RU2651033C1 - Способ диагностики хронического гастрита, ассоциированного с Helicobacter pylori - Google Patents

Способ диагностики хронического гастрита, ассоциированного с Helicobacter pylori Download PDF

Info

Publication number
RU2651033C1
RU2651033C1 RU2017113252A RU2017113252A RU2651033C1 RU 2651033 C1 RU2651033 C1 RU 2651033C1 RU 2017113252 A RU2017113252 A RU 2017113252A RU 2017113252 A RU2017113252 A RU 2017113252A RU 2651033 C1 RU2651033 C1 RU 2651033C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
helicobacter pylori
chronic gastritis
cells
patients
ifn
Prior art date
Application number
RU2017113252A
Other languages
English (en)
Inventor
Ольга Валентиновна Смирнова
Эдуард Вильямович Каспаров
Владислав Владимирович Цуканов
Александр Александрович Синяков
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный исследовательский центр "Красноярский научный центр Сибирского отделения Российской академии наук" (ФИЦ КНЦ СО РАН)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный исследовательский центр "Красноярский научный центр Сибирского отделения Российской академии наук" (ФИЦ КНЦ СО РАН) filed Critical Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный исследовательский центр "Красноярский научный центр Сибирского отделения Российской академии наук" (ФИЦ КНЦ СО РАН)
Priority to RU2017113252A priority Critical patent/RU2651033C1/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2651033C1 publication Critical patent/RU2651033C1/ru

Links

Classifications

    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Изобретение относится к медицине и предназначено для диагностики хронического гастрита, ассоциированного с Helicobacter pylori. Проводят иммунологическое исследование гепаринизированной венозной крови больных. Методом непрямой иммунофлюоресценции в крови определяют абсолютное количество естественных киллеров (NK-клеток), а в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа определяют уровни цитокинов - интерлейкина-2 (ИЛ-2) и интерферона-гамма (ИФН-γ). При абсолютном количестве NK-клеток ниже 0,17×109/л, уровне ИЛ-2 ниже 3,35 пг/мл, ИФН-γ ниже 2,25 пг/мл диагностируют хронический гастрит, ассоциированный с Helicobacter pylori, с атрофическими изменениями слизистой оболочки желудка. Способ позволяет своевременно диагностировать хронический атрофический гастрит, корректировать план и тактику лечения данной категории больных. 2 пр.

