RU2675354C1 - Способ стимуляции веса плода на ранних сроках беременности в эксперименте - Google Patents
Способ стимуляции веса плода на ранних сроках беременности в эксперименте Download PDFInfo
- Publication number
- RU2675354C1 RU2675354C1 RU2018111840A RU2018111840A RU2675354C1 RU 2675354 C1 RU2675354 C1 RU 2675354C1 RU 2018111840 A RU2018111840 A RU 2018111840A RU 2018111840 A RU2018111840 A RU 2018111840A RU 2675354 C1 RU2675354 C1 RU 2675354C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- pregnancy
- cells
- weight
- cpc
- growth
- Prior art date
Links
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 title claims abstract description 88
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 title claims abstract description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 12
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 title claims abstract description 8
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 title claims description 14
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 39
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 claims abstract description 24
- 210000002445 nipple Anatomy 0.000 claims abstract description 9
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 claims abstract description 7
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 7
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 abstract description 6
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 abstract description 6
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 41
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 37
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 34
- 238000011161 development Methods 0.000 description 23
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 23
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 22
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 20
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 description 16
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 12
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 11
- 230000004578 fetal growth Effects 0.000 description 11
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 10
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 description 9
- 102100038803 Somatotropin Human genes 0.000 description 9
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 9
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 9
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 9
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 9
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 9
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 9
- 101800001586 Ghrelin Proteins 0.000 description 8
- 102400000442 Ghrelin-28 Human genes 0.000 description 8
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 description 8
- GNKDKYIHGQKHHM-RJKLHVOGSA-N ghrelin Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CN)COC(=O)CCCCCCC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 GNKDKYIHGQKHHM-RJKLHVOGSA-N 0.000 description 8
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 description 8
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 description 8
- 210000002993 trophoblast Anatomy 0.000 description 8
- PROQIPRRNZUXQM-UHFFFAOYSA-N (16alpha,17betaOH)-Estra-1,3,5(10)-triene-3,16,17-triol Natural products OC1=CC=C2C3CCC(C)(C(C(O)C4)O)C4C3CCC2=C1 PROQIPRRNZUXQM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 7
- 230000009471 action Effects 0.000 description 7
- 229960001348 estriol Drugs 0.000 description 7
- PROQIPRRNZUXQM-ZXXIGWHRSA-N estriol Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)([C@H]([C@H](O)C4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 PROQIPRRNZUXQM-ZXXIGWHRSA-N 0.000 description 7
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 7
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 7
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 7
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 6
- 230000006870 function Effects 0.000 description 6
- 230000007045 gastrulation Effects 0.000 description 6
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 6
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 6
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 6
- 102000016267 Leptin Human genes 0.000 description 5
- 108010092277 Leptin Proteins 0.000 description 5
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 5
- 210000003785 decidua Anatomy 0.000 description 5
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 5
- 229940039781 leptin Drugs 0.000 description 5
- NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N leptin Chemical compound O=C([C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)CCSC)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N 0.000 description 5
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 4
- 210000001808 exosome Anatomy 0.000 description 4
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 4
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 4
- 230000005305 organ development Effects 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 3
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 3
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 3
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 3
- 210000004100 adrenal gland Anatomy 0.000 description 3
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 3
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 3
- 230000002559 cytogenic effect Effects 0.000 description 3
- 230000002357 endometrial effect Effects 0.000 description 3
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 3
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 3
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 3
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 230000003076 paracrine Effects 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 3
- 231100000255 pathogenic effect Toxicity 0.000 description 3
- 230000028742 placenta development Effects 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 3
- 238000011121 vaginal smear Methods 0.000 description 3
- NGZUCVGMNQGGNA-UHFFFAOYSA-N 7-[5-(2-acetamidoethyl)-2-hydroxyphenyl]-3,5,6,8-tetrahydroxy-9,10-dioxoanthracene-1,2-dicarboxylic acid 7-[5-(2-amino-2-carboxyethyl)-2-hydroxyphenyl]-3,5,6,8-tetrahydroxy-9,10-dioxoanthracene-1,2-dicarboxylic acid 3,5,6,8-tetrahydroxy-7-[2-hydroxy-5-(2-hydroxyethyl)phenyl]-9,10-dioxoanthracene-1,2-dicarboxylic acid 3,6,8-trihydroxy-1-methyl-9,10-dioxoanthracene-2-carboxylic acid Chemical compound Cc1c(C(O)=O)c(O)cc2C(=O)c3cc(O)cc(O)c3C(=O)c12.OCCc1ccc(O)c(c1)-c1c(O)c(O)c2C(=O)c3cc(O)c(C(O)=O)c(C(O)=O)c3C(=O)c2c1O.CC(=O)NCCc1ccc(O)c(c1)-c1c(O)c(O)c2C(=O)c3cc(O)c(C(O)=O)c(C(O)=O)c3C(=O)c2c1O.NC(Cc1ccc(O)c(c1)-c1c(O)c(O)c2C(=O)c3cc(O)c(C(O)=O)c(C(O)=O)c3C(=O)c2c1O)C(O)=O NGZUCVGMNQGGNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010000234 Abortion spontaneous Diseases 0.000 description 2
- 101000599951 Homo sapiens Insulin-like growth factor I Proteins 0.000 description 2
- 102100037852 Insulin-like growth factor I Human genes 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 2
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 2
- 210000004246 corpus luteum Anatomy 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 230000032692 embryo implantation Effects 0.000 description 2
- 210000002308 embryonic cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000005168 endometrial cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000008175 fetal development Effects 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 208000014951 hematologic disease Diseases 0.000 description 2
- 210000001320 hippocampus Anatomy 0.000 description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 2
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 description 2
- 230000003169 placental effect Effects 0.000 description 2
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 2
- 230000015284 positive regulation of neurogenesis Effects 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 208000000995 spontaneous abortion Diseases 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 230000002861 ventricular Effects 0.000 description 2
- DNXHEGUUPJUMQT-UHFFFAOYSA-N (+)-estrone Natural products OC1=CC=C2C3CCC(C)(C(CC4)=O)C4C3CCC2=C1 DNXHEGUUPJUMQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 17β-estradiol Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 0.000 description 1
- -1 ANGF1 Proteins 0.000 description 1
- 102100034608 Angiopoietin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010048036 Angiopoietin-2 Proteins 0.000 description 1
- BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N Aspirin Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010003805 Autism Diseases 0.000 description 1
- 208000020706 Autistic disease Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 201000006474 Brain Ischemia Diseases 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 241000189617 Chorda Species 0.000 description 1
