RU2632109C1 - Способ определения цитотоксической активности nk-клеток - Google Patents

Способ определения цитотоксической активности nk-клеток Download PDF

Info

Publication number
RU2632109C1
RU2632109C1 RU2016127903A RU2016127903A RU2632109C1 RU 2632109 C1 RU2632109 C1 RU 2632109C1 RU 2016127903 A RU2016127903 A RU 2016127903A RU 2016127903 A RU2016127903 A RU 2016127903A RU 2632109 C1 RU2632109 C1 RU 2632109C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
cells
trophoblast
incubated
viable
peripheral blood
Prior art date
Application number
RU2016127903A
Other languages
English (en)
Inventor
Дмитрий Игоревич Соколов
Валентина Анатольевна Михайлова
Лариса Павловна Вязьмина
Алана Олеговна Агнаева
Олеся Николаевна Беспалова
Сергей Алексеевич Сельков
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт акушерства, гинекологии и репродуктологии имени Д.О. Отта"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт акушерства, гинекологии и репродуктологии имени Д.О. Отта" filed Critical Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт акушерства, гинекологии и репродуктологии имени Д.О. Отта"
Priority to RU2016127903A priority Critical patent/RU2632109C1/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2632109C1 publication Critical patent/RU2632109C1/ru

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor

Abstract

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для определения цитотоксической активности NK-клеток в отношении клеток трофобласта. Способ включает выделение фракции мононуклеарных клеток, содержащих NK-клетки, из периферической крови. Проводят инкубацию в культуральной среде мононуклеаров в присутствии клеток-мишеней с последующей оценкой количества погибших клеток путем проточной цитофлуометрии. При этом мононуклеары периферической крови, содержащие NK-клетки, инкубируют в культуральной среде DMEM в течение 4 часов в присутствии клеток трофобласта линии Jeg-3. Часть клеток трофобласта инкубируют в культуральной среде DMEM без мононуклеаров в течение 4 часов. Затем определяют количество нежизнеспособных и жизнеспособных клеток трофобласта, инкубированных с мононуклеарами периферической крови, и базовое количество нежизнеспособных и жизнеспособных клеток трофобласта, инкубированных в культуральной среде без мононуклеаров периферической крови. Определяют цитотоксический эффект NK-клеток в отношении клеток трофобласта по формуле: ЦЭ=(X1/Х2)×100-(Х1баз/Х2баз)×100, где ЦЭ - цитотоксическая активность NK-клеток, X1 - количество нежизнеспособных клеток трофобласта, инкубированных с мононуклеарами периферической крови, Х2 - количество жизнеспособных клеток трофобласта, инкубированных с мононуклеарами периферической крови, Х1баз. - базовое количество нежизнеспособных клеток трофобласта, инкубированных в культуральной среде без добавления мононуклеаров; Х2баз. - базовое количество жизнеспособных клеток трофобласта, инкубированных в культуральной среде без добавления мононуклеаров. Использование данного способа позволяет получить количественную оценку цитотоксической активности NK-клеток, что дает возможность проводить мониторинг течения беременности. 6 ил., 1 табл., 1 пр.

