RU2642270C1 - Способ диагностики эндогенной интоксикации криопротекторного генеза - Google Patents
Способ диагностики эндогенной интоксикации криопротекторного генеза Download PDFInfo
- Publication number
- RU2642270C1 RU2642270C1 RU2016151152A RU2016151152A RU2642270C1 RU 2642270 C1 RU2642270 C1 RU 2642270C1 RU 2016151152 A RU2016151152 A RU 2016151152A RU 2016151152 A RU2016151152 A RU 2016151152A RU 2642270 C1 RU2642270 C1 RU 2642270C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- facies
- toxic
- endogenous intoxication
- development
- pattern
- Prior art date
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value
- G01N2500/20—Screening for compounds of potential therapeutic value cell-free systems
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Изобретение относится к лабораторной диагностике и представляет собой способ диагностики эндогенной интоксикации у лабораторных мышей для разработки нетоксичного криопротектора, включающий внутрибрюшинное введение испытуемого антифриза, забор крови, высушивание капель сыворотки крови объемом 4 мкл при +37°C, анализ структурности фации дегидратированных капель под микроскопом по показателям: индекс структурности, кристаллизуемость, степень деструкции фации и выраженность краевой зоны фации, отличающийся тем, что фации испытуемых веществ сравнивают с паттерном эндогенной интоксикации низкой выраженности, и вещества, у которых структурность фации аналогична паттерну с высокой выраженностью, относят к высокотоксичным и неперспективным, а вещества, у которых структурность фации аналогична паттерну с низкой выраженностью, относят к малотоксичным и перспективным для разработки криопротектора. Осуществление изобретения позволяет с высокой точностью определить степень эндогенной интоксикации и расширить список средств для проведения скрининга антифризов для разработки нетоксичного криопротектора. 5 пр.
Description
Изобретение относится к медицине, в частности к лабораторному исследованию, и может использоваться для диагностики эндогенной интоксикации и степени ее выраженности при разработке нетоксичного криопротектора на белых беспородных мышах. Для осуществления способа тест-дозу испытуемого антифриза согревают до +37÷39°C, вводят в брюшную полость (0,5 мл/животное), выдерживают в организме мыши в течение 25 мин, выполняют мгновенную декапитацию головы животного, собирают кровь в пробирку, пробы центрифугируют, сыворотку крови наносят каплями объемом 4 мкл на предметное стекло, высушивают при +37°C в горизонтальном положении в течение 1-1,5 часов и анализируют структурность фации дегидратированных капель под микроскопом в проходящем свете [1, 2]. Фации испытуемого антифриза сравнивают с паттерном разных степеней эндогенной интоксикации по показателям: индекс структурности (ИС), кристаллизуемость (Кр), степень деструкции фации (СДФ) и выраженность краевой зоны фации (Кз). Тестируемое химическое вещество, у которого структурность фации аналогична паттерну с высокой степенью выраженности эндогенной интоксикации, относят к высокотоксичным и неперспективным для разработки нетоксичного криопротектора. Тестируемые химические вещества, у которых структурность фации аналогична паттерну с низкой степенью выраженности эндогенной интоксикации, относят к малотоксичным и перспективным для разработки нетоксичного криопротектора. Способ прост и доступен в осуществлении. Использование заявленного способа позволяет с высокой точностью диагностировать степень выраженности эндогенной интоксикации и расширить список разрешенных «лекарственных» форм для разработки нетоксичного криопротектора.
Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторному исследованию сыворотки крови мышей, и может использоваться для диагностики эндогенной интоксикации и степени ее выраженности на экспериментальном этапе разработки нетоксичного криопротектора.
Уровень техники
Эндогенная интоксикация представляет собой синдром, характеризующийся накоплением в органах и тканях организма избытка эндогенных токсических субстанций и нарушением их выделения естественными органами детоксикации [3, 4].
На протяжении всей истории применения замороженных компонентов крови и костного мозга с лечебной целью важная роль отводится разработке нетоксичного криопротектора. В последние годы актуальным направлением криотрансфузиологии является многофакторное исследование синдрома эндогенной интоксикации. Показано, что эндогенная интоксикация криопротекторного генеза развивается в организме на клеточном и организменном уровнях. Она же ответственна за развитие различной степени выраженности посттрансфузионных реакций или осложнений [5].
