RU2624014C1 - Haemophilus influenzae spb strain type b - highly active producer of capsular polyribosylribitolphosphate polysaccharide - Google Patents

Haemophilus influenzae spb strain type b - highly active producer of capsular polyribosylribitolphosphate polysaccharide Download PDF

Info

Publication number
RU2624014C1
RU2624014C1 RU2016113658A RU2016113658A RU2624014C1 RU 2624014 C1 RU2624014 C1 RU 2624014C1 RU 2016113658 A RU2016113658 A RU 2016113658A RU 2016113658 A RU2016113658 A RU 2016113658A RU 2624014 C1 RU2624014 C1 RU 2624014C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
polyribosylribitolphosphate
haemophilus influenzae
spb
polysaccharide
capsular
Prior art date
Application number
RU2016113658A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Виктор Павлович Трухин
Станислав Викторович Петровский
Игорь Викторович Красильников
Елена Петровна Начарова
Анатолий Эдуардович Евтушенко
Елена Леонидовна Салимова
Анастасия Дмитриевна Конон
Станислав Валентинович Уйба
Original Assignee
Федеральное государственное унитарное предприятие "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток и предприятие по производству бактерийных препаратов" Федерального медико-биологического агентства России (ФГУП СПбНИИВС ФМБА России)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное унитарное предприятие "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток и предприятие по производству бактерийных препаратов" Федерального медико-биологического агентства России (ФГУП СПбНИИВС ФМБА России) filed Critical Федеральное государственное унитарное предприятие "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток и предприятие по производству бактерийных препаратов" Федерального медико-биологического агентства России (ФГУП СПбНИИВС ФМБА России)
Priority to RU2016113658A priority Critical patent/RU2624014C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2624014C1 publication Critical patent/RU2624014C1/en

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/04—Polysaccharides, i.e. compounds containing more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic bonds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/21—Haemophilus

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

FIELD: biotechnology.
SUBSTANCE: Haemophilus influenzae SPB strain type b, which is a highly active producer of capsular polyribosylribitolphosphate polysaccharide, is deposited in the National Collection of Pathogenic Microorganisms and Cell Cultures "GKPM - Obolensk" under number B-7884. The invention provides polyribosylribitolphosphate synthesis, 250-300 mcg/ml.
EFFECT: minimum cultivation time.
1 dwg, 1 tbl, 2 ex

Description

Штамм HAEMOPHILUS INFLUENZAE SPB тип b - высокоактивный продуцент капсульного полисахарида полирибозилрибитолфосфата (далее - изобретение) относится к области биотехнологии и медицины. Целью данного изобретения является получение капсульного полисахарида полирибозилрибитолфосфата для дальнейшего промышленного производства иммунобиологических препаратов. Для достижения поставленной цели предлагается штамм Haemophilus influenzae SPB тип b, выделенный от больного ребенка в г. Санкт-Петербург и депонированный в Государственной коллекции патогенных микроорганизмов и клеточных культур «ГКПМ - Оболенск» ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии» Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека под номером В-7884. Данный штамм обладает способностью синтезировать полирибозилрибитолфосфат в высокой концентрации при росте на полусинтетической питательной среде.The strain HAEMOPHILUS INFLUENZAE SPB type b - a highly active producer of capsular polysaccharide polyribosylribitolphosphate (hereinafter - the invention) belongs to the field of biotechnology and medicine. The aim of this invention is to obtain a capsular polysaccharide of polyribosylribitolphosphate for further industrial production of immunobiological preparations. To achieve this goal, the proposed strain Haemophilus influenzae SPB type b, isolated from a sick child in St. Petersburg and deposited in the State collection of pathogenic microorganisms and cell cultures "GKPM - Obolensk" Federal State Budgetary Institution "State Scientific Center for Applied Microbiology and Biotechnology" Federal Service for supervision in the field of consumer protection and human well-being under the number B-7884. This strain has the ability to synthesize polyribosylribitolphosphate in high concentration with growth on a semi-synthetic nutrient medium.

