RU2639245C1 - Method of spectrophotometric determining lactic acid - Google Patents
Method of spectrophotometric determining lactic acid Download PDFInfo
- Publication number
- RU2639245C1 RU2639245C1 RU2016147376A RU2016147376A RU2639245C1 RU 2639245 C1 RU2639245 C1 RU 2639245C1 RU 2016147376 A RU2016147376 A RU 2016147376A RU 2016147376 A RU2016147376 A RU 2016147376A RU 2639245 C1 RU2639245 C1 RU 2639245C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- lactic acid
- solution
- concentration
- iron
- iii
- Prior art date
Links
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 95
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 title claims abstract description 48
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 title claims abstract description 48
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 23
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 38
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 claims abstract description 15
- 239000012085 test solution Substances 0.000 claims abstract description 4
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 3
- RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K iron trichloride Chemical compound Cl[Fe](Cl)Cl RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 29
- 229910021578 Iron(III) chloride Inorganic materials 0.000 claims description 15
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 claims description 4
- FBAFATDZDUQKNH-UHFFFAOYSA-M iron chloride Chemical compound [Cl-].[Fe] FBAFATDZDUQKNH-UHFFFAOYSA-M 0.000 abstract description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 5
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 5
- YNVZDODIHZTHOZ-UHFFFAOYSA-K 2-hydroxypropanoate;iron(3+) Chemical compound [Fe+3].CC(O)C([O-])=O.CC(O)C([O-])=O.CC(O)C([O-])=O YNVZDODIHZTHOZ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 4
- 235000014048 cultured milk product Nutrition 0.000 description 4
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 3
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 description 3
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N nicotinamide-adenine dinucleotide Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 3
- IKHGUXGNUITLKF-UHFFFAOYSA-N Acetaldehyde Chemical compound CC=O IKHGUXGNUITLKF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910052684 Cerium Inorganic materials 0.000 description 1
- 108010001539 D-lactate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 102100023319 Dihydrolipoyl dehydrogenase, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M Pyruvate Chemical compound CC(=O)C([O-])=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- YXVFYQXJAXKLAK-UHFFFAOYSA-N biphenyl-4-ol Chemical group C1=CC(O)=CC=C1C1=CC=CC=C1 YXVFYQXJAXKLAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BRPQOXSCLDDYGP-UHFFFAOYSA-N calcium oxide Chemical compound [O-2].[Ca+2] BRPQOXSCLDDYGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000292 calcium oxide Substances 0.000 description 1
- ODINCKMPIJJUCX-UHFFFAOYSA-N calcium oxide Inorganic materials [Ca]=O ODINCKMPIJJUCX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- GWXLDORMOJMVQZ-UHFFFAOYSA-N cerium Chemical compound [Ce] GWXLDORMOJMVQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 231100000481 chemical toxicant Toxicity 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 229910000365 copper sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 231100001261 hazardous Toxicity 0.000 description 1
- 239000000383 hazardous chemical Substances 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- NGXHXXMELBDZNB-UHFFFAOYSA-N iron;phenol Chemical compound [Fe].OC1=CC=CC=C1.OC1=CC=CC=C1 NGXHXXMELBDZNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- -1 lactate ions Chemical class 0.000 description 1
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 239000012286 potassium permanganate Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N sulfuric acid Substances OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- WFKWXMTUELFFGS-UHFFFAOYSA-N tungsten Chemical compound [W] WFKWXMTUELFFGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052721 tungsten Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010937 tungsten Substances 0.000 description 1
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01J—MEASUREMENT OF INTENSITY, VELOCITY, SPECTRAL CONTENT, POLARISATION, PHASE OR PULSE CHARACTERISTICS OF INFRARED, VISIBLE OR ULTRAVIOLET LIGHT; COLORIMETRY; RADIATION PYROMETRY
- G01J3/00—Spectrometry; Spectrophotometry; Monochromators; Measuring colours
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к аналитической химии, в частности к количественному определению молочной кислоты как в чистом виде, так и в продуктах питания, биологических и культуральных жидкостях.The invention relates to analytical chemistry, in particular to the quantitative determination of lactic acid both in pure form and in food, biological and cultural fluids.