Description

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для оценки цитотоксической активности NK-клеток фракции мононуклеаров периферической крови.
Известен способ определения цитотоксической активности NK-клеток по интенсивности индукции гибели клеток-мишеней перевиваемой линии К562 (Муругин В.В. Комплекс методов исследования NK-клеток в норме и при патологии // Диссертация … канд. мед. наук. Москва, 2012, стр. 134). Для мечения клеток-мишеней линии К562 используют флуоресцентный краситель 5-,6-карбоксифлуоресцеин диацетатсукцинилмидиловый эфир (КФДЭ), который образует прочную ковалентную связь с внутриклеточными белками и в используемой концентрации не влияет на жизнеспособность клеток (Ковальчук Л.В., Игнатьева Г.А., Ганковская Л.В. Иммунология. Практикум. Учебное пособие // 2010. - Р. 176). Учет флуоресценции проводится при помощи метода проточной цитофлуориметрии, позволяющего проанализировать большое количество клеток.
Недостаток способа: не учитываются особенности функциональных взаимодействий NK-клеток при различных физиологических процессах, например при беременности.
Данные литературы (Hunt J.S., Petroff M.G., McIntire R.H., Ober С. HLA-G and immune tolerance in pregnancy // FASEB J. - 2005. - Vol. 19, №7. P. 681-93) указывают на возможность образования NK-клеток децидуальной оболочки из NK-клеток периферической крови. Непосредственное взаимодействие клеток трофобласта и NK-клеток является неотъемлемым процессом, происходящим при физиологической беременности. В настоящее время малоизученным остается вопрос о характере взаимодействия клеток трофобласта и NK-клеток при беременности. При помощи существующих способов оценки цитотоксической активности NK-клеток не представляется возможным полноценно моделировать in vitro подобное взаимодействие клеток при беременности.
Техническим результатом изобретения является создание способа определения цитотоксической активности фракции NK-клеток мононуклеаров периферической крови в отношении клеток трофобласта, который может быть использован для проведения мониторинга цитотоксической активности NK-клеток пациенток с физиологической беременностью, а также для исследований функциональной активности NK-клеток пациенток с патологиями беременности.
Указанный технический результат достигается тем, что в заявленном способе определения цитотоксической активности NK-клеток, включающем выделение фракции мононуклеарных клеток, содержащих NK-клетки, из периферической крови, инкубацию в культуральной среде мононуклеаров в присутствии клеток-мишеней и последующую оценку количества погибших клеток путем проточной цитофлуометрии, согласно изобретению мононуклеары периферической крови, содержащие NK-клетки, инкубируют в культуральной среде DMEM в течение 4 часов в присутствии клеток трофобласта линии Jeg-3, часть клеток трофобласта инкубируют в культуральной среде DMEM без мононуклеаров в течение 4 часов, затем определяют количество нежизнеспособных и жизнеспособных клеток трофобласта, инкубированных с мононуклеарами периферической крови, и базовое количество нежизнеспособных и жизнеспособных клеток трофобласта, инкубированных в культуральной среде без мононуклеаров периферической крови, определяют цитотоксический эффект NK-клеток в отношении клеток трофобласта по формуле:
ЦЭ=(X1/Х2)×100-(Х1баз/Х2баз)×100,
где ЦЭ - цитотоксическая активность NK-клеток,
X1 - количество нежизнеспособных клеток трофобласта, инкубированных с мононуклеарами периферической крови,
Х2 - количество жизнеспособных клеток трофобласта, инкубированных с мононуклеарами периферической крови,
X1баз. - базовое количество нежизнеспособных клеток трофобласта, инкубированных в культуральной среде без добавления мононуклеаров,
Х2баз. - базовое количество жизнеспособных клеток трофобласта, инкубированных в культуральной среде без добавления мононуклеаров.
В исследование, на котором основано изобретение, было включено 89 пациентов, среди которых были 54 здоровые небеременные женщины без предшествующих беременностей в анамнезе (Группа 1), 14 здоровых мужчин (Группа 2) и 21 здоровая беременная женщина на сроке 6-7 недель.
Для каждого пациента проводили оценку цитотоксического эффекта NK-клеток в четырех повторах.
