RU2625743C1 - Способ диагностики миопатии в эксперименте - Google Patents

Способ диагностики миопатии в эксперименте Download PDF

Info

Publication number
RU2625743C1
RU2625743C1 RU2016122002A RU2016122002A RU2625743C1 RU 2625743 C1 RU2625743 C1 RU 2625743C1 RU 2016122002 A RU2016122002 A RU 2016122002A RU 2016122002 A RU2016122002 A RU 2016122002A RU 2625743 C1 RU2625743 C1 RU 2625743C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
myopathy
isoform
content
titin
experiment
Prior art date
Application number
RU2016122002A
Other languages
English (en)
Inventor
Елена Сергеевна Белоусова
Зоя Ивановна Микашинович
Олег Грачикович Саркисян
Елена Викторовна Виноградова
Original Assignee
федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Ростовский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО РостГМУ Минздрава России)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Ростовский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО РостГМУ Минздрава России) filed Critical федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Ростовский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО РостГМУ Минздрава России)
Priority to RU2016122002A priority Critical patent/RU2625743C1/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2625743C1 publication Critical patent/RU2625743C1/ru

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
    • G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups
    • G01N2333/4701—Details
    • G01N2333/4712—Muscle proteins, e.g. myosin, actin, protein
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/28—Neurological disorders
    • G01N2800/2878—Muscular dystrophy

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

Данное изобретение относится к экспериментальной биологии и представляет собой способ диагностики миопатии в эксперименте, включающий исследование подопытного животного, отличающийся тем, что в двуглавой мышце, выделенной из передней конечности, определяют содержание изоформ NT- и N2A-тайтина, и при одновременном выполнении условий: содержание NT-изоформы ≤0,016 и содержание N2A-изоформы ≤0,085 диагностируют миопатию. Осуществление изобретения обеспечивает повышение достоверности диагностики миопатии за счет использования конкретных лабораторных показателей. 2 пр.

