RU2687155C1 - STRAIN OF THE MICROBACTERIUM PARAOXYDANS BKM Ac-2619D BACTERIA - OIL AND OIL PRODUCTS DECOMPOSER - Google Patents
STRAIN OF THE MICROBACTERIUM PARAOXYDANS BKM Ac-2619D BACTERIA - OIL AND OIL PRODUCTS DECOMPOSER Download PDFInfo
- Publication number
- RU2687155C1 RU2687155C1 RU2018111145A RU2018111145A RU2687155C1 RU 2687155 C1 RU2687155 C1 RU 2687155C1 RU 2018111145 A RU2018111145 A RU 2018111145A RU 2018111145 A RU2018111145 A RU 2018111145A RU 2687155 C1 RU2687155 C1 RU 2687155C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- oil
- strain
- products
- bacteria
- vkm
- Prior art date
Links
- 241001533536 Microbacterium paraoxydans Species 0.000 title claims abstract description 21
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 title abstract description 7
- 239000003921 oil Substances 0.000 abstract description 68
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 21
- 239000002689 soil Substances 0.000 abstract description 14
- 239000010705 motor oil Substances 0.000 abstract description 12
- 239000003502 gasoline Substances 0.000 abstract description 11
- 239000003350 kerosene Substances 0.000 abstract description 11
- 239000010720 hydraulic oil Substances 0.000 abstract description 9
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 14
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 14
- 239000003209 petroleum derivative Substances 0.000 description 13
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 10
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 8
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 8
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 8
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 7
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 7
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 6
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 5
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 5
- 102220201851 rs143406017 Human genes 0.000 description 5
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 239000007003 mineral medium Substances 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 241001249119 Bacillus vallismortis Species 0.000 description 3
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 3
- 241000589776 Pseudomonas putida Species 0.000 description 3
- 241000607694 Serratia odorifera Species 0.000 description 3
- 239000002283 diesel fuel Substances 0.000 description 3
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 3
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 3
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 2
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 2
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 description 2
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 235000019733 Fish meal Nutrition 0.000 description 2
- 241000186035 Kurthia zopfii Species 0.000 description 2
- 241000203815 Microbacterium testaceum Species 0.000 description 2
- 241000187486 Mycobacterium flavescens Species 0.000 description 2
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 2
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000003337 fertilizer Substances 0.000 description 2
- 239000004467 fishmeal Substances 0.000 description 2
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 2
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- IYVCXLAGSZWAEQ-UHFFFAOYSA-N 1,1,2,2,3,3,4,4,4a,5,5,6,6,7,7,8,8,8a-octadecafluoronaphthalene;1-[1,2,2,3,3,4,5,5,6,6-decafluoro-4-(trifluoromethyl)cyclohexyl]-2,2,3,3,4,4,5,5,6,6-decafluoropiperidine Chemical compound FC1(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C2(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C21F.FC1(F)C(F)(F)C(C(F)(F)F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C1(F)N1C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C1(F)F IYVCXLAGSZWAEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 244000075850 Avena orientalis Species 0.000 description 1
- 235000007319 Avena orientalis Nutrition 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 241000186650 Clavibacter Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen sulfide Chemical compound S RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004566 IR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 241000191953 Kocuria varians Species 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 241000191936 Micrococcus sp. Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 241001135514 Paraburkholderia caryophylli Species 0.000 description 1
- 231100000674 Phytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 241000589540 Pseudomonas fluorescens Species 0.000 description 1
- 240000002913 Trifolium pratense Species 0.000 description 1
- 235000015724 Trifolium pratense Nutrition 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- -1 aromatic polycyclic hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 238000004500 asepsis Methods 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 238000006065 biodegradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000010779 crude oil Substances 0.000 description 1
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000035622 drinking Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229910000037 hydrogen sulfide Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 1
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 1
- 235000013526 red clover Nutrition 0.000 description 1
- 238000007670 refining Methods 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- PRWXGRGLHYDWPS-UHFFFAOYSA-L sodium malonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC([O-])=O PRWXGRGLHYDWPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- 231100000033 toxigenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001551 toxigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002351 wastewater Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B09—DISPOSAL OF SOLID WASTE; RECLAMATION OF CONTAMINATED SOIL
- B09C—RECLAMATION OF CONTAMINATED SOIL
- B09C1/00—Reclamation of contaminated soil
- B09C1/10—Reclamation of contaminated soil microbiologically, biologically or by using enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C02—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
- C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
- C02F3/00—Biological treatment of water, waste water, or sewage
- C02F3/34—Biological treatment of water, waste water, or sewage characterised by the microorganisms used
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Environmental & Geological Engineering (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Soil Sciences (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Hydrology & Water Resources (AREA)
- Water Supply & Treatment (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области микробиологии и представляет собой новый бактериальный штамм бактерий Microbacterium paraoxydans ВКМ Ас-2619D, обладающий способностью быстро утилизировать нефть и нефтепродукты (дизельное топливо, масло моторное, газовый конденсат, масло гидравлическое, керосин авиационный, бензин).The invention relates to the field of microbiology and is a new bacterial bacterial strain Microbacterium paraoxydans VKM Ac-2619D, with the ability to quickly dispose of oil and oil products (diesel, motor oil, gas condensate, hydraulic oil, aviation kerosene, gasoline).
Штамм может быть использован для очистки почв и водоемов, загрязненных нефтью и нефтепродуктами и нефтепродуктами (дизельное топливо, масло моторное, газовый конденсат, масло гидравлическое, керосин авиационный, бензин), в широком диапазоне температур от +8 до +37°C.The strain can be used to clean soils and water bodies polluted with oil and petroleum products and petroleum products (diesel, motor oil, gas condensate, hydraulic oil, aviation kerosene, gasoline) in a wide temperature range from +8 to + 37 ° C.
Уровень техники.The level of technology.
