RU2671478C1 - Способ определения агрессивности микроорганизмов-биодеструкторов полимерных материалов - Google Patents
Способ определения агрессивности микроорганизмов-биодеструкторов полимерных материалов Download PDFInfo
- Publication number
- RU2671478C1 RU2671478C1 RU2018102513A RU2018102513A RU2671478C1 RU 2671478 C1 RU2671478 C1 RU 2671478C1 RU 2018102513 A RU2018102513 A RU 2018102513A RU 2018102513 A RU2018102513 A RU 2018102513A RU 2671478 C1 RU2671478 C1 RU 2671478C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- sample
- carbon dioxide
- microorganisms
- control
- aggressiveness
- Prior art date
Links
- 239000000463 material Substances 0.000 title claims abstract description 42
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 25
- 239000001064 degrader Substances 0.000 title abstract 3
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 114
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims abstract description 80
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 claims abstract description 53
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 claims abstract description 53
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 53
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 34
- 230000006378 damage Effects 0.000 claims abstract description 32
- 239000013068 control sample Substances 0.000 claims abstract description 27
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims abstract description 15
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 12
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 claims abstract description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 28
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 claims description 8
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 claims description 8
- 238000011161 development Methods 0.000 claims description 8
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 claims description 5
- UGFAIRIUMAVXCW-UHFFFAOYSA-N Carbon monoxide Chemical compound [O+]#[C-] UGFAIRIUMAVXCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 claims 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 239000002861 polymer material Substances 0.000 description 29
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 14
- 229920001971 elastomer Polymers 0.000 description 14
- 239000005060 rubber Substances 0.000 description 14
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 12
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 10
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 10
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 9
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 9
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 9
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 description 8
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 7
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 7
- 241001515917 Chaetomium globosum Species 0.000 description 6
- 230000008859 change Effects 0.000 description 6
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 6
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 6
- 238000011160 research Methods 0.000 description 6
- 241001149955 Cladosporium cladosporioides Species 0.000 description 5
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 4
- 229920001875 Ebonite Polymers 0.000 description 3
- 241000985530 Penicillium glabrum Species 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 2
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 2
- 229940094461 penicillium glabrum Drugs 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 239000004588 polyurethane sealant Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 229920002379 silicone rubber Polymers 0.000 description 2
- 239000004945 silicone rubber Substances 0.000 description 2
- 239000004590 silicone sealant Substances 0.000 description 2
- 230000028070 sporulation Effects 0.000 description 2
- UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 5,8-dihydroxy-2-methoxy-6-methyl-7-(2-oxopropyl)naphthalene-1,4-dione Chemical compound CC1=C(CC(C)=O)C(O)=C2C(=O)C(OC)=CC(=O)C2=C1O UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000223600 Alternaria Species 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 102000004031 Carboxy-Lyases Human genes 0.000 description 1
- 108090000489 Carboxy-Lyases Proteins 0.000 description 1
- 241000221955 Chaetomium Species 0.000 description 1
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 description 1
- 102000011782 Keratins Human genes 0.000 description 1
- 108010076876 Keratins Proteins 0.000 description 1
- 241000228143 Penicillium Species 0.000 description 1
- 241000235527 Rhizopus Species 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000223259 Trichoderma Species 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000005336 cracking Methods 0.000 description 1
- 230000000254 damaging effect Effects 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000010292 electrical insulation Methods 0.000 description 1
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000004362 fungal culture Methods 0.000 description 1
- 230000000855 fungicidal effect Effects 0.000 description 1
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 239000012770 industrial material Substances 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 1
- 239000001814 pectin Substances 0.000 description 1
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 description 1
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 description 1
- 230000008659 phytopathology Effects 0.000 description 1
- 239000004014 plasticizer Substances 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000004626 scanning electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000000565 sealant Substances 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 229920003051 synthetic elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000000844 transformation Methods 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/18—Testing for antimicrobial activity of a material
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ определения агрессивности микроорганизмов-биодеструкторов полимерных материалов, заключающийся в газохроматографическом определении метаболической активности микроорганизмов по эмиссии диоксида углерода. Рассчитывают удельную эмиссию диоксида углерода (мкмоль/см2/ч) в опытной Vo и контрольной Vк пробе по формуле Vo или Vк=(So или Sк*0.002124*Mr*v)/(t*s), где So или Sк - средняя площадь пика опытной и контрольной проб на хроматографе, Mr - молярная масса углекислого газа, v - объем аликвоты газовой пробы из флакона (см3), t - время экспозиции инкубации пробы в закрытом флаконе (час), s - площадь поверхности опытного или контрольного образца (см2). Затем рассчитывают отношение удельной эмиссии диоксида углерода в опытном образце к контрольному в %(об.) по формуле к=Vo/Vк и определяют отсутствие или наличие агрессивности микроорганизма и деструкции опытного образца. Способ обеспечивает расширение арсенала технических средств оценки агрессивности микроорганизмов-биодеструкторов полимерных материалов и повышение точности определения. 8 ил., 1 табл., 4 пр.
Description
Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к исследованию степени деструкции полимерных материалов микроорганизмами.
Биологическая деструкция, протекающая под действием микроорганизмов, представляет собой сложный физико-химический и медико-биологический процесс, включающий их диффузию в полимерный материал с последующими реакциями превращения химически нестойких связей, изменениями основных эксплуатационных или функциональных свойств полимеров. Повреждения полимерных материалов чаще всего вызываются грибами из родов Penicillium, Aspergillus, Chaetomium, Fusarium, Alternaria, Trichoderma, Rhizopus и т.п.
