RU2648142C1 - Новый сульфатированный фукоолигосахарид и способ его получения - Google Patents
Новый сульфатированный фукоолигосахарид и способ его получения Download PDFInfo
- Publication number
- RU2648142C1 RU2648142C1 RU2016152515A RU2016152515A RU2648142C1 RU 2648142 C1 RU2648142 C1 RU 2648142C1 RU 2016152515 A RU2016152515 A RU 2016152515A RU 2016152515 A RU2016152515 A RU 2016152515A RU 2648142 C1 RU2648142 C1 RU 2648142C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- sulfated
- formula
- minutes
- fucooligosaccharides
- residue
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title abstract description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 7
- 229920000855 Fucoidan Polymers 0.000 claims abstract description 17
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 16
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 241001260874 Sargassum horneri Species 0.000 claims abstract description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 claims abstract description 9
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims abstract description 8
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 101150108864 Ffar1 gene Proteins 0.000 claims abstract description 6
- 101100264077 Xenopus laevis wrn gene Proteins 0.000 claims abstract description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 6
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N Ammonium bicarbonate Chemical compound [NH4+].OC([O-])=O ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims abstract description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 claims abstract description 5
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 claims abstract description 4
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 claims abstract description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims abstract description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 5
- 229910000013 Ammonium bicarbonate Inorganic materials 0.000 abstract description 4
- 235000012538 ammonium bicarbonate Nutrition 0.000 abstract description 4
- 239000001099 ammonium carbonate Substances 0.000 abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 abstract 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 21
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 17
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 10
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical group C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 description 8
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N Fucose Natural products C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 4
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 241000285018 Formosa algae Species 0.000 description 3
- 241000199919 Phaeophyceae Species 0.000 description 3
- 238000001052 heteronuclear multiple bond coherence spectrum Methods 0.000 description 3
- 150000002772 monosaccharides Chemical group 0.000 description 3
- 0 CC([C@@](C(C1O)O[C@@](C(C2O)O)OC(*)[C@@]2O)O)O[C@]1O Chemical compound CC([C@@](C(C1O)O[C@@](C(C2O)O)OC(*)[C@@]2O)O)O[C@]1O 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 241000547293 Lambis Species 0.000 description 2
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 2
- 238000000990 heteronuclear single quantum coherence spectrum Methods 0.000 description 2
- 108010004131 poly(beta-D-mannuronate) lyase Proteins 0.000 description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 2
- 238000001896 rotating frame Overhauser effect spectroscopy Methods 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L sulfate group Chemical group S(=O)(=O)([O-])[O-] QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical group 0.000 description 2
- CQHWROCHCWOEOA-ALUYNVSLSA-N CC([C@H](C(C1O)O)O)O[C@H]1OC([C@H](C(C)O[C@H]1O)O)C1O Chemical compound CC([C@H](C(C1O)O)O)O[C@H]1OC([C@H](C(C)O[C@H]1O)O)C1O CQHWROCHCWOEOA-ALUYNVSLSA-N 0.000 description 1
- 241000004452 Fucus evanescens Species 0.000 description 1
- 206010017964 Gastrointestinal infection Diseases 0.000 description 1
- 229920002971 Heparan sulfate Polymers 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 239000012614 Q-Sepharose Substances 0.000 description 1
- 102000005262 Sulfatase Human genes 0.000 description 1
- 102000012086 alpha-L-Fucosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010061314 alpha-L-Fucosidase Proteins 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 208000019836 digestive system infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 150000008267 fucoses Chemical class 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- OQUKIQWCVTZJAF-UHFFFAOYSA-N phenol;sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O.OC1=CC=CC=C1 OQUKIQWCVTZJAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 108060007951 sulfatase Proteins 0.000 description 1
- 108091016226 sulfate binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H3/00—Compounds containing only hydrogen atoms and saccharide radicals having only carbon, hydrogen, and oxygen atoms
- C07H3/06—Oligosaccharides, i.e. having three to five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
- C07H1/06—Separation; Purification
- C07H1/08—Separation; Purification from natural products
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Abstract
Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложены новый сульфатированный фукоолигосахарид формулы II, представленной на фиг.3, и способ его получения. Осуществляют обработку фукоидана из Sargassum horneri рекомбинантной фукоиданазой FFA1 в Tris-HCl буфере с рН 7,2 при 37°С в течение 72-75 ч. Затем нагревают до 100°C в течение 5-10 мин. Далее высокомолекулярные продукты гидролиза осаждают 75% водным раствором этанола или ацетона. Затем образовавшийся осадок отделяют с помощью центрифугирования при 9000-10000 g в течение 20-30 мин. Супернатант наносят на колонку с анионообменным сорбентом, уравновешенную водой, и элюируют фукоолигосахариды линейным градиентом гидрокарбоната аммония со скоростью 1 мл/мин. Сначала элюируют сульфатированный фукоолигосахарид формулы II, затем сульфатированный фукоолигосахарид формулы I. Полученные фракции целевых продуктов лиофильно высушивают. Изобретение расширяет арсенал сульфатированных фукоолигосахаридов, полученных из бурой водоросли Sargassum horneri. 2 н.п. ф-лы, 3 ил., 2 табл., 2 пр.
