RU2686695C1 - Способ дифференциальной диагностики случной болезни (t. equiperdum) и сурры (t. evansi) лошадей - Google Patents
Способ дифференциальной диагностики случной болезни (t. equiperdum) и сурры (t. evansi) лошадей Download PDFInfo
- Publication number
- RU2686695C1 RU2686695C1 RU2017141202A RU2017141202A RU2686695C1 RU 2686695 C1 RU2686695 C1 RU 2686695C1 RU 2017141202 A RU2017141202 A RU 2017141202A RU 2017141202 A RU2017141202 A RU 2017141202A RU 2686695 C1 RU2686695 C1 RU 2686695C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- dna
- evansi
- equiperdum
- fragment
- samples
- Prior art date
Links
- 241000223089 Trypanosoma equiperdum Species 0.000 title claims abstract description 22
- 241000223095 Trypanosoma evansi Species 0.000 title claims abstract description 21
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 15
- 241000283086 Equidae Species 0.000 title claims abstract description 11
- 208000009514 Dourine Diseases 0.000 title 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 claims abstract description 15
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 14
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 14
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 14
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 14
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 6
- 238000003748 differential diagnosis Methods 0.000 claims abstract description 6
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 claims abstract description 5
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 claims abstract description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 claims abstract description 3
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims abstract description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 9
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 abstract description 8
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 abstract description 6
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 abstract description 6
- 101150053343 NAD5 gene Proteins 0.000 abstract description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 5
- 102000006746 NADH Dehydrogenase Human genes 0.000 abstract description 3
- 108010086428 NADH Dehydrogenase Proteins 0.000 abstract description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 abstract description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 abstract description 2
- 238000009395 breeding Methods 0.000 abstract 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 206010025482 malaise Diseases 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 13
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 8
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 241000222712 Kinetoplastida Species 0.000 description 3
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 3
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 3
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 2
- 238000007476 Maximum Likelihood Methods 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 2
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N nicotinamide-adenine dinucleotide Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 2
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 description 2
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 101150096316 5 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000606646 Anaplasma Species 0.000 description 1
- 208000031295 Animal disease Diseases 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 101100384273 Dictyostelium discoideum clua gene Proteins 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 241000223105 Trypanosoma brucei Species 0.000 description 1
- 241001533601 Trypanozoon Species 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 230000037029 cross reaction Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000009589 serological test Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 201000002311 trypanosomiasis Diseases 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области молекулярной биологии и ветеринарии и предназначено для дифференциальной диагностики случной болезни и сурры лошадей. Для этого сначала из крови больных лошадей или из крови мышей и кроликов, которым трехкратно вводили трипаносомный антиген с адьювантом (гидроокись алюминия) и которых тотально обескровливали на 25-30 день, получают высокоактивные и высокоспецифичные ДНК-содержащие антигены Т. evansi и Т. equiperdum, которые лиофилизируют, а затем используют при постановке полимеразной цепной реакции с праймерами к гену RoTat1.2 VSG, гену субъединицы 5 NADH дегидрогеназы (nad5) с последующим электрофоретическим определением размера амплифицируемого фрагмента нуклеотидной последовательности. При наличии на электрофореграмме фрагмента длиной 410 н.п. диагностируют наличие в образцах ДНК-содержащих антигенов ДНК Т. evansi, а при наличии фрагмента длиной 724 н.п. диагностируют наличие в образцах ДНК-содержащих антигенов ДНК Т. equiperdum соответственно. Способ позволяет достоверно дифференцировать трипаносомы видов Т. evansi и Т. equiperdum. 6 ил.
Description
Изобретение относится к области биотехнологии, молекулярно-генетической диагностики паразитарных болезней животных, научных исследований в ветеринарии и молекулярной биотехнологии и может быть использовано в диагностических исследованиях в научно-исследовательских институтах, ветеринарных лабораториях, животноводческих хозяйствах.
Трипаносомы - одноклеточные простейшие жгутиковые паразиты класса кинетопластид. На территории России встречаются возбудители случной болезни (Т. equiperdum) и сурры (Т. evansi) лошадей.
По данным Международного Эпизоотическое Бюро случную болезнь, вызываемую Trypanosoma equiperdum, регистрируют в Южной Африке, на юге Западной Европы, в Южной Америке, КНР, Среднем Востоке, Средней Азии (Киргизии, Узбекистане) и в России (Сибири). У лошадей случная болезнь протекает наиболее тяжело с высоким уровнем смертности (30…50%).
