RU2621122C1 - Method of estimation of the apoptosis process in the fabric of the brain of laboratory animals - Google Patents

Method of estimation of the apoptosis process in the fabric of the brain of laboratory animals Download PDF

Info

Publication number
RU2621122C1
RU2621122C1 RU2016116182A RU2016116182A RU2621122C1 RU 2621122 C1 RU2621122 C1 RU 2621122C1 RU 2016116182 A RU2016116182 A RU 2016116182A RU 2016116182 A RU2016116182 A RU 2016116182A RU 2621122 C1 RU2621122 C1 RU 2621122C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
expression
neurons
caspase
bcl
animals
Prior art date
Application number
RU2016116182A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Евгений Алексеевич Титов
Михаил Александрович Новиков
Лариса Михайловна Соседова
Татьяна Васильевна Ганенко
Борис Геннадьевич Сухов
Борис Александрович Трофимов
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Восточно-Сибирский институт медико-экологических исследований"
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Иркутский научный центр Сибирского отделения Российской академии наук
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Восточно-Сибирский институт медико-экологических исследований", Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Иркутский научный центр Сибирского отделения Российской академии наук filed Critical Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Восточно-Сибирский институт медико-экологических исследований"
Priority to RU2016116182A priority Critical patent/RU2621122C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2621122C1 publication Critical patent/RU2621122C1/en

Links

Classifications

    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82—NANOTECHNOLOGY
    • B82B—NANOSTRUCTURES FORMED BY MANIPULATION OF INDIVIDUAL ATOMS, MOLECULES, OR LIMITED COLLECTIONS OF ATOMS OR MOLECULES AS DISCRETE UNITS; MANUFACTURE OR TREATMENT THEREOF
    • B82B1/00—Nanostructures formed by manipulation of individual atoms or molecules, or limited collections of atoms or molecules as discrete units
    • G—PHYSICS
    • G09—EDUCATION; CRYPTOGRAPHY; DISPLAY; ADVERTISING; SEALS
    • G09B—EDUCATIONAL OR DEMONSTRATION APPLIANCES; APPLIANCES FOR TEACHING, OR COMMUNICATING WITH, THE BLIND, DEAF OR MUTE; MODELS; PLANETARIA; GLOBES; MAPS; DIAGRAMS
    • G09B23/00—Models for scientific, medical, or mathematical purposes, e.g. full-sized devices for demonstration purposes
    • G09B23/28—Models for scientific, medical, or mathematical purposes, e.g. full-sized devices for demonstration purposes for medicine

Landscapes

  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

FIELD: medicine.
SUBSTANCE: invention concerns the criteria for the diagnosis of the toxic effect of silver nanoparticles encapsulated in the natural polymeric matrix of arabinogalactan (nAgAG). Laboratory animals of the experimental group for 9 days intragastrically injected aqueous solution of nAgAg at a rate of 100 mcg of silver per kilogram of weight in 0.5 ml of distilled water. The animals of the control group receive 0.5 ml of distilled water for 9 days intragastrically. Immediately after the end of the exposure, sections of the brain tissues of the animals of both groups are made. They are stained for antibodies to the proteins caspase-3 and bcl-2 and conduct a survey microscopy of the preparations obtained. At this time, the total number of cells in 0.2 mm2, the number of pathologically altered neurons with caspase 3 expression, the number of pathologically altered neurons with bcl-2 expression, the number of normal neurons with caspase 3 expression, the number of normal neurons with bcl-2 expression as a percentage of the total cell count of 0.2 mm2. The ratio is calculated of these indicators on the drugs of the experimental group to those of the control group. When the number of pathologically altered neurons with caspase 3 expression increased by an average of 1.6 times in the experimental group, the number of normal neurons with the expression of caspase 3 averaged 2.5 times, pathologically altered neurons with bcl-2 expression on average of 2.4 fold, the number of normal neurons expressing bcl-2 is 1.5 times the conclusion about the presence of the process of apoptosis in the brain tissues of animals.
EFFECT: method makes it possible to evaluate the functional state of neurons of the brain under the influence of silver nanobiocomposites, expands the arsenal of methods for evaluating the effect of toxic substances on the organism of laboratory animals.
1 ex, 1 tbl

Description

Изобретение относится к области экспериментальной медицины, общей токсикологии и нанотоксикологии и касается критериев диагностики токсического действия наночастиц серебра, инкапсулированных в природную полимерную матрицу арабиногалактана.The invention relates to the field of experimental medicine, general toxicology and nanotoxicology and relates to criteria for the diagnosis of the toxic effects of silver nanoparticles encapsulated in the natural polymer matrix of arabinogalactan.

