RU2663456C1 - Method of diagnostics of preeclampsia on the gestation up to 34 week by evaluation of levels of ang (1-8) vasoconstrictor and ang (1-7) vasodilator - Google Patents
Method of diagnostics of preeclampsia on the gestation up to 34 week by evaluation of levels of ang (1-8) vasoconstrictor and ang (1-7) vasodilator Download PDFInfo
- Publication number
- RU2663456C1 RU2663456C1 RU2017130534A RU2017130534A RU2663456C1 RU 2663456 C1 RU2663456 C1 RU 2663456C1 RU 2017130534 A RU2017130534 A RU 2017130534A RU 2017130534 A RU2017130534 A RU 2017130534A RU 2663456 C1 RU2663456 C1 RU 2663456C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- ang
- preeclampsia
- angiotensin
- vasodilator
- vasoconstrictor
- Prior art date
Links
- 201000011461 pre-eclampsia Diseases 0.000 title claims abstract description 47
- PVHLMTREZMEJCG-GDTLVBQBSA-N Ile(5)-angiotensin II (1-7) Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C([O-])=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=[NH2+])NC(=O)[C@@H]([NH3+])CC([O-])=O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 PVHLMTREZMEJCG-GDTLVBQBSA-N 0.000 title claims abstract description 32
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 26
- 108010027713 angiotensin II (1-8) Proteins 0.000 title claims abstract description 20
- 229940124549 vasodilator Drugs 0.000 title claims abstract description 9
- 239000003071 vasodilator agent Substances 0.000 title claims abstract description 9
- 239000005526 vasoconstrictor agent Substances 0.000 title claims abstract description 7
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 title abstract description 17
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 title abstract description 4
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims abstract description 16
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims abstract description 13
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims abstract description 13
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 10
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 10
- 108010021281 angiotensin I (1-7) Proteins 0.000 claims abstract description 6
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 claims abstract description 6
- 102400000347 Angiotensin 1-7 Human genes 0.000 claims abstract description 4
- 102000005862 Angiotensin II Human genes 0.000 claims abstract description 4
- 101800000733 Angiotensin-2 Proteins 0.000 claims abstract description 4
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- CZGUSIXMZVURDU-JZXHSEFVSA-N Ile(5)-angiotensin II Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C([O-])=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=[NH2+])NC(=O)[C@@H]([NH3+])CC([O-])=O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 CZGUSIXMZVURDU-JZXHSEFVSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 229950006323 angiotensin ii Drugs 0.000 claims abstract description 4
- 108010064733 Angiotensins Proteins 0.000 claims abstract 4
- 102000015427 Angiotensins Human genes 0.000 claims abstract 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 230000002411 adverse Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 9
- 238000011161 development Methods 0.000 description 7
- 230000035606 childbirth Effects 0.000 description 6
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 5
- 239000002313 adhesive film Substances 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 201000005608 severe pre-eclampsia Diseases 0.000 description 5
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 5
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 5
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 description 4
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 description 4
- 229940024171 alpha-amylase Drugs 0.000 description 4
- 208000002296 eclampsia Diseases 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 238000007726 management method Methods 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 230000036266 weeks of gestation Effects 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 208000037849 arterial hypertension Diseases 0.000 description 2
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 230000035487 diastolic blood pressure Effects 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 2
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 2
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001156002 Anthonomus pomorum Species 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 208000001362 Fetal Growth Retardation Diseases 0.000 description 1
- 206010070531 Foetal growth restriction Diseases 0.000 description 1
- 206010070538 Gestational hypertension Diseases 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- 206010035039 Piloerection Diseases 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 1
- 230000001934 delay Effects 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 230000001973 epigenetic effect Effects 0.000 description 1
- 208000030941 fetal growth restriction Diseases 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 210000002311 liver mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 230000009984 peri-natal effect Effects 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 238000010837 poor prognosis Methods 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 210000005084 renal tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000036454 renin-angiotensin system Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 206010043554 thrombocytopenia Diseases 0.000 description 1
- 230000006442 vascular tone Effects 0.000 description 1
- 230000000304 vasodilatating effect Effects 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству и гинекологии, связано с разработкой способа диагностики преэклампсии путем определения уровня соотношения Ангиотензина II (ANG (1-8) и Ангиотензина 1-7 (ANG (1-7), в том числе, у пациенток со сложностью оценки тяжести преэклампсии и недостаточными клинико-лабораторными данными.The invention relates to medicine, namely to obstetrics and gynecology, is associated with the development of a method for the diagnosis of preeclampsia by determining the ratio of Angiotensin II (ANG (1-8) and Angiotensin 1-7 (ANG (1-7), including patients with difficulty assessing the severity of preeclampsia and inadequate clinical and laboratory data.