Description

Изобретение относится к медицине, а именно к гастроэнтерологии и иммунологии, и может быть использовано для диагностики хронического атрофического гастрита.
На сегодняшний день хронический гастрит (ХГ) - наиболее распространенное заболевание желудочно-кишечного тракта. По данным Всемирной организации здравоохранения хроническим гастритом болеют 80% населения Земли. Считается, что инфекция Helicobacter pylori (Н. pylori) является одной из распространенных причин возникновения хронического гастрита, и степень выраженности хронического гастрита зависит от вирулентности штаммов Н. pylori, а развитие атрофии - от генетической предрасположенности и индивидуального ответа на инфицирование Н. pylori [1]. Возникающие при хроническом гастрите структурные изменения слизистой оболочки желудка приводят к нарушению основных функций желудка, в первую очередь кислото- и пепсинообразующей. При этом одной из важных эпидемиологических особенностей хронических гастритов является их предраковый потенциал. Так, при нормальной структуре слизистой оболочки желудка 10-летний риск возникновения рака желудка составляет менее 1%, при хроническом аутоиммунном гастрите с выраженной атрофией он равен 1-9%, а при Н. pylori - ассоциированном хроническом гастрите с выраженной атрофией - 4-30%. [1]. В связи с этим функционально-морфологическое изучение желудка при различных типах ХГ дает возможность предусмотреть возможные варианты дальнейшего развития патологии, провести патогенетическое лечение и предупредить прогрессирование болезни. Таким образом, ранняя диагностика хронического атрофического гастрита, ассоциированного с Helicobacter pylori, является актуальной для предупреждения трансформации его в рак желудка.
Известен способ диагностики хронического гастрита, ассоциированного с Helicobacter pylori, включающий взятие биоматериала в виде слизистого секрета желудка со всей поверхности антрального и пилорического отделов, смешивание биоматериала с реактивом Несслера для определения в нем наличия аммиака и последующую оценку характера окраски смеси [2]. При окрашивании смеси в желтый цвет и/или выпадении из нее осадка диагностируют хронический гастрит, ассоциированный с Helicobacter pylori. Недостатки известного способа: трудоемкость из-за необходимости забора слизистого секрета со всей поверхности как антрального, так и пилорического отделов желудка, малая информативность, так как оценивается только показатель цвета смеси, при этом не учитываются возможные оттенки полученной окраски смеси и другие характеристики и параметры.
Задачей изобретения является создание информативного способа для ранней диагностики хронического гастрита, ассоциированного с Helicobacter pylori с атрофическими изменениями слизистой оболочки.
Задача достигается тем, что проводят иммунологическое исследование гепаринизированной венозной крови больных. Для этого методом непрямой иммунофлюоресценции в крови определяют абсолютное количество естественных киллеров (NK-клеток), а в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа определяют уровни цитокинов - интерлейкина-2 (ИЛ-2) и интерферона-гамма (ИФН-γ). При абсолютном количестве NK-клеток ниже 0,17×109/л, уровне ИЛ-2 ниже 3,35 пг/мл, ИФН-γ ниже 2,25 пг/мл диагностируют хронический гастрит, ассоциированный с Helicobacter pylori, с атрофическими изменениями слизистой оболочки желудка.
Развитие хронического гастрита - сложный патогенетический процесс, характеризующийся последовательными изменениями в слизистой оболочке желудка. Согласно каскаду Корреа, рак желудка развивается через гастрит-атрофию-метаплазию-рак, следовательно, пациенты с хроническим атрофическим гастритом подвергаются повышенному риску развития рака желудка. Это положение было подтверждено 4-м Маастрихтским консенсусом в 2010 г. и европейскими рекомендациями по ведению пациентов с предраковыми изменениями в желудке.
NK-клетки, естественные киллеры, - гетерогенная популяция лимфоцитов системы врожденного иммунитета. Они осуществляют противоопухолевый и противовирусный контроль организма. Кроме естественной цитолитической активности, натуральные киллеры оказывают регулирующее влияние на иммунные реакции посредством секреции цитокинов, хемокинов и ростовых факторов.
Цитокины, как регуляторы межклеточных взаимодействий в иммунной системе, также способствуют активации противоопухолевого иммунного ответа, являясь связующим звеном между иммунной и другими системами организма. ИЛ-2 индуцирует пролиферацию и усиление цитотоксической функции NK-клеток. NK-клетки служат одним из основных источников ИФН-γ. Таким образом, использование в качестве достоверных маркеров диагностики атрофических изменений в слизистой оболочке желудка при хроническом гастрите абсолютное количество NK-клеток и содержание цитокинов в крови является целесообразным. Было доказано, что наиболее значимыми для диагностики атрофических изменений слизистой оболочки желудка, у больных хроническим гастритом, ассоциированным с Helicobacter pylori, является понижение количества NK-клеток ниже 0,17×109/л, уровни ИЛ-2 ниже 3,35 пг/мл, ИФН-γ ниже 2,25 пг/мл. При данных уровнях исследуемых цитокинов и абсолютном количестве NK-клеток наличие атрофических изменений слизистой оболочки желудка у больных хроническим гастритом следует признавать высоким.
Пороговые значения цитокинов ИЛ-2, ИФН-γ и количества NK-клеток получены опытным путем на основании сопоставления уровней исследуемых цитокинов и количества естественных киллеров с данными по наличию атрофических изменений слизистой оболочки желудка у больных хроническим гастритом, ассоциированным с Helicobacter pylori, полученных при последующем наблюдении за клиническим состоянием больных.
ИЛ-2 ниже 3,35 пг/мл ОШ=2,73 (95% ДИ=2,07-6,51, p1,2=0,02)
ИФН-γ ниже 2,25 пг/мл ОШ=4,23 (95%ДИ=2,63-9,61, p1,2=0,0008)
NK-клетки менее 0,17×109/л ОШ=7,21 (95%ДИ=2,45-16,28, p1,2=0,0007)