Известен штамм Microbacterium testaceum 17В (1. Патент RU №2475533. Штамм бактерий Microbacterium testaceum 17В - продуцент сайт-специфической эндонуклеазы. C1, C12N 1/20, C12N 9/14. Заявка: 12.12. 2011. Опубликовано: 20.02.2013. Авторы: Чернухин В.А., Килёва Е.В., Голикова Л.Н., Болтенгаген А.А., Тарасова Г.В., Дедков B.C., Михненкова Н.А., Дегтярев С.Х. Патентообладатель: Общество с ограниченной ответственностью «СибЭнзайм»), используемый для выделения новой сайт-специфической эндонуклеазы, узнающей и расщепляющей ДНК, способный расти при температуре от +8 до +37°C.A known strain of Microbacterium testaceum 17B (1. Patent RU No. 2475533. The strain of bacteria Microbacterium testaceum 17B is a site specific endonuclease producer. C1, C12N 1/20, C12N 9/14. Application: 12.12. 2011. Published: 02/20/2013. Authors : Chernukhin V.A., Kileva E.V., Golikova L.N., Boltengagen A.A., Tarasova G.V., Dedkov VS, Mikhnenkova N.A., Degtyarev S.Kh. Patentee: Limited Company SibEnzyme LLC), used to isolate a new site-specific endonuclease that recognizes and cleaves DNA, capable of growing at temperatures from +8 to + 37 ° C.
Недостатком известного штамма бактерий является не изученность окисляющей активности по отношению к нефти и нефтепродуктам, что не позволяет оценить его деструктирующую способность по отношению к нефтяным углеводородам.The disadvantage of the known bacterial strain is the lack of knowledge of the oxidizing activity in relation to petroleum and petroleum products, which does not allow to evaluate its destructive ability with respect to petroleum hydrocarbons.
Известны штаммы: Mycobacterium flavescens ЕХ-91 (2. Патент RU №2053296. Штамм Mycobacterium flavescens, используемый для очистки воды и почвы от нефтепродуктов. C1, C12N 1/20, C02F 3/34, C12R1:32, C12N 1/20. Заявка: 92005971/13, 11.11.1992. Опубликовано: 27.01.1996. Бюл. №3. Авторы: Ермоленко З.М., Холоденко В.П., Короткий Л.М. Патентообладатель: Государственный научно-исследовательский институт прикладной микробиологии); Pseudomonas putida 36 (3. Авторское свидетельство СССР N1076446, Штамм Pseudomonas putida 36, используемый для очистки воды и почвы от нефти и нефтепродуктов. А1, C02F 3/34, В09С 1/10, C12N 1/20 C02F 3/34, C02F 101:32, C12N 1/20, C12R 1:40. Заявка: 3474745, 22.07.1982. Опубликовано: 28.02.1984. Заявитель: Западно-Сибирский научно-исследовательский геологоразведочный нефтяной институт. Авторы: Дядечко В.Н., Толстокорова Л.Е., Морозова Т.Н.); Serratia odorifera А 36 (4. Патент RU №2157839. Штамм бактерий Serratia odorifera А 36 ГКМ ВИЗР N 100 для окисления углеводородов нефти и нефтепродуктов. C1, C12N 1/26, B09C 1/10 C12N 1/26, C12R1:425. Заявка: 99111625/13, 31.05.1999. Опубликовано: 20.10.2000. Патентообладатели: Саксон В.М., Кузнецов С.А., Бойкова И.В., Сабаляускас Ю., Диджяпетрис А., Янкявичус К. Авторы: Саксон В.М., Кузнецов С.А., Бойкова И.В., Новикова И.И., Чумакова А.Я., Сабаляускас Ю., Диджяпетрис А., Янкявичус К.); Kurthia zopfii 7-204 (5. Патент RU №2270063. Штамм бактерий Kurthia zopfii, обладающий свойством утилизировать нефть, нефтепродукты и ароматические полициклические углеводороды. С2, В09С 1/10, C02F 3/34, C12N 1/20, C12R 1/01. Заявка: 2003106326/13, 07.03.2003. Опубликовано: 20.01.2005. Патентообладатель: ООО ПКФ "БИГОР". Авторы: Бирюков В.В., Биттеева М.Б., Щеблыкин И.Н., Осипова В.Г., Коваленко Н.В., Гайтан В.И., Лобов Ю.А., Стехновская Л.Д., Разживин А.В., Барбот B.C., Васильев В.Н.), обладающие эффективностью утилизировать нефть и нефтепродукты.The following strains are known: Mycobacterium flavescens EX-91 (2. RU patent No. 2053296. Strain Mycobacterium flavescens, used to purify water and soil from oil products. C1, C12N 1/20, C02F 3/34, C12R1: 32, C12N 1/20. Application: 92005971/13, 11.11.1992 Published: 01/27/1996 Bulletin No. 3. Authors: Ermolenko Z. M., Kholodenko V. P., Korotky L. Patentee: State Research Institute for Applied Microbiology ; Pseudomonas putida 36 (3. USSR Author's Certificate N1076446, Pseudomonas putida 36 strain, used to purify water and soil from oil and oil products. A1, C02F 3/34, B09C 1/10, C12N 1/20 C02F 3/34, C02F 101 : 32, C12N 1/20, C12R 1:40. Application: 3474745, 07.22.1982 Published: 02.28.1984 Applicant: West Siberian Scientific Research Geological Exploration Oil Institute. Authors: Dyadechko VN, Tolstokorova L. E., Morozova T.N.); Serratia odorifera A 36 (4. Patent RU No. 2157839. The strain of bacteria Serratia odorifera A 36 GKM VIZR N 100 for the oxidation of hydrocarbons of oil and oil products. C1, C12N 1/26, B09C 1/10 C12N 1/26, C12R1: 425. Application : 99111625/13, 05.31.1999 Published: 10/20/2000 Patent holders: Sakson VM, Kuznetsov SA, Boikova IV, Sabalyauskas U., Didjäpetris A., Yankyavichus K. Authors: Sakson V .M., Kuznetsov S.A., Boykova I.V., Novikova I.I., Chumakova A.Ya., Sabalyauskas Y., Didgyapetris A., Yankyavichus K.); Kurthia zopfii 7-204 (5. Patent RU No. 2270063. The strain of bacteria Kurthia zopfii, which has the property to utilize oil, petroleum products and aromatic polycyclic hydrocarbons. C2, B09C 1/10, C02F 3/34, C12N 1/20, C12R 1/01 Application: 2003106326/13, 07.03.2003 Published: January 20, 2005 Patentee: PKF “BIGOR” LLC Authors: Biryukov VV, Bitteeva MB, Shcheblykin IN, Osipova VG , Kovalenko N.V., Gaitan V.I., Lobov Yu.A., Stechnovskaya L.D., Razzhivin A.V., Barbot VS, Vasilyev V.N., having the efficiency to utilize oil and oil products.
Недостатком штаммов является то, что они утилизируют нефть при сравнительно высоких температурах.The disadvantage of the strains is that they utilize oil at relatively high temperatures.