Развитие беременности нередко осложняется разнообразными патологическими процессами и заболеваниями как со стороны матери, так и со стороны плода. К одному из наиболее грозных можно отнести преэклампсию. Преэклампсия (ПЭ) - это мультисистемное патологическое состояние, развивающееся при беременности, клинические признаки которого манифестируют после 20-й недели гестации, частота распространения достигает 2-8% [Duley L. The global impact of pre-eclampsia and eclampsia // Semin Perinatol. 2009. Vol. 33(3). P. 130-137]. Повышение артериального давления является ведущим в генезе преэклампсии. Одной из наиболее значимых систем организма человека, отвечающей за повышение сосудистого тонуса и регуляцию артериального давление, является ренин-ангиотензиновая система. Известно, что ANG II (ANG (1-8)) является мощным вазоконстриктором, в то время как ANG (1-7) обладает вазодилатирующими свойствами (Brenner & Rector's the kidney Skorecki, Karl; Chertow, Glenn M; Marsden, Philip A; Taal, Maarten W; Yu, Alan S L. Tenth edition. Philadelphia, PA: Elsevier, 2016; Gironacci MM. Angiotensin-(1-7): beyond its central effects on blood pressure. Ther Adv Cardiovasc Dis. 2015; 9(4):209-16).The development of pregnancy is often complicated by a variety of pathological processes and diseases from both the mother and the fetus. One of the most formidable is preeclampsia. Preeclampsia (PE) is a multisystem pathological condition that develops during pregnancy, the clinical signs of which manifest after the 20th week of gestation, the spreading rate reaches 2-8% [Duley L. The global impact of pre-eclampsia and eclampsia // Semin Perinatol. 2009. Vol. 33 (3). P. 130-137]. An increase in blood pressure is leading in the genesis of preeclampsia. One of the most significant systems of the human body, responsible for increasing vascular tone and regulating blood pressure, is the renin-angiotensin system. It is known that ANG II (ANG (1-8)) is a powerful vasoconstrictor, while ANG (1-7) has vasodilating properties (Brenner & Rector's the kidney Skorecki, Karl; Chertow, Glenn M; Marsden, Philip A; Taal, Maarten W; Yu, Alan S L. Tenth edition. Philadelphia, PA: Elsevier, 2016; Gironacci MM. Angiotensin- (1-7): beyond its central effects on blood pressure. Ther Adv Cardiovasc Dis. 2015; 9 ( 4): 209-16).
Актуальность проблемы вызвана необходимостью поиска дополнительных критериев оценки степени тяжести преэклампсии для разработки адекватной тактики ведения беременных женщин и снижения частоты неблагоприятных исходов беременности при данном осложнении.The urgency of the problem is caused by the need to search for additional criteria for assessing the severity of preeclampsia in order to develop adequate tactics for pregnant women and reduce the frequency of adverse pregnancy outcomes with this complication.
К настоящему времени известен способ (RU 2478966 С1, Редьков О.В и др. 10.04.13) оценки степени тяжести преэклампсии, который включает анализ плазмы периферической венозной крови беременных, вынашивающих плод мужского пола, после 20 недель беременности определяют концентрацию плодовой ДНК и при концентрации плодового генетического материала от 1,8 до 2,6 нг/мл прогнозируют преэклампсию средней степени тяжести, при концентрации 2,6 нг/мл и выше - преэклампсию тяжелой степени. Хотя данный способ очень точен, он не применим, если женщина вынашивает девочку.To date, a method is known (RU 2478966 C1, Redkov O.V. et al. 10.04.13) for assessing the severity of preeclampsia, which includes an analysis of the plasma of peripheral venous blood of pregnant women bearing a male fetus, after 20 weeks of pregnancy, the concentration of fetal DNA is determined and concentrations of fetal genetic material from 1.8 to 2.6 ng / ml predict moderate preeclampsia, with a concentration of 2.6 ng / ml and above, severe preeclampsia. Although this method is very accurate, it is not applicable if a woman is carrying a girl.
Наряду с этим, описан метод диагностики преэклампсии у беременных в сроки 24-40 недель беременности (RU 2483311 Макаров О.В. и др. 27.05.13), при котором с помощью твердофазного иммуноферментного анализа сыворотки крови определяют содержание аутоантител класса IgG к двуспиральной ДНК, антигенам мембран тромбоцитов TrM-001-15 и TrM-015-12, антигенам почечной ткани KiM-05-300 и KiS-07-120 и антигену митохондрий печени НММР. Далее для каждого вида исследованных антител определяют соотношение аутоантител в опытной сыворотке к контрольной сыворотке. Однако недостатком данного метода является его трудоемкость и необходимость определения большого спектра антител.Along with this, a method for the diagnosis of preeclampsia in pregnant women within the period of 24-40 weeks of pregnancy is described (RU 2483311 Makarov O.V. et al. 27.05.13), in which the content of IgG class autoantibodies to double-stranded DNA is determined using enzyme-linked immunosorbent analysis , platelet membrane antigens TrM-001-15 and TrM-015-12, renal tissue antigens KiM-05-300 and KiS-07-120 and liver mitochondria antigen NMMP. Next, for each type of antibody tested, the ratio of autoantibodies in the test serum to the control serum is determined. However, the disadvantage of this method is its complexity and the need to determine a large spectrum of antibodies.