Проведенные исследования показали, что при развитии атрофических изменений слизистой оболочки желудка у больных хроническим гастритом уровни цитокинов варьировали в пределах: ИЛ-2 - от 2,8 до 9,5 пг/мл, ИФН-γ - от 2,03 до 4,8 пг/мл, количество NK-клеток - от 0,1×109 до 1,0×109/л. При этом в 100% случаев при заявленных уровнях исследуемых цитокинов (ИЛ-2 ниже 3,35 пг/мл, ИФН-γ ниже 2,25 пг/мл) и количестве NK-клеток (менее 0,17×109/л) у больных хроническим гастритом независимо от стадии заболевания развивались атрофические изменения слизистой оболочки желудка.
NK-клетки - CD16+CD56+-лимфоциты, участвуют в выработке как противовоспалительных, так и иммуносупрессирующих цитокинов, таких как фактор некроза опухоли-альфа и ИЛ-10, секретируют гранулоцитарно-макрофагальный и гранулоцитарный колониестимулирующий факторы, ИЛ-3 и служат одним из основных источников интерферона-гамма в организме. Биологическая роль NK-клеток в противоопухолевой активности, контроле инфекционного процесса, регуляции пролиферативной активности и дифференцировки гемопоэтических клеток, участие в реакции отторжения трансплантата.
Интерлейкин-2 (ИЛ-2) является плейотропным цитокином, стимулирует пролиферацию и активацию натуральных киллеров и цитотоксических лимфоцитов, способен индуцировать активность практически всех клонов цитотоксических клеток, стимулирует пролиферацию В-лимфоцитов и секрецию иммуноглобулинов.
Интерферон-гамма (ИФН-γ) обладает противоопухолевой активностью, активирует макрофаги, стимулирует иммунную цитотоксичность, усиливает макрофагальный киллинг, обладает антивирусной активностью.
Заявленный способ апробирован на 110 больных хроническим гастритом, ассоциированным с Helicobacter pylori (у 85 больных - хронический поверхностный гастрит, у 25 - хронический атрофический гастрит), проходивших лечение в гастроэнтерологическом отделение НИИ медицинских проблем Севера ФИЦ КНЦ СО РАН. У 24 больных были диагностированы атрофические изменения слизистой оболочки желудка, которые в дальнейшем подтвердились лабораторно-инструментальными исследованиями (эзофагогастродуоденоскопия с биопсией). У одного больного хроническим гастритом диагноз не совпал. Таким образом, совпадение результатов диагностики предложенным способом и общепринятым лабораторно-инструментальным методом составило 98,0%.
Способ осуществляется следующим образом.
У больных с диагнозом хронический гастрит, независимо от стадии заболевания, при поступлении в гастроэнтерологическое отделение забирают венозную кровь из локтевой вены свободным током в пробирку. Из образца выделяют лимфоциты и сыворотку. Методом непрямой иммунофлюоресценции иммунофенотипируют CD16+CD56+-лимфоциты (NK-клетки) и определяют их количество в 1 литре. Метод определения цитокинов основан на «сэндвич» варианте твердофазного иммуноферментного анализа с применением моно- и поликлональных антител к цитокинам ИЛ-2 и ИФН-γ с использованием коммерческих тест-систем «Вектор-Бест». При сочетании содержания цитокинов: ИЛ-2 ниже 3,35 пг/мл, ИФН-γ ниже 2,25 пг/мл и количества NK-клеток ниже 0,17×109/л, у больных хроническим гастритом, ассоциированным с Helicobacter pylori, независимо от стадии заболевания, диагностируют наличие атрофических изменений слизистой оболочки желудка.
Клинический пример 1. Больной С., 45 лет, поступил на обследование и стационарное лечение в гастроэнтерологическое отделение НИИ медицинских проблем Севера ФИЦ КНЦ СО РАН с диагнозом: хронический гастрит, обострение. При поступлении состояние больного средней степени тяжести, беспокоят явления диспепсии и боль в эпигастральной области.
Проведено обследование по заявленному способу. Определены уровни цитокинов в сыворотке крови и количество NK-клеток:
Figure 00000001
Согласно изобретению, у больного диагностирован хронический гастрит, ассоциированный с Helicobacter pylori, с атрофическими изменениями слизистой оболочки желудка. Установленный диагноз подтвержден данными ЭФГДС и биопсии. Больному назначена патогенетическая терапия.
Клинический пример 2. Больная Р., 59 лет, поступила на обследование и стационарное лечение в гастроэнтерологическое отделение НИИ медицинских проблем Севера ФИЦ КНЦ СО РАН с диагнозом: хронический гастрит, обострение. При поступлении состояние больной средней степени тяжести, беспокоит выраженная диспепсия. Проведено обследование по заявленному способу. Определены уровни цитокинов в сыворотке крови и количество NK-клеток:
Figure 00000002
Согласно изобретению, у больной не диагностирован хронический гастрит, ассоциированный с Helicobacter pylori, с атрофическими изменениями слизистой оболочки желудка. По данным ЭФГДС с биопсией: у больной хронический поверхностный гастрит, ассоциированный с Helicobacter pylori. Больной назначена патогенетическая терапия.
Технический результат от реализации предлагаемого способа:
- повышение точности диагностики развития атрофических изменений слизистой оболочки желудка у больных хроническим гастритом, ассоциированным с Helicobacter pylori за счет анализа регуляторного звена иммунной системы;
- возможность ранней диагностики атрофических изменений слизистой оболочки желудка при хроническом гастрите, ассоциированном с Helicobacter pylori;
- расширение арсенала средств для диагностики атрофических изменений слизистой оболочки желудка у больных хроническим гастритом, ассоциированном с Helicobacter pylori.
Таким образом, предложенный высокочувствительный информативный способ позволяет своевременно диагностировать хронический Helicobacter pylori-ассоциированный гастрит с атрофическими изменениями слизистой оболочки желудка, корректировать план и тактику лечения данной категории больных.
Источники информации
1. Ивашкин В.Т., Шептулин А.А., Лапина Т.Л. Хронический гастрит, вызванный инфекцией Helicobacter pylori: диагностика, клиническое значение, прогноз. Пособие для врачей. М., 2009. 24 с.
2. Патент №2069699 РФ. Способ диагностики хронического гастрита, ассоциированного с Helicobacter pylori. Опубл. 27.11.1996.