Полученные данные были статистически обработаны с помощью программы Statistica 10. Для сравнения полученных данных использовался U-критерий Манна-Уитни, являющийся непараметрическим аналогом t-критерия Стьюдента. Статистически значимыми признавались различия при р<0,05.
В таблице 1 для каждой группы пациентов представлены значения медианы, в фигурных скобках приведены значения верхнего и нижнего квартиля.
Figure 00000001
Установлено, что группа 1 (здоровые небеременные женщины) статистически не отличается от группы 2 (здоровые мужчины). Группа 3 (здоровые беременные женщины на сроке 6-7 недель) отличается от группы 1 (здоровые небеременные женщины).
Вероятно, выявленный с помощью предлагаемого способа сниженный цитотоксический эффект NK-клеток в отношении клеток трофобласта в группе здоровых беременных женщин в сравнении с группой здоровых небеременных женщин определяется контактами NK-клеток данных пациенток с клетками трофобласта in vivo и подавлением их цитотоксической функции.
Способ иллюстрируется фиг. 1-6, где:
на фиг. 1 представлена двумерная гистограмма относительного количества клеток трофобласта линии Jeg-3 с координатами по оси абсцисс FSC, по оси ординат SSC. Регион Cells содержит клетки трофобласта;
на фиг. 2 представлена двумерная гистограмма образца клеток трофобласта линии Jeg-3, неокрашенных красителем КФДЭ (отрицательный контроль), с координатами по оси абсцисс FSC, по оси ординат FITC. Клетки спроецированы из региона Cells;
на фиг. 3 представлена двумерная гистограмма относительного количества клеток трофобласта линии Jeg-3 с координатами по оси абсцисс FSC, по оси ординат FITC. Регион Jeg-3 содержит клетки трофобласта, окрашенные красителем КФДЭ. Клетки спроецированы из региона Cells;
на фиг. 4 представлена двумерная гистограмма относительного количества клеток трофобласта линии Jeg-3, неокрашенных красителем пропидия иодида (отрицательный контроль), с координатами по оси абсцисс FSC, по оси ординат РЕ. Клетки спроецированы из региона Jeg-3;
на фиг. 5 представлена двумерная гистограмма относительного количества погибших клеток трофобласта линии Jeg-3, окрашенных красителем пропидия иодида, с координатами по оси абсцисс FSC, по оси ординат РЕ. Регион Dead cells содержит клетки трофобласта, окрашенные красителем РЕ. Клетки спроецированы из региона Jeg-3;
на фиг. 6 представлена двумерная гистограмма относительного количества погибших клеток трофобласта линии Jeg-3, окрашенных красителем пропидия иодида, после инкубации в присутствии мононуклеаров периферической крови, с координатами по оси абсцисс FSC, по оси ординат РЕ. Регион Dead cells содержит клетки трофобласта, окрашенные красителем РЕ. Клетки спроецированы из региона Jeg-3.
Способ осуществляют, например, следующим образом.
Для оценки цитотоксической активности NK-клеток фракции мононуклеаров периферической крови в отношении клеток трофобласта используют клетки трофобласта линии Jeg-3.
I. Порядок исследования.
1. Подготовка рабочих растворов.
1.1. Культуральная среда DMEM с добавлением 10% инактивированной эмбриональной телячьей сыворотки (ЭТС), 100 Ед./мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина, 2 мМ L-глютамина, 10 мМ пирувата натрия (полная культуральная среда).
1.2. Раствор Версена стерильный.
1.3. Раствор Трипсина стерильный.
1.4. Раствор градиента плотности фиколл-верографин.
1.5. Раствор Хенкса стерильный.
2. Подготовка необходимых материалов.
2.1. Планшет 96-луночный, стерильный, с крышкой, прозрачный, круглодонный.
2.2. Флакон для культивирования прилипающих культур с вентилируемой синей крышкой 75 см2.
2.3. Камера Горяева.
2.4. Стерильные наконечники на 5 мл.
2.5. Одноразовые наконечники для дозаторов переменного объема до 10 мкл, до 300 мкл, до 1000 мкл.
2.6. Конические стерильные пробирки объемом 13 мл, 15 мл, 50 мл.
2.9. Раствор пропидия иодида 1 мкг/мл, приготовленный на PBS.
3. Подготовка необходимого оборудования.
3.1. Вертикальный ламинарно-потоковый шкаф.
3.2. Набор механических дозаторов переменного объема.
3.3. Центрифуга.
3.4. Термостат.
3.5. Вортекс.
3.6. Холодильник 6+2°С.
3.7. СO2 инкубатор.
3.8. Проточный цитофлуориметр, оборудованный 488 нм лазером, датчиками прямого и непрямого светорассеяния, датчиками учета флуоресценции FITC (519 нм), РЕ (578 нм).
II. Культивирование клеток трофобласта линии Jeg-3.
Порядок работы
