RU2659240C2 - Method for obtaining a functional food for aftercare of oncologic patients - Google Patents
Method for obtaining a functional food for aftercare of oncologic patients Download PDFInfo
- Publication number
- RU2659240C2 RU2659240C2 RU2016119758A RU2016119758A RU2659240C2 RU 2659240 C2 RU2659240 C2 RU 2659240C2 RU 2016119758 A RU2016119758 A RU 2016119758A RU 2016119758 A RU2016119758 A RU 2016119758A RU 2659240 C2 RU2659240 C2 RU 2659240C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- lactobacillus
- pro
- functional food
- glu
- peptide
- Prior art date
Links
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 title claims abstract description 55
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 16
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 title abstract description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 75
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 51
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 claims abstract description 49
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 claims abstract description 49
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 claims abstract description 48
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims abstract description 47
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 15
- 102000014171 Milk Proteins Human genes 0.000 claims abstract description 12
- 108010011756 Milk Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 claims abstract description 12
- 235000021239 milk protein Nutrition 0.000 claims abstract description 12
- 239000005018 casein Substances 0.000 claims abstract description 11
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 claims abstract description 11
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 claims abstract description 9
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims abstract description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 5
- 108090000317 Chymotrypsin Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 108090001109 Thermolysin Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 claims abstract description 4
- 229960002376 chymotrypsin Drugs 0.000 claims abstract description 4
- 238000009928 pasteurization Methods 0.000 claims abstract description 4
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 claims abstract description 4
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims abstract description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims abstract description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 13
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 13
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 claims description 9
- 240000006024 Lactobacillus plantarum Species 0.000 claims description 8
- 235000013965 Lactobacillus plantarum Nutrition 0.000 claims description 8
- 229940072205 lactobacillus plantarum Drugs 0.000 claims description 8
- 240000001046 Lactobacillus acidophilus Species 0.000 claims description 7
- 235000013956 Lactobacillus acidophilus Nutrition 0.000 claims description 7
- 241000186869 Lactobacillus salivarius Species 0.000 claims description 7
- 229940039695 lactobacillus acidophilus Drugs 0.000 claims description 7
- 241000186016 Bifidobacterium bifidum Species 0.000 claims description 6
- 241000186840 Lactobacillus fermentum Species 0.000 claims description 6
- 241000193985 Streptococcus agalactiae Species 0.000 claims description 6
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 6
- 241000186605 Lactobacillus paracasei Species 0.000 claims description 5
- 229940012969 lactobacillus fermentum Drugs 0.000 claims description 5
- 241000186012 Bifidobacterium breve Species 0.000 claims description 4
- 241000218588 Lactobacillus rhamnosus Species 0.000 claims description 4
- 229940002008 bifidobacterium bifidum Drugs 0.000 claims description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 4
- 241000194031 Enterococcus faecium Species 0.000 claims description 3
- UCNNZELZXFXXJQ-BZSNNMDCSA-N Leu-Leu-Tyr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 UCNNZELZXFXXJQ-BZSNNMDCSA-N 0.000 claims description 3
- ZXEUFAVXODIPHC-GUBZILKMSA-N Lys-Glu-Asn Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O ZXEUFAVXODIPHC-GUBZILKMSA-N 0.000 claims description 3
- 108010009298 lysylglutamic acid Proteins 0.000 claims description 3
- 241000186604 Lactobacillus reuteri Species 0.000 claims description 2
- 241000186018 Bifidobacterium adolescentis Species 0.000 claims 1
- 244000199866 Lactobacillus casei Species 0.000 claims 1
- 235000013958 Lactobacillus casei Nutrition 0.000 claims 1
- 229940017800 lactobacillus casei Drugs 0.000 claims 1
- 238000001303 quality assessment method Methods 0.000 claims 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 abstract description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 12
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 abstract description 12
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 abstract description 8
- 235000013305 food Nutrition 0.000 abstract description 7
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 abstract description 2
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 abstract description 2
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 230000000118 anti-neoplastic effect Effects 0.000 abstract 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 abstract 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 abstract 1
- 239000005428 food component Substances 0.000 abstract 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 abstract 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 abstract 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 52
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 17
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 14
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 14
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 13
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 13
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 12
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 10
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 10
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 9
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 7
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 6
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 description 6
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 6
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 6
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 6
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- QIJRTFXNRTXDIP-UHFFFAOYSA-N (1-carboxy-2-sulfanylethyl)azanium;chloride;hydrate Chemical compound O.Cl.SCC(N)C(O)=O QIJRTFXNRTXDIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 description 5
- 241000206672 Gelidium Species 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 5
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 5
- 229960001305 cysteine hydrochloride Drugs 0.000 description 5
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 5
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 5
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 5
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 5
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 5
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 5
- 239000013028 medium composition Substances 0.000 description 5
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 5
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 5
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 5
- YWYZEGXAUVWDED-UHFFFAOYSA-N triammonium citrate Chemical compound [NH4+].[NH4+].[NH4+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O YWYZEGXAUVWDED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 4
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 4
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 4
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 4
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 4
- 229940099596 manganese sulfate Drugs 0.000 description 4
- 239000011702 manganese sulphate Substances 0.000 description 4
- 235000007079 manganese sulphate Nutrition 0.000 description 4
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 4
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 4
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 4
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 4
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 4
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 4
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 3
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 3
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 3
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N (±)-α-Tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000434048 Xanthoparmelia camtschadalis Species 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 2
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 108010042598 glutamyl-aspartyl-glycine Proteins 0.000 description 2
- 235000021552 granulated sugar Nutrition 0.000 description 2
- 235000015243 ice cream Nutrition 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 2
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 2
- 230000000242 pagocytic effect Effects 0.000 description 2
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 2
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- RBCOYOYDYNXAFA-UHFFFAOYSA-L (5-hydroxy-4,6-dimethylpyridin-3-yl)methyl phosphate Chemical compound CC1=NC=C(COP([O-])([O-])=O)C(C)=C1O RBCOYOYDYNXAFA-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- MIDXCONKKJTLDX-UHFFFAOYSA-N 3,5-dimethylcyclopentane-1,2-dione Chemical compound CC1CC(C)C(=O)C1=O MIDXCONKKJTLDX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CMRSBOGQMSQPFW-UHFFFAOYSA-N 5-hydroxy-6-methyl-1h-pyrimidine-2,4-dione Chemical compound CC=1NC(=O)NC(=O)C=1O CMRSBOGQMSQPFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000589291 Acinetobacter Species 0.000 description 1
- QUAWOKPCAKCHQL-SRVKXCTJSA-N Asn-His-Lys Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N QUAWOKPCAKCHQL-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- 241001608472 Bifidobacterium longum Species 0.000 description 1
- 241000186015 Bifidobacterium longum subsp. infantis Species 0.000 description 1
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 1
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000011691 Burkitt lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 241000193403 Clostridium Species 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000588914 Enterobacter Species 0.000 description 1
- 241000194033 Enterococcus Species 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 1
- DSPQRJXOIXHOHK-WDSKDSINSA-N Glu-Asp-Gly Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O DSPQRJXOIXHOHK-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- GAAHQHNCMIAYEX-UWVGGRQHSA-N Gly-Pro-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)CN GAAHQHNCMIAYEX-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- 244000303040 Glycyrrhiza glabra Species 0.000 description 1
- 235000006200 Glycyrrhiza glabra Nutrition 0.000 description 1
- DSPQRJXOIXHOHK-UHFFFAOYSA-N H-Glu-Asp-Gly-OH Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O DSPQRJXOIXHOHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000017443 Hedysarum boreale Nutrition 0.000 description 1
- 235000007858 Hedysarum occidentale Nutrition 0.000 description 1
- 241000588747 Klebsiella pneumoniae Species 0.000 description 1
- FOBUGKUBUJOWAD-IHPCNDPISA-N Leu-Leu-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 FOBUGKUBUJOWAD-IHPCNDPISA-N 0.000 description 1
- DCRWPTBMWMGADO-AVGNSLFASA-N Lys-Glu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O DCRWPTBMWMGADO-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000003856 Parmelia Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 241000186334 Propionibacterium freudenreichii subsp. shermanii Species 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000588769 Proteus <enterobacteria> Species 0.000 description 1
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 1
- AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N Riboflavin Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- GLEVLJDDWXEYCO-UHFFFAOYSA-N Trolox Chemical compound O1C(C)(C(O)=O)CCC2=C1C(C)=C(C)C(O)=C2C GLEVLJDDWXEYCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010053613 Type IV hypersensitivity reaction Diseases 0.000 description 1
- MQGGXGKQSVEQHR-KKUMJFAQSA-N Tyr-Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 MQGGXGKQSVEQHR-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- OENHQHLEOONYIE-UKMVMLAPSA-N all-trans beta-carotene Natural products CC=1CCCC(C)(C)C=1/C=C/C(/C)=C/C=C/C(/C)=C/C=C/C=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C OENHQHLEOONYIE-UKMVMLAPSA-N 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000005975 antitumor immune response Effects 0.000 description 1
- 235000008452 baby food Nutrition 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- TUPZEYHYWIEDIH-WAIFQNFQSA-N beta-carotene Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2=CCCCC2(C)C TUPZEYHYWIEDIH-WAIFQNFQSA-N 0.000 description 1
- 235000013734 beta-carotene Nutrition 0.000 description 1
- 239000011648 beta-carotene Substances 0.000 description 1
- 229960002747 betacarotene Drugs 0.000 description 1
- 229940009291 bifidobacterium longum Drugs 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 235000013736 caramel Nutrition 0.000 description 1
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003736 gastrointestinal content Anatomy 0.000 description 1
- 239000001947 glycyrrhiza glabra rhizome/root Substances 0.000 description 1
- 244000005709 gut microbiome Species 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 1
- 235000008216 herbs Nutrition 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 230000003136 immunomodifying effect Effects 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 229910000358 iron sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 235000021374 legumes Nutrition 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 1
- 238000009343 monoculture Methods 0.000 description 1
- 235000008935 nutritious Nutrition 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 235000021116 parmesan Nutrition 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 235000013406 prebiotics Nutrition 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 235000020185 raw untreated milk Nutrition 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011008 sodium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 235000021092 sugar substitutes Nutrition 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N thiamine Chemical compound CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000005951 type IV hypersensitivity Effects 0.000 description 1
- 208000027930 type IV hypersensitivity disease Diseases 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 1
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 description 1
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 1
- OENHQHLEOONYIE-JLTXGRSLSA-N β-Carotene Chemical compound CC=1CCCC(C)(C)C=1\C=C\C(\C)=C\C=C\C(\C)=C\C=C\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C OENHQHLEOONYIE-JLTXGRSLSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/17—Amino acids, peptides or proteins
- A23L33/19—Dairy proteins
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Mycology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине, биотехнологии и пищевой промышленности, в частности к созданию функциональных продуктов питания для реабилитации онкологических больных на основе симбиотических консорциумов пробиотических бактерий и биологически активных пептидов.The invention relates to medicine, biotechnology and the food industry, in particular to the creation of functional food products for the rehabilitation of cancer patients based on symbiotic consortia of probiotic bacteria and biologically active peptides.