Также известен метод оценки тяжести преэклампсии с помощью изучения содержания тромбоцитов в венозной крови, когда по уровню тромбоцитопении судят о степени тяжести преэклампсии (Преэклампсия: руководство / Под ред. акад. РАМН Г.Т. Сухих, проф. Л.Е. Мурашко. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010. С. 226-228). Недостатком данного способа является низкая степень его достоверности из-за наличия многочисленных механизмов тромбоцитопении (включая наличие аутоиммунного механизма, связанного с диссеминированным внутрисосудистым свертыванием крови, анемией, изменением объема циркулирующей крови и другими), в том числе и не характерных для беременности, а также отсутствием четкой зависимости между степенью тяжести преэклампсии и выраженностью тромбоцитопении.Also known is a method for assessing the severity of preeclampsia by studying the content of platelets in venous blood, when the severity of preeclampsia is judged by the level of thrombocytopenia (Preeclampsia: guidance / Edited by academician of the Russian Academy of Medical Sciences G.T. Sukhikh, Prof. L.E. Murashko. - M .: GEOTAR-Media, 2010.S. 226-228). The disadvantage of this method is the low degree of its reliability due to the presence of numerous mechanisms of thrombocytopenia (including the presence of an autoimmune mechanism associated with disseminated intravascular coagulation, anemia, changes in the volume of circulating blood and others), including those not typical for pregnancy, as well as the absence a clear relationship between the severity of preeclampsia and the severity of thrombocytopenia.
Имеется способ диагностики преэклампсии путем определения уровня альфа-амилазы в сыворотке крови количественным методом (RU 2426129 С1, Гребенкин Б.Е. и др., 10.08.2011). При уровне альфа-амилазы 28-100 Ед./л диагностируют умеренную преэклампсию. При уровне альфа-амилазы >100 Ед./л - преэклампсию тяжелой степени. К недостаткам способа следует отнести возможность получения высоких значений альфа-амилазы и, следовательно, ложноположительного результата при наличии заболеваний поджелудочной железы. Кроме того, отсутствуют данные о точности, специфичности и чувствительности данного способа.There is a method for diagnosing preeclampsia by determining the level of alpha-amylase in the blood serum by a quantitative method (RU 2426129 C1, Grebenkin B.E. et al., 10.08.2011). At an alpha-amylase level of 28-100 U / L, moderate preeclampsia is diagnosed. At an alpha-amylase level> 100 Units / L - severe preeclampsia. The disadvantages of the method include the possibility of obtaining high values of alpha-amylase and, therefore, a false-positive result in the presence of diseases of the pancreas. In addition, there is no data on the accuracy, specificity and sensitivity of this method.
Зарегистрирован также способ диагностики преэклампсии (RU 2408259 С2, Абрамова и др., 10.01.2011) по сердечно-сосудистым параметрам. Если при увеличении срока беременности скорость распространения пульсовой волны снижается, диагностируют физиологическое развитие беременности, а при отсутствии снижения или при нарастании скорости прогнозируют развитие преэклампсии. Недостатком указанного способа является необходимость наблюдения пациенток в течение длительного периода. В случаях, когда существует необходимость быстрой и достоверной верификации заболевания, данный способ не может быть применим.A method for diagnosing preeclampsia (RU 2408259 C2, Abramova et al., January 10, 2011) by cardiovascular parameters has also been registered. If the propagation rate of the pulse wave decreases with an increase in the duration of pregnancy, the physiological development of pregnancy is diagnosed, and in the absence of a decrease or with an increase in the rate, the development of preeclampsia is predicted. The disadvantage of this method is the need to monitor patients for a long period. In cases where there is a need for quick and reliable verification of the disease, this method may not be applicable.
Существует способ диагностики преэклампсии на основании мониторинга артериального давления и частоты сердечных сокращений в течение суток (RU 2002105984 A, Гурьева В.М. и др., 20.11.2003). По результатам исследования, каждое из измеренных диастолических давлений соотносят с максимально допустимым для данной частоты сердечных сокращений (ЧСС), вычисленным по формуле АД диаст=[-0,569+17,7*log (чcс)]. В случае, когда превышение максимально допустимого диастолического давления наблюдается более чем в 55% измерений днем и/или более чем в 70% ночью, диагностируют преэклампсию тяжелой степени. Недостатки способа: способ трудоемок, длительность диагностического процесса отсрочивает правильную постановку диагноза, отсутствует возможность диагностики преэклампсии у женщин с хронической артериальной гипертензией ввиду возможности получения ложноположительного результата.There is a method for diagnosing preeclampsia based on monitoring of blood pressure and heart rate during the day (RU 2002105984 A, Guryeva V.M. et al., 20.11.2003). According to the results of the study, each of the measured diastolic pressures is correlated with the maximum allowable for a given heart rate (HR), calculated by the formula HELL diast = [- 0.569 + 17.7 * log (hcc)]. In the case when the excess of the maximum allowable diastolic pressure is observed in more than 55% of measurements during the day and / or more than 70% at night, severe preeclampsia is diagnosed. The disadvantages of the method: the method is time-consuming, the duration of the diagnostic process delays the correct diagnosis, there is no possibility of diagnosing preeclampsia in women with chronic arterial hypertension due to the possibility of obtaining a false-positive result.