1. До начала процедуры прогреть стерильные контейнеры со средой для культивирования клеток трофобласта, стерильным раствором Трипсина и стерильным раствором Версена при температуре 37°С.
2. Все необходимые материалы, перечисленные в пункте 2 раздела I, внести стерильно в вертикальный ламинарно-потоковый шкаф для работы с клеточными культурами.
3. Смешать стерильно раствор Трипсина с раствором Версена (ТВ), содержащий равные части раствора Трипсина и раствора Версена.
4. Аккуратно слить старую среду из флакона 75 см2 для культивирования с клетками трофобласта, добавить 5 мл стерильного раствора ТВ, чтобы дезинтегрировать монослой клеток. Подождать 30 секунд, аккуратно потрясти флакон и слить раствор ТВ. Повторить операцию 2 раза, затем добавить две капли раствора ТВ. Закрыть крышку флакона. Покачивать флакон в течение 5 минут так, чтобы клетки все время омывались раствором. Похлопать флакон по бокам, чтобы снять клетки со стенок флакона.
5. Добавить 5 мл ранее приготовленной среды для клеток трофобласта во флакон 75 см2.
6. Тщательно ресуспендировать. Перенести 700 мкл среды с клетками в новый флакон 75 см2 и долить в него 10 мл среды для культивирования.
7. Культивировать клеточную культуру во влажной атмосфере с 7% СO2 при 37°С в течение 72 часов или до образования клетками 2/3 монослоя.
III. Выделение мононуклеаров из периферической крови.
1. Все необходимые материалы, перечисленные в пункте 2 раздела I, внести стерильно в вертикальный ламинарно-потоковый шкаф для работы с клеточными культурами.
2. Подогреть Хенкс и раствор градиента плотности фиколл-верографин в термостате 37°С.
3. Подписать и внести в ламинар (из расчета на анализ 1 пациента): 1 пробирку на 50 мл, 3 пробирки на 13 мл, 1 пробирку на 15 мл.
4. Внести в пробирки на 13 мл по 4 мл раствора градиента. В пробирки на 50 мл внести по 12 мл Хенкса, в пробирки для отмывки мононуклеаров внести по 10 мл Хенкса.
5. Смешать 6 мл периферической крови с теплым раствором Хенкса в соотношении 1:2.
6. Пипеткой на 1 мл аккуратно наслоить разведенную периферическую кровь на раствор градиента из расчета на 4 мл градиента по 6 мл разведенной крови.
7. Центрифугировать 400g в течение 30 мин при 22°С.
8. Стерильно внести пробирки в ламинарно-потоковый шкаф. Отобрать 4-5 мл плазмы пипеткой на 1 мл и слить ее. Собрать кольцо мононуклеаров.
9. Перенести мононуклеары в пробирку с 10 мл раствора Хенкса.
10. Центрифугировать 200g в течение 10 мин при 22°С.
11. Аккуратно слить надосадочную жидкость, добавить к мононуклеарам 3 мл раствора Хенкса, ресуспендировать.
12. Посчитать концентрацию мононуклеаров в камере Горяева. Добавить 10 мл раствора Хенкса.
13. Центрифугировать 200g в течение 10 мин при 22°С.
14. Аккуратно слить надосадочную жидкость. Развести клетки в культуральной среде на основе DMEM до концентрации 3 млн/мл.
15. Перенести по 100 мкл клеток в лунки круглодонных планшетов.
16. Инкубировать в течение 96 часов при 37°С во влажной атмосфере и 5% СO2.
IV. Проведение эксперимента.
1. Подогреть культуральную среду DMEM, полную культуральную среду для клеток трофобласта линии JEG-3, раствор ТВ в термостате 37°С.
2. Все необходимые материалы, перечисленные в пункте 2 раздела I, внести стерильно в вертикальный ламинарно-потоковый шкаф для работы с клеточными культурами.
3. Развести в 5 мл теплой культуральной среды DMEM 4 мкл КФДЭ (стоковый раствор: 4,48 ммоль/л) и ресуспендировать.
4. Аккуратно слить старую среду из флакона для культивирования с клетками трофобласта, добавить 5 мл стерильного раствора, внести раствор красителя КФДЭ.
5. Инкубировать в течение 10 мин при 37°С, 7% СО2.
6. Слить раствор красителя, внести 10 мл холодной культуральной среды для JEG-3 без ЭТС.
7. Повторить отмывку: слить раствор холодной культуральной среды и повторно внести 10 мл холодной культуральной среды для JEG-3.
8. Слить раствор культуральной среды.
9. Добавить во флакон для культивирования клеток трофобласта 5 мл стерильного раствора ТВ, чтобы дезинтегрировать монослой клеток. Подождать 30 секунд, аккуратно потрясти флакон и слить раствор ТВ. Повторить операцию 2 раза, затем добавить две капли раствора ТВ. Закрыть крышку флакона. Покачивать флакон в течение 5 минут так, чтобы клетки все время омывались раствором. Похлопать флакон по бокам, чтобы снять клетки со стенок флакона.