- 102100021809 Chorionic somatomammotropin hormone 1 Human genes 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 201000010374 Down Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- DNXHEGUUPJUMQT-CBZIJGRNSA-N Estrone Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 DNXHEGUUPJUMQT-CBZIJGRNSA-N 0.000 description 1
- 208000001951 Fetal Death Diseases 0.000 description 1
- 208000030271 Fetal Nutrition disease Diseases 0.000 description 1
- 206010055690 Foetal death Diseases 0.000 description 1
- 206010016862 Foetal malnutrition Diseases 0.000 description 1
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003745 Hepatocyte Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 108090000100 Hepatocyte Growth Factor Proteins 0.000 description 1
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 description 1
- 101100478248 Homo sapiens SPRED1 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010070511 Hypoxic-ischaemic encephalopathy Diseases 0.000 description 1
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 206010056254 Intrauterine infection Diseases 0.000 description 1
- 102100030412 Matrix metalloproteinase-9 Human genes 0.000 description 1
- 108010015302 Matrix metalloproteinase-9 Proteins 0.000 description 1
- 208000034702 Multiple pregnancies Diseases 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- 241000283903 Ovis aries Species 0.000 description 1
- 102100041030 Pancreas/duodenum homeobox protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710144033 Pancreas/duodenum homeobox protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 208000032542 Pathological Protein Aggregation Diseases 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 108010003044 Placental Lactogen Proteins 0.000 description 1
- 239000000381 Placental Lactogen Substances 0.000 description 1
- 102100024819 Prolactin Human genes 0.000 description 1
- 108010057464 Prolactin Proteins 0.000 description 1
- 102000013275 Somatomedins Human genes 0.000 description 1
- 102000005157 Somatostatin Human genes 0.000 description 1
- 108010056088 Somatostatin Proteins 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 208000030886 Traumatic Brain injury Diseases 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 229960001138 acetylsalicylic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 210000001643 allantois Anatomy 0.000 description 1
- 238000011316 allogeneic transplantation Methods 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002491 angiogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 210000004198 anterior pituitary gland Anatomy 0.000 description 1
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 230000004900 autophagic degradation Effects 0.000 description 1
- 239000003855 balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 210000002459 blastocyst Anatomy 0.000 description 1
- 210000001109 blastomere Anatomy 0.000 description 1
- 230000036765 blood level Effects 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 230000001364 causal effect Effects 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 206010008129 cerebral palsy Diseases 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 230000037020 contractile activity Effects 0.000 description 1
- 230000008094 contradictory effect Effects 0.000 description 1
- 210000004087 cornea Anatomy 0.000 description 1
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 1
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 1
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- XEYBRNLFEZDVAW-ARSRFYASSA-N dinoprostone Chemical compound CCCCC[C@H](O)\C=C\[C@H]1[C@H](O)CC(=O)[C@@H]1C\C=C/CCCC(O)=O XEYBRNLFEZDVAW-ARSRFYASSA-N 0.000 description 1
- 229960002986 dinoprostone Drugs 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 230000007184 endocrine pathway Effects 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 229960005309 estradiol Drugs 0.000 description 1
- 229930182833 estradiol Natural products 0.000 description 1
- 229960003399 estrone Drugs 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 1
- 231100000479 fetal death Toxicity 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 210000001654 germ layer Anatomy 0.000 description 1
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 1
- 208000037824 growth disorder Diseases 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 235000012907 honey Nutrition 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001861 immunosuppressant effect Effects 0.000 description 1
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000009027 insemination Effects 0.000 description 1
- 230000035992 intercellular communication Effects 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 208000023589 ischemic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000006651 lactation Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 1
- 230000036244 malformation Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 1
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 1
- 210000000274 microglia Anatomy 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 208000015994 miscarriage Diseases 0.000 description 1
- 210000000472 morula Anatomy 0.000 description 1
- 230000007659 motor function Effects 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 210000001020 neural plate Anatomy 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004766 neurogenesis Effects 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 239000000813 peptide hormone Substances 0.000 description 1
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 210000001778 pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 230000024715 positive regulation of secretion Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 239000000583 progesterone congener Substances 0.000 description 1
- 102000003998 progesterone receptors Human genes 0.000 description 1
- 108090000468 progesterone receptors Proteins 0.000 description 1
- 229940097325 prolactin Drugs 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- XEYBRNLFEZDVAW-UHFFFAOYSA-N prostaglandin E2 Natural products CCCCCC(O)C=CC1C(O)CC(=O)C1CC=CCCCC(O)=O XEYBRNLFEZDVAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 238000011552 rat model Methods 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 230000003578 releasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 210000005241 right ventricle Anatomy 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N somatostatin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)[C@@H](C)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N)C(O)=O)=O)[C@H](O)C)C1=CC=CC=C1 NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N 0.000 description 1
- 229960000553 somatostatin Drugs 0.000 description 1
- 239000003270 steroid hormone Substances 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 229940037128 systemic glucocorticoids Drugs 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009529 traumatic brain injury Effects 0.000 description 1
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 1
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G09—EDUCATION; CRYPTOGRAPHY; DISPLAY; ADVERTISING; SEALS
- G09B—EDUCATIONAL OR DEMONSTRATION APPLIANCES; APPLIANCES FOR TEACHING, OR COMMUNICATING WITH, THE BLIND, DEAF OR MUTE; MODELS; PLANETARIA; GLOBES; MAPS; DIAGRAMS
- G09B23/00—Models for scientific, medical, or mathematical purposes, e.g. full-sized devices for demonstration purposes
- G09B23/28—Models for scientific, medical, or mathematical purposes, e.g. full-sized devices for demonstration purposes for medicine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/48—Reproductive organs
- A61K35/51—Umbilical cord; Umbilical cord blood; Umbilical stem cells
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Virology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Algebra (AREA)
- Computational Mathematics (AREA)
- Hematology (AREA)
- Mathematical Analysis (AREA)
- Mathematical Optimization (AREA)
- Mathematical Physics (AREA)
- Pure & Applied Mathematics (AREA)
- Business, Economics & Management (AREA)
- Educational Administration (AREA)
- Educational Technology (AREA)
- Theoretical Computer Science (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной медицине, клеточной биологии. В качестве стимулятора веса плода в организм беременной крысы на 9 или 10 или 11 день беременности однократно вводят подкожно в область каждого из сосков молочной железы 100 мкл суспензии клеток-мононуклеаров пуповинной крови человека, содержащей 6.9 миллиона клеток. При этом общее количество инъецированных клеток должно составить 69 миллионов клеток пуповинной крови человека в объеме 1000 мкл. Способ позволяет расширить арсенал действующих средств для стимуляции веса плодов в эксперименте и в клинической практике после получения разрешения на клиническое применение данного способа, а также исключить использование наркоза у беременной женщины на ранних сроках ее беременности. 1 табл.