Питание является очень важной составляющей здоровья человека. У больного с онкологическим заболеванием в организме происходят изменения метаболических процессов, поэтому ему требуется особый питательный рацион.Nutrition is a very important component of human health. In a patient with an oncological disease, metabolic processes occur in the body, therefore, he needs a special nutritious diet.
Онкологические пациенты нуждаются в повышенном потреблении белковой пищи. Имеющиеся на сегодняшний день данные свидетельствуют о том, что пептидная диета наиболее эффективно поддерживает работу печени и, следовательно, способствует синтезу белков. Биологически активные пептиды, используемые в качестве пребиотиков, представляют собой короткие цепочки из аминокислот и обладают иммуномодифицирующими и противоопухолевыми свойствами.Cancer patients need an increased intake of protein foods. Currently available data indicate that the peptide diet most effectively supports the liver and, therefore, promotes the synthesis of proteins. Biologically active peptides used as prebiotics are short chains of amino acids and possess immunomodifying and antitumor properties.
Систематическое употребление пробиотиков в питании стимулирует иммунную систему организма, подавляет патогенную и условно-патогенную микрофлору, оказывает противоопухолевый и другие положительные эффекты на организм человека.The systematic use of probiotics in food stimulates the body's immune system, suppresses pathogenic and conditionally pathogenic microflora, and has antitumor and other positive effects on the human body.
На сегодняшний день созданию новых функциональных продуктов питания для обеспечения населения необходимыми полезными веществами, придающими им лечебные и профилактические свойства, уделяется особое внимание.Today, special attention is paid to the creation of new functional food products to provide the population with necessary useful substances that give them therapeutic and preventive properties.
Так, известен пищевой лечебно-профилактический функциональный продукт (RU, патент 2453132, опубл. 20.06.2012), обладающий иммуномодулирующим действием. Получение пищевого функционального продукта заключается в смешивании в следующем соотношении исходных компонентов, мас. %: растительных фосфолипидов - 6,00; витамина Е - 0,40; β-каротина - 0,10 и отдельно аскорбиновой кислоты - 2,50; витамина В1 - 0,06; витамина В2 - 0,04; витамина В6 - 0,10; сульфата железа - 0,05; сухого водорастворимого экстракта шиповника - 45,00; сухого водорастворимого экстракта корня солодки голой - 43,75; заменителя сахара - 2,00.So, it is known food therapeutic and prophylactic functional product (RU, patent 2453132, publ. 20.06.2012), which has an immunomodulating effect. Getting food functional product consists in mixing in the following ratio of starting components, wt. %: plant phospholipids - 6.00; vitamin E - 0.40; β-carotene - 0.10 and separately ascorbic acid - 2.50; vitamin B 1 - 0.06; vitamin B 2 - 0.04; vitamin B 6 - 0.10; iron sulfate - 0.05; dry water-soluble rosehip extract - 45.00; dry water-soluble extract of licorice root naked - 43.75; sugar substitute - 2.00.
Недостатком известного продукта являются недостаточно высокие иммуномодулирующие свойства.A disadvantage of the known product is insufficiently high immunomodulating properties.
Известен продукт детского питания для иммуномодулирующего эффекта (RU, патент 2402226, опубл. 27.10.2010). Основу иммуномодулирующей леденцовой карамели составляет экстракт из слоевища лишайника семейства пармелиевых Xanthoparmelia camtschadalis - 67%, к которому добавлены, сахар-песок - 22%, патока - 10%, лимонная кислота - 0,7%, эссенция - 0,3%.Known baby food product for immunomodulating effect (RU, patent 2402226, publ. 10.27.2010). The basis of immunomodulating candy caramel is the extract from the thallus of the lichen of the parmesan family Xanthoparmelia camtschadalis - 67%, to which are added granulated sugar - 22%, molasses - 10%, citric acid - 0.7%, essence - 0.3%.
Недостатком известного продукта следует признать использование редкого сырья - экстракта из слоевища лишайника семейства пармелиевых Xanthoparmelia camtschadalis.A disadvantage of the known product should be recognized as the use of rare raw materials - extract from the thallus of the lichen of the Xanthoparmelia camtschadalis parmelia family.
Известно мороженое (RU, патент 2294647, опубл. 10.03.2007) с повышенными пробиотическими, профилактическими и биологическими свойствами. В состав мороженого помимо молока, сливок, сахара-песка, стабилизатора, также вносят бакконцентрат, который включает культуры микроорганизмов Bifidobacterium longum В 379 М, Lactobacillus acidophilus 97, Propionibacterium shermanii 12 AE, в соотношении 1:1:1.It is known ice cream (RU, patent 2294647, publ. 10.03.2007) with increased probiotic, preventive and biological properties. In addition to milk, cream, granulated sugar, stabilizer, the composition of ice cream also contains a concentrate, which includes cultures of microorganisms Bifidobacterium longum B 379 M, Lactobacillus acidophilus 97, Propionibacterium shermanii 12 AE, in the ratio 1: 1: 1.
Недостатком данного продукта можно считать невысокую пищевую и биологическую ценность.The disadvantage of this product can be considered low nutritional and biological value.
Известен жидкий ферментированный и пастеризованный натуральный продукт (RU, патент 2452243, опубл. 10.06.2012), изготовленный на основе фруктов, овощей, бобовых, трав и/или орехов и содержащий живые пробиотические микроорганизмы в количестве от 105 до 1015 клеток/мл и неживые пробиотические микроорганизмы. Микроорганизмы находятся в натуральном продукте в виде смеси бактерий Lactobacillus rhamnosus с другими пробиотическими микроорганизмами.Known liquid fermented and pasteurized natural product (RU, patent 2452243, publ. 10.06.2012), made on the basis of fruits, vegetables, legumes, herbs and / or nuts and containing live probiotic microorganisms in an amount of from 10 5 to 10 15 cells / ml and non-living probiotic microorganisms. Microorganisms are found in a natural product as a mixture of the bacteria Lactobacillus rhamnosus with other probiotic microorganisms.
Основной недостаток продукта заключается в том, что, несмотря на относительно широкий спектр действия, он недостаточно эффективен к иммуностимулирующим механизмам в организме.The main disadvantage of the product is that, despite the relatively wide spectrum of action, it is not effective enough to immune-stimulating mechanisms in the body.
Известен штамм Bifidobacterium longum infantis для приготовления пробиотика (RU, патент 2308483, опубл. 20.10.2007), выделенный из иссеченного и промытого желудочно-кишечного тракта человека. Препарат с данным штаммом может применяться при профилактике или лечении нежелательной воспалительной активности. Штамм Bifidobacterium оказывает существенное противовоспалительное действие после перорального потребления и вызывает изменения в иммунологическом маркере при введении в систему, содержащую клетки, которые взаимодействуют с иммунной системой. А также предложен препарат (RU, патент 2308483, опубл. 20.10.2007), содержащий штамм Bifidobacterium, который может включать другой пробиотический материал - Lactobacillus salivarius, выделенный из иссеченного и промытого желудочно-кишечного тракта человека.A known strain of Bifidobacterium longum infantis for the preparation of a probiotic (RU, patent 2308483, publ. 20.10.2007), isolated from excised and washed human gastrointestinal tract. A drug with this strain can be used in the prevention or treatment of undesirable inflammatory activity. The Bifidobacterium strain has a significant anti-inflammatory effect after oral consumption and causes changes in the immunological marker when introduced into a system containing cells that interact with the immune system. And also proposed a preparation (RU, patent 2308483, publ. 20.10.2007) containing a strain of Bifidobacterium, which may include another probiotic material - Lactobacillus salivarius, isolated from excised and washed human gastrointestinal tract.