Использование наночастиц серебра в промышленности и медицине приобретает все большее значение и широкий размах. Так, например, на настоящий момент наночастицы серебра используются при изготовлении упаковочного материала [1], в стоматологии [2, 3]. Установлена высокая стабильность наночастиц серебра в окружающей среде, определены их антибактериальная и цитотоксическая активность, а также способность сохранять токсические свойства на протяжении длительного времени [4]. Выяснено, что механизм развития токсичности связан с окислительным стрессом, нарушением функций митохондрий и увеличением проницаемости мембраны [3].The use of silver nanoparticles in industry and medicine is becoming increasingly important and widespread. So, for example, currently silver nanoparticles are used in the manufacture of packaging material [1], in dentistry [2, 3]. High stability of silver nanoparticles in the environment has been established, their antibacterial and cytotoxic activity, as well as their ability to maintain toxic properties for a long time have been determined [4]. It has been found that the mechanism of toxicity development is associated with oxidative stress, impaired mitochondrial function, and increased membrane permeability [3].

В настоящее время, в связи с необходимостью снижения токсического эффекта, активно идет разработка и испытание различных природных и синтетических полимерных матриц - носителей наночастиц [4]. В наших исследованиях использовался арабиногалактан (АГ), полученный из лиственницы сибирской [5, 6]. Возможность широкого использования подобных нанобиокомпозитов требует расширенного изучения биологического ответа организма на воздействие наночастиц серебра, инкапсулировнных в данные полимерные матрицы.Currently, due to the need to reduce the toxic effect, the development and testing of various natural and synthetic polymer matrices - carriers of nanoparticles is actively ongoing [4]. In our studies, we used arabinogalactan (AH) obtained from Siberian larch [5, 6]. The possibility of widespread use of such nanobiocomposites requires an extensive study of the biological response of the body to the effects of silver nanoparticles encapsulated in these polymer matrices.

В подобных исследованиях оценивается в основном биологическое действие наночастиц серебра на органы фильтрации (печень, почки), в то время как воздействие нанокомпозита на головной мозг практически не исследуется.In such studies, the biological effect of silver nanoparticles on the filtration organs (liver, kidneys) is mainly evaluated, while the effect of the nanocomposite on the brain is practically not studied.

Задачей изобретения является разработка способа, позволяющего судить о наличии в тканях процесса апоптоза клеток головного мозга экспериментальных животных при воздействии нанобиокомпозитов, содержащих наносеребро, расширение арсенала методов оценки патологических нарушений у экспериментальных животных.The objective of the invention is to develop a method to judge the presence in the tissues of the process of apoptosis of brain cells of experimental animals when exposed to nanobiocomposites containing nanosilver, expanding the arsenal of methods for assessing pathological disorders in experimental animals.

Поставленная задача решается путем проведения иммуногистохимического анализа экспрессии проапоптотического белка caspase 3 и антиапоптотического белка bcl-2 в ткани головного мозга белых крыс при воздействия наночастиц серебра, инкапсулированных в полимерную матрицу арабиногалактана (нAgAГ), с последующей морфометрической обработкой и интерпретации полученного результата.The problem is solved by immunohistochemical analysis of the expression of the proapoptotic protein caspase 3 and antiapoptotic protein bcl-2 in the brain tissue of white rats when exposed to silver nanoparticles encapsulated in the polymer matrix of arabinogalactan (nAgAG), followed by morphometric processing and interpretation of the result.

Уровень экспрессии белков является показателем функционального состояния ткани головного мозга при воздействии наночастиц серебра, инкапсулированных в природную полимерную матрицу арабиногалактана. Данный способ позволяет уточнить причину развития патологического процесса в ткани головного мозга, а также дает более полное представление о течении патологического процесса в клетке и ткани в целом.The level of protein expression is an indicator of the functional state of brain tissue when exposed to silver nanoparticles encapsulated in the natural polymer matrix of arabinogalactan. This method allows you to clarify the cause of the development of the pathological process in the brain tissue, and also gives a more complete picture of the pathological process in the cell and the tissue as a whole.