Известен консорциум нефтеокисляющих микроорганизмов в составе Pseudomonas putida ПИ Ко-1, Pseudomonas fluorescens ПИ-896, Micrococcus sp. ПИ Ку-1, Burkholderia caryophylli Jap-3, Serratia odorifera Jap-1 при весовом соотношении 3-12 мас. % каждого микроорганизма, при этом совместно с суспензией биопрепарата в загрязненную среду вводят ризоторфин в количестве 30-120 г/м3 (6. Патент RU 2191643. Способ очистки почв от загрязнений нефтью и нефтепродуктами. C1, В09С 1/10, C12N 1/20, C12N 1/20, C12R 1:01. Заявка: 2001119562/13, 09.07.2001. Опубликовано: 27.10.2002. Заявитель: Закрытое акционерное общество "Полиинформ". Авторы: Саксон В.М., Кузнецов С.А., Бойкова И.В., Новикова И.И. Патентообладатель: Закрытое акционерное общество "Полиинформ").Known consortium of oil-oxidizing microorganisms in the composition of Pseudomonas putida PI Ko-1, Pseudomonas fluorescens PI-896, Micrococcus sp. PI Ku-1, Burkholderia caryophylli Jap-3, Serratia odorifera Jap-1 with a weight ratio of 3-12 wt. % of each microorganism, along with rhizotorphin in the amount of 30-120 g / m 3 (6. Patent RU 2191643. Method of cleaning the soil from oil and oil products. Together with the suspension of a biological product (6. Patent RU 2191643. C1, В09С 1/10, C12N 1 / 20, C12N 1/20, C12R 1:01. Application: 2001119562/13, 07/09/2001 Published: 10/27/2002 Applicant: Polinform Closed Joint-Stock Company. Authors: Sakson V.M., Kuznetsov S.A. , Boykova I.V., Novikova I.I. Patentee: Closed Joint-Stock Company Polinform).
Недостатком является то, что при приготовлении рабочей суспензии микроорганизмов температура поддерживается на уровне +18+22°C, т.е. микроорганизмы, входящие в состав консорциума, не способны к деградации нефтепродуктов при пониженных положительных температурах (от +8°C).The disadvantage is that when preparing a working suspension of microorganisms, the temperature is maintained at + 18 + 22 ° C, i.e. microorganisms that are part of the consortium are not capable of degradation of petroleum products at low positive temperatures (from + 8 ° C).
Известен нефтедеструктор, включающий культуру бактерий и микробное удобрение, содержащее нативные микроорганизмы: Clavibacter michiganese, Bacillus amyloliguefaciens, Micrococcus varians (7. Архипченко И.А., Загвоздкин В.К. Очистка нефтезагрязненных почв с помощью препаратов на основе микробных удобрений // Экология и промышленность России. Спецвапуск. 2004. С. 16-18).The oil destructor is known, including bacterial culture and microbial fertilizer containing native microorganisms: Clavibacter michiganese, Bacillus amyloliguefaciens, Micrococcus varians (7. Archipchenko IA, Zagvozdkin VK. Cleaning of oil-polluted soils using preparations based on microbial fertilizers //). Russian industry. Special vpusk. 2004. p. 16-18).
Недостатком является то, что нефтедеструктирующая активность клеток микроорганизмов не достаточна для проведения нефтеочистки почвы в районах с коротким тепловым периодом.The disadvantage is that the oil destructive activity of microbial cells is not sufficient for oil refining of the soil in areas with a short thermal period.
Известен штамм бактерий Bacillus subtilis Колыма 7/2 (8. Патент RU №2446900. Способ очистки мерзлотных почв от нефти спорообразующими бактериями Bacillus subtilis. С2. В09С 1/10 (2006.01). Заявка: 2010129158/13, 13.07.2010. Опубликовано: 10.04.2012. Авторы: Неустроев М.П., Тарабукина Н.П., Неустроев М.М., Сазонов Н.Н., Парникова С.И., Степанова A.M. Патентообладатель: Государственное научное учреждение Якутский научно-исследовательский институт сельского хозяйства Россельхозакадемии), обладающий способностью снижать концентрацию нефти в почве до 0,48% в течение 3 месяцев летнего периода.A known bacterial strain Bacillus subtilis Kolyma 7/2 (8. Patent RU No. 2446900. A method for cleaning frozen soils from oil with spore-forming bacteria Bacillus subtilis. С2. В09С 1/10 (2006.01). Application: 2010129158/13, 13.07.2010. Published: April 10, 2012. Authors: Neustroev MP, Tarabukina NP, Neustroev MM, Sazonov NN, Parnikova SI, Stepanova AM Patentee: State Scientific Institution Yakut Research Institute of Agriculture Russian Agricultural Academy), which has the ability to reduce the concentration of oil in the soil to 0.48% within 3 months of the summer period.
Однако штамм осуществляет деградацию только нефти и не способен утилизировать нефтепродукты (дизельное топливо, масло моторное, газовый конденсат, масло гидравлическое, керосин авиационный, бензин), в том числе в условиях широкого диапазона температур от +8 до +37°C.However, the strain degrades only oil and is not capable of utilizing oil products (diesel, motor oil, gas condensate, hydraulic oil, aviation kerosene, gasoline), including in a wide temperature range from +8 to + 37 ° C.
В качестве прототипа служат штаммы: Bacillus atropheus ВКПМ В-10592 (9. Патент RU 2482179. Штамм бактерий Bacillus atropheus ВКПМ В-10592 - деструктор нефти и нефтепродуктов. C1, C12N 1/26, C02F 3/34, В09С 1/10, C12R 1/57. Заявка №2012114907/10 от 04.2012 г. Опубликовано 20.05.2013 г. Бюллетень №14. Автор: Ерофеевская Л.А. Патентообладатель: ИПНГ СО РАН) и Bacillus vallismortis ВКПМ В-11017 (10. Патент РФ №2525930. Штамм бактерий Bacillus vallismortis ВКПМ В-11017 - деструктор нефти и нефтепродуктов. C1, C12N 1/20, C02F 3/34, В09С 1/10, C12R 1/07. Заявка: 2013113813/10, 27.03.2013. Дата подачи заявки: 27.03.2013. Опубликовано: 20.04.14 г. Бюл. №11. Автор: Ерофеевская Л.А. Патентообладатель: ИПНГ СО РАН), обладающие высокой утилизирующей эффективностью по отношению к нефти и нефтепродуктам.As a prototype are the strains: Bacillus atropheus VKPM B-10592 (9. Patent RU 2482179. Bacillus atropheus VKPM B-10592 bacterial strain - destructor of oil and oil products. C1, C12N 1/26, C02F 3/34, B09C 1/10, C12R 1/57. Application No. 2012114907/10 dated 04.2012 Published on 05/20/2013 Bulletin No. 14. Author: Erofeevskaya LA Patentee: IPNG SB RAS) and Bacillus vallismortis VKPM B-11017 (10. RF Patent No. 2525930. The bacterial strain Bacillus vallismortis VKPM B-11017 - destructor of oil and oil products. C1, C12N 1/20, C02F 3/34, B09C 1/10, C12R 1/07. Application: 2013113813/10, 03/27/2013. Date of submission Applications: 03/27/2013 Published: 04/20/14 Bulletin No. 11. Author: Erofeevskaya LA Patentooblad Tel: IPNG RAS) having a high-utilizing efficiency with respect to oil and petroleum products.
