RU2680408C1 - Method for determining the influence of low-molecular biologically active substances on the affinite of protein-ligand bonding - Google Patents
Method for determining the influence of low-molecular biologically active substances on the affinite of protein-ligand bonding Download PDFInfo
- Publication number
- RU2680408C1 RU2680408C1 RU2018109670A RU2018109670A RU2680408C1 RU 2680408 C1 RU2680408 C1 RU 2680408C1 RU 2018109670 A RU2018109670 A RU 2018109670A RU 2018109670 A RU2018109670 A RU 2018109670A RU 2680408 C1 RU2680408 C1 RU 2680408C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- biologically active
- antigen
- protein
- effect
- serum
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к биологии, медицине, а именно к фундаментальной и клинической биохимии, и позволяет выявлять влияние низкомолекулярных биологически активных веществ на взаимодействие белков с лигандами.The invention relates to biology, medicine, namely to fundamental and clinical biochemistry, and allows you to identify the effect of low molecular weight biologically active substances on the interaction of proteins with ligands.
В настоящее время исследование роли малых молекул в регуляции белок-белковых и белок-лигандных взаимодействий представляется актуальной задачей. Нами были показаны особенности влияния некоторых малых молекул на белок-белковые взаимодействия [1-3], однако в литературе отсутствуют данные о влиянии низкомолекулярных соединений на аффинитет связи белок-лиганд.At present, the study of the role of small molecules in the regulation of protein-protein and protein-ligand interactions seems to be an urgent task. We have shown the features of the influence of some small molecules on protein – protein interactions [1-3], however, there are no data in the literature on the effect of low molecular weight compounds on the affinity of the protein – ligand bond.
Известен метод определения лиганда в образце [4], суть которого заключается в определении содержания одного типа лиганда в образце на выбранном носителе, имеющего блокируемый объект, не способный специфически взаимодействовать с выявляемым лигандом и участвующий в произведении детектируемого сигнала, по которому определяют лиганд в образце.A known method for determining the ligand in a sample [4], the essence of which is to determine the content of one type of ligand in a sample on a selected medium having a blockable object, unable to specifically interact with the detected ligand and is involved in the production of a detectable signal by which the ligand is determined in the sample.
Недостатком данного метода является трудоемкость выполнения, отсутствие стандартной методики выполнения и интерпретации результата, методика варьирует в зависимости от типа лиганда и исследуемого объекта.The disadvantage of this method is the complexity of the execution, the lack of a standard methodology for the implementation and interpretation of the result, the technique varies depending on the type of ligand and the studied object.
Известен способ определения адренореактивности эритроцитов по их адренозависимой агглютинации у женщин на различных этапах репродуктивного процесса [5] при этом определяется изменение времени начала агглютинации эритроцитов женщин, имеющих II, III или IV группу крови под влиянием адреналина.A known method for determining the adrenoreactivity of erythrocytes by their adrenergic agglutination in women at various stages of the reproductive process [5] is determined by the change in the time of onset of agglutination of erythrocytes in women with blood group II, III or IV under the influence of adrenaline.
Недостатком способа является субъективная визуальная оценка времени начала агглютинации эритроцитов, что делает данный метод не стандартизированным. Способ подразумевает оценку антиген-антительных взаимодействий только по системе АВ0. Помимо этого изучается влияние адреналина только на антигены.The disadvantage of this method is the subjective visual assessment of the start time of red blood cell agglutination, which makes this method not standardized. The method involves the evaluation of antigen-antibody interactions only in the AB0 system. In addition, the effect of adrenaline on antigens only is being studied.
