RU2628456C1 - Новые пиримидиновые ингибиторы репликации аденовируса человека - Google Patents
Новые пиримидиновые ингибиторы репликации аденовируса человека Download PDFInfo
- Publication number
- RU2628456C1 RU2628456C1 RU2016125942A RU2016125942A RU2628456C1 RU 2628456 C1 RU2628456 C1 RU 2628456C1 RU 2016125942 A RU2016125942 A RU 2016125942A RU 2016125942 A RU2016125942 A RU 2016125942A RU 2628456 C1 RU2628456 C1 RU 2628456C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- compounds
- phenoxy
- dmso
- mmol
- uracil
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
- A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
- A61K31/513—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring, e.g. cytosine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
- C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
- C07D239/24—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
- C07D239/28—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
- C07D239/46—Two or more oxygen, sulphur or nitrogen atoms
- C07D239/52—Two oxygen atoms
- C07D239/54—Two oxygen atoms as doubly bound oxygen atoms or as unsubstituted hydroxy radicals
- C07D239/545—Two oxygen atoms as doubly bound oxygen atoms or as unsubstituted hydroxy radicals with other hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Изобретение относится к новым производным 5-аминоурацила, содержащим в положении N1 4-(фенокси)бензильный или ω-(фенокси)алкильный заместитель, соответствующим общей структурной формуле (I). Соединения обладают селективным противовирусным действием в отношении аденовирусов человека (HAdV) и могут быть использованы при лечении аденовирусных инфекций. Соединения представляют собой новый класс противоаденовирусных агентов ненуклеозидной природы. В общей формуле (I)
X=СН или N; Y=(СН2)2, (СН2)3, (СН2)4 или С6Н4; R1=Н, R2=С6Н5 или 3,5-Cl2C6H3; R1+R2=морфолино; R3=Н, F или Cl. 1 ил., 3 табл., 11 пр.
Description
Изобретение относится к области молекулярной биологии, вирусологии и медицины, а именно к новым производным 5-аминоурацила, содержащим в положении N1 4-(фенокси)бензильный или ω-(фенокси)алкильный заместитель и обладающим противовирусным действием в отношении аденовирусов человека (HAdV), общей формулы
где X=СН или N; Y=(СН2)2, (СН2)3, (СН2)4 или С6Н4;
R1=Н, R2=С6Н5 или 3,5-Cl2С6Н3; R1+R2=морфолино;
R3=Н, F или Cl.
Высокоэффективные селективные химиотерапевтические противовирусные средства для лечения аденовирусных инфекций на сегодняшний день отсутствуют [Pihos А.М. Epidemic keratoconjunctivitis: А review of current concepts in management // Journal of Optometry. - 2013. - T. 6, №2. - C. 69-74]. Как правило, в терапии используют противовирусные средства широкого спектра действия, такие как интерферон или индукторы интерферона и препараты на основе кортикостероидов [Meyer-Rusenberg В., Loderstadt U., Richard G., Kaulfers P.M., Gesser C. Epidemic keratoconjunctivitis: the current situation and recommendations for prevention and treatment // Dtsch Arztebl Int. - 2011. - T. 108, №27. - C. 475-480]. Лекарственные средства, относящиеся к группе индукторов интерферона, недостаточно эффективны при борьбе с осложненными формами заболеваний, вызываемых аденовирусами, из-за низкой специфичности действия.
В настоящее время показана активность производных ациклонуклеотидов в отношении аденовирусов, например, цидофовира - (S)-1-(3-гидрокси-2-фосфонилметоксипропил)цитозина [De Clercq Е. The acyclic nucleoside phosphonates from inception to clinical use: historical perspective // Antiviral Res. - 2007. - T. 75, №1. - C. 1-13]. Действие цидофовира неспецифично в отношении аденовирусов человека: соединение является предшественником субстрата ДНК-полимеразы многих ДНК-содержащих вирусов. Проникая в клетку, цидофовир фосфорилируется клеточными киназами, превращается в аналог нуклеозидтрифосфатов, при синтезе ДНК конкурирует с обычными нуклеозидами и встраивается в растущую цепь ДНК. Гидроксильная группа в алифатической боковой цепи цидофовира оставляет возможность для дальнейшего удлинения цепи ДНК, поэтому лишь последовательное включение в растущую цепь двух молекул цидофовира приводит к невозможности ее дальнейшей элонгации. Как следствие, продукты, образующиеся в результате преждевременной остановки роста цепи ДНК, подвергаются быстрой деградации [De Clercq Е. The history of antiretrovirals: key discoveries over the past 25 years // Rev Med Virol. - 2009. - T. 19, №5. - C. 287-299]. Было показано, что HPMPC-дифосфат обладает более специфичным действием in vitro в отношении аденовирусов за счет повышенного сродства этого соединения к вирусной ДНК-полимеразе [De Clercq Е. Antivirals and antiviral strategies // Nat Rev Microbiol. - 2004. - T. 2, №9. - C. 704-720].