Эффективные и недорогие методы определения молочной кислоты могут найти широкое применение, прежде всего, для контроля процессов ферментаций бактериальных штаммов молочнокислых бактерий, которые традиционно используют для получения молочной кислоты, а также для контроля качества продуктов питания, сельскохозяйственного сырья и др.Effective and inexpensive methods for the determination of lactic acid can be widely used, first of all, to control the fermentation processes of bacterial strains of lactic acid bacteria, which are traditionally used to produce lactic acid, as well as to control the quality of food, agricultural raw materials, etc.
Известен способ качественного определения молочной кислоты, основанный на реакции Уффельмана. Принцип метода заключается в том, что молочная кислота в присутствии фенолята железа (реактив Уффельмана), окрашенного в фиолетовый цвет, образует лактат железа желто-зеленого цвета [1]. Изменение окраски раствора с фиолетовой на желто-зеленую свидетельствует о присутствии молочной кислоты в исследуемом образце.A known method for the qualitative determination of lactic acid, based on the Uffelman reaction. The principle of the method is that lactic acid in the presence of iron phenolate (Uffelman's reagent) colored in violet forms yellow-green iron lactate [1]. A change in the color of the solution from violet to yellow-green indicates the presence of lactic acid in the test sample.
К недостаткам метода, основанного на реакции Уффельмана, можно отнести то, что он является качественным и не позволяет определить концентрацию молочной кислоты в исследуемом образце, а также то, что при проведении реакции образуется такое токсичное химическое вещество, как фенол, работа с которым требует особых мер предосторожности.The disadvantages of the method based on the Uffelman reaction include the fact that it is qualitative and does not allow determining the concentration of lactic acid in the test sample, as well as the fact that during the reaction such toxic chemical substance as phenol is formed, the work with which requires special precautionary measures.
В настоящее время наиболее точными методами количественного определения молочной кислоты являются различные варианты высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), включая ионный (ИХ) [2], ион-парный (ИПХ) [3], ионоэксклюзионный (ИЭХ) [4] и обращенно-фазовый (ОФХ) [5].Currently, the most accurate methods for the quantitative determination of lactic acid are various options for high-performance liquid chromatography (HPLC), including ionic (IC) [2], ion-pair (IPC) [3], ion-exclusion (IEC) [4] and reverse phase (OFH) [5].
Однако использование методов ВЭЖХ в рутинной практике ограничено тем, что для их осуществления требуется сложная подготовка проб, а также наличие дорогостоящего оборудования и высококвалифицированных специалистов.However, the use of HPLC methods in routine practice is limited by the fact that their implementation requires complex sample preparation, as well as the availability of expensive equipment and highly qualified specialists.
Известен способ определения молочной кислоты, основанный на количественном окислении ее до ацетальдегида и определении последнего либо бисульфитным методом [6], либо окрашиванием п-гидроксидифенилом в присутствии металлических ионов [7].A known method for the determination of lactic acid, based on the quantitative oxidation of it to acetaldehyde and determination of the latter either by the bisulfite method [6] or by staining with p-hydroxydiphenyl in the presence of metal ions [7].
Недостатком данной группы способов является то, что перед определением молочной кислоты необходимо проведение процедуры удаления примесей белков и углеводов с использованием фосфорно-вольфрамовой кислоты, сернокислой меди и оксида кальция. В качестве окислителей используют такие вещества, как перманганат калия, концентрированная серная кислота или церий, работа с которыми требует особых мер предосторожности. Процесс проведения измерения занимает несколько часов, при этом результаты могут быть недостаточно точными из-за неполного удаления примесей из исследуемого образца.The disadvantage of this group of methods is that before the determination of lactic acid, it is necessary to carry out a procedure for removing impurities of proteins and carbohydrates using phosphoric tungsten acid, copper sulfate and calcium oxide. As oxidizing agents, substances such as potassium permanganate, concentrated sulfuric acid or cerium are used, the work with which requires special precautions. The measurement process takes several hours, while the results may not be accurate due to incomplete removal of impurities from the test sample.