Известен способ лабораторной диагностики вирусного гепатита С, в основе которого лежит белок-белковое взаимодействие [6]. Проводят выявление антител и специфических иммунных комплексов, при этом в иммуноферментном тесте определяют антитела к неструктурным белкам (NS4) как в свободном виде, так и в составе иммунных комплексов. Результаты реакции учитывают на иммуноферментном анализаторе и сравнивают показатели оптической плотности (ОП) растворов в лунках 2-х параллельных рядов, отмытых 6М мочевиной и фосфатно-солевым раствором (ФСР) соответственно. При увеличении показателя ОП в лунках, промытых 6М мочевиной, по сравнению с ОП в лунках, промытых только ФСР, на 12% и более результат считают положительным. Данный способ выбран в качестве прототипа.A known method of laboratory diagnosis of viral hepatitis C, which is based on protein-protein interaction [6]. Antibodies and specific immune complexes are detected, while antibodies to non-structural proteins (NS4) are determined both in free form and as part of immune complexes in an enzyme-linked immunosorbent assay. The results of the reaction are taken into account on an enzyme immunoassay and the optical density (OD) of the solutions in the wells of 2 parallel rows washed with 6M urea and phosphate-saline solution (FSR), respectively, is compared. With an increase in OD in wells washed with 6M urea, compared with OD in wells washed only with SDF, by 12% or more, the result is considered positive. This method is selected as a prototype.
Недостатком метода является то, что воздействие оказывается на сформированный комплекс антиген-антитело, а также то, что запрещено применение реагентов, содержащих в качестве субстрата ортофенилендиамин, в виду его высокой степени канцерогенности и необходимости специальной технологии утилизации (Приказ Минздрава РФ №322 от 21.10.2002 "О применении в практике здравоохранения иммуноферментных тест-систем для выявления поверхностного антигена вируса гепатита В (HBsAg) и антител к вирусу гепатита С (анти-ВГС) в сыворотке крови человека").The disadvantage of this method is that the effect is on the formed antigen-antibody complex, and also that the use of reagents containing orthophenylenediamine as a substrate is prohibited, due to its high degree of carcinogenicity and the need for special disposal technology (Order of the Ministry of Health of the Russian Federation No. 322 of 21.10. 2002 "On the use of enzyme immunoassay test systems for the detection of hepatitis B virus surface antigen (HBsAg) and hepatitis C virus antibodies (anti-HCV) in human serum").
Целью является создание способа для выявления влияния низкомолекулярных биологически активных веществ на аффинитет белок-лигандной связи.The aim is to create a method for detecting the effect of low molecular weight biologically active substances on the affinity of a protein-ligand bond.
Эта цель достигается тем, что биологически активное соединение низкомолекулярной массы вносят в лунку планшета с иммобилизованными антителами к антигену вируса гепатита перед этапом внесения сыворотки для определения воздействия на антитела или в сыворотку перед внесением в лунку планшета для определения воздействия на антигены; в контрольные образцы вносят раствор для разведения сыворотки, входящий в состав набора, в эквивалентном объеме, после чего производят инкубацию в течение 5 минут в темном месте; проводят иммуноферментный анализ, строят калибровочный график зависимости оптической плотности от концентрации антигена вирусного гепатита; по полученному калибровочному графику рассчитывают титр антигенов в контрольных и опытных образцах, производят статистическую обработку полученных результатов, рассчитывая среднее арифметическое, ошибку среднего, стандартную ошибку, изменение концентрации антигена в опытном образце по сравнению с контрольным образцом в абсолютных числах и процентах, при изменении концентрации антигена на ≥±10% по сравнению с контрольным образцом делают вывод о наличии влияния исследуемого низкомолекулярного биологически активного вещества на аффинитет белок-лигандной связи, а при изменении концентрации антигена на <±10% - об отсутствии влияния выбранного низкомолекулярного биологически активного вещества на аффинитет белок-лигандной связи.This goal is achieved by the fact that the biologically active compound of low molecular weight is added to the well of the plate with immobilized antibodies to the hepatitis V antigen before the step of adding serum to determine the effect on the antibodies or to the serum before adding to the well of the tablet to determine the effect on the antigens; in the control samples make a solution for diluting serum, which is part of the kit, in an equivalent volume, after which they incubate for 5 minutes in a dark place; conduct an enzyme-linked immunosorbent assay, build a calibration graph of the dependence of optical density on the concentration of antigen of viral hepatitis; according to the obtained calibration graph, the antigen titer in the control and experimental samples is calculated, the results are statistically processed, calculating the arithmetic mean, average error, standard error, the change in the concentration of antigen in the experimental sample compared to the control sample in absolute numbers and percent, when the antigen concentration changes ≥ ± 10% compared with the control sample conclude that there is an effect of the studied low molecular weight biologically active substance on affi protein-ligand bond immunity, and when the antigen concentration changes by <± 10% - the absence of the effect of the selected low molecular weight biologically active substance on the protein-ligand bond affinity.