10. Внести 2 мл теплой среды для клеток трофобласта.
11. Посчитать концентрацию клеток в камере Горяева. Развести клетки в среде для клеток JEG-3 до концентрации 0,6 млн/мл.
12. Перенести по 50 мкл клеток в планшет с предварительно засеянными мононуклеарами периферической крови, ресуспендировать. Внести в 5 лунок без мононуклеаров по 150 мкл клеток JEG-3.
13. Центрифугировать планшет при 100g в течение 3 мин при 22°С.
14. Инкубировать пробы в течение 4 часов при 37°С, 5% СО2.
15. Окрасить пробы красителем пропидия иодида. Конечная концентрация пропидия иодида должна составлять 2 мкг/мл. Оставить неокрашенной 1 пробу с клетками JEG-3.
16. Инкубировать пробы 20 минут при 4°С.
17. Добавить в пробы по 300 мкл стандартного фосфатно-солевого буфера.
V. Проведение анализа и учет результатов.
Анализ клеток проводят на проточном цитофлуориметре, оборудованном 488 нм лазером, по четырем параметрам: интенсивности прямого и бокового светорассеяния, флуоресценции по каналу FITC (спектр поглощения 488 нм, спектр эмиссии 519 нм), флуоресценции по каналу РЕ (спектр поглощения 488 нм, спектр эмиссии 578 нм). Анализируется 10000 событий. На двумерной гистограмме с координатами FSC-SSC выделяют регион Cells, содержащий клетки трофобласта (фиг. 1). Клетки из региона Cells проецируют на двумерную гистограмму с координатами FSC-FITC (фиг. 2). Границу квадрантов на графике устанавливают на основании предшествующего измерения контрольной пробы, неокрашенной раствором КФДЭ (фиг. 2). При измерении опытной пробы, окрашенной раствором КФДЭ, клетки из региона Cells проецируют на двумерную гистограмму с координатами FSC-FITC. Определяют количество событий в квадранте Jeg-3 (фиг. 3), данное количество соответствует количеству клеток трофобласта. Затем события из квадранта Jeg-3 проецируют на двумерную гистограмму с координатами FSC-PE. Границу квадрантов на графике устанавливают на основании предшествующего измерения контрольной пробы, неокрашенной раствором пропидия иодида (фиг. 4). При измерении опытной пробы, окрашенной растворами КФДЭ и пропидия иодида, на двумерной гистограмме с координатами FSC-PE анализируют относительное количество погибших клеток трофобласта линии Jeg-3 (клетки из квадранта Jeg-3, окрашенные красителем пропидия иодида) (фиг. 5). Регион Dead cells содержит клетки трофобласта, окрашенные раствором пропидия иодида. Количество событий в квадранте Dead cells соответствует нежизнеспособным клеткам трофобласта (фиг. 5). Гибель клеток в контрольной лунке (после инкубации клеток трофобласта без мононуклеаров периферической крови) не должна превышать 30%.
Затем проводят учет количества событий в квадранте Dead cells после инкубации клеток трофобласта с мононуклеарами периферической крови (фиг. 6). По количеству событий в квадрантах Dead cells определяют процент нежизнеспособных клеток трофобласта.
Затем вычисляют цитотоксический эффект NK-клеток фракции мононуклеаров периферической крови по формуле:
ЦЭ=(X1/Х2)×100-(Х1баз/Х2баз)×100.
Параметр X1 соответствует количеству событий в гейте Dead cells после измерения пробы клеток трофобласта, инкубированных с мононуклеарами периферической крови (фиг. 6). Параметр Х2 соответствует количеству событий в гейте Jeg-3 после измерения пробы клеток трофобласта, инкубированных с мононуклеарами периферической крови (фиг. 6). Параметр X1баз соответствует количеству событий в гейте Dead cells после измерения пробы клеток трофобласта, инкубированных без мононуклеаров периферической крови (фиг. 5). Параметр Х2баз соответствует количеству событий в гейте Jeg-3 после измерения пробы клеток трофобласта, инкубированных без мононуклеаров периферической крови (фиг. 5).
Пример 1. Пациентка А. Параметр X1=959 событие. Параметр Х2=2378 события. Параметр X1баз=624 события. Параметр Х2баз=3003 событий.
ЦЭ=(X1/Х2)×100-(Х1баз/Х2баз)×100=(959/2378)×100-(624/3003)×100=19,5%.
Способ позволяет получить количественную оценку цитотоксической активности NK-клеток в отношении клеток трофобласта при их взаимодействии. Оценка цитотоксического эффекта NK-клеток в отношении клеток трофобласта может быть применена для мониторинга физиологического течения беременности, а также для исследований функциональной активности NK-клеток при патологии беременности.