Известен также ферментативный способ количественного определения молочный кислоты [8], основанный на преобразовании молочной кислоты в присутствии НАД+ в пируват и восстановленную форму НАДН с использованием фермента лактатдегидрогеназы. Количество образовавшегося НАДН, которое пропорционально содержанию молочной кислоты, определяют спектрофотометрически измерением оптической плотности инкубационной смеси при длине волны 340 нмAlso known is the enzymatic method for the quantitative determination of lactic acid [8], based on the conversion of lactic acid in the presence of NAD + to pyruvate and the reduced form of NADH using the enzyme lactate dehydrogenase. The amount of NADH formed, which is proportional to the content of lactic acid, is determined spectrophotometrically by measuring the optical density of the incubation mixture at a wavelength of 340 nm
Недостатки метода заключаются в необходимости использования дорогостоящих очищенных препаратов L- и D-лактатдегидрогеназ с известной активностью и дорогостоящего спектрофотометрического оборудования, способного работать в ультрафиолетовом диапазоне.The disadvantages of the method are the need to use expensive purified preparations of L- and D-lactate dehydrogenases with known activity and expensive spectrophotometric equipment that can operate in the ultraviolet range.
Кроме того, способ сложен в исполнении и требует большой аккуратности при проведении измерений из-за нестабильности НАД+ и НАДН.In addition, the method is complicated in execution and requires great accuracy when taking measurements due to the instability of NAD + and NADH.
Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является расширение арсенала способов количественного определения молочной кислоты, в том числе в составе продуктов питания, биологических и культуральных жидкостях.The task to which the invention is directed is to expand the arsenal of methods for the quantitative determination of lactic acid, including in food products, biological and cultural fluids.
Поставленная задача решена тем, что разработан способ количественного определения молочной кислоты, включающий добавление исследуемого раствора к раствору хлорида железа(III), взятого в концентрации 0,1-0,3%, измерение оптической плотности полученного раствора при длине волны 380-405 нм и количественное определение концентрации лактата в исходном растворе с использованием калибровочного графика.The problem is solved in that a method for the quantitative determination of lactic acid was developed, including adding the test solution to a solution of iron (III) chloride, taken in a concentration of 0.1-0.3%, measuring the optical density of the resulting solution at a wavelength of 380-405 nm and quantitative determination of the concentration of lactate in the initial solution using a calibration graph.
Способ основан на реакции взаимодействия хлорида железа(III) с лактат-ионами, входящими в состав молочной кислоты, в результате чего образуется раствор лактата железа, окрашенный в желто-зеленый цвет.The method is based on the reaction of interaction of iron (III) chloride with the lactate ions that are part of lactic acid, resulting in the formation of a solution of iron lactate, painted in yellow-green color.
Авторы показали, чтоThe authors showed that
- максимальное поглощение лактата железа(III) наблюдается при длине волны в интервале 380-405 нм, а поглощающая способность молочной кислоты в заданном диапазоне близка к нулю (фиг. 1);- the maximum absorption of iron (III) lactate is observed at a wavelength in the range of 380-405 nm, and the absorption capacity of lactic acid in a given range is close to zero (Fig. 1);
- оптическая плотность окрашенного раствора пропорциональна концентрации молочной кислоты в интервале от 0,5 до 11 г/л, (фиг. 2);- the optical density of the colored solution is proportional to the concentration of lactic acid in the range from 0.5 to 11 g / l, (Fig. 2);
- оптимальной для проведения анализа является концентрация хлорида железа в диапазоне от 0,1 до 0,3%;- the optimal concentration for the analysis is the concentration of iron chloride in the range from 0.1 to 0.3%;
- окраска продукта реакции - раствора лактата железа(III) при комнатной температуре (25±5°C) остается стабильной в интервале от 1 до 15 минут;- the color of the reaction product - a solution of iron (III) lactate at room temperature (25 ± 5 ° C) remains stable in the range from 1 to 15 minutes;
Выявленные закономерности дают возможность использовать для количественного определения молочной кислоты калибровочный график (фиг. 2).The revealed patterns make it possible to use a calibration graph for the quantitative determination of lactic acid (Fig. 2).
Способ осуществляют следующим образом.The method is as follows.
К раствору хлорида железа(III) добавляют исследуемый раствор, содержащий молочную кислоту в концентрации от 0,5 до 11 г/л, перемешивают и измеряют оптическую плотность окрашенного раствора при длине волны 380-405 нм против контроля - раствора хлорида железа(III). Реакцию и измерения проводят при комнатной температуре.The test solution containing lactic acid in a concentration of 0.5 to 11 g / l is added to the solution of iron (III) chloride, mixed and the optical density of the colored solution is measured at a wavelength of 380-405 nm against the control solution of iron (III) chloride. The reaction and measurements are carried out at room temperature.