Микроорганизмы и метаболиты также вызывают изменения физико-химических и электрофизических свойств полимерных материалов в результате набухания или растрескивания. В частности в результате биообрастания - появление пятен плесени ухудшаются и различные внешние качества полимерных материалов, при этом работоспособность изделия может сохраняться. Развитие на поверхности полимера культуры плесневых грибов вызывает конденсацию из атмосферы паров воды, скопление влаги, что может в дальнейшем повлиять на изменение свойств полимерного материала.
Деструкция пластмасс зависит не только от вида и рода воздействующих микроорганизмов. На степень повреждения пластмасс оказывает влияние и химическое строение полимерного материала, его физическая структура, молекулярная масса, молекулярно-массовое распределение фракций, наличие и состав пластификаторов, наполнителей, стабилизаторов, а также других добавок.
Кроме того повреждения полимерного материала зависит и от его физической структуры. Мицелий грибов может использовать для своего развития очень тонкие трещины, поры материала, образующиеся на границе раздела фаз и поверхностей в материале.
Все это в конечном итоге может приводить к изменению физико-механических свойств полимерного материала, например, уменьшение прочности, гибкости, диэлектрических характеристик, снижению электроизоляционных свойств.
В этой связи определение агрессивности микроорганизмов-биодеструкторов полимерных материалов в процессе их эксплуатации имеет важное значение.
Тем более что на современном этапе развития меняется подход к разработке полимерных материалов, диаметрально противоположный традиционному, так как его целью является получение полимеров, которые сохраняют эксплуатационные характеристики только в течение периода эксплуатации, а затем претерпевают физико-химические и биологические превращения под действием факторов окружающей среды и легко включаются в процессы метаболизма природных биосистем.
На сегодняшний день существует большое количество стандартов по определению агрессивности микроорганизмов-биодеструкторов полимерных материалов, в которых проводят определение методом визуальной оценки степени обрастания материалов; кроме того, ряд стандартов рекомендует осуществлять проверку некоторых физико-технических параметров исследуемых изделий (убыль веса, прочность на разрыв и сжатие, удельное объемное и поверхностное сопротивление, tg угла диэлектрических потерь, диэлектрическая проницаемость и т.п.), которые изменяются при биологических повреждениях (Родионова М.С., Березниковская Л.В., Веприцкая А.В. О методах испытания изделий на грибостойкость // Микология и фитопатология. 1990. Т. 24. Вып. 1. С. 87-88).
В соответствии с ГОСТ 9.048-75 … 9.053-75 и ГОСТ 20.57.406-81 известны два метода испытаний на грибостойкость. По первому методу испытуемые образцы, тщательно очищают от загрязнений этиловым спиртом. По второму методу выборку изделий делят на две равные части (число изделий в выборке должно быть четным). Для выявления причин поражения изделий грибами подвергают очистке от загрязнений этиловым спиртом только первую группу образцов. Таким образом, первый метод устанавливает, содержат ли изделие и материалы источники питания для развития и роста грибов, а второй метод устанавливает наличие фунгицидных свойств и влияние внешних загрязнений на грибоустойчивость образца. Готовят суспензию спор грибов в воде для каждого вида грибов с концентрацией 1-2 млн. спор/мл. Приспособления с испытываемыми образцами переносят в испытательный бокс, после чего доступные поверхности образцов заражают водной суспензией спор грибов. Вся поверхность изделий должна быть равномерно опрыснута из пульверизатора. На питательную среду контрольных чашек Петри наносится несколько капель суспензии. Образцы просушивают. После высыхания капель суспензии образцы и контрольные чашки Петри помещают в камеру грибообразования. Расстояние между образцами должно быть не менее 20 мм. Камеру закрывают. Продолжительность испытаний составляет 28 суток. По истечении 5 суток из камеры извлекают контрольные чашки Петри. Если на питательной среде чашек Петри рост грибов не наблюдается, то испытания повторяют на новых образцах с вновь приготовленной суспензией из новых партий грибов. По окончании испытаний образцы извлекают из камеры и сразу осматривают сначала невооруженным глазом в рассеянном свете при освещенности от 2000 до 3000 лк, а затем при увеличении в 56-60 раз. Оценку грибоустойчивости изделий производят по росту грибов на образцах по шестибалльной системе: при осмотре под микроскопом рост плесневых грибов не виден - 0; при осмотре под микроскопом видны проросшие споры и незначительно развитый мицелий в виде неветвящихся гиф - 1; при осмотре под микроскопом виден мицелий в виде ветвящихся гиф, возможно наличие спор - 2; при осмотре невооруженным глазом рост грибов едва виден, но отчетливо виден под микроскопом - 3; при осмотре невооруженным глазом отчетливо виден рост грибов, покрывающих менее 25% испытываемой поверхности - 4; при осмотре невооруженным глазом отчетливо виден рост грибов, покрывающих более 25% испытываемой поверхности - 5. Для повышения точности оценки грибоустойчивости рекомендуется воспользоваться фотообразцами, приведенными в приложении к ГОСТу 9.048-75. Изделия считают выдержавшими испытание по первому методу, если рост грибов на них не превышает 2 балла. Результаты испытания изделий на грибоустойчивость по второму методу оценивают по обеим группам образцов. Результаты испытаний считают положительными, если оценка роста грибов на образцах первой группы не превышает 2 балла, а у второй группы - 3 балла. Затем составляют протокол испытаний, куда заносят результаты. Однако эти методы имеют ряд весьма существенных недостатков. При испытании материалов с одинаковым целевым назначением используются различные тест-организмы. В ряде указанных стандартов учитывается присутствие внешних загрязнений на испытуемых материалах, в ряде других - не учитывается. Это приводит к неадекватности оценки при учетах результатов испытаний одних и тех же материалов.