Цидофовир обладает широким спектром ингибирующей активности: in vitro он эффективен в отношении вирусов простого герпеса типа 1 и типа 2 человека, вируса Эпштейна-Барр, вирусов папилломы типов 6, 7 и 8 человека, полиомавирусов человека, а также аденовирусов [Waye М.М.Y., Sing С.W. Anti-Viral Drugs for Human Adenoviruses // Pharmaceuticals. - 2010. – T.3, №10. - C. 3343-3354]. В настоящее время цидофовир используют для терапии цитомегаловирусного ретинита у пациентов, страдающих синдромом приобретенного иммунодефицита (СПИД). Следует отметить, что применение цидофовира ограничено его высокой токсичностью, в том числе нефротоксичностью [Piscitelli S.С, Penzak S.R., Flexner С. Chapter 36 - Practical Therapeutics // AIDS and Other Manifestations of HIV Infection (Fourth Edition). - 2003. - C. 913-930]. Таким образом, актуальным является поиск эффективных и нетоксичных химиопрепаратов для борьбы с аденовирусами.
Наиболее близкими по химическому строению к предлагаемым соединениям являются 1-бензил-5-(ариламино)-производные урацила [Novikov М.S., Buckheit R.W., Jr., Temburnikar K., Khandazhinskaya A.L., Ivanov A.V., Seley-Radtke K.L. 1 - Benzyl derivatives of 5-(arylamino)uracils as anti-HIV-1 and anti-EBV agents // Bioorg Med Chem. - 2010. - T. 18, №23. - C. 8310-8314]. Данные соединения проявляют активность в отношении вируса иммунодефицита человека типа 1 (ВИЧ-1) и вируса Эпштейна-Барр; активность данных соединений в отношении аденовирусов человека не показана.
Целью предлагаемого изобретения является создание новых, высокоэффективных, селективных и малотоксичных антивирусных агентов для лечения аденовирусной инфекции.
Сущность изобретения заключается в синтезе новых производных 5-аминоурацила, содержащих в положении N1 пиримидинового цикла 4-(фенокси)бензильный или ω-(фенокси)алкильный заместитель и отвечающих указанной выше общей формуле.
Синтез новых соединений был осуществлен путем конденсации 2,4-бис(триметилсилилокси)-5-аминопиримидина или 6-амино-3,5-бис-(триметилсилилокси)-1,2,4-триазина с соответствующим 4-(фенокси)бензилбромидом или ω-(фенокси)алкилбромидом. Химическое строение, выход и физико-химические свойства синтезированных соединений представлены в таблице 1. Структура соединений доказана методами ЯМР-спектроскопии, чистота и индивидуальность - методом тонкослойной хроматографии.
Краткое описание чертежей
Фиг. 1. Оценка противоаденовирусной активности производных 5-аминоурацила. Различия между опытными и контрольными образцами статистически значимы при *р<0,05; ***р<0,001.
Следующие примеры иллюстрируют сущность изобретения.
Пример 1. [4-(Фенокси)бензил]-5-(фениламино)-6-азаурацил (соединение 1). Суспензию 1,0 г (4,90 ммоль) 6-аза-5-(фениламино)урацила и 0,1 г (1,87 ммоль) NH4Cl в 30 мл ГМДС кипятили в течение 12 ч до образования прозрачного раствора. Избыток ГМДС удалили при пониженном давлении, остаток растворили в 50 мл безводного 1,2-дихлорэтана, добавили 1,3 г (4,94 ммоль) 4-(фенокси)бензилбромида и полученную смесь кипятили с защитой от влаги воздуха в течение 24 ч. Реакционную массу охладили до комнатной температуры, обработали 10 мл изопропилового спирта, упарили при пониженном давлении и остаток чистили флэш-хроматографией, элюируя смесью хлороформ - метанол (10:1). Фракции, содержащие продукт, объединили и упарили досуха при пониженном давлении. Твердый остаток перекристаллизовали из смеси этилацетат - гексан (2:1). Получили 1,26 г мелкокристаллического продукта белого цвета с выходом 67%, Т.пл. 264-266°С, Rf 0,76 (этилацетат). 1H ЯМР (ДМСО-D6), δ, м.д.: 4,95 (2Н, с, СН2); 6,89-7,03 (5Н, м, Н-2', Н-3', Н-4', Н-5', Н-6'); 7,10 (1Н, т, J=7,1 Гц, Н-4'''); 7,22 (2Н, т, J=7,6 Гц, Н-3''', Н-5'''); 7,33 (2Н, т, J=7,7 Гц, Н-3ʺ, Н-5ʺ); 7,38 (2Н, д, J=8,2 Гц, Н-2ʺ, Н-6ʺ); 7,61 (2Н, д, J=7,8 Гц, Н-2''', Н-6'''); 8,33 (1H, с, NH); 13С ЯМР (ДМСО-D6), δ, м.д.: 52,7; 119,0; 119,1; 119,3; 122,4; 123,9; 128,9; 130,3; 130,4; 132,5; 139,8; 140,0; 148,0; 154,7; 156,8; 157,3.