Способ осуществляется следующим образом: животные разделяются на две группы: опытную и контрольную. Животных опытной группы подвергают пероральному воздействию нAgAГ в дозировке 100 мг на килограмм массы в 0,5 мл дистиллированной воды в течение 9 дней. Животным контрольной группы на протяжении 9 дней внутрижелудочно вводят 0,5 мл дистиллированной воды. Сразу после окончания воздействия животные декапитируются. Готовят срезы тканей коры головного мозга животных из всех групп, иммуногистохимически окрашивают их на антитела к белку caspase-3 и bcl-2, при помощи обзорной микроскопии подсчитывают общее количество клеток в 0,2 мм2, определяют по отдельности количество патологически измененных нейронов с экспрессией белков caspase 3 и bcl-2, количество нормальных нейронов с экспрессией этих белков. Вычисляют изменение количества патологически измененных нейронов с экспрессией caspase 3 и bcl-2 в препаратах опытной группы относительно аналогичных показателей в препаратах контрольной группы; изменение нормальных нейронов с экспрессией белков caspase 3 и bcl-2 в препаратах опытной группы по сравнению с аналогичными характеристиками в препаратах контрольной группы. При увеличении числа патологически измененных нейронов с экспрессией белка caspase 3 в среднем в 1,6 раза в опытной группе в сравнении с контрольной группой, увеличении числа нормальных нейронов с экспрессией белка caspase 3 в среднем в 2,5 раза в опытной группе в сравнении с контрольной группой и увеличении патологически измененных нейронов с экспрессией белка bcl-2 в среднем в 2,4 раза в опытной группе, увеличении числа нормальных нейронов с экспрессией белка bcl-2 в среднем в 1,5 раза в опытной группе в сравнении с контрольной группой делают заключение о возникновении и развитии патологического процесса с преобладанием повреждений нейронов по типу апоптоза в ткани головного мозга сразу после окончания воздействия нанокомпозита серебра.The method is as follows: animals are divided into two groups: experimental and control. The animals of the experimental group are subjected to oral exposure to nAgAG in a dosage of 100 mg per kilogram of weight in 0.5 ml of distilled water for 9 days. Animals of the control group for 9 days are injected intragastrically with 0.5 ml of distilled water. Immediately after the end of the exposure, the animals are decapitated. Tissue sections of the cerebral cortex of animals from all groups are prepared, immunohistochemically stained for antibodies to the caspase-3 and bcl-2 protein, the total number of cells in 0.2 mm 2 is counted using panoramic microscopy, the number of pathologically changed neurons with expression is determined individually caspase 3 and bcl-2 proteins, the number of normal neurons with the expression of these proteins. The change in the number of pathologically altered neurons with expression of caspase 3 and bcl-2 in the preparations of the experimental group is calculated relative to similar indicators in the preparations of the control group; a change in normal neurons with expression of caspase 3 and bcl-2 proteins in the preparations of the experimental group compared with similar characteristics in the preparations of the control group. With an increase in the number of pathologically altered neurons with caspase 3 protein expression on average 1.6 times in the experimental group compared to the control group, an increase in the number of normal neurons with caspase 3 protein expression on average 2.5 times in the experimental group compared with the control group and an increase in pathologically altered neurons with expression of bcl-2 protein on average 2.4 times in the experimental group, an increase in the number of normal neurons with expression of bcl-2 protein on average 1.5 times in the experimental group in comparison with the control group about the emergence and development of a pathological process with a predominance of neuronal damage by the type of apoptosis in the brain tissue immediately after the end of exposure to silver nanocomposite.

Таким образом, совместное использование показателей экспрессии вышеназванных белков позволяет более точно представить и охарактеризовать картину возникновения и развития процесса апоптоза в ткани.Thus, the joint use of indicators of expression of the above proteins allows you to more accurately represent and characterize the pattern of occurrence and development of apoptosis in the tissue.

