RU2674583C1 - Способ дифференциального учета молочнокислых бактерий в смеси в пищевом продукте - Google Patents

Способ дифференциального учета молочнокислых бактерий в смеси в пищевом продукте Download PDF

Info

Publication number
RU2674583C1
RU2674583C1 RU2016125858A RU2016125858A RU2674583C1 RU 2674583 C1 RU2674583 C1 RU 2674583C1 RU 2016125858 A RU2016125858 A RU 2016125858A RU 2016125858 A RU2016125858 A RU 2016125858A RU 2674583 C1 RU2674583 C1 RU 2674583C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
lactobacillus
strains
paracasei
medium
strain
Prior art date
Application number
RU2016125858A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2016125858A (ru
Inventor
Кандис ФУРМЕСТРО
Жером КОМБРИССОН
Микаель БОУЕР
Анна ГАЛА
Лейла БУМГАР-БУРТШЕ
Original Assignee
Компани Жервэ Данон
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Компани Жервэ Данон filed Critical Компани Жервэ Данон
Publication of RU2016125858A publication Critical patent/RU2016125858A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2674583C1 publication Critical patent/RU2674583C1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
    • C12Q1/14—Streptococcus; Staphylococcus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
    • C12Q1/045—Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
    • C12Q1/06—Quantitative determination
    • C12Q1/08—Quantitative determination using multifield media
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/02—Food
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/225—Lactobacillus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/46—Streptococcus ; Enterococcus; Lactococcus
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/195—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria
    • G01N2333/315—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria from Streptococcus (G), e.g. Enterococci
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/195—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria
    • G01N2333/335—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria from Lactobacillus (G)

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ дифференциального учета молочнокислых бактерий в молочном продукте. Способ включает инокуляцию аликвот молочного продукта в культуральные чашки, содержащие химически определенную агаровую среду и хромогенные субстраты, дающие различные окраски исследуемых колоний штаммовLactobacillus paracasei subsp. paracasei, Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus и Streptococcus thermophilus; затем их культивируют в селективных условиях и ведут подсчет колоний разной окраски. Способ позволяет специфически дифференцировать и подсчитать штаммы молочнокислых бактерий в молочном продукте. 8 з.п. ф-лы, 14 табл., 1 пр.