Известно, что преэклампсия с клиническими проявлениями до 34 недель относится к ранней преэклампсии, связана с задержкой развития плода, имеет наиболее тяжелое клиническое течение и неблагоприятный прогноз (Magee L.A., Pels A., Helewa М., Rey Е., von Dadelszen P. Diagnosis, evaluation and management of the hypertensive disorders of pregnancy: execultive summary // J. Obstet. Gynaecol. Can. 2014. Vol. 36. N5. P. 416-441; Гипертензивные расстройства во время беременности, родах и послеродовом периоде. Преэклампсия. Эклампсия. Клинические рекомендации (протокол лечения) 2016). Однако определение точного диагноза и, в зависимости от этого, выбор акушерской тактики является основной задачей врача.It is known that preeclampsia with clinical manifestations up to 34 weeks refers to early preeclampsia, is associated with fetal growth retardation, has the most severe clinical course and poor prognosis (Magee LA, Pels A., Helewa M., Rey E., von Dadelszen P. Diagnosis , evaluation and management of the hypertensive disorders of pregnancy: executive summary // J. Obstet. Gynaecol. Can. 2014. Vol. 36. N5. P. 416-441; Hypertensive disorders during pregnancy, childbirth and the puerperium. Preeclampsia. Eclampsia: Clinical recommendations (treatment protocol) 2016). However, determining the exact diagnosis and, depending on this, the choice of obstetric tactics is the main task of the doctor.
Таким образом, несовершенство объективных способов диагностики преэклампсии приводит к недооценке истинной степени тяжести, более поздней диагностике и, как следствие, неэффективности лечебных мероприятий.Thus, the imperfection of objective methods for the diagnosis of preeclampsia leads to an underestimation of the true severity, later diagnosis and, as a consequence, the ineffectiveness of therapeutic measures.
Диагностика преэклампсии на ранних стадиях имеет наиболее важное значение для определения тактики ведения беременности и сроков родоразрешения.The diagnosis of preeclampsia in the early stages is most important for determining pregnancy management tactics and delivery times.
Целью изобретения является повышение объективности диагностики преэклампсии на сроках до 34 недель, улучшение перинатальных исходов.The aim of the invention is to increase the objectivity of the diagnosis of preeclampsia for up to 34 weeks, to improve perinatal outcomes.
Способ осуществляют следующим образомThe method is as follows
Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для диагностики преэклампсии на сроках до 34 недель гестации. Для этого посредством иммуноферментного анализа (ИФА) на образцах плазмы крови определяют концентрацию вазодилататора ANG (1-7) и вазоконстриктора ANG (1-8), а также соотношения ANG (1-7)/ANG (1-8).The invention relates to medicine, namely to obstetrics and gynecology, and can be used to diagnose preeclampsia for periods up to 34 weeks of gestation. For this, by means of an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) on blood plasma samples, the concentration of the vasodilator ANG (1-7) and the vasoconstrictor ANG (1-8), as well as the ratio ANG (1-7) / ANG (1-8), are determined.
Определение маркеров проводят методом количественного иммуноферментного анализа с использованием наборов Angiotensin 1-7 (Ang1-7), Angiotensin II (Ang1-8) на образцах 0,2 мл плазмы крови.Markers are determined by enzyme-linked immunosorbent assay using Angiotensin 1-7 (Ang1-7), Angiotensin II (Ang1-8) kits on 0.2 ml blood plasma samples.
Плазма крови (0,2 мл) получают из цельной крови, взятой из локтевой вены, объемом 3 мл, в пробирку с ЭДТА, центрифугируют на оборотах 3000 об/мин в течение 20 мин, при наличии концентрации вазодилататора ANG (1-7) менее 500 пг/мл, и при соотношении ANG (1-7)/ANG (1-8) менее 25 диагностируют преэклампсию.Blood plasma (0.2 ml) is obtained from whole blood taken from the ulnar vein, with a volume of 3 ml, into a tube with EDTA, centrifuged at 3,000 rpm for 20 min, in the presence of an ANG vasodilator concentration of (1-7) less 500 pg / ml, and with an ANG (1-7) / ANG (1-8) ratio of less than 25, preeclampsia is diagnosed.
Методика подготовки плазмы крови:The method of preparation of blood plasma:
У пациентки берут кровь из вены в пробирку с ЭДТА, объемом 3 мл. Образцы подвергают центрифугированию на 3000 оборотах в течение 20 мин. На полученных образцах плазмы можно определять концентрацию ANG (1-8) и ANG (1-7).The patient takes blood from a vein into a 3 ml EDTA tube. Samples are centrifuged at 3,000 rpm for 20 minutes. On the obtained plasma samples, the concentrations of ANG (1-8) and ANG (1-7) can be determined.
Протокол определения ANG (1-8)ANG Definition Protocol (1-8)
1. Перед использованием все реагенты должны достичь комнатной температуры (18-25°С).1. Before use, all reagents must reach room temperature (18-25 ° C).
2. Все реагенты, стандарты, контроль, образцы подготавливаем в соответствии с инструкцией производителя используемого раствора.2. We prepare all reagents, standards, control, samples in accordance with the manufacturer's instructions for the solution used.
3. Вносим в соответствующие лунки по 100 мкл рабочего раствора антител к ANG (1-8). Закрываем лунки микропланшета адгезивной пленкой и инкубируем 1,5 часа при комнатной температуре, и аккуратном перемешивании (1-2 цикла/сек).3. Pipette 100 μl of a working solution of antibodies to ANG into the corresponding wells (1-8). We cover the wells of the microplate with an adhesive film and incubate for 1.5 hours at room temperature, and gently stir (1-2 cycles / sec).