Пример 2. 1-[4-(Фенокси)бензил]-5-[(3,5-дихлорфенил)амино]-6-азаурацил (соединение 2). Суспензию 0,5 г (1,84 ммоль) 6-аза-5-[(3,5-дихлорфенил)амино]урацила и 50 мг (0,97 ммоль) NH4Cl в 20 мл ГМДС кипятили в течение 12 ч до образования прозрачного раствора. Избыток ГМДС удалили при пониженном давлении, остаток растворили в 40 мл безводного 1,2-дихлорэтана, добавили 0,5 г (1,90 ммоль) 4-(фенокси)бензилбромида и полученную смесь кипятили с защитой от влаги воздуха в течение 24 ч. Реакционную массу охладили до комнатной температуры, обработали 10 мл изопропилового спирта, упарили при пониженном давлении и остаток чистили флэш-хроматографией, элюируя смесью хлороформ - метанол (10:1). Фракции, содержащие продукт, объединили и упарили досуха при пониженном давлении. Твердый остаток перекристаллизовали из смеси этилацетат - гексан (3:1). Получили 0,47 г мелкокристаллического продукта белого цвета с выходом 56%, Т.пл. 224,5-226°С, Rf 0,78 (этилацетат). 1Н ЯМР-спектр (ДМСО-D6, δ, м.д.: 4,95 (2Н, с, СН2); 6,93-6,98 (4Н, м, Н-2''', Н-4''', Н-6''', NH); 7,10 (1Н, т, J=6,9 Гц, Н-4'); 7,22 (2Н, т, J=7,6 Гц, Н-3', Н-5'); 7,33 (2Н, д, J=7,5 Гц, Н-2', Н-6'); 7,39 (2Н, д, J=8,2 Гц, Н-3ʺ, Н-5ʺ); 7,61 (2Н, д, J=7,8 Гц, Н-2ʺ, Н-6ʺ); 8,33 (1Н, с, N3H); 13С ЯМР-спектр (ДМСО-D6), δ, м.д.: 31,1; 36,1; 40,3; 51,9; 116,9; 118,9; 120,9; 123,8; 130,3; 130,5; 132,0; 134,2; 139,6; 142,1; 147,9; 154,3.
Пример 3.1-[4-(Фенокси)бензил]-5-(морфолино)урацил (соединение 3). Суспензию 1,0 г (5,07 ммоль) 5-(морфолино)урацила и 0,1 г (1,87 ммоль) NH4Cl в 30 мл ГМДС кипятили в течение 20 ч до образования прозрачного раствора. Избыток ГМДС удалили при пониженном давлении, остаток растворили в 50 мл безводного 1,2-дихлорэтана, добавили 1,35 г (5,13 ммоль) 4-(фенокси)бензилбромида и полученную смесь кипятили с защитой от влаги воздуха в течение 24 ч. Реакционную массу охладили до комнатной температуры, обработали 10 мл изопропилового спирта, упарили при пониженном давлении и остаток чистили флэш-хроматографией, элюируя смесью хлороформ - метанол (10:1). Фракции, содержащие продукт, объединили и упарили досуха при пониженном давлении. Твердый остаток перекристаллизовали из смеси этилацетат - этанол (2:1). Получили 1,3 г продукта в виде мелких игольчатых кристаллов белого цвета с выходом 68%, Т.пл. 182-184°С, Rf 0,41 (этилацетат). 1Н ЯМР (ДМСО-D6), δ, м.д.: 2,82 (4Н, с, 2×СН2); 3,64 (4Н, т, J=4,4 Гц, 2×СН2); 4,82 (2Н, с, СН2Ar); 6,96 (2Н, д, J=8,3 Гц, Н-2', Н-6'); 6,98 (2Н, д, J=8,0 Гц, Н-3ʺ, Н-5ʺ); 7,13 (1Н, т, J=8,0 Гц, Н-4'); 7,18 (1Н, с, Н-6); 7,32-7,36 (4Н, м, Н-3', Н-5', Н-2ʺ, Н-6ʺ); 11,37 (1Н, с, NH). 13С ЯМР (ДМСО-D6), δ, м.д.: 40,3; 50,2; 50,4; 66,3; 118,9; 119,0; 123,9; 127,2; 129,7; 130,2; 130,4; 132,3; 150,1; 156,5; 156,8; 161,2.