Недостатком известных штаммов является то, что для наращивания биомассы из клеток штаммов Bacillus atropheus ВКПМ В-10592 и Bacillus vallismortis ВКПМ В-11017 требуется специальная среда с добавлением перфторуглеродов в виде дефицитного и дорогостоящего препарата «Перфторан», что не экономично и усложняет процедуру накопления клеточной биомассы штаммов, используемых для очистки почвы и воды от нефти и нефтепродуктов, кроме того, не известна их способность утилизировать бензин и керосин авиационный.A disadvantage of known strains is that to increase the biomass from cells of the Bacillus atropheus VKPM B-10592 and Bacillus vallismortis VKPM B-11017 strains, a special medium with the addition of perfluorocarbons in the form of scarce and expensive Perftoran is required, which is not economical and complicates the accumulation process. biomass of strains used to clean the soil and water from oil and oil products, in addition, their ability to utilize gasoline and aviation kerosene is not known.
Задачей изобретения является расширение номенклатуры штаммов, обладающих утилизирующей способностью по отношению, как к нефти, так и нефтепродуктам (дизельное топливо, масло моторное, газовый конденсат, масло гидравлическое, керосин авиационный, бензин), в относительно короткие сроки, в широком диапазоне температур от +8 до +37°C, которые могут быть использованы для очистки воды и почвы, как от нефти, так и от нефтепродуктов (дизельное топливо, масло моторное, газовый конденсат, масло гидравлическое, керосин авиационный, бензин).The objective of the invention is to expand the range of strains with recycling capacity in relation to both oil and petroleum products (diesel, motor oil, gas condensate, hydraulic oil, aviation kerosene, gasoline) in a relatively short time, in a wide temperature range from + 8 to + 37 ° C, which can be used for the purification of water and soil, both from oil and oil products (diesel, motor oil, gas condensate, hydraulic oil, aviation kerosene, gasoline).
Поставленная задача решена тем, что получен новый бактериальный штамм бактерий Microbacterium paraoxydans ВКМ Ac-2619D, обладающий способностью быстро утилизировать нефть и нефтепродукты (дизельное топливо, масло моторное, газовый конденсат, масло гидравлическое, керосин авиационный, бензин).The problem is solved by the fact that a new bacterial strain of bacteria Microbacterium paraoxydans VKM Ac-2619D was obtained, which has the ability to quickly utilize oil and oil products (diesel fuel, engine oil, gas condensate, hydraulic oil, aviation kerosene, gasoline).
Штамм может быть использован для очистки почв и водоемов, загрязненных нефтью и нефтепродуктами (дизельное топливо, масло моторное, газовый конденсат, масло гидравлическое, керосин авиационный, бензин), в широком диапазоне температур от +8 до +37°C, в относительно короткие сроки (7-60 суток).The strain can be used to clean soils and water bodies polluted with oil and oil products (diesel, motor oil, gas condensate, hydraulic oil, aviation kerosene, gasoline) in a wide temperature range from +8 to + 37 ° C, in a relatively short time (7-60 days).
Заявляемый штамм бактерий Microbacterium paraoxydans ВКМ Ас-2619D (авторский номер ELA-10м), выделен из пробы почвенно-гравийной смеси, загрязненной маслом моторным, отобранной с территории ОАО «Якутскэнерго», Республика Саха (Якутия).The inventive bacterium strain Microbacterium paraoxydans VKM Ac-2619D (author's number ELA-10m), isolated from a soil-gravel mixture contaminated with motor oil taken from the territory of Yakutskenergo, Republic of Sakha (Yakutia).
Штамм идентифицирован и депонирован во Всероссийской Коллекции Микроорганизмов (ВКМ) Федерального государственного бюджетного учреждения науки Институт биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г.К. Скрябина Российской академии наук (ИБФМ РАН) под регистрационным номером Microbacterium paraoxydans ВКМ Ac-2619D.The strain is identified and deposited in the All-Russian Collection of Microorganisms (VKM) of the Federal State Budgetary Institution of Science Institute of Biochemistry and Physiology of Microorganisms. G.K. Scriabin of the Russian Academy of Sciences (IBFM RAS) under the registration number of Microbacterium paraoxydans VKM Ac-2619D.
Полученный штамм Microbacterium paraoxydans ВКМ Ac-2619D характеризуется следующими признаками.The resulting strain of Microbacterium paraoxydans VKM Ac-2619D is characterized by the following features.
Морфологические признаки.Morphological signs.
Грамположительные неподвижные палочки.Gram-positive fixed sticks.
Кулътуральные характеристики.Cultural characteristics.
На мясопептонном агаре (МПА) (масс. %: ферментативный пептон - 1,0; натрий хлористый - 0,5; агар - 1,0; вода мясная - остальное, pH 7,0-7,2) и ГРМ агаре (на основе гидролизата рыбной муки), масс. %: гидролизат рыбной муки - 1,2; пептон ферментативный - 1,2; натрий хлористый - 0,6; агар - 1,0; вода дистиллированная остальное; pH 7,1-7,5, формирует матовые, непрозрачные, серовато-желтые колонии, диаметром 1-2 мм.Meat-peptone agar (MPA) (wt.%: Enzymatic peptone - 1.0; sodium chloride - 0.5; agar - 1.0; meat water - the rest, pH 7.0-7.2) and timing agar (on the basis of hydrolyzed fish meal), mass. %: hydrolyzed fish meal - 1,2; enzymatic peptone - 1,2; sodium chloride - 0.6; agar - 1.0; distilled water else; pH 7.1-7.5, forms dull, opaque, greyish-yellow colonies with a diameter of 1-2 mm.