Для внутрибрюшинного способа введения тест-доз антифризов мышам могут быть разрешены как масляные растворы, жиры, эмульсии, суспензии, так и химические вещества с другими «лекарственными» формами, для которых внутривенный путь инъекций запрещен. Кроме того, современная методология доказательной оценки нетоксичных антифризов испытывает потребность в использовании морфометрических тестов по кристаллизуемости фаций сыворотки крови мышей [1, 2, 6, 7].
Задачей предлагаемого изобретения является устранение этого недостатка.
За аналог предлагаемого изобретения выбран известный способ испытания лекарственных средств на аномальную токсичность, включающий внутрибрюшинный способ введения в организм животного тест-доз водных растворов лекарственных средств [6].
Известный способ (тест для вакцин и сывороток) испытывают на 5 здоровых белых мышах обоего пола массой 17-20 г. Сухой лекарственный препарат растворяют прилагаемым растворителем и вводят внутрибрюшинно не более 1,0 мл каждому из животных, после чего за животными наблюдают в течение 7 суток. Лекарственное средство выдерживает испытание, если в течение предусмотренного срока наблюдения не появятся признаки интоксикации или не погибнет ни одна из подопытных мышей.
За прототип предлагаемого изобретения выбран метод изучения индукции металлотионеинов в организме мышей, который включает однократное введение растворимых солей тяжелых металлов внутрибрюшинным или внутривенным способами, последующую декапитацию, сбор крови, аутопсию печени и их целевое исследование [8].
Известный способ осуществляют на нелинейных белых лабораторных мышах - самцах массой 18-25 г, разделенных на 6 групп по 5 животных в каждой. I группа служит контролем. Каждому животному II, III, IV, V, VI групп внутрибрюшинно вводят (в зависимости от массы) 0,4-0,5 мл растворимой соли свинца, меди, цинка, ртути или кадмия соответственно. Через 3 суток проводят декапитацию головы животных под эфирным наркозом, собирают кровь и резецируют печень для целевых исследований.
Недостатки известных способов заключаются в ограниченности количества испытуемых антифризов и получении фрагментарных сведений для диагностики эндогенной интоксикации.
Эти недостатки усложняют выполнение программы поиска нетоксичного криопротектора.
Раскрытие изобретения
Техническим результатом изобретения является увеличение количества «лекарственных» форм со свойствами антифризов, повышение информативности методологии оценки степени интенсивности эндогенной интоксикации и упрощение скрининга в диагностике химических веществ, перспективных для разработки нетоксичного криопротектора.
Сущность изобретения заключается в том, что для диагностики эндогенной интоксикации криопротекторного генеза тест-дозу испытуемого антифриза согревают до +37÷39°С, вводят в брюшную полость (0,5 мл/животное), выдерживают в организме мыши в течение 25 мин, выполняют мгновенную декапитацию головы животного, собирают кровь в пробирку, пробы центрифугируют, сыворотку крови наносят каплями объемом 4 мкл на предметное стекло, высушивают при +37°С в горизонтальном положении в течение 1-1,5 часов и анализируют структурность фации дегидратированных капель под микроскопом в проходящем свете. Фации испытуемого антифриза сравнивают с паттерном разных степеней эндогенной интоксикации по показателям: индекс структурности (ИС), кристаллизуемость (Кр), степень деструкции фации (СДФ) и выраженность краевой зоны фации (Кз) [1, 2]. Тестируемое химическое вещество, у которого структурность фации аналогична паттерну с высокой степенью выраженности эндогенной интоксикации, относят к высокотоксичным и неперспективным для разработки нетоксичного криопротектора. Тестируемые химические вещества, у которых структурность фации аналогична паттерну с низкой степенью выраженности эндогенной интоксикации, относят к малотоксичным и перспективным для разработки нетоксичного криопротектора. Способ прост и доступен в осуществлении. Использование заявленного способа позволяет с высокой точностью диагностировать степень выраженности эндогенной интоксикации и расширить список разрешенных «лекарственных» форм для разработки нетоксичного криопротектора.
Способ диагностики эндогенной интоксикации криопротекторного генеза осуществляется следующим образом.
1. Готовят бланк с кристаллоскопическим паттерном сыворотки крови мышей с низкой степенью выраженности эндогенной интоксикации.
2. Готовят тест-дозы испытуемых антифризов в различных «лекарственных» формах. Разрешены: водные и масляные растворы, жиры, эмульсии, суспензии и другие, подогретые до +37÷39°С.