Предложенный способ является простым и удобным, так как сопоставим с любой методикой иммуноферментного анализа; недорогим, поскольку не требует привлечения дополнительных реактивов, кроме тех, что входят в стандартный набор иммуноферментного анализа; быстрым - результаты опыта возможно получить через 3-4 часа; объективным, так как заключение о влиянии биологически активного вещества выдается на основании проведения статистических расчетов и нахождении изменения концентрации антигена в опытном образце по сравнению с контрольным образцом в процентах; безопасным, так как не содержит канцерогенных веществ; кроме того данный способ позволяет изолированно выявлять влияние низкомолекулярных веществ как на антигены, так и на антитела.The proposed method is simple and convenient, as it is comparable to any enzyme-linked immunosorbent assay; inexpensive, since it does not require the use of additional reagents, except those that are included in the standard set of enzyme-linked immunosorbent assay; fast - the results of the experiment can be obtained in 3-4 hours; objective, since a conclusion on the influence of a biologically active substance is issued on the basis of statistical calculations and finding the change in the concentration of antigen in the experimental sample in comparison with the control sample in percent; safe, since it does not contain carcinogens; in addition, this method allows the isolated detection of the influence of low molecular weight substances both on antigens and antibodies.
Способ выявления влияния низкомолекулярных биологически активных веществ на аффинитет белок-лигандной связи реализуют следующим образом:A method for detecting the effect of low molecular weight biologically active substances on the affinity of a protein-ligand bond is implemented as follows:
Для определения влияния исследуемого низкомолекулярного биологически активного вещества на антитело к антигену гепатита вирусной этиологии цельную кровь пациента носителя выбранного антигена без добавления консервантов центрифугируют для отделения форменных элементов от сыворотки. Готовят раствор биологически активного вещества требуемой концентрации. Исследуемое вещество добавляют в лунку планшета с последующей инкубацией в течение 5 минут. Соотношение сыворотки и исследуемого низкомолекулярного вещества составляет 9:1 с сохранением общего объема пробы, вносимой в лунку на первом этапе иммуноферментного анализа, заявленной в инструкции производителя. В контрольные образцы вносят раствор для разведения сыворотки, входящий в состав набора, в эквивалентном объеме. Далее постановку иммуноферментного анализа производят согласно методике производителя.To determine the effect of the studied low molecular weight biologically active substance on the antibody to the hepatitis V virus etiology antigen, the whole blood of the patient carrier of the selected antigen is centrifuged without adding preservatives to separate the formed elements from the serum. A solution of the biologically active substance of the desired concentration is prepared. The test substance is added to the well of the tablet, followed by incubation for 5 minutes. The ratio of serum to the studied low molecular weight substance is 9: 1, while maintaining the total sample volume introduced into the well at the first stage of the enzyme immunoassay, as stated in the manufacturer's instructions. In the control samples make a solution for the dilution of serum, which is part of the kit, in an equivalent volume. Next, the enzyme immunoassay is performed according to the manufacturer’s methodology.
Учет результата производят путем измерения оптической плотности образцов при заданной длине волны. На основании полученной оптической плотности производят расчет титра антигенов по калибровочному графику. График строят в системе линейных координат СИ, график представляет собой линейную зависимость оптической плотности (о.е.) от концентрации выбранного антигена вируса гепатита (МЕ/мл) в калибровочных образцах, содержащих известный титр указанного антигена (МЕ/мл), входящих в состав набора.The result is taken into account by measuring the optical density of the samples at a given wavelength. Based on the obtained optical density, the antigen titer is calculated according to a calibration graph. The graph is built in the SI linear coordinate system, the graph is a linear dependence of the optical density (pu) on the concentration of the selected hepatitis virus antigen (ME / ml) in calibration samples containing the known titer of the indicated antigen (ME / ml) included recruitment.