В данном способе предлагаются качественные и количественные критерии морфометрических изменений в нейронах головного мозга, с помощью которых диагностируют поражение ткани головного мозга при воздействии нAgAГ, и дается их сравнительная характеристика.This method proposes qualitative and quantitative criteria for morphometric changes in brain neurons, which are used to diagnose brain tissue damage when exposed to nAgAG, and their comparative characteristics are given.

Заявленное изобретение соответствует критериям изобретения «новизна» и «изобретательский уровень», так как оно явным образом не следует для специалиста из уровня техники. Предлагаемое изобретение соответствует критерию «промышленная применимость», так как оно может использоваться в экспериментальной медицине (токсикологии, фармакологии, патологической физиологии, патологической анатомии) для верификации моделирования патологических состояний центральной нервной системы животных. Технология оценки безопасности нанопрепаратов, основанная на морфологическом анализе структурных изменений внутренних органов и тканей организма и молекулярной диагностике экспрессии внутриклеточных белков, позволит не допускать к производству и применению лекарственные формы и диагностические препараты, способные вызывать неблагоприятные последствия воздействия.The claimed invention meets the criteria of the invention of "novelty" and "inventive step", as it clearly does not follow for a specialist from the prior art. The present invention meets the criterion of "industrial applicability", as it can be used in experimental medicine (toxicology, pharmacology, pathological physiology, pathological anatomy) to verify the simulation of pathological conditions of the central nervous system of animals. The technology for assessing the safety of nanopreparations, based on a morphological analysis of structural changes in the internal organs and tissues of the body and molecular diagnostics of the expression of intracellular proteins, will prevent the production and use of dosage forms and diagnostic preparations that can cause adverse effects.

Пример осуществления способаAn example of the method

Предлагаемый способ был применен на 40 особях беспородных белых крыс-самцов в трехмесячном возрасте и массой от 240 до 280 грамм. Животным опытной группы (20 особей) внутрижелудочно через зонд на протяжении 9 дней вводили водный раствор АГ с наночастицами серебра (нAgAГ) из расчета 100 мкг серебра на килограмм массы в 0,5 мл дистиллированной воды. После окончания воздействия животные были декапитированы. Животные контрольной группы (20 особей) получали на протяжении 9 дней внутрижелудочно 0,5 мл дистиллированной воды.The proposed method was applied to 40 individuals of outbred white male rats at the age of three months and weighing from 240 to 280 grams. The animals of the experimental group (20 animals) were administered intragastrically through a probe for 9 days with an aqueous solution of AG with silver nanoparticles (nAgAG) at the rate of 100 μg of silver per kilogram of mass in 0.5 ml of distilled water. After exposure, the animals were decapitated. Animals of the control group (20 individuals) received for 9 days intragastrically 0.5 ml of distilled water.

После декапитации головной мозг от каждого исследуемого животного был извлечен и фиксирован в нейтральном буферном растворе формалина (10%), обезвожен этанолом восходящей концентрации (70, 80, 90, 95 и 100%) и помещен в гомогенизированную парафиновую среду для гистологических исследований HistoMix (BioVitrum, Россия). Далее, с помощью микротома НМ 400 (Microm, Германия) изготавливались срезы толщиной 4-5 мкм. Для исследования биологического ответа организма на субклеточном уровне применяли имунногистохимический метод определения активности проапоптотического белка caspase 3 и антиапоптотического белка bcl-2. Полученные на микротоме срезы были помещены на полизиновые стекла (Menzel, Германия) и окрашены на антитела к белку caspase-3 (Monosan, Нидерланды) и bcl-2 в соответствии с протоколом, предложенным производителем. Дополнительно для визуализации нервных клеток проводили окраску по Нисслю. Окрашенные срезы фиксировались полистиролом и накрывались покровным стеклом. После высыхания полистирола полученные микропрепараты просматривали на светооптическом исследовательском микроскопе. Исследование полученных срезов осуществляли при помощи светооптического исследовательского микроскопа Olympus ВХ 51 (Япония) с вводом микроизображений в компьютер при помощи камеры Olympus.After decapitation, the brain from each test animal was removed and fixed in a neutral formalin buffer solution (10%), dehydrated with ethanol of increasing concentration (70, 80, 90, 95 and 100%) and placed in a homogenized paraffin medium for histological studies of HistoMix (BioVitrum , Russia). Further, using a microtome NM 400 (Microm, Germany), sections 4–5 μm thick were made. To study the biological response of the body at the subcellular level, an immunohistochemical method was used to determine the activity of the proapoptotic protein caspase 3 and the antiapoptotic protein bcl-2. The sections obtained on the microtome were placed on polysin glasses (Menzel, Germany) and stained for antibodies to caspase-3 protein (Monosan, Netherlands) and bcl-2 in accordance with the protocol proposed by the manufacturer. In addition, Nissl staining was performed to visualize nerve cells. The stained sections were fixed with polystyrene and covered with a coverslip. After drying of the polystyrene, the obtained micropreparations were examined on a light-optical research microscope. The study of the obtained sections was carried out using an Olympus BX 51 light-optical research microscope (Japan) with micro images being input into a computer using an Olympus camera.