Description
Изобретение относится к биотехнологии и касается получения новых сульфатированных фукоолигосахаридов из фукоиданов. Эти соединения могут быть использованы в научных исследованиях, а также в медицине, косметологии, сельском хозяйстве.
Фукоиданы - сульфатированные гетерополисахариды бурых водорослей обладают широким спектром биологической активности [Fitton, J.H., Stringer, D.N., and Karpiniec, S.S. (2015). Therapies from Fucoidan: An Update. Marin Drugs 13, 5920-5946]. Однако использование полимерных молекул в медицине практически невозможно из-за гетерогенности препаратов полисахаридов и невозможности их стандартизации. Поэтому стоит проблема получения из фукоидана олигосахаридов, имеющих постоянные структуры и стандартные характеристики. Применение ферментов для деполимеризации биологически активных фукоиданов и получение олигосахаридов открывает новые возможности использования этих соединений в фармацевтике и косметологии [Kusaykin, M.I., Silchenko, A.S., Zakharenko, A.M., and Zvyagintseva, T.N. (2016). Fucoidanases. Glycobiology 26, 3-12].
Описано использование фукозилированных олигосахаридов в составе композиции, используемой для предупреждения и/или лечения атопического дерматита и экземы [RU 2586776 С2, 10.06.2016], желудочно-кишечной инфекции [WO2016139333 А1, 09.09.2016]. Предложены новые N-сульфатированные олигосахариды, стимулирующие образование сосудов [RU 2559629 С2, 10.08.2015], а также новые сульфатированные производные олигосахаридов, эффективные в качестве ингибиторов гепаринсульфат-связывающих белков [RU 2483074 С2, 27.05.2013]. Известны фукоолигосахариды, которые могут быть использованы для защиты растений от патогенов [US 6984630 В1, 10.01.2006].
По сравнению с получением сульфатированных олигосахаридов многостадийным методом органического синтеза, ферментативное получение подобных олигосахаридов из фукоиданов отличается меньшей трудоёмкостью, существенно меньшим числом стадий получения и высоким выходом продуктов реакции.
Описано получение фукоолигосахаридов из фуканов деполимеризацией с помощью бактериальных эндофуканаз [US 6984630 В1, 10.01.2006].
Описано получение фукоолигосахаридов, используемых в области гликотехнологии, с помощью ферментов из фукоидана, полученного из бурых водорослей порядка Laminarinales. [US 6927289 В2, 09.08.2005].
