RU2668173C1 - Nutritive medium for cultivation bacillus subtilis vkpm b-12079 - Google Patents

Nutritive medium for cultivation bacillus subtilis vkpm b-12079 Download PDF

Info

Publication number
RU2668173C1
RU2668173C1 RU2017144484A RU2017144484A RU2668173C1 RU 2668173 C1 RU2668173 C1 RU 2668173C1 RU 2017144484 A RU2017144484 A RU 2017144484A RU 2017144484 A RU2017144484 A RU 2017144484A RU 2668173 C1 RU2668173 C1 RU 2668173C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
bacillus subtilis
cultivation
vkpm
sodium chloride
subtilis vkpm
Prior art date
Application number
RU2017144484A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Никита Сергеевич Рыженков
Елена Сергеевна Яценко
Ирина Владимировна Микушина
Максим Вячеславович Ширманов
Иван Юрьевич Евдокимов
Original Assignee
федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Алтайский государственный университет"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Алтайский государственный университет" filed Critical федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Алтайский государственный университет"
Priority to RU2017144484A priority Critical patent/RU2668173C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2668173C1 publication Critical patent/RU2668173C1/en

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/07—Bacillus
    • C12R2001/125—Bacillus subtilis ; Hay bacillus; Grass bacillus

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

FIELD: biotechnology; microbiology.SUBSTANCE: nutrient medium for the cultivation of VKPM B-12079 Bacillus subtilis bacteria contains peptone enzymatic, yeast extract, sodium chloride, 96 % alcohol extract of arabica coffee and distilled water at a given ratio of components.EFFECT: invention allows to increase the yield of biomass of VKPM B-12079 Bacillus subtilis bacteria.1 cl, 1 tbl, 1 ex

Description

Изобретение относится к биотехнологии и микробиологии. Препарат на основе Bacillus subtilis ВКПМ В-12079 может быть использован при получении пробиотических средств для КРС и птицы, применяемых для лечения и профилактики заболеваний, связанных с нарушениями процессов пищеварения. Штамм Bacillus subtilis ВКПМ В-12079 составляет основу кормовой добавки «Энзимспорин».The invention relates to biotechnology and microbiology. The drug based on Bacillus subtilis VKPM B-12079 can be used to obtain probiotic agents for cattle and poultry, used for the treatment and prevention of diseases associated with digestive disorders. The strain of Bacillus subtilis VKPM B-12079 is the basis of the Enzimsporin feed additive.

Составы питательных сред для культивирования Bacillus subtilis хорошо изучены на лабораторном и промышленном уровнях.The composition of culture media for the cultivation of Bacillus subtilis has been well studied at the laboratory and industrial levels.

Известна питательная среда для стационарного культивирования Bacillus subtilis - мясопептонный бульон (МПБ). Мясопептонный бульон готовится из мясной воды, к которой добавляют 1% пептона и 0,5% натрия хлористого. Мясную воду получают путем проварки в 2-4-кратном объеме водопроводной воды мяса или фарша крупного рогатого скота или лошадей в течение 1 ч с последующей фильтрацией [1].Known nutrient medium for stationary cultivation of Bacillus subtilis - meat and peptone broth (MPB). The meat-peptone broth is prepared from meat water, to which 1% peptone and 0.5% sodium chloride are added. Meat water is obtained by boiling in 2-4 times the volume of tap water of meat or minced cattle or horses for 1 hour, followed by filtration [1].

Недостатком данной среды является дороговизна используемых компонентов и сложная технология приготовления. Применение данной среды для промышленного производства трудновыполнимо.The disadvantage of this environment is the high cost of the components used and the complex cooking technology. The use of this medium for industrial production is difficult.

Наиболее близким аналогом для культивирования Bacillus subtilis к заявляемой питательной среде является L-бульон. Его готовят следующим образом: состав (г/л): дрожжевой экстракт - 5, пептон ферментативный - 15, хлорид натрия - 5, дистиллированная вода - до 1 л (рН 6,8-7,0). Стерилизацию проводили при давлении 1,1 атм. в течение 40 минут [2].The closest analogue for the cultivation of Bacillus subtilis to the claimed nutrient medium is L-broth. It is prepared as follows: composition (g / l): yeast extract - 5, enzyme peptone - 15, sodium chloride - 5, distilled water - up to 1 l (pH 6.8-7.0). Sterilization was carried out at a pressure of 1.1 atm. within 40 minutes [2].

Недостатком данной среды является то, что при культивировании Bacillus subtilis ВКПМ В-12079 максимальное количество организмов не выше 5×109 КОЕ/мл.The disadvantage of this medium is that during the cultivation of Bacillus subtilis VKPM B-12079, the maximum number of organisms is not higher than 5 × 10 9 CFU / ml.