Недостатком известных препаратов можно считать узкий спектр действия предлагаемого штамма.A disadvantage of the known drugs can be considered a narrow spectrum of action of the proposed strain.
Предложена фармацевтическая композиция (RU, патент 2362579, опубл. 27.07.2009), обладающая противоопухолевым действием, содержащая в качестве действующего вещества эффективное количество пептида глутамил-аспартил-глицин формулы: H-Glu-Asp-Gly-OH и фармацевтически приемлемый носитель. Пептид получают классическим методом пептидного синтеза в растворе.A pharmaceutical composition is proposed (RU, patent 2362579, publ. 07/27/2009) having an antitumor effect, containing as an active substance an effective amount of a glutamyl-aspartyl-glycine peptide of the formula: H-Glu-Asp-Gly-OH and a pharmaceutically acceptable carrier. The peptide is obtained by the classical method of peptide synthesis in solution.
Недостатком предложенной композиции следует признать трудоемкость процедуры получения биопептида.The disadvantage of the proposed composition should be recognized as the complexity of the procedure for producing a biopeptide.
Предлагается пептид структуры Tyr-Ser-Leu (RU, патент 2305107, опубл. 27.08.2007), характеризующийся аминокислотнойA peptide of the structure Tyr-Ser-Leu (RU, patent 2305107, publ. 08.27.2007), characterized by amino acid
последовательностью SEQ ID No: 16, и фармацевтическая композиция на его основе для стимулирования противоопухолевого иммунного ответа. Фармацевтическая композиция состоит из эффективного количества пептида и фармацевтически приемлемого носителя.the sequence of SEQ ID No: 16, and a pharmaceutical composition based thereon for stimulating an antitumor immune response. A pharmaceutical composition consists of an effective amount of a peptide and a pharmaceutically acceptable carrier.
Недостатком известной композиции являются недостаточно высокие противоопухолевые свойства.A disadvantage of the known composition is not sufficiently high antitumor properties.
Известен лекарственный препарат (RU, заявка 94040451, опубл. 20.09.1996), содержащий живую культуру молочнокислых бактерий Streptococcus faecium 3185-М ВКПМ В-3491 и Streptococcus faecium М ВКПМ В-3490, производимые в виде сухого концентрата монокультур и смешиваемые в соотношении 0,6…1,4:0,6…1,4 по количеству жизнеспособных клеток. Предлагаемый лекарственный препарат обладает высокой биологической активностью, в том числе иммуностимулирующей способностью и способностью к подавлению патогенной и условно-патогенной микрофлоры.Known drug (RU, application 94040451, publ. September 20, 1996) containing a live culture of lactic acid bacteria Streptococcus faecium 3185-M VKPM B-3491 and Streptococcus faecium M VKPM B-3490, produced in the form of a dry monoculture concentrate and mixed in the
Недостатком предлагаемого препарата является ограниченный видовой состав микроорганизмов.The disadvantage of the proposed drug is the limited species composition of microorganisms.
В ходе проведения патентного поиска не выявлено техническое решение, которое может быть признано ближайшим аналогом.During the patent search, no technical solution was identified that could be recognized as the closest analogue.
Техническая задача, решаемая использованием разработанного способа, состоит в расширении ассортимента продуктов питания функционального назначения для онкологических больных в период реабилитации.The technical problem solved by using the developed method is to expand the range of functional foods for cancer patients during the rehabilitation period.
Технический результат, достигаемый при реализации разработанного способа, состоит в получении функционального продукта питания для реабилитации онкологических больных, состоящего из пробиотических бактерий - представителей нормальной кишечной микрофлоры человека и биологически активных пептидов, выделенных из белков молока, с выраженными противоопухолевыми, антиоксидантными и иммуномодулирующими свойствами.The technical result achieved by the implementation of the developed method consists in obtaining a functional food product for the rehabilitation of cancer patients, consisting of probiotic bacteria - representatives of the normal human intestinal microflora and biologically active peptides isolated from milk proteins, with pronounced antitumor, antioxidant and immunomodulating properties.
Для достижения указанного технического результата предложено использовать разработанный способ получения функционального продукта питания для реабилитации онкологических больных, согласно которому сначала проводят выделение биологически активных пептидов из белков молока путем внесения в него фосфатов, пастеризацию при температуре 74±2°С с выдержкой 15-20 секунд с целью уничтожения микроорганизмов, содержащихся в казеине, охлаждения до температуры 37+2°С, внесения энзиматической системы, и дальнейшего выделения и очистки биологически активных пептидов посредством ультрафильтрации, препаративного электрофореза и обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии. Для достижения необходимой консистенции биологически активных пептидов их сгущают на вакуум-выпарной установке до массовой доли сухих веществ от 40 до 45% и проводят распылительную сушку с температурой воздуха на входе 175±5°С, на выходе 90±5°С.To achieve the specified technical result, it is proposed to use the developed method for obtaining a functional food product for the rehabilitation of cancer patients, according to which the biologically active peptides are first extracted from milk proteins by adding phosphates to it, pasteurization at a temperature of 74 ± 2 ° C with an exposure of 15-20 seconds the purpose of the destruction of microorganisms contained in casein, cooling to a temperature of 37 + 2 ° C, the introduction of an enzymatic system, and further isolation and purification biologically active peptides by ultrafiltration, preparative electrophoresis and reverse phase high performance liquid chromatography. To achieve the required consistency of biologically active peptides, they are concentrated in a vacuum evaporator to a mass fraction of solids from 40 to 45% and spray drying is carried out with an air temperature of 175 ± 5 ° С at the inlet and 90 ± 5 ° С at the outlet.
С целью получения консорциума пробиотических бактерий проводят первичное выделение бактерий из фекалий человека, их культивирование на жидкой питательной среде в анаэробных условиях при Т=37,0±2,0°С, рН 7,2±0,2 в течение 12,0 ч, с последующим центрифугированием и лиофилизацией. Далее проводят смешивание компонентов функционального продукта (консорциум пробиотических бактерий и биологически активный пептид), готовый продукт фасуют и упаковывают.In order to obtain a consortium of probiotic bacteria, the primary isolation of bacteria from human feces is carried out, their cultivation on a liquid nutrient medium under anaerobic conditions at T = 37.0 ± 2.0 ° C, pH 7.2 ± 0.2 for 12.0 hours followed by centrifugation and lyophilization. Next, the components of the functional product are mixed (a consortium of probiotic bacteria and a biologically active peptide), the finished product is packaged and packaged.
Разработанный способ реализуют следующим образом.The developed method is implemented as follows.
Выделение биологически активных пептидов осуществляют из белков молока. Проводят приемку сырья и оценку его качества (показатели качества и безопасности сырого молока должны соответствовать требованиям, установленным в Техническом регламенте Таможенного союза «О безопасности молока и молочной продукции» TP ТС 033/2013, принятом решением Совета Евразийской экономической комиссии от 9 октября 2013 года №67). Вносят фосфорнокислый натрий (35%-ный раствор) до достижения рН молока 7,5 и проводят пастеризацию при температуре 74±2°С с выдержкой 15-20 секунд с целью уничтожения микроорганизмов, содержащихся в казеине, охлаждают до температуры 37+2°С, вносят энзиматическою систему, включающую трипсин, химотрипсин и термолизин в соотношении 1:1:1.The selection of biologically active peptides is carried out from milk proteins. Acceptance of raw materials and assessment of their quality are carried out (quality and safety indicators of raw milk must meet the requirements established in the Technical Regulation of the Customs Union “On the Safety of Milk and Dairy Products” TP TS 033/2013, adopted by the Council of the Eurasian Economic Commission on October 9, 2013 No. 67). Sodium phosphate (35% solution) is added until the milk pH is 7.5 and pasteurization is carried out at a temperature of 74 ± 2 ° C for 15-20 seconds to kill microorganisms contained in casein, cooled to a temperature of 37 + 2 ° C , make the enzymatic system, including trypsin, chymotrypsin and thermolysin in a ratio of 1: 1: 1.
Ферментативный гидролиз ведут при температуре 37+2°С в течение 8,00±0,05 ч при рН 7,5±0,1, фермент-субстратное соотношение 1:50. С целью инактивации комплекса ферментов и удаления патогенной микрофлоры полученный гидролизат подогревают до 95±2°С в течение 30 с. Enzymatic hydrolysis is carried out at a temperature of 37 + 2 ° C for 8.00 ± 0.05 hours at a pH of 7.5 ± 0.1, the enzyme-substrate ratio of 1:50. In order to inactivate the complex of enzymes and remove pathogenic microflora, the resulting hydrolyzate is heated to 95 ± 2 ° C for 30 s.
