RU2685655C1 - Enclosing medium for light microscopy of biological and histological micropreparations - Google Patents
Enclosing medium for light microscopy of biological and histological micropreparations Download PDFInfo
- Publication number
- RU2685655C1 RU2685655C1 RU2018109445A RU2018109445A RU2685655C1 RU 2685655 C1 RU2685655 C1 RU 2685655C1 RU 2018109445 A RU2018109445 A RU 2018109445A RU 2018109445 A RU2018109445 A RU 2018109445A RU 2685655 C1 RU2685655 C1 RU 2685655C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- micropreparations
- resin
- medium
- dye
- histological
- Prior art date
Links
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 title abstract description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 45
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 27
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 14
- 239000004848 polyfunctional curative Substances 0.000 claims abstract description 14
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims abstract description 12
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims abstract description 12
- AXDJCCTWPBKUKL-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-aminophenyl)-(4-imino-3-methylcyclohexa-2,5-dien-1-ylidene)methyl]aniline;hydron;chloride Chemical compound Cl.C1=CC(=N)C(C)=CC1=C(C=1C=CC(N)=CC=1)C1=CC=C(N)C=C1 AXDJCCTWPBKUKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 9
- ZXJXZNDDNMQXFV-UHFFFAOYSA-M crystal violet Chemical compound [Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC=C1[C+](C=1C=CC(=CC=1)N(C)C)C1=CC=C(N(C)C)C=C1 ZXJXZNDDNMQXFV-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 8
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 8
- 239000003822 epoxy resin Substances 0.000 claims abstract description 3
- 229920000647 polyepoxide Polymers 0.000 claims abstract description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 21
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 10
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 239000011790 ferrous sulphate Substances 0.000 claims description 4
- 235000003891 ferrous sulphate Nutrition 0.000 claims description 4
- 229940052224 rosaniline hydrochloride Drugs 0.000 claims description 3
- RUTXIHLAWFEWGM-UHFFFAOYSA-H iron(3+) sulfate Chemical compound [Fe+3].[Fe+3].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O RUTXIHLAWFEWGM-UHFFFAOYSA-H 0.000 claims description 2
- 229910000360 iron(III) sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 17
- 238000003860 storage Methods 0.000 abstract description 7
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 abstract description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 abstract description 3
- 230000006872 improvement Effects 0.000 abstract description 2
- 238000005457 optimization Methods 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 2
- 239000005569 Iron sulphate Substances 0.000 abstract 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 14
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 description 8
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 8
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000588767 Proteus vulgaris Species 0.000 description 5
- 239000006059 cover glass Substances 0.000 description 5
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 5
- 238000003475 lamination Methods 0.000 description 5
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 5
- 229940007042 proteus vulgaris Drugs 0.000 description 5
- 235000007173 Abies balsamea Nutrition 0.000 description 4
- 239000004857 Balsam Substances 0.000 description 4
- NIQCNGHVCWTJSM-UHFFFAOYSA-N Dimethyl phthalate Chemical compound COC(=O)C1=CC=CC=C1C(=O)OC NIQCNGHVCWTJSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 244000018716 Impatiens biflora Species 0.000 description 4
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 4
- DOIRQSBPFJWKBE-UHFFFAOYSA-N dibutyl phthalate Chemical compound CCCCOC(=O)C1=CC=CC=C1C(=O)OCCCC DOIRQSBPFJWKBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 229920005830 Polyurethane Foam Polymers 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 3
- 239000011496 polyurethane foam Substances 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 2
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 2
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 2
- FBSAITBEAPNWJG-UHFFFAOYSA-N dimethyl phthalate Natural products CC(=O)OC1=CC=CC=C1OC(C)=O FBSAITBEAPNWJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960001826 dimethylphthalate Drugs 0.000 description 2
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 239000003517 fume Substances 0.000 description 2
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 2
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000013028 medium composition Substances 0.000 description 2
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 3,7-bis(dimethylamino)phenothiazin-5-ium Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical class [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 244000062730 Melissa officinalis Species 0.000 description 1
- 235000010654 Melissa officinalis Nutrition 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N acrylic acid group Chemical group C(C=C)(=O)O NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 210000003651 basophil Anatomy 0.000 description 1
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000002788 crimping Methods 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000009931 harmful effect Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000010030 laminating Methods 0.000 description 1
- 239000000865 liniment Substances 0.000 description 1
- 230000005923 long-lasting effect Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 229960000907 methylthioninium chloride Drugs 0.000 description 1
- 230000003589 nefrotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000381 nephrotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 231100000189 neurotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002887 neurotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004014 plasticizer Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011477 surgical intervention Methods 0.000 description 1
- 239000000057 synthetic resin Substances 0.000 description 1
- 229920003002 synthetic resin Polymers 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 231100000167 toxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
- Sampling And Sample Adjustment (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области медицины и биологии, а именно к технике микроскопирования и подготовке образцов для исследования бактериологических препаратов и гистологических образцов тканей, взятых у человека или животных при хирургических вмешательствах.The invention relates to the field of medicine and biology, in particular to the technique of microscopy and sample preparation for the study of bacteriological preparations and histological tissue samples taken from humans or animals during surgical interventions.