Description

Данное изобретение относится к экспериментальной биологии и медицине и может быть использовано для диагностики миопатии у экспериментальных животных.
Миопатия - обобщенное название множества заболеваний мышечной системы, обусловленных нарушением сократительной способности мышечных волокон (Орлова М.А., Троицкая Л.А. Разработка проблемы когнитивного развития детей с соединительнотканной патологией и наследственными нарушениями опорно-двигательного аппарата: результаты историко-психологического анализа. // Материалы III Международной научно-практической конференции «Психология XXI века: теория, практика, перспективы». - Прага, 2013. - С. 12-20).
В настоящее время в зависимости от этиологического фактора выделяют врожденные нейродегенеративные заболевания мышечной системы, а также миопатии лекарственного генеза, общими проявлениями которых являются мышечная слабость, уменьшение объема активных движений, снижение мышечного тонуса. При этом описанные проявления являются не специфичными для миопатии и могут встречаться при других заболеваниях.
Поскольку верификация миопатии в эксперименте зачастую основана на субъективном описании изменения двигательной активности животных в динамике эксперимента, то выделение лабораторных критериев позволит исключить субъективный фактор и существенно повысить диагностику миопатии в эксперименте.
В качестве прототипа нами выбран способ диагностики миопатии, описанный в авторском свидетельстве СССР №1312633 (опубликовано 23.05.87). Исследуют подопытное животное, в качестве которого выбирают кролика. Животному удаляют вилочковую железу, а на ее место имплантируют фрагмент свежей вилочковой железы больного дистрофией Дюшена. Повторную имплантацию осуществляют через 5-6 дней в область спины, используя фрагмент консервированной вилочковой железы того же больного. В обоих случаях имплантируемые фрагменты по массе равны удаленной вилочковой железе.
Согласно прототипу критериями для диагностики миопатии является описание симптоматики в динамике эксперимента: нарушение двигательной активности, постепенная дистрофия мышц спины, передних и задних конечностей подопытного животного. Недостатками прототипа является недостаточная достоверность за счет субъективизма и использования неспецифических критериев.
Задачей предлагаемого изобретения является разработка высокообъективного, достоверного способа диагностики миопатии в эксперименте.
Техническим результатом, проявляющимся при использовании данного изобретения, является повышение достоверности диагностики миопатии за счет использования конкретных лабораторных показателей.
Технический результат достигается тем, что исследуют подопытное животное - кролика, в двуглавой мышце которого определяют содержание NT-изоформы тайтина и N2А-изоформы тайтина. При одновременном выполнении условий: содержание NT-изоформы ≤0,016 и содержание N2A-изоформы ≤0,085 диагностируют миопатию.
Подробное описание способа.
Для исследования используют двуглавую мышцу, которую выделяют из передней конечности подопытного животного - кролика. Кролика обезболивают и умерщвляют в соответствии с принципами Хельсинской декларации о гуманном отношении к животным.
Выделение тайтина, идентификацию его изоформ и определение содержания NT-изоформы и N2A-изоформы тайтина проводят по методике, разработанной для данного белка (Вихлянцев И.М., Подлубная З.А. Изоформный состав тайтина в мышцах при патологических процессах // Биофизика. - 2008. - Т. 53, вып. 6. - С. 1058-1065).
При одновременном выполнении условий: содержание NT-изоформы ≤0,016 и содержание N2A-изоформы ≤0,085 диагностируют миопатию.
Выбор белка тайтина в качестве лабораторного критерия для верификации миопатии обусловлен его полифункциональной ролью в организации структуры и функционировании мышечной ткани. Согласно современным представлениям, тайтин является каркасом для сборки толстых нитей саркомера и обеспечивает его высокоупорядоченную структуру, участвует в регуляции актин-миозинового взаимодействия и межклеточных коммуникациях. Более ранними исследованиями снижение уровня тайтина выявлено при ряде патологий скелетной мускулатуры и миокарда (Вихлянцев И.М., Подлубная З.А. Новые изоформы тайтина (коннектина) и их функциональная роль в поперечно-полосатых мышцах млекопитающих: факты и предположения. // Успехи биологической химии. - 2012. - Т. 52. - С. 239-280).
Для разработки диагностических критериев нами были исследованы 25 животных - кроликов в возрасте 1,3-1,5 лет, массой 2,1-2,3 кг. Контрольную группу составили 10 интактных животных. В качестве группы сравнения использовали 15 животных с экспериментальной миопатией, которая была смоделирована согласно способу, описанному в авторском свидетельстве СССР №1312633 (опубликовано 23.05.87).
Для исследования использовали двуглавую мышцу, которую выделяли из передней конечности подопытного животного. Кролика обезболивали и умерщвляли в соответствии с принципами Хельсинской декларации о гуманном отношении к животным.
Содержание изоформ тайтина определяли в двуглавой мышце передней конечности кролика. Выделение тайтина, идентификацию его изоформ и определение содержания NT-изоформы и N2A-изоформы проводили по методике, разработанной для данного белка (Вихлянцев И.М., Подлубная З.А. Изоформный состав тайтина в мышцах при патологических процессах // Биофизика. - 2008. - Т. 53, вып. 6. - С. 1058-1065).
Анализ изменений содержания тайтина позволил выявить статистически достоверное (р<0,001) снижение содержания NT-изоформы и содержания N2A-изоформы тайтина в мышечной ткани животных группы сравнения относительно контрольной группы, и определить пограничные количественные значения содержания NT-изоформы ≤0,016 и содержания N2A-изоформы ≤0,085, позволяющие верифицировать миопатию (Белоусова Е.С., Виноградова Е.В., Саркисян О.Г., Микашинович З.И. Уровень тайтина как показатель мышечной дистрофии в эксперименте // Материалы международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы современной медицины». - Екатеринбург, 2015. - С. 59-61).
Практическая реализуемость предлагаемого способа подтверждается следующими данными экспериментального исследования.
Пример 1: кролик-самец, возраст 1,2 года, масса 2,25 кг с экспериментальной миопатией, которая была смоделирована согласно способу, описанному в авторском свидетельстве СССР №1312633 (опубликовано 23.05.87). Животное было обезболено и умерщвлено в соответствии с принципами Хельсинской декларации о гуманном отношении к животным. Было проведено исследование согласно заявляемому способу.
Для исследования использовали двуглавую мышцу передней конечности животного.
Выделение тайтина, идентификацию его изоформ и определение содержания NT-изоформы и N2A-изоформы проводили по методике, разработанной для данного белка (Вихлянцев И.М., Подлубная З.А. Изоформный состав тайтина в мышцах при патологических процессах // Биофизика. - 2008. - Т. 53, вып. 6. - С. 1058-1065).
Было получено: содержание NT-изоформы = 0,014, N2A-изоформы = 0,085.
Поскольку были одновременно выполнены условия: содержание NT-изоформы = 0,014<0,016 и N2A-изоформы = 0,085, то у животного была диагностирована миопатия. Подтверждением диагноза служили результаты визуального осмотра и исследование поведения животных, при котором были отмечены вялость, дрожание в конечностях, животное падало на задние лапы.
Пример 2: кролик-самка, возраст 1,4 года, масса 2,00 кг с экспериментальной миопатией, которая была смоделирована согласно способу, описанному в авторском свидетельстве СССР №1312633 (опубликовано 23.05.87). По истечении срока эксперимента животное было обезболено и умерщвлено в соответствии с принципами Хельсинской декларации о гуманном отношении к животным.
Для исследования использовали двуглавую мышцу передней конечности животного.
Выделение тайтина, идентификацию его изоформ и определение содержания NT-изоформы и N2A-изоформы проводили по методике, разработанной для данного белка (Вихлянцев И.М., Подлубная З.А. Изо-формный состав тайтина в мышцах при патологических процессах // Биофизика. - 2008. - Т. 53, вып. 6. - С. 1058-1065).
Было получено: содержание NT-изоформы = 0,016, N2A-изоформы = 0,084. Поскольку были одновременно выполнены условия: содержание NT-изоформы = 0,016 и N2A-изоформы = 0,084<0,085, то у животного была диагностирована миопатия. Подтверждением диагноза служили результаты визуального осмотра и исследование поведения животных, при котором были отмечены шаткость, дрожание в конечностях, животное падало на бок, не могло отталкиваться задними лапами.
С помощью предлагаемого способа нами было исследовано 15 кроликов в возрасте 1,3-1,5 лет, массой 2,1-2,3 кг. В мышечной ткани всех животных содержание NT-изоформы тайтина находилось в пределах 0,010-0,016, содержание N2A-изоформы тайтина - от 0,070 до 0,085. У всех животных наблюдали нарушение двигательной активности. Всем животным была диагностирована миопатия.
Таким образом, предлагаемый способ диагностики миопатии в эксперименте эффективен, достоверен и позволяет исключить субъективный фактор при диагностике миопатии за счет использования специфических лабораторных критериев.