Известен также способ определения стойкости образцов материалов к воздействию микроорганизмов путем оценки интенсивности роста тест-культур при этом в состав тест-организмов вводят культуры денитрифицирующих, десульфатирующих, углеводород-окисляющих и аммонифицирующих бактерий, выделенных из почв и подвергают образцы в том числе и полимерные материалы физико-механическим испытаниям (SU 245433 А1, 04.06.1969). Недостатками способа являются длительность исследования.
Известна группа хроматографических методов (газовые, газожидкостные, тонкослойные, ионообменные) определения деструкции полимеров. Эти методики разработаны и используются рядом авторов. Ермилова И.А. с сотрудниками при определении особенностей воздействия химических волокон на бактерии использовали газохроматографический метод определения углекислого газа для выявления активности декарбоксилаз микроорганизмов. (Ермилова И.А, Вершинина Н.П., Зубко И.К. Газохроматографические методы определения особенностей воздействия химических волокон на микроорганизмы // В сб.: Биохимические основы защиты промышленных материалов от повреждений. Горький: Б.И., 1987. С. 34-38). Способ трудоемок и длителен в исследовании.
Известен хроматографический экспресс-способ определения устойчивости полимеров на основе искусственных каучуков к разрушающему воздействию микроскопических грибов. Он заключается в сравнительном анализе хроматограмм экстрактов материала до и после воздействия на него микодеструкторов, а также в сравнении хроматограмм газовой фазы продуктов жизнедеятельности грибов, культивируемых на питательной среде и в присутствии изучаемого объекта (Feldman M.S., Kirsh S.I., Pozhidaev V.M. Extraction of organic compounds, formed in the cource of polymer biodestruction // Abstr. International conference on solutions extraction of organic compounds ISECOS 92, Voronezh, Rissia, Sertember 22-25, 1992. V. 11. P. 65-69). Недостатками способа является его трудоемкость. Данный источник информации рассмотрен в качестве ближайшего аналога.
Технический результат заявленного способа заключается в расширении арсенала технических средств для оценки агрессивности микроорганизмов-биодеструкторов полимерных материалов с высокой точностью и значительным сокращением трудозатрат и временем исследования.
Технический результат достигается тем, что определение агрессивности микроорганизмов-биодеструкторов полимерных материалов, проводят путем газохроматографического определения метаболической активности микроорганизмов по эмиссии диоксида углерода, при этом образцы полимерных материалов с исследуемой площадью, незараженные -контрольный образец и зараженные с поверхности суспензией спор микроорганизмов - опытный образец помещают в отдельные чашки Петри или на решетчатое дно эксикатора на расстоянии 1,5-2 см друг от друга, закрывают и инкубируют при оптимальных для развития микроорганизмов условиях - при влажности 80-85% и температуре 24-28°С, один-два раза в неделю сдвигая в сторону крышку для обеспечения циркуляции воздуха, затем по истечении 28-96 суток инкубации при свободном газообмене образцы переносят во флаконы объемом 15 см3, герметично закрывают и инкубируют 24-48 часов при температуре 24-28°С, затем отбирают шприцом аликвоты газовой пробы из флаконов с контрольными и опытными образцами в количестве 0,5-1,0 см3 и определяют в них хроматографически концентрацию диоксида углерода, рассчитывая удельную эмиссию диоксида углерода (мкмоль/см2 /час) в опытной Vo и контрольной Vк пробе по формуле: Vo или Vк=(So или Sк*0.002124*Mr*v)/(t*s), где So или Sк -средняя площадь пика опытной и контрольной пробы на хроматографе при умножении на коэффициент 0,002124 и Mr показывающая концентрацию СО2 в мкмолях; Mr - молярная масса углекислого газа (равна 44,01 г/моль); v - объем аликвоты газовой пробы из флакона (см3); t - время экспозиции инкубации пробы в закрытом флаконе, час; s - площадь поверхности опытного или контрольного образца, см2, затем рассчитывают отношение удельной эмиссии диоксида углерода в опытном образце к контрольному в %(об), определяя кратность превышения концентрации диоксида углерода
(k) в опытном образце по формуле: k=Vo/Vк и при значении k<10 определяют отсутствие агрессивности микроорганизма и отсутствии деструкции опытного образца, при значении 10<k<30 - его слабую агрессивность и отсутствие деструкцию опытного образца, при значении 30<k<50 - среднюю агрессивность и химическую деструкцию опытного образца метаболитами микроорганизмов и при значении k>50 - его сильную агрессивность и химическую и механическую деструкцию опытного образца полимерного материала с изменением его физико-химических и электрофизических свойств.
Способ осуществляется следующим образом.
Предварительно проводят подготовку водной суспензии спор Aspergillus niger (и также других видов микроорганизмов по отдельности), используя для этого дистиллированную воду и культуру гриба на агаризованной среде Чапека в возрасте 14-28 суток. Концентрацию спор подсчитывают методом прямого счета в камере Горяева. Для исследования концентрация спор в суспензии должна быть равна 1-2 млн. спор/см3; - в суспензию также добавляют ПАВ Твин-80 (1 капля в 10 мл суспензии).