На среде Сабуро (состав, г/л: пептон - 10,0 мальтоза - 40,0; агар - 12,0±2,0; вода очищенная до 1 л), формирует матовые, непрозрачные, серовато-желтые колонии, диаметром 1-2 мм.On Saburo's medium (composition, g / l: peptone - 10.0 maltose - 40.0; agar - 12.0 ± 2.0; purified water to 1 l), forms matte, opaque, grayish-yellow colonies with a diameter of 1 -2 mm.
На агаризованной среде Мюнца (11. Керстен Д.К. Морфологические и культуральные свойства индикаторных микроорганизмов нефтегазовой съемки - Микробиология, 1963, №5 - С. 1024-1030) с нефтью и нефтепродуктами (дизельное топливо, масло моторное, газовый конденсат, бензин, керосин авиационный) следующего состава: (масс. %) KNO3 - 0,4; MgSO4⋅7H2O - 0,08; NaCl - 0,1; K2HPO4 - 0,14; KH2PO4 - 0,06; агар - 2,0; нефть или нефтепродукты - 1,0; вода дистиллированная - остальное, pH - 7,2, формирует матовые, непрозрачные, серовато-желтые колонии, диаметром 1-2 мм.On the Müntz agar medium (11. Kersten DK The morphological and cultural properties of indicator microorganisms of oil and gas surveys - Microbiology, 1963, No. 5 - P. 1024-1030) with oil and oil products (diesel, motor oil, gas condensate, gasoline, aviation kerosene) of the following composition: (wt.%) KNO 3 - 0.4; MgSO 4 · 7H 2 O - 0.08; NaCl — 0.1; K 2 HPO 4 - 0.14; KH 2 PO 4 - 0.06; agar - 2.0; oil or oil products - 1.0; distilled water - the rest, pH - 7.2, forms a matte, opaque, grayish-yellow colonies with a diameter of 1-2 mm.
В мясо-пептонном бульоне промышленного производства образует равномерную муть.In the meat-peptone broth of industrial production forms a uniform slime.
Растет в диапазоне pH 56,5-9,0.It grows in the pH range of 56.5-9.0.
Растет в диапазоне температур от +8 до +37±1°C.It grows in the temperature range from +8 to + 37 ± 1 ° C.
Отношение к кислороду: аэробы.Attitude to oxygen: aerobes.
Используемые источники углерода: сорбит.Carbon sources used: sorbitol.
Проверенные не используемые источники углерода: лактоза, глюкоза, цитрат натрия, малонат натрия.Proven carbon sources not used: lactose, glucose, sodium citrate, sodium malonate.
Другие проверенные тесты: оксидаза-положительный, не декарбоксилирует лизин и орнитин, не способен расщеплять фенилаланин, индол-отрицательный, сероводород не продуцирует, не активный в отношении инозита, уреаза-отрицательный, тест с 
При секвенировании вариабельных участков 16S rDNA получена следующая собранная нуклеотидная последовательность для исследуемого штамма:When sequencing the 16S rDNA variable regions, the following assembled nucleotide sequence was obtained for the strain under study:
Результаты определения родовой принадлежности штаммов и процента сходства с ближайшими известными видами, представлены в таблице №1.The results of the determination of the genus affiliation of the strains and the percentage of similarity with the closest known species are presented in Table 1.
Штамм не вирулентный, не токсичный, не токсигенный (проверка проведена на белых мышах).The strain is not virulent, non-toxic, non-toxigenic (tested on white mice).
Штамм не патогенен для растений (проверка на фитотоксичность проведена на семенах овса посевного 
Штамм может поддерживаться регулярными пересевами (1 раз в 10-14 дней) на скошенном МПА или храниться в лиофилизированном состоянии в ампулах при температуре +4°C.The strain can be maintained by regular transfers (1 time in 10-14 days) on canted MPA or stored in a lyophilized state in ampoules at a temperature of + 4 ° C.
Штамм может быть получен в лаборатории №2 Федерального государственного бюджетного учреждения науки Институт проблем нефти и газа Сибирского отделения Российской академии наук (ИПНГ СО РАН), по адресу: 677980, Республика Саха (Якутия), г. Якутск, ул. Октябрьская, 1.The strain can be obtained in the laboratory No. 2 of the Federal State Budgetary Institution of Science Institute of Oil and Gas Problems of the Siberian Branch of the Russian Academy of Sciences (IPNG SB RAS) at the address: 677980, the Republic of Sakha (Yakutia), Yakutsk, ul. October, 1.
Изобретение поясняется следующими примерами.The invention is illustrated by the following examples.
Пример 1. Выделение и культивирование штамма Microbacterium paraoxydans ВКМ Ac-2619DExample 1. Isolation and cultivation of a strain of Microbacterium paraoxydans VKM Ac-2619D
Штамм бактерий Microbacterium paraoxydans ВКМ Ac-2619D из почвенно-гравийной смеси, загрязненной маслом моторным, методом накопительных культур на минеральной среде с нефтью с последующим пересевом на МПА.The strain of bacteria Microbacterium paraoxydans VKM Ac-2619D from soil-gravel mixture, contaminated with motor oil, by the method of cumulative crops on mineral medium with oil, followed by subculture on MPA.
Для этого, соблюдая правила асептики, 1 г измельченной и предварительно просеянной почвенно-гравийной смеси, растирают в ступке и вносят в колбы емкостью 250 мл, с содержанием 100 мл, заранее подготовленной минеральной средой следующего состава: (масс. %) KNO3 - 0,4; MgSO4⋅7H2O - 0,08; NaCl - 0,1; K2HPO4 - 0,14; KH2PO4 - 0,06; вода дистиллированная - остальное, pH 7,2; в качестве источника углерода и энергии используют нефть, которую вносят в среду в количестве 1000 мг на 1,0 дм3 среды.To do this, following the rules of asepsis, 1 g of crushed and pre-sifted soil-gravel mix is ground in a mortar and introduced into flasks with a capacity of 250 ml, with a content of 100 ml, prepared in advance of the mineral medium of the following composition: (mass%) KNO 3 - 0 ,four; MgSO 4 · 7H 2 O - 0.08; NaCl — 0.1; K 2 HPO 4 - 0.14; KH 2 PO 4 - 0.06; distilled water - the rest, pH 7.2; as a source of carbon and energy, oil is used, which is introduced into the medium in the amount of 1000 mg per 1.0 dm 3 of the medium.
Инкубация проводится в качалочных условиях на установке «УВМТ-12-250» при 200 об/мин и температуре +20±1°C.Incubation is carried out in rocking conditions on the UVMT-12-250 unit at 200 rpm and a temperature of + 20 ± 1 ° C.