Description

Настоящее изобретение относится к дифференциации и подсчету исследуемых бактериальных штаммов, присутствующих в смеси в пищевом продукте, особенно молочном продукте.
В производстве ферментированных продуктов, и особенно молочных продуктов, смеси бактерий, которые могут составлять бактерии различных родов и/или бактерии одного рода и различных видов или подвидов, и/или различные штаммы бактерий того же вида или подвидов, обычно используют в качестве закваски. В частности, пробиотические продукты обычно включают, кроме одного или более пробиотических штаммов, один или более "технологических" штаммов, которые не обязательно имеют пробиотические свойства но способны, например, улучшать рост пробиотических штаммов и/или позволяют придавать желаемые свойства (аромат, текстура и др.) конечному продукту.
Чтобы гарантировать качество ферментированных продуктов во время их производства, в конце их производства и в течение их хранения, необходимо быть способными специфически дифференцировать и подсчитывать пробиотические и технологические штаммы, присутствующие в таких продуктах, что может быть проблематичным особенно в случаях, в которых, по меньшей мере, два штамма, используемые в продукте, принадлежат к соседним видам того же рода, или к одним видам или даже к одним подвидам.
Следовательно, желательно иметь надежные и быстрые аналитические технологии, которые позволят дифференциально подсчитывать такие штаммы.
Авторы изобретения разработали способ на основе использования селективной культуральной среды и/или селективных условий культивирования, в комбинации с применением различных хромогенных субстратов.
Следовательно, задачей настоящего изобретения является способ отличия одного от другого и подсчета штаммов молочнокислых бактерий или бифидобактерий известной смеси, которые присутствуют в различных популяционных количествах в пищевом продукте, предпочтительно молочном продукте, ферментированном с использованием указанных штаммов, отличающийся тем, что он включает:
a) инокуляцию аликвот необязательно разведенного пищевого продукта в серии культуральных чашек, содержащих химически определенную агаровую среду M1 и по меньшей мере два хромогенных субстрата, дающие различные окраски, каждый из указанных субстратов потребляется по меньшей мере одним из указанных бактериальных штаммов и не потребляется по меньшей мере другим из указанных штаммов;
b) необязательно, инокуляцию аликвот необязательно разведенного пищевого продукта в серии культуральных чашек, содержащих химически определенную агаровую среду M2, позволяющую рост штаммов молочнокислых бактерий, присутствующих в тестируемом продукте, указанные штаммы не могут расти на среде M1, и по меньшей мере один хромогенный субстрат, потребляемый по меньшей мере одним из указанных бактериальных штаммов;
c) инкубацию указанных чашек в течение времени, необходимого для образования бактериальных колоний, и подсчет колоний для каждой из окрасок, наблюдаемых в каждой культуральной чашке.
В описании изобретения выражение "молочнокислые бактерии или бифидобактерии" предпочтительно относится ко всем анаэробным, частично кислород-толерантным грам-положительным бактериям, которые обычно не продуцируют споры, такие бактерии находятся в форме палочки или кокка и способны ферментировать сахара до молочной кислоты. Более предпочтительно, молочнокислые бактерии в рамках изобретения принадлежат к, по меньшей мер, одному из семейств Aerococcaceae, Carnobacteriaceae, Enterococcaceae, Lactobacillaceae, Leuconostocaceae, Streptococcaceae или Bifidobacteriaceae, и еще более предпочтительно к одному из родов Aerococcus, Carnobacterium, Enterococcus, Lactobacillus, Lactococcus, Leuconostoc, Oenococcus, Pediococcus, Streptococcus, Tetragenococcus, Vagococcus, Weissella или Bifidobacterium. Наиболее часто предпочтительно молочнокислые бактерии или бифидобактерии, в рамках настоящего изобретения принадлежат к, по меньшей мере, одному из видов Lactobacillus brevis, Lactobacillus buchneri, Lactobacillus casei, Lactobacillus curvatus, Lactobacillus delbruckei, в частности L. delbruckei supsb. bulgaricus или lactis, Lactobacillus diolivorans, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus fructivorans, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus hilgardii, Lactobacillus jensenii, Lactobacillus kunkeei, Lactobacillus mali, Lactobacillus nagelii, Lactobacillus paracasei, в частности L. paracasei subsp. paracasei, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus vini, Lactobacillus rhamnosus, Streptococcus thermophilus, Streptococcus lactis, Streptococcus raffinolactis, Streptococcus cremoris, Bifidobacterium adolescentis, Bifidobacterium animalis, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium breve, Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium lactis, или Bifidobacterium longum; бифидобактерии в рамках изобретения объединяют бактерии, принадлежащие к семейству Bifidobacteriaceae, особенно к роду Bifidobacterium.
"Известная смесь" обозначает смесь бактериальных штаммов, известен качественный состав которой, иными словами природа и характеристики различных штаммов, которые ее составляют. Это относится более специфически к смеси штаммов, используемой для получения ферментированного продукта, который анализируют. Перед осуществлением метода в соответствии с изобретением, такие штаммы подвергают фенотипическому анализу с целью освещения их физиологических и метаболических характеристик, так, чтобы установить фенотипический профиль, специфический для каждого штамма. Такой анализ может особенно относиться к применению различных типов источников углерода, азота, фосфата и серы, к применению заданных пищевых добавок и/или к устойчивости к различным стрессовым агентам (соли, pH, антимикробные средства и др.).