Затем надевают медицинскую маску, резиновые перчатки и проводят обработку исследуемого полимерного материала суспензией спор Aspergillus niger или другим видом микроорганизма из пульверизатора, аккуратно распыляя определенный объем на исследуемую площадь, не допуская слияния капель споровой суспензии. Для работы со спорами используют металлическую кювету или поднос, покрытый алюминиевой фольгой. Работы выполняются при соблюдении стерильных условий в ламинарном боксе.
Далее образцы полимерных материалов с исследуемой площадью, незараженные (контрольный образец) и зараженные с поверхности суспензией спор микроорганизма (опытный образец) помещают в отдельные чашки Петри и/или на решетчатое дно эксикатора на расстоянии 1,5-2 см друг от друга и инкубируют при оптимальных для развития микроорганизмов условиях - при влажности 80-85% и температуре 24-28°С, один-два раза в неделю сдвигая в сторону крышку эксикатора или чашек Петри на 5-10 секунд. Ее открывают и закрывают для обеспечения циркуляции воздуха. Затем по истечении 28-96 суток инкубации при свободном газообмене образцы переносят в пенициллиновые флаконы объемом 15 см3. Далее их герметично закрывают и инкубируют 24-48 часов при температуре 24-28°С. Затем производят отбор шприцом аликвоты газовой пробы из флаконов с контрольными и опытными образцами в количестве 0,5-1,0 см3. Определяют в них хроматографически концентрацию диоксида углерода, рассчитывая удельную эмиссию диоксида углерода (мкмоль/см2/час) в опытной пробе Vo и контрольной пробе Vк по формуле: Vo или Vк=(So или Sк*0.002124*Mr*v)/(t*s), где
So или Sк - средняя площадь пика опытной и контрольной пробы на хроматографе при умножении на коэффициент 0,002124 и Mr, показывающий концентрацию СО2 в мкмолях;
Mr - молярная масса углекислого газа (равна 44,01 г/моль); v - объем аликвоты газовой пробы из флакона (см3);
t - время экспозиции инкубации пробы в закрытом флаконе, час; s - площадь поверхности опытного или контрольного образца, см. Затем рассчитывают отношение удельной эмиссии диоксида углерода в опытном образце к контрольному в %(об), определяя кратность превышения концентрации диоксида углерода (k) в опытном образце по формуле: к=Vo/Vк. При значении k<10 определяют отсутствие агрессивности микроорганизма и отсутствии деструкции опытного образца, при значении 10<k<30 - его слабую агрессивность и отсутствие деструкцию опытного образца, при значении 30<k<50 - среднюю агрессивность и химическую деструкцию опытного образца метаболитами микроорганизмов и при значении k>50 - его сильную агрессивность и химическую и
механическую деструкцию опытного образца полимерного материала с изменением его физико-химических и электрофизических свойств.
Примеры осуществления способа.
Пример 1
Для исследования использовали пластины полимерного материала в виде высушенного тонкого силиконового герметика (Penosil + 1500°С Sealant жаростойкий).
Образцы материала очищали от внешних загрязнений, погружая на 1 минуту в этиловый спирт, и высушивали. Расход спирта составлял от 0,05 до 0,1 дм3/м2. Предварительно осуществляли подготовку суспензии спор Aspergillus niger как описано выше. Готовили суспензию спор грибов в воде по ГОСТ 9.048. (п. 1.3).
Под ламинарным боксом при соблюдении условий стерильности пластины полимерного материала в количестве 3 контрольных и 3 опытных выкладывали на дно металлической кюветы и обрабатывали из пульверизатора суспензией спор Aspergillus niger, не допуская слияния капель на поверхности.
Образцы полимерных материалов с исследуемой площадью поверхности (s) равной 8 см2, незараженные (контрольный образец) и зараженные с поверхности суспензией спор Aspergillus niger (опытный образец) размещали на расстоянии 1,5 см друг от друга в чашках Петри, на дно которых налита вода, и инкубировали 28 суток при температуре 28°С и влажности 85%. Один-два раза в неделю сдвигали в сторону крышку чашек Петри на 5-10 секунд.
Затем эти образцы полимерных материалов контрольные и опытные помещали в пенициллиновые флаконы объемом 15 см3. Герметично закрывали и инкубировали 48 часа при температуре 28°С. Из пенициллиновых флаконов с контрольным и опытным образцами отобрали шприцом аликвоты газовой пробы (v) в количестве 1,0 см3. Далее определяли в ней концентрацию диоксида углерода с помощью газового хроматографа (М 3700-4).
Было проведено три измерения при этом площадь пика контрольной пробы на хроматографе трех измерений равнялась 113,55; 178,15; 107,67. Рассчитанная средняя площадь пика пробы на хроматографе (So) при этом равнялась 133,12. Молярная масса углекислого газа (Mr) составляет 44,01 г/моль. Объем аликвоты газовой пробы из флакона (v) составил 1 см3. Время экспозиции инкубации пробы в закрытом флаконе (t) составляла 48 часов. Удельную эмиссию диоксида углерода (мкмоль/см2/час, в контрольной пробе) рассчитывали по формуле: Vк=(133,12*0,002124*44,01*1)/(48*8)=0,033
Также было проведено три измерения площади пика опытной пробы на хроматографе, которые равнялись 205,4; 191,85, 178,31. Рассчитанная средняя площадь пика пробы на хроматографе (Sк) при этом равнялась 191,85. Молярная масса углекислого газа (Mr) составляет 44,01 г/моль. Объем аликвоты газовой пробы из флакона (v) составил 1 см3. Время экспозиции инкубации пробы в закрытом флаконе (t) составляла 48 часов. Удельную эмиссию диоксида углерода (мкмоль/см2/час, в контрольной пробе) рассчитывали по формуле: Vo=(191,85*0,002124*44,01*1)/(48*8)=0,047
Затем рассчитывали отношение удельной эмиссии диоксида углерода в опытном образце к контрольному в % (об), определяя кратность превышения концентрации диоксида углерода (k) в опытном образце по формуле: k=0,047/0,033=1,4.