В настоящее время рутинно используется в качестве заключающей среды для приготовления постоянных микропрепаратов так называемый Канадский бальзам. Так же используются среды на основе акрила и ксилола (гистологическая техника) и безксилольные среды иностранного производства.At present, the so-called Canadian Balsam is routinely used as a closing medium for the preparation of permanent micro-preparations. Acrylic and xylene-based media are also used (histological technique) and foreign-made xylene-free media.
Канадский бальзам чувствителен к температурному фактору и колебаниям влажности. Нередки случаи кристаллизации бальзама при длительном или кратковременном хранении постоянных препаратов. Длительный срок затвердевания бальзама ограничивает применение препаратов через короткий промежуток времени после их изготовления, затрудняет их хранение и транспортировку. Ксилольные среды в составе сред для заливки препаратов используются вещества (например ксилол) наличие которых не допускает использования микропрепаратов на уроках детьми, из за вредных воздействий на здоровье человека. Так же ксилольные среды вступают в взаимодействие с микробиологическими препаратами. Безксилольные среды отличаются очень высокой ценой.Canadian Balsam is sensitive to temperature and humidity fluctuations. Cases of balsam crystallization are not uncommon during long-term or short-term storage of permanent preparations. The long period of hardening of the balm limits the use of drugs after a short period of time after their manufacture, complicates their storage and transportation. Xylene environment in the composition of the media for filling drugs are used substances (such as xylene) whose presence does not allow the use of micro-preparations in the classroom by children, due to harmful effects on human health. Also, xylene media interact with microbiological preparations. The xylene-free media have a very high price.
Известен состав для заключения гистологических препаратов, включающий синтетическую смолу, растворитель и вспомогательный компонент. В качестве смолы (Пенополиуретан, это пластмасса, не смола) берут пенополиуретан (ППУ), в качестве растворителя - ксилол и вспомогательного компонента - дибутилфталат / Патент Ru 2499988, G01N 1/28, 27.11.2013/. К недостатки данного решения относится следующее.Known composition for the conclusion of histological preparations, including synthetic resin, solvent and auxiliary component. Polyurethane foam (PUF) is used as a resin (polyurethane foam, it is plastic, not resin), xylene is used as a solvent and dibutyl phthalate as an auxiliary component. Patent Ru 2499988, G01N 1/28, 11.27.2013 /. The disadvantages of this solution include the following.
Данная технология не подходит для изготовления бактериологических препаратов. Требует использования специального оборудования, вытяжных шкафов. В составе присутствует ксилол и дибутилфталат, что является ограничением для использования в учебном процессе, например в школах. Из-за очень короткого времени застывания, становится невозможной корректировка при заливке.This technology is not suitable for the manufacture of bacteriological preparations. Requires the use of special equipment, fume hoods. The composition contains xylene and dibutyl phthalate, which is a limitation for use in the educational process, for example in schools. Due to the very short freezing time, it becomes impossible to adjust when pouring.
Невозможность устранения дефектов (пузырьки воздуха) нагреванием. Недостаточное (по описанию авторов - удовлетворительное) просветление, делает менее качественным и комфортным микроскопирование препаратов.The inability to eliminate defects (air bubbles) by heating. Insufficient (according to the description of the authors - satisfactory) enlightenment, makes microscopy of preparations less qualitative and comfortable.