Далее при помощи системы микроскопии и анализа Image Scope М были проанализированы заранее выбранные параметры полученных фотоматериалов: количество патологически измененных нейронов с экспрессией проапоптотического белка caspase 3 и количество патологически измененных нейронов с экспрессией белка bcl-2 в процентах от общего количества клеток в 0.2 мм2, количество нормальных нейронов с экспрессией белка caspase 3 и количество нормальных нейронов с экспрессией белка bcl-2 в процентах от общего количества клеток в 0.2 мм2. Изменение показателя выражалось в отношении количественного показателя образца опытной группы к значению аналогичного показателя из контрольной группы.Further, using the microscope and analysis system Image Scope M, the pre-selected parameters of the obtained photographic materials were analyzed: the number of pathologically altered neurons with expression of the proapoptotic caspase 3 protein and the number of pathologically altered neurons with expression of the bcl-2 protein as a percentage of the total number of cells in 0.2 mm 2 , the number of normal neurons with caspase 3 protein expression and the number of normal neurons with bcl-2 protein expression as a percentage of the total number of cells in 0.2 mm 2 . The change in the indicator was expressed in relation to the quantitative indicator of the sample of the experimental group to the value of the same indicator from the control group.

Статистическую обработку результатов проводили с помощью пакета прикладных программ «Statistica 6.0» (Statsoft Inc., США). Статистическую значимость различий в независимых выборках определяли по методу Манна-Уитни. Достигнутый уровень значимости признаков - при р<0,05.Statistical processing of the results was carried out using the software package “Statistica 6.0” (Statsoft Inc., USA). The statistical significance of differences in independent samples was determined by the Mann-Whitney method. The achieved level of significance of the signs is at p <0.05.

Figure 00000001
Figure 00000001

Как видно из таблицы, в опытной группе по сравнению с контролем увеличилось количество патологически измененных нейронов с экспрессией caspase 3 в среднем в 2,5 раза, количество нормальных нейронов с экспрессией белка caspase 3 в среднем в 1,6 раза, также увеличилось по сравнению с контрольной группой количество патологически измененных нейронов с экспрессией белка bcl-2 в среднем в 2.4 раза, а количество нормальных нейронов с экспрессией белка bcl-2 в среднем в 1,5 раза. Учитывая полученные результаты, делают заключение о возникновении и развитии патологического процесса с преобладанием повреждений нейронов по типу апоптоза в ткани головного мозга сразу после окончания воздействия нанокомпозита серебра.As can be seen from the table, in the experimental group, compared with the control, the number of pathologically changed neurons with expression of caspase 3 increased by an average of 2.5 times, the number of normal neurons with expression of caspase 3 protein by an average of 1.6, also increased compared to the control group the number of pathologically altered neurons with expression of bcl-2 protein on average 2.4 times, and the number of normal neurons with expression of bcl-2 protein on average 1.5 times. Considering the results obtained, a conclusion is drawn about the occurrence and development of a pathological process with a predominance of neuronal damage by the type of apoptosis in the brain tissue immediately after the exposure to silver nanocomposite.