Выделение и очистку биологически активных пептидов осуществляют путем последовательных стадий ультрафильтрации, препаративного электрофореза и обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии. На первой стадии очистки ферментативные гидролизаты казеина подвергают ультрафильтрации с использованием мембран с диаметром пор 10 и 15 кДа при рН 6,0-6,5. Полученный материал, содержащий пептиды и низкомолекулярные белки с молекулярными массами менее 10-12 кДа, наносят на электрофоретическую колонку (предварительно добавив в пробу мочевину до концентрации 3 М) для разделения белков с помощью препаративного электрофореза.Isolation and purification of biologically active peptides is carried out by successive stages of ultrafiltration, preparative electrophoresis and reverse phase high performance liquid chromatography. In the first stage of purification, casein enzymatic hydrolysates are ultrafiltered using membranes with pore diameters of 10 and 15 kDa at pH 6.0-6.5. The resulting material containing peptides and low molecular weight proteins with molecular weights of less than 10-12 kDa is applied to an electrophoretic column (after adding urea to a concentration of 3 M in the sample) for protein separation using preparative electrophoresis.
Препаративный электрофорез при непрерывной элюции белков проводят в 12,5%-ном полиакриламидном геле в кислой буферной системе в присутствии мочевины. Элюированные с колонки белковые фракции анализируют с помощью аналитического электрофореза в присутствии додецилсульфата натрия. Содержащиеся в белковых фракциях пептиды разделяют с помощью нескольких последовательных циклов обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии, элюируя пептиды в градиенте концентраций ацетонитрила с использованием различных противоионов, при скорости потока 0,8 мл/мин.Preparative electrophoresis during continuous elution of proteins is carried out in a 12.5% polyacrylamide gel in an acidic buffer system in the presence of urea. Protein fractions eluted from the column are analyzed by analytical electrophoresis in the presence of sodium dodecyl sulfate. The peptides contained in the protein fractions were separated using several successive cycles of reverse phase high performance liquid chromatography, eluting the peptides in a gradient of acetonitrile concentrations using various counterions at a flow rate of 0.8 ml / min.
Для достижения необходимой консистенции биологически активных пептидов их сгущают на вакуум-выпарной установке до массовой доли сухих веществ от 40 до 45% и сушат в распылительной сушилке с температурой воздуха на входе 175±5°С, на выходе 90±5°С.To achieve the required consistency of biologically active peptides, they are concentrated in a vacuum evaporator to a mass fraction of solids from 40 to 45% and dried in a spray dryer with an air temperature of 175 ± 5 ° С at the inlet and 90 ± 5 ° С at the outlet.
Источником выделения пробиотических бактерий являются фекалии взрослого здорового субъекта, который в течение 3 месяцев перед выделением не принимает ни антибиотические, ни пробиотические препараты.The source of probiotic bacteria is the feces of an adult healthy subject who does not take antibiotic or probiotic drugs for 3 months before isolation.
Подготовку содержимого кишечника проводят следующим образом: 1 г фекалий вносят в 9 мл стерильного изотонического раствора хлорида натрия (NaCl) и тщательно суспендируют путем встряхивания в течение 20-30 минут. Затем отстаивают и через 1 час из надосадочной жидкости готовят разведения в изотоническом растворе хлорида натрия 102, 103, 104, 105. Из разведений 103, 104, 105 делают посев бактериологической петлей на питательные среды.Preparation of intestinal contents is carried out as follows: 1 g of feces is introduced into 9 ml of a sterile isotonic solution of sodium chloride (NaCl) and carefully suspended by shaking for 20-30 minutes. Then they defend and after 1 hour, dilutions in an isotonic sodium chloride solution 10 2 , 10 3 , 10 4 , 10 5 are prepared from the supernatant. From dilutions of 10 3 , 10 4 , 10 5 make inoculation with a bacteriological loop on a nutrient medium.
Для первичного выделения бактерий родов Bifidobacterium, Lactobacillus, Streptococcus и Enterococcus используют бифидум-среду, среду МРС, селективный агар для стрептококков, среду Сланец-Бартли для энтерококков. Культивирование бактерий осуществляют на агаризованных питательных средах в анаэробном режиме при температуре 37°С в течение 24,0 часов. С суммарных газонов на чашках Петри с видимым ростом микроорганизмов проводят истощающие рассевы. Выделенные микроорганизмы культивируют в жидких питательных средах в анаэробном режиме при температуре 37°С в течение 1,20-24,0 часов до достижения концентрации микроорганизмов 1,0⋅108 КОЕ/мл.For the primary isolation of bacteria of the genera Bifidobacterium, Lactobacillus, Streptococcus and Enterococcus, bifidum medium, MPC medium, selective agar for streptococci, and Slate-Bartley medium for enterococci are used. The cultivation of bacteria is carried out on agarized nutrient media in anaerobic mode at a temperature of 37 ° C for 24.0 hours. Exhaustive screenings are carried out from the total lawns on Petri dishes with visible growth of microorganisms. The isolated microorganisms are cultured in liquid nutrient media under anaerobic conditions at a temperature of 37 ° C for 1.20-24.0 hours until the microorganism concentration reaches 1.0-10 8 CFU / ml.
По окончании культивирования биомассу отделяют от культуральной жидкости центрифугированием при 8000 об/мин в течение 20 минут.At the end of the cultivation, the biomass is separated from the culture fluid by centrifugation at 8000 rpm for 20 minutes.
Культуры микроорганизмов, выделенных из желудочно-кишечного тракта человека, хранятся в сублимационно-высушенном состоянии в ампулах при температуре 4±2°С не менее 24 месяцев. Параметры сублимационной сушки: температура замораживания в защитной среде, содержащей 5% глицерина, -25°С при продолжительности 90 минут; температура сушки 30°С; продолжительность сушки 6 часов; тепловая нагрузка 5,45 кВт/м2; остаточное давление 0,6-0,8 кПа, толщина слоя сушки - 2 мм.Cultures of microorganisms isolated from the human gastrointestinal tract are stored in a freeze-dried state in ampoules at a temperature of 4 ± 2 ° C for at least 24 months. Freeze-drying parameters: freezing temperature in a protective medium containing 5% glycerol, -25 ° C for a duration of 90 minutes; drying temperature 30 ° C; drying time 6 hours; thermal load of 5.45 kW / m 2 ; residual pressure 0.6-0.8 kPa, drying
Лиофилизированные культуры микроорганизмов, выделенных из желудочно-кишечного тракта человека, восстанавливают путем переноса содержимого ампул в определенном соотношении в пробирки с питательными средами, соответствующими культивированию консорциумов пробиотических бактерий.Lyophilized cultures of microorganisms isolated from the human gastrointestinal tract are restored by transferring the contents of the ampoules in a certain ratio to test tubes with nutrient media corresponding to the cultivation of consortia of probiotic bacteria.
Для получения функционального продукта питания проводят смешивание компонентов в соответствии с рецептурой: консорциум пробиотических бактерий + биологически активный пептид.To obtain a functional food product, the components are mixed in accordance with the recipe: a consortium of probiotic bacteria + biologically active peptide.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами.The invention is illustrated by the following examples.
Пример 1Example 1
Для получения биологически активных пептидов при температуре 37+2°С, рН 7,5±0,1 и фермент-субстратном соотношении 1:50 проводят ферментативный гидролиз подготовленного молока энзиматической системой, включающей трипсин, химотрипсин и термолизин в течение 8,00±0,05 ч. Полученный гидролизат подогревают до 95±2°С в течение 30 с.To obtain biologically active peptides at a temperature of 37 + 2 ° C, pH 7.5 ± 0.1 and an enzyme-substrate ratio of 1:50, enzymatic hydrolysis of the prepared milk is carried out by an enzymatic system including trypsin, chymotrypsin and thermolysin for 8.00 ± 0 , 05 h. The resulting hydrolyzate is heated to 95 ± 2 ° C for 30 s.
Для очистки ферментативные гидролизаты казеина подвергаются ультрафильтрации с использованием мембран с диаметром пор 10 и 15 кДа при рН 6,0-6,5. Полученный материал наносят на электрофоретическую колонку. Препаративный электрофорез при непрерывной элюции белков проводят в 12,5%-ном полиакриламидном геле в кислой буферной системе в присутствии мочевины. Элюированные с колонки белковые фракции анализируют с помощью аналитического электрофореза в присутствии додецилсульфата натрия. Содержащиеся в белковых фракциях пептиды Leu-Leu-Tyr и Trp-Tre-Ala-Glu-Glu-Lys-Glu-Leu разделяют с помощью нескольких последовательных циклов обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии, элюируя пептиды в градиенте концентраций ацетонитрила с использованием различных противоионов, при скорости потока 0,8 мл/мин.For purification, casein enzymatic hydrolysates are ultrafiltered using membranes with pore diameters of 10 and 15 kDa at a pH of 6.0-6.5. The resulting material is applied to an electrophoretic column. Preparative electrophoresis during continuous elution of proteins is carried out in a 12.5% polyacrylamide gel in an acidic buffer system in the presence of urea. Protein fractions eluted from the column are analyzed by analytical electrophoresis in the presence of sodium dodecyl sulfate. The peptides Leu-Leu-Tyr and Trp-Tre-Ala-Glu-Glu-Lys-Glu-Leu contained in the protein fractions were separated by several successive cycles of reverse phase high performance liquid chromatography, eluting the peptides in a gradient of acetonitrile concentrations using various counterions, at a flow rate of 0.8 ml / min.