Известен также способ для обезвоживания и фиксации биологического материала, при котором используют ацетон в присутствии обезвоженного хлорида кальция, взятого в количестве 10-12% от массы биологического материала. В качестве пластин для закрепления гистологических срезов используют пластины из ламинационных пленок, а защитную среду создают путем закатки гистологических срезов между пластинами из ламинационных пленок с полимерным клеем, предназначенными для холодного ламинирования /Патент Ru 2613175, G01N 1/28, опубл. 15.03.2017/.There is also known a method for dehydration and fixation of a biological material, in which acetone is used in the presence of dehydrated calcium chloride, taken in an amount of 10-12% by weight of the biological material. Plates of lamination films are used as plates for fixing histological sections, and the protective medium is created by crimping histological sections between plates of lamination films with polymer glue intended for cold lamination / Patent Ru 2613175, G01N 1/28, publ. 03/15/2017 /.
При рассмотрении данной технологии были выявлены следующие минусы.When considering this technology, the following disadvantages were identified.
Ацетон является токсичным веществом, следовательно, для изготовления препаратов с его использованием необходим вытяжной шкаф. Время работы при этом также ограничено.Acetone is a toxic substance, therefore, for the manufacture of drugs with its use, a fume hood is required. Operating time is also limited.
Технология применима только для гистологических препаратов.The technology is applicable only for histological preparations.
Ламинирование требует наличия ламинатора. Также очень важно достижение герметичности склеиваемых слоев пленки.Lamination requires a laminator. It is also very important to achieve tightness of the bonded film layers.
Пленка для ламинирования, даже двуслойная, слишком тонкая и мягкая. Возникает вопрос об удобстве микроскопирования на разных моделях микроскопов с разными механизмами фиксации препарата.Laminating film, even bilayer, is too thin and soft. The question arises about the convenience of microscopy on different models of microscopes with different mechanisms of fixation of the drug.
Отсутствие твердой основы, вопреки заявлению авторов, можно тоже отнести к недостаткам. С одной стороны, гибкие препараты не бьются. Но возникает проблема «перегибов» - препарат может быть согнут, после чего в месте перегиба изменяется его прозрачность, да и сам препарат трудно фиксировать для просмотра.The absence of a solid foundation, contrary to the authors' statement, can also be attributed to shortcomings. On the one hand, flexible drugs do not fight. But the problem of “kinks” arises - the drug can be bent, after which its transparency changes at the point of bend, and the drug itself is difficult to fix for viewing.
Пленка для ламинирования при своей упругости способна деформироваться при механическом воздействии: возникают полосы, вдавления, царапины, разрывы, снижающие качество препарата.The film for lamination, with its elasticity, is capable of deforming under mechanical action: stripes, depressions, scratches, ruptures appear, reducing the quality of the preparation.
При использовании во время учебного процесса, например в школах, заламинированный препарат будет поврежден учащимися во время работы с ним.When used during the learning process, for example in schools, the laminated product will be damaged by students while working with it.
Для изготовления бактериальных препаратов данная технология неприменима, так как требует подготовки с использованием ацетона, который будет изменять цвет микропрепарата, что в свою очередь делает невозможным дальнейшее использование препарата.This technology is not applicable for the manufacture of bacterial preparations, since it requires preparation using acetone, which will change the color of the microscopic preparation, which in turn makes it impossible to continue using the preparation.
Еще одна причина, по которой данная технология не подходит для изготовления бактериальных препаратов кроется в технологии изготовления: фиксация материала производится нагревом над пламенем спиртовки или применением достаточно активных химических агентов, высушивание мазка, зачастую, также не обходится без нагрева. Маловероятно, что пленка сохранит свои структуру и свойства после таких воздействий. Даже при отказе от использования термической фиксации клей на внутренних поверхностях слоев пленки можем изменить свои свойства или вообще их потерять.Another reason why this technology is not suitable for the manufacture of bacterial preparations lies in the manufacturing technology: the material is fixed by heating over a spirit lamp flame or using sufficiently active chemical agents, drying the smear often also does not do without heating. It is unlikely that the film will retain its structure and properties after such effects. Even if we refuse to use thermal fixation, the glue on the inner surfaces of the film layers can change its properties or lose them altogether.