Цель состоит в разработке состава питательной среды, содержащего доступное и дешевое сырье, обеспечивающее количество Bacillus subtilis ВКПМ В-12079 в процессе культивирования выше 5×109 КОЕ/мл.The goal is to develop a composition of a nutrient medium containing affordable and cheap raw materials, providing an amount of Bacillus subtilis VKPM B-12079 during cultivation above 5 × 10 9 CFU / ml.

Технический результат, который может быть получен при осуществлении изобретения, состоит в повышении количества Bacillus subtilis ВКПМ В-12079 выше 5×109 КОЕ/мл.The technical result that can be obtained by carrying out the invention consists in increasing the amount of Bacillus subtilis VKPM B-12079 above 5 × 10 9 CFU / ml.

Описание изобретенияDescription of the invention

Для достижения указанного технического результата культивирования Bacillus subtilis ВКПМ В-12079 предложено использовать питательную среду, состоящую из дрожжевого экстракта, пептона ферментативного, хлорид натрия, 96%-го спиртового экстракта кофе арабика, дистиллированной воды, доведенной до объема 1 л (рН 6,8-7,0), при следующем соотношении компонентов (г/л): дрожжевой экстракт - 5, пептон - 15, хлорид натрия - 5, 96% спиртовой экстракт кофе арабика 2-40 мл/л, дистиллированная вода - до 1 л. (рН 6,8-7,0). Стерилизация при давлении 1,1 атм. в течение 40 минут.To achieve the technical result of the cultivation of Bacillus subtilis VKPM B-12079, it was proposed to use a nutrient medium consisting of a yeast extract, enzymatic peptone, sodium chloride, 96% alcoholic extract of Arabica coffee, distilled water, brought to a volume of 1 l (pH 6.8 -7.0), with the following ratio of components (g / l): yeast extract - 5, peptone - 15, sodium chloride - 5, 96% alcohol extract of Arabica coffee 2-40 ml / l, distilled water - up to 1 l. (pH 6.8-7.0). Sterilization at a pressure of 1.1 atm. for 40 minutes.

Приготовление экстракта включает в себя экстрагирование растительного сырья. В данной работе использовали аппарат Сокслета. На 1 г воздушно-сухого вещества использовали 15 мл растворителя. В качестве растворителей выбрали 96%-ый раствор этанола. В патрон из белой фильтровальной бумаги добавляли 10 г воздушно-сухого растительного сырья, после чего закрывали с обеих сторон и помещали в экстрактор Сокслета. В колбу добавляли 150 мл растворителя и начинали экстрагирование на водяной бане. Продолжительность экстрагирования - 3 часа, количество циклов - 10. На выходе получали спиртовой экстракт растительного сырья.The preparation of the extract includes the extraction of plant materials. In this work, we used the Soxhlet apparatus. For 1 g of air-dry substance used 15 ml of solvent. As solvents, a 96% ethanol solution was chosen. 10 g of air-dried plant material was added to a cartridge made of white filter paper, after which it was closed on both sides and placed in a Soxhlet extractor. 150 ml of solvent was added to the flask and extraction began in a water bath. The extraction time was 3 hours, the number of cycles was 10. The alcohol extract of the plant material was obtained at the output.

Опыт поясняется следующими примерами.The experience is illustrated by the following examples.

Пример 1.Example 1

Для приготовления жидкой питательной среды в колбу Эрленмейера (объем 50 мл) добавляли компоненты среды, при соотношении г/л: дрожжевой экстракт - 5, пептон - 15, хлорид натрия - 5, определенные объемы экстрактов кофе арабика (см. таблица1), дистиллированная вода - до 1 л. (рН 6,8-7,0). Закрывали ватно-марлевой пробкой и стерилизовали при давлении 1,1 атм. в течение 40 минут. Затем, в остывшую жидкую питательную среду (объем 50 мл) в стерильных условиях вносили навеску 0,5 г лиофилизированно высушенных спор Bacillus subtilis ВКПМ В-12079.To prepare a liquid nutrient medium, medium components were added to an Erlenmeyer flask (volume 50 ml), with a ratio of g / l: yeast extract - 5, peptone - 15, sodium chloride - 5, certain volumes of Arabica coffee extracts (see table 1), distilled water - up to 1 liter (pH 6.8-7.0). Closed with a cotton-gauze plug and sterilized at a pressure of 1.1 atm. for 40 minutes. Then, in a cooled liquid nutrient medium (volume of 50 ml) in sterile conditions weighed 0.5 g of lyophilized dried spores of Bacillus subtilis VKPM B-12079.