Для профилактики инфекций, вызванных Haemophilus influenzae тип b, используют моно- и комбинированные вакцины, действующим веществом в которых является полирибозилрибитолфосфат - капсульный полисахарид возбудителя. Одними из основных факторов, влияющих на эффективность промышленного производства данных вакцин, являются продуктивность штамма, скорость его роста, себестоимость питательной среды.For the prevention of infections caused by Haemophilus influenzae type b, mono- and combination vaccines are used, the active substance in which is polyribosylribitolphosphate - the capsular polysaccharide of the pathogen. One of the main factors affecting the efficiency of industrial production of these vaccines is the productivity of the strain, its growth rate, and the cost of the nutrient medium.

Известен способ получения капсульного полисахарида при помощи штамма Haemophilus influenzae b Mech №1, который при росте на синтетической и полусинтетической (на основе аминопептина) питательных средах синтезировал полирибозилрибитолфосфат в количестве 100 и 50 мкг/мл соответственно (патент RU 2257412, 27.07.2005 С1, Елкина СИ., Ястребова Н.Е., Орлова О.Е., Ванеева Н.П., Сергеев В.В., Апарин П.Г., Львов В.Л. «Штамм Haemophilus influenzae b Mech №1 - продуцент капсульного полисахарида - полирибозилрибитолфосфата»). Время культивирования в жидкой питательной среде составляет 6-8 часов после достижения культурой стационарной фазы роста.A known method of producing capsular polysaccharide using Haemophilus influenzae b Mech strain No. 1, which, when grown on synthetic and semi-synthetic (based on aminopeptin) nutrient media, synthesized polyribosylribitolphosphate in the amount of 100 and 50 μg / ml, respectively (patent RU 2257412, 07.27.2005 C1, Elkina SI., Yastrebova N.E., Orlova O.E., Vaneeva N.P., Sergeev V.V., Aparin P.G., Lvov V.L. “Strain Haemophilus influenzae b Mech No. 1 - capsule producer polysaccharide - polyribosylribitolphosphate "). The time of cultivation in a liquid nutrient medium is 6-8 hours after the culture reaches a stationary growth phase.

В патенте (патент RU 2465316, 27.10.2012, Ванеева Н.П., Елкина СИ., Апарин П.Г. «Штамм бактерий Haemophilus influenzae b 326, стабильный продуцент капсульного полисахарида») описан штамм Haemophilus influenzae В 326 - стабильный продуцент капсульного полисахарида. При росте на синтетической (среда Klein с факторами роста) и полусинтетической (дополнительно содержит казеиновый пептон) питательных средах данный штамм синтезирует 90-150 и 80-130 мкг/мл полирибозилрибитолфосфата соответственно. Длительность культивирования не превышает 8 часов.In the patent (patent RU 2465316, 10.27.2012, Vaneeva NP, Elkina SI., Aparin P. G. "The strain of bacteria Haemophilus influenzae b 326, stable producer of capsular polysaccharide") describes a strain of Haemophilus influenzae B 326 - stable producer of capsular polysaccharide. When growing on synthetic (Klein medium with growth factors) and semi-synthetic (additionally contains casein peptone) culture media, this strain synthesizes 90-150 and 80-130 μg / ml polyribosylribitolphosphate, respectively. The cultivation duration does not exceed 8 hours.

Задачей настоящего изобретения является получения продуктивного штамма-продуцента полирибозилрибитолфосфата.An object of the present invention is to provide a productive producer strain of polyribosylribitolphosphate.

Технический результат, достигаемый при осуществлении изобретения, заключается в повышении продукции полирибозилрибитолфосфата.The technical result achieved by the implementation of the invention is to increase the production of polyribosylribitolphosphate.