3. Производят внутрибрюшинное введение тест-доз испытуемого антифриза по 0,5 мл каждому животному.
4. Производят мгновенную декапитацию головы мыши острыми ножницами.
5. Производят забор артериовенозной крови из рассеченных сосудов до окончания агонии мыши и центрифугируют для получения сыворотки.
6. Сыворотку крови в виде округлых капель (не менее 5-6) объемом 4 мкл каждая наносят на предметное стекло.
7. Капли с испытуемым антифризом высушивают в термостате при +37°С в горизонтальном положении на протяжении 1-1,5 часов.
8. Под микроскопом в проходящем свете изучают особенности кристаллизации фации и при аналогичности структуропостроения испытуемого антифриза контрольному паттерну с низкой степенью выраженности эндогенной интоксикации испытуемый антифриз относят к малотоксичным и перспективным для дальнейшей углубленной разработки нетоксичного криопротектора.
Примеры
Контрольная проба. Паттерн результатов кристаллоскопических фаций сыворотки крови беспородных белых мышей-самцамов в возрасте 4-6 мес массой 17-20 г после внутрибрюшинного введения криопротектора с низкой степенью выраженности эндогенной интоксикации: ИС=0,55±0,22; Кр=0,77±0,21; СДФ=1,50±0,32; Кз=1,18±0,21. ∑=4,00. Вывод: испытуемое вещество относится к малотоксичным криопротекторам.
Пример 1. Беспородным белым мышам-самцам в возрасте 4-6 мес массой 17-20 г вводят внутрибрюшинно подогретую до +37÷39°С тест-дозу 0,5 мл масляной формы испытуемого вещества «1». ИС=1,00±0,41; Кр=1,48±0,36; СДФ=1,05±0,11; Кз=1,08±0,12. ∑=4,61. Вывод: испытуемое вещество относится к малотоксичным и перспективным для дальнейшей углубленной разработки нетоксичного криопротектора.
Пример 2. Беспородным белым мышам-самцам в возрасте 4-6 мес массой 17-20 г вводят внутрибрюшинно подогретую до +37÷39°С тест-дозу 0,5 мл эмульсии испытуемого вещества «2». ИС=0,73±0,25; Кр=1,18±0,21; СДФ=1,50±0,20; Кз=1,43±0,24. ∑=4,84. Вывод: испытуемое вещество относится к малотоксичным и перспективным для дальнейшей углубленной разработки нетоксичного криопротектора.
Пример 3. Беспородным белым мышам-самцам в возрасте 4-6 мес массой 17-20 г вводят внутрибрюшинно подогретую до +37÷39°С тест-дозу 0,5 мл раствора вещества «3» на воде для инъекций. ИС=1,20±0,31; Кр=1,90±0,13; СДФ=2,00±0,35; Кз=2,00±0,24. ∑=7,10. Вывод: испытуемое вещество относится к токсичным и неперспективным для дальнейшей углубленной разработки нетоксичного криопротектора.
Пример 4. Беспородным белым мышам-самцам в возрасте 4-6 мес массой 17-20 г вводят внутрибрюшинно подогретую до +37÷39°С тест-дозу 0,5 мл раствора вещества «4» на 0,9% NaCl. ИС=2,21±0,09; Кр=2,14±0,23; СДФ=1,29±0,09; Кз=1,50±0,00. ∑=7,14. Вывод: испытуемое вещество относится к токсичным и неперспективным для дальнейшей углубленной разработки нетоксичного криопротектора.
Пример 5. Беспородным белым мышам-самцам в возрасте 4-6 мес массой 17-20 г вводят внутрибрюшинно подогретую до +37÷39°С тест-дозу 0,5 мл раствора «5» на растворе Кребса. ИС=1,67±0,26; Кр=2,00±0,31; СДФ=2,12±0,18; Кз=1,46±0,22. ∑=7,25. Вывод: испытуемое вещество относится к токсичным и неперспективным для дальнейшей углубленной разработки нетоксичного криопротектора.
Представленный пример иллюстрирует применимость предлагаемого способа диагностики эндогенной интоксикации криопротекторного генеза. Согласно анализу результатов кристаллизации к малотоксичным и перспективными для дальнейшей углубленной разработки нетоксичного криопротектора относятся вещества «1» и «2», у которых, по сравнению с паттерном контрольной пробы, выявлена более выраженная аналогичность структуропостроения зональных структур фаций высушенных капель.