Диапазон концентраций хлорида железа и МК подбирают таким образом, чтобы значение полученной оптической плотности попадало в линейную область калибровочного графика. Для этого используют раствор хлорида железа с концентрацией 0,1-0,3%, а измерение оптической плотности осуществляют при длине волны в интервале 380-405 нм.The range of concentrations of iron chloride and MK is selected so that the value of the obtained optical density falls into the linear region of the calibration graph. To do this, use a solution of iron chloride with a concentration of 0.1-0.3%, and the measurement of optical density is carried out at a wavelength in the range of 380-405 nm.
Концентрацию молочной кислоты вычисляют по калибровочному графику с учетом разведения исследуемого образца.The concentration of lactic acid is calculated according to the calibration graph, taking into account the dilution of the test sample.
Обработку результатов проводят с использованием статистической программы Statistica 6.0. [9].The results are processed using the statistical program Statistica 6.0. [9].
Изобретение проиллюстрировано следующими фигурами.The invention is illustrated by the following figures.
Фиг. 1 – Спектры поглощения a - молочная кислота (1%, контроль - дистиллированная вода); b - хлорид железа(III) (0,2%, контроль - дистиллированная вода); c - лактат железа(III) (контроль – 0,2% раствор хлорида железа(III)).FIG. 1 - Absorption spectra a - lactic acid (1%, control - distilled water); b - iron (III) chloride (0.2%, control - distilled water); c - iron (III) lactate (control - 0.2% solution of iron (III) chloride).
Фиг. 2 – Калибровочный график для определения концентрации молочной кислоты.FIG. 2 - Calibration graph for determining the concentration of lactic acid.
Пример 1. Построение калибровочного графикаExample 1. The construction of the calibration graph
Навеску 1,2 г молочной кислоты с известной концентрацией (89%, ρ 1,2 г/см3) помещают в мерную колбу и доводят водой до 10 мл. Получают стандартный раствор с концентрацией молочной кислоты 89 г/л.A weighed portion of 1.2 g of lactic acid with a known concentration (89%, ρ 1.2 g / cm 3 ) is placed in a volumetric flask and adjusted to 10 ml with water. Get a standard solution with a concentration of lactic acid 89 g / L.
На основании стандартного раствора готовят серию растворов молочной кислоты методом двукратных разведений.Based on the standard solution, a series of lactic acid solutions is prepared by the method of double dilutions.
Готовят 0,2% раствор хлорида железа(III), для чего навеску 0,3 г 6-водного хлорида железа(III) помещают в мерную колбу и доводят водой до 100 мл. Раствор перемешивают до полного растворения соли. Раствор должен иметь комнатную температуру (25±5°C).A 0.2% solution of iron (III) chloride is prepared, for which a weighed portion of 0.3 g of 6-aqueous iron (III) chloride is placed in a volumetric flask and adjusted to 100 ml with water. The solution is stirred until the salt is completely dissolved. The solution should have room temperature (25 ± 5 ° C).
К 2 мл 0,2% раствора хлорида железа(III) добавляют 50 мкл раствора молочной кислоты соответствующей концентрации, перемешивают. Оптическую плотность полученных окрашенных растворов измеряют с помощью спектрофотометра при длине волны 390 нм. В качестве контроля используют раствор - 2 мл 0,2% раствора хлорида железа(III). Данные зависимости светопоглощения окрашенных растворов от концентрации молочной кислоты, взятой на выполнение реакции, используют для построения калибровочного графика (фиг. 2).To 2 ml of a 0.2% solution of iron (III) chloride add 50 μl of a lactic acid solution of the appropriate concentration, mix. The optical density of the obtained colored solutions is measured using a spectrophotometer at a wavelength of 390 nm. As a control, a solution is used - 2 ml of a 0.2% solution of iron (III) chloride. The dependences of the light absorption of colored solutions on the concentration of lactic acid taken to perform the reaction are used to construct a calibration graph (Fig. 2).