Раннее нами были получены фукоолигосахариды ферментативным гидролизом фукоидана из бурой водоросли Fucus evanescens. Для этого фукоидан смешивали с нативной фукоиданазой FFA из морской бактерии Formosa algae в 0,015 М Na-фосфатном буфере, рН 7,2 и инкубировали в течение 72 ч при 25ºС. Высокомолекулярные продукты гидролиза осаждали 75% водным раствором этанола. Выпавший осадок центрифугировали при 10000 g в течение 30 мин. Супернатант упаривали на роторном испарителе, растворяли в дистиллированной воде и наносили на термостатируемую колонку с биогелем Р-6, уравновешенную водой. Фукоолигосахариды элюировали со скоростью 0,7 мл/мин. Присутствие сахаров в исследуемых фракциях проверяли фенол-сернокислотным методом. Низкомолекулярные фракции олигосахаридов объединяли, концентрировали на роторном испарителе и рехроматографировали. В результате получали дисахариды [Сильченко А.С. Фукоиданазы и альгинат-лиазы морской бактерии Formosa algae KMM 3553T и морского моллюска Lambis sp: диссертация на соискание ученой степени канд. хим. наук. ТИБОХ ДВО РАН, Владивосток, 2014, стр. 69].
На фиг. 1 (А, Б) представлены структуры дисахаридов.
Задача изобретения – расширение арсенала сульфатированных фукоолигосахаридов. Задача решена разработкой способа их получения из фукоидана, выделенного из бурой водоросли Sargassum horneri.
Технический результат, обеспечиваемый изобретением, заключается в получении новых сульфатированных фукоолигосахаридов постоянной структуры из фукоидана из Sargassum horneri.
В доступной патентной и другой научно-технической литературе заявляемые сульфатированные фукоолигосахариды не обнаружены.
Заявляемый сульфатированный фукоолигосахарид формулы I состоит из остатков фукозы (n=4), связанных чередующимися 1→3;1→4 гликозидными связями, сульфатные группы расположены при С2 в 1→3-связанных остатках фукозы, и при С2 и С3 в 1→4-связанных остатках фукозы.
На фиг. 2 представлена структура сульфатированного фукоолигосахарида формулы I.
Заявляемый сульфатированный фукоолигосахарид формулы II состоит из остатков фукозы (n=6), связанных чередующимися 1→3;1→4 гликозидными связями, сульфатные группы расположены при С2 в 1→3-связанных остатках фукозы, и при С2 и С3 в 1→4-связанных остатках фукозы, к третьему моносахаридному остатку, которого присоединена боковая цепь с 1→4 гликозидной связью, состоящая из 2 остатков несульфатированной фукозы, связанных между собой 1→2 гликозидной связью.
На фиг. 3 представлена структура сульфатированного фукоолигосахарида формулы II.
Заявляемый способ получения сульфатированных фукоолигосахаридов формул I и II заключается в том, что рекомбинантную фукоиданазу FFA1 в Tris-HCl буфере рН 7,2 смешивают с 5-10% раствором фукоидана из Sargassum horneri, смесь инкубируют при 37°С в течение 72-75 часов, затем нагревают до 100°С в течение 5-10 мин, далее высокомолекулярные продукты гидролиза осаждают 75% водным раствором этанола или ацетона, затем образовавшийся осадок отделяют с помощью центрифугирования при 9000-10000 g в течение 20-30 мин, а супернатант наносят на колонку с анионообменным сорбентом, уравновешенную водой, и элюируют фукоолигосахариды линейным градиентом гидрокарбоната аммония со скоростью 1 мл/мин, сначала сульфатированный фукоолигосахарид формулы II, затем сульфатированный фукоолигосахарид формулы I, далее полученные фракции целевых продуктов лиофильно высушивают.
Рекомбинантную фукоиданазу FFA1 получают известным способом [Сильченко А.С. Фукоиданазы и альгинат-лиазы морской бактерии Formosa algae KMM 3553T и морского моллюска Lambis sp: диссертация на соискание ученой степени канд. хим. наук. ТИБОХ ДВО РАН, Владивосток, 2014, стр. 110].
Фукоидан получают из бурой водоросли Sargassum horneri по известной методике [Zvyagintseva, T. N., Shevchenko, N. M., et.al. (1999). A new procedure for the separation of water-soluble polysaccharides from brown seaweeds. Carbohydr. Res. 322, 32-39].
Изобретение иллюстрируется примерами конкретного выполнения.