4. Удаляем раствор из лунок и промываем все лунки микропланшета 4 раза, буфером для промывок, используя по 300 мкл буфера на лунку на цикл 4. Remove the solution from the wells and wash all the wells of the microplate 4 times with washing buffer using 300 μl of buffer per well per cycle
промывки. Используем многоканальную пипетку. Для получения точных результатов полностью удаляем жидкость из лунок микропланшета между циклами промывки. После последнего цикла промывки удаляем остатки промывающего буфера декантированием. flushing. We use a multichannel pipette. To obtain accurate results, completely remove the liquid from the microplate wells between the washing cycles. After the last wash cycle, remove the remaining wash buffer by decantation.
5. Вносим в соответствующие лунки по 100 мкл стандартов, положительного контроля и образцов, а в первую лунку-бланк только рабочий разбавитель. Закрываем лунки микропланшета адгезивной пленкой и инкубируем 2.5 часа при комнатной температуре, аккуратном перемешивании (1-2 цикла/сек).5. Pipette 100 μl of standards, positive control and samples into the appropriate wells, and only the working diluent in the first well blank. We cover the wells of the microplate with an adhesive film and incubate for 2.5 hours at room temperature, gently stirring (1-2 cycles / sec).
6. Удаляем раствор из лунок и промываем все лунки микропланшета 4 раза, как это указано в пункте 3.6. Remove the solution from the wells and wash all the wells of the microplate 4 times, as described in paragraph 3.
7. Вносим во все лунки по 100 мкл приготовленного раствора конъюгата HRP-стрептавидина. Инкубируем ровно 45 минут при комнатной температуре, аккуратном перемешивании (1-2 цикла/сек).7. Pipette 100 μl of the prepared HRP-streptavidin conjugate solution into all wells. Incubate for exactly 45 minutes at room temperature, gently stirring (1-2 cycles / sec).
8. Удаляем раствор из лунок и промываем все лунки микропланшета 4 раза, как это показано в пункте 3.8. Remove the solution from the wells and wash all the wells of the microplate 4 times, as shown in paragraph 3.
9. Вносим по 100 мкл раствора субстрата ТМВ во все лунки. Инкубируем 30 минут при комнатной температуре в темноте и при аккуратном перемешивании (1-2 цикла/сек).9. Dispense 100 μl of TMB substrate solution into all wells. Incubate for 30 minutes at room temperature in the dark and with gentle stirring (1-2 cycles / sec).
10. Вносим по 50 мкл стоп-раствора во все лунки, немедленно считаем абсорбцию (ОП) при длине волны 450 нм.10. Pipette 50 μl of stop solution into all wells, immediately calculate absorbance (OD) at a wavelength of 450 nm.
Протокол определения ANG (1-7)ANG Definition Protocol (1-7)
1. Все реагенты, стандарты, образцы подготавливаем в соответствии с инструкцией производителя используемого раствора. Все стандарты и образцы анализируем в дублях.1. We prepare all reagents, standards, samples in accordance with the manufacturer's instructions for the solution used. We analyze all standards and samples in duplicates.
2. Вносим в соответствующие лунки микропланшета по 50 мкл стандартов, образцов, а в первую лунку-бланк рабочий разбавитель. После этого сразу же добавляем по 50 мкл рабочего раствора антител к ANG (1-7). Осторожно встряхиваем микропланшет, покрываем адгезивной пленкой. Инкубируем 1 час при 37°С.2. Pipette 50 μl of standards, samples into the appropriate wells of the microplate, and the working diluent into the first well blank. After that, immediately add 50 μl of a working solution of antibodies to ANG (1-7). Gently shake the microplate, cover with an adhesive film. Incubate 1 hour at 37 ° C.
3. Удаляем раствор и промываем все лунки микропланшета 3 раза буфером для промывок, используя по 350 мкл на лунку за один цикл промывки (время экспозиции между внесением и удалением промывающего буфера 1-2 мин.). Используем многоканальную пипетку. Для получения точных результатов полностью удаляем жидкость из лунок микропланшета между циклами промывки. После последнего цикла удаляем остатки промывающего буфера декантированием.3. We remove the solution and wash all wells of the microplate 3 times with wash buffer using 350 μl per well for one wash cycle (exposure time between application and removal of wash buffer is 1-2 minutes). We use a multichannel pipette. To obtain accurate results, completely remove the liquid from the microplate wells between the washing cycles. After the last cycle, remove the remaining wash buffer by decantation.
4. Вносим во все лунки по 100 мкл раствора коньюгата HRP-стрептавидина. Закрываем лунки микропланшета адгезивной пленкой и инкубируем 30 минут при 37°С.4. Pipette 100 μl HRP-streptavidin conjugate solution into all wells. We cover the wells of the microplate with an adhesive film and incubate for 30 minutes at 37 ° C.
5. Удаляем раствор из лунок и промываем все лунки микропланшета 5 раз, как указано в пункте 3.5. Remove the solution from the wells and rinse all the wells of the microplate 5 times, as described in paragraph 3.