Claims (1)

  1. Способ диагностики миопатии в эксперименте, включающий исследование подопытного животного, отличающийся тем, что в двуглавой мышце, выделенной из передней конечности, определяют содержание изоформ NT- и N2A-тайтина, и при одновременном выполнении условий: содержание NT-изоформы ≤0,016 и содержание N2A-изоформы ≤0,085 диагностируют миопатию.
RU2016122002A 2016-06-02 2016-06-02 Способ диагностики миопатии в эксперименте RU2625743C1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2016122002A RU2625743C1 (ru) 2016-06-02 2016-06-02 Способ диагностики миопатии в эксперименте

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2016122002A RU2625743C1 (ru) 2016-06-02 2016-06-02 Способ диагностики миопатии в эксперименте

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2625743C1 true RU2625743C1 (ru) 2017-07-18

Family

ID=59495613

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2016122002A RU2625743C1 (ru) 2016-06-02 2016-06-02 Способ диагностики миопатии в эксперименте

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2625743C1 (ru)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU1455271A1 (ru) * 1986-04-14 1989-01-30 Латвийский Научно-Исследовательский Институт Кардиологии Способ диагностики миопатий
US20090280517A1 (en) * 2008-03-18 2009-11-12 University Of Maryland Methods of diagnosis and prognosis for a muscular dystrophy