Пример 4. 1-[4-(4-Хлорфенокси)бензил]-5-(морфолино)урацил (соединение 4). Суспензию 1,0 г (5,07 ммоль) 5-(морфолино)урацила и 0,1 г (1,87 ммоль) NH4Cl в 30 мл ГМДС кипятили в течение 20 ч до образования прозрачного раствора. Избыток ГМДС удалили при пониженном давлении, остаток растворили в 50 мл безводного 1,2-дихлорэтана, добавили 1,55 г (5,21 ммоль) 4-(4-хлорфенокси)бензилбромида и полученную смесь кипятили с защитой от влаги воздуха в течение 24 ч. Реакционную массу охладили до комнатной температуры, обработали 10 мл изопропилового спирта, упарили при пониженном давлении и остаток чистили флэш-хроматографией, элюируя смесью хлороформ - метанол (10:1). Фракции, содержащие продукт, объединили и упарили досуха при пониженном давлении. Твердый остаток перекристаллизовали из смеси этилацетат - этанол (2:1). Получили 1,7 г продукта в виде мелких игольчатых кристаллов белого цвета с выходом 81%, Т.пл. 204-206°С, Rf 0,32 (этилацетат). 1Н ЯМР-спектр (ДМСО-D6), δ, м.д.: 2,82 (4Н, с, 2×NCH2); 3,64 (4Н, с, 2×ОСН2); 4,80 (2Н, с, ArСН2); 6,80 (2Н, д, J=7,6, Н-2', Н-6'); 7,12 (2Н, д, J=7,4, Н-3', Н-5'); 7,39 (2Н, д, J=8,2, Н-3ʺ, Н-5ʺ); 7,61 (2Н, д, J=7,8, Н-2ʺ, Н-6ʺ); 7,70 (1Н, с, Н-6); 11,42 (1Н, с, NH)., 3С ЯМР-спектр (ДМСО-D6), δ, м.д.: 50,1; 50,5; 67,0; 118,8; 121,1; 122,5; 123,2; 124,5; 134,0; 134,1; 138,5; 149,8; 154,2; 160,1; 164,2.
Пример 5. 1-[4-(4-Фторфенокси)бензил]-5-(морфолино)урацил (соединение 5). Суспензию 1,0 г (5,07 ммоль) 5-(морфолино)урацила и 0,1 г (1,87 ммоль) NH4Cl в 30 мл ГМДС кипятили в течение 20 ч до образования прозрачного раствора. Избыток ГМДС удалили при пониженном давлении, остаток растворили в 50 мл безводного 1,2-дихлорэтана, добавили 1,45 г (5,16 ммоль) 4-(4-фторфенокси)бензилбромида и полученную смесь кипятили с защитой от влаги воздуха в течение 24 ч. Реакционную массу охладили до комнатной температуры, обработали 10 мл изопропилового спирта, упарили при пониженном давлении и остаток чистили флэш-хроматографией, элюируя смесью хлороформ - метанол (10:1). Фракции, содержащие продукт, объединили и упарили досуха при пониженном давлении. Твердый остаток перекристаллизовали из смеси этилацетат - этанол (2:1). Получили 1,5 г мелкокристаллического продукта белого цвета с выходом 74%, Т.пл. 220-222°С, Rf 0,34 (этилацетат). 1Н ЯМР-спектр (ДМСО-D6), δ, м.д.: 2,85 (4Н, с, 2×NCH2); 3,66 (4Н, с, 2×ОСН2); 4,79 (2Н, с, ArСН2); 6,79 (2Н, д, J=7,9, Н-2', Н-6'); 7,11 (2Н, д, J=7,4, Н-3', Н-5'); 7,36 (2Н, д, J=8.2, Н-3ʺ, Н-5ʺ); 7,60 (2Н, д, J=7,9, Н-2ʺ, Н-6ʺ); 7,69 (1Н, с, Н-6); 11,47 (1Н, с, NH). 13С ЯМР-спектр (ДМСО-D6), δ, м.д.: 50,2; 50,6; 67,0; 118,8; 121,1; 122,5; 123,2; 124,5; 134,0; 134,1; 138,5; 149,8; 154,2; 160,1; 164,2.