Таким образом, деструкция у данного опытного полимерного материала отсутствует. А k - кратность превышения значения содержания диоксида углерода (в объемных процентах) в опытном варианте над контрольным составила 1,4, что является меньше 10 (см. рис. 1 и 2). Как на рисунке 1 (контрольный образец) так и на рисунке 2 (опытный образец) отсутствуют какие-либо факторы присутствия мицелия и деградации полимерного материала.
Было проведено исследование степени деструкции полимерного материала силиконовый герметик и путем оценки в баллах по ГОСТ 9.048-89. Агрессивность микроорганизма также отсутствовала и была равна 0. Соответственно отсутствовала и деградация опытного образца.
Пример 2
Для исследования использовали полимерный материал в виде высушенной пластины тонкого полиуретанового герметика Makroflex.
Образцы материала очищали от внешних загрязнений, погружая на 1 минуту в этиловый спирт, и высушивали. Расход спирта составлял от 0,05 до 0,1 дм3/м2. Предварительно осуществляли подготовку суспензии спор Aspergillus niger как описано выше. Готовили суспензию спор грибов в воде по ГОСТ 9.048. (п. 1.3).
Под ламинарным боксом при соблюдении условий стерильности пластины полимерного материала в количестве 3 контрольных и 3 опытных выкладывали на решетчатое дно эксикатора и обрабатывали из пульверизатора суспензией спор Aspergillus niger, не допуская слияния капель на поверхности.
Образцы полимерных материалов с исследуемой площадью поверхности (s) равной 9 см2, незараженные (контрольный образец) и зараженные с поверхности суспензией спор Aspergillus niger (опытный образец) размещали в эксикаторах, на дно которых налита вода, и инкубировали 68 суток при температуре 29°С и влажности 80%.
Затем эти образцы полимерных материалов контрольные и опытные помещали в пенициллиновые флаконы объемом 15 см3. Герметично закрывали и инкубировали 24 часа при температуре 28°С. Из пенициллиновых флаконов с контрольным и опытным образцами отобрали шприцом аликвоты газовой пробы (v) в количестве 1,0 см3. Далее определяли в ней концентрацию диоксида углерода с помощью газового хроматографа (М 3700-4).
Было проведено три измерения при этом площадь пика контрольной пробы на хроматографе трех измерений равнялась 19,58; 15,66; 23,50. Рассчитанная средняя площадь пика пробы на хроматографе (So) при этом равнялась 19,58. Молярная масса углекислого газа (Mr) составляет 44,01 г/моль. Объем аликвоты газовой пробы из флакона (v) составил 1 см3. Время экспозиции инкубации пробы в закрытом флаконе (t) составляла 24 часа. Удельная эмиссия диоксида углерода (мкмоль/см2/час, в контрольной пробе) рассчитывали по формуле: Vк=(19,58*0,002124*44,01*1)/(24*9)=0,0084
Также было проведено три измерения площади пика опытной пробы на хроматографе, которые равнялись 344,56; 172,28, 904,46. Рассчитанная средняя площадь пика пробы на хроматографе (Sк) при этом равнялась 473,77. Молярная масса углекислого газа (Mr) составляет 44,01 г/моль. Объем аликвоты газовой пробы из флакона (v) составил 1 см3. Время экспозиции инкубации пробы в закрытом флаконе (t) составляла 24 часа. Удельная эмиссия диоксида углерода (мкмоль/см2/час, в контрольной пробе) рассчитывали по формуле: Vo=(473,77*0,002124*44,01*1)/(24*9)=0,205
Затем рассчитывали отношение удельной эмиссии диоксида углерода в опытном образце к контрольному в % (об), определяя кратность превышения концентрации диоксида углерода (k) в опытном образце по формуле: k=0,205/0,0084=24,4.
Таким образом, деструкция у данного опытного полимерного материала отсутствует. А k - кратность превышения значения содержания диоксида углерода (в объемных процентах) опытного над контрольным составила 24,4, что является больше 10, но меньше 30 (см. рис. 3 и 4). Как на рисунке 3 (контрольный образец) так и на рисунке 4 (опытный образец), несмотря на слабую агрессивность микроорганизмов опытного образца, отсутствуют какие-либо факторы деградации полимерного материала. На поверхности мицелия визуально не обнаружено.
Было проведено исследование степени деструкции полимерного материала полиуретанового герметика путем оценки в баллах по ГОСТ 9.048-89. Агрессивность микроорганизма также отсутствовала и была равна 0. Соответственно отсутствовала и деградация опытного образца.
Пример 3
Для исследования использовали полимерный материал в виде силиконовой резины. Образцы материала очищали от внешних загрязнений, погружая на 1 минуту в этиловый спирт, и высушивали. Расход спирта составлял от 0,05 до 0,1 дм3/м2. Предварительно осуществляли подготовку суспензии спор Chaetomium globosum как описано выше. Готовили суспензию спор грибов в воде по ГОСТ 9.048. (п. 1.3).