Для определения влияния низкомолекулярного биологически активного вещества на антиген гепатита вирусной этиологии цельную кровь пациента без добавления консервантов центрифугируют для отделения форменных элементов от плазмы. Исследуемое вещество добавляют непосредственно в сыворотку с последующей инкубацией в течение 5 минут. Соотношение сыворотки и исследуемого низкомолекулярного вещества составляет 9:1 с сохранением общего объема пробы, вносимой в лунку на первом этапе иммуноферментного анализа, заявленной в инструкции производителя. В контрольные образцы вносят раствор для разведения сыворотки, входящий в состав набора, в эквивалентном объеме. Дальнейшее исследование производят в соответствии с приведенным выше методом.To determine the effect of a low molecular weight biologically active substance on the hepatitis V virus etiology antigen, the patient’s whole blood without the addition of preservatives is centrifuged to separate the formed elements from the plasma. The test substance is added directly to serum, followed by incubation for 5 minutes. The ratio of serum to the studied low molecular weight substance is 9: 1, while maintaining the total sample volume introduced into the well at the first stage of the enzyme immunoassay, as stated in the manufacturer's instructions. In the control samples make a solution for the dilution of serum, which is part of the kit, in an equivalent volume. Further research is carried out in accordance with the above method.
Учет результата производят путем измерения оптической плотности образцов при заданной длине волны и расчета титра антигенов в контрольных и опытных образцах по калибровочному графику. Калибровочный график строят в системе линейных координат СИ, график представляет собой линейную зависимость оптической плотности (о.е.) от концентрации выбранного антигена вируса гепатита (МЕ/мл) в калибровочных образцах, содержащих известный титр указанного антигена (МЕ/мл), входящих в состав набора.The result is taken into account by measuring the optical density of the samples at a given wavelength and calculating the titer of antigens in the control and experimental samples according to the calibration graph. The calibration graph is built in the SI linear coordinate system, the graph is a linear dependence of the optical density (pu) on the concentration of the selected hepatitis virus antigen (ME / ml) in calibration samples containing a known titer of the indicated antigen (ME / ml) included in set composition.
Производят статистическую обработку полученных результатов, рассчитывая среднее арифметическое, ошибку среднего, стандартную ошибку, изменение концентрации антигена в опытном образце по сравнению с контрольным образцом в абсолютных числах и процентах. При изменении концентрации антигена на ≥±10% по сравнению с контрольным образцом делают вывод о наличии влияния исследуемого низкомолекулярного биологически активного вещества на аффинитет белок-лигандной связи, а при изменении концентрации антигена на <±10% - об отсутствии влияния выбранного низкомолекулярного биологически активного вещества на аффинитет белок-лигандной связи.Perform statistical processing of the results, calculating the arithmetic mean, the error of the mean, standard error, the change in the concentration of antigen in the experimental sample compared to the control sample in absolute numbers and percent. When the antigen concentration is changed by ≥ ± 10% compared with the control sample, it is concluded that there is an effect of the studied low molecular weight biologically active substance on the affinity of the protein-ligand bond, and when the antigen concentration is changed by <± 10%, the absence of the effect of the selected low molecular weight biologically active substance on the affinity of protein-ligand bonds.
Способ сопровождается лабораторными примерами.The method is accompanied by laboratory examples.
Лабораторный пример №1Laboratory example No. 1
Исследуемым низкомолекулярным биологически активным соединением был выбран оксалоацетат, исследовали влияние оксалоацетата на аффинитет связи HBsAg-антиHBsAg. Исследование проводилось в тест-системе «HBsAg-ИФА-БЕСТ-количественный» производства Вектор-Бест. Опытный образец содержал 10 мкл раствора оксалоацетата, внесенных в лунку планшета перед этапом внесения сыворотки с последующей инкубацией в темном месте в течение 5 мин, и 90 мкл сыворотки пациента носителя HBsAg. Контрольный образец содержал 10 мкл раствора для разведения сыворотки из набора «HBsAg-ИФА-БЕСТ-количественный» производства Вектор-Бест, внесенных в лунку планшета перед этапом внесения сыворотки с последующей инкубацией в темном месте в течение 5 мин, и 90 мкл сыворотки пациента носителя HBsAg.Oxaloacetate was chosen as the studied low molecular weight biologically active compound; the effect of oxaloacetate on the affinity of the HBsAg-anti-HBsAg bond was studied. The study was conducted in the test system "HBsAg-IFA-BEST-quantitative" production of Vector-Best. The test sample contained 10 μl of a solution of oxaloacetate, introduced into the well of the plate before the step of introducing serum, followed by incubation in a dark place for 5 min, and 90 μl of patient serum from an HBsAg carrier. The control sample contained 10 μl of serum dilution solution from the HBsAg-IFA-BEST-quantitative kit produced by Vector-Best, added to the plate well before the serum application step, followed by incubation in a dark place for 5 min, and 90 μl of the patient serum HBsAg.