Рост бактерий наблюдают через 7 суток инкубации по образованию мутной эмульсии и дезинтеграции слоя нефти.The growth of bacteria is observed after 7 days of incubation on the formation of a turbid emulsion and disintegration of the oil layer.
Чистая культура бактерий получена путем культивирования при вышеперечисленных условиях и многократных пересевов (более 10) накопительной культуры на чашки Петри с МПА.Pure culture of bacteria was obtained by cultivation under the above conditions and multiple passages (more than 10) of the accumulation culture on Petri dishes with MPA.
Далее посевы инкубировали в стационарных условиях при различных температурах (+8, +20, +30 и +37 (±1)°C).Next, the crops were incubated in stationary conditions at different temperatures (+8, +20, +30 and +37 (± 1) ° C).
Через 72 ч., при культивировании штамма при температурах от +8 до +37°C, на поверхности МПА наблюдали появление матовых, серовато-желтых колоний округлой формы диаметром 1-2 мм, которые по культурально-морфологическим и биохимическим признакам, а также по результатам проведенного анализа нуклеотидных последовательностей гена 16SpРНК и ключевых фенотипических признаков, согласно таксономическим описаниям, приведенным в Определителе Берги (12. Bergey's Manual of Systematic Bacteriology Book Review Int. J. of Syst. Bact; July 1985, p. 408.) идентифицированы, как штамм Microbacterium paraoxydans.After 72 hours, during the cultivation of the strain at temperatures from +8 to + 37 ° C, matte, grayish-yellow colonies with a diameter of 1-2 mm were observed on the surface of the MPA, which are culturally morphological and biochemical, as well as the results of the analysis of the nucleotide sequences of the 16SpRNA gene and key phenotypic traits, according to the taxonomic descriptions given in the Berg determinant (12. Bergey's Manual of Systematic Bacteriology Book Review Int. J. of Syst. Bact; July 1985, p. 408.) were identified as Microbacterium paraoxydans strain.
Пример 2. Приготовление бактериального препарата на основе клеток штамма Microbacterium paraoxydans ВКМ Ac-2619DExample 2. Preparation of a bacterial preparation based on cells of the strain Microbacterium paraoxydans VKM Ac-2619D
Изолированные колонии, полученные по примеру 1, пересевают на скошенный МПА и инкубируют 48-72 часов при температуре +20±1°C. Клетки смывают 0,9% раствором NaCl и готовят исходную микробную суспензию бактериального изолята с титром 1×109 микробных клеток/см3 по оптическому стандарту ГИСК им. A.M. Тарасевича.The isolated colonies obtained in Example 1 are subcultured on canted MPA and incubated for 48-72 hours at a temperature of + 20 ± 1 ° C. The cells are washed off with a 0.9% NaCl solution and the initial microbial suspension of the bacterial isolate is prepared with a titer of 1 × 10 9 microbial cells / cm 3 according to the optical standard of the H.C. AM Tarasevich.
Для получения препарата готовят жидкую минеральную среду с нефтью (нефтепродуктами) следующего состава (масс. %): KNO3 - 0,4; MgSO4⋅7H2O - 0,08; NaCl - 0,1; K2HPO4 - 0,14; KH2PO4 - 0,06; нефть (нефтепродукты) - 1,0; вода дистиллированная - остальное; pH среды - 7,2 и культивируют в колбах в качалочных условиях в течение 48-72 часов, при температуре плюс 20±1°C, при 200 об/мин.To obtain the drug is prepared liquid mineral medium with oil (petroleum products) of the following composition (wt.%): KNO 3 - 0.4; MgSO 4 · 7H 2 O - 0.08; NaCl — 0.1; K 2 HPO 4 - 0.14; KH 2 PO 4 - 0.06; oil (oil products) - 1.0; distilled water - the rest; The pH of the medium is 7.2 and cultured in flasks under rocking conditions for 48-72 hours, at a temperature of plus 20 ± 1 ° C, at 200 rpm.
Получают жидкую мутноватую смесь клеток штамма Microbacterium paraoxydans ВКМ Ac-2619D Ac-2625D с титром 1-5×109 клеток/см3, которую можно использовать в качестве препарата для обработки почвы или воды, загрязненной нефтью и нефтепродуктами.A liquid cloudy mixture of Microbacterium paraoxydans VKM Ac-2619D Ac-2625D cells with a titer of 1-5 × 10 9 cells / cm 3 is obtained, which can be used as a preparation for treating the soil or water contaminated with oil and oil products.
Пример 3. Исследование нефтеокисляющей активности штамма Microbacterium paraoxydans ВКМ Ac-2619DExample 3. The study of the oxidizing activity of the strain Microbacterium paraoxydans VKM Ac-2619D
Клетки штамма Microbacterium paraoxydans ВКМ Ac-2619D смывают 0,9% раствором NaCl со скошенного МПА (по примеру 2), готовят исходную микробную суспензию бактериального изолята, объемом 25 см3, с концентрацией 1×109 микробных клеток/см3 по оптическому стандарту ГИСК им. A.M. Тарасевича.Cells of the strain Microbacterium paraoxydans VKM Ac-2619D are washed off with 0.9% NaCl solution from canted MPA (according to example 2), an initial microbial suspension of a bacterial isolate is prepared, 25 cm 3 , with a concentration of 1 × 9 microbial cells / cm 3 according to the optical standard GISK them. AM Tarasevich.
Полученный бактериальный изолят штамма Microbacterium paraoxydans ВКМ Ac-2619D культивируют в водной среде с минеральным составом (масс. %): KNO3 - 0,4; MgSO4⋅7H2O - 0,08; NaCl - 0,1; K2HPO4 - 0,14; KH2PO4 - 0,06; вода дистиллированная - остальное; pH среды - 7,2.The obtained bacterial isolate of the strain Microbacterium paraoxydans VKM Ac-2619D is cultivated in an aqueous medium with a mineral composition (mass%): KNO 3 - 0.4; MgSO 4 · 7H 2 O - 0.08; NaCl — 0.1; K 2 HPO 4 - 0.14; KH 2 PO 4 - 0.06; distilled water - the rest; pH of the medium - 7.2.
В колбочки объемом 200,0 см3 вносят по 100,0 см3 готовой минеральной среды и 1000 мг нефти (нефтепродуктов).In the cones with a volume of 200.0 cm 3 make 100.0 cm 3 of the finished mineral medium and 1000 mg of oil (petroleum products).