Пример 6. 1-[3-(Фенокси)пропил]-5-(морфолино)-урацил (соединение 6). Смесь 1,5 г (4,61 ммоль) 5-бром-1-[3-(фенокси)пропил]-урацила и 1 мл (11,56 ммоль) морфолина кипятили в растворе 50 мл безводного этиленгликоля в течение 2 ч, вылили в 250 мл холодной воды и поместили в холодильник на ночь. Образовавшийся осадок отфильтровали, перекристаллизовали из смеси этилацетат - гексан (2:1) и получили 1,0 г мелкокристаллического продукта белого цвета с выходом 66%, Т.пл. 169-170°С, Rf 0,31 (этилацетат). 1Н ЯМР-спектр (ДМСО-D6), δ, м.д.: 2,04 (2Н, кв, J=6,3 Гц, СН2); 3,77 (2Н, т, J=6,0 Гц, NCH2); 3,87 (2Н, т, J=5,7 Гц, ОСН2); 2,82 (4Н, с, 2×NCH2); 3,69 (4Н, с, 2×ОСН2); 6,82-6,86 (3Н, м, Н-2', Н-4', Н-6'); 7,19 (2Н, т, J=8,0 Гц, Н-3', Н-5'); 7,63 (1Н, с, Н-6); 11,37 (1Н, с, NH). 13С ЯМР-спектр (ДМСО-D6), δ, м.д.: 28,0; 45,4; 50,1; 50,5; 64,6; 100,9; 112,2; 122,3; 138,6; 145,8; 151,0; 158,4; 163,9.
Пример 7. 1-[4-(Фенокси)бутил]-5-(морфолино)-урацил (соединение 7). Смесь 1,5 г (4,42 ммоль) 5-бром-1-[4-(фенокси)бутил]урацила и 1 мл (11,56 ммоль) морфолина кипятили в растворе 50 мл безводного этиленгликоля в течение 2 ч, вылили в 250 мл холодной воды и поместили в холодильник на ночь. Образовавшийся осадок отфильтровали, перекристаллизовали из смеси этилацетат - гексан (2:1) и получили 1,2 г мелкокристаллического продукта белого цвета с выходом 78%, Т.пл. 156-159°С, Rf 0,75 (этилацетат). 1Н ЯМР-спектр (ДМСО-Б6), δ, м.д.: 1,64 (4Н, с, СН2); 3,67 (2Н, т, J=6,2 Гц, NCH2); 3,89 (2Н, т, J=6,2 Гц, ОСН2); 2,85 (4Н, с, 2×NCH2); 3,66 (4H, с, 2×ОСН2); 6,79-6,83 (3Н, м, Н-2', Н-4', Н-6'); 7,13 (2Н, т, J=8,1 Гц, Н-3', Н-5'); 7,64 (1Н, с, Н-6); 11,41 (1Н, с, NH). 13С ЯМР-спектр (AMCO-D6), δ, м.д.: 25,3; 25,7; 47,3; 50,4; 51,0; 66,8; 100,9; 114,4; 120,5; 129,5; 145,7; 151,0; 158,6; 165,8.
Пример 8. 1-[5-(Фенокси)пентил]-5-(морфолино)-урацил (соединение 8). Смесь 1,5 г (4,25 ммоль) 5-бром-1-[5-(фенокси)пентил]-урацила и 1 мл (11,56 ммоль) морфолина кипятили в растворе 50 мл безводного этиленгликоля в течение 2 ч, вылили в 250 мл холодной воды и поместили в холодильник на ночь. Образовавшийся осадок отфильтровали, перекристаллизовали из смеси этилацетат - гексан (2:1) и получили 1,1 г мелкокристаллического продукта белого цвета с выходом 71%, Т.пл. 162-163,5°С, Rf 0,78 (этилацетат). 1H ЯМР-спектр (ДМСО-D6), δ, м.д.: 1,39 (2Н, кв, J=5,3 Гц, СН2); 1,63 (2Н, кв, J=7,2 Гц, СН2); 1,72 (2Н, кв, J=7,2 Гц, СН2); 3,67 (2Н, т, J=7,2 Гц, NCH2); 3,93 (2Н, т, J=6,5 Гц, ОСН2); 2,88 (4Н, с, 2×NCH2); 3,67 (4Н, с, 2×ОСН2); 6,83-6,88 (3Н, м, Н-2', Н-4', Н-6'); 7,22 (2Н, т, J=8,0 Гц, Н-3', Н-5'); 7,55 (1Н, с, Н-6); 11,29 (1H, с, NH)., 3С ЯМР-спектр (AMCO-D6), δ, м.д.: 22,9; 28,6; 28,7; 47,8; 50,5; 51,0; 67,5; 101,2; 114,8; 120,8; 129,9; 146,2; 151,4; 159,0; 164,3.
Пример 9. Определение цитотоксичности соединений.
Цитотоксичность соединений для клеток линии НЕК293 (клетки почки эмбриона мыши) [Graham F.L., Smiley J., Russell W.С., Nairn R. Characteristics of a human cell line transformed by DNA from human adenovirus type 5 // The Journal of general virology. - 1977. - T. 36. - C. 59-74] оценивали с помощью методов прижизненного окрашивания данных клеток бромидом 3-[4,5-диметилтиазолил-2]-2,5-дифенилтетразолия (МТТ) [Mosmarm Т. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays // J Immunol Methods. - 1983. - T. 65, №1-2. - C. 55-63] или трипановым синим [Strober W. Trypan blue exclusion test of cell viability // Curr Protoc Immunol. - 2001. - T. Appendix 3. - C. Appendix 3В].