В отличии от аналогов предлагаемый штамм Haemophilus influenzae SPB тип b (№В-7884 в Государственной коллекции патогенных микроорганизмов и клеточных культур «ГКПМ - Оболенск» ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии» Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека) синтезирует большее количество полирибозилрибитолфосфата (250-300 мкг/мл) за меньший период культивирования (6 часов).Unlike analogues, the proposed strain Haemophilus influenzae SPB type b (No. B-7884 in the State collection of pathogenic microorganisms and cell cultures "GKPM - Obolensk" Federal State Budgetary Institution "State Scientific Center for Applied Microbiology and Biotechnology" Federal Service for Supervision of Consumer Rights Protection and Well-Being human) synthesizes a greater amount of polyribosylribitolphosphate (250-300 μg / ml) for a shorter cultivation period (6 hours).

Первичная идентификация культуры Haemophilus influenzae SPB тип b была проведена по фенотипическим и серологическим признакам на базе Федерального государственного унитарного предприятия «Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток и предприятие по производству бактерийных препаратов» Федерального медико-биологического агентства (ФГУП СПбНИИВС ФМБА России).The primary identification of the Haemophilus influenzae SPB type b culture was carried out according to phenotypic and serological characteristics on the basis of the Federal State Unitary Enterprise St. Petersburg Research Institute of Vaccines and Serums and the Enterprise for the Production of Bacterial Preparations of the Federal Medical and Biological Agency (FSUE SPbNIIVS FMBA of Russia) .

Вторичная идентификация была проведена по фенотипическим, серологическим и генотипическим признакам на базе Федерального бюджетного учреждения науки «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Серологическое исследование провели с использованием моновалентной сыворотки тип b (Becton, Dickinson and Company, США), генетическое - с помощью масс-спектрометра MALDI-Biotyper (Bruker, Германия) и анализа нуклеотидной последовательности гена 16S рРНК.Secondary identification was carried out on phenotypic, serological and genotypic grounds on the basis of the Federal State Institution of Science “State Scientific Center for Applied Microbiology and Biotechnology” of the Federal Service for Supervision of Consumer Rights Protection and Human Well-being. Serological studies were performed using monovalent serum type b (Becton, Dickinson and Company, USA), genetic studies were performed using a MALDI-Biotyper mass spectrometer (Bruker, Germany) and nucleotide sequence analysis of the 16S rRNA gene.

Морфологические признаки Haemophilus influenzae SPB тип bMorphological features of Haemophilus influenzae SPB type b

Культура представлена мелкими неподвижными грамотрицательными неспорообразующими палочками овоидной формы размером 0,3-0,5×0,2-0,3 мкм, возможен полиморфизм, деление клеток происходит перетяжкой. На поверхности клеток образуется легкоотделяемый капсульный полисахарид. По отношению к кислороду культура - факультативный анаэроб.The culture is represented by small motionless gram-negative non-spore-forming rods of an ovoid shape measuring 0.3-0.5 × 0.2-0.3 microns, polymorphism is possible, cell division occurs by constriction. An easily detachable capsular polysaccharide forms on the surface of the cells. In relation to oxygen, culture is an optional anaerobic.

Культуральные особенности Haemophilus influenzae SPB тип bCultural Features of Haemophilus influenzae SPB Type B

На твердой питательной среде шоколадный агар образует округлые мелкие (0,5-3 мм) выпуклые матовые колонии серого цвета с гладкой поверхностью. У молодых колоний края ровные, которые по мере старения культуры становятся волнистыми. При культивировании данного штамма на полусинтетической жидкой питательной среде для культивирования Haemophilus influenzae тип b (состав приведен в примере 1) наблюдается равномерное помутнение среды и незначительный придонный рост.On solid nutrient medium, chocolate agar forms rounded small (0.5-3 mm) convex matte colonies of gray color with a smooth surface. In young colonies, the edges are even, which become wavy as cultures age. When cultivating this strain on a semisynthetic liquid nutrient medium for cultivating Haemophilus influenzae type b (the composition is shown in example 1), a uniform turbidity of the medium and slight bottom growth are observed.