Известна среда для заключения гистологических срезов на основе раствора пенопласта в ксилоле с добавлением диметилфталата (патент №2117273, G01N 1/28, от 10.08.1998).A known environment for the conclusion of histological sections based on a solution of foam in xylene with the addition of dimethyl phthalate (patent No. 21117273, G01N 1/28, dated 10.08.1998).
Недостатками данной среды является то, что указанная среда категорически не подходит для изготовления бактериальных микропрепаратов. При нагревании происходит выделение формалина, что требует использования специально оборудованных лабораторий и вытяжных шкафов. При массовом использовании без покровных стекол он выделяется в окружающий воздух, что делает невозможным работу с препаратами в школах и ВУЗах, не оборудованных специальными лабораториями Пленка легко отделяется от предметного стекла, что делает препараты неудобными в использовании, особенно при микроскопировании. Возможны смещения препарата во время перемещения предметного столика микроскопаThe disadvantages of this environment is that this environment is categorically not suitable for the manufacture of bacterial preparations. When heated, formalin is released, which requires the use of specially equipped laboratories and hoods. With mass use without cover glasses, it is released into the surrounding air, which makes it impossible to work with drugs in schools and universities that are not equipped with special laboratories. The film is easily separated from the glass slide, which makes the preparations inconvenient to use, especially during microscopy. Drug offsets are possible during the movement of the microscope stage.
Невозможность использования техники иммерсионного микроскопирования. Поскольку иммерсионная среда наносится непосредственно на микропрепарат, он должен быть покрыт инертным материалом в обязательном порядке.The impossibility of using the technique of immersion microscopy. Since the immersion medium is applied directly to the microdrug, it must be coated with an inert material without fail.
Очень высокая плотность пластификатора. Отказ от использования покровного стекла, снижает устойчивость препарата к внешним воздействиям, страдает объективность оценки микропрепарата.Very high density plasticizer. Refusal to use a cover glass, reduces the resistance of the drug to external influences, suffers from the objectivity of the evaluation of the microslide.
Так же, из-за отказа от использования покровного стекла, поверхность препарата получается немного линзообразной, что влечет аберрации при микроскопировании на больших увеличениях.Also, due to the rejection of the use of a coverslip, the surface of the preparation is slightly lens-shaped, which leads to aberrations during microscopy at high magnifications.
Из-за использования диметилфталата, и ксилола, среда является нефротоксичной и нейротоксичной, что ограничивает использование препаратов в учебном процессе.Due to the use of dimethyl phthalate, and xylene, the medium is nephrotoxic and neurotoxic, which limits the use of drugs in the learning process.
Следует также отметить необходимость создания для хранения препаратов определенных условий, трудность упаковки и транспортировки. Данное решение выбрано в качестве прототипа.It should also be noted the need to create for storage of drugs certain conditions, the difficulty of packaging and transportation. This solution is chosen as a prototype.
Таким образом, техническая проблема, на решение которой направлено заявляемое изобретение, заключается в невозможности использовании существующих сред для приготовления изготовления бактериальных микропрепаратов (микроорганизмы, бактерии, простейшие). Указанные решения разрабатывались для гистологической микроскопии (ткани организма, кусочки органов). Данные среды приводят к ухудшению оптических свойств изготовленных образцов, кристаллизации. Техническим результатом предлагаемого изобретения является улучшение оптических свойств микропрепаратов, сокращение времени их полимеризации, оптимизация режимов хранения микропрепаратов.Thus, the technical problem, the solution of which the claimed invention is directed, is the impossibility of using existing media for the preparation of the manufacture of bacterial micropreparations (microorganisms, bacteria, protozoa). These solutions were developed for histological microscopy (body tissue, pieces of organs). These environments lead to a deterioration of the optical properties of the fabricated samples, crystallization. The technical result of the invention is to improve the optical properties of the micropreparations, reducing the time of polymerization, optimization of storage modes of the micropreparations.