Description
Изобретение относится к области экспериментальной медицины, клеточной биологии и клеточной терапии и может использоваться в клинической практике после клинической апробации для стимуляции веса плода и сохранения беременности в 1-ом триместре беременности.
Вес эмбриона и плода является одним из критериев оценки успешности внутриутробного развития и обычно должен соответствовать нормальному весу на данном сроке беременности. Вес устанавливают непосредственно после рождения, его величина влияет на дальнейшее развитие ребенка. Отставание веса и роста плода является одними из проявлений угрозы сохранения беременности или риска рождения ребенка с низким весом, что, в свою очередь, является риском последующего отставания развития ребенка. В большинстве случаев нарушения роста выявляются постнатально, но они напрямую связаны с процессами, протекающими на протяжении всего эмбрионального периода. В настоящее время остается актуальным изучение механизмов регуляции развития и роста плода, начиная с ранних сроков беременности.
В регуляцию течения беременности и роста плодов вовлечены все основные метаболические системы матери и плода. Кроме того, плацента частично принимает на себя синтез стероидных, белковых и пептидных гормонов, которые влияют как на развитие плода, так и на материнский организм.
Одним из важнейших регуляторов роста и веса растущего организма у млекопитающих являются стероидные гормоны. Сюда относятся прогестерон, эстрогены и глюко- и минералкортикоиды. Синтез прогестерона усиливается в сохранившемся желтом теле после имплантации бластоцисты и нарастает до конца беременности. У человека с 8-й недели беременности синтез прогестерона почти полностью переходит к плаценте.
Известно, что введение прогестерона (прогестинов) в повышенных дозах не нарушает и не изменяет рост, вес и развитие плодов, как у экспериментальных животных, так и у человека. С целью стимуляции роста и веса плода и нормального течения беременности на ранних сроках в клинической практике помимо прогестерона, используют также аспирин и гепарин. [Duckitt K., Quareshi А., 2011. Reccurent miscarriage. BMJ Clin. Evid. 2011. 1409]. В конце беременности плацента секретирует ежедневно 250 мг прогестерона в сутки. Таким образом, прогестерон функционирует как важнейший участник регуляции беременности, роста и веса плода, подавляя сократительную активность матки и выступая как иммуносупрессор.
Основным представителем эстрогенов, секретируемых плацентой, является эстриол. Эстрогены стимулируют образование рецепторов для прогестерона в матке и рост матки. 90% эстриола имеет плацентарное происхождение и 10% образуется из эстрона и эстрадиола, секретируемых яичниками матери. У человека при нормально протекающей беременности уровень эстриола растет параллельно росту уровня прогестерона. Имеется прямая связь между размерами плода, массой плаценты, состоянием надпочечников плода и уровнем эстриола в крови беременной. По данным Кащеевой (2007) снижение уровня эстриола в крови беременной связано с гипотрофией плода, гипоплазией надпочечников плода, синдромом Дауна, внутриутробной инфекцией, угрозой гибели плода, лечением большими дозами кортикостероидов и др. Значительное снижение уровня эстриола в крови матери указывает на возникновение угрозы прерывания беременности. Повышение уровня эстриола в крови беременных наблюдается при многоплодной беременности или крупном плоде.
Концентрация глюкокортикоидов и минералкортикоидов при беременности возрастает. Кортизол продуцируется и в надпочечниках плода и в плаценте так, что концентрация кортизола в крови матери отражает как состояние плода, так и состояние плаценты. При состоянии напряжения концентрация кортизола возрастает более чем на 50%, при истощении фетально-плацентарного комплекса концентрация снижается более чем на 50% от нормы.
По мере развития беременности увеличивается продукция пролактина, подготавливающего молочные железы к лактации. Плацентарный лактоген обладает низкой стимулирующей активностью гормона роста (ГР).
Одним из основных регуляторов роста и развития плодов является ГР, вырабатываемый клетками передней доли гипофиза. При беременности у человека в плаценте также синтезируется плацентарный гормон роста (ПГР), отличающийся от гипофизарного ГР по 13 аминокислотным остаткам. Предполагается, что ПГР участвует в контроле уровня инсулиноподобного фактора роста 1 типа (ИПФ-1).
ГР контролирует рост плодов на ранних сроках постнатальной жизни, включая подростковый возраст. Избыток ГР на начальных сроках беременности вызывает у трансгенных по гену ГР мышей и ягнят отставание веса тела. Также вес новорожденных телят уменьшается после введения беременным коровам ГР, начиная с ранних сроков беременности. У свиней после химической стимуляции синтеза ГР вес поросят увеличивается. При этом наблюдается значительное последействие в виде усиления роста, нарушений метаболических путей матери и функции плаценты, усиление накопления жира, тучность [Oberbauer А.М. 2015. Developmental programming: the role of growth hormone. J. of Animal Science and Biotechnology, v. 6:8, DOI 10.1186/s40104-015-0001 -8].
Таким образом, можно заключить, что взаимоотношения между ГР и ростом плодов изучены не полностью и что продолжительное воздействие экзогенного гипофизарного ГР разрушает нормальные взаимоотношения метаболических путей и поэтому не используется на ранних сроках беременности для регуляции веса плода.