Tr. evansi широко распространена в Азии, Северной Африке, Центральной и Южной Америке. К ней восприимчивы большинство видов домашних и многие виды диких животных. У непривитых лошадей вызываемая этой трипаносомой болезнь - сурра (суауру), - как правило, заканчивается летально.
Согласно утвержденным Международным Эпизоотическим Бюро Правилам, ввоз лошадей из неблагополучных по случной болезни стран разрешен только при условии полного исключения у них данного трипаносомоза. С этой целью в основном применяют серологические тесты (чаще всего реакцию связывания комплемента и дополнительно иммуноферментный анализ), микроскопию мазков и биопробу на лабораторных животных.
При проведении диагностических исследований особую сложность представляет видовая дифференциация Tr. equiperdum и Tr. evansi, поскольку они неразличимы морфологически, имеют перекрестно реагирующие антигены и многочисленные сходные участки генома (фиг. 1 и фиг. 2).
Вместе с тем, разработка достоверных методов, позволяющих дифференцировать возбудителей этих двух болезней, является важной задачей для ветеринарной медицины, так как от правильности постановки диагноза зависит выбор дальнейшей стратегии. При случной болезни лошадей убивают, а при суре - лечат.
Принцип полимеразной цепной реакции (ПЦР) заключается в многократном увеличении (амплификации) определенного участка ДНК выявляемого объекта путем его копирования с помощью фермента ДНК-полимеразы и специфических праймеров. Специфические праймеры (прямой и обратный) ограничивают определенный фрагмент нуклеотидной последовательности таким образом, что элонгация новой цепи ДНК при амплификации в ПЦР происходит только между ними. Основными параметрами эффективного прохождения реакции амплификации, обеспечивающими специфичность и чувствительность, являются правильный выбор области генома идентифицируемого агента, структура и температурный режим отжига олигонуклеотидных праймеров.
До сих пор никому не удалось создать универсальную тест-систему для дифференциации трипаносом видов Т. evansi и Т. equiperdum методом ПЦР.
Уровень техники
Известен способ дифференциальной диагностики Т. evansi и Т. equiperdum серологическими методами с применение реакции связывания комплемента со специфическими трипаносомными антигенами в разведениях от 1:10 до 1:160. Данный метод позволяет дифференцировать возбудителей друг от друга, но при этом остается вероятность перекрестной реакции ввиду близкородственных генетических связей обеих трипаносом и похожести их некоторых поверхностных антигенов (Георгиу X. Получение высокоактивных и высокоспецифичных трипаносомных сывороток. ВЕТКОРМ» №1/2014 Москва стр. 26-28)
За прототип мы взяли способ диагностики Т. evansi и Т. equiperdum методом ПЦР с использованием одной пары праймеров. Однако эти праймеры позволяют установить лишь принадлежность трипаносомы из исследуемого материала к подроду Trypanozoon, и позволяет только выявить в образце сразу по меньшей мере три вида трипаносом (Т. equiperdum, Т. brucei и Т. evansi) без видовой дифференциации. В случае случной болезни и сурры это не приемлемо, так как позволяет только обнаружить возбудителя в образце, но не может различить их по видовой принадлежности. (Ломакина Н.Ф., Георгиу X., Гулюкин М.И. Трудности дифференциации трипаносом Т. evansi и Т. equiperdum // Сборник трудов VIII сероссийской научно-практической конференции с международным участием «Молекулярная диагностика». Том II. Москва. Март 2014 г. стр. 491-492.)
Раскрытие изобретения
Техническим результатом является достоверная дифференциация трипаносомы видов Т. evansi и Т. equiperdum.