Культивирование производили в шейкер-инкубаторе "Innova 44" (New Brunswick, США) при вращении со скоростью 250 оборотов в минуту (эксцентриситет 5 см), температуре 37°С в течение 24 часов.Cultivation was carried out in an Innova 44 shaker incubator (New Brunswick, USA) at a rotation speed of 250 rpm (eccentricity 5 cm), at a temperature of 37 ° C for 24 hours.

Для определения количества использовали стандартный метод десятикратных разведений с пересевом на питательный агар, приготовленный при следующем соотношении компонентов (г/л): дрожжевой экстракт - 5, пептон - 15, хлорид натрия - 5, агар-агар - 18, дистиллированная вода - до 1 л. (рН 6,8-7,0). Стерилизацию проводили при давлении 1,1 атм. в течение 40 минут. Затем термостатировали при температуре 37°С в течение 24 часов. В качестве контрольной пробы использовали среду, без внесения экстрактов кофе арабика. Эксперименты проведены семь раз.To determine the amount, we used the standard method of ten-fold dilutions with reseeding on nutrient agar prepared in the following ratio of components (g / l): yeast extract - 5, peptone - 15, sodium chloride - 5, agar-agar - 18, distilled water - up to 1 l (pH 6.8-7.0). Sterilization was carried out at a pressure of 1.1 atm. for 40 minutes. Then it was thermostated at a temperature of 37 ° C for 24 hours. As a control sample, medium was used without adding Arabica coffee extracts. The experiments were carried out seven times.

Figure 00000001
Figure 00000001

Из приведенных данных видно (табл. 1), что максимальное увеличение количества бактерий достигается при добавлении 20 мл 96%-го спиртового экстракта кофе арабика в L-бульон.From the above data it is seen (Table 1) that the maximum increase in the number of bacteria is achieved by adding 20 ml of a 96% alcoholic extract of Arabica coffee to L-broth.

Таким образом, предлагаемая питательная среда для культивирования бактерии Bacillus subtilis ВКПМ -12079 содержит доступное сырье, а ее использование позволяет повысить количество микроорганизмов до 2×1013 КОЕ/мл.Thus, the proposed nutrient medium for the cultivation of the bacterium Bacillus subtilis VKPM -12079 contains available raw materials, and its use allows to increase the number of microorganisms to 2 × 10 13 CFU / ml.

ЛитератураLiterature

1. Частная медицинская микробиология с техникой микробиологических исследований. / Под ред. А.С. Лабинской, Л.П. Блинковой, А.С. Ещиной. - М.: Медицина, 2005. - С. 4801. Private medical microbiology with the technique of microbiological research. / Ed. A.S. Labinskaya, L.P. Blinkova, A.S. Eschinoy. - M.: Medicine, 2005 .-- S. 480

2. Бойко С.С, Яценко Е.С. Влияние ультразвука на Bacillus subtilis в процессе стационарного культивирования // Технологии и оборудование химической, биотехнологический и пищевой промышленности. Материалы X Всероссийской научно-практической конференции студентов, аспирантов и молодых ученых с международным участием. - Бийск, 2017. - С. 321-324.2. Boyko S.S., Yatsenko E.S. The influence of ultrasound on Bacillus subtilis during stationary cultivation // Technologies and equipment of the chemical, biotechnological and food industries. Materials of the X All-Russian scientific-practical conference of students, graduate students and young scientists with international participation. - Biysk, 2017 .-- S. 321-324.

Claims (4)

Питательная среда для культивирования Bacillus subtilis ВКПМ В-12079, состоящая из пептона, дрожжевого экстракта, хлорида натрия и дистиллированной воды, отличающаяся тем, что включает 96%-ный спиртовой экстракт кофе арабика при следующем соотношении компонентов, г/л:Culture medium for the cultivation of Bacillus subtilis VKPM B-12079, consisting of peptone, yeast extract, sodium chloride and distilled water, characterized in that it includes 96% alcoholic extract of Arabica coffee in the following ratio, g / l: ПептонPeptone 15fifteen Дрожжевой экстрактYeast extract 55 Хлорид натрияSodium chloride 55 96%-ный спиртовой экстракт96% alcohol extract
кофе арабикаcoffee arabica 20 мл20 ml
водопроводная водаtap water до 1 лup to 1 l
RU2017144484A 2017-12-18 2017-12-18 Nutritive medium for cultivation bacillus subtilis vkpm b-12079 RU2668173C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2017144484A RU2668173C1 (en) 2017-12-18 2017-12-18 Nutritive medium for cultivation bacillus subtilis vkpm b-12079

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2017144484A RU2668173C1 (en) 2017-12-18 2017-12-18 Nutritive medium for cultivation bacillus subtilis vkpm b-12079

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2668173C1 true RU2668173C1 (en) 2018-09-26