В плаценте также обнаружен соматостатин, ингибитор ГР. Важнейшими участниками регуляции роста плода и беременности являются инсулино-подобный фактор роста 1 (ИФР-1), грелин и лептин. Грелин синтезируется в моруле, в эмбриональных тканях более поздних сроков развития, в плаценте, участвует в регуляции дифференцировки клеток эндометрия и в имплантации. Грелин обладает ГР-рилизинг активностью, т.е. стимулирует активность ГР. Представления о максимальных концентрациях грелина в крови матери в течение беременности противоречивы. На ранних сроках беременности у мышей показано, что как повышенный уровень грелина в крови при помощи ежедневных инъекций, так и подавление его активности при помощи антагонистов, оказывают негативный эффект на оплодотворение, имплантацию и эмбриональное развитие, зарегистрированное на 18-й день беременности, что указывает на то, что грелин в адекватной концентрации выполняет физиологическую функцию в регуляции беременности на ранних сроках [Luque Е.М., Torres P.J., De Loredo N., Vincent iL. M., Stutz G., Santillan M.E., Ruiz R.D., De Cuneo M.F., Martini A.C., Role of ghrelin in fertilization, early embryo development, and implantation period. Society for reproduction and fertility. DOI: 10.1530/REP. 14-0129], что указывает на трудности использования грелина с целью стимуляции развития плода на ранних сроках беременности. Лептин рассматривается как один из важных регуляторов роста плода. Лептин синтезируется в синцитиотрофобласте и в клетках материнской части плаценты. Предполагается, что лептин участвует в регуляции инвазии клеток трофобласта в спиральные артерии плаценты. В крови матери его начинают определять с 18 недели беременности. Можно допустить, что возможность его определения в крови связана с ростом плаценты. У женщин пониженный уровень лептина в крови в первом триместре беременности предшествует самопроизвольному прерыванию беременности [А.А. Александрова Л.В. Гутникова Е.Г. Деревянчук. Геномные и постгеномные маркеры развития плаценты и плода (учебно-методическое пособие), «ЮЖНЫЙ ФЕДЕРАЛЬНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ», Ростов-на-Дону, 2011].
Из представленных данных следует, что механизмы регуляции роста и развития плода и течения беременности на каждом из периодов беременности отличаются от предшествующего. Развитие системы регуляции развития плода осложняется тем обстоятельством, что плацента также принимает на себя функцию регулятора течения беременности и роста плода. Регуляция беременности осуществляется сбалансированной системой гормонов и ростовых факторов, концентрации которых изменяются в процессе беременности как в сторону повышения, так и в сторону понижения при участии органов и тканей матери, плода и плаценты. Изменения концентрации какого-либо участника регуляционной системы из-за экзогенного введения или гормона, или фактора роста нарушает динамическое равновесие между всеми членами регуляторной системы и тормозит рост плода. Подтверждением этого является торможение роста плодов после повышения концентрации ГР при беременности [Oberbauer А.М. 2015. Developmental programming: the role of growth hormone. J. of Animal Science and Biotechnology, v. 6:8, DOI 10.1186/S40104-015-0001-8].
Началом изучения использования клеточной терапии для регуляции развития плодов и протекания беременности на ранних сроках у млекопитающих и человека являются исследования, доказывающие положительное влияние внутриматочной трансплантации так называемых мезенхимальных эндометриальных стволовых клеток человека на рост децидуа крыс в период до 11-го дня беременности [Михайлов В.М., Домнина А.П., Никольский Н.Н. 2014. Способ стимуляции образования децидуальной оболочки эндометрия в эксперименте. Патент RU 2515475, 2014]
[Mikhailov V.M., Domnina А.P., Sokolova А.V., Rosanov J.M., Kaminskaya, Nikolski N.N. Bone marrow cells influences for function of rat decidua. J. Cell Sci. Ther, 2015. 6:4, DOI: 4172/2217-7013. 1000224;
Mikhailov V.M., Sokolova A.V., Skripkina N.S., Kaminskaya E.V., Domnina A.P., Nikolsky N.N. Further Characteristics of Pregnant Bone Marrow Cells Action on Rat Development during Early Pregnancy J. of Genetic Synd.& Gene Ther., 2017.8:1, DOI: 10.4172/2157-7412.1000316].
В качестве прототипа нами выбран способ стимуляции веса плода в эксперименте, заключающийся в однократном внутривенном введении в организм беременной крысы клеток костного мозга (ККМ) в пост-имплантационном периоде развития в момент гаструляции и плацентации эмбрионов, то есть на 9 или 10, или 11, или 13 день беременности. [Mikhailov V.M., Domnina А.P., Sokolova А.V., Rosanov J.M., Kaminskaya, Nikolski N.N. Bone marrow cells influences for function of rat decidua. J. Cell Sci. Ther, 2015. 6:4, DOI: 4172/2217-7013. 1000224;
Mikhailov V.M., Sokolova A.V., Skripkina N.S., Kaminskaya E.V., Domnina A.P., Nikolsky N.N. Further Characteristics of Pregnant Bone Marrow Cells Action on Rat Development during Early Pregnancy J. of Genetic Synd. & Gene Ther., 2017.8:1, DOI: 10.4172/2157-7412.1000316]
К недостаткам способа, выбранного в качестве прототипа, можно отнести то, что забор такого биологического материала как костный мозг у беременных женщин при использовании его в клинической практике после получения соответствующего разрешения представляет опасность из-за использования наркоза, что является риском для благополучного вынашивания беременности.
Техническим результатом, достигаемым с помощью изобретения, является расширение арсенала действующих средств для стимуляции веса плодов в эксперименте и в клинической практике после получения разрешения на клиническое применение данного способа, а также исключение использования наркоза у беременной женщины на ранних сроках ее беременности.
Технический результат изобретения достигается тем, что в качестве стимулятора веса плода в организм беременной крысы на 9 или 10 или 11 день беременности однократно вводят подкожно в область каждого из сосков молочной железы 100 мкл суспензии клеток-мононуклеаров пуповинной крови человека, содержащей 6.9 миллион клеток так, чтобы общее количество инъецированных клеток составило 69 миллион клеток пуповинной крови человека в объеме 1000 мкл.
Способ осуществляется следующим образом:
Беременных самок получают после утреннего отбора среди самок-крыс, содержавшихся одну ночь вместе с самцами и имеющих во влагалищном мазке сперматозоиды, выявляемые с помощью микроскопирования на микроскопе (об. 10x, ок. 7х) утреннего влагалищного мазка, приготовленного при помощи ватного тампона, смоченного стерильным физиологическим раствором [Михайлов В. М. 1967. Патогенное действие нефроцитоксической сыворотки на эмбриональное развитие белых крыс. Бюлл. Экспер. Биол. и Мед., №6, стр. 97-100]. Крыс, содержащих сперматозоиды в утреннем мазке, обозначали как крысы 1-го дня беременности.