Клетки линии HEК293 культивировали на среде DMEM, содержащей 10% эмбриональной сыворотки крупного рогатого скота, 4 мМ L-глутамина, 1 мМ пирувата натрия, стрептомицин и пенициллин в концентрации 100 мкг/мл и 100 ед/мл соответственно. К клеткам НЕК293 добавляли исследуемые соединения, растворенные в диметилсульфоксиде (ДМСО) в диапазоне концентраций 2,5-200 мкМ. Контролем служили клетки, к которым вместо исследуемых соединений добавляли соответствующее количество ДМСО.
Прижизненное окрашивание клеток НЕК293 МТТ для оценки их жизнеспособности проводили через 48 ч после внесения веществ. Токсичность различных доз препарата определяли по жизнеспособности клеток относительно контроля. Все исследуемые соединения не оказывали токсического действия на клетки НЕК293 в эффективных концентрациях.
Для соединений, проявляющих ингибиторную активность в отношении аденовирусов человека, была определена концентрация, при которой количество живых клеток сокращается на 50% (ЦТД50). С этой целью проводили подсчет клеток, селективно окрашенных трипановым синим, через 24 ч после добавления соединений. Все исследуемые соединения не оказывали токсического действия на клетки НЕК293 в эффективных концентрациях. Результаты представлены в таблице 2.
Пример 10. Определение противоаденовирусной активности in vitro.
Было изучено влияние исследуемых соединений на репликацию аденовирусов в культуре клеток НЕК293.
В ходе оценки противоваденовирусной активности 5-аминопроизодных урацила клетки линии НЕК293 заражали рекомбинантным аденовирусом типа 5 человека, экспрессирующим усиленный зеленый флуоресцентный белок (HAdV 5-eGFP) [Шмаров М.М., Черенова Л.В., Шашкова Е.В., Логунов Д.Ю., Верховская Л.В., Капитонов А.В., Неугодова Г.Л., Доронин К.К., Народицкий Б.С. Эукариотические векторы на основе генома аденовируса птиц CELO, несущие гены GFP и IL-2 человека // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. - 2002. - №2. - С. 30-35; Logunov D.Y., Zubkova О.V., Karyagina-Zhulina A.S., Shuvalova Е.A., Karpov А.Р., Shmarov М.М., Tutykhina I.L., Alyapkina Y.S., Grezina N.M., Zinovieva N.A., Ernst L.K., Gintsburg A.L., Naroditsky B.S. Identification of Hl-like loop in CELO adenovirus fiber for incorporation of receptor binding motifs // J Virol. - 2007. - T. 81, №18. - C. 9641-9652] с множественностью инфекции 1 ФОЕ/клетку. Через 3 ч после инфекции добавляли исследуемые соединения в концентрации 25 мкМ. В качестве отрицательного контроля использовали ДМСО. Концентрация ДМСО во всех образцах не превышала 0,1%. Через 24 ч ингибиторную активность соединений оценивали по определению количества копий генома HAdV 5-eGFP методом количественной ГТЦР [Heim A., Ebnet С., Harste G., Pring-Akerblom P. Rapid and quantitative detection of human adenovirus DNA by real-time PCR // J Med Virol. - 2003. - T. 70, №2. - C. 228-239]. Было выявлено, что соединения 1, 3, 4 и 5 (примеры 1, 3, 4 и 5 соответственно) проявляют выраженную ингибиторную активность в отношении репликации HAdV 5-eGFP (фиг. 1).
Для соединений 1, 3, 4 и 5 (примеры 1, 3, 4 и 5 соответственно), проявляющих ингибиторную активность в отношении аденовирусов человека, была определена концентрация полумаксимального ингибирования (ИД50), при которой наблюдается снижение относительного количества копий генома HAdV 5-eGFP на 50% по сравнению с контролем. Клетки линии НЕК293 заражали HAdV 5-eGFP с множественностью инфекции 1 ФОЕ/клетку. Через 3 ч после инфекции добавляли исследуемые соединения в концентрации 0,5, 2,5, 5, 10, 15 и 25 мкМ. Концентрация ДМСО во всех образцах не превышала 0,1%. Через 24 ч ингибиторную активность соединений оценивали по определению количества копий генома HAdV 5-eGFP методом количественной ГТЦР и построению по полученным результатам дозозависимой кривой. Индекс селективности (ИС) рассчитывали как отношение ЦТД50 соединения к его ИД50 (табл. 2). На основании данных количественных показателей ингибирования можно судить об эффективности противовирусного действия ряда заявляемых соединений, заключающейся в высокой степени подавления репликации HAdV 5-eGFP в культуре клеток НЕК293.