6. Вносим по 90 мкл субстрат-раствора с тетраметилбензидином (ТМВ) микропланшета адгезивной пленкой и инкубируем 20-30 минут при 37°C, в защищенном от света месте.6. Pipette 90 μl of the substrate solution with tetramethylbenzidine (TMB) of the microplate with an adhesive film and incubate for 20-30 minutes at 37 ° C in a dark place.
7. Вносим по 50 мкл стоп-раствора во все лунки, немедленно считаем абсорбцию (ОП) при длине волны 450 нм.7. We add 50 μl of stop solution to all wells, immediately consider absorption (OD) at a wavelength of 450 nm.
Примеры.Examples.
Пример 1. Пациентка К., 29 лет, поступила на 32 неделе гестации с повышением давления до 150/100 мм рт.ст. У пациентки была взята кровь из вены, центрифугирована, на полученных образцах плазмы крови методом ИФА были определены уровни ANG (1-8) и ANG (1-7), которые составили 20,18 пг/мл и 406,6 пг/мл, соответственно; соотношение ANG (1-7) и ANG (1-8) было равно 20, что свидетельствовало о преэклампсии.Example 1. Patient K., 29 years old, was admitted at 32 weeks of gestation with an increase in pressure to 150/100 mm Hg. Blood was taken from a patient from a vein, centrifuged, the levels of ANG (1-8) and ANG (1-7) were determined on the obtained plasma samples by ELISA, which amounted to 20.18 pg / ml and 406.6 pg / ml, respectively; the ratio of ANG (1-7) and ANG (1-8) was 20, indicating preeclampsia.
При последующем получении данных клинико-лабораторного исследования, наблюдения и анализа истории родов установлено наличие признаков повышения артериального давления выше 160/100 мм рт.ст., и повышенного содержания белка в суточной моче выше 0,9 г/сут, на основании чего сделано клиническое заключение о развитии у беременной тяжелой преэклампсии.Subsequent obtaining of clinical and laboratory research data, observation and analysis of the history of childbirth revealed the presence of signs of an increase in blood pressure above 160/100 mm Hg, and an increased protein content in daily urine above 0.9 g / day, based on which clinical conclusion on the development in a pregnant woman of severe preeclampsia.
Пример 2. Пациентка С., 31 года, на 31 неделе гестации, поступила в НЦАГиП им В.Н. Кулакова с артериальным давлением 150/100 мм рт.ст., белком в моче 0,9 г в сутки. В связи с нарастанием тяжести преэклампсии перед оперативным родоразрешением, взята кровь, образцы плазмы подвергнуты иммуноферментному анализу, согласно описанной методике.Example 2. Patient S., 31 years old, at the 31st week of gestation, was admitted to the NTSAGiP named after V.N. Kulakova with blood pressure of 150/100 mm Hg, protein in the urine of 0.9 g per day. In connection with the increasing severity of preeclampsia before surgical delivery, blood was taken, plasma samples were subjected to enzyme immunoassay according to the described procedure.
У пациентки была взята кровь из вены, центрифугирована, на полученных образцах плазмы крови методом ИФА был определен уровень ANG (1-8), который составил 25,078 пг/мл, уровень ANG (1-7) составил 404,88 пг/мл, соотношение ANG (1-7) и ANG (1-8) было равно 16, что свидетельствовало о преэклампсии.Blood was taken from a patient from a vein, centrifuged, the level of ANG (1-8) was determined by ELISA on the obtained blood plasma samples, which amounted to 25.078 pg / ml, the level of ANG (1-7) was 404.88 pg / ml, the ratio ANG (1-7) and ANG (1-8) was 16, indicating preeclampsia.
При последующем получении данных клинико-лабораторного исследований и анализа истории родов установлено наличие признаков повышения артериального давления выше 160/100 мм рт.ст., и повышенного содержания белка в суточной моче выше 1 г/сут, на основании чего сделано клиническое заключение о развитии у беременной тяжелой преэклампсии.Subsequent obtaining of clinical and laboratory research data and an analysis of the history of childbirth revealed the presence of signs of an increase in blood pressure above 160/100 mm Hg, and an increased protein content in daily urine above 1 g / day, based on which a clinical conclusion was made on pregnant with severe preeclampsia.
Пример 3. Пациентка С. 38 лет на сроке 33 недель поступила с появлением эпизодов повышенного артериального давления и подозрением на развитие преэклампсии поступила для наблюдения и последующего родоразрешения. Перед родоразрешением, была взята кровь, образцы плазмы подвергнуты иммуноферментному анализу, согласно описанной методике.Example 3. Patient S., 38 years old, for a period of 33 weeks was admitted with the appearance of episodes of high blood pressure and suspected development of preeclampsia was admitted for observation and subsequent delivery. Before delivery, blood was taken, plasma samples were subjected to enzyme-linked immunosorbent assay, according to the described method.