Мононуклеарную фракцию КПК (ООО Покровский банк стволовых клеток, Санкт-Петербург) получают при помощи центрифугирования клеточной суспензии в градиенте плотности 63% раствора перколла, приготовленного на стерильном сбалансированном солевом растворе без Са2+ и Mg2. Нами был использован полисахарид перколл производства фирмы SIGMA (США), но возможно использование перколла и других фирм производителей. Использовалась центрифуга К-23 (Janetzki, DDR). Свежеполученные КПК при комнатной температуре в объеме 5 мл наслаивают на 7 мл 63%-го раствора перколла и центрифугируют 20 мин при 1500 g. По окончанию верхний слой клеток в перколле удаляют при помощи 5 мл шприца и помещают в свежую пробирку для отмывания от избытка перколла в сбалансированном солевом растворе без Са2+ и Mg2+ и центрифугируют 10 мин при 700 g. Концентрацию клеток-мононуклеаров определяют при помощи подсчета в камере Горяева.
На 9 или 10 день или 11 день беременности животному однократно инъецируют мононуклеарную фракцию пуповинной крови человека. Для этого животное вводят в эфирный наркоз. Местом инъекций является поверхность живота. Животное под эфирным наркозом привязывают к станку.
Затем подкожно в область каждого соска молочной железы беременной крысы инъецируют 100 мкл клеточной суспензии, содержащей 6.9 миллионов мононуклеаров пуповинной крови человека. На каждой крысе для трансплантации используют пространство около 10-ти или 12-ти сосков молочной железы (в зависимости от наличия у крысы 10 или 12 сосков) так, чтобы общее количество инъецированных клеток соответствовала 69 миллиону клеток пуповинной крови человека в объеме 1000 мкл.
Существенные отличительные признаки и причинно-следственная связь между ними и достигаемым техническим результатом:
В качестве стимулятора веса беременной крысе вводят подкожно в область каждого из сосков молочной железы 100 мкл суспензии клеток-мононуклеаров пуповинной крови человека, содержащей 6.9 миллионов клеток так, чтобы общее количество инъецированных клеток составило 69 миллионов клеток пуповинной крови человека в объеме 1000 мкл.
Эффективность действия клеток пуповинной крови может быть обосновано тем, что ростовые факторы находятся в КПК в сбалансированном состоянии друг с другом и с клетками-мишенями. Активация секреции регулируется сигналами со стороны клеток-мишеней. Поэтому поступление ростовых факторов из трансплантированных КПК в ткани плода и матки не нарушает функционирование системы регуляции беременности и веса плода. Подтверждением тому является отсутствие нарушений течения беременности после трансплантации беременным крысам в период гаструляции КПК человека.
КПК обогащена стволовыми клетками с плюрипотентными свойствами [Harris D.T., Rogers I. 2007. Umbilical cord blood: a unique source of pluripotent stem cells for regenerative medicine. Curr. Stem Cell Res. Ther. 2: 301-309]. По аналогии с мнением авторов, использующих КПК для клеточной терапии в клинической практике, мы считаем, что в основе стимулирующего действия трансплантации КПК человека на рост плодов, плацент и ход беременности беременных крыс является секреция ими ростовых факторов, цитокинов, и др. [Harris D.Т. 2009. Non-hematological uses of cord blood stem cells. Britich J of Hematology, 147: 177-184; Смирнов B.H., Пальцев M.A. 2012. Почему пуповинная кровь? Стимуляция нейрогенеза в гиппокампе как наиболее вероятный механизм паракринных эффектов клеток пуповиной крови. В кн: Терапевтический потенциал клеток пуповинной крови при негематологических заболеваниях. Ред.: М.А. Пальцева и В.Н. Смирнова. М.: Из-во «ШИКО», 2012. стр. 15-31;
Ballen К. 2017. Umbilical Cord Blood Transplanta, 6(5): 1312-1315. 10.1002/sctm. 17-0069].
В Институте цитологии РАН описано стимулирующее действие ККМ крыс на рост децидуа у крыс [Михайлов и др., 2014]. У млекопитающих децидуальная оболочка обеспечивает возможность гаструляции и последующего развития зародыша после имплантации. Нормальное развитие млекопитающих с гемохориальным типом плаценты вне децидуализированной матки невозможно [Mikhailov V.М. Life cycle of decidual cells. Academic Press, 2003, vol. 227, pp 1-63]. Можно допустить, что трансплантация КПК также стимулирует функцию децидуа, обеспечивая, тем самым, успех гаструляции и дальнейшего постимплантационного развития зародыша. Таким образом, стимулирующее действие КПК на клетки эмбриона может быть результатом как прямого действия секреции КПК на клетки эмбриона, так и быть опосредованным через влияние на рост плодов децидуальной оболочки и функционирование желтого тела.
По аналогии с мнением авторов, использующих для клеточной терапии развития децидульной оболочки крыс мезенхимальные стволовые эндометриальные клетки человека [Михайлов В.М., Домнина А.П., Никольский Н.Н. 2014. Способ стимуляции образования децидуальной оболочки эндометрия в эксперименте. Патент RU 2515475, 2014] мы считаем, что в основе стимулирующего действия трансплантации КПК на вес плодов, плацент и течение беременности, является секреция ими ростовых факторов, цитокинов, и др.
Известно использование в клинической практике аллогенной трансплантации КПК, включающей в себя такие болезни нервной системы как церебральный паралич, ишемическая энцефалопатия, травматическое повреждение мозга, аутизм [Смирнов В.Н., Пальцев М.А. 2012. Стимуляция нейрогенеза в гиппокампе как наиболее вероятный механизм паракринных эффектов клеток пуповиной крови. В кн: Терапевтический потенциал клеток пуповинной крови при негематологических заболеваниях. Ред.: М.А. Пальцев и В.Н. Смирнов. М.: Из-во «ШИКО», 2012. стр. 15-31]. Основными механизмами действия в неврологии являются: а) индукция эндогенного нейрогенеза, реализуемая через синтез стволовыми клетками различных факторов роста (ФР) (нейрональный ФР, ФР эндотелия, ФР фибробластов 2, неротропина-3 и других; б) иммуномодуляция и противовоспалительное действие за счет синтеза противовоспалительных интерлейкинов (ИЛ-4, ИЛ-10); в) предотвращение патологической агрегации белка путем стимуляции секреции протеолитических ферментов в микроглии (например Аβ разлагающий фермент) и аутофагии.
При сердечно-сосудистых заболеваниях КПК секретируют цитокины, которые стимулируют ангиогенез [Wu К.Н., Zhou В., Mo Х.М. et al., 2007. Therapeutic potential of human umbilical cord-derived stem cells in ischemic diseases. Transplant Proa, 39: 1620-1622, Ballen K. 2017. Umbilical Cord Blood Transplant, 6(5): 1312-1315. 10.1002/sctm.17-0069], наиболее значимыми из которых являются фактор роста эндотелия сосудов (ФРЭС), фактор роста фибробластов-b (ФРФ b), фактор роста гепатоцитов (ФРГ) и простагландин Е2.