ПРИМЕР 1
Рекомбинантную фукоиданазу FFA1 (1 мг) в Tris-HCl буфере, рН 7,2 смешивают с 5% раствором фукоидана из Sargassum horneri. Смесь инкубируют при 37°С в течение 72 ч, затем нагревают до 100°С в течение 5 мин. Образовавшийся осадок отделяют с помощью центрифугирования и отбрасывают. В супернатант добавляют этанол до достижения его концентрации 75%. Выпавший осадок (высокомолекулярная фракция) центрифугируют при 9000 g в течение 20 мин. Супернатант (низкомолекулярная фракция) наносят на колонку с сорбентом Q-Sepharose, уравновешенную водой. Олигосахариды элюируют линейным градиентом гидрокарбоната аммония со скоростью 1 мл/мин, сначала сульфатированный фукоолигосахарид формулы II, затем сульфатированный фукоолигосахарид формулы I. Полученные фракции олигосахаридов лиофильно высушивают. Выход целевых продуктов составляет 5-15% от веса низкомолекулярной фракции.
ПРИМЕР 2
Рекомбинантную фукоиданазу FFA1 (1 мг) в Tris-HCl буфере, рН 7,2 смешивают с 10% раствором фукоидана из Sargassum horneri. Смесь инкубируют при 37°С в течение 75 ч, затем нагревают до 100°С в течение 10 мин. Образовавшийся осадок отделяют с помощью центрифугирования и отбрасывают. В супернатант добавляют ацетон до достижения его концентрации 75%. Выпавший осадок (высокомолекулярная фракция) центрифугируют при 10000 g в течение 30 мин. Супернатант (низкомолекулярная фракция) наносят на колонку с сорбентом Mono-Q, уравновешенную водой. Олигосахариды элюируют линейным градиентом гидрокарбоната аммония со скоростью 1 мл/мин, сначала сульфатированный фукоолигосахарид формулы II, затем сульфатированный фукоолигосахарид формулы I. Полученные фракции олигосахаридов лиофильно высушивают. Выход целевых продуктов составляет 7-20% от веса низкомолекулярной фракции.
Структура полученных олигосахаридов была установлена с помощью ЯМР спектроскопии.
На 1H-спектре олигосахарида формулы I были обнаружены химические сдвиги, принадлежащие четырём разным остаткам α-метил-L-фукопиранозида, обозначенным буквами a-d, представленные в таблице 1. С помощью спектров 1DTOXY и COSY были определены хим. сдвиги, принадлежащие каждому остатку, и их последовательность. Из HSQC-спектра было установлено соотношение между хим. сдвигами 1H и 13C. Спектр ROESY показал корреляцию между H1 остатка d и H4 остатка c, H1 остатка c и H3 остатка a, H1 остатка b и H3 и H4 остатка d. В спектре HMBC наблюдалась связь между С1 остатка d и H4 остатка c, С1 остатка c и H3 остатка a, С1 остатка b и H3 и остатка d. Аналогично протоны d1, c1 и b1 коррелировали с атомами углерода c4, a3 и d3 соответственно. На основании этого был сделан вывод, что олигосахарид формулы I имеет углеродный скелет α-L-Fucp-1→3-α-L-Fucp-1→4-α-L-Fucp-1→3-α-L-Fucp.
Спектр 1H снят при 700 MHz, 308 К, хим. сдвиги измерены относительно хим. сдвига ацетона 2,225. Спектр 13С снят при 700 MHz, 308 К, хим. сдвиги измерены относительно хим. сдвига ацетона 31,45.
Аналогичным образом была установлена структура олигосахарида формулы II. 1H-спектр показал наличие шести разных моносахаридных остатков. Спектры 1DTOXY, COSY и HSQC позволили установить протонные и углеродные хим. сдвиги каждого из них, представленные в таблице 2.
На спектре ROESY наблюдается корреляция между H1 остатка a’ и H4 остатка d’, H1 остатка e’ и H3 остатка d’, H1 остатка d’ и H4 остатка c’, H1 остатка c’ и H3 остатка b’, H1 остатка f’ и H2 остатка a’. В спектре HMBC атомы углерода a’1, d’1, e’1, f’1, c’1 коррелируют с протонами d’4, c’4, d’3, a’2 и b’3 соответственно, а протоны a’1, e’1, f’1, d’1 – с атомами углерода d’4, d’3, a’2, c’4 соответственно. Кроме того, в спектре HMBC наблюдается связь атома углерода b’3 с протоном c’1 или d’1.