Claims (7)

  1. Способ определения цитотоксической активности NK-клеток, включающий выделение фракции мононуклеарных клеток, содержащих NK-клетки, из периферической крови, инкубацию в культуральной среде мононуклеаров в присутствии клеток-мишеней и последующую оценку количества погибших клеток путем проточной цитофлуометрии, отличающийся тем, что мононуклеары периферической крови, содержащие NK-клетки, инкубируют в культуральной среде DMEM в течение 4 часов в присутствии клеток трофобласта линии Jeg-3, часть клеток трофобласта инкубируют в культуральной среде DMEM без мононуклеаров в течение 4 часов, затем определяют количество нежизнеспособных и жизнеспособных клеток трофобласта, инкубированных с мононуклеарами периферической крови, и базовое количество нежизнеспособных и жизнеспособных клеток трофобласта, инкубированных в культуральной среде без мононуклеаров периферической крови, определяют цитотоксический эффект NK-клеток в отношении клеток трофобласта по формуле:
  2. ЦЭ=(X1/Х2)×100-(Х1баз/Х2баз)×100,
  3. где ЦЭ - цитотоксическая активность NK-клеток,
  4. X1 - количество нежизнеспособных клеток трофобласта, инкубированных с мононуклеарами периферической крови,
  5. Х2 - количество жизнеспособных клеток трофобласта, инкубированных с мононуклеарами периферической крови,
  6. Х1баз - базовое количество нежизнеспособных клеток трофобласта, инкубированных в культуральной среде без добавления мононуклеаров;
  7. Х2баз - базовое количество жизнеспособных клеток трофобласта, инкубированных в культуральной среде без добавления мононуклеаров.
RU2016127903A 2016-07-11 2016-07-11 Способ определения цитотоксической активности nk-клеток RU2632109C1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2016127903A RU2632109C1 (ru) 2016-07-11 2016-07-11 Способ определения цитотоксической активности nk-клеток

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2016127903A RU2632109C1 (ru) 2016-07-11 2016-07-11 Способ определения цитотоксической активности nk-клеток