Пример 11. Влияние исследуемых соединений на инфекционность аденовирусного потомства.
Было оценено влияние наиболее эффективных производных 5-аминоурацила - соединений 1 и 3 (примеры 1 и 3 соответственно) на инфекционность аденовирусного потомства.
Клетки линии НЕК293 заражали HAdV 5-eGFP с множественностью инфекции 1 и 10 ФОЕ/клетку. Через 3 ч после инфекции добавляли растворы соединений 1 и 3 (примеры 1 и 3 соответственно) в ДМСО в концентрации 25 мкМ. В качестве контроля использовали ДМСО, конечная концентрация которого в культуральной среде не превышала 0,1%. Через 48 ч культуральную среду собирали в микропробирки и замораживали при температуре -70°С. С целью разрушения клеток полученную вируссодержащую среду размораживали при комнатной температуре и снова замораживали при -70°С. После повторного размораживания аликвоты 10-кратных разведений вируссодержащих стоков добавляли к клеткам линии НЕК293. Наблюдали снижение титра вирусного потомства под воздействием указанных веществ (табл. 3).
Таким образом, открыт новый класс анти-аденовирусных агентов ненуклеозидной природы, которые проявляют ингибирующий эффект в культуре клеток НЕК293 в отношении аденовирусов человека. Это позволяет считать соединения данного ряда перспективными в плане создания на их основе лекарственных средств для лечения заболеваний, вызываемых аденовирусами.
Claims (6)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2016125942A RU2628456C1 (ru) | 2016-06-29 | 2016-06-29 | Новые пиримидиновые ингибиторы репликации аденовируса человека |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2016125942A RU2628456C1 (ru) | 2016-06-29 | 2016-06-29 | Новые пиримидиновые ингибиторы репликации аденовируса человека |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2628456C1 true RU2628456C1 (ru) | 2017-08-17 |
Family
ID=59641795
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2016125942A RU2628456C1 (ru) | 2016-06-29 | 2016-06-29 | Новые пиримидиновые ингибиторы репликации аденовируса человека |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2628456C1 (ru) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2670204C1 (ru) * | 2017-12-01 | 2018-10-19 | федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Производные 2-тиоурацила, обладающие противоаденовирусной активностью |
RU2697804C1 (ru) * | 2019-04-26 | 2019-08-20 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Волгоградский государственный технический университет" (ВолгГТУ) | Способ получения 1-(ω-гидроксиалкил)урацилов |
CN115477622A (zh) * | 2021-06-16 | 2022-12-16 | 江苏中旗科技股份有限公司 | 地克珠利衍生物及其应用和一种用于抗植物病的杀菌剂 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5376644A (en) * | 1987-08-22 | 1994-12-27 | Burroughs Wellcome Co. | Treatment of adenovical infections with 3'-fluoro-5-halo uracil compounds |
RU2002118327A (ru) * | 1999-12-03 | 2003-12-20 | Де Риджентс Ов Де Юниверсити Ов Калифорния | Фосфонатные соединения |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA2747954C (en) * | 1999-12-03 | 2014-02-25 | The Regents Of The University Of California | Phosphonate compounds |
-
2016
- 2016-06-29 RU RU2016125942A patent/RU2628456C1/ru active
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5376644A (en) * | 1987-08-22 | 1994-12-27 | Burroughs Wellcome Co. | Treatment of adenovical infections with 3'-fluoro-5-halo uracil compounds |
RU2002118327A (ru) * | 1999-12-03 | 2003-12-20 | Де Риджентс Ов Де Юниверсити Ов Калифорния | Фосфонатные соединения |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
Novikov, Mikhail S et al., 154:124322 1-Benzyl derivatives of 5-(arylamino)uracils as anti-HIV-1 and anti-EBV agents. Bioorganic & Medicinal Chemistry, 2010, 18(23), 8310-8314 (English). Гуреева Е. С., Диссертация на соискание кандидата ученой степени кфн "СИНТЕЗ 1-[3- И 4-(ФЕНОКСИ)БЕНЗИЛ]ПРОИЗВОДНЫХ 5-(ФЕНИЛАМИНО)УРАЦИЛА И ИХ АНАЛОГОВ КАК ПОТЕНЦИАЛЬНЫХ ИНГИБИТОРОВ ВИРУСНОЙ РЕПРОДУКЦИИ", ВОЛГОГРАД, 21.09.2016. * |