Под ламинарным боксом при соблюдении условий стерильности пластины полимерного материала в количестве 3 контрольных и 3 опытных выкладывали на решетчатое дно эксикатора и обрабатывали из пулевизатора суспензией спор Chaetomium globosum, не допуская слияния капель на поверхности.
Образцы полимерных материалов с исследуемой площадью поверхности (s) равной 4,4 см2, незараженные (контрольный образец) и зараженные с поверхности суспензией спор Chaetomium globosum (опытный образец) размещали в эксикаторах, на дно которых налита вода, и инкубировали 96 суток при температуре 24°С и влажности 80%.
Затем эти образцы полимерных материалов контрольные и опытные помещали в пенициллиновые флаконы объемом 15 см3. Герметично закрывали и инкубировали 24 часа при температуре 28°С. Из пенициллиновых флаконов с контрольным и опытным образцами отобрали шприцом аликвоты газовой пробы (v) в количестве 0,5 см3. Далее определяли в ней концентрацию диоксида углерода с помощью газового хроматографа (М 3700-4).
Было проведено три измерения при этом площадь пика контрольной пробы на хроматографе трех измерений равнялась 17,01; 16,58; 14,0. Рассчитанная средняя площадь пика пробы на хроматографе (So) при этом равнялась 15,86. Молярная масса углекислого газа (Mr) составляет 44,01 г/моль. Объем аликвоты газовой пробы из флакона (v) составил 0,5 см3. Время экспозиции инкубации пробы в закрытом флаконе (t) составляла 24 часа. Удельная эмиссия диоксида углерода (мкмоль/см2/час, в контрольной пробе) рассчитывали по формуле: Vк=(15,86*0,002124*44,01*0,5)/(24*4,4)=0,007
Также было проведено три измерения площади пика опытной пробы на хроматографе, которые равнялись 681,22; 814,4, 630,38. Рассчитанная средняя площадь пика пробы на хроматографе (Sк) при этом равнялась 708,66. Молярная масса углекислого газа (Mr) составляет 44,01 г/моль. Объем аликвоты газовой пробы из флакона (v) составил 0,5 см3. Время экспозиции инкубации пробы в закрытом флаконе (t) составляла 24 часа. Удельная эмиссия диоксида углерода (мкмоль/см2/час, в контрольной пробе) рассчитывали по формуле: Vo=(708,66*0,002124*44,01 *0,5)/(24*4,4)=0,313.
Затем рассчитывали отношение удельной эмиссии диоксида углерода в опытном образце к контрольному в % (об), определяя кратность превышения концентрации диоксида углерода (k) в опытном образце по формуле: k=0,313/0,007=44,7.
В соответствии с данными к у данного опытного полимерного материала имеет средняя степень деструкции - химическая метаболитами микроорганизмов. То есть кратность превышения значения содержания диоксида углерода (в объемных процентах) в опытном варианте над контрольным составила 44,7, что является больше 30, но меньше 50 (см. рис.5 и 6). На рисунках 5 и 6 (опытный образец) имеется деградация полимерного материала, глубина которой составила 0,167 мм. Поверхность образца резины покрыта мицелием менее чем на 25%.
Было проведено исследование степени деструкции полимерного материала силиконовой резины путем оценки в баллах по ГОСТ 9.048-89. Средняя агрессивность микроорганизма была равна 3-4 баллам.
Пример 4
Для исследования использовали полимерный материал в виде твердой резины: смеси содержащей до 47 частей серы на 100 частей каучука. Образцы материала очищали от внешних загрязнений, погружая на 1 минуту в этиловый спирт, и высушивали. Расход спирта составлял от 0,05 до 0,1 дм3/м2. Предварительно осуществляли подготовку суспензии спор Chaetomium globosum как описано выше. Готовили суспензию спор грибов в воде по ГОСТ 9.048. (п. 1.3).
Под ламинарным боксом при соблюдении условий стерильности пластины полимерного материала в количестве 3 контрольных и 3 опытных выкладывали на дно чашки Петри и обрабатывали из пулверизатора суспензией спор Chaetomium globosum, не допуская слияния капель на поверхности.
Образцы полимерных материалов с исследуемой площадью поверхности (s) равной 4,4 см, незараженные (контрольный образец) и зараженные с поверхности суспензией спор Chaetomium globosum (опытный образец) размещали в чашках Петри, на дно которых налита вода, и инкубировали 56 суток при температуре 24°С и влажности 80%.
Затем эти образцы полимерных материалов контрольные и опытные помещали в пенициллиновые флаконы объемом 15 см3. Герметично закрывали и инкубировали 38 часов при температуре 28°С. Из пенициллиновых флаконов с контрольным и опытным образцами отобрали шприцом аликвоты газовой пробы (v) в количестве 0,5 см3. Далее определяли в ней концентрацию диоксида углерода с помощью газового хроматографа (М 3700-4).