Предлагаемый способ позволяет оценить функциональное состояние нейронов головного мозга при воздействие нанобиокомпозитов серебра. Данный метод используется для моделей нейроинтоксикаций у экспериментальных животных. Он расширяет арсенал методов оценки действия токсических веществ на организм лабораторных животных, повышает точность верификации токсической энцефалопатии, позволяет оценивать функциональное состояние, наряду со структурными, благодаря морфометрической характеристике нейронов головного мозга, уточняя механизм развития патологического процесса по типу апоптоза.The proposed method allows to evaluate the functional state of brain neurons when exposed to silver nanobiocomposites. This method is used for neurointoxication models in experimental animals. It expands the arsenal of methods for assessing the effects of toxic substances on the organism of laboratory animals, improves the accuracy of verification of toxic encephalopathy, and allows one to evaluate the functional state along with the structural state due to the morphometric characteristics of brain neurons, clarifying the mechanism of development of the pathological process by the type of apoptosis.

ЛитератураLiterature

1. Верников В.М., Гмошинский И.В., Хотимченко С.А. // Наночастицы серебра в природе, промышленности, упаковочных материалах, предназначенных для пищевых продуктов: характеристика возможных рисков / Вопросы питания 2009, №6, стр. 13-20.1. Vernikov V.M., Gmoshinsky I.V., Khotimchenko S.A. // Silver nanoparticles in nature, industry, packaging materials intended for food: a description of possible risks / Nutrition Issues 2009, No. 6, pp. 13-20.

2. Садыков М.И., Нестеров A.M., Фесик Е.В. // Изготовление съемных зубных протезов из акриловой пластмассы содержащей наночастицы серебра (лабораторное исследование) / Врач-аспирант, 2011, т. 49 №6.3, стр. 451-456.2. Sadykov M.I., Nesterov A.M., Fesik E.V. // Production of removable dentures from acrylic plastic containing silver nanoparticles (laboratory research) / Post-graduate student, 2011, t. 49 No. 6.3, p. 451-456.

3. Sahoo S.K., Parveen S., Panda J.J. // Nanomedicine: Nanotechnology, Biology and Medicine, 2007. №3. P. 20-31.3. Sahoo S.K., Parveen S., Panda J.J. // Nanomedicine: Nanotechnology, Biology and Medicine, 2007. No. 3. P. 20-31.

4. Prozorova G.F., Pozdnyakov A.S., Kuznetsova N.P. et al. // International Journal of Nanomedicine, 2014. №9. 1883.4. Prozorova G.F., Pozdnyakov A.S., Kuznetsova N.P. et al. // International Journal of Nanomedicine, 2014. No. 9. 1883.

5. Lewinski N., Colvin V., Drezek R. // Small-journal 2008, 4, No. 1, 26-49.5. Lewinski N., Colvin V., Drezek R. // Small-journal 2008, 4, No. 1, 26-49.

6. Ji J.H. // Inhalation Toxicology 2007. Vol. 19. Iss. 10. P. 857-71.6. Ji J.H. // Inhalation Toxicology 2007. Vol. 19. Iss. 10. P. 857-71.

7. Дубровина В.И., Медведева С.А. и др. Иммуномодулирующие свойства арабиногалактана лиственницы сибирской. - М.: Фармация, 2001. С. 26-27.7. Dubrovina V.I., Medvedeva S.A. et al. Immunomodulating properties of arabinogalactan of Siberian larch. - M .: Pharmacy, 2001.S. 26-27.

Claims (1)