Уровень ANG (1-8) и ANG (1-7), составили 15,3 пг/мл и 520 пг/мл, соотношение ANG (1-7) и ANG (1-8) было равно 34, что свидетельствовало об отсутствии преэклампсии. При последующем получении данных клинико-лабораторного исследований и анализа истории родов установлено наличие признаков повышения артериального давления до 145/90 мм. рт.ст., и наличия содержания белка в суточной моче до 0,1 г/сут. При анализе результатов клинического течения и лабораторных показателей белка в моче в истории родов сделано заключение о наличии гестационной артериальной гипертензии, но отсутствии у беременной преэклампсии.The levels of ANG (1-8) and ANG (1-7) were 15.3 pg / ml and 520 pg / ml, the ratio of ANG (1-7) and ANG (1-8) was 34, indicating the absence preeclampsia. Upon subsequent receipt of clinical and laboratory research data and analysis of the history of childbirth, the presence of signs of an increase in blood pressure to 145/90 mm was established. Hg, and the presence of protein content in daily urine up to 0.1 g / day. When analyzing the results of the clinical course and laboratory parameters of protein in the urine in the history of childbirth, a conclusion was made about the presence of gestational hypertension, but the absence of preeclampsia in the pregnant woman.
Предлагаемый способ позволяет улучшить точность диагностики преэклампсии, а, следовательно, и лечения данного контингента больных.The proposed method allows to improve the accuracy of diagnosis of preeclampsia, and, consequently, the treatment of this contingent of patients.
Диагностические возможности предлагаемого способа были проверены при сопоставлении результатов иммуноферментного анализа и данных клинико-лабораторных обследований 59 беременных, находившихся на лечении в Научном центре акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова. У 12 из них была диагностирована преэклампсия на сроках до 34 недели гестации на сроках, у 17 - гестационная артериальная гипертензия, но не преэклампсия, у 30 - нормальное течение беременности.The diagnostic capabilities of the proposed method were tested by comparing the results of an enzyme-linked immunosorbent assay and data from clinical and laboratory examinations of 59 pregnant women who were treated at the Academician V.I. Scientific Center for Obstetrics, Gynecology and Perinatology. Kulakova. 12 of them were diagnosed with pre-eclampsia for periods up to 34 weeks of gestation on the terms, 17 had gestational arterial hypertension, but not preeclampsia, and 30 had a normal pregnancy.
Работа выполнена в рамках Государственного задания по теме «Изучение диагностической и прогностической роли молекулярно-генетических, иммунологических, эпигенетических факторов в развитии преэклампсии» №государственной регистрации 116-08-22-1-000-2.This work was carried out as part of the State Assignment on the topic “Studying the diagnostic and prognostic role of molecular genetic, immunological, epigenetic factors in the development of preeclampsia” No. state registration 116-08-22-1-000-2.
Источники информацииInformation sources
1. Duley L. The global impact of pre-eclampsia and eclampsia // Semin Perinatol. 2009. Vol 33 (3). P. 130-137.1. Duley L. The global impact of pre-eclampsia and eclampsia // Semin Perinatol. 2009. Vol 33 (3). P. 130-137.
2. Преэклампсия: руководство / Под ред. акад. РАМН Г.Т. Сухих, проф. Л.Е. Мурашко. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010. С. 226-228.2. Preeclampsia: a guide / Ed. Acad. RAMS G.T. Dry, prof. L.E. Goosebumps. - M.: GEOTAR-Media, 2010.S. 226-228.
3. Brenner & Rector's the kidney Skorecki, Karl; Chertow, Glenn M; Marsden, Philip A; Taal, Maarten W; Yu, Alan S L. Tenth edition. Philadelphia, PA: Elsevier, 2016.3. Brenner & Rector's the kidney Skorecki, Karl; Chertow, Glenn M; Marsden, Philip A; Taal, Maarten W; Yu, Alan S L. Tenth edition. Philadelphia, PA: Elsevier, 2016.
4. Gironacci MM. Angiotensin-(1-7): beyond its central effects on blood pressure. Ther Adv Cardiovasc Dis. 2015; 9(4): 209-16.4. Gironacci MM. Angiotensin- (1-7): beyond its central effects on blood pressure. Ther Adv Cardiovasc Dis. 2015; 9 (4): 209-16.
5. Magee L.A., Pels A., Helewa M., Rey E., von Dadelszen P. Diagnosis, evaluation and management of the hypertensive disorders of pregnancy: execultive summary // J. Obstet. Gynaecol. Can. 2014. Vol. 36. N5. P. 416-441.5. Magee L.A., Pels A., Helewa M., Rey E., von Dadelszen P. Diagnosis, evaluation and management of the hypertensive disorders of pregnancy: executive summary // J. Obstet. Gynaecol. Can. 2014. Vol. 36. N5. P. 416-441.