Было проведено три измерения при этом площадь пика контрольной пробы на хроматографе трех измерений равнялась 37,01; 29,58; 38,3. Рассчитанная средняя площадь пика пробы на хроматографе (So) при этом равнялась 34,96. Молярная масса углекислого газа (Mr) составляет 44,01 г/моль. Объем аликвоты газовой пробы из флакона (v) составил 0,5 см3. Время экспозиции инкубации пробы в закрытом флаконе (t) составляла 38 часа. Удельная эмиссия диоксида углерода (мкмоль/см2/час, в контрольной пробе) рассчитывали по формуле: Vк=(34,96*0,002124*44,01*0,5)/(38*4,4)=0,0097
Также было проведено три измерения площади пика опытной пробы на хроматографе, которые равнялись 3280,09; 3506,24, 3400,1. Рассчитанная средняя площадь пика пробы на хроматографе (Sк) при этом равнялась 3395,5. Молярная масса углекислого газа (Mr) составляет 44,01 г/моль. Объем аликвоты газовой пробы из флакона (v) составил 0,5 см3. Время экспозиции инкубации пробы в закрытом флаконе (t) составляла 38 часов. Удельная эмиссия диоксида углерода (мкмоль/см2/час, в контрольной пробе) рассчитывали по формуле: Vo=(3395,5*0,002124*44,01*0,5)/(38*4,4)=0,94.
Затем рассчитывали отношение удельной эмиссии диоксида углерода в опытном образце к контрольному в % (об), определяя кратность превышения концентрации диоксида углерода (k) в опытном образце по формуле: k=0,94/0,0097=96,9.
В соответствии с данными к у этого опытного полимерного материала имеется сильная степень деструкции, с изменением его физико-химических и электрофизических свойств, поскольку кратность превышения значения содержания диоксида углерода (в объемных процентах) в опытном варианте над контрольным составила 96,9, что является больше 50 (см. рис. 7). По результатам оценки деградации данного опытного образца полимера с помощью томографа глубина деградации составила 0,325 мм. Образец резины более, чем на 25% покрыт мицелием.
Было также проведено исследование степени деструкции полимерного материала твердой резины путем оценки в баллах по ГОСТ 9.048-89. Агрессивность микроорганизмов была сильной и составила 5 баллов.
Были проведены исследования также образцов твердой резины как описано выше с другими микроорганизмами. Расчет производился по формулам: Vo или Vк=(So или Sк*0.002124*Mr*v)/(t*s) и k=Vo/Vк. Результаты представлены в таблице 1.
Высокая агрессивность Penicillium glabrum и Cladosporium cladosporioides прослеживается и при осмотре невооруженным глазом образцов резины. В опытных вариантах отчетливо виден мицелий грибов, покрывающий более 25% испытываемой поверхности и дающий обильное спороношение. Вид С.cladosporioides широко распространен на различных полимерных материалах, способен к разложению целлюлозы, пектина, кератина, а также доминирует на поверхности широкого круга полимерных материалов.
Для подтверждения заявленного способа и выявления особенностей роста и степени воздействия на резину этих видов микромицетов использовали сканирующую электронную микроскопию (см. рис. 8). Электронная микроскопия резины 203Б показана на рис. 8а - наличие мицелия Cladosporium cladosporioides на поверхности резины; на рис. 8 6, в - резина
после удаления С.cladosporioides на разном увеличении; на рис. 8 г - мицелий и спороношение Penicillium glabrum на поверхности резины; на рис. 8д, 8е - резина после удаления P.glabrum на разном увеличении; на рис. 8ж - чистая резина. В качестве контроля представлена микрофотография резины, которая не была засеяна микромицетами (рис. 8ж). При сравнении с контролем заметно, что на поверхности материала после удаления грибов образуются разнообразные трещины и даже каверны. Причем резина после контакта с С.cladosporioides характеризуется большей рыхлостью.
Таким образом, заявленный способ расширяет арсенал технических средств для оценки деструкции полимерных материалов микроорганизмами и обладает высокой точностью определения деструкции полимерного материала микроорганизмами и значительным сокращением трудозатрат и временем исследования.
Claims (1)
- Способ определения агрессивности микроорганизмов-биодеструкторов полимерных материалов, заключающийся в газохроматографическом определении метаболической активности микроорганизмов по эмиссии диоксида углерода, отличающийся тем, что образцы полимерных материалов с исследуемой площадью незараженные - контрольный образец - и зараженные с поверхности суспензией спор микроорганизмов - опытный образец - помещают в отдельные чашки Петри и/или на решетчатое дно эксикатора на расстоянии 1,5-2 см друг от друга, закрывают и инкубируют при оптимальных для развития микроорганизмов условиях: влажности 80-85% и температуре 24-28°С, один-два раза в неделю, сдвигая в сторону крышку для обеспечения циркуляции воздуха, затем по истечении 28-96 суток инкубации при свободном газообмене образцы переносят во флаконы объемом 15 см3, герметично закрывают и инкубируют 24-48 ч при температуре 24-28°С, затем отбирают шприцем аликвоты газовой пробы из флаконов с контрольными и опытными образцами в количестве 0,5-1,0 см3 и определяют в них хроматографически концентрацию диоксида углерода, рассчитывая удельную эмиссию диоксида углерода (мкмоль/см2/ч) в опытной Vo и контрольной Vк пробах по формуле Vo или Vк=(So или Sк*0.002124*Mr*v)/(t*s), где So или Sк - средняя площадь пика опытной и контрольной проб на хроматографе при умножении на коэффициент 0,002124 и Mr, показывающая концентрацию СО2 в мкмолях, Mr - молярная масса углекислого газа (равна 44,01 г/моль), v - объем аликвоты газовой пробы из флакона (см3), t - время экспозиции инкубации пробы в закрытом флаконе, ч, s - площадь поверхности опытного или контрольного образца, см2, затем рассчитывают отношение удельной эмиссии диоксида углерода в опытном образце к контрольному в % (об.), определяя кратность превышения концентрации диоксида углерода (к) в опытном образце по формуле к=Vo/Vк, и при значении k<10 определяют отсутствие агрессивности микроорганизма и отсутствие деструкции опытного образца, при значении 10<k<30 - его слабую агрессивность и отсутствие деструкции опытного образца, при значении 30<k<50 - среднюю агрессивность и химическую деструкцию опытного образца метаболитами микроорганизмов и при значении k>50 - его сильную агрессивность и химическую и механическую деструкции опытного образца полимерного материала с изменением его физико-химических и электрофизических свойств.