Необходимое оборудование: персональный компьютер, микроскоп с проходящим светом, цифровая приставка, пипеточный микродозатор, предметные стекла, набор тест-проб антифризов.
Способ прост и доступен в осуществлении. Использование заявленного способа позволяет определить степень выраженности эндогенной интоксикации и расширить список разрешенных «лекарственных» форм для разработки нетоксичного криопротектора. Может быть освоен в научных центрах, разрабатывающих нетоксичные криопротекторы и гемоконсерванты на их основе.
Таким образом, благодаря использованию указанного способа диагностики эндогенной интоксикации криопротекторного генеза удается быстро оценить степень ее интенсивности и дать оценку пригодности испытуемого антифриза для дальнейшей углубленной разработки нетоксичного криопротектора.
Предлагаемое изобретение отвечает критериям «новизна» и «изобретательский уровень», так как проведенные патентно-информационные исследования не выявили источников патентной и научно-технической литературы, которые бы порочили новизну предлагаемого способа, равно как и известных способов с существенными признаками предлагаемого технического решения. Техническим результатом использования изобретения является возможность проведения скрининга антифризов для разработки нетоксичного криопротектора.
Источники информации
1. Камакин Н.Ф., Мартусевич А.К. Тезикристаллоскопическое исследование биологических субстратов: Методические рекомендации. Киров, 2005. - 34 с.
2. Ковалева Л.К. Кристаллогенные свойства сыворотки крови как интегральный показатель адаптационных возможностей организма: Автореф. … дис. канд. биол. наук. - Киров, 2014. - 16 с.
3. Малахов М.Я. Метод регистрации эндогенной интоксикации. Пособие для врачей. – СПб.: СПбМАПО, 1995. - 33 с.
4. Лабораторная оценка тяжести синдрома эндогенной интоксикации и выбор метода детоксикации у хирургических больных / Иванова В.Н., Обедин А.Н., Первушин Ю.В. и др. // Клиническая лабораторная диагностика. - 1999.- №11. - С. 33.
5. Костяев А.А., Андреев А.А., Мартусевич А.К. Токсичность криопротекторов и криоконсервантов на их основе для компонентов крови и костного мозга (Обзорная статья) // Научное обозрение. Медицинские науки. – 2016. - №6. - С. 54-74.
6. Государственная фармакопея Российской Федерации / Мз и CP РФ. - М.: изд-во НЦ экспертизы средств медицинского применения. ХII издание, часть I. - 2008. - 704 с.
7. Современные методы доставки лекарственных препаратов в клинической практике / Креативная онкология и хирургия // Ганцев Ш.Х., Умезаева К., Ганцева Х.Х. и др. - 2012. - №3. - С. 1-4.
8. Пыхтеева Е.Г. Изучение индукции металлотионеинов в печени мышей при внутрибрюшинном введении солей двухвалентных металлов / Современные проблемы токсикологии. - 2012. - №01(56).
Claims (1)
- Способ диагностики эндогенной интоксикации криопротекторного генеза у белых лабораторных мышей для разработки нетоксичного криопротектора, включающий внутрибрюшинное введение испытуемого антифриза, забор крови при помощи декапитации головы животного, высушивание капель сыворотки крови объемом 4 мкл при +37°C в горизонтальном положении, анализ структурности фации дегидратированных капель под микроскопом в проходящем свете по показателям: индекс структурности (ИС), кристаллизуемость (Кр), степень деструкции фации (СДФ) и выраженность краевой зоны фации (Кз), отличающийся тем, что в качестве испытуемых антифризов используют химические вещества различных «лекарственных» форм, кристаллоскопические фации которых сравнивают с паттерном эндогенной интоксикации низкой степени выраженности, тестируемое химическое вещество, у которого структурность фации аналогична паттерну с высокой степенью выраженности эндогенной интоксикации, относят к высокотоксичным и неперспективным для разработки нетоксичного криопротектора, тестируемые химические вещества, у которых структурность фации аналогична паттерну с низкой степенью выраженности эндогенной интоксикации, относят к малотоксичным и перспективным для разработки нетоксичного криопротектора.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016151152A RU2642270C1 (ru) | 2016-12-23 | 2016-12-23 | Способ диагностики эндогенной интоксикации криопротекторного генеза |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016151152A RU2642270C1 (ru) | 2016-12-23 | 2016-12-23 | Способ диагностики эндогенной интоксикации криопротекторного генеза |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2642270C1 true RU2642270C1 (ru) | 2018-01-24 |