Полученные биологически активные пептиды сгущают на вакуум-выпарной установке до массовой доли сухих веществ от 40 до 45% и сушат в распылительной сушилке с температурой воздуха на входе 175±5°С, на выходе - 90±5°С.The obtained biologically active peptides are concentrated in a vacuum evaporator to a mass fraction of solids from 40 to 45% and dried in a spray dryer with an air temperature of 175 ± 5 ° С at the inlet and 90 ± 5 ° С at the outlet.
Для получения консорциума пробиотических бактерий лиофилизированные культуры, выделенные из желудочно-кишечного тракта человека, восстанавливают путем переноса содержимого ампул с бактериями видов Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium breve, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus paracasei (соотношение 1:1:1:1:1:1) в чашку Петри с питательной средой состава, г/л: дрожжевой экстракт - 5,0; папаиновый перевар соевой муки - 10,0; натрия гидрофосфат - 1,0; Твин-80 - 0,2; аммония цитрат - 1,0; цистеина гидрохлорид - 0,5; магния хлорид - 0,5; кислота аскорбиновая - 0,5; глюкоза - 10,0; мясной экстракт - 20,0; марганца сульфат - 0,05; натрия азид - 0,2; агар-агар - 15,0. Посевы инкубируют при температуре 37,0±2,0°С, рН 6,8±0,2 в течение 12,0 ч.To obtain a consortium of probiotic bacteria, lyophilized cultures isolated from the human gastrointestinal tract are restored by transferring the contents of ampoules with bacteria of the species Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium breve, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus rhamobius 1: 1, para 1: para : 1: 1) in a Petri dish with a nutrient medium composition, g / l: yeast extract - 5.0; papain digest of soy flour - 10.0; sodium hydrogen phosphate - 1.0; Twin-80 - 0.2; ammonium citrate - 1.0; cysteine hydrochloride - 0.5; magnesium chloride - 0.5; ascorbic acid - 0.5; glucose - 10.0; meat extract - 20.0; manganese sulfate - 0.05; sodium azide - 0.2; agar-agar - 15.0. Crops are incubated at a temperature of 37.0 ± 2.0 ° C, pH 6.8 ± 0.2 for 12.0 hours.
По окончании культивирования консорциум пробиотических бактерий подвергают сублимационной сушке при следующих параметрах: температура замораживания в защитной среде, содержащей 5% глицерина, -25°С при продолжительности 90 минут; температура сушки 30°С; продолжительность сушки 6 часов; тепловая нагрузка 5,45 кВт/м2; остаточное давление 0,6-0,8 кПа, толщина слоя сушки - 2 мм.At the end of cultivation, a consortium of probiotic bacteria is freeze-dried at the following parameters: freezing temperature in a protective medium containing 5% glycerol, -25 ° C for a duration of 90 minutes; drying temperature 30 ° C; drying time 6 hours; thermal load of 5.45 kW / m 2 ; residual pressure 0.6-0.8 kPa, drying
Для получения функционального продукта питания проводят смешивание консорциума пробиотических бактерий и биологически активных пептидов в соответствии с рецептурой, мас. %:To obtain a functional food product, a consortium of probiotic bacteria and biologically active peptides is mixed in accordance with the recipe, wt. %:
консорциум пробиотических бактерий - 25,0;consortium of probiotic bacteria - 25.0;
пептид Leu-Leu-Tyr - 37,5;Leu-Leu-Tyr peptide - 37.5;
пептид Trp-Tre-Ala-Glu-Glu-Lys-Glu-Leu - 37,5.peptide Trp-Tre-Ala-Glu-Glu-Lys-Glu-Leu - 37.5.
Для полученного функционального продукта питания в экспериментах in vitro и in vivo определяли противоопухолевые, антиоксидантные и иммуномодулирующие свойства.For the obtained functional food product, the antitumor, antioxidant and immunomodulating properties were determined in vitro and in vivo experiments.
Результаты определения противоопухолевых свойств функционального продукта питания представлены в таблице 1.The results of determining the antitumor properties of a functional food product are presented in table 1.
Результаты определения антиоксидантных свойств функционального продукта питания представлены на фиг. 1.The results of determining the antioxidant properties of a functional food product are presented in FIG. one.
Результаты оценки влияния функционального продукта питания на гуморальный иммунный ответ представлены в таблице 2.The results of evaluating the effect of a functional food product on the humoral immune response are presented in table 2.
Результаты оценки влияния функционального продукта питания на фагоцитоз представлены в таблице в таблице 3.The results of evaluating the effect of a functional food product on phagocytosis are presented in the table in table 3.
Пример 2Example 2
Биологически активные пептиды из белков молока выделяют аналогично примеру 1.Biologically active peptides from milk proteins isolated analogously to example 1.
Содержащиеся в белковых фракциях пептиды Tre-Gly-Glu-Asn-His-Asp и Lys-Val-Leu-Pro-Val-Pro-Glu разделяют с помощью нескольких последовательных циклов обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии, элюируя пептиды в градиенте концентраций ацетонитрила с использованием различных противоионов, при скорости потока 0,8 мл/мин.Peptides Tre-Gly-Glu-Asn-His-Asp and Lys-Val-Leu-Pro-Val-Pro-Glu contained in the protein fractions were separated by several successive cycles of reverse phase high performance liquid chromatography, eluting the peptides in a concentration gradient of acetonitrile with using various counterions at a flow rate of 0.8 ml / min.
Полученные биологически активные пептиды сгущают и подвергают распылительной сушке при параметрах, указанных в примере 1.The obtained biologically active peptides are concentrated and subjected to spray drying at the parameters specified in example 1.
Для получения консорциума пробиотических бактерий лиофилизированные культуры, выделенные из желудочно-кишечного тракта человека, восстанавливают путем переноса содержимого ампул с бактериями видов Bifidobacterium breve, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus salivarius, Streptococcus agalactiae, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus casei (соотношение 1:1:1:1:1:1:1:1) в чашку Петри с питательной средой состава, г/л: протеозопептон - 15,0; папаиновый перевар соевой муки - 10,0; натрия гидрофосфат - 1,5; Твин-80 - 1,0; аммония цитрат - 2,0; цистеина гидрохлорид - 1,0; магния хлорид - 0,5; кислота аскорбиновая - 0,2; натрия хлорид - 2,5; глюкоза - 10,0; мясной экстракт - 10,0; натрия азид - 0,2; агар-агар - 15,0. Посевы инкубируют при температуре 37,0±2,0°С, рН 7,0±0,2 в течение 12,0 ч.To obtain a consortium of probiotic bacteria, lyophilized cultures isolated from the human gastrointestinal tract are reconstructed by transferring the contents of ampoules with bacteria of the species Bifidobacterium breve, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus salivariusaciocacactocobactococactobococactocobococactococactococactocobococactococactococactococactus, and Streococactus : 1: 1: 1: 1: 1: 1: 1) into a Petri dish with a nutrient medium composition, g / l: proteozopeptone - 15.0; papain digest of soy flour - 10.0; sodium hydrogen phosphate - 1.5; Twin-80 - 1.0; ammonium citrate - 2.0; cysteine hydrochloride - 1.0; magnesium chloride - 0.5; ascorbic acid - 0.2; sodium chloride - 2.5; glucose - 10.0; meat extract - 10.0; sodium azide - 0.2; agar-agar - 15.0. Crops are incubated at a temperature of 37.0 ± 2.0 ° C, pH 7.0 ± 0.2 for 12.0 hours.
По окончании культивирования консорциум пробиотических бактерий подвергают сублимационной сушке при параметрах, указанных в примере 1.At the end of the cultivation, a consortium of probiotic bacteria is freeze-dried at the parameters specified in example 1.
Для получения функционального продукта питания проводят смешивание консорциума пробиотических бактерий и биологически активных пептидов в соответствии с рецептурой, мас. %:To obtain a functional food product, a consortium of probiotic bacteria and biologically active peptides is mixed in accordance with the recipe, wt. %:
консорциум пробиотических бактерий - 50,0;consortium of probiotic bacteria - 50.0;
пептид Tre-Gly-Glu-Asn-His-Asp - 25,0;Tre-Gly-Glu-Asn-His-Asp peptide 25.0;
пептид Lys-Val-Leu-Pro-Val-Pro-Glu - 25,0.Lys-Val-Leu-Pro-Val-Pro-Glu peptide - 25.0.