Биохимические свойства Haemophilus influenzae SPB тип bBiochemical properties of Haemophilus influenzae SPB type b

Штамм оксидазо- и каталазоположительный, по типу питания- хемоорганотроф. Штамм является ауксотрофом и требует для роста факторов роста никотинамидадениндинуклеотид (НАД) и протопорфирин IX (или протогем).The oxidase-and catalase-positive strain, according to the type of nutrition, is chemoorganotroph. The strain is auxotroph and requires nicotinamide adenine dinucleotide (NAD) and protoporphyrin IX (or protogem) to grow growth factors.

Серологические свойства Haemophilus influenzae SPB тип bSerological properties of Haemophilus influenzae SPB type b

Штамм проявляет агглютинирующие свойства к сыворотке специфичной к Н. influenzae типа b.The strain exhibits agglutinating properties to serum specific for H. influenzae type b.

Антигенные свойства Haemophilus influenzae SPB тип bAntigenic properties of Haemophilus influenzae SPB type b

Штамм синтезирует антиген полирибозилрибитолфосфат - капсульный полисахарид, который играет основную роль в его вирулентности.The strain synthesizes the antigen polyribosylribitolphosphate - capsular polysaccharide, which plays a major role in its virulence.

Генетические характеристики Haemophilus influenzae SPB тип bGenetic characteristics of Haemophilus influenzae SPB type b

При анализе нуклеотидной последовательности гена 16S рРНК была определена последовательность размером 1395 п.н.When analyzing the nucleotide sequence of the 16S rRNA gene, a sequence of 1395 bp was determined.

Figure 00000001
Figure 00000001

Штамм Haemophilus influenzae SPB тип b хранят при температуре - (80±3)°С в полусинтетической питательной среде для культивирования Haemophilus influenzae тип b (состав приведен в примере 1) в смеси с 80% глицерином (соотношение 1:4).The strain Haemophilus influenzae SPB type b is stored at a temperature of - (80 ± 3) ° C in a semisynthetic culture medium for culturing Haemophilus influenzae type b (the composition is shown in example 1) in a mixture with 80% glycerol (1: 4 ratio).

Подробное получение капсульного полисахарида на жидкой полусинтетической питательной среде для культивирования Haemophilus influenzae тип b (состав приведен в примере 1) в зависимости от способа подготовки посевного материала описано далее в примерах.The detailed preparation of the capsular polysaccharide in a liquid semi-synthetic culture medium for the cultivation of Haemophilus influenzae type b (the composition is shown in example 1), depending on the method of preparation of the seed, is described in the examples below.

Пример 1. Синтез полирибозилрибитолфосфата штаммом Haemophilus influenzae SPB тип b в зависимости от различных компонентных комбинаций шоколадного агара, используемого при получении инокулятаExample 1. Synthesis of polyribosylribitolphosphate strain Haemophilus influenzae SPB type b depending on the various component combinations of chocolate agar used to obtain the inoculum

Культуру из криопробирки в объеме 0,2 мл пересевали на шоколадный агар различного состава. Инкубацию посевов проводили в СО2-инкубаторе в атмосфере 5% СО2 при температуре (35±2)°С в течение 24 ч. Для культивирования использовали готовые чашки с шоколадным агаром (вариант 1, производитель Becton and Dickinson), приготовленный в лабораторных условиях шоколадный агар с добавкой IsoVitaleX (1%, объемная часть) согласно инструкции (вариант 2, основа шоколадного агара и добавка IsoVitaleX производства Becton and Dickinson, среда приготовлена ФГУП СПбНИИВС ФМБА России) и приготовленный в лабораторных условиях шоколадный агар с добавкой IsoVitaleX (1%, объемная часть) с дополнительно внесенными факторами роста, а именно НАД - 0,02 г/л; гемин - 0,04 г/л, (вариант 3, основа шоколадного агара и добавка IsoVitaleX производства Becton and Dickinson, среда приготовлена ФГУП СПбНИИВС ФМБА России).A culture from a cryovial in a volume of 0.2 ml was transferred to chocolate agar of various compositions. The crops were incubated in a CO 2 incubator in an atmosphere of 5% CO 2 at a temperature of (35 ± 2) ° C for 24 hours. For cultivation, prepared cups with chocolate agar (option 1, manufactured by Becton and Dickinson), prepared in laboratory conditions, were used chocolate agar with IsoVitaleX additive (1%, volume part) according to the instructions (option 2, chocolate agar base and IsoVitaleX additive manufactured by Becton and Dickinson, medium prepared by FSUE SPbNIIVS FMBA of Russia) and laboratory-prepared chocolate agar with IsoVitaleX additive (1%, volumetric part) with additional due to growth factors, namely, NAD - 0.02 g / l; hemin - 0.04 g / l, (option 3, chocolate agar base and IsoVitaleX additive manufactured by Becton and Dickinson, medium prepared by FSUE SPbNIIIVS FMBA of Russia).