Для решения указанной технической проблемы и достижения заявленного технического результата предлагается среда для заключения микропрепаратов, содержащая смолу и отвердитель. Отличительной особенностью среды является то, что в качестве смолы используется эпоксидная смола, и краситель, при следующем соотношении компонентов, масс. %:To solve this technical problem and achieve the stated technical result, a medium for the conclusion of micro-preparations containing resin and hardener is proposed. A distinctive feature of the medium is that epoxy resin and dye are used as resin, in the following ratio of components, mass. %:
В качестве красителя используется состав, включающий фуксин - солянокислый розанилин, метиловый фиолетовый, сульфат железа(II), щавелевую кислоту при следующем соотношении компонентов, масс. %:As a dye, a composition is used that includes fuchsine - rosaniline hydrochloride, methyl violet, ferric sulfate, oxalic acid in the following ratio of components, mass. %:
Заявленная среда может использоваться для изготовления бактериальных и гистологических препаратов.The claimed medium can be used for the manufacture of bacterial and histological preparations.
Технология получения среды для заключения микропрепаратов следующая.The technology for obtaining the medium for the conclusion of micro-preparations is as follows.
Смешивается смола и отвердитель, перемешиваются ручным способом с помощью шпателя, в стеклянной посуде нагретой до 40-45°С. Из полученной смеси ручным способом (металлическая иголка) или с помощью центрифугирования удаляются воздушные пузыри, образовавшиеся при смешивании. Краситель добавляется в отвердитель нагретый до 40 С и перемешивается до исчезновения видимости (до перемешивания отвердителя со смолой).Mixed resin and hardener, mixed by hand with a spatula, in a glass dish heated to 40-45 ° C. From the resulting mixture by hand (metal needle) or by centrifuging remove air bubbles formed during mixing. The dye is added to the hardener heated to 40 ° C and mixed until the visibility disappears (before the hardener mixes with the resin).
Через 5-7 минут после перемешивания, на предметное стекло с подготовленным (окрашенным и высушенным) препаратом наносится приготовленная заключающая среда. Предметное стекло устанавливается над источником тепла с температурой 50-60°С (вертикальный обогреватель, лабораторная горелка) наносится заключающая среда (каплей со шпателя, или при помощи шприца) и накрывается покровным стеклом, под действием температуры заключающая среда становится более текучей и самостоятельно растекается по препарату в пределах покровного стекла. Далее препарат помещается в комнатную температуру и оставляется до полной полимеризации (20-24 часа).After 5-7 minutes after mixing, the prepared enclosing medium is applied on a glass slide with the prepared (painted and dried) preparation. A glass slide is placed above a heat source with a temperature of 50-60 ° C (vertical heater, laboratory burner), the enclosing medium is applied (drop from a spatula, or using a syringe) and covered with a cover glass, the enclosing medium becomes more fluid under the influence of temperature and spreads the drug within the cover glass. Next, the drug is placed at room temperature and left until complete polymerization (20-24 hours).
Далее приводятся конкретные примеры реализации изобретения и фигуры.The following are specific examples of the implementation of the invention and the figure.
Фиг. 1 Фотография Proteus vulgaris, промышленный способ (состав среды неизвестен).FIG. 1 Photograph of Proteus vulgaris, industrial method (medium composition unknown).
Фиг. 2 Фотография Proteus vulgaris (препарат с использованием представленной заключающей среды)FIG. 2 Photograph of Proteus vulgaris (preparation using the presenting medium)
Фиг. 3 Гистологический препарат (фрагмент аппендикса), увеличение X125FIG. 3 Histological preparation (fragment of appendix), increase X125
Фиг. 4 Гистологический препарат (фрагмент аппендикса), увеличение Х500FIG. 4 Histological preparation (fragment of the appendix), magnification X500
Пример 1.Example 1
Для изготовления микропрепарата использовался следующий состав:For the manufacture of micropreparations used the following composition:
При таком соотношении компонентов срок отвердения составляет до 10 часов. Заключающая среда твердая, на поверхности не остается следов механического воздействия. Одновременно среда достаточно хрупкая. В данном примере наиболее выражено и длительно сохраняется прозрачность.With this ratio of components, the curing time is up to 10 hours. The closing medium is solid, there are no traces of mechanical impact on the surface. At the same time, the environment is quite fragile. In this example, the most pronounced and long-lasting transparency.