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018102513A RU2671478C1 (ru) | 2018-01-22 | 2018-01-22 | Способ определения агрессивности микроорганизмов-биодеструкторов полимерных материалов |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018102513A RU2671478C1 (ru) | 2018-01-22 | 2018-01-22 | Способ определения агрессивности микроорганизмов-биодеструкторов полимерных материалов |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2671478C1 true RU2671478C1 (ru) | 2018-10-31 |
Family
ID=64103235
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2018102513A RU2671478C1 (ru) | 2018-01-22 | 2018-01-22 | Способ определения агрессивности микроорганизмов-биодеструкторов полимерных материалов |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2671478C1 (ru) |
-
2018
- 2018-01-22 RU RU2018102513A patent/RU2671478C1/ru active IP Right Revival
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| DALE R. "A rapid method for assessing the resistance of polyurethanes to biodeterioration".//International biodeterioration, 1990, N 26, р.355-367. * |
| ВАРЧЕНКО Е.А. "Особенности оценки биоповреждений и биокоррозии материалов в природных средах".//Научный журнал КубГАУ, 2014, N 104 (10), 18с. * |
| КРЯЖЕВ Д.В. и др. "Анализ методов оценки биостойкости промышленных материалов (критерии, подходы).//Вестник Нижегородского университета им.Н.И.Лобачевского, 2013, N 2, с.118-124. * |
| КРЯЖЕВ Д.В. и др. "Анализ методов оценки биостойкости промышленных материалов (критерии, подходы).//Вестник Нижегородского университета им.Н.И.Лобачевского, 2013, N 2, с.118-124. ВАРЧЕНКО Е.А. "Особенности оценки биоповреждений и биокоррозии материалов в природных средах".//Научный журнал КубГАУ, 2014, N 104 (10), 18с. DALE R. "A rapid method for assessing the resistance of polyurethanes to biodeterioration".//International biodeterioration, 1990, N 26, р.355-367. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Baig et al. | Multimodal chemical imaging of molecular messengers in emerging Pseudomonas aeruginosa bacterial communities | |
| Viitanen | Modelling the time factor in the development of mould fungi-The effect of critical humidity and temperature conditions on pine and spruce sapwood | |
| Zhang et al. | An optimized protocol of single spore isolation for fungi | |
| Zotti et al. | Mycological and FTIR analysis of biotic foxing on paper substrates | |
| Braun et al. | Adhesion of Cochliobolus heterostrophus conidia and germlings to leaves and artificial surfaces | |
| Grant-Downton | Botrytis-biology, detection and quantification | |
| Deans | Evaluation of antimicrobial activity of essential (volatile) oils | |
| Joblin et al. | Detection of moulds by volatile organic compounds: Application to heritage conservation | |
| Gadd | Toxicity screening using fungi and yeasts | |
| Pinzari et al. | Fungal bioleaching of mineral components in a twentieth-century illuminated parchment | |
| KR102533339B1 (ko) | 미생물을 분광학적으로 특성화하는 방법 | |
| CN109486870A (zh) | 一种木霉属真菌挥发物的收集和鉴定方法 | |
| RU2671478C1 (ru) | Способ определения агрессивности микроорганизмов-биодеструкторов полимерных материалов | |
| Warnock | Assay of fungal mycelium in grains of barley, including the use of the fluorescent antibody technique for individual fungal species | |
| Abrusci et al. | A viscometric study of the biodegradation of photographic gelatin by fungi isolated from cinematographic films | |
| Mian et al. | The onset of nitrogen fixation in young alder plants and its relation to differentiation in the nodular endophyte | |
| Mattick et al. | The differentiation of species of lactobacilli and streptococci by means of paper partition chromatography | |
| Ahmed et al. | Development of a new rapid method for mould testing in a climate chamber: preliminary tests | |
| Côrtes et al. | Potential for using crude extract of Sarocladium oryzae for suppression of rice blast | |
| Izumi et al. | High-resolution spatial and temporal analysis of phytoalexin production in oats | |
| Loskutov et al. | Diagnostics of early changes in the physicochemical properties of wood under the influence of fungal infections | |
| RU2776486C1 (ru) | Штамм микроскопического гриба Cladosporium halotolerans Zalar, de Hoog & Gunde-Cim. BKM F-4829D, являющийся активным агентом биоповреждений промышленных материалов | |
| Doménech-Carbó et al. | Microbial deterioration of Mowilith DMC 2, Mowilith DM5 and Conrayt poly (vinyl acetate) emulsions used as binding media of paintings by pyrolysis-silylation-gas chromatography–mass spectrometry | |
| RU2776487C1 (ru) | Штамм микроскопического гриба Penicillium sclerotiorum J.F.H. Beyma BKM F-4837D, являющийся активным агентом биоповреждений промышленных материалов | |
| Ali et al. | Deterioration of different paper types by fungi isolated from Cairo University´ s old library |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20200123 |
|
| NF4A | Reinstatement of patent |
Effective date: 20201103 |