Далее культуру с поверхности чашек смывали физиологическим раствором (титр 105 КОЕ/мл) и засевали колбы (10% от объема питательной среды), содержащие по 100 мл жидкой полусинтетической питательной среды для культивирования Haemophilus influenzae тип b следующего состава (г/л): Na2HPO4⋅2H2O - 1,5, КСl - 0,5, NaCl - 2,3, NH4Cl - 0,5, пептон бактериологический - 7,5, дрожжевой экстракт - 2,0, НАД - 0,02, гемин - 0,04, глюкоза - 4,0. Культивирование проводили на шейкер-инкубаторе при температуре (35±2)°С, при 150 об/мин в течение 6 часов.Next, the culture from the surface of the plates was washed with physiological saline (titer 10 5 CFU / ml) and flasks were seeded (10% of the volume of the nutrient medium) containing 100 ml of a semi-synthetic liquid nutrient medium for the cultivation of Haemophilus influenzae type b of the following composition (g / l): Na 2 HPO 4 ⋅ 2H 2 O - 1.5, KCl - 0.5, NaCl - 2.3, NH 4 Cl - 0.5, bacteriological peptone - 7.5, yeast extract - 2.0, NAD - 0 02, hemin - 0.04, glucose - 4.0. Cultivation was carried out on a shaker incubator at a temperature of (35 ± 2) ° C, at 150 rpm for 6 hours.

По завершении культивирования концентрацию полисахарида определяли следующим образом. Биомассу инактивировали нагреванием (55°С, в течение 15 минут) и после охлаждения до (8-10)°С отделяли центрифугированием (4500 об/мин, в течение 30 мин). Содержание полирибозилрибитолфосфата в полученном супернатанте определяли по содержанию рибозы спектрофотометрическим методом.After cultivation, the polysaccharide concentration was determined as follows. The biomass was inactivated by heating (55 ° C, for 15 minutes) and, after cooling to (8-10) ° C, was separated by centrifugation (4500 rpm, for 30 minutes). The content of polyribosylribitolphosphate in the obtained supernatant was determined by the ribose content by spectrophotometric method.

В таблице 1 представлены данные по количественному содержанию полирибозилрибитолфосфата в супернатанте в зависимости от состава шоколадного агара.Table 1 presents data on the quantitative content of polyribosylribitolphosphate in the supernatant, depending on the composition of the chocolate agar.

Таким образом, максимальное количество капсульного полисахарида (265-275 мкг/мл) получено при использовании посевного материала, выращенного на шоколадном агаре с добавкой IsoVitaleX, в состав которого дополнительно входит 0,02 г/л НАД и 0,04 г/л гемина.Thus, the maximum amount of capsular polysaccharide (265-275 μg / ml) was obtained using seeds grown on chocolate agar with the addition of IsoVitaleX, which additionally contains 0.02 g / l of NAD and 0.04 g / l of hemin.