Claims (1)

  1. Способ диагностики хронического гастрита, ассоциированного с Helicobacter pylori, включающий исследование биологического материала, отличающийся тем, что проводят иммунологическое исследование гепаринизированной венозной крови больных, для этого методом непрямой иммунофлюоресценции в крови определяют абсолютное количество естественных киллеров (NK-клеток), а в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа определяют уровни цитокинов - интерлейкина-2 (ИЛ-2) и интерферона-гамма (ИФН-γ), и при абсолютном количестве NK-клеток ниже 0,17×109/л, уровне ИЛ-2 ниже 3,35 пг/мл, ИФН-γ ниже 2,25 пг/мл диагностируют хронический гастрит, ассоциированный с Helicobacter pylori, с атрофическими изменениями слизистой оболочки желудка.
RU2017113252A 2017-04-17 2017-04-17 Способ диагностики хронического гастрита, ассоциированного с Helicobacter pylori RU2651033C1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2017113252A RU2651033C1 (ru) 2017-04-17 2017-04-17 Способ диагностики хронического гастрита, ассоциированного с Helicobacter pylori

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2017113252A RU2651033C1 (ru) 2017-04-17 2017-04-17 Способ диагностики хронического гастрита, ассоциированного с Helicobacter pylori

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2651033C1 true RU2651033C1 (ru) 2018-04-18

Family

ID=61977103

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2017113252A RU2651033C1 (ru) 2017-04-17 2017-04-17 Способ диагностики хронического гастрита, ассоциированного с Helicobacter pylori

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2651033C1 (ru)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014087055A1 (en) * 2012-12-05 2014-06-12 Amplidiag Oy Method for detecting helicobacter pylori dna in a stool sample
RU2536018C2 (ru) * 2012-11-20 2014-12-20 Юлия Александровна Белая СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ЧАСТОТЫ ВСТРЕЧАЕМОСТИ АНТИГЕНОВ Helicobacter pylori НА ПЕРИД 2013-2019 ГГ.