Недавно выяснилось, что внеклеточные везикулы, в том числе экзосомы и микровезикулы, являются важными медиаторами межклеточных коммуникаций в росте и развитии сосудов [Todorova D, Simoncini S, Lacroix R et al. Extracellular vesicles in angiogenesis. Circ Res 2017; 120:1658-1673]. Экзосомы содержат ряд биологически активных молекул, в том числе пептидов, белков, липидов и нуклеиновых кислоты (микро-РНК и мРНК), действующих как регуляторы функций эндотелиальных клеток и стимулирующих или ингибирующих ангиогенез паракринным или эндокринным путем. Например, было показано что экзосомы CD34+ клеток улучшают перфузию за счет поглощения эндотелиальными клетками мРНК-126-3р подавляющую экспрессию гена SPRED1, и одновременно активирующую экспрессию ФРЭС, ANGF1, ангиопоэтина-2, и ММП-9 [Mathiyalagan Р, Liang Y, Kim D et al. Angiogenic mechanisms of human CD341 stem cell exosomes in the repair of ischemic hindlimb. Circ Res 2017; 120:1466-1476]. Также за счет подобных механизмов действия КПК человека используются для лечения воспалительных заболеваний желудочно-кишечного тракта, роговицы, артрита, гепатита.
Трансплантированные крысам КПК человека улучшают моторную функцию мозга. На крысиной модели инфаркта миокарда показано, что КПК уменьшают размер инфаркта. Трансплантация КПК человека улучшает функционирование правого желудочка у мышей [Oommen, О.S. Yamada, S. Cantero Peral, К.A. Campbell, Е.S. Bruinsma, A. Terzic, and Т.J. Nelson. 2015. Human umbilical cord blood-derived mononuclear cells improve murine ventricular function upon intramyocardial delivery in right ventricular chronic pressure overload. Stem Cell Res Ther. 2015; 6(1): 50].
Таким образом, КПК обладают широким спектром терапевтического действия, как при воспалительных, так и при дегенеративных заболеваниях.
В доступной литературе информации об использовании трансплантации КПК для стимуляции веса плодов, как в клинической практике, так и в эксперименте, нами не обнаружено. Выявленное впервые рост-стимулирующего действия трансплантации КПК человека в период гаструляции на рост плодов и течение беременности у крыс открывает возможность как для понимания клеточно-молекулярных механизмов регуляции роста плодов, так и для использования трансплантации КПК для клеточной терапии ранней беременности.
Апробация способа была проведена на 54 половозрелых белых беспородных крысах-самках массой 200-250 г, 26 из которых были беременными на 9, 10, 11 и 13 дни беременности. 28 беременных самок были использованы как чистый контроль без введения клеток пуповинной крови (КПК). Источником крыс был питомник Рапполово. (Ленинградская область). Для регистрации стимулирующего действия КПК на вес плодов клетки пуповинной крови вводили в объеме 1 мл и в концентрациях (71, 68, и 26) × 106 клеток. Местом инъекций была поверхность живота животного, которое под эфирным наркозом было привязано к станку. Клеточную суспензию вводили в область около каждого из 10 или 12-ти сосков молочной железы. Беременных самок получали после утреннего отбора среди самок-крыс, содержащихся ночь вместе с самцами и имеющих во влагалищном мазке сперматозоиды. Крыс, содержащих сперматозоиды в утреннем мазке, обозначали как крысы 1-го дня беременности. Животных вскрывали в обеденное время на 18-й день беременности после их гибели при передозировке диэтилового эфира. Выбор для вскрытия 18 дня беременности обусловлен тем, что на этом сроке беременности у крыс питомника «Рапполово» заканчивается органогенез, переходящий в стадию роста [Михайлов В.М. 1970. Анализ механизмов патогенного действия иммунной антипочечной сыворотки на эмбриогенез. Рукопись диссертации на соискание уч. степени канд. мед. наук. Ленинград, Институт Экспериментальной Медицины АМН СССР]. При вскрытии подсчитывали количество желтых тел, мест имплантации, живых и резорбированных плодов с плацентами. Плоды и плаценты фиксировали в жидкости Буэна одни сутки и взвешивали. Для регистрации возможных поверхностной уродств развития плоды изучали под бинокулярной лупой [Михайлов В.М. Патогенное действие нефроцитотоксической сыворотки на эмбриональное развитие белых крыс. Бюллетень экспериментальной биологии, медицины, 1967, Т63, с. 97-100].
Анализ полученных гистологических срезов матки 10-го дня беременности через 24 часа после введения КПК показал, что трансплантация клеток пуповинной крови человека в область сосков молочной железы беременных самок крыс не нарушает дифференцировку клеток децидуа и организацию ткани матки, сохраняя в децидуа взаимное расположение эмбриона и плаценты.
Результаты, представленные в таблице, показывают, что подкожная трансплантация крысам на 9 или на 10 или на 11 дни беременности КПК в дозе (69±9)×106 достоверно (Р<0.01) увеличивает вес 18 дневных плодов от контрольного уровня 745±11 мг до 848±8 мг в случаи введения на 9 или на 10 дни беременности а в случае введения КПК на 11 день беременности - до 826±28 мг. Достоверных различий веса между группами плодов после трансплантации КПК на 9 и 10 дни беременности не обнаружено. Трансплантация КПК на 13 день беременности в дозе (69±9)×106 клеток увеличивает вес плодов только до 782 мг. Различие с весом контрольных плодов недостоверно, Р>0.05. Вес плодов достоверно ниже при сравнении с весом плодов после трансплантации КПК на 9, 10 и на 11 дни беременности, Р<0.05. Таким образом, КПК стимулирует вес плодов крыс при трансплантации в период гаструляции и плацентации. Эффект КПК снижается при трансплантации в конце плацентации на 13 день беременности. Сравнение пред- и постимплантационой выживаемости плодов (см. таблицу) показывает, что предимплантационная выживаемость колеблется в различных группах крыс от 90% до 94% (средняя для 4 опытных групп 92.0%), тогда как постимплантационная выживаемость вырастает от 92% до уровня контрольной группы 94.0%. Повышение выживаемости имеется в каждой группе из 4-х. Возможно, что введение КПК увеличивает постимплантационную выживаемость плодов до некого максимума, характерного для этих групп животных в данное время сезона при имеющемся качестве кормов и содержания в общем помещении вивария.