Наиболее высокие результаты были получены при изготовлении бактериальных микропрепаратов. Готовое изделие сравнивалось с микропрепаратами фирмы 3BScientific. Несмотря на использование достаточно дешевой и простой технологии изготовления, микропрепараты не уступали по качеству зарубежному оппонентуThe highest results were obtained in the manufacture of bacterial microscopic preparations. The finished product was compared with the microscopic preparations of 3BScientific. Despite the use of a fairly cheap and simple manufacturing technology, the micropreparations were not inferior in quality to the foreign opponent
Пример 2.Example 2
Для изготовления микропрепарата использовался следующий состав:For the manufacture of micropreparations used the following composition:
Заключающая среда оптимально сбалансирована для заливки бактериальных препаратов. Время отвердения 15-20 часов. Вязкость оптимальна для прилегания покровного стекла. Минимально количество оптических дефектов. Наиболее стабильная при микроскопировании бактериальных микропрепаратов.The closing medium is optimally balanced for the filling of bacterial preparations. Hardening time 15-20 hours. Viscosity is optimal for fitment of cover glass. The minimum number of optical defects. Most stable microscopic microscopic specimens.
Пример 3.Example 3
Для изготовления микропрепарата использовался следующий состав:For the manufacture of micropreparations used the following composition:
При данном соотношении время отвердения увеличивается до 24 часов. Данная среда подходит для изготовления микробиологических препаратов, при механических воздействиях на поверхности среды, выступающей из-под покровного стекла, остаются дефекты.With this ratio, the curing time is increased to 24 hours. This medium is suitable for the manufacture of microbiological preparations, with mechanical effects on the surface of the medium protruding from under the coverslip, defects remain.
Пример 4.Example 4
В сравнении с бактериальными препаратами, изготовленными на производстве, данная заключающая среда, при добавлении красителя (фуксин-солянокислый розанилин от 30 до 40%; метиловый фиолетовый - от 40 до 50%; сульфат железа(II) - от 5 до 15%; щавелевую кислоту - от 5 до 15%) показывает улучшение оптических свойств при микроскопировании бактериальных препаратов.In comparison with the bacterial preparations made at work, this enclosing medium, when dye is added (fuchsin hydrochloric rosaniline, from 30 to 40%; methyl violet, from 40 to 50%; ferrous sulfate (5), from 5 to 15%; oxalic acid - from 5 to 15%) shows the improvement of optical properties during microscopy of bacterial preparations.
В качестве примера представлены фотографии микроорганизма Proteus vulgaris. На фигуре 1-Proteus vulgaris, промышленный способ (состав среды неизвестен), на фиг.. 2 Proteus vulgaris (препарат с использованием представленной заключающей среды)As an example, photographs of the microorganism Proteus vulgaris are presented. In FIG. 1, Proteus vulgaris, industrial method (medium composition unknown), FIG. 2, Proteus vulgaris (preparation using the presenting medium)
Фотографии выполнены на одном оборудовании (что подтверждает дефект линзы в центре). Более четко видны нижележащие слои в зоне расфокуссировки.Photos are made on the same equipment (which confirms the defect of the lens in the center). More clearly visible underlying layers in the zone defocusing.
Пример 5.Example 5
Проведенные исследования, показали что при использовании заявленной среды время полимеризации сокращается с 2-7 суток до 10-20 часов (таблица 1).Studies have shown that when using the stated medium, the polymerization time is reduced from 2-7 days to 10-20 hours (Table 1).
Пример 6.Example 6
Предлагаемая заключающая среда является заменой канадскому бальзаму, при изготовлении гистологических микропрепаратов.The proposed closing medium is a substitute for Canadian balsam, in the manufacture of histological microscopic preparations.
Для изготовления микропрепарата использовался следующий состав:For the manufacture of micropreparations used the following composition:
Смола - 59,940%Resin - 59.940%
Отвердитель - 40,000%Hardener - 40,000%
Краситель - 0,060%Dye - 0,060%
Более доступные компоненты, меньшие требования среды к условиям хранения, отсутствие необходимости применения токсичных растворителей, меньший срок, и наличие полного отвердения (полимеризации), безопасность готовых препаратов, меньшая требовательность готовых препаратов к условиям хранения, высокая стойкость к воздействию солнечного света и колебаниям температур, отсутствие потери качества с течением времени, высокое качество готовых микропрепаратов. Это отличает данную среду от рутинно используемых, и позволяет повысить удобство применения заключающей среды и качество готовых микропрепаратов.More accessible components, lower environmental requirements for storage conditions, no need to use toxic solvents, less time, and the presence of complete hardening (polymerization), safety of finished products, less demanding finished products to storage conditions, high resistance to sunlight and temperature fluctuations, no loss of quality over time, high quality ready-made microdrugs. This distinguishes this medium from the routinely used, and allows us to improve the usability of the enclosing medium and the quality of the finished micropreparations.