6. Гипертензивные расстройства во время беременности, родах и послеродовом периоде. Преэклампсия. Эклампсия. Клинические рекомендации (протокол лечения) 2016.6. Hypertensive disorders during pregnancy, childbirth and the postpartum period. Preeclampsia Eclampsia. Clinical recommendations (treatment protocol) 2016.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017130534A RU2663456C1 (en) | 2017-08-29 | 2017-08-29 | Method of diagnostics of preeclampsia on the gestation up to 34 week by evaluation of levels of ang (1-8) vasoconstrictor and ang (1-7) vasodilator |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017130534A RU2663456C1 (en) | 2017-08-29 | 2017-08-29 | Method of diagnostics of preeclampsia on the gestation up to 34 week by evaluation of levels of ang (1-8) vasoconstrictor and ang (1-7) vasodilator |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2663456C1 true RU2663456C1 (en) | 2018-08-06 |
Family
ID=63142748
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017130534A RU2663456C1 (en) | 2017-08-29 | 2017-08-29 | Method of diagnostics of preeclampsia on the gestation up to 34 week by evaluation of levels of ang (1-8) vasoconstrictor and ang (1-7) vasodilator |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2663456C1 (en) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20080108572A1 (en) * | 2004-04-30 | 2008-05-08 | Bas Medical, Inc. | Methods and compositions for control of fetal growth via modulation of relaxin |
| RU2408259C2 (en) * | 2008-01-24 | 2011-01-10 | Римма Михайловна Абрамова | Method of preclinical diagnostics of preeclampsia |
| RU2426129C1 (en) * | 2010-05-21 | 2011-08-10 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Пермская государственная медицинская академия имени академика Е.А. Вагнера Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" | Diagnostic technique for severe gestosis |
-
2017
- 2017-08-29 RU RU2017130534A patent/RU2663456C1/en active IP Right Revival
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20080108572A1 (en) * | 2004-04-30 | 2008-05-08 | Bas Medical, Inc. | Methods and compositions for control of fetal growth via modulation of relaxin |
| RU2408259C2 (en) * | 2008-01-24 | 2011-01-10 | Римма Михайловна Абрамова | Method of preclinical diagnostics of preeclampsia |
| RU2426129C1 (en) * | 2010-05-21 | 2011-08-10 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Пермская государственная медицинская академия имени академика Е.А. Вагнера Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" | Diagnostic technique for severe gestosis |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| NACCASHA N et al. Phenotypic and metabolic characteristics of monocytes and granulocytes in normal pregnancy and maternal infection// Am J Obstet Gynecol.2001 Nov;185(5):1118-23 PMID:11717644. * |
| ВЕТРОВ В.В. и др. Неосложненная преэклампсия. - СПб: "Информнавигатор", 2012, С.31-97. * |
| ВЕТРОВ В.В. и др. Неосложненная преэклампсия. - СПб: "Информнавигатор", 2012, С.31-97. NACCASHA N et al. Phenotypic and metabolic characteristics of monocytes and granulocytes in normal pregnancy and maternal infection// Am J Obstet Gynecol.2001 Nov;185(5):1118-23 PMID:11717644. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102414566B (en) | Methods for determining maternal health risks | |
| EP3189336B1 (en) | Method for determining risk of pre-eclampsia | |
| KR20150119009A (en) | Diagnostic tools to predict onset of preeclampsia | |
| RU2428105C2 (en) | Method of predicting vascular disorders in patients with essential arterial hypertension | |
| RU2561060C1 (en) | Diagnostic technique for preeclampsia in pregnant women suffering chronic arterial hypertension | |
| Sherif et al. | Soluble urokinase plasminogen activator receptor in type 1 diabetic children, relation to vascular complications | |
| US8846324B2 (en) | In vitro method for diagnosing or predicting hypertension and/or early-stage cardiovascular end-organ damage by determining the concentration of soluble prorenin receptor | |
| RU2483311C1 (en) | Diagnostic technique of preeclampsia in pregnant women with chronic arterial hypertension | |
| RU2663456C1 (en) | Method of diagnostics of preeclampsia on the gestation up to 34 week by evaluation of levels of ang (1-8) vasoconstrictor and ang (1-7) vasodilator | |
| RU2587781C1 (en) | Method of diagnosing severe preeclampsia | |
| US20140127703A1 (en) | Method for Diagnosing Preeclampsia | |
| Kumar et al. | Dynamic alteration in the vaginal secretory proteome across the early and mid-trimesters of pregnancy | |
| RU2720241C1 (en) | Method for prediction of hypercoagulable complications of gestation after transfer of "fresh" embryos in ivf programs | |
| RU2554827C1 (en) | Method for prediction of placental insufficiency in second trimester of pregnancy | |
| RU2614692C1 (en) | Method for prediction of fetal growth retardation for pregnant women with placental insufficiency | |
| RU2309412C1 (en) | Method for evaluating the degree of gestosis severity | |
| RU2652447C1 (en) | Method of diagnostics of preeclampsia attachment in pregnant women with chronic arterial hypertension | |
| RU2338198C1 (en) | Method of preclinical gestosis prediction in third trimester of pregnancy associated with previous influenza a(h3n2) in first trimester of gestation, complicated with miscarriage threat | |
| RU2342666C1 (en) | Method for gestosis degree determination | |
| US20200124612A1 (en) | Detection of predictors of preeclampsia | |
| RU2641029C1 (en) | Method for preeclampsia severity diagnostics based on evaluation of dna-recognizing dai-1 receptors expression in placental tissue | |
| RU2804645C1 (en) | Method of diagnostics of severity of pre-eclampsia on the background of chronic arterial hypertension in pregnant women | |
| Rokotyanskaya et al. | Markers of endothelial dysfunction as criteria for differential diagnosis of hypertensive disorders in pregnant women | |
| RU2752715C1 (en) | Method for predicting effectiveness of treatment of moderate preeclampsia | |
| Xu et al. | Normative values of renin and aldosterone in clinically stable preterm neonates |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20190830 |
|
| NF4A | Reinstatement of patent |
Effective date: 20220121 |