Колбы засевают клетками штамма до концентрации 1×109 клеток/см3.The flasks are seeded with strain cells to a concentration of 1 × 10 9 cells / cm 3 .
В качестве контроля ставят такую же колбу со средой, нефтью и без бактерий для определения общих (естественных) потерь.As a control, they put the same flask with medium, oil and without bacteria to determine total (natural) losses.
Опыт проводят в трех повторностях.The experiment is carried out in three replications.
Колбы культивируют при температурах +8°C; +20°C; +30°C; +37°C в течение 7 суток.Flasks are cultivated at temperatures of + 8 ° C; + 20 ° C; + 30 ° C; + 37 ° C for 7 days.
Биодеградацию нефти и нефтепродуктов определяют спектрометрическим методом, с использованием концентратомера «ИКН-0,25» (13. ФР. 1.31.2007.03234 МВИ 01.02.117. Методка выполнения измерений массовой концентрации нефтепродуктов в питьевых, природных и сточных водах ИК-спектрометрическим методом с использованием концентратомера «ИКН-0,25»).Biodegradation of oil and petroleum products is determined by a spectrometric method using a TKN-0.25 concentrator meter (13. FR. 1.31.2007.03234 MVI 01.02.117. The method for measuring the mass concentration of petroleum products in drinking, natural and waste waters by infrared spectrometry using concentrator “TSC-0.25”).
Данные эксперимента показывают, что в водной среде с минеральными компонентами предлагаемый штамм Microbacterium paraoxydans ВКМ Ас-2619D на 7-е сутки культивирования в условиях постоянной аэрации утилизирует от 14,0 до 15,0% - нефти и нефтепродуктов при температуре +8°C; от 47,8 до 48,0% - при температуре +20°C; от 57,98 до 58,38% - при температуре +30°C; от 68,56 до 69,19% - при температуре +37°C (таблица 2).The experimental data show that in the aquatic environment with mineral components, the proposed Microbacterium paraoxydans VKM Ac-2619D strain on the 7th day of cultivation under conditions of constant aeration utilizes 14.0 to 15.0% of oil and oil products at + 8 ° C; from 47.8 to 48.0% - at a temperature of + 20 ° C; from 57.98 to 58.38% - at a temperature of + 30 ° C; from 68.56 to 69.19% - at a temperature of + 37 ° C (Table 2).
Пример 4. Очистка воды от нефти с помощью клеток штамма Microbacterium paraoxydans ВКМ Ac-2619DExample 4. Water purification from oil using cells of the strain Microbacterium paraoxydans VKM Ac-2619D
В эксикатор объемом 5,0 дм3 вносят 3,0 дм3 водопроводной воды, отстоявшейся в течение суток при комнатной температуре. В воду добавляют 30000 мг сырой неочищенной нефти (нефтепродукта) и 30,0 см3 бактериального изолята штамма Microbacterium paraoxydans ВКМ Ас-2619D, приготовленного по примеру 2, содержащего 1,0-109 клеток/см3 суспензии.In a desiccator with a volume of 5.0 dm 3, add 3.0 dm 3 of tap water that has settled for 24 hours at room temperature. 30000 mg of crude crude oil (petroleum product) and 30.0 cm 3 of bacterial isolate of Microbacterium paraoxydans VKM Ac-2619D strain prepared according to example 2, containing 1.0-10 9 cells / cm 3 of suspension are added to water.
В качестве контроля используют воду в количестве 3,0 дм3 с добавлением 30000 мг нефти (нефтепродукта) и без внесения микробной суспензии бактериального изолята.As a control, water is used in an amount of 3.0 dm 3 with the addition of 30,000 mg of oil (petroleum product) and without introducing a microbial suspension of the bacterial isolate.
Эксперимент проводят в течение 60 суток, поддерживая температуру воды в интервале +15+20°C.The experiment is carried out for 60 days, maintaining the water temperature in the range of + 15 + 20 ° C.
Полученные результаты (таблица 3) показали, что в воде, деструкция нефти под влиянием штамма Microbacterium paraoxydans ВКМ Ас-2619D за 60 суток составила 72,52% для нефти и 72,92% для дизельного топлива. Деструкция в контрольной емкости существенно не изменилась.The results obtained (Table 3) showed that in water, the destruction of oil under the influence of the strain Microbacterium paraoxydans VKM Ac-2619D for 60 days amounted to 72.52% for oil and 72.92% for diesel fuel. Destruction in the control capacity did not change significantly.
Таким образом, преимуществом предлагаемого штамма является то, что он обладает высокой утилизирующей способностью по отношению как к нефти, так и к нефтепродуктам в относительно короткие сроки (от 7 до 60 суток), в широком диапазоне температур от +8 до +37°C, который может быть использован для очистки объектов окружающей среды от загрязнений нефтью и нефтепродуктами (дизельное топливо, масло моторное, масло гидравлическое, газовый конденсат, керосин авиационный, бензин).Thus, the advantage of the proposed strain is that it has a high utilizing capacity with respect to both oil and oil products in a relatively short time (from 7 to 60 days), in a wide temperature range from +8 to + 37 ° C, which can be used to clean the environment from pollution by oil and oil products (diesel fuel, engine oil, hydraulic oil, gas condensate, aviation kerosene, gasoline).