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2536018C2 (ru) * 2012-11-20 2014-12-20 Юлия Александровна Белая СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ЧАСТОТЫ ВСТРЕЧАЕМОСТИ АНТИГЕНОВ Helicobacter pylori НА ПЕРИД 2013-2019 ГГ.
WO2014087055A1 (en) * 2012-12-05 2014-06-12 Amplidiag Oy Method for detecting helicobacter pylori dna in a stool sample

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
WATARI J et al., Helicobacter pylori associated chronic gastritis, clinical syndromes, precancerous lesions, and pathogenesis of gastric cancer development. World J Gastroenterol. 2014 May 14; N 20(18), c. 5461-73 PMID: 24833876.. *
ГРИГОРЬЕВ П.Я. и др., Справочное руководство по гастроэнтерологии, Москва, МИА-2003, с. 112-123. *
ГРИГОРЬЕВ П.Я. и др., Справочное руководство по гастроэнтерологии, Москва, МИА-2003, с. 112-123. WATARI J et al., Helicobacter pylori associated chronic gastritis, clinical syndromes, precancerous lesions, and pathogenesis of gastric cancer development. World J Gastroenterol. 2014 May 14; N 20(18), c. 5461-73 PMID: 24833876.. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Pillebout et al. Biomarkers of IgA vasculitis nephritis in children
Ruiz et al. What’s normal? Immune profiling of human milk from healthy women living in different geographical and socioeconomic settings
Qin et al. Th22 cells are associated with hepatocellular carcinoma development and progression
Bossowski et al. Lower proportions of CD4+ CD25high and CD4+ FoxP3, but not CD4+ CD25+ CD127low FoxP3+ T cell levels in children with autoimmune thyroid diseases
De Vita et al. Interleukin-6 serum level correlates with survival in advanced gastrointestinal cancer patients but is not an independent prognostic indicator
Hsu et al. IL2RG reversion event in a common lymphoid progenitor leads to delayed diagnosis and milder phenotype
Zhang et al. Elevated serum levels of interleukin-1β and interleukin-33 in patients with systemic sclerosis in Chinese population.
CN105051537B (zh) 细胞介导的免疫应答试验
Gozalbo et al. Assessment of the nutritional status, diet and intestinal parasites in hosted saharawi children
Tsuji et al. Association between bisphenol A diglycidyl ether-specific IgG in serum and food sensitization in young children
RU2651033C1 (ru) Способ диагностики хронического гастрита, ассоциированного с Helicobacter pylori
Sheldon et al. Three siblings with scleroderma (systemic sclerosis) and two with Raynaud's phenomenon from a single kindred
RU2445915C1 (ru) Способ прогнозирования риска снижения уровня резистентности организма к острым респираторным заболеваниям у детей в возрасте 3-7 лет по индексу авидности секреторного иммуноглобулина а
Schubert et al. The influence of the trace element zinc on the immune system
Štěpánová et al. Maternal exposure results in long-term deoxynivalenol persistence in piglets’ plasma and modulates the immune system
Mosbech Insect allergy: a comparative study including case histories and immunological parameters
Dilibe et al. Macrophage activation syndrome (MAS): a case report and narrative review
Ardila et al. Association between immunoglobulin G1 against Tannerella forsythia and reduction in the loss of attachment tissue
Shavkatovna et al. Diagnostic role of immunological and biochemical parameters in the gastrointestinal food allergy in children
Karlsson Cytokines as diagnostic biomarkers in canine pyometra and sepsis
Yagi et al. Expression of Leucine-rich Repeat-containing Protein 32 Following Lymphocyte Stimulation in Patients with Non-IgE-mediated Gastrointestinal Food Allergies.
Mizutani et al. Measurement of the concentration of serum soluble interleukin-2 receptor alpha chain in dogs with lymphoma
RU2572704C1 (ru) Способ прогнозирования инфекционных осложнений у больных миеломной болезнью
Nasution et al. The Difference in Serum Pepsinogen I, Pepsinogen II, Carcinoembryonic Antigen, and Carcinoma Antigen 72-4 Levels between Children with and without Helicobacter Pylori Infection
Sargın et al. Thyroid Function Tests in Ankylosing Spondylitis Patients on Anti-Tumour Necrosis Factor Treatment