Таким образом, после трансплантации КПК выживаемость плодов не снижается, что свидетельствует о том, что КПК, стимулируя вес плодов, не нарушают течение беременности.
Максимальный средний вес плодов после подкожной трансплантации КПК в дозе (69±9)×106 на 9-10 дни беременности достигает 848±8 мг. КПК в дозе (26±5.8)×106 трансплантируемых клеток увеличивают вес плодов до 813±17 мг, что выше контрольного (Р<0.01). Разница веса плодов после действиями доз КПК (26±5.8)×106 и (69±9)×106 клеток на 9-10 дни беременности достоверна при Р<0.05.
При этом после дозы 26 миллионов вес плацент остается на контрольном уровне. При дозе 69 миллионов вес плацент растет параллельно с ростом веса плодов на 9-10 и 11 дни беременности. При трансплантации на 13 день беременности доза КПК 69 миллионов не оказывает влияния на вес плацент. Таким образом, вес плодов более чувствителен к изменению дозы КПК, чем вес плацент. Рост веса плодов 18 дня беременности после трансплантации КПК на 9-10, и 11 дни беременности коррелирует с ростом веса плацент.
Из полученных данных следует, что стимуляция роста плодов крыс 18 дня беременности при действии КПК достигает максимальных величин при подкожной трансплантации КПК на 9, 10 и 11-ый дни беременности. Обращает на себя внимание, что трансплантированные клеточные популяции КПК человека, также как и ККМ крыс, стимулировали постимплантационную выживаемость плодов, то есть не нарушали течения беременности.
Сопоставление событий и сроков развития человека и крыс показывает, что, несмотря на значительное расхождение по продолжительности беременности, сроки начальных стадий развития незначительно отличаются друг от друга по продолжительности. Этапы морфологического развития эмбрионов на 9, 10 и 11 дни беременности крыс соответствуют примерно 20-22 и 24-30 дням беременности у человека, рассчитанных по классификации сроков беременности Института Карнеги (США) от момента оплодотворения [Witschi, Е. (1962) Development: Rat. In: Growth Including Reproduction and Morphological Development. Altman, P.L. and D.S. Dittmer, ed. Fed. Am. Soc. Exp.Biol., Washington DC,. pp 304-314]. В соответствии с принятой классификацией, эти стадии развития обозначаются как преэмбриональный и эмбриональный (начальный период органогенеза) периоды. В течение 20-22 дней и 24-30 дней беременности у человека и 9-11 дней беременности у крыс формируются зародышевые листки, сосуды, хорда, нервная пластинка, сердце. Аллантоис достигает базальной пластинки плаценты [Зыбина Е.Д.. Цитология трофобласта. Ленинград. Наука, 1986, 191 с]. Органогенез у человека заканчивается на 60 день беременности [Баранов B.C., Кузнецова Т.В. 2007. Цитогенетика эмбрионального развития человека. СПб. Изд-во Н-Л. - 640 с]. У крыс органогенез заканчивается к 18 дню беременности, после которого происходит преимущественно рост массы тела. Авторы обоих сопоставлений подчеркивают статистический уровень определения сроков развития. Выделение клеток трофобласта у человека и крыс происходит в бластоцисте до имплантации, у человека на стадии 32 бластомеров. У крыс имплантация происходит на 6 день после осеменения, у человека на 5-7 дни после оплодотворения с активным участием клеток трофобласта [Зыбина Е.Д.. Цитология трофобласта. Ленинград. Наука, 1986, 191 с; Mikhailov V. М. Life cycle of decidual cells. Academic Press, 2003, pp 1-63; Баранов B.C., Кузнецова Т.В. 2007. Цитогенетика эмбрионального развития человека. СПб. Изд-во Н-Л. - 640 с]. Третичные ворсины плаценты васкуляризуются и начинают функционировать у человека как плацента на 5-7 неделях беременности [Баранов B.C., Кузнецова Т.В. 2007. Цитогенетииа эмбрионального развития человека. СПб. Изд-во Н-Л. - 640 с; (А.А. Александрова Л.В. Гутникова Е.Г. Деревянчук. Геномные и постгеномные маркеры развития плаценты и плода (учебно-методическое пособие), «ЮЖНЫЙ ФЕДЕРАЛЬНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ», Ростов-на-Дону, 2011].
У крыс будущие третичные клетки трофобласта появляются, начиная с 10 дня беременности из эктоплацентарного конуса. Они заселяют стенки сосудов матки, участвуя в формировании кровеносной системы плаценты к 14-16 дня беременности [Зыбина Е.Д.. Цитология трофобласта. Ленинград. Наука, 1986, 191 с.; Mikhailov V.М. Life cycle of decidual cells. Academic Press, 2003, pp 1-63]. Таким образом, введение КПК человека крысам на 9 или 10, или 11 дни беременности стимулирует гаструляцию и плацентацию у крыс. Позитивное действие трансплантации КПК человека на рост плодов, плацент и течение беременности у крыс начинается в преэмбриональном периоде беременности, когда происходит закладка тканей и отдельных органов. Реализация действия КПК осуществляется в эмбриональном периоде беременности.
Таким образом, заявляемый способ расширяет арсенал действующих средств для стимуляции веса плодов на ранних сроках беременности в эксперименте, а также в клинической практике после получения разрешения на клиническое применение данного способа и исключит использование наркоза у беременной женщины на ранних сроках ее беременности.