Сущность предполагаемого изобретения заключается в том, что для дифференциальной диагностики сначала из крови больных лошадей или из крови мышей и кроликов, которым трехкратно вводили трипаносомный антиген с адьювантом (гидроокись алюминия) и которых тотально обескровливали на 25-30 день, получают высокоактивные и высокоспецифичные ДНК-содержащие антигены Т. evansi и Т. equiperdum (Фиг. 3), которые лиофилизируют, а затем используют при постановке полимеразной цепной реакции с специально разработанными праймерами: ACGAAGTGGCTTCTGAAGG и AGCTAATCCCAACCTTGCC, AGGAGGAGCCAGAGTGGA и CCAGAGATTCCGCACCACT (Фиг. 4) - к гену RoTat1.2 VSG, гену субъединицы 5 NADH дегитрогеназы (nad5) с последующим электрофоретическим (Фиг. 5 и Фиг. 6) определением размера амплифицируемого фрагмента нуклеотидной последовательности, где по наличию на электрофораграмме фрагментов соответствующей длины в исследуемом образце диагностируют наличие в ДНК-содержащих антигенах паразитов Т. evansi или Т. equiperdum.
Осуществление изобретения.
Предлагаемое изобретение может быть проиллюстрировано следующим примером:
Нами было выявлено, что для выявления Т. evansi и Т. equiperdum целесообразно использовать праймеры к специфичному для обоих возбудителей участку гена RoTat1.2 VSG, гену субъединицы 5 NADH дегитрогеназы (nad5) как наиболее консервативной области генома. При конструировании праймеров и оценке их специфичности использовали нуклеотидные последовательности и программу BLAST, доступные в Интернете на сайте NCBI.
Предложенный способ заключается в следующем: с помощью компьютерной программы DNASTAR (Lasergene Co., USA) на основании программы, предоставленной в базах данных Интернет ресурсов GenBank (CLUA), по генотипам возбудителей выбирают рефернс - последовательность. Праймеры проверяют на отсутствие гомологии с последовательностями других микроорганизмов и генома человека программой BLAST с помощью веб-ресурса Национального центра биотехнологической информации (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/). На основании проведенного компьютерного анализа были подобраны пары праймеров ACGAAGTGGCTTCTGAAGG и AGCTAATCCCAACCTTGCC, AGGAGGAGCCAGAGTGGA и CCAGAGATTCCGCACCACT, которые являются главным компонентом ПЦР и обеспечивают ее специфичность и чувствительность.
Праймеры имеют следующую характеристику: комлементарность выбранной области гена, отсутствие самокомлементарных участков внутри каждого праймера и между прямым и обратным, фланкируют область фрагментов гена RoTat1.2 VSG, гену субъединицы 5 NADH дегитрогеназы (nad5). Синтез разработанных олигонуклеотидных праймеров заказывается в коммерческом сервисном центре.
Амплификация специфических фрагментов ДНК анаплазм с помощью разработанных праймеров для дифференциальной диагностики случной болезни и суры лошадей.
В процессе проведения практических экспериментов подбирают оптимальные условия прохождения полимеразной цепной реакции с разработанными праймерами.
ДНК прогревают при 95° в течение 3 минут и используют для постановки ПЦР. Состав реакционной смеси указан в таблице 4. В качестве положительного контроля и ПЦР используют референтный штамм Альфорт. Предварительно штамм был исследован серологическими методами (РСК и ИФА). В качестве отрицательного контроля используют дистиллированную воду.
Полимеразную цепную реакцию проводят в объеме реакционной смеси 25 мкл на 1 пробу ДНК. Температурно-временной режим проведения реакции для амплификатора «Терцик» («ДНК-технология», Россия) представлен в фиг. 4.
После проведения реакции амплификации продукты ПЦР анализируют методом электрофоретического разделения в 2% агарозном геле с добавлением бромистого этидия.
В процессе ПЦР были получены продукты амплификации ДНК фрагмента специфичного участка гена RoTat1.2 VSG, гену субъединицы 5 NADH дегитрогеназы (nad5), кодирующего ДНК трипаносом. При обнаружении амплифицируемых фрагментов нуклеотидной последовательности соответствующей длины на электрофореграмме в исследуемом образце диагностируют наличие в исследуемом образце трипаносом Т. evansi или Т. equiperdum.
При учете результатов ПЦР в первую очередь оценивали контрольные образцы. В электрофоретической дорожке с положительным контрольным образцом (K+) присутствовала светящаяся полоса на уровне соответствующем фрагменту длиной 410 н.п. (Т. evansi) или 724 н.п. (Т. equiperdum) В отрицательных пробах полоса отсутствовала.
Опытные пробы оценивали по наличию в соответствующей дорожке специфической полосы, которая в положительных образцах располагалась на том же уровне, что и полоса в положительной контрольной пробе.