Е.С.ГУРЕЕВА И ДР. СИНТЕЗ 1-[4-(ФЕНОКСИ)БЕНЗИЛ]-5- (ФЕНИЛАМИНО)УРАЦИЛОВ КАК ПОТЕНЦИАЛЬНЫХ ПРОТИВОВИРУСНЫХ АГЕНТОВ, ВОЛГОГРАДСКИЙ НАУЧНО-МЕДИЦИНСКИЙ ЖУРНАЛ. 2012, 2, стр. 22-24. * |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2670204C1 (ru) * | 2017-12-01 | 2018-10-19 | федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Производные 2-тиоурацила, обладающие противоаденовирусной активностью |
RU2697804C1 (ru) * | 2019-04-26 | 2019-08-20 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Волгоградский государственный технический университет" (ВолгГТУ) | Способ получения 1-(ω-гидроксиалкил)урацилов |
CN115477622A (zh) * | 2021-06-16 | 2022-12-16 | 江苏中旗科技股份有限公司 | 地克珠利衍生物及其应用和一种用于抗植物病的杀菌剂 |
CN115477622B (zh) * | 2021-06-16 | 2023-09-22 | 江苏中旗科技股份有限公司 | 地克珠利衍生物及其应用和一种用于抗植物病的杀菌剂 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11638716B2 (en) | Compounds, compositions, and methods for the treatment of disease | |
EP0619813B1 (en) | Linked cyclic polyamines with activity against hiv | |
RU2628456C1 (ru) | Новые пиримидиновые ингибиторы репликации аденовируса человека | |
US7638502B2 (en) | Treatment of EBV and KHSV infection and associated abnormal cellular proliferation | |
Khalifa et al. | HIV-1 and HSV-1 virus activities of some new polycyclic nucleoside pyrene candidates | |
Sriram et al. | Newer aminopyrimidinimino isatin analogues as non-nucleoside HIV-1 reverse transcriptase inhibitors for HIV and other opportunistic infections of AIDS: design, synthesis and biological evaluation | |
EP0877022B1 (en) | Sulfonylpyrimidine derivatives with anticancer activity | |
ES2754403T3 (es) | Derivados de pririmidina útiles como inhibidores selectivos de JAK3 y/o JAK1 | |
Nikitenko et al. | 1-(4-Phenoxybenzyl) 5-aminouracil derivatives and their analogues-novel inhibitors of human adenovirus replication | |
JP4545434B2 (ja) | 抗ウイルス活性を有する6−‘2−(ホスホノメトキシ)アルコキシピリミジン誘導体 | |
Okazaki et al. | Investigations of possible prodrug structures for 2-(2-mercaptophenyl) tetrahydropyrimidines: Reductive conversion from anti-HIV agents with pyrimidobenzothiazine and isothiazolopyrimidine scaffolds | |
CN108440559B (zh) | 二芳基噻吩并嘧啶类hiv-1逆转录酶抑制剂及其制备方法和应用 | |
Ibrahim et al. | Synthesis of Nucleosides and Non-nucleosides Based 4, 6-disubstituted-2-oxo-dihydropyridine-3-carbonitriles as Antiviral Agents | |
Al‐Masoudi et al. | Nitroimidazoles, Part 2: Synthesis, Antiviral and Antitumor Activity of New 4‐Nitroimidazoles | |
US8431583B2 (en) | Use of purine derivatives for the manufacture of a medicament | |
RU2376307C1 (ru) | 4-((Z)-4'-ГИДРОКСИБУТЕН-2'-ИЛ)-2-R-6-ФЕНИЛ-1,2,4-ТРИАЗОЛО[5,1-c][1,2,4]ТРИАЗИН-7-ОНЫ | |
Wang et al. | Design, synthesis and biological evaluation of substituted guanidine indole derivatives as potential inhibitors of HIV-1 Tat-TAR interaction | |
CN111285859B (zh) | 一类以hiv-1逆转录酶为靶点的2,4,5-三取代嘧啶类化合物及其制备方法与应用 | |
RU2198166C2 (ru) | 2,4-диоксо-5-арилиденимино-1,3-пиримидины | |
Tatar et al. | Synthesis, anti-tuberculosis and antiviral activity of novel 2-isonicotinoylhydrazono-5-arylidene-4-thiazolidinones | |
RU2670204C1 (ru) | Производные 2-тиоурацила, обладающие противоаденовирусной активностью | |
Babkov et al. | 2-(2, 4-Dioxy-1, 2, 3, 4-Tetrahydropyrimidin-1-yl)-n-(4-phenoxyphenyl)-acetamides as a novel class of cytomegalovirus replication inhibitors | |
Rai et al. | Evaluation of 5-[1-(2-halo (or nitro) ethoxy-2-iodoethyl)]-2′-deoxyuridines as Inhibitors of herpes simplex virus | |
Khandazhinskaya et al. | Uracil derivatives as non-nucleoside inhibitors of viral infections | |
Паньківська et al. | ANTIADENOVIRALACTIVITY OF FLUORIDECONTAINING NUCLEOSIDES AND BISPHOSPHONATES DERIVATES |