Для полученного функционального продукта питания в экспериментах in vitro и in vivo определяли противоопухолевые, антиоксидантные и иммуномодулирующие свойства.For the obtained functional food product, the antitumor, antioxidant and immunomodulating properties were determined in vitro and in vivo experiments.
Результаты определения противоопухолевых свойств функционального продукта питания представлены в таблице 1.The results of determining the antitumor properties of a functional food product are presented in table 1.
Результаты определения антиоксидантных свойств функционального продукта питания представлены на фиг. 1.The results of determining the antioxidant properties of a functional food product are presented in FIG. one.
Результаты оценки влияния функционального продукта питания на гуморальный иммунный ответ представлены в таблице 2.The results of evaluating the effect of a functional food product on the humoral immune response are presented in table 2.
Результаты оценки влияния функционального продукта питания на фагоцитоз представлены в таблице в таблице 3.The results of evaluating the effect of a functional food product on phagocytosis are presented in the table in table 3.
Пример 3Example 3
Биологически активные пептиды из белков молока выделяют аналогично примеру 1.Biologically active peptides from milk proteins isolated analogously to example 1.
Содержащиеся в белковых фракциях пептиды Lys-Glu-Asn и Leu-Leu-Tyr-Glu-Glu-Pro-Val-Leu-Gly-Pro-Val-Gly-Pro-Pro-Pro-Ile-Ile-Val разделяют с помощью нескольких последовательных циклов обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии, элюируя пептиды в градиенте концентраций ацетонитрила с использованием различных противоионов, при скорости потока 0,8 мл/мин.The peptides contained in the protein fractions Lys-Glu-Asn and Leu-Leu-Tyr-Glu-Glu-Pro-Val-Leu-Gly-Pro-Val-Gly-Pro-Pro-Pro-Ile-Ile-Val are separated by several successive cycles of reverse phase high performance liquid chromatography, eluting peptides in a gradient of acetonitrile concentrations using various counterions, at a flow rate of 0.8 ml / min.
Полученные биологически активные пептиды сгущают и подвергают распылительной сушке при параметрах, указанных в примере 1.The obtained biologically active peptides are concentrated and subjected to spray drying at the parameters specified in example 1.
Для получения консорциума пробиотических бактерий лиофилизированные культуры, выделенные из желудочно-кишечного тракта человека, восстанавливают путем переноса содержимого ампул с бактериями видов Lactobacillus fermentum, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus salivarius, Streptococcus agalactiae, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus paracasei (соотношение 1:1:1:1:1:1:1) в чашку Петри с питательной средой состава, г/л: дрожжевой экстракт - 5,0; протеозопептон - 3,0; панкреатический гидролизат казеина - 25,0; папаиновый перевар соевой муки - 7,5; натрия гидрофосфат - 2,0; лактоза - 2,0; аммония цитрат -2,0; цистеина гидрохлорид - 0,5; магния хлорид - 0,5; кислота аскорбиновая - 0,2; натрия хлорид - 4,0; глюкоза - 5,0; мясной экстракт - 15,0; марганца сульфат - 0,02; натрия азид - 0,1; агар-агар - 15,0. Посевы инкубируют при температуре 37,0±2,0°С, рН 7,0±0,2 в течение 12,0 ч.For consortium probiotic bacteria lyophilized culture isolated from the human gastrointestinal tract is reduced by transferring the contents of the vials with the bacteria species Lactobacillus fermentum, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus salivarius, Streptococcus agalactiae, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus paracasei (ratio 1: 1: 1: 1: 1: 1: 1) in a Petri dish with a nutrient medium composition, g / l: yeast extract - 5.0; proteozopeptone - 3.0; casein pancreatic hydrolyzate - 25.0; papain digest of soy flour - 7.5; sodium hydrogen phosphate - 2.0; lactose - 2.0; ammonium citrate -2.0; cysteine hydrochloride - 0.5; magnesium chloride - 0.5; ascorbic acid - 0.2; sodium chloride - 4.0; glucose - 5.0; meat extract - 15.0; manganese sulfate - 0.02; sodium azide - 0.1; agar-agar - 15.0. Crops are incubated at a temperature of 37.0 ± 2.0 ° C, pH 7.0 ± 0.2 for 12.0 hours.
По окончании культивирования консорциум пробиотических бактерий подвергают сублимационной сушке при параметрах, указанных в примере 1.At the end of the cultivation, a consortium of probiotic bacteria is freeze-dried at the parameters specified in example 1.
Для получения функционального продукта питания проводят смешивание консорциума пробиотических бактерий и биологически активных пептидов в соответствии с рецептурой, мас. %:To obtain a functional food product, a consortium of probiotic bacteria and biologically active peptides is mixed in accordance with the recipe, wt. %:
консорциум пробиотических бактерий - 50,0;consortium of probiotic bacteria - 50.0;
пептид Lys-Glu-Asn - 25,0;Lys-Glu-Asn peptide - 25.0;
пептид Leu-Leu-Tyr-Glu-Glu-Pro-Val-Leu-Gly-Pro-Val-Gly-Pro-Pro-Pro-Ile-Ile-Val - 25,0.Leu-Leu-Tyr-Glu-Glu-Pro-Val-Leu-Gly-Pro-Val-Gly-Pro-Pro-Pro-Ile-Ile-Val peptide - 25.0.
Для полученного функционального продукта питания в экспериментах in vitro и in vivo определяли противоопухолевые, антиоксидантные и иммуномодулирующие свойства.For the obtained functional food product, the antitumor, antioxidant and immunomodulating properties were determined in vitro and in vivo experiments.
Результаты определения противоопухолевых свойств функционального продукта питания представлены в таблице 1.The results of determining the antitumor properties of a functional food product are presented in table 1.
Результаты определения антиоксидантных свойств функционального продукта питания представлены на фиг. 1.The results of determining the antioxidant properties of a functional food product are presented in FIG. one.
Результаты оценки влияния функционального продукта питания на гуморальный иммунный ответ представлены в таблице 2.The results of evaluating the effect of a functional food product on the humoral immune response are presented in table 2.
Результаты оценки влияния функционального продукта питания на фагоцитоз представлены в таблице 3.The results of evaluating the effect of a functional food product on phagocytosis are presented in table 3.
Пример 4Example 4
Биологически активные пептиды из белков молока выделяют аналогично примеру 1.Biologically active peptides from milk proteins isolated analogously to example 1.
Содержащиеся в белковых фракциях пептиды Tyr-Pro-Pro-Pro-Gly-Pro-Ile и Lys-Val-Leu-Pro-Val-Pro-Glu разделяют с помощью нескольких последовательных циклов обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии, элюируя пептиды в градиенте концентраций ацетонитрила с использованием различных противоионов, при скорости потока 0,8 мл/мин.The peptides contained in the protein fractions Tyr-Pro-Pro-Pro-Gly-Pro-Ile and Lys-Val-Leu-Pro-Val-Pro-Glu were separated by several successive cycles of reverse phase high performance liquid chromatography, eluting the peptides in a concentration gradient acetonitrile using various counterions at a flow rate of 0.8 ml / min.
Полученные биологически активные пептиды сгущают и подвергают распылительной сушке при параметрах, указанных в примере 1.The obtained biologically active peptides are concentrated and subjected to spray drying at the parameters specified in example 1.
Для получения консорциума пробиотических бактерий лиофилизированные культуры, выделенные из желудочно-кишечного тракта человека, восстанавливают путем переноса содержимого ампул с бактериями видов Bifidobacteriu longum, Bifidobacterium bifidum, Lactobacillus salivarius, Streptococcus agalactiae, Bifidobacterium adolescentis, Lactobacillus paracasei (соотношение 1:1:1:1:1:1) в чашку Петри с питательной средой состава, г/л: дрожжевой экстракт - 5,0; панкреатический гидролизат казеина - 30,0; папаиновый перевар соевой муки - 5,0; натрия гидрофосфат - 1,0; Твин-80 - 1,0; лактоза - 2,5; аммония цитрат - 2,0; цистеина гидрохлорид - 1,0; магния хлорид - 0,5; кислота аскорбиновая - 0,5; натрия ацетат - 0,3; натрия хлорид - 2,0; глюкоза - 7,5; мясной экстракт - 10,0; марганца сульфат - 0,05; натрия азид - 0,2; агар-агар - 12,0. Посевы инкубируют при температуре 37,0±2,0°С, рН 7,2±0,2 в течение 12,0 ч.To obtain a consortium of probiotic bacteria, lyophilized cultures isolated from the human gastrointestinal tract are reconstructed by transferring the contents of ampoules with bacteria of the species Bifidobacteriu longum, Bifidobacterium bifidum, Lactobacillus salivarius, Streptococcus agalactiae, Bifidobacterium lobacis 1: 1 ratio: 1: 1 : 1: 1) in a Petri dish with a nutrient medium composition, g / l: yeast extract - 5.0; casein pancreatic hydrolyzate - 30.0; papain digest of soy flour - 5.0; sodium hydrogen phosphate - 1.0; Twin-80 - 1.0; lactose - 2.5; ammonium citrate - 2.0; cysteine hydrochloride - 1.0; magnesium chloride - 0.5; ascorbic acid - 0.5; sodium acetate - 0.3; sodium chloride - 2.0; glucose - 7.5; meat extract - 10.0; manganese sulfate - 0.05; sodium azide - 0.2; agar-agar - 12.0. Crops are incubated at a temperature of 37.0 ± 2.0 ° C, pH 7.2 ± 0.2 for 12.0 hours.