Термин "химически определенная среда" используют в настоящем описании в его обычном смысле для обозначения культуральной среды, все компоненты которой полностью известны и определены. Химически определенная агаровая среда по изобретению предпочтительно является агаровой средой для культивирования бактерий, более предпочтительно агаровой культуральной средой для молочнокислых бактерий или бифидобактерий.
В настоящем описании выражение "хромогенный субстрат" предпочтительно обозначает субстрат, потребление которого бактериями дает вещество, которое абсорбирует свет при одной или более длинах волн, особенно окрашенные вещества. Специалист в области техники хорошо понимает, что длина(ы) волн, абсорбируемые продуцируемым веществом, предпочтительно отличаются от таковой(таковых), необязательно абсорбируемых хромогенным субстратом, который может в частности быть бесцветным. Хромогенные субстраты, которые могут быть использованы для осуществления настоящего изобретения, известны как таковые; ими могут быть, в частности, 6-хлор-3-индоксил-β-D-галактопиранозид (лососевый Gal), 5-бром-4-хлор-3-индолил-β-D-глюкопиранозид (X-Glu), 5-бром-4-хлор-3-индолил-β-D-галактопиранозид (X-Gal).
Агаровая среда части культуральных чашек может также включать по меньшей мере одну добавку, селективно обеспечивающую рост по меньшей мере одного из указанных бактериальных штаммов, и/или агаровая среда части культуральных чашек может также включать по меньшей мере одну добавку, селективно ингибирующую рост по меньшей мере одного из указанных бактериальных штаммов.
Также, часть культуральных чашек может инкубироваться в селективных условиях, благоприятных для роста по меньшей мере одного из указанных бактериальных штаммов, и другая часть указанных культуральных чашек может инкубироваться в других селективных условиях, благоприятных для роста по меньшей мере одного другого из указанных бактериальных штаммов.
Способ в соответствии с изобретением особенно подходит для анализа продуктов, в которых по меньшей мере два из присутствующих бактериальных штаммов принадлежат к одним видам или подвидам.
Предпочтительно, по меньшей мере один из бактериальных штаммов, присутствующих в тестируемом продукте, принадлежит к роду Lactobacillus и/или по меньшей мере один из бактериальных штаммов, присутствующих в тестируемом продукте, принадлежит к роду Streptococcus.
В соответствии с частным вариантом осуществления настоящего изобретения, тестируемый продукт содержит по меньшей мере один штамм Lactobacillus paracasei subsp. paracasei, по меньшей мере один штамм Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus и по меньшей мере один штамм Streptococcus thermophilus. Преимущественно, он также содержит по меньшей мере один штамм Lactobacillus rhamnosus.
В контексте настоящего варианта осуществления изобретения для подсчета бактерий вида Lactobacillus paracasei subsp. paracasei, Lactobacillus rhamnosus, и Streptococcus thermophilus, использовали среду M1 со следующим составом: агар: 15 г/л; триптон: 2,5 г/л; пепсин-переваренный мясной пептон: 2,5 г/л; папаин-переваренный соевый пептон: 5 г/л; глицерофосфат натрия: 19 г/л; лактоза: 5 г/л; экстракт дрожжей: 2,5 г/л; мясной экстракт: 5 г/л; сульфат магния: 0,25 г/л; аскорбиновая кислота: 0,5 г/л; 6-хлор-3-индоксил-β-D-галактопиранозид (лососевый Gal): 0,2 г/л; 5-бром-4-хлор-3-индолил-β-D-глюкопиранозид.
Для подсчета бактерий видов Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus, использовали среду M2 со следующим составом: полипептон: 10 г/л; экстракт дрожжей: 5 г/л; мясной экстракт: 10 г/л; фосфат дикалия: 2 г/л; ацетат натрия: 5 г/л; цитрат аммония: 2 г/л; сульфат магния: 0,2 г/л; сульфат марганца: 0,05 г/л; агар: 15 г/л; 5-бром-4-хлор-3-индолил-β-D-галактопиранозид (X-Gal): 0,15 г/л.
Преимущественно, для подсчета бактерий видов Lactobacillus paracasei subsp. paracasei, Lactobacillus rhamnosus, и Streptococcus thermophilus:
- первая часть чашек, содержащих среду M1, не включает каких-либо добавок, вторая часть указанных чашек включает ванкомицин в качестве добавки, и третья часть указанных чашек включает рамнозу в качестве добавки; и/или
- инокулированные чашки инкубировали в течение приблизительно 48 часов в контролируемой атмосфере, содержащей от 6 до 16% O2 и от 2 до 10% CO2, часть указанных чашек инкубировали при приблизительно 37°C, и другую часть при приблизительно 44°C.
Предпочтительно, для подсчета бактерий видов Lactobacillus delbrueckii subsp. Bulgaricus, инокулированные чашки среды M2 инкубировали в течение приблизительно 48 часов при приблизительно 47°C в контролируемой атмосфере, содержащей менее чем 1% O2 и, по меньшей мере, 13% CO2.
Настоящее изобретение будет более понятно посредством следующего дополнительного описания, которое дает ссылки на неограничивающие примеры, иллюстрирующие осуществление способа в соответствии с изобретением для дифференциации различных штаммов молочнокислых бактерий и для подсчета бактерий каждого из таких штаммов в ферментированных молочных продуктах.
ПРИМЕР: ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНЫЙ ПОДСЧЕТ МОЛОЧНОКИСЛЫХ БАКТЕРИЙ В ФЕРМЕНТИРОВАННЫХ МОЛОЧНЫХ ПРОДУКТАХ
Материалы и методы:
Состав тестируемых продуктов
Продукт 1:
Продукт 1 представляет собой ферментированный продукт, содержащий 5 бактериальных штаммов, принадлежащих к трем видам, а именно:
- 1 пробиотический штамм L. casei subsp. paracasei (далее называемый как Lactobacillus paracasei штамм 1);
- 3 технологических штамма S. thermophilus;
- 1 технологический штамм L. delbrueckii subsp. Bulgaricus.
Теоретическая бактериальная нагрузка, ожидаемая в начале периода хранения (D4) и в конце периода хранения (D35) продукта показана в таблице I ниже.
Таблица I
Теоретическая бактериальная нагрузка (в бактериях/мл)
D4 D35
Lactobacillus paracasei штамм 1 2×108 2×108
3 Streptococcus thermophilus >108 >108
Lactobacillus bulgaricus 1×107 101-104
Продукт 2:
Продукт 2 представляет собой ферментированный продукт, содержащий 7 бактериальных штаммов, принадлежащих к трем видам, а именно:
- 2 пробиотических штамма L. casei subsp. paracasei (Lactobacillus paracasei штамм 1 и Lactobacillus paracasei штамм 2);
- 1 пробиотический штамм L. rhamnosus;
- 3 технологических штамма S. thermophilus;
- 1 технологический штамм L. delbrueckii subsp. Bulgaricus.
Теоретическая бактериальная нагрузка, ожидаемая в начале периода хранения (D4) и в конце периода хранения (D35), продукта показаны в таблице II ниже.
Таблица II
Теоретическая бактериальная нагрузка
(в бактериях/мл)
D4 D35
Lactobacillus paracasei
штамм 1 и штамм 2		 2-3×108 2-3×108
Lactobacillus rhamnosus 1×108 1×108
3 Streptococcus thermophilus 1×108 1×108
Lactobacillus bulgaricus 1×107 101-104
Ферментативная активность штаммов:
Различные штаммы тестировали в отношении их β-глюкозидазной и β-галактозидазной активности.
Результаты показаны в таблице III ниже:
Таблица III
Штамм β-глюкозидаза β-галактозидаза
Lactobacillus rhamnosus + +
Lactobacillus paracasei 1 + -
Lactobacillus paracasei 2 - -
Streptococcus thermophilus 1 - +
Streptococcus thermophilus 2 - +
Streptococcus thermophilus 3 - +
Lactobacillus bulgaricus - +
Подсчет бактерий в продуктах 1 и 2:
Условия и среда для культивирования:
Условия и среды для культивирования в настоящее время использованные для подсчета бактериальных штаммов, присутствующих в продуктах 1 и 2, суммированы в таблицах IV и V, соответственно, ниже. Такие контрольные культуральные условия и среды использовали в качестве контроля.
Таблица IV
Исследуемый штамм Среда Температура Продолжительность Атмосфера
Lactobacillus paracasei 1 MRS + ванкомицин (1 мкг/мл) 37°C 48 часов CO2
Streptococcus sp. M17 44°C 48 часов аэробная
Lactobacillus bulgaricus кислая MRS 50°C 48 часов анаэробная
Таблица V
Исследуемый штамм Среда Температура Продолжительность Атмосфера
Lactobacillus rhamnosus MRS + ванкомицин (1 мкг/мл) 44°C 48 часов CO2
Lactobacillus rhamnosus +
Lactobacillus paracasei 1 +
Lactobacillus paracasei 2		 MRS + ванкомицин (1 мкг/мл) 37°C 48 часов CO2
Streptococcus sp. M17 44°C 48 часов аэробная
Lactobacillus bulgaricus кислая MRS 50°C 48 часов анаэробная
Среды MRS, кислая MRS и M17 являются обычными коммерчески доступными средами (AES CHEMUNEX).
Для культур в контролируемой атмосфере, использовали системы создания газа GasPak® для получения следующих условий:
- анаэробные условия: %O2<1%; %CO2≥13%
- CO2:%CO2>2,5%
- микроаэробные условия: 6%<%O2<16%; 2%<%CO2<10%
- аэробные условия: окружающий воздух
Получали две хромогенные среды, далее называемые как M1 и M2,: состав таких сред указан в таблицах VI и VII ниже, соответственно:
Таблица VI
M1 среда
Составляющее Концентрация (в г/л)
Агар 15
Триптон 2,5
Пепсин-переваренный мясной пептон 2,5
Папаин-переваренный соевый пептон 5
Глицерофосфат натрия 19
Лактоза 5
Экстракт дрожжей 2,5
Мясной экстракт 5
Сульфат магния 0,25
Аскорбиновая кислота 0,5
6-Хлор-3-индоксил-β-D-галактопиранозид (лососевый Gal) 0,2
5-Бром-4-хлор-3-индолил-β-D-глюкопиранозид (X-Glu) 0,1
Таблица VII
M2 среда
Составляющее Концентрация (в г/л)
полипептон 10
Экстракт дрожжей 5
Мясной экстракт 10
Фосфат дикалия 2
Ацетат натрия 5
Цитрат аммония 2
Сульфат магния 0,2
Сульфат марганца 0,05
Агар 15
5-Бром-4-хлор-3-индолил-β-D-галактопиранозид (X-Gal) 0,15
Тесты проводили с тремя различными партиями каждой из сред M1 и M2.
Условия культивирования, используемые для продуктов 1 и 2 соответственно, показаны в таблицах VIII и IX ниже:
Таблица VIII
Исследуемый штамм Среда Температура Продолжительность Атмосфера
Lactobacillus paracasei 1 +
Streptococcus sp.		 M1 37°C 48 часов микроаэробная
Lactobacillus bulgaricus M2 47°C 48 часов анаэробная
Таблица IX
Исследуемый штамм Среда Температура Продолжительность Атмосфера
Lactobacillus paracasei 1 M1 + рамноза (10 г/л) 37°C 48 часов микроаэробная
Lactobacillus paracasei 2 M1 + ванкомицин (1 мкг/мл) 37°C 48 часов микроаэробная
Lactobacillus rhamnosus +
Streptococcus sp.		 M1 44°C 48 часов микроаэробная
Lactobacillus bulgaricus M2 47°C 48 часов анаэробная
Рабочий протокол:
Образцы получали в двух фазах периода хранения продуктов: начало хранения и конец хранения.
Для продукта 1, исходные образцы начала хранения получали на 4, 5 и 6 дни после получения ферментированного продукта и образцы конца периода хранения получали в 31, 32 и 33 дни после производства; для продукта 2, образцы начала хранения получали в 7, 8 и 9 дни после производства и образцы конца хранения получали в 28, 29 и 30 дни после производства.
Для каждого тестируемого образца диапазон разведений до 1/10 проводили в пробирках триптоновой соли. Три разведения, выбранные как функция теоретических популяций (см. таблицы I и II), инокулировали на каждой из используемых сред. Для каждого разведения, 1 мл разведенного продукта инокулировали в 1 чашку Петри и 15 мл используемой среды вливали в чашку.
Чашки инкубировали в условиях и в течение продолжительности времени, указанных в таблицах IV, V, VIII и IX.
Результаты
Идентификация штаммов:
На среде M1:
- при 44°C, штамм Lactobacillus rhamnosus продуцирует колонии синего цвета и штаммы Streptococcus thermophilus продуцируют колонии пурпурного цвета; штаммы Lactobacillus paracasei 1 и 2 и штамм Lactobacillus bulgaricus не растут;
- при 37°C с добавлением рамнозы штамм Lactobacillus rhamnosus и штамм Lactobacillus paracasei 2 продуцируют бесцветные колонии; штамм Lactobacillus paracasei 1 продуцирует колонии бирюзового цвета и штаммы Streptococcus thermophilus продуцируют колонии пурпурного цвета. Штамм Lactobacillus bulgaricus не растет;
- при 37°C с добавлением ванкомицина штамм Lactobacillus rhamnosus продуцирует синие колонии; штамм Lactobacillus paracasei 1 продуцирует колонии бирюзового цвета и штамм Lactobacillus paracasei 2 продуцирует бесцветные колонии; штаммы Streptococcus thermophilus и штамм Lactobacillus bulgaricus не растут.