Family
ID=61023586
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2016151152A RU2642270C1 (ru) | 2016-12-23 | 2016-12-23 | Способ диагностики эндогенной интоксикации криопротекторного генеза |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2642270C1 (ru) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2280865C1 (ru) * | 2004-12-27 | 2006-07-27 | Лидия Васильевна Савина | Способ экспресс-диагностики эндогенной интоксикации |
-
2016
- 2016-12-23 RU RU2016151152A patent/RU2642270C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2280865C1 (ru) * | 2004-12-27 | 2006-07-27 | Лидия Васильевна Савина | Способ экспресс-диагностики эндогенной интоксикации |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| МАРТУСЕВИЧ А.К., КАМАКИН Н.Ф. Новый алгоритм визуаметрического анализа кристаллогенных и инициирующих свойств биологических субстратов // Научно-практический журнал "Клинико-лабораторный консилиум". 2011, No.2 (38), C.23-26. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Musiał et al. | Formalin use in anatomical and histological science in the 19th and 20th centuries | |
| Schmidt et al. | Localization of the locus coeruleus in the mouse brain | |
| Kuwayama et al. | Estimation of day of death using micro-segmental hair analysis based on drug use history: a case of lidocaine use as a marker | |
| Drenovska et al. | Nickel and skin: from allergy to autoimmunity | |
| Tappe-Theodor et al. | The “WWHow” concept for prospective categorization of post-operative severity assessment in mice and rats | |
| RU2642270C1 (ru) | Способ диагностики эндогенной интоксикации криопротекторного генеза | |
| Labelle et al. | Effects of ophthalmic disease on concentrations of plasma fibrinogen and serum amyloid A in the horse | |
| Burcham et al. | Chaperone heat shock protein 90 mobilization and hydralazine cytoprotection against acrolein-induced carbonyl stress | |
| Kanjhan et al. | Neurobiotin electroporation for combined structural and functional analysis of neurons in developing mouse brain slices | |
| Lacalle et al. | Bicarbonate-triggered in vitro capacitation of boar spermatozoa conveys an increased relative abundance of the canonical transient receptor potential cation (TRPC) channels 3, 4, 6 and 7 and of CatSper-γ subunit mRNA transcripts | |
| Fraga et al. | Assessment of the Teratogenic Effect of Drugs on the Chicken Embryo | |
| Baker et al. | Pretreatment with intravenous fish oil reduces hepatic ischemia reperfusion injury in a murine model | |
| RU2624243C1 (ru) | Способ определения оптимального моноэндоцеллюлярного криоконсерванта для хранения клеток при -80o С | |
| Stefaniuk et al. | Evaluation of minimally invasive muscle biopsy method for genetic analysis in horse | |
| Tuorkey | Kidney remote ischemic preconditioning as a novel strategy to explore the accurate protective mechanisms underlying remote ischemic preconditioning | |
| Ionescu et al. | Surgery technique models of sciatic nerve allograph in Wistar rats | |
| Kumar et al. | Correlation of Postmortem Changes with Time Since Death | |
| CN104721842B (zh) | 蜂蜜在炎症部位动态长时程近红外靶向成像试剂中的应用 | |
| RU2557946C1 (ru) | Способ дооперационного определения объема операции у больных диффузным токсическим зобом | |
| Yapa et al. | To Investigate the Viability of Thyroid Tumour Tissue Maintained in a Microfluidic System: 0702 | |
| RU2676674C1 (ru) | Способ выявления эффективного криопротектора по цитохимическому показателю содержания лейкоцитарной щелочной фосфатазы аутокрови | |
| Walls et al. | The Association Between Severity of Liver Disease in Transplant Assessment Patients With Patient Haematology and Biochemistry Variables: 0654 | |
| Dilaver et al. | Does the use of Local Anaesthetic (LA) Spray Combined With IV Sedation for Diagnostic OGD (Oesophagogastroduodenoscopy) Affect 8-Day Re-Admission and 30-Day Mortality?: 0095 | |
| RU2648440C1 (ru) | Способ видового определения микобактерий туберкулеза у инфицированного пациента | |
| RU2573381C2 (ru) | Способ моделирования пострезекционной гипокальцемии |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20181224 |