Применение красителя в составе среды обеспечивает эффект просветления, что в свою очередь повышает качество готового изделия.The use of dye in the composition of the environment provides the effect of enlightenment, which in turn improves the quality of the finished product.
Также следует отметить, что при отвердении заключающей среды формируется нечто наподобие триплекса из предметного и покровного стекол а также среды между ними, что повышает ударостойкость и механическую прочность микропрепаратов.It should also be noted that during the hardening of the enclosing medium, something like a triplex is formed from the objective and surface glasses as well as the medium between them, which increases the impact resistance and mechanical strength of the micropreparations.
Изготовленные гистологические микропрепараты, имеют высокое качество, как видно на рисунках фиг. 3 и 4.The histological specimens manufactured are of high quality, as can be seen in the figures of FIG. 3 and 4.
Данный вариант с меньшей концентрацией красителя, более подходит для микроскопирования заранее окрашенных метиленовым синим препаратов, или более базофильных структур.This variant with a lower concentration of the dye is more suitable for microscopic examination of preparations pre-stained with methylene blue or more basophil structures.
Пример 7.Example 7
Для изготовления микропрепарата использовался следующий состав:For the manufacture of micropreparations used the following composition:
Таким образом, использование изобретения, по сравнению с известными решениями той же задачи, позволяет изготавливать постоянные микропрепараты высокого качества, с хорошими оптическими свойствами благодаря использованию отвердителя с маркировкой (ОП-оптический, коэффициент преломления 1.50-1.55.) Постоянные микропрепараты изготовленные по такой технологии, не склонны желтеть. Данная заключающая среда не изменяет цвета, и свойств подготовленных биологических объектов, и не требует многоэтапной сложной предварительной подготовки объектов к заливке. Очень существенным моментом является возможность использования микропрепаратов уже через 20 часов после приготовления. Добавление красителя в состав среды позволяет получить эффект просветления, что положительно отражается на качестве прозрачности препарата. Немаловажна стоимость заключающей среды, которая ниже аналогов. Так же среда после полимеризации является нетоксичной, что позволяет использовать изготовленные с помощью данного изобретения препараты в учебном процессе без применения дополнительных средств защиты глаз и органов дыхания школьников и студентов.Thus, the use of the invention, in comparison with the known solutions of the same problem, makes it possible to produce permanent high-quality micropreparations with good optical properties due to the use of a hardener with marking (OP-optical, refractive index 1.50-1.55.) Constant micropreparations manufactured according to this technology, not inclined to turn yellow. This enclosing environment does not change the colors and properties of the prepared biological objects, and does not require multi-stage, complex preliminary preparation of objects for pouring. A very important point is the possibility of using microscopic preparations within 20 hours after preparation. Adding dye to the composition of the medium allows to obtain the effect of enlightenment, which has a positive effect on the quality of the transparency of the preparation. The cost of the closing medium, which is lower than the analogs, is also important. Also, the medium after polymerization is non-toxic, which makes it possible to use the preparations made with the help of the present invention in the learning process without the use of additional eye and respiratory protection for schoolchildren and students.