На среде M2:
- штамм Lactobacillus rhamnosus продуцирует бесцветные колонии и штамм Lactobacillus bulgaricus продуцирует синие колонии. Штаммы Streptococcus thermophilus и штаммы Lactobacillus paracasei 1 и 2 не растут.
Полученные результаты суммированы в таблице X ниже:
Таблица X
Наименование штамма M1 среда M2 Среда
Инкубация при 44°C Добавление рамнозы и инкубация при 37°C Добавление ванкомицина и инкубация при 37°C
Lactobacillus rhamnosus синий бесцветный синий бесцветный
Lactobacillus paracasei 1 Отсутствие роста бирюзовый бирюзовый Отсутствие роста
Lactobacillus paracasei 2 Отсутствие роста бесцветный бесцветный Отсутствие роста
Streptococcus thermophilus (штаммы 1, 2, и 3) Magenta Magenta Отсутствие роста Отсутствие роста
Lactobacillus bulgaricus Отсутствие роста Отсутствие роста Отсутствие роста синий
Идентифицированный штамм(ы) Lactobacillus rhamnosus и Streptococcus thermophilus Lactobacillus paracasei 1 Lactobacillus paracasei 2 Lactobacillus bulgaricus
Продукт 1:
M1 среда, следовательно, позволяет подсчитать Lactobacillus paracasei и Streptococcus thermophilus, и среда M2 позволяет подсчитать Lactobacillus bulgaricus.
Продукт 2:
M1 среда, следовательно позволяет подсчитать:
- при 44°C: Lactobacillus rhamnosus и Streptococcus thermophilus
- с добавлением рамнозы при 37°C: Lactobacillus paracasei штамм 1;
- с добавлением ванкомицина при 37°C: Lactobacillus paracasei штамм 2.
M2 среда позволяет подсчитать Lactobacillus bulgaricus.
Бактерии, считающие бактерии:
Продукт 1:
Рано в периоде хранения:
Результаты проиллюстрированы в таблице XI.
Таблица XI
Виды Референсная среда (контроль) Партия 1 Партия 2 Партия 3
L.paracasei 1 Бактериальная нагрузка 5,4×108 6,1×108 5,7×108 6,2×108
Различие относительно контроля (log) +0,06 +0,03 +0,07
S.thermophilus Бактериальная нагрузка 6,4×108 5,3×108 6,8×108 5,5×108
Различие относительно контроля (log) -0,08 +0,03 -0,07
L.bulgaricus Бактериальная нагрузка 1,6×106* 3×106 3×106 2,8×106
Различие относительно контроля (log) +0,27 +0,26 0,23
Вариабельность метода подсчета была следующая:
-на среде M1: между 5,7×10 8 КОЕ/мл и 6,2×10 8 КОЕ/мл для L.paracasei 1, между 5,3×10 8 КОЕ/мл и 6,8×10 8 КОЕ/мл для S. thermophilus,
- на среде M2: между 2,8×10 6 КОЕ/мл и 3×10 6 КОЕ/мл для L.bulgaricus.
Затруднения в подсчете L. bulgaricus на контрольной среде кислой MRS, необходимо отметить:
- день 5: различие на один log относительно среды M2 и количества с D4,
- день 6: отсутствие роста.
Конец периода хранения:
Результаты проиллюстрированы в таблице XII.
Таблица XII
Виды Референсная среда (контроль) Партия 1 Партия 2 Партия 3
L.paracasei 1 Бактериальная нагрузка 4,5×108 4,1×108 4×108 4,5×108
Различие относительно контроля (log) -0,04 -0,05 -0,01
S.thermophilus Бактериальная нагрузка 1,8×108 1,9×108 1,9×108 2,2×108
Различие относительно контроля (log) +0,02 +0,02 +0,08
L.bulgaricus Бактериальная нагрузка отсутствие отсутствие отсутствие отсутствие
Различие относительно контроля (log) Н.п. Н.п. Н.п.
M1 среда позволяет эффективно различить Lactobacillus paracasei и Streptococcus thermophiles, присутствующие в продукте. Количество для L. paracasei варьируется между 4×108 КОЕ/мл и 4,5×108 КОЕ/мл по трем партиям и в течение трех дней анализа. Нагрузка S.thermophilus варьируется между 1,9×108 КОЕ/мл и 2,2×108 КОЕ/мл.
Такие тесты также демонстрируют отсутствие L. bulgaricus в продукте на этой стадии хранения, или на референсной среде или на среде M2.
Продукт 2:
Рано на стадии хранения:
Результаты проиллюстрированы в таблице XIII.
Таблица XIII
Виды Референсная среда (контроль) Партия 1 Партия 2 Партия 3
L.paracasei 1 и 2 L.paracasei 1 бактериальная нагрузка 2×108 1,6×108 1,8×108 1,7×108
L.paracasei 2 бактериальная нагрузка 2,3×107 3×107 2,8×107
Различие относительно контроля (log) -0,02 +0,03 0,00
S.thermophilus Бактериальная нагрузка 8,9×108 8,7×108 9,1×108 9,8×108
Различие относительно контроля (log) -0,01 +0,01 +0,04
L.rhamnosus Бактериальная нагрузка 2,3×108 2,3×108 2,3×108 2,3×108
Различие относительно контроля (log) 0,00 0,00 0,00
L.bulgaricus Бактериальная нагрузка 2,5×105 4,6×105 2,6×105 3,1×105
Различие относительно контроля (log) +0,27 +0,03 0,10
Вариабельность метода подсчета была следующая:
- на среде M1: между 1,6×10 8 КОЕ/мл и 1,8×10 8 КОЕ/мл для L.paracasei 1, между 2,3×10 7 КОЕ/мл и 3×10 7 КОЕ/мл для L.paracasei 2, между 8,7×10 8 КОЕ/мл и 9,8×10 8 КОЕ/мл для S.thermophilus, 2,3×10 8 КОЕ/мл для трех партий L.rhamnosus
- на среде M2: между 2,6×10 5 КОЕ/мл и 5×10 5 КОЕ/мл для L.bulgaricus.
Конец периода хранения:
Результаты проиллюстрированы в таблице XIV.
Таблица XIV
Виды Референсная среда (контроль) Партия 1 Партия 2 Партия 3
L.paracasei 1 и 2 L.paracasei 1 бактериальная нагрузка 2,1×108 1,6×108 1,5×108 1,6×108
L.paracasei 2 бактериальная нагрузка 1,4×107 2,2×107 2,2×107
Различие относительно контроля (log) - 0,07 - 0,08 - 0,05
S.thermophilus Бактериальная нагрузка 7,3×108 6,8×108 6,6×108 7,5×108
Различие относительно контроля (log) -0,03 -0,04 +0,01
L.rhamnosus Бактериальная нагрузка 1,8×108 2,0×108 2,0×108 2,0×108
Различие относительно контроля (log) +0,03 +0,04 +0,04
L.bulgaricus Бактериальная нагрузка отсутствие отсутствие отсутствие отсутствие
Различие относительно контроля (log) Н.п. Н.п. Н.п.
Количество по трем партиям среде M1 варьировалось между 1,5×108 КОЕ/мл и 1,6×108 КОЕ/мл для L.paracasei 1, между 1,4×107 КОЕ/мл и 2,2×107 КОЕ/мл для L.paracasei 2, между 6,6×108 КОЕ/мл и 7,5×108 КОЕ/мл для S.thermophilus, 2,0×108 КОЕ/мл для трех партий L.rhamnosus.
Тесты также демонстрируют отсутствие L. bulgaricus в продукте на этой стадии хранения, и на референсной среде и на среде M2.
Применение способа, описанного выше, позволяет различить три бактериальных штамма, присутствующие в продукте 1, и четыре, присутствующие в продукте 2.