Family

ID=63669056

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2017144484A RU2668173C1 (en) 2017-12-18 2017-12-18 Nutritive medium for cultivation bacillus subtilis vkpm b-12079

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2668173C1 (en)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2722071C1 (en) * 2019-11-06 2020-05-26 федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Алтайский государственный университет" Nutrient medium for cultivation of bacillus subtilis vkpm b-12079

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2100029C1 (en) * 1995-01-13 1997-12-27 Полянцев Николай Иванович Medium for culturing bacterium-symbiont bacillus pulvifaciens or bacillus subtilis - a producer of probiotic

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2100029C1 (en) * 1995-01-13 1997-12-27 Полянцев Николай Иванович Medium for culturing bacterium-symbiont bacillus pulvifaciens or bacillus subtilis - a producer of probiotic

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
БОЙКО С.С., ЯЦЕНКО Е.С. "Влияние ультразвука на численность Bacillus subtilis в процессе стационарного культивирования". Технологии и оборудование химической, биотехнологической и пищевой промышленности. Материалы X Всероссийской научно-практической конференции студентов, аспирантов и молодых ученых с международным участием. - Бийск, 2017, с.322-325. *
СИДОРОВ М.А., СКОРОДУМОВ Д.И., ФЕДОТОВ В.Б. Определитель зоопатогенных микроорганизмов. Справочник. М.: Колос, 1995, с. 108-112. *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2722071C1 (en) * 2019-11-06 2020-05-26 федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Алтайский государственный университет" Nutrient medium for cultivation of bacillus subtilis vkpm b-12079

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Abdel-Daim et al. Antagonistic activity of Lactobacillus isolates against Salmonella typhi in vitro
CN107201322B (en) Bacillus subtilis and its application for degrading aflatoxin B 1
KR101533602B1 (en) Compositions for inducing an immune response of silkworm and silkworm having anitmicrobial induced an immune response by using the same
CN101363007A (en) Lactic acid bacerium capable of producing resistant protease bacteriocin and culture thereof
CN105176874A (en) Bacillus coagulans fm 603 and application thereof
CN102178128A (en) Application of bacillus subtilis ZDY1982 to degradation of mycotoxin deoxynivalenol
CN109097298A (en) A kind of method of enrichment culture method preparation phage bdellovibro preparation
CN110331103B (en) Streptomyces algicidal N1-32, microecological preparation thereof and preparation method thereof
RU2668173C1 (en) Nutritive medium for cultivation bacillus subtilis vkpm b-12079
Selvendran et al. Studies on novel bacteriocin like inhibitory substance (BLIS) from microalgal symbiotic Vibrio spp MMB2 and its activity against aquatic bacterial pathogens
CN114645001A (en) Lactobacillus paracasei and application thereof in preparation of product for regulating skin microecological system
JP6833418B2 (en) Lipopolysaccharide, lipopolysaccharide production method and lipopolysaccharide formulation
RU2668178C1 (en) Nutrient medium for cultivation of bacillus subtilis
Ebnetorab et al. Isolation, biochemical and molecular detection of Bacillus subtilis and Bacillus licheniformis from the digestive system of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) and its inhibitory effect on Aeromonas hydrophila.
CN112592851B (en) Lactobacillus acidophilus with broad-spectrum antagonistic effect on aquatic pathogenic bacteria and application thereof
RU2298032C2 (en) Bacillus subtilis 1719 BACTERIUM STRAIN AS PRODUCER OF ANTAGONISTICALLY ACTIVE BIOMASS IN RELATES TO PATHOGENIC MICROORGANISMS, AS WELL AS PROTEOLYTIC, AMYLOLYTIC, AND LIPOLYTIC ENZYMES
RU2475535C1 (en) Method to produce probiotic preparation lacto-amylovorin
Christy et al. Determination of the aerolysin gene in Aeromonas hydrophila using the polymerase chain reaction (pcr) technique
KR20180134128A (en) Sparassis crispa fermentation product having antioxidative and immunological activity, and preparing method thereof
CN110591962B (en) Proteus mirabilis BSFLG-CIP5 derived from stratiomyiid intestinal tract and application thereof
CN112795501A (en) Bacillus beiLeisi D2406 separated from stratiomyiid intestinal tract and application thereof
Kaynar et al. Antagonistic activities of Bacillus spp. strains isolated from the fishes
Sofandi et al. Growth characteristics and antagonistic potential of Bacillus cereus and Bacillus zhangzhouensis against pathogenic bacteria Aeromonas hydrophila in vitro
CN103405479A (en) Lactobacillus preparation for preventing and controlling late farmed shrimp ponds vibrio
CN114262666A (en) Screening method of leuconostoc mesenteroides and application of leuconostoc mesenteroides in preparation of aquatic bacteriostatic agent