Claims (5)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018109445A RU2685655C1 (en) | 2018-03-17 | 2018-03-17 | Enclosing medium for light microscopy of biological and histological micropreparations |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018109445A RU2685655C1 (en) | 2018-03-17 | 2018-03-17 | Enclosing medium for light microscopy of biological and histological micropreparations |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2685655C1 true RU2685655C1 (en) | 2019-04-22 |
Family
ID=66314642
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2018109445A RU2685655C1 (en) | 2018-03-17 | 2018-03-17 | Enclosing medium for light microscopy of biological and histological micropreparations |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2685655C1 (en) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1725094A1 (en) * | 1989-02-09 | 1992-04-07 | Всесоюзный Научно-Исследовательский Институт Гельминтологии Им.Акад.К.И.Скрябина | Medium for preparation of sections of biological objects |
| RU2273027C1 (en) * | 2004-12-28 | 2006-03-27 | Государственное учреждение "Челябинский государственный институт лезерной хирургии" | Method for preparing blood preparation for electron-microscopic investigation |
| RU2600058C2 (en) * | 2011-04-22 | 2016-10-20 | Феи Компани | Automated sample preparation |
| WO2017074900A1 (en) * | 2015-10-29 | 2017-05-04 | Vibrant Holdings, Llc | Methods, tools, and tool assemblies for biomolecular analysis using microarrays |
-
2018
- 2018-03-17 RU RU2018109445A patent/RU2685655C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1725094A1 (en) * | 1989-02-09 | 1992-04-07 | Всесоюзный Научно-Исследовательский Институт Гельминтологии Им.Акад.К.И.Скрябина | Medium for preparation of sections of biological objects |
| SU1725093A1 (en) * | 1989-02-09 | 1992-04-07 | Всесоюзный Научно-Исследовательский Институт Гельминтологии Им.Акад.К.И.Скрябина | Medium for preparation of sections of biological objects |
| RU2273027C1 (en) * | 2004-12-28 | 2006-03-27 | Государственное учреждение "Челябинский государственный институт лезерной хирургии" | Method for preparing blood preparation for electron-microscopic investigation |
| RU2600058C2 (en) * | 2011-04-22 | 2016-10-20 | Феи Компани | Automated sample preparation |
| WO2017074900A1 (en) * | 2015-10-29 | 2017-05-04 | Vibrant Holdings, Llc | Methods, tools, and tool assemblies for biomolecular analysis using microarrays |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Tran et al. | Synthesis and characterization of silicone contact lenses based on TRIS-DMA-NVP-HEMA hydrogels | |
| US3736042A (en) | Microscope slide assembly | |
| Khetan et al. | Cellular encapsulation in 3D hydrogels for tissue engineering | |
| RU2685655C1 (en) | Enclosing medium for light microscopy of biological and histological micropreparations | |
| Prieto et al. | Application of the DNA-specific stain methyl green in the fluorescent labeling of embryos | |
| Thibeaux et al. | Biofilm formation and quantification using the 96-microtiter plate | |
| Bashirzadeh et al. | Stiffness measurement of soft silicone substrates for mechanobiology studies using a widefield fluorescence microscope | |
| Stone et al. | Patterns of protein adsorption in chromatographic particles visualized by optical microscopy | |
| Park et al. | PDMS microchannel surface modification with Teflon for algal lipid research | |
| Zhang et al. | Nanosheet wrapping-assisted coverslip-free imaging for looking deeper into a tissue at high resolution | |
| WO2019110078A1 (en) | Uv curable mounting medium | |
| Saritas et al. | Optical clearing and imaging of immunolabeled kidney tissue | |
| CN106644632B (en) | Artificial substratum for cell monolayer tiling | |
| Saify et al. | Mounting Media-An Untouched Aspect. | |
| JP7092294B2 (en) | A material for coating a biological tissue made of an ultra-thin film, and a biological tissue coated with the material. | |
| Quesnel | Chapter X Methods of Microculture | |
| CN106226896A (en) | A kind of can be with the microscope mirror oil compound method of transparent microporous filter membrane | |
| Han et al. | Grafting zwitterionic brushes from the surface of an epoxy-based transparent hydrogel for antifouling performance | |
| Donius et al. | FRET imaging in three-dimensional hydrogels | |
| Gage | Apparatus and methods for micro-incineration | |
| Galy et al. | Remote magnetic actuation of micrometric probes for in situ 3D mapping of bacterial biofilm physical properties | |
| WO2020153463A1 (en) | Microscope immersion liquid and method for observing sample by employing immersion liquid | |
| DE102016009908A1 (en) | UV-curable mounting agent | |
| Hamad | USING FIBERGLASS TO CONSOLIDATE COMPLEMENTING MATERIALS IN ARCHAEOLOGICAL GLASS “EXPERIMENTAL STUDY” | |
| Hagiwara et al. | Initial 3D Cell Cluster Control in a Hybrid Gel Cube Device for Repeatable Pattern Formations |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20210318 |