Была приготовлена навеска оксалоацетата 24 мг, которую затем растворили в 1 л дистиллированной воды, что соответствует физиологической концентрации оксалоацетата в организме.A 24 mg sample of oxaloacetate was prepared, which was then dissolved in 1 liter of distilled water, which corresponds to the physiological concentration of oxaloacetate in the body.
Для определения влияния исследуемого вещества на анти HBsAg цельную кровь пациента носителя HBsAg без добавления консервантов центрифугировали для отделения форменных элементов от сыворотки. 10 мкл полученного раствора добавляли в лунки планшета и инкубировали 5 минут в темном месте. После инкубации в лунки добавили по 90 мкл сыворотки. Далее следовали инструкции «HBsAg-ИФА-БЕСТ-количественный», утвержденной 07.06.2012 приказом Росздравнадзора №2753-пр/12.To determine the effect of the test substance on anti-HBsAg, the whole blood of the patient’s HBsAg carrier without the addition of preservatives was centrifuged to separate the cells from the serum. 10 μl of the resulting solution was added to the wells of the plate and incubated for 5 minutes in a dark place. After incubation, 90 μl of serum was added to the wells. Then followed the instructions “HBsAg-IFA-BEST-quantitative”, approved on 07/07/2012 by order of Roszdravnadzor No. 2753-pr / 12.
График линейной зависимости оптической плотности от концентрации HBsAg (МЕ/мл) в калибровочных образцах, содержащих известный титр HBsAg (МЕ/мл), входящих в состав набора, строили в системе линейных координат СИ. В приложении 1 на фигуре 1 представлен калибровочный график для определения концентрации HBsAg (МЕ/мл).A graph of the linear dependence of the optical density on the concentration of HBsAg (IU / ml) in calibration samples containing the known titer of HBsAg (ME / ml) included in the kit was built in the SI linear coordinate system.
Производили статистическую обработку полученных результатов, рассчитывая среднее арифметическое, ошибку среднего, стандартную ошибку, изменение концентрации антигена в опытном образце по сравнению с контрольным образцом в абсолютных числах и процентах. Полученные результаты выявления влияния оксалоацетата на взаимодействие HBsAg и анти-HBsAg представлены в Приложении 2 Таблице 1.Statistical processing of the obtained results was carried out, calculating the arithmetic mean, the error of the mean, standard error, and the change in the concentration of antigen in the experimental sample compared to the control sample in absolute numbers and percent. The results of the determination of the effect of oxaloacetate on the interaction of HBsAg and anti-HBsAg are presented in
Концентрация HBsAg при взаимодействии оксалоацетата с анти-HBsAg по сравнению с контрольным образцом изменилась на 18,43%, что больше 10%. На основании полученных данных делаем вывод о том, что низкомолекулярное биологически активное вещество оксалоацетат влияет на аффинитет связи HBsAg-антиHBsAg.The concentration of HBsAg in the interaction of oxaloacetate with anti-HBsAg compared with the control sample changed by 18.43%, which is more than 10%. Based on the data obtained, we conclude that the low molecular weight biologically active substance oxaloacetate affects the affinity of the HBsAg-antiHBsAg bond.
Лабораторный пример №2Laboratory example No. 2
Исследуемым низкомолекулярным биологически активным соединением была выбрана мочевина, исследовали влияние мочевины на аффинитет связи HBsAg-антиHBsAg. Исследование проводилось в тест-системе «HBsAg-ИФА-БЕСТ-количественный» производства Вектор-Бест. Опытный образец содержал 10 мкл раствора мочевины и 90 мкл сыворотки пациента носителя HBsAg, инкубированные в темном месте в течение 5 мин. Контрольный образец содержал 10 мкл раствора для разведения сыворотки из набора «HBsAg-ИФА-БЕСТ-количественный» производства Вектор-Бест и 90 мкл сыворотки пациента носителя HBsAg, инкубированные в темном месте в течение 5 мин.Urea was chosen as the studied low molecular weight biologically active compound; the effect of urea on the affinity of the HBsAg-antiHBsAg bond was studied. The study was conducted in the test system "HBsAg-IFA-BEST-quantitative" production of Vector-Best. The test sample contained 10 μl of urea solution and 90 μl of patient serum from an HBsAg carrier incubated in a dark place for 5 minutes. The control sample contained 10 μl of serum dilution solution from the HBsAg-IFA-BEST-quantitative kit produced by Vector-Best and 90 μl of patient serum from the HBsAg carrier incubated in a dark place for 5 min.