Пример 2. Влияние концентрации клеток Haemophilus influenzae SPB тип b в инокуляте на количество синтезированного капсульного полисахаридаExample 2. The effect of the concentration of Haemophilus influenzae SPB type b cells in the inoculum on the amount of synthesized capsular polysaccharide

Посевной материал получали при условиях, описанных в примере 1. Культуру выращивали на шоколадном агаре с повышенным содержание факторов роста (пример 1, вариант 3). Далее путем смыва культуры с поверхности агаризованной среды физиологическим раствором готовили суспензию с различной концентрацией клеток Haemophilus influenzae SPB тип b: 104 КОЕ/мл, 105 КОЕ/мл, 106 КОЕ/мл, 107 КОЕ/мл, 108 КОЕ/мл. Засев, культивирование, определение концентрации полирибозилрибитолфосфата проводили, как описано в примере 1.Inoculum was obtained under the conditions described in example 1. The culture was grown on chocolate agar with a high content of growth factors (example 1, option 3). Further, by flushing culture surface agar medium saline prepared suspension with various concentrations of cells Haemophilus influenzae SPB type b: April 10 CFU / ml, 10 5 cfu / ml, June 10 CFU / ml, 10 7 cfu / ml, 10 8 cfu / ml Sowing, cultivation, determination of the concentration of polyribosylribitolphosphate was carried out as described in example 1.

На рис. 1 представлены данные по количественному содержанию полирибозилрибитолфосфата в супернатанте в зависимости от концентрации клеток в суспензии для засева жидкой полусинтетической питательной среды для культивирования Haemophilus influenzae тип b.In fig. 1 shows data on the quantitative content of polyribosylribitolphosphate in the supernatant depending on the concentration of cells in suspension for inoculation of a liquid semisynthetic culture medium for cultivation of Haemophilus influenzae type b.

Как видно из данных, представленных на рис. 1, максимальная концентрация полисахарида (290-300 мкг/мл) наблюдалась при концентрации клеток в инокуляте 106 КОЕ/мл.As can be seen from the data presented in Fig. 1, the maximum polysaccharide concentration (290-300 μg / ml) was observed at a cell concentration in the inoculum of 10 6 CFU / ml.

Figure 00000002
Figure 00000002

Claims (1)

Штамм Haemophilus influenzae SPB тип b, депонированный в Государственной коллекции патогенных микроорганизмов и клеточных культур «ГКПМ - Оболенск» ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии» Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека под номером В-7884, продуцент капсульного полисахарида полирибозилрибитолфосфата.The strain Haemophilus influenzae SPB type b, deposited in the State collection of pathogenic microorganisms and cell cultures "GKPM - Obolensk" Federal State Budgetary Institution "State Scientific Center for Applied Microbiology and Biotechnology" Federal Service for Supervision of Consumer Protection and Human Well-being under the number B-7884, producer capsular polysaccharide of polyribosylribitolphosphate.
RU2016113658A 2016-04-08 2016-04-08 Haemophilus influenzae spb strain type b - highly active producer of capsular polyribosylribitolphosphate polysaccharide RU2624014C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2016113658A RU2624014C1 (en) 2016-04-08 2016-04-08 Haemophilus influenzae spb strain type b - highly active producer of capsular polyribosylribitolphosphate polysaccharide

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2016113658A RU2624014C1 (en) 2016-04-08 2016-04-08 Haemophilus influenzae spb strain type b - highly active producer of capsular polyribosylribitolphosphate polysaccharide

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2624014C1 true RU2624014C1 (en) 2017-06-30

Family

ID=59312272

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2016113658A RU2624014C1 (en) 2016-04-08 2016-04-08 Haemophilus influenzae spb strain type b - highly active producer of capsular polyribosylribitolphosphate polysaccharide