Спектр 1H снят при 700 MHz, 308 К, хим. сдвиги измерены относительно хим. сдвига ацетона 2,225. Спектр 13С снят при 700 MHz, 308 К, хим. сдвиги измерены относительно хим. сдвига ацетона 31,45.
На основании вышесказанного был сделан вывод, что олигосахарид формулы II имеет разветвлённую структуру вида
α-L-Fucp-1→2-α-L-Fucp-1↓4
α-L-Fucp-1→3-α-L-Fucp-1→4-α-L-Fucp-1→3-α-L-Fucp.
Положение сульфатов в моносахаридных остатках было установлено путём сравнения сдвигов их протонов с фукозой (H1 = 5,19, H2 = 3,76, H3 = 3,85, H4 = 3,80, H5 = 4,19, H6 = 1,20) и сдвигов их углеродных атомов с α-метил-L-фукопиранозидом (C1 = 100,5, C2 = 69,0, С3 = 70,6, С4 = 72,9, С5 = 67,5, С6 = 16,5). Сульфатирование в положении 2 было вычислено из смещения H2 в слабое поле на 0,8-0,9 ppm относительно фукозы и C2 – на 4-6 ppm относительно α-метил-L-фукопиранозида. По сдвигу H3 в слабое поле на 0,9-1,0 ppm и C3 – на 4-6 ppm было установлено наличие сульфатов в положении 3.
Заявляемые сульфатированные фукоолигосахариды используют в научных исследованиях в качестве субстратов фукоиданаз, фукозидаз и сульфатаз.
Claims (2)
1. Способ получения сульфатированных фукоолигосахаридов формулы I, представленной на фиг. 2, и формулы II, представленной на фиг. 3, заключающийся в том, что рекомбинантную фукоиданазу FFA1 в Tris-HCl буфере, рН 7,2 смешивают с 5-10% раствором фукоидана из Sargassum horneri, смесь инкубируют при 37°C в течение 72-75 ч, затем нагревают до 100°C в течение 5-10 мин, далее высокомолекулярные продукты гидролиза осаждают 75% водным раствором этанола или ацетона, затем образовавшийся осадок отделяют с помощью центрифугирования при 9000-10000 g в течение 20-30 мин, а супернатант наносят на колонку с анионообменным сорбентом, уравновешенную водой, и элюируют фукоолигосахариды линейным градиентом гидрокарбоната аммония со скоростью 1 мл/мин, сначала сульфатированный фукоолигосахарид формулы II, затем сульфатированный фукоолигосахарид формулы I, далее полученные фракции целевых продуктов лиофильно высушивают.