Была приготовлена навеска мочевины 36 мг, которую затем растворили в 1 л дистиллированной воды, что соответствует физиологической концентрации мочевины в организме.A 36 mg sample of urea was prepared, which was then dissolved in 1 liter of distilled water, which corresponds to the physiological concentration of urea in the body.
Для определения влияния исследуемого вещества на HBsAg цельную кровь пациента без добавления консервантов центрифугировали для отделения форменных элементов от плазмы. 10 мкл раствора мочевины добавили к 90 мкл сыворотки и инкубировали 5 минут при комнатной температуре в темном месте. Далее следовали инструкции «HBsAg-ИФА-БЕСТ-количественный», утвержденной 07.06.2012 приказом Росздравнадзора №2753-пр/12.To determine the effect of the test substance on HBsAg, the patient’s whole blood without preservatives was centrifuged to separate the cells from the plasma. 10 μl of urea solution was added to 90 μl of serum and incubated for 5 minutes at room temperature in a dark place. Then followed the instructions “HBsAg-IFA-BEST-quantitative”, approved on 07/07/2012 by order of Roszdravnadzor No. 2753-pr / 12.
График линейной зависимости оптической плотности от концентрации HBsAg (МЕ/мл) в калибровочных образцах, содержащих известный титр HBsAg (МЕ/мл), входящих в состав набора, строили в системе линейных координат СИ аналогичным образом.A graph of the linear dependence of the optical density on the concentration of HBsAg (IU / ml) in calibration samples containing the known titer of HBsAg (IU / ml) included in the kit was constructed in the SI linear coordinate system in a similar way.
Производили статистическую обработку полученных результатов, рассчитывая среднее арифметическое, ошибку среднего, стандартную ошибку, изменение концентрации антигена в опытном образце по сравнению с контрольным образцом в абсолютных числах и процентах. Полученные результаты выявления влияния мочевины на взаимодействие HBsAg и анти-HBsAg представлены в Приложении 3 Таблице 2.Statistical processing of the obtained results was carried out, calculating the arithmetic mean, the error of the mean, standard error, and the change in the concentration of antigen in the experimental sample compared to the control sample in absolute numbers and percent. The results of the determination of the effect of urea on the interaction of HBsAg and anti-HBsAg are presented in Appendix 3 of Table 2.
Концентрация HBsAg при взаимодействии мочевины с HBsAg по сравнению с контрольным образцом изменилась на 3,43%, что меньше 10%. На основании полученных данных делаем вывод о том, что низкомолекулярное биологически активное вещество мочевина не влияет на аффинитет связи HBsAg-антиHBsAg.The concentration of HBsAg in the interaction of urea with HBsAg compared with the control sample changed by 3.43%, which is less than 10%. Based on the data obtained, we conclude that the low molecular weight biologically active substance urea does not affect the affinity of the HBsAg-antiHBsAg bond.
Способ выявления влияния низкомолекулярных биологически активных веществ на аффинитет белок-лигандной связи может быть использован в фундаментальных исследованиях в области протеомики: изучение действий гормонов, нейромедиаторов, токсинов на белок-белковые взаимодействия; в разработке методов персонифицированной медицины; в фармакологии при разработке и испытании лекарственных средств, таргетных препаратов, биологических добавок.A method for detecting the effect of low molecular weight biologically active substances on the affinity of a protein-ligand bond can be used in fundamental research in the field of proteomics: studying the effects of hormones, neurotransmitters, toxins on protein-protein interactions; in the development of personalized medicine methods; in pharmacology in the development and testing of drugs, targeted drugs, biological additives.