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2624014C1 (en)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2185191C1 (en) * 2001-02-01 2002-07-20 Ростовский научно-исследовательский институт микробиологии и паразитологии Method of preparing antigenic preparation haemophilus influenzae type b (hib)
RU2465316C1 (en) * 2011-10-05 2012-10-27 Общество с ограниченной ответственностью "ГРИТВАК" Haemophilus influenzae b n 326 bacterial strain, stable producer of capsular saccharide
CN102628068B (en) * 2012-04-23 2013-09-04 成都欧林生物科技股份有限公司 High-density culture and production method of bacterium capsular polysaccharide with haemophilus influenzae type b
FR2992656A1 (en) * 2012-07-02 2014-01-03 Sanofi Pasteur METHOD FOR PRODUCING ANTIGENS HAEMOPHILUS INFLUENZAE TYPE B

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2185191C1 (en) * 2001-02-01 2002-07-20 Ростовский научно-исследовательский институт микробиологии и паразитологии Method of preparing antigenic preparation haemophilus influenzae type b (hib)
RU2465316C1 (en) * 2011-10-05 2012-10-27 Общество с ограниченной ответственностью "ГРИТВАК" Haemophilus influenzae b n 326 bacterial strain, stable producer of capsular saccharide
CN102628068B (en) * 2012-04-23 2013-09-04 成都欧林生物科技股份有限公司 High-density culture and production method of bacterium capsular polysaccharide with haemophilus influenzae type b
FR2992656A1 (en) * 2012-07-02 2014-01-03 Sanofi Pasteur METHOD FOR PRODUCING ANTIGENS HAEMOPHILUS INFLUENZAE TYPE B

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Toyama et al. Enhanced production of biomass and lipids by Euglena gracilis via co-culturing with a microalga growth-promoting bacterium, Emticicia sp. EG3
CN103849590A (en) Acid-resistant bifidobacterium breve BB8dpH and application thereof
BR112015024308B1 (en) METHOD FOR THE PRODUCTION OF POLYSACCHARIDES AND METHOD FOR THE PRODUCTION OF AN ORGANIC COMPOUND
CN109722388B (en) Microalgae commensal bacterium separation culture medium, separation method and high-throughput screening method for key bacteria influencing microalgae growth
CN106010997B (en) Lactobacillus plantarum and culture separation method, screening method and application thereof
CN106282044B (en) A kind of preparation method of Hyphomicrobium and pyrroloquinoline quinone
CN112852664B (en) Saccharomyces cerevisiae and method for improving yield of gamma-aminobutyric acid produced by saccharomyces cerevisiae
CN109777749B (en) Selenium-enriched bacillus pumilus strain D1-019 and separation and screening method and application thereof
CN110343638B (en) Streptomyces strain capable of producing daptomycin and application thereof
CN102618474A (en) Bacillus subtilis and separate culture method for same
CN108865931A (en) One bacillus and its application
RU2624014C1 (en) Haemophilus influenzae spb strain type b - highly active producer of capsular polyribosylribitolphosphate polysaccharide
CN104745554B (en) Bacillus produces the fermentation medium and fermentation process of protease and gemma
CN110760529B (en) Coding gene of chlorella endophyte and specific primer for amplification thereof
CN110564645B (en) Chlorella endophyte and application thereof in promoting growth of chlorella
KR102201035B1 (en) Method for isolating and culturing microorganism difficult to culture
Querijero-Palacpac et al. Mass cultivation of the nitrogen-fixing cyanobacterium Gloeotrichia natans, indigenous to rice-fields
CN103865856A (en) Acid-resistant bifidobacterium longum JDY1017dpH and application thereof
CN112358969A (en) Method for promoting bait microalgae propagation
RU2518282C1 (en) Nutrient medium for submerged cultivation of tularemia microbe
CN113337432A (en) Methylophagus for producing pyrroloquinoline quinone and application thereof
CN109136145A (en) One kind separating Bifidobacterium and its purification process from rabbit excrement
RU2465316C1 (en) Haemophilus influenzae b n 326 bacterial strain, stable producer of capsular saccharide
JP6479396B2 (en) Novel microorganism having ability to produce putrescine and method for producing putrescine using the same
EP1159400A1 (en) Culture of mycobacteria