Обработку результатов и построение калибровочного графика осуществляют с использованием статистической программы Statistica 6.0.Processing the results and constructing a calibration graph is carried out using the statistical program Statistica 6.0.
Выделяют линейный участок кривой, где оптическая плотность окрашенного раствора пропорциональна концентрации молочной кислоты в интервале от 0,5 до 11 г/л. Уравнение градуировочного графика имеет вид Б=0.1414А-0.0222, коэффициент корреляции 0.9999, уровень достоверности 0.000001, величина достоверности аппроксимации 0.9998 (фиг. 2).A linear portion of the curve is distinguished, where the optical density of the colored solution is proportional to the concentration of lactic acid in the range from 0.5 to 11 g / l. The equation of the calibration graph has the form B = 0.1414A-0.0222, the correlation coefficient is 0.9999, the confidence level is 0.000001, and the approximation confidence value is 0.9998 (Fig. 2).
Пример 2. Определение молочной кислоты в культуральной жидкостиExample 2. Determination of lactic acid in the culture fluid
Культуральную жидкость отделяют от клеток центрифугированием. Надосадочную жидкость разбавляют в 20 раз деионизированной водой.The culture fluid is separated from the cells by centrifugation. The supernatant is diluted 20 times with deionized water.
К 2 мл 0,2% раствора хлорида железа(III) добавляют 50 мкл разбавленной в 20 раз культуральной жидкости, перемешивают и измеряют оптическую плотность окрашенного раствора при длине волны 390 нм против контроля (2 мл 0,2% раствора хлорида железа(III)). Реакцию и измерения проводят при комнатной температуре (25±5°C). Измеренная оптическая плотность равна 0,628.To 2 ml of a 0.2% solution of iron (III) chloride, add 50 μl of a culture solution diluted 20 times, mix and measure the optical density of the colored solution at a wavelength of 390 nm against the control (2 ml of a 0.2% solution of iron (III) chloride ) The reaction and measurements are carried out at room temperature (25 ± 5 ° C). The measured optical density is 0.628.
Концентрацию молочной кислоты вычисляют по калибровочному графику с учетом 20-кратного разведения исследуемого образца культуральной жидкости.The concentration of lactic acid is calculated according to the calibration graph, taking into account a 20-fold dilution of the test sample of the culture fluid.
Сравнение результатов определения молочной кислоты в культуральной жидкости, полученных предложенным спектрофотометрическим методом и методом ВЭЖХ, приведено в табл. 1.A comparison of the results of determination of lactic acid in the culture fluid obtained by the proposed spectrophotometric method and HPLC is shown in table. one.
Пример 3. Определение молочной кислоты в составе кисломолочного продуктаExample 3. Determination of lactic acid in the composition of fermented milk product
Сыворотку отделяют от осадка методом центрифугирования и разбавляют в 10 раз деионизированной водой.The serum is separated from the precipitate by centrifugation and diluted 10 times with deionized water.
К 2 мл 0,2% раствора хлорида железа(III) добавляют 50 мкл разбавленной в 10 раз сыворотки кисломолочного продукта, перемешивают и измеряют оптическую плотность окрашенного раствора при длине волны 390 нм против контроля. Измеренная оптическая плотность равна 0,109.To 2 ml of a 0.2% solution of iron (III) chloride, 50 μl of fermented milk product serum diluted 10 times are added, mixed and the absorbance of the colored solution is measured at a wavelength of 390 nm against the control. The measured optical density is 0.109.
Концентрацию молочной кислоты вычисляют по калибровочному графику с учетом 10-кратного разведения исследуемого образца.The concentration of lactic acid is calculated according to the calibration graph taking into account 10-fold dilution of the test sample.
Сравнение результатов определения молочной кислоты в кисломолочном продукте, полученных предложенным спектрофотометрическим методом и методом ВЭЖХ, приведено в табл. 1.A comparison of the results of the determination of lactic acid in a fermented milk product obtained by the proposed spectrophotometric method and HPLC is given in table. one.
Пример 4. Определение концентрации молочной кислоты в водном раствореExample 4. Determination of the concentration of lactic acid in an aqueous solution
Навеску 1,2 г молочной кислоты с известной концентрацией (89%, ρ 1,2 г/см3) помещают в мерную колбу и доводят водой до 10 мл. Получают стандартный раствор с концентрацией молочной кислоты 89 г/л.A weighed portion of 1.2 g of lactic acid with a known concentration (89%, ρ 1.2 g / cm 3 ) is placed in a volumetric flask and adjusted to 10 ml with water. Get a standard solution with a concentration of lactic acid 89 g / L.