Заявляемое изобретение апробировано с положительным результатом и регулярной воспроизводимостью в 2015-2017 годах на 50 пробах, полученных из сохраняемых в криобанке лаборатории референтных штаммов Т. evansi и Т. equiperdum и от больных лошадей, поступивших из различных регионов.
Предлагаемое изобретение найдет применение в диагностических исследованиях в научно-исследовательских институтах, ветеринарных лабораториях, животноводческих хозяйствах.
Список литературы.
1. Георгиу X. Получение высокоактивных и высокоспецифичных трипаносомных сывороток. ВЕТКОРМ» №1/2014 Москва стр. 26-28.
2. Ломакина Н.Ф., Георгиу X., Гулюкин М.И. Трудности дифференциации трипаносом Т. evansi и Т. equiperdum // Сборник трудов VIII сероссийской научно-практической конференции с международным участием «Молекулярная диагностика». Том II. Москва. Март 2014 г. стр. 491-492.
На фиг. 1 изображена дендрограмма фрагмента в 410 н.п. из области миникольца кинетопласта, построенная методом ближайшего соседа с повторной выборкой n=1000 в бутстрепном анализе в программе Mega 4. Статистическая достоверность соответствующих узлов дерева представлена в процентах. Шкала делений отражает эволюционное расстояние - число замен нуклеотидов на сайт. Эволюционное расстояние рассчитано методом максимального правдоподобия. Кружками помечены пробы, исследованные в настоящей работе.
На Фиг. 2. изображена дендрограмма фрагмента в 724 н.п. из области миникольца кинетопласта. Статистическая достоверность соответствующих узлов дерева представлена в процентах. Шкала делений отражает эволюционное расстояние - число замен нуклеотидов на сайт. Эволюционное расстояние рассчитано методом максимального правдоподобия. Кружками помечены пробы, исследованные в настоящей работе.
Claims (1)
- Способ дифференциальной диагностики случной болезни Т. Equiperdum и сурры Т. evansi лошадей, включающий в себя постановку полимеразной цепной реакции со специфическими праймерами и отличающийся тем, что для дифференциальной диагностики сначала из крови больных лошадей или из крови мышей и кроликов, которым трехкратно вводят трипаносомный антиген с гидроокисью алюминия и которых тотально обескровливают на 25-30 день, получают высокоактивные и высокоспецифичные ДНК-содержащие антигены Т. evansi и Т. equiperdum, которые лиофилизируют, а затем используют при постановке полимеразной цепной реакции с праймерами ACGAAGTGGCTTCTGAAGG и AGCTAATCCCAACCTTGCC, AGGAGGAGCCAGAGTGGA и CCAGAGATTCCGCACCACT к гену RoTat1.2 VSG, гену субъединицы 5 NADH дегидрогеназы (nad5) с последующим электрофоретическим определением размера амплифицируемого фрагмента нуклеотидной последовательности, где по наличию на электрофореграмме фрагмента длиной 410 н.п.диагностируют наличие в образцах ДНК-содержащих антигенов ДНК Т. evansi, а при наличии фрагмента длиной 724 н.п. диагностируют наличие в образцах ДНК-содержащих антигенов ДНК Т. equiperdum соответственно.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017141202A RU2686695C1 (ru) | 2017-11-27 | 2017-11-27 | Способ дифференциальной диагностики случной болезни (t. equiperdum) и сурры (t. evansi) лошадей |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017141202A RU2686695C1 (ru) | 2017-11-27 | 2017-11-27 | Способ дифференциальной диагностики случной болезни (t. equiperdum) и сурры (t. evansi) лошадей |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2686695C1 true RU2686695C1 (ru) | 2019-04-30 |
Family
ID=66430536
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017141202A RU2686695C1 (ru) | 2017-11-27 | 2017-11-27 | Способ дифференциальной диагностики случной болезни (t. equiperdum) и сурры (t. evansi) лошадей |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2686695C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114045349A (zh) * | 2021-12-02 | 2022-02-15 | 锡林郭勒职业学院 | 梅花鹿和马鹿源性同步检测的引物和探针及试剂盒 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2327169C2 (ru) * | 2006-07-20 | 2008-06-20 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко (ВИЭВ) | Способ получения трипаносомного антигена для серологической диагностики у животных |