Claims (14)

1. Способ различия друг от друга и подсчета штаммов молочнокислых бактерий или бифидобактерий в известной смеси, которые присутствуют в различных популяционных количествах в молочном продукте,
причем тестируемый молочный продукт содержит по меньшей мере один штамм Lactobacillus paracasei subsp. paracasei, по меньшей мере один штамм Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus и по меньшей мере один штамм Streptococcus thermophilus,
отличающийся тем, что он включает:
a) инокуляцию аликвот указанного молочного продукта в серии культуральных чашек, каждая содержит химически определенную агаровую среду М1 со следующим составом: агар: 15 г/л; триптон: 2,5 г/л; пепсин-переваренный мясной пептон: 2,5 г/л; папаин-переваренный соевый пептон: 5 г/л; глицерофосфат натрия: 19 г/л; лактоза: 5 г/л; экстракт дрожжей: 2,5 г/л; мясной экстракт: 5 г/л; сульфат магния: 0,25 г/л; аскорбиновая кислота: 0,5 г/л; и по меньшей мере два хромогенных субстрата: 6-хлор-3-индоксил-β-D-галактопиранозид (лососевый Gal): 0,2 г/л; 5-бром-4-хлор-3-индолил-β-D-глюкопиранозид (X-Glu): 0,1 г/л, дающие различные окраски, каждый из указанных субстратов потребляется по меньшей мере одним из указанных бактериальных штаммов и не потребляется по меньшей мере одним другим из указанных бактериальных штаммов; и
b) необязательно инокуляцию аликвот указанного молочного продукта в серии культуральных чашек, содержащих химически определенную агаровую среду M2, позволяющую рост штаммов молочнокислых бактерий, присутствующих в тестируемом молочном продукте, такие штаммы не могут расти на среде М1 и по меньшей мере один хромогенный субстрат, потребляемый по меньшей мере одним из указанных бактериальных штаммов; и
c) инкубацию указанных чашек в течение времени, достаточного для формирования бактериальных колоний, и подсчет колоний для каждой из окрасок, наблюдаемых в каждой культуральной чашке.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что агаровая среда части культуральных чашек также включает по меньшей мере одну добавку, селективно способствующую росту по меньшей мере одного из указанных бактериальных штаммов, и/или агаровая среда части культуральных чашек также включает по меньшей мере одну добавку, селективно ингибирующую рост по меньшей мере одного из указанных бактериальных штаммов.
3. Способ по п.1, отличающийся тем, что часть указанных культуральных чашек инкубируют в селективных условиях, благоприятных для роста по меньшей мере одного из указанных бактериальных штаммов, и другую часть культуральных чашек инкубируют в различных селективных условиях, благоприятных для роста по меньшей мере одного другого из указанных бактериальных штаммов.
4. Способ по п.1, отличающийся тем, что по меньшей мере два из бактериальных штаммов, присутствующих в тестируемом молочном продукте, принадлежат к тем же видам и подвидам.
5. Способ по п.1, отличающийся тем, что тестируемый молочный продукт дополнительно содержит по меньшей мере один штамм Lactobacillus rhamnosus.
6. Способ по п.5, отличающийся тем, что для подсчета бактерий вида Lactobacillus delbrueckii bulgaricus использовали среду M2 со следующим составом: полипептон: 10 г/л; экстракт дрожжей: 5 г/л; мясной экстракт: 10 г/л; фосфат дикалия: 2 г/л; ацетат натрия: 5 г/л; цитрат аммония: 2 г/л; сульфат магния: 0,2 г/л; сульфат марганца: 0,05 г/л; агар: 15 г/л; 5-бром-4-хлор-3-индолил-β-D-галактопиранозид (X-Gal): 0,15 г/л.
7. Способ по п.1, отличающийся тем, что для подсчета бактерий вида Lactobacillus paracasei subsp. paracasei, Lactobacillus rhamnosus, и Streptococcus thermophilus, первая часть чашек, содержащих среду М1, не включала какой-либо добавки, вторая часть указанных чашек включала ванкомицин в качестве добавки и третья часть указанных чашек включала рамнозу в качестве добавки.
8. Способ по п.5, отличающийся тем, что для подсчета бактерий вида Lactobacillus paracasei subsp. paracasei, Lactobacillus rhamnosus и Streptococcus thermophilus, инокулированные чашки инкубировали в течение приблизительно 48 часов в контролируемой атмосфере, содержащей от 6 до 16% O2 и от 2 до 10% CO2, часть указанных чашек инкубировали при приблизительно 37°C, и другую часть при приблизительно 44°C.
9. Способ по п.5, отличающийся тем, что для подсчета бактерий вида Lactobacillus delbrueckii bulgaricus, инокулированные чашки инкубировали в течение приблизительно 48 часов при приблизительно 47°C в контролируемой атмосфере, содержащей менее чем 1% O2 и по меньшей мере 13% CO2.
RU2016125858A 2013-12-16 2014-12-16 Способ дифференциального учета молочнокислых бактерий в смеси в пищевом продукте RU2674583C1 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/IB2013/060988 WO2015092481A1 (fr) 2013-12-16 2013-12-16 Procédé de dénombrement différentiel de bactéries lactiques en mélange dans un produit alimentaire
IBPCT/IB2013/060988 2013-12-16
PCT/FR2014/053359 WO2015092258A1 (fr) 2013-12-16 2014-12-16 Procédé de dénombrement différentiel de bactéries lactiques en mélange dans un produit alimentaire