Стандартный раствор молочной кислоты разбавляют в 40 раз деионизированной водой.A standard lactic acid solution is diluted 40 times with deionized water.
К 2 мл 0,2% раствора хлорида железа(III) добавляют 50 мкл разбавленного в 40 раз стандартного водного раствора молочной кислоты, перемешивают и измеряют оптическую плотность окрашенного раствора при длине волны 390 нм против контроля. Измеренная оптическая плотность равна 0,601.To 2 ml of a 0.2% solution of iron (III) chloride, add 50 μl of a 40 times diluted standard aqueous solution of lactic acid, mix and measure the optical density of the colored solution at a wavelength of 390 nm against the control. The measured optical density is 0.601.
Концентрацию молочной кислоты вычисляют по калибровочному графику с учетом 40-кратного разведения исследуемого образца.The concentration of lactic acid is calculated according to the calibration graph taking into account 40-fold dilution of the test sample.
Сравнение результатов определения молочной кислоты в водном растворе, полученных предложенным спектрофотометрическим методом и методом ВЭЖХ, приведено в табл. 1.A comparison of the results of the determination of lactic acid in an aqueous solution obtained by the proposed spectrophotometric method and HPLC is given in table. one.
Таким образом, показано, что предложенный способ позволяет проводить количественное определение молочной кислоты как в водном растворе, так и в составе многокомпонентных смесей, таких как культуральная жидкость или кисломолочный продукт.Thus, it is shown that the proposed method allows the quantitative determination of lactic acid both in aqueous solution and in multicomponent mixtures, such as culture fluid or fermented milk product.
Преимущества способа:The advantages of the method:
- позволяет проводить определение молочной кислоты в составе многокомпонентных смесей без сложной подготовки проб;- allows the determination of lactic acid in the composition of multicomponent mixtures without complex sample preparation;
- точность определения;- accuracy of determination;
- не требует использования опасных или токсичных веществ, работа с которыми требует особых мер предосторожности;- does not require the use of hazardous or toxic substances, work with which requires special precautions;
- не требует использования дорогостоящих реагентов и оборудования;- does not require the use of expensive reagents and equipment;
- минимальные временные затраты.- minimum time costs.
Источники информацииInformation sources
1. Matthews, А.Р. 1920. Physiological Chemistry. 3rd Ed., Wm. Wood and Co., New York.1. Matthews, A.R. 1920. Physiological Chemistry. 3rd Ed., Wm. Wood and Co., New York.
2. Mima Y, Ohno H., Koh T. Bunseki Kagaku. 1994. 43. 10. C. 745.2. Mima Y, Ohno H., Koh T. Bunseki Kagaku. 1994. 43. 10. C. 745.
3. Lebuhn M., Hartmann A. J. Chromatogr. 1993. 629. C. 255.3. Lebuhn M., Hartmann A. J. Chromatogr. 1993.629. C. 255.
4. Lesh M.J., Wilkinson E.L., Zolfaghari M.R., Schreiber M.A. J. Liq. Chromatogr. 1993. 16. 11. C. 2415.4. Lesh M.J., Wilkinson E.L., Zolfaghari M.R., Schreiber M.A. J. Liq. Chromatogr. 1993. 16. 11. C. 2415.
5. Ohara H., Hiraga T., Katasho I., Inuta T., Yoshida T. J. Ferm. Bioengineering. 1993. 75. C. 470.5. Ohara H., Hiraga T., Katasho I., Inuta T., Yoshida T. J. Ferm. Bioengineering. 1993. 75.P. 470.
6. Frledemann TE, Catonlo M & Shatter PA. I. Blot. Client. 73: 335-58, 1927.6. Frledemann TE, Catonlo M & Shatter PA. I. Blot. Client 73: 335-58, 1927.
7. S.B. Barker and William H. Summerson J. Biol. Chem, 1941, 138: 535-554.7. S.B. Barker and William H. Summerson J. Biol. Chem, 1941, 138: 535-554.