Способ оценки процесса апоптоза в ткани головного мозга лабораторных животных при воздействии арабиногалактана с наночастицами серебра (нAgAГ) на лабораторных животных, включающий воздействие на животных опытной группы токсикантом путем внутрижелудочного введения водного раствора нAgAГ из расчета 100 мкг серебра на килограмм массы в 0,5 мл дистиллированной воды на протяжении 9 дней и внутрижелудочное введение животным контрольной группы 0,5 мл дистиллированной воды на протяжении 9 дней, после чего сразу после окончания воздействия изготовление срезов тканей головного мозга животных обеих групп, окрашивание их на антитела к белкам caspase-3 и bcl-2 и проведение обзорной микроскопии полученных препаратов, при которой подсчитывают общее количество клеток в 0,2 мм2, количество патологически измененных нейронов с экспрессией caspase 3, количество патологически измененных нейронов с экспрессией bcl-2, количество нормальных нейронов с экспрессией caspase 3, количество нормальных нейронов с экспрессией bcl-2 в процентах от общего количества клеток в 0.2 мм2, вычисляют отношения этих показателей на препаратах опытной группы к аналогичным показателям контрольной группы и при увеличении в опытной группе числа патологически измененных нейронов с экспрессией caspase 3 в среднем в 1,6 раза, числа нормальных нейронов с экспрессией caspase 3 в среднем в 2,5 раза, патологически измененных нейронов с экспрессией bcl-2 в среднем в 2,4 раза, числа нормальных нейронов с экспрессией bcl-2 в 1,5 раза делают заключение о наличии процесса апоптоза в тканях головного мозга животных.A method for evaluating the apoptosis process in the brain tissue of laboratory animals when exposed to arabinogalactan with silver nanoparticles (nAgAG) on laboratory animals, including exposure to animals of the experimental group with a toxicant by intragastric administration of an aqueous solution of nAgAG based on 100 μg of silver per kilogram of weight in 0.5 ml of distilled water for 9 days and intragastric administration to animals of the control group of 0.5 ml of distilled water for 9 days, after which immediately after exposure slices of animal brain tissue of both groups, antibody staining of proteins to caspase-3 and bcl-2 and carrying out microscope observation derived preparations in which the total number of cells counted in 0.2 mm 2, the number of pathologically altered neurons expressing caspase 3 , the number of pathologically altered neurons with bcl-2 expression, the number of normal neurons with caspase 3 expression, the number of normal neurons with bcl-2 expression as a percentage of the total number of cells in 0.2 mm 2 , the ratios of these indicators are calculated by reparations of the experimental group to similar indicators of the control group and with an increase in the number of pathologically altered neurons with caspase 3 expression in the experimental group by an average of 1.6 times, the number of normal neurons with caspase 3 expression by an average of 2.5 times, pathologically altered neurons with expression bcl-2 on average 2.4 times, the number of normal neurons with bcl-2 expression 1.5 times conclude that there is an apoptosis process in the brain tissue of animals.
RU2016116182A 2016-04-25 2016-04-25 Method of estimation of the apoptosis process in the fabric of the brain of laboratory animals RU2621122C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2016116182A RU2621122C1 (en) 2016-04-25 2016-04-25 Method of estimation of the apoptosis process in the fabric of the brain of laboratory animals

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2016116182A RU2621122C1 (en) 2016-04-25 2016-04-25 Method of estimation of the apoptosis process in the fabric of the brain of laboratory animals

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2621122C1 true RU2621122C1 (en) 2017-05-31

Family

ID=59032442

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2016116182A RU2621122C1 (en) 2016-04-25 2016-04-25 Method of estimation of the apoptosis process in the fabric of the brain of laboratory animals

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2621122C1 (en)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2733504C1 (en) * 2019-12-23 2020-10-02 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Восточно-Сибирский институт медико-экологических исследований" Method of assessing the toxic effect of a bimetallic ferrum-gadolinium nanocomposite encapsulated in a natural polymer matrix of arabinogalactan on laboratory animals

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6534267B1 (en) * 2000-01-06 2003-03-18 Xiaodong Wang Polynucleotides encoding activators of caspases
RU2278669C1 (en) * 2004-11-09 2006-06-27 Иркутский институт химии им. А.Е. Фаворского Сибирского отделения Российской академии наук (ИрИХ СО РАН) Agent possessing antibacterial activity
RU2471247C1 (en) * 2011-07-19 2012-12-27 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Восточно-Сибирский научный центр экологии человека" Сибирского отделения Российской академии медицинских наук Diagnostic technique for mercury encephalopathy in small laboratory animals
RU2578545C1 (en) * 2015-01-12 2016-03-27 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Восточно-Сибирский институт медико-экологических исследований" Method of evaluating toxic effects of silver nanoparticles encapsulated within polymer matrix of arabinogalactan on brain tissue of laboratory animals in long-term