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2016125858A RU2016125858A (ru) 2018-01-23
RU2674583C1 true RU2674583C1 (ru) 2018-12-11

Family

ID=50030370

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2016125858A RU2674583C1 (ru) 2013-12-16 2014-12-16 Способ дифференциального учета молочнокислых бактерий в смеси в пищевом продукте

Country Status (5)

Country Link
US (1) US10093958B2 (ru)
EP (1) EP3083982B1 (ru)
JP (1) JP6580569B2 (ru)
RU (1) RU2674583C1 (ru)
WO (2) WO2015092481A1 (ru)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109136324A (zh) * 2017-06-28 2019-01-04 西安市宇驰检测技术有限公司 肉制品中微生物的检测的方法以及新型混合液

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2342435C2 (ru) * 2003-01-10 2008-12-27 Сентро Насьональ Де Биопрепарадос Селективная культуральная среда для выделения и выявления видов рода streptococcus
RU2386696C1 (ru) * 2008-10-14 2010-04-20 Общество с ограниченной ответственностью Научно-производственное предприятие "Питательные среды" ХРОМОГЕННАЯ СЕЛЕКТИВНАЯ ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДагХром АГАР ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ И ИДЕНТИФИКАЦИИ КИШЕЧНОЙ ПАЛОЧКИ И ДРУГИХ КОЛИФОРМНЫХ БАКТЕРИЙ

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2708286B1 (fr) * 1993-07-28 1995-10-20 Rambach Alain Procédé d'identification de microorganismes avec au moins deux chromogènes.
FR2875240B1 (fr) * 2004-09-16 2006-11-17 Biomerieux Sa Procede de detection de streptococcus agalactiae en utilisant l'activite alpha-glucosidase
FR2881755B1 (fr) * 2005-02-10 2012-11-30 Biomerieux Sa Milieux pour la detection specifique de micro-organismes resistants
WO2008003810A1 (es) * 2006-07-03 2008-01-10 Consejo Superior De Investigaciones Científicas Procedimiento para diferenciar y cuantificar bacterias lácticas y bifidobacterias en leches fermentadas que emplea medios de cultivo selectivos libres de antibióticos
JP5519960B2 (ja) * 2009-06-18 2014-06-11 日水製薬株式会社 乳酸菌検出用培地及び検出法
CA2823518A1 (en) * 2010-12-30 2012-07-05 3M Innovative Properties Company Articles and method for detecting a target microorganism
JP2012217440A (ja) * 2011-04-14 2012-11-12 Nissui Pharm Co Ltd 袋状微生物検出用容器