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018111145A RU2687155C1 (en) | 2018-03-28 | 2018-03-28 | STRAIN OF THE MICROBACTERIUM PARAOXYDANS BKM Ac-2619D BACTERIA - OIL AND OIL PRODUCTS DECOMPOSER |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018111145A RU2687155C1 (en) | 2018-03-28 | 2018-03-28 | STRAIN OF THE MICROBACTERIUM PARAOXYDANS BKM Ac-2619D BACTERIA - OIL AND OIL PRODUCTS DECOMPOSER |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2687155C1 true RU2687155C1 (en) | 2019-05-07 |
Family
ID=66430444
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2018111145A RU2687155C1 (en) | 2018-03-28 | 2018-03-28 | STRAIN OF THE MICROBACTERIUM PARAOXYDANS BKM Ac-2619D BACTERIA - OIL AND OIL PRODUCTS DECOMPOSER |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2687155C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112522115A (en) * | 2020-12-09 | 2021-03-19 | 云南大学 | Application of microbacterium Paraoxidans in inducing Arthrobotrys oligospora to generate predatory organ and method |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2292326C2 (en) * | 2005-01-21 | 2007-01-27 | Общество с ограниченной ответственностью "ЛУКОЙЛ-Коми" | Biopreparation-petroleum destructor |
| RU2337069C1 (en) * | 2007-04-02 | 2008-10-27 | Закрытое акционерное общество "Биоойл" | Preparation for soil and water purufication from oil and oil products |
| RU2446900C2 (en) * | 2010-07-13 | 2012-04-10 | Государственное научное учреждение Якутский научно-исследовательский институт сельского хозяйства Россельхозакадемии | Method of cleaning out of frozen soil from crude oil by spore-forming bacteria bacillus subtilis |
| RU2482179C1 (en) * | 2012-04-16 | 2013-05-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт проблем нефти и газа Сибирского отделения Российской академии наук | Bacillus atropheus BACTERIA STRAIN - OIL AND OIL PRODUCT DECOMPOSER |
| RU2525930C1 (en) * | 2013-04-23 | 2014-08-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт проблем нефти и газа Сибирского отделения Российской академии наук | Method of cleaning cryogenic soils and water environment from crude oil and petroleum products by spore-forming bacteria bacillus vallismortis |
-
2018
- 2018-03-28 RU RU2018111145A patent/RU2687155C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2292326C2 (en) * | 2005-01-21 | 2007-01-27 | Общество с ограниченной ответственностью "ЛУКОЙЛ-Коми" | Biopreparation-petroleum destructor |
| RU2337069C1 (en) * | 2007-04-02 | 2008-10-27 | Закрытое акционерное общество "Биоойл" | Preparation for soil and water purufication from oil and oil products |
| RU2446900C2 (en) * | 2010-07-13 | 2012-04-10 | Государственное научное учреждение Якутский научно-исследовательский институт сельского хозяйства Россельхозакадемии | Method of cleaning out of frozen soil from crude oil by spore-forming bacteria bacillus subtilis |
| RU2482179C1 (en) * | 2012-04-16 | 2013-05-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт проблем нефти и газа Сибирского отделения Российской академии наук | Bacillus atropheus BACTERIA STRAIN - OIL AND OIL PRODUCT DECOMPOSER |
| RU2525930C1 (en) * | 2013-04-23 | 2014-08-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт проблем нефти и газа Сибирского отделения Российской академии наук | Method of cleaning cryogenic soils and water environment from crude oil and petroleum products by spore-forming bacteria bacillus vallismortis |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112522115A (en) * | 2020-12-09 | 2021-03-19 | 云南大学 | Application of microbacterium Paraoxidans in inducing Arthrobotrys oligospora to generate predatory organ and method |
| CN112522115B (en) * | 2020-12-09 | 2022-09-02 | 云南大学 | Application of microbacterium Paraoxidans in inducing Arthrobotrys oligospora to generate predatory organ and method |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2523584C1 (en) | BACTERIAL STRAIN Exiguobacterium mexicanum - DESTRUCTOR OF CRUDE OIL AND PETROLEUM PRODUCTS | |
| RU2482179C1 (en) | Bacillus atropheus BACTERIA STRAIN - OIL AND OIL PRODUCT DECOMPOSER | |
| RU2687155C1 (en) | STRAIN OF THE MICROBACTERIUM PARAOXYDANS BKM Ac-2619D BACTERIA - OIL AND OIL PRODUCTS DECOMPOSER | |
| RU2513702C1 (en) | Strain of bacteria bacillus vallismortis - destructor of oil and oil products | |
| RU2675940C1 (en) | Bacillus species vkm b-2815d bacteria strain - oil and petroleum product decomposer | |
| RU2300561C1 (en) | Strain rhodococcus globerulus h-42 for decomposition of petroleum and petroleum products | |
| RU2687131C1 (en) | STRAIN OF THE MICROCOCCUS LUTEUS VKM Ac-2627D BACTERIA - OIL AND OIL PRODUCTS DECOMPOSER | |
| RU2687130C1 (en) | STRAIN OF THE MICROBACTERIUM SPECIES BKM Ac-2625D BACTERIA - OIL AND OIL PRODUCTS DECOMPOSER | |
| RU2560272C1 (en) | Strain of bacteria serratia plymuthica - decomposer of crude oil and petroleum products | |
| KR101475589B1 (en) | A novel microorganism Rhodococcus pyridinovorans EDB2 degrading aromatic compounds | |
| RU2687154C1 (en) | Strain of the stenotrophomonas species vkm b-2818d bacteria - oil and oil products decomposer | |
| RU2615464C1 (en) | Preparation for soils and water bodies purification from oil products | |
| RU2564105C1 (en) | STRAIN OF BACTERIA Exiguobacterium sp. - DECOMPOSER OF CRUDE OIL AND PETROLEUM PRODUCTS | |
| RU2228952C2 (en) | Strain of bacterium pseudomonas stutzeri mev-s1 used for treatment of soil, ground and surface water from petroleum and products of its processing | |
| RU2675941C1 (en) | Bacillus simplex vkm b-2817d bacteria strain - oil and petroleum product decomposer | |
| RU2687127C1 (en) | STRAIN OF THE RHODOCOCCUS ERYTHROPOLIS VKM Ac-2628D BACTERIA - OIL AND OIL PRODUCTS DECOMPOSER | |
| RU2675938C1 (en) | Lisinibacillus fusiformis vkm b-2816d bacteria strain - oil and petroleum product decomposer | |
| RU2558299C1 (en) | STRAIN OF BACTERIA Rhodococcus sp. - DECOMPOSER OF CRUDE OIL AND PETROLEUM PRODUCTS | |
| RU2617950C1 (en) | STRAIN OF BACTERIA Stenotrophomonas maltophilia - OIL AND OILPRODUCT DESTRUCTOR | |
| RU2676850C1 (en) | Lisinibacillus species vkm b-2814d bacteria strain - oil and petroleum product decomposer | |
| CN110168073A (en) | Bacterial consortium for the bacterium bacterial strain of degrade MTBE, TBA and/or HCHO and comprising the bacterium bacterial strain | |
| RU2560279C1 (en) | STRAIN OF BACTERIA Kocuria sp. - DESTRUCTOR OF CRUDE OIL AND PETROLEUM PRODUCTS | |
| RU2257409C1 (en) | Strain rhodococcus erythropolis for decomposition of petroleum and petroleum products | |
| RU2228953C2 (en) | Strain of bacterium pseudomonas alcaligenes mev used for treatment of soil, ground and surface water from petroleum and products of its processing | |
| RU2571943C1 (en) | Method of water medium purification from oil and oil products |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20200329 |