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2632109C1 true RU2632109C1 (ru) 2017-10-02

Family

ID=60040540

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2016127903A RU2632109C1 (ru) 2016-07-11 2016-07-11 Способ определения цитотоксической активности nk-клеток

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2632109C1 (ru)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103045712A (zh) * 2013-01-27 2013-04-17 罗奇志 一种适合教学与科研使用的nk细胞活性检测方法
RU2514019C2 (ru) * 2012-06-06 2014-04-27 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научный центр психического здоровья" Российской академии медицинских наук Способ оценки цитотоксической активности лимфоцитов натуральных киллеров

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2514019C2 (ru) * 2012-06-06 2014-04-27 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научный центр психического здоровья" Российской академии медицинских наук Способ оценки цитотоксической активности лимфоцитов натуральных киллеров
CN103045712A (zh) * 2013-01-27 2013-04-17 罗奇志 一种适合教学与科研使用的nk细胞活性检测方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
БАЖЕНОВ Д.О. и др. Пролиферативная активность клеток трофобласта в присутствии цитопротективных лекарственных препаратов // Журнал укашерства и женских болезней // 2015. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11579084B2 (en) Devices, systems, and methods for fluorescence lifetime imaging microscopy
Hoeller et al. Epstein-Barr virus–positive diffuse large B-cell lymphoma in elderly patients is rare in Western populations
Borchardt et al. A comparison of the sensitivity of the InPouch TV, Diamond's and Trichosel media for detection of Trichomonas vaginalis.
Aanei et al. Focal adhesion protein abnormalities in myelodysplastic mesenchymal stromal cells
US11015172B2 (en) Method for culturing a subpopulation of circulating epithelial tumour cells from a body fluid
Zhang et al. The effect of cellular isolation and cryopreservation on the expression of markers identifying subsets of regulatory T cells
Cover et al. A new method for the diagnosis of Trichomonas gallinae infection by culture
WO2020066991A1 (ja) アカルボース又はスタキオースを含む哺乳動物細胞保存用液
RU2632109C1 (ru) Способ определения цитотоксической активности nk-клеток
Salinas-Jazmín et al. A flow cytometry-based assay for the evaluation of antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC) in cancer cells
Koh et al. Visualizing cellular dynamics and protein localization in 3D collagen
RU2437100C1 (ru) Способ диагностики аномалий упаковки хроматина сперматозоидов при мужском бесплодии
Herzig et al. Interactions of human mesenchymal stromal cells with peripheral blood mononuclear cells in a Mitogenic proliferation assay
Tanaka et al. Gaps between Asian regulations for eligibility of human mesenchymal stromal cells as starting materials of cell therapy products and comparability of mesenchymal stromal cell-based products subject to changes in their manufacturing process
Goossens et al. Computer-assisted motility analysis of spermatozoa obtained after spermatogonial stem cell transplantation in the mouse
RU2657433C1 (ru) Способ оценки риска невынашивания беременности у женщин с привычным невынашиванием
Wu et al. A comprehensive multiparameter flow cytometry panel for immune profiling and functional studies of frozen tissue, bone marrow, and spleen
Zhou et al. Myeloid-derived suppressor cells exert immunosuppressive function on the T helper 2 in mice infected with Echinococcus granulosus
CN112813021A (zh) 评估药物心血管安全性的细胞模型及方法
Maini et al. Monocyte and neutrophil isolation, migration, and phagocytosis assays
Mazzucchelli et al. Expression and function of toll-like receptors in human circulating endothelial colony forming cells
Agallou et al. Detection of antigen-specific T cells in spleens of vaccinated mice applying 3 [H]-thymidine incorporation assay and luminex multiple cytokine analysis technology
Owusu et al. Intestinal Enteroid Culture for Human Astroviruses
Beelen et al. An in vitro model to monitor natural killer cell effector functions against breast cancer cells derived from human tumor tissue
Gómez-Aguililla et al. Isolation and cryopreservation of peripheral blood mononuclear cells

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20190712