По окончании культивирования консорциум пробиотических бактерий подвергают сублимационной сушке при параметрах, указанных в примере 1.At the end of the cultivation, a consortium of probiotic bacteria is freeze-dried at the parameters specified in example 1.
Для получения функционального продукта питания проводят смешивание консорциума пробиотических бактерий и биологически активных пептидов в соответствии с рецептурой, мас. %:To obtain a functional food product, a consortium of probiotic bacteria and biologically active peptides is mixed in accordance with the recipe, wt. %:
консорциум пробиотических бактерий - 30,0;consortium of probiotic bacteria - 30.0;
пептид Tyr-Pro-Pro-Pro-Gly-Pro-Ile - 35,0;peptide Tyr-Pro-Pro-Pro-Gly-Pro-Ile - 35.0;
пептид Lys-Val-Leu-Pro-Val-Pro-Glu - 35,0.Lys-Val-Leu-Pro-Val-Pro-Glu peptide - 35.0.
Для полученного функционального продукта питания в экспериментах in vitro и in vivo определяли противоопухолевые, антиоксидантные и иммуномодулирующие свойства.For the obtained functional food product, the antitumor, antioxidant and immunomodulating properties were determined in vitro and in vivo experiments.
Результаты определения противоопухолевых свойств функционального продукта питания представлены в таблице 1.The results of determining the antitumor properties of a functional food product are presented in table 1.
Результаты определения антиоксидантных свойств функционального продукта питания представлены на фиг. 1.The results of determining the antioxidant properties of a functional food product are presented in FIG. one.
Результаты оценки влияния функционального продукта питания на гуморальный иммунный ответ представлены в таблице 2.The results of evaluating the effect of a functional food product on the humoral immune response are presented in table 2.
Результаты оценки влияния функционального продукта питания на фагоцитоз представлены в таблице в таблице 3.The results of evaluating the effect of a functional food product on phagocytosis are presented in the table in table 3.
Пример 5Example 5
Биологически активные пептиды из белков молока выделяют аналогично примеру 1.Biologically active peptides from milk proteins isolated analogously to example 1.
Содержащиеся в белковых фракциях пептиды Lys-Glu и Tre-Gly-Glu-Asn-His-Asp разделяют с помощью нескольких последовательных циклов обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии, элюируя пептиды в градиенте концентраций ацетонитрила с использованием различных противоионов, при скорости потока 0,8 мл/мин.The peptides Lys-Glu and Tre-Gly-Glu-Asn-His-Asp contained in the protein fractions were separated by several successive cycles of reverse phase high performance liquid chromatography, eluting the peptides in a gradient of acetonitrile concentrations using various counterions at a flow rate of 0.8 ml / min
Полученные биологически активные пептиды сгущают и подвергают распылительной сушке при параметрах, указанных в примере 1.The obtained biologically active peptides are concentrated and subjected to spray drying at the parameters specified in example 1.
Для получения консорциума пробиотических бактерий лиофилизированные культуры, выделенные из желудочно-кишечного тракта человека, восстанавливают путем переноса содержимого ампул с бактериями видов Lactobacillus reuteri, Bifidobacterium bifidum, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus salivarius, Streptococcus agalactiae, Enterococcus faecium (соотношение 1:1:1:1:1:1:1) в чашку Петри с питательной средой состава, г/л: дрожжевой экстракт - 10,0; панкреатический гидролизат казеина - 20,0; натрия гидрофосфат - 2,5; Твин-80 - 0,7; лактоза - 5,0; аммония цитрат - 0,5; цистеина гидрохлорид - 1,0; магния хлорид - 1,0; кислота аскорбиновая - 0,1; натрия ацетат - 0,2; натрия хлорид - 3,0; глюкоза - 5,0; мясной экстракт - 15,0; марганца сульфат - 0,1; натрия азид - 0,2; агар-агар - 12,0. Посевы инкубируют при температуре 37,0±2,0°С, рН 7,0±0,2 в течение 12,0 ч.To obtain a consortium of probiotic bacteria, lyophilized cultures isolated from the human gastrointestinal tract are reconstructed by transferring the contents of ampoules with bacteria of the species Lactobacillus reuteri, Bifidobacterium bifidum, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus plantarum,
По окончании культивирования консорциум пробиотических бактерий подвергают сублимационной сушке при параметрах, указанных в примере 1.At the end of the cultivation, a consortium of probiotic bacteria is freeze-dried at the parameters specified in example 1.
Для получения функционального продукта питания проводят смешивание консорциума пробиотических бактерий и биологически активных пептидов в соответствии с рецептурой, мас. %:To obtain a functional food product, a consortium of probiotic bacteria and biologically active peptides is mixed in accordance with the recipe, wt. %:
консорциум пробиотических бактерий - 30,0;consortium of probiotic bacteria - 30.0;
пептид Lys-Glu - 35,0;Lys-Glu peptide - 35.0;
пептид Tre-Gly-Glu-Asn-His-Asp - 35,0.Peptide Tre-Gly-Glu-Asn-His-Asp - 35.0.
Для полученного функционального продукта питания в экспериментах in vitro и in vivo определяли противоопухолевые, антиоксидантные и иммуномодулирующие свойства.For the obtained functional food product, the antitumor, antioxidant and immunomodulating properties were determined in vitro and in vivo experiments.
Результаты определения противоопухолевых свойств функционального продукта питания представлены в таблице 1.The results of determining the antitumor properties of a functional food product are presented in table 1.
Результаты определения антиоксидантных свойств функционального продукта питания представлены на фиг. 1.The results of determining the antioxidant properties of a functional food product are presented in FIG. one.
Результаты оценки влияния функционального продукта питания на гуморальный иммунный ответ представлены в таблице 2.The results of evaluating the effect of a functional food product on the humoral immune response are presented in table 2.
Результаты оценки влияния функционального продукта питания на фагоцитоз представлены в таблице в таблице 3.The results of evaluating the effect of a functional food product on phagocytosis are presented in the table in table 3.
Из таблицы 1 следует, что функциональные продукты питания на основе консорциумов пробиотических бактерий и биологически активных пептидов, полученные в соответствии с описанными примерами, характеризуются противоопухолевой активностью по отношению к тестируемым клеточным линиям: лимфомы Беркитта ЛБР2, рака предстательной железы человека DU 145, рака молочной железы человека MDAMB-231 и MCF7, гепатоцеллюлярной карциномы HepG2, рака головного мозга U-87, рака поджелудочной железы человека PANC-1.From table 1 it follows that functional foods based on consortia of probiotic bacteria and biologically active peptides obtained in accordance with the described examples are characterized by antitumor activity in relation to the tested cell lines: Burkitt’s lymphoma LBR2, human prostate cancer DU 145, breast cancer human MDAMB-231 and MCF7, hepatocellular carcinoma HepG2, brain cancer U-87, human pancreatic cancer PANC-1.
Данные фиг.1 свидетельствуют о том, что функциональные продукты питания на основе консорциумов пробиотических бактерий и биологически активных пептидов, полученные в соответствии с описанными примерами, характеризуются выраженными антиоксидантными свойствами (величина тролокс-эквивалента/109 клеток находится в диапазоне от 345 до 1488). При этом максимальная антиоксидантная активность обнаружена у функционального продукта, приготовленного по примеру 2 (от 500 до 1545).The data of Fig. 1 indicate that functional foods based on consortia of probiotic bacteria and biologically active peptides obtained in accordance with the described examples are characterized by pronounced antioxidant properties (the value of trolox equivalent / 109 cells is in the range from 345 to 1488). Moreover, the maximum antioxidant activity was found in the functional product prepared according to example 2 (from 500 to 1545).
Из таблицы 2 видно, что все функциональные продукты питания на основе консорциумов пробиотических бактерий и биологически активных пептидов, полученные в соответствии с описанными примерами, вызывают увеличение антителообразующих клеток в селезенке крыс в 1,26-1,33 раз по сравнению с контролем. В пересчете на 1 млн спленоцитов исследуемые функциональные продукты питания стимулируют антителогенез. Кроме того, из таблицы 2 видно, что исследуемые продукты ослабляют гиперчувствительностью замедленного типа к эритроцитам барана, что может объясняться наличием у разработанных продуктов противовоспалительного эффекта.Table 2 shows that all functional food products based on consortia of probiotic bacteria and biologically active peptides obtained in accordance with the described examples cause an increase in antibody-forming cells in the rat spleen by 1.26-1.33 times compared with the control. In terms of 1 million splenocytes, the studied functional food products stimulate antibody production. In addition, from table 2 it can be seen that the studied products weaken the delayed-type hypersensitivity to sheep erythrocytes, which may be explained by the presence of an anti-inflammatory effect in the developed products.