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU1455271A1 (ru) * 1986-04-14 1989-01-30 Латвийский Научно-Исследовательский Институт Кардиологии Способ диагностики миопатий
US20090280517A1 (en) * 2008-03-18 2009-11-12 University Of Maryland Methods of diagnosis and prognosis for a muscular dystrophy

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ГРИЦЫНА Ю.В. и др. Изменение экспрессии гена и содержания тайтина (коннектина) в поперечно-полосатых мышцах хронически алкоголизированных крыс // Молекулярная биология. 2013. Т.47, No.6, C.996-1003. ВИХЛЯНЦЕВ И.М., ПОДЛУБНАЯ З.А. Новые изоформы тайтина (коннектина) и их функциональная роль в поперечно-полосатых мышцах млекопитающих: факты и предположения // Успехи биологической химии. 2012. Т.52, С.239-280. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Yamazaki et al. Vascular ApoE4 impairs behavior by modulating gliovascular function
Yu et al. Kinetic alterations of collagen and elastic fibres and their association with cardiac function in acute myocardial infarction
Van Der Laan et al. mRNA cycles through hypoxia-induced stress granules in live Drosophila embryonic muscles
Shevelkin et al. Expression of mutant DISC1 in Purkinje cells increases their spontaneous activity and impairs cognitive and social behaviors in mice
Mitroshina et al. Brain-derived neurotrophic factor (BDNF) preserves the functional integrity of neural networks in the β-amyloidopathy model in vitro
Spoleti et al. Early derailment of firing properties in CA1 pyramidal cells of the ventral hippocampus in an Alzheimer's disease mouse model
Rácz et al. Molecular composition of extracellular matrix in the vestibular nuclei of the rat
Ba et al. Repetitive transcranial magnetic stimulation protects mice against 6-OHDA-induced Parkinson’s disease symptoms by regulating brain amyloid β 1–42 level
Walter et al. Structural and functional connections between the median and the ventrolateral preoptic nucleus
RU2625743C1 (ru) Способ диагностики миопатии в эксперименте
Lipp et al. Mechanical loading is required for initiation of extracellular matrix deposition at the developing murine myotendinous junction
Ghosh Dastidar et al. Distinct regulation of bioenergetics and translation by group I mGluR and NMDAR
Naaman et al. The Surprising Nonlinear Effects of S100A9 Proteins in the Retina
Li et al. Pial surface CSF-contacting texture, subpial and funicular plexus in the thoracic spinal cord in monkey: NADPH diaphorase histological configuration
Shehab et al. Activation of the subthalamic nucleus suppressed by high frequency stimulation: A c-Fos immunohistochemical study
Raheem et al. Effect of hypercholestermic diet on the amyloid precursor protein (APP) deposition with some behavior alterations in male rats
Nandini Motor and Sensory Characterization of a Mouse Model of Charcot-Marie-Tooth Type 2O Disease
Kanthakumar Acute electrophysiological effects of lithium on mouse olfactory bulb projection neurons in vitro
Козлова Trace elements changes in forebrain and their influence on the rats behavior in elevated plus maze in acute period of mild blast traumatic brain injury
Waagepetersen et al. Glutamate homeostasis revisited-neuronal transport and metabolism
Geibl Selective cellular vulnerability and pathology progression patterns in two mouse models of Parkinson’s disease
da Silva Correia et al. Cellular prion protein acts as mediator of amyloid beta uptake by caveolin‐1 causing cellular dysfunctions in vitro and in vivo
Chiu et al. α-Synuclein-induced Kv4 channelopathy in mouse vagal motoneurons causes non-motor parkinsonian symptoms
Dragan et al. METHOD FOR FORMING BEHAVIORAL REACTIONS IN LABORATORY ANIMALS
Kozlova TRACE ELEMENTS CHANGES IN FOREBRAIN AND THEIR INFLUENCE ON THE RATS BEHAVIOR IN ELEVATED PLUS MAZE IN ACUTE PERIOD OF MILD BLAST TRAUMATIC BRAIN INJURY.