Claims (1)
- Способ стимуляции веса плода на ранних сроках беременности в эксперименте, заключающийся во введении в организм беременной крысы стимулятора веса на 9 или 10 или 11 день беременности, отличающийся тем, что в качестве стимулятора веса плода беременной крысе однократно вводят подкожно в область каждого соска молочной железы 100 мкл суспензии клеток мононуклеаров пуповинной крови человека, содержащей 6.9 миллиона клеток, так, чтобы общее количество инъецированных клеток составило 69 миллионов клеток пуповинной крови человека в объеме 1000 мкл.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018111840A RU2675354C1 (ru) | 2018-04-02 | 2018-04-02 | Способ стимуляции веса плода на ранних сроках беременности в эксперименте |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018111840A RU2675354C1 (ru) | 2018-04-02 | 2018-04-02 | Способ стимуляции веса плода на ранних сроках беременности в эксперименте |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2675354C1 true RU2675354C1 (ru) | 2018-12-18 |
Family
ID=64753061
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2018111840A RU2675354C1 (ru) | 2018-04-02 | 2018-04-02 | Способ стимуляции веса плода на ранних сроках беременности в эксперименте |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2675354C1 (ru) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2252252C1 (ru) * | 2004-04-09 | 2005-05-20 | Тепляшин Александр Сергеевич | Способ выделения мезенхимальных стволовых клеток |
| RU2515475C1 (ru) * | 2012-11-15 | 2014-05-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки ИНСТИТУТ ЦИТОЛОГИИ РОССИЙСКОЙ АКАДЕМИИ НАУК | Способ стимуляции образования децидуальной оболочки эндометрия в эксперименте |
-
2018
- 2018-04-02 RU RU2018111840A patent/RU2675354C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2252252C1 (ru) * | 2004-04-09 | 2005-05-20 | Тепляшин Александр Сергеевич | Способ выделения мезенхимальных стволовых клеток |
| RU2515475C1 (ru) * | 2012-11-15 | 2014-05-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки ИНСТИТУТ ЦИТОЛОГИИ РОССИЙСКОЙ АКАДЕМИИ НАУК | Способ стимуляции образования децидуальной оболочки эндометрия в эксперименте |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| BARKER J.N. et al. Searching for unrelated donor hematopoietic stem cells: availability and speed of umbilical cord blood versus bone marrow. Biol. Blood Marrow Transplant. 2002. Vol. 8, P. 257-260. * |
| ЙЫЛМАЗ Т.С. и др. Участие мононуклеаров пуповинной крови человека в физиологической регенерации почки крысы. Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. 2012, Т. VII(3), С.69-70. КУДРЯШОВА Н.В. и др. Мононуклеарные клетки пуповинной крови человека, трансфицированные двухкассетными плазмидами (vegf + нейротрофический фактор) для терапии бокового амиотрофического склероза. Клеточная трансплантология и тканевая инженерия.2012, Т. VII(3), С.92-97. BARKER J.N. et al. Searching for unrelated donor hematopoietic stem cells: availability and speed of umbilical cord blood versus bone marrow. Biol. Blood Marrow Transplant. 2002. Vol. 8, P. 257-260. * |
| КУДРЯШОВА Н.В. и др. Мононуклеарные клетки пуповинной крови человека, трансфицированные двухкассетными плазмидами (vegf + нейротрофический фактор) для терапии бокового амиотрофического склероза. Клеточная трансплантология и тканевая инженерия.2012, Т. VII(3), С.92-97. * |
| МИХАЙЛОВ В.М., ДОМНИНА А.П., СОКОЛОВА А.В., РОЗАНОВ Ю.М., КАМИНСКАЯ К.В., и др. Влияние клеток костного мозга на функцию крысиного децидуа. J Cell Sci Ther, 2015, N6: 224. DOI: 10,4172 / 2157-7013.1000224. * |
| МИХАЙЛОВ В.М., ДОМНИНА А.П., СОКОЛОВА А.В., РОЗАНОВ Ю.М., КАМИНСКАЯ К.В., и др. Влияние клеток костного мозга на функцию крысиного децидуа. J Cell Sci Ther, 2015, N6: 224. DOI: 10,4172 / 2157-7013.1000224. ЙЫЛМАЗ Т.С. и др. Участие мононуклеаров пуповинной крови человека в физиологической регенерации почки крысы. Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. 2012, Т. VII(3), С.69-70. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN104768559B (zh) | 用于预防和治疗先兆子痫的方法 | |
| KR101505382B1 (ko) | 인간 배아 줄기 세포 및 그의 유도체를 포함하는 조성물, 그의 사용 방법 및 제조 방법 | |
| Bertoldo et al. | In-vitro regulation of primordial follicle activation: challenges for fertility preservation strategies | |
| EP3517118B1 (en) | Sperm activator and uses thereof | |
| EA030000B1 (ru) | Способ стимуляции развития зрелого ооцита | |
| WO2021103817A1 (zh) | 蜕膜nk细胞及其细胞亚群来源外泌体在制备不孕不育相关疾病药物及辅助治疗剂中的用途 | |
| EP1156821A1 (en) | Treatment of infertility | |
| US20180296608A1 (en) | Compositions containing SPHEROID CELL AGGREGATES for enhance ovary function and preparation method of the same | |
| US20200239853A1 (en) | Stem cell-derived sertoli-like cell, preparation method therefor, and use thereof | |
| Wang et al. | Removal of mouse ovary fat pad affects sex hormones, folliculogenesis and fertility | |
| WO2000050066A1 (en) | Treatment of infertility | |
| JP2022528079A (ja) | Ｎｋ細胞培養培地用添加組成物、前記添加組成物を用いたｎｋ細胞培養方法、及び前記培養方法で得られた皮膚トラブル改善用化粧料組成物 | |
| Lange-Consiglio et al. | Application of perinatal derivatives in ovarian diseases | |
| RU2675354C1 (ru) | Способ стимуляции веса плода на ранних сроках беременности в эксперименте | |
| Chaudhuri et al. | Frozen embryo transfer: the present practice and beyond | |
| Burton | The John Hughes Memorial Lecture: stimulation of early placental development through a trophoblast-endometrial dialog | |
| KR20120096793A (ko) | 태반 유래 줄기세포를 포함한 면역반응억제용 조성물 | |
| KR101890648B1 (ko) | 태반-유래 줄기세포를 포함하는 난소 기능부전 혹은 갱년기 증후군의 예방 또는 치료용 약학 조성물 | |
| RU2629871C1 (ru) | Препарат для стимуляции фолликулогенеза и способ его применения | |
| RU2804945C1 (ru) | Способ синхронизации полового цикла коров | |
| Volkova et al. | Cryopreserved multipotent mesenchymal stromal cells restore fertility in animals with chronic inflammation of ovaries | |
| Bondarenko et al. | Influence of cord blood serum and actovegin on the reproductive function of cows in the comparative aspect | |
| CN110787286B (zh) | Fsh和hcg在制备促进睾丸细胞功能恢复的药物中的应用 | |
| EP4282423A1 (en) | Pharmaceutical composition for prevention or treatment of inflammatory disease or pain, comprising mesenchymal stem cells expressing ptx-3, timp1 and bdnf as active ingredient | |
| Oka et al. | Study of the growth factors for the mammary gland: Epidermal growth factor and mesenchyme-derived growth factor |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20200403 |