Источники информацииInformation sources
1. Гильмиярова ФН, Рыскина ЕА, Колотьева НА, Потехина ВИ, Горбачева ИВ. Белок-лигандные взаимодействия: влияние минорных компонентов метаболизма. Сибирское медицинское обозрение. 2017; (6); 12-21. DOI: 10.20333/2500136-2017-6-12-21.1. Gilmiyarova FN, Ryskina EA, Kolotiev NA, Potekhin VI, Gorbachev IV. Protein-ligand interactions: the effect of minor components of metabolism. Siberian Medical Review. 2017; (6); 12-21. DOI: 10.20333 / 2500136-2017-6-12-21.
2. Gilmiyarova F. Kolotyeva N., Radomskaya V., Gusyakova О., Gorbacheva I., Potekhina V. Role of the Metabolic Minor Components in the Regulation of Intermolecular Interaction // Journal of Biosciences and Medicines. 2016. Vol. 4. pp. 28-35. doi:10.4236/jbm.2016.47004.2. Gilmiyarova F. Kolotyeva N., Radomskaya V., Gusyakova O., Gorbacheva I., Potekhina V. Role of the Metabolic Minor Components in the Regulation of Intermolecular Interaction // Journal of Biosciences and Medicines. 2016. Vol. 4. pp. 28-35. doi: 10.4236 / jbm.2016.47004.
3. Gylmiyarova, F.N., Radomskaya, V.M., Gusyakova, O.A. et al. The effect of Pyruvate on Antibody Interaction with Group-Specific Erythrocyte Antigens // Biochem. Moscow Suppl. Ser. B. 2014. Vol. 8. pp. 260-265 doi:10.1134/S1990750814030056.3. Gylmiyarova, F.N., Radomskaya, V.M., Gusyakova, O.A. et al. The effect of Pyruvate on Antibody Interaction with Group-Specific Erythrocyte Antigens // Biochem. Moscow Suppl. Ser. B. 2014. Vol. 8. pp. 260-265 doi: 10.1134 / S1990750814030056.
4. Nikitin M.P., Shipunova V.O, Deyev S.M, Nikitin P.I Biocomputing based on particle disassembly // Nat Nanotechnol. 2014. Vol. 9. pp. 716-22.4. Nikitin M.P., Shipunova V.O., Deyev S.M., Nikitin P.I. Biocomputing based on particle disassembly // Nat Nanotechnol. 2014. Vol. 9. pp. 716-22.
5. Володченко A.M., Циркин В.И., Хлыбова С.В., Дмитриева С.Л.. Адренореактивность эритроцитов, определяемая по их адренозависимой агглютинации, у женщин на различных этапах репродуктивного процесса. Вятский медицинский вестник, №1, 2013. С 25-30.5. Volodchenko A.M., Tsirkin VI, Khlybova SV, Dmitrieva SL. Adrenoreactivity of red blood cells, determined by their adrenergic agglutination, in women at various stages of the reproductive process. Vyatka Medical Bulletin, No. 1, 2013. From 25-30.
6. Аксенов О.А., Мукомоловачева А.Л., Горячева Л.Г., Рогозина Н.В., Колобов А.А., патент RU 2226694 С2, 2004 г.6. Aksenov O. A., Mukomolovacheva A. L., Goryacheva L. G., Rogozina N. V., Kolobov A. A., patent RU 2226694 C2, 2004.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018109670A RU2680408C1 (en) | 2018-03-19 | 2018-03-19 | Method for determining the influence of low-molecular biologically active substances on the affinite of protein-ligand bonding |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018109670A RU2680408C1 (en) | 2018-03-19 | 2018-03-19 | Method for determining the influence of low-molecular biologically active substances on the affinite of protein-ligand bonding |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2680408C1 true RU2680408C1 (en) | 2019-02-21 |
Family
ID=65479207
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2018109670A RU2680408C1 (en) | 2018-03-19 | 2018-03-19 | Method for determining the influence of low-molecular biologically active substances on the affinite of protein-ligand bonding |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2680408C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2698628C1 (en) * | 2019-06-13 | 2019-08-28 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Самарский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method of detecting the effect of low-molecular biologically active substances on the conformation of protein |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2226694C2 (en) * | 2002-05-30 | 2004-04-10 | Научно-исследовательский институт детских инфекций | Method for differential diagnostics of viral hepatitis c |
| WO2016210009A2 (en) * | 2015-06-22 | 2016-12-29 | University Of Southern California | Methods for analyzing the interaction between a target protein and a ligand |
-
2018