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2342435C2 (ru) * 2003-01-10 2008-12-27 Сентро Насьональ Де Биопрепарадос Селективная культуральная среда для выделения и выявления видов рода streptococcus
RU2386696C1 (ru) * 2008-10-14 2010-04-20 Общество с ограниченной ответственностью Научно-производственное предприятие "Питательные среды" ХРОМОГЕННАЯ СЕЛЕКТИВНАЯ ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДагХром АГАР ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ И ИДЕНТИФИКАЦИИ КИШЕЧНОЙ ПАЛОЧКИ И ДРУГИХ КОЛИФОРМНЫХ БАКТЕРИЙ

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHEVALIER P. et al."X-a-Gal-based medium for simultaneous enumeration of bifidobacteria and lactic acid bacteria in milk".//Journal of Microbiological Methods, 1991, N13, p.75-83. *
CHEVALIER P. et al."X-a-Gal-based medium for simultaneous enumeration of bifidobacteria and lactic acid bacteria in milk".//Journal of Microbiological Methods, 1991, N13, p.75-83. KNEIFEL W., PACHER B. "An X-Glu based agar medium for the selective enumeration of Lactobacillus acidophilus in yogurt-related milk products".//Int. Dairy Journal, 1993, N3, p.277-291. *
KNEIFEL W., PACHER B. "An X-Glu based agar medium for the selective enumeration of Lactobacillus acidophilus in yogurt-related milk products".//Int. Dairy Journal, 1993, N3, p.277-291. *

Also Published As

Publication number Publication date
US10093958B2 (en) 2018-10-09
US20160298163A1 (en) 2016-10-13
RU2016125858A (ru) 2018-01-23
JP2016540513A (ja) 2016-12-28
EP3083982B1 (fr) 2019-09-11
EP3083982A1 (fr) 2016-10-26
WO2015092258A1 (fr) 2015-06-25
JP6580569B2 (ja) 2019-09-25
WO2015092481A1 (fr) 2015-06-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Guessas et al. Characterization of lactic acid bacteria isolated from Algerian arid zone raw goats\'milk
Nwamaioha et al. A selective medium for the enumeration and differentiation of Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus
Strompfová et al. Isolation and characterization of faecal bifidobacteria and lactobacilli isolated from dogs and primates
US11484040B2 (en) Ampicillin resistant texturizing lactic acid bacteria strains
Miranda et al. Development of a selective culture medium for bifidobacteria, Raffinose-Propionate Lithium Mupirocin (RP-MUP) and assessment of its usage with Petrifilm™ Aerobic Count plates
Galat et al. Novel method based on chromogenic media for discrimination and selective enumeration of lactic acid bacteria in fermented milk products
Oyeniran et al. A modified reinforced clostridial medium for the isolation and enumeration of Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus in a mixed culture
Zhang et al. New selective media for isolation and enumeration of Lactobacillus rhamnosus and Streptococcus thermophilus
RU2674583C1 (ru) Способ дифференциального учета молочнокислых бактерий в смеси в пищевом продукте
Patil et al. Isolation and characterisation of Lactobacillus species from sheep milk
KR101548640B1 (ko) 엽산생성능이 우수한 신규한 락토바실러스 플랜타룸 ja71 균주
CN102325873A (zh) 制备乳酸菌组合物的方法
CN112813134B (zh) 显色培养基、制备方法及菌株检测方法
KR20100005552A (ko) 락토바실러스 프란타럼 μ23 균주를 포함하는 발효유 및이의 제조방법
Voidarou et al. Chemical and microbiological characterization of artisan inoculants used for the fermentation of traditional dairy products in Epirus area (Greece)
KR100989638B1 (ko) 락토바실러스 지애 ｒｍｋ354 균주를 포함하는 발효유 및이의 제조방법
Darwish et al. Probiotic Characterization of Limosilactobacillus and Lactiplantibacillus Strains Isolated from Traditional Egyptian Dairy Products
KR100858288B1 (ko) Αｃｅ 억제능이 있는 신규한 락토바실러스 지애 ｒｍｋ354균주
Nataraj et al. Scheme of Isolation and Characterization of Pure Lactic Acid Bacteria and Probiotics with Their In-Vitro Safety Assessment Protocols
Kandola Compatibility assessment of yoghurt starters with indigenous isolates of Lactobacillus acidophilus for development of synbiotic yoghurt by checking different attributes like contact inhibition, titrable acidity, viable counts and pH
Mourad et al. Technological and biochemical characterization of lactic acid bacteria isolated from Algerian traditional dairy products
KR101737812B1 (ko) 락토바실루스 살리바리우스 ldtm7701(kctc18437p) 신균주 맞춤형 최적 배지조성물 및 이를 이용한 배양 방법
Gamboa et al. Antagonistic action of indigenous Streptococcus mutans strains
Note Evaluation of selective media for enumeration of Lactobacillus acidophilus and Bifidobacterium animalis present in probiotic formulations
KR100870729B1 (ko) Αｃｅ 억제능이 있는 신규한 엔테로코커스 휘칼리스ｒｍｂ46 균주

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20191217