2. Сульфатированный фукоолигосахарид формулы II, представленной на фиг. 3.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016152515A RU2648142C1 (ru) | 2016-12-30 | 2016-12-30 | Новый сульфатированный фукоолигосахарид и способ его получения |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016152515A RU2648142C1 (ru) | 2016-12-30 | 2016-12-30 | Новый сульфатированный фукоолигосахарид и способ его получения |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2648142C1 true RU2648142C1 (ru) | 2018-03-22 |
Family
ID=61708099
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2016152515A RU2648142C1 (ru) | 2016-12-30 | 2016-12-30 | Новый сульфатированный фукоолигосахарид и способ его получения |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2648142C1 (ru) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000017215A1 (fr) * | 1998-09-21 | 2000-03-30 | Laboratoires Goemar S.A. | Endofucanases et procede les mettant en oeuvre pour la preparation des fuco-oligosaccharides a partir des fucanes, bacterie productrice des endofucanases et applications des fuco-oligosaccharides a la protection de plantes |
| WO2006008379A1 (fr) * | 2004-06-18 | 2006-01-26 | Laboratoires Goëmar | Endofucanase recombinante |
-
2016
- 2016-12-30 RU RU2016152515A patent/RU2648142C1/ru active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000017215A1 (fr) * | 1998-09-21 | 2000-03-30 | Laboratoires Goemar S.A. | Endofucanases et procede les mettant en oeuvre pour la preparation des fuco-oligosaccharides a partir des fucanes, bacterie productrice des endofucanases et applications des fuco-oligosaccharides a la protection de plantes |
| WO2006008379A1 (fr) * | 2004-06-18 | 2006-01-26 | Laboratoires Goëmar | Endofucanase recombinante |
Non-Patent Citations (5)
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Otero et al. | Seaweed polysaccharides: Emerging extraction technologies, chemical modifications and bioactive properties | |
| Peng et al. | Structure and antitumor activities of the water-soluble polysaccharides from Ganoderma tsugae mycelium | |
| Kono et al. | NMR spectroscopic structural characterization of a water-soluble β-(1→ 3, 1→ 6)-glucan from Aureobasidium pullulans | |
| Chi et al. | Ulvan lyase assisted structural characterization of ulvan from Ulva pertusa and its antiviral activity against vesicular stomatitis virus | |
| Chang et al. | Primary structure and chain conformation of fucoidan extracted from sea cucumber Holothuria tubulosa | |
| Ermakova et al. | Water-soluble polysaccharides from the brown alga Eisenia bicyclis: Structural characteristics and antitumor activity | |
| Yu et al. | Structure, chain conformation and antitumor activity of a novel polysaccharide from Lentinus edodes | |
| Wang et al. | Structural studies on a novel fucogalactan sulfate extracted from the brown seaweed Laminaria japonica | |
| Vishchuk et al. | Sulfated polysaccharides from brown seaweeds Saccharina japonica and Undaria pinnatifida: isolation, structural characteristics, and antitumor activity | |
| Duarte et al. | Structural studies on fucoidans from the brown seaweed Sargassum stenophyllum | |
| Jeff et al. | Purification and in vitro anti-proliferative effect of novel neutral polysaccharides from Lentinus edodes | |
| Yu et al. | Structural study of fucoidan from sea cucumber Acaudina molpadioides: A fucoidan containing novel tetrafucose repeating unit | |
| Fan et al. | Structural elucidation of a neutral fucogalactan from the mycelium of Coprinus comatus | |
| Usoltseva et al. | Structure and anticancer activity of native and modified polysaccharides from brown alga Dictyota dichotoma | |
| Ye et al. | Structural elucidation of the polysaccharide moiety of a glycopeptide (GLPCW-II) from Ganoderma lucidum fruiting bodies | |
| Liu et al. | A rhamnan-type sulfated polysaccharide with novel structure from Monostroma angicava Kjellm (Chlorophyta) and its bioactivity | |
| Zhao et al. | Studies on the chemical structure and antitumor activity of an exopolysaccharide from Rhizobium sp. N613 | |
| Silchenko et al. | Endo-1, 4-fucoidanase from Vietnamese marine mollusk Lambis sp. which producing sulphated fucooligosaccharides | |
| Maity et al. | Structural characterization and study of immunoenhancing and antioxidant property of a novel polysaccharide isolated from the aqueous extract of a somatic hybrid mushroom of Pleurotus florida and Calocybe indica variety APK2 | |
| Jeff et al. | Purification, structural elucidation and antitumor activity of a novel mannogalactoglucan from the fruiting bodies of Lentinus edodes | |
| Wang et al. | A heteropolysaccharide, l-fuco-d-manno-1, 6-α-d-galactan extracted from Grifola frondosa and antiangiogenic activity of its sulfated derivative | |
| Thinh et al. | A novel sulfated fucan from Vietnamese sea cucumber Stichopus variegatus: Isolation, structure and anticancer activity in vitro | |
| Bhanja et al. | Water-insoluble glucans from the edible fungus Ramaria botrytis | |
| Ye et al. | Structural characterisation of a heteropolysaccharide by NMR spectra | |
| Laezza et al. | Chemical fucosylation of a polysaccharide: A semisynthetic access to fucosylated chondroitin sulfate |