- 2018-03-19 RU RU2018109670A patent/RU2680408C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2226694C2 (en) * | 2002-05-30 | 2004-04-10 | Научно-исследовательский институт детских инфекций | Method for differential diagnostics of viral hepatitis c |
| WO2016210009A2 (en) * | 2015-06-22 | 2016-12-29 | University Of Southern California | Methods for analyzing the interaction between a target protein and a ligand |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| GAO P.J. et al., Studies on specific interaction of beta-2-glycoprotein I with HBsAg, World J Gastroenterol. 2003 Sep;9(9):2114-6- . * |
| ГИЛЬМИЯРОВА Ф. Н. и др., Влияние малых молекул на процессы межмолекулярного взаимодействия, лежащие в основе лигандных технологий лабораторной диагностики, Клиническая лабораторная диагностика, 2010, N 7, С. 14 -18. * |
| ГИЛЬМИЯРОВА Ф. Н. и др., Влияние малых молекул на процессы межмолекулярного взаимодействия, лежащие в основе лигандных технологий лабораторной диагностики, Клиническая лабораторная диагностика, 2010, N 7, С. 14 -18. GAO P.J. et al., Studies on specific interaction of beta-2-glycoprotein I with HBsAg, World J Gastroenterol. 2003 Sep;9(9):2114-6- реферат. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2698628C1 (en) * | 2019-06-13 | 2019-08-28 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Самарский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method of detecting the effect of low-molecular biologically active substances on the conformation of protein |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Kim et al. | Quantitative measurement of serum allergen-specific IgE on protein chip | |
| JP4151986B2 (en) | Method for measuring lymphocyte function | |
| Hayrapetyan et al. | Enzyme-linked immunosorbent assay: types and applications | |
| CN101833009A (en) | Double antibody complex retinol-binding protein assay kit | |
| BR112016009460B1 (en) | METHOD FOR DETECTING THE PRESENCE OF NEUTRALIZING ANTIBODIES | |
| Shah et al. | Calibration-free concentration analysis of protein biomarkers in human serum using surface plasmon resonance | |
| Peterson et al. | Antibodies to phosphatidylserine/prothrombin complex in antiphospholipid syndrome: analytical and clinical perspectives | |
| Panzer et al. | Serological features of antibodies to protamine inducing thrombocytopenia and thrombosis | |
| Muthana et al. | ABO blood type correlates with survival on prostate cancer vaccine therapy | |
| RU2680408C1 (en) | Method for determining the influence of low-molecular biologically active substances on the affinite of protein-ligand bonding | |
| CN108291909A (en) | Analyze analyte detection and its method | |
| MX2022012831A (en) | Systems and methods for assaying large molecules with improved sensitivity. | |
| EP3865873A1 (en) | Method and assay reagent for immunoassay of leucine-rich ?2 glycoprotein | |
| CN108780086A (en) | The subcellular localization of target analyte | |
| Haverland et al. | Immunoreactivity of anti-gelsolin antibodies: implications for biomarker validation | |
| Verbeke et al. | Increased C-reactive protein values in the absence of inflammation: monoclonal immunoglobulin interference in immunonephelometry | |
| CN102721819B (en) | Competitive inhibitory enzyme-linked immunoassay kit of adiponectin and method | |
| CN113702362A (en) | Method for quantitatively detecting IFN-gamma concentration by using chemiluminescence method and detection kit thereof | |
| CN112485447A (en) | Kit for determining complement C1q | |
| Iordanishvili et al. | The detection of IgG class antibodies against SARS-CoV-2 nucleocapsid protein by application of nanoparticles | |
| CN108709989A (en) | A method of NeuGc ALPHA2-3Gal content is detected based on aptamer | |
| Boonkaew et al. | Point-of-care testing for C-reactive protein in a sequential microfluidic device | |
| WO2018223151A1 (en) | Flow cytometry system and methods for the diagnosis of infectious disease | |
| Cheng et al. | Determination of Schistosoma japonicum circulating antigens in dilution serum by piezoelectric immunosensor and S/N enhancement | |
| Schindler et al. | Diagnostic performance study of an antigen microarray for the detection of antiphospholipid antibodies in human serum |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20200320 |