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6534267B1 (en) * 2000-01-06 2003-03-18 Xiaodong Wang Polynucleotides encoding activators of caspases
RU2278669C1 (en) * 2004-11-09 2006-06-27 Иркутский институт химии им. А.Е. Фаворского Сибирского отделения Российской академии наук (ИрИХ СО РАН) Agent possessing antibacterial activity
RU2471247C1 (en) * 2011-07-19 2012-12-27 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Восточно-Сибирский научный центр экологии человека" Сибирского отделения Российской академии медицинских наук Diagnostic technique for mercury encephalopathy in small laboratory animals
RU2578545C1 (en) * 2015-01-12 2016-03-27 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Восточно-Сибирский институт медико-экологических исследований" Method of evaluating toxic effects of silver nanoparticles encapsulated within polymer matrix of arabinogalactan on brain tissue of laboratory animals in long-term

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ФАТХУТДИНОВА Л.М. И др. Токсичность искусственныхнаночастиц. Казанский медицинский журнал, 2009, том 90. ГРИЩЕНКО Л А. Металлосодержащие нанокомпозиты на основе арабиногалактана. автореф.дисс.канд. хим. наук, Иркутск, 2007. KATO K et al. Pressure-dependent effect of shock waves on ratbrain: induction of neuronal apoptosis mediated by a caspasedependentpathway. J Neurosurg. 2007 Apr;106(4):667-76, abstr. *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2733504C1 (en) * 2019-12-23 2020-10-02 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Восточно-Сибирский институт медико-экологических исследований" Method of assessing the toxic effect of a bimetallic ferrum-gadolinium nanocomposite encapsulated in a natural polymer matrix of arabinogalactan on laboratory animals

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Sorrells et al. Human hippocampal neurogenesis drops sharply in children to undetectable levels in adults
Calì et al. 3D cellular reconstruction of cortical glia and parenchymal morphometric analysis from Serial Block-Face Electron Microscopy of juvenile rat
Siksou et al. A common molecular basis for membrane docking and functional priming of synaptic vesicles
Katoh et al. Polymorphic regulation of mitochondrial fission and fusion modifies phenotypes of microglia in neuroinflammation
Brauckmann et al. Lipopolysaccharide-induced hemolysis: Evidence for direct membrane interactions
Dall'Oglio et al. The human medial amygdala: structure, diversity, and complexity of dendritic spines
Furness et al. The dimensions and structural attachments of tip links in mammalian cochlear hair cells and the effects of exposure to different levels of extracellular calcium
Navarro et al. Cerebral Corpora amylacea are dense membranous labyrinths containing structurally preserved cell organelles
Pelkonen et al. Isolation of intact and functional melanosomes from the retinal pigment epithelium
Silano et al. Early tissue transglutaminase–mediated response underlies K562 (S)-cell gliadin-dependent agglutination
Böni et al. Effect of ionic strength and seawater cations on hagfish slime formation
Abrahao et al. Ethanol-sensitive pacemaker neurons in the mouse external globus pallidus
Dall'Oglio et al. Cellular components of the human medial amygdaloid nucleus
Strecker et al. FE65 and FE65L1 share common synaptic functions and genetically interact with the APP family in neuromuscular junction formation
RU2578545C1 (en) Method of evaluating toxic effects of silver nanoparticles encapsulated within polymer matrix of arabinogalactan on brain tissue of laboratory animals in long-term
Kumar et al. Protein characterization of extracellular microvesicles/exosomes released from cytotoxin-challenged rat cerebrocortical mixed culture and mouse N2a cells
RU2621122C1 (en) Method of estimation of the apoptosis process in the fabric of the brain of laboratory animals
Corbo et al. Use of different morphological techniques to analyze the cellular composition of the adult zebrafish optic tectum
Elices et al. An electrophysiological and kinematic model of Paramecium, the “swimming neuron”
Maiti et al. Labeling and imaging of amyloid plaques in brain tissue using the natural polyphenol curcumin
Vymazalová et al. The possibilities of studying human embryos and foetuses using micro-CT: a technical note
Samoylov et al. Novel metal clusters isolated from blood are lethal to cancer cells
Oriá et al. Comparison of electrolyte composition and crystallization patterns in bird and reptile tears
Chatterjee et al. Lasting effects of mild embryonic ethanol exposure on voltage-gated ion channels in adult zebrafish brain
López‐Cervantes et al. Cerebellar spongiform degeneration is accompanied by metabolic, cellular, and motor disruption in male rats with portacaval anastomosis

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20200426