8. Rodgers-Neame N.T. &. Blackwell R.E. Journal of Tissue Culture Methods Vol. 7, No. 4, 1982.8. Rodgers-Neame N.T. &. Blackwell R.E. Journal of Tissue Culture Methods Vol. 7, No. 4, 1982.
9. http://www.statsoft.ru.9.http: //www.statsoft.ru.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016147376A RU2639245C1 (en) | 2016-12-02 | 2016-12-02 | Method of spectrophotometric determining lactic acid |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016147376A RU2639245C1 (en) | 2016-12-02 | 2016-12-02 | Method of spectrophotometric determining lactic acid |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2639245C1 true RU2639245C1 (en) | 2017-12-20 |
Family
ID=60718626
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2016147376A RU2639245C1 (en) | 2016-12-02 | 2016-12-02 | Method of spectrophotometric determining lactic acid |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2639245C1 (en) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2190214C1 (en) * | 2001-04-20 | 2002-09-27 | Химический факультет МГУ им. М.В.Ломоносова | Chromatographic method for determination of lactic acid |
| WO2013045443A1 (en) * | 2011-09-28 | 2013-04-04 | Emilia Bramanti | Measurement of lactic acid in biological fluids |
-
2016
- 2016-12-02 RU RU2016147376A patent/RU2639245C1/en active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2190214C1 (en) * | 2001-04-20 | 2002-09-27 | Химический факультет МГУ им. М.В.Ломоносова | Chromatographic method for determination of lactic acid |
| WO2013045443A1 (en) * | 2011-09-28 | 2013-04-04 | Emilia Bramanti | Measurement of lactic acid in biological fluids |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| D. Figenschou et al. Spectrophotometric method for the determination of microquantities of lactic acid in biological material. Analytical Biochemistry, July 1991, pages 308-312. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Borshchevskaya et al. | Spectrophotometric determination of lactic acid | |
| Garry et al. | A micro method for serum cholinesterase | |
| Hadwan | New method for assessment of serum catalase activity | |
| Chromý et al. | Determination of serum creatinine by Jaffe method and how to calibrate to eliminate matrix interference problems | |
| Tanganelli et al. | Enzymic assay of creatinine in serum and urine with creatinine iminohydrolase and glutamate dehydrogenase. | |
| Shi et al. | Naked-eye sensitive detection of alkaline phosphatase (ALP) and pyrophosphate (PPi) based on a horseradish peroxidase catalytic colorimetric system with Cu (ii) | |
| Welshman et al. | The estimation of citrate in serum and urine using a citrate lyase technique | |
| US8883439B2 (en) | Blood component measurement method utilizing hemolyzed whole blood, and kit for the method | |
| Arciuli et al. | Bioactive paper platform for colorimetric phenols detection | |
| Morgenstern et al. | Automated determination of NAD-coupled enzymes. Determination of lactic dehydrogenase | |
| CN114113506B (en) | A method for judging the freshness of meat by quantitatively detecting hypoxanthine | |
| Khachornsakkul et al. | Development of an ultrasound-enhanced smartphone colorimetric biosensor for ultrasensitive hydrogen peroxide detection and its applications | |
| Levinson et al. | Measuring hemoglobin in plasma by reaction with tetramethylbenzidine. | |
| US4001089A (en) | Method for determination of triglycerides and glycerol | |
| Bucolo et al. | Mechanized enzymatic determination of triglycerides in serum | |
| KR100682082B1 (en) | Method of measuring biological sample components | |
| Artuch et al. | Determination of lactate, pyruvate, b-hydroxybutyrate and acetoacetate with a centrifugal analyser | |
| RU2639245C1 (en) | Method of spectrophotometric determining lactic acid | |
| US6287796B1 (en) | Biochemical method to measure niacin status in a biological sample | |
| Głowacka et al. | Photometric flow system for the determination of serum lactate dehydrogenase activity | |
| US4142938A (en) | Determination of triglycerides and glycerol | |
| Gavella | A simple automated method for determination of citric acid levels in semen | |
| Azeez et al. | Simple assay for quantifying xanthine oxidase activity | |
| Rodionov et al. | A photometric assay for ethanol | |
| CN106556595B (en) | A kind of Picric kinetic method detection kit of strong antijamming capability |