Из таблицы 3 следует, что при введении лабораторным животным функциональных продуктов питания на основе консорциумов пробиотических бактерий и биологически активных пептидов, полученных в соответствии с описанными примерами, в течение 16 дней наблюдается увеличение числа фагоцитирующих клеток (3,89-5,38%) по сравнению с контролем (2,71%). Активность фагоцитов у животных, получавших исследуемые продукты, аналогична фагоцитарному индексу животных, которым вводят оксиметилурацил (2,02 и 2,54, соответственно). На основании анализа абсолютного фагоцитарного показателя установлено, что все изучаемые функциональные продукты питания обладают способностью стимулировать фагоцитоз.From table 3 it follows that when the laboratory animals introduced functional foods based on consortia of probiotic bacteria and biologically active peptides obtained in accordance with the described examples, an increase in the number of phagocytic cells (3.89-5.38%) is observed over 16 days compared with control (2.71%). The activity of phagocytes in animals treated with the studied products is similar to the phagocytic index of animals that are injected with oxymethyluracil (2.02 and 2.54, respectively). Based on the analysis of the absolute phagocytic index, it was found that all studied functional food products have the ability to stimulate phagocytosis.
Таким образом, установлено, что разработанные продукты на основе консорциумов пробиотических бактерий и биологически активных пептидов, характеризуются выраженными противоопухолевыми, антиоксидантными и иммуномодулирующими свойствами, что позволяет использовать их в качестве функционального питания в восстановительной терапии онкологических больных.Thus, it was found that the developed products based on consortia of probiotic bacteria and biologically active peptides are characterized by pronounced antitumor, antioxidant and immunomodulating properties, which allows them to be used as functional nutrition in the rehabilitation therapy of cancer patients.
Получены предварительные результаты клинических исследований, свидетельствующие о том, что включение в рацион питания больных колоректальным раком функциональных продуктов питания на основе консорциумов пробиотических бактерий и биологически активных пептидов, выделенных из белков молока, полученных в соответствии с примерами 1-5, приводит к положительной динамике в бактериальном составе микрофлоры желудочно-кишечного тракта у онкологических больных, что выражается в увеличении количества полезной микрофлоры (бифидобактерий, лактобактерий, молочнокислых бактерий, энтерококков, эшерихий с нормальной ферментацией) и уменьшении содержания условно-патогенных бактерий (Klebsiella pneumoniae, Enterobacter spp., Proteus spp., Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter, Clostridium).Preliminary results of clinical studies have been obtained, indicating that the inclusion in the diet of patients with colorectal cancer of functional foods based on consortia of probiotic bacteria and biologically active peptides isolated from milk proteins obtained in accordance with examples 1-5, leads to a positive dynamics in the bacterial composition of the microflora of the gastrointestinal tract in cancer patients, which is expressed in an increase in the number of beneficial microflora (bifidobacteria, lact bacteria, lactobacilli, enterococci, Escherichia normal fermentation) and reducing the content of opportunistic bacteria (Klebsiella pneumoniae, Enterobacter spp., Proteus spp., Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter, Clostridium).
Claims (20)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2016119758A RU2659240C2 (en) | 2016-05-23 | 2016-05-23 | Method for obtaining a functional food for aftercare of oncologic patients |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2016119758A RU2659240C2 (en) | 2016-05-23 | 2016-05-23 | Method for obtaining a functional food for aftercare of oncologic patients |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2016119758A RU2016119758A (en) | 2017-11-28 |
RU2659240C2 true RU2659240C2 (en) | 2018-06-29 |
Family
ID=60580821
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2016119758A RU2659240C2 (en) | 2016-05-23 | 2016-05-23 | Method for obtaining a functional food for aftercare of oncologic patients |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2659240C2 (en) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2791802C1 (en) * | 2022-07-19 | 2023-03-13 | федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Казанский (Приволжский) федеральный университет" (ФГАОУ ВО КФУ) | Method for nutritional support of patients with breast cancer chemotherapy |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2308483C2 (en) * | 1999-01-15 | 2007-10-20 | ЭНТЕРПРАЙЗ АЙЭЛЭНД (торгующая как БайоРисёрч Айэлэнд) | Strain bifidobacterium longum infantis for probiotic production, anti-microbial agent and preparation based on strain bifidobacterium longum infantis with immunomodulating properties |
US20070298144A1 (en) * | 2004-10-22 | 2007-12-27 | Compagnie Gervais Danone | Method for Protecting Bioactive Food Ingredients Using Decoy Ingredients |
RU2362579C1 (en) * | 2007-11-26 | 2009-07-27 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Сиа Пептайдс" | Pharmaceutical composition on basis of peptide possessing antitumoral action |
WO2010033424A2 (en) * | 2008-09-19 | 2010-03-25 | Nestec S.A. | Nutritional support of the immune system during anti-cancer treatment |
US20140271553A1 (en) * | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Mead Johnson Nutrition (Asia Pacifci) Pte. Ltd. | Nutritional Compositions Containing A Peptide Component with Anti-Inflammatory Properties and Uses Thereof |
WO2014150571A1 (en) * | 2013-03-15 | 2014-09-25 | Mjn U.S. Holdings Llc | Reducing proinflammatory response |
-
2016
- 2016-05-23 RU RU2016119758A patent/RU2659240C2/en active
Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2308483C2 (en) * | 1999-01-15 | 2007-10-20 | ЭНТЕРПРАЙЗ АЙЭЛЭНД (торгующая как БайоРисёрч Айэлэнд) | Strain bifidobacterium longum infantis for probiotic production, anti-microbial agent and preparation based on strain bifidobacterium longum infantis with immunomodulating properties |
US20070298144A1 (en) * | 2004-10-22 | 2007-12-27 | Compagnie Gervais Danone | Method for Protecting Bioactive Food Ingredients Using Decoy Ingredients |
RU2362579C1 (en) * | 2007-11-26 | 2009-07-27 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Сиа Пептайдс" | Pharmaceutical composition on basis of peptide possessing antitumoral action |
WO2010033424A2 (en) * | 2008-09-19 | 2010-03-25 | Nestec S.A. | Nutritional support of the immune system during anti-cancer treatment |
US20140271553A1 (en) * | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Mead Johnson Nutrition (Asia Pacifci) Pte. Ltd. | Nutritional Compositions Containing A Peptide Component with Anti-Inflammatory Properties and Uses Thereof |
WO2014150571A1 (en) * | 2013-03-15 | 2014-09-25 | Mjn U.S. Holdings Llc | Reducing proinflammatory response |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2791802C1 (en) * | 2022-07-19 | 2023-03-13 | федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Казанский (Приволжский) федеральный университет" (ФГАОУ ВО КФУ) | Method for nutritional support of patients with breast cancer chemotherapy |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2016119758A (en) | 2017-11-28 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Soccol et al. | The potential of probiotics: a review. | |
JP5923238B2 (en) | Vagus nerve activator | |
US20220409676A1 (en) | Compositions comprising bacterial strains for use in increasng the bioavailability of amino acids derived from proteins | |
Kariyawasam et al. | Synbiotic yoghurt supplemented with novel probiotic Lactobacillus brevis KU200019 and fructooligosaccharides | |
US11751597B2 (en) | Compositions comprising bacterial strains for use in increasing the bioavailability of amino acids derived from proteins, and related food product methods and systems | |
MX2007012697A (en) | Infant formula with probiotics. | |
CA2470776A1 (en) | Malleable protein matrix and uses thereof | |
KR101927859B1 (en) | Method for improving the stability and coating efficiency of probiotics using ultrasonic wave after freeze-drying and food composition containing freeze-dried powder of probiotics prepared thereby as effective component | |
TW201305331A (en) | Bacterium lactobacillus helveticus having high proteolysis activity | |
Araújo et al. | Probiotics in dairy fermented products | |
Turkmen | Kefir as a functional dairy product | |
JP2011526486A (en) | Temperature-induced delivery of nutrients to the gastrointestinal tract by microorganisms | |
Alhaj et al. | Milk‐derived bioactive components from fermentation | |
TWI679982B (en) | Use of lactic acid bacteria fermented material for producing inhibitor of pentosine | |
JP5950993B2 (en) | Vagus nerve activator | |
RU2659240C2 (en) | Method for obtaining a functional food for aftercare of oncologic patients | |
CN115038341B (en) | Coated probiotics, food compositions comprising the same and methods for producing the same | |
RU2268599C2 (en) | Composition for manufacturing of fermented milky beverage and method for production thereof | |
CN101938912A (en) | Prevention and treatment of otitis media using iga enriched milk | |
Bahati et al. | Classification and applications of probiotics. | |
Kaur et al. | Role of fermented dairy foods in human health | |
Marini et al. | Development of probiotic yoghurts with high protein content by ultrafiltration | |
JP2019208486A (en) | Composition containing lactic acid bacterium, and composition for immunostimulation | |
Kontareva et al. | Improving the environmental safety of dairy products | |
RU2800267C1 (en) | Method for making enriched whey protein concentrate |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
HZ9A | Changing address for correspondence with an applicant |