| US20120276131A1 (en) * | 2009-11-10 | 2012-11-01 | Virginie Coustou Linares | Anti-trypanosomiasis vaccines and diagnostics |
-
2017
- 2017-11-27 RU RU2017141202A patent/RU2686695C1/ru active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2327169C2 (ru) * | 2006-07-20 | 2008-06-20 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко (ВИЭВ) | Способ получения трипаносомного антигена для серологической диагностики у животных |
| US20120276131A1 (en) * | 2009-11-10 | 2012-11-01 | Virginie Coustou Linares | Anti-trypanosomiasis vaccines and diagnostics |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| SALIM B. et al. Molecular epidemiology of camel trypanosomiasis based on ITS1 rDNA and RoTat 1.2 VSG gene in the Sudan// Parasit Vectors. 2011 Mar 4;4:31. * |
| ГЕОРГИУ Х. Получение высокоактивных и высокоспецифичных трипаносомных сывороток// Веткорм 2014, No1, с.26-28. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114045349A (zh) * | 2021-12-02 | 2022-02-15 | 锡林郭勒职业学院 | 梅花鹿和马鹿源性同步检测的引物和探针及试剂盒 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Fooks et al. | Emerging technologies for the detection of rabies virus: challenges and hopes in the 21st century | |
| Srivastava et al. | Diagnosis of Indian visceral leishmaniasis by nucleic acid detection using PCR | |
| Walls et al. | Improved sensitivity of PCR for diagnosis of human granulocytic ehrlichiosis using epank1 genes of Ehrlichia phagocytophila-group ehrlichiae | |
| Smirnova et al. | Current methods of human and animal brucellosis diagnostics | |
| Muscillo et al. | GIV noroviruses in wastewaters and in stool specimens from hospitalized patients | |
| US20060099628A1 (en) | Diagnostic assay for rickettsia prowazekii disease by detection of responsive gene expression | |
| Maan et al. | A quantitative real-time reverse transcription PCR (qRT-PCR) assay to detect genome segment 9 of all 26 bluetongue virus serotypes | |
| RU2727054C1 (ru) | Способ выявления кДНК коронавируса SARS-CoV-2 с помощью синтетических олигонуклеотидных праймеров в полимеразной цепной реакции | |
| Kauffman et al. | Early detection of Brucella canis via quantitative polymerase chain reaction analysis | |
| Reddy et al. | Molecular typing of bluetongue viruses isolated over a decade in South India | |
| Parker et al. | Investigation of a canine parvovirus outbreak using next generation sequencing | |
| US9689044B2 (en) | Assays and methods to sequence microbes directly from immune complexes | |
| CN116171198A (zh) | 用于快速早期检测感染的宿主rna生物标志物和早期鉴定人的covid-19冠状病毒感染的系统、方法和组合物 | |
| Ayan et al. | PREVALANCE AND MOLECULAR CHARACTERIZATION OF GIARDIA DUODENALIS IN LIVESTOCK IN VAN, TURKEY.. | |
| RU2686695C1 (ru) | Способ дифференциальной диагностики случной болезни (t. equiperdum) и сурры (t. evansi) лошадей | |
| Halecker et al. | Comparative evaluation of different antigen detection methods for the detection of peste des petits ruminants virus | |
| Takeshima et al. | Development of a direct blood-based PCR system to detect BLV provirus using CoCoMo primers | |
| Nehra et al. | Current trends in biosensors for the detection of cattle diseases worldwide | |
| Belák et al. | New developments in the diagnosis of avian influenza | |
| Andriamandimby et al. | Detection in and circulation of Bluetongue virus among domestic ruminants in Madagascar | |
| Barua et al. | Comparison of diagnostic tests for detection of bovine rotavirus a in calf feces | |
| Matsui et al. | Development of serological assays to identify Helicobacter suis and H. pylori infections | |
| Islam et al. | Molecular Detection of Brucellosis, Leptospirosis and Campylobacteriosis by Multiplex PCR and Screening by ELISA Assays in Buffalo Breeding Bulls. | |
| RU2586527C1 (ru) | Олигонуклеотидные праймеры, флюоресцентный зонд и способ для выявления генома вируса эпизоотической диареи свиней методом обратной транскрипции - полимеразной цепной реакции | |
| RU2612263C1 (ru) | Способ диагностики анаплазмоза рогатого скота методом полимеразной цепной реакции |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD4A | Correction of name of patent owner |