RU2617047C1 - Method of personified administration of standard or combined luteal phase maintenance modes in ivf program using molecular-genetic markers - Google Patents
Method of personified administration of standard or combined luteal phase maintenance modes in ivf program using molecular-genetic markers Download PDFInfo
- Publication number
- RU2617047C1 RU2617047C1 RU2016125835A RU2016125835A RU2617047C1 RU 2617047 C1 RU2617047 C1 RU 2617047C1 RU 2016125835 A RU2016125835 A RU 2016125835A RU 2016125835 A RU2016125835 A RU 2016125835A RU 2617047 C1 RU2617047 C1 RU 2617047C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- standard
- combined
- ivf
- support
- luteal phase
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6806—Preparing nucleic acids for analysis, e.g. for polymerase chain reaction [PCR] assay
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6813—Hybridisation assays
- C12Q1/6827—Hybridisation assays for detection of mutation or polymorphism
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2531/00—Reactions of nucleic acids characterised by
- C12Q2531/10—Reactions of nucleic acids characterised by the purpose being amplify/increase the copy number of target nucleic acid
- C12Q2531/113—PCR
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2561/00—Nucleic acid detection characterised by assay method
- C12Q2561/113—Real time assay
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/106—Pharmacogenomics, i.e. genetic variability in individual responses to drugs and drug metabolism
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Поддержка лютеиновой фазы (ЛФ) стимулированного цикла - это интегральная часть программ вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ), во многом определяющая их результативность. В качестве одной из причин неудач программы экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) предполагают потери на этапе имплантации эмбриона. Это связывают с тем, что методы ВРТ оказывают отрицательное влияние на раннее функционирование желтого тела, в связи с этим недостаточность ЛФ после стимуляции суперовуляции в протоколах с аналогами гонадотропин - рилизинг гормона (ГнРГ) является серьезной проблемой ВРТ. По данным литературы недостаточность ЛФ в программах ЭКО развивается в большинстве случаев как в протоколах с агонистами-гонадотропин-рилизинг гормона (а-ГнРГ), так и антагонистами - гонадотропин-рилизинг гормона (ант-ГнРГ) и обусловлена неблагоприятными эффектами стимуляции суперовуляции, подавлением секреции лютеинизирующего гормона (ЛГ) аналогами ГнРГ [1, 2, 3].Supporting the luteal phase (LF) of the stimulated cycle is an integral part of assisted reproductive technology (ART) programs, which largely determines their effectiveness. In vitro fertilization (IVF) programs suggest losses at the embryo implantation stage as one of the causes of failure. This is due to the fact that the methods of ART have a negative effect on the early functioning of the corpus luteum; in this regard, LF insufficiency after stimulation of superovulation in protocols with gonadotropin analogues - hormone releasing (GnRH) is a serious problem of ART. According to the literature, LF insufficiency in IVF programs develops in most cases, both in protocols with gonadotropin-releasing hormone agonists (a-GnRH) and antagonists - gonadotropin-releasing hormone antagonists (ant-GnRH) and is caused by adverse effects of stimulation of superovulation, suppression of secretion luteinizing hormone (LH) analogues of GnRH [1, 2, 3].
Таким образом, ожидаемый результат лечения методом ЭКО в значительной степени зависит от эффективности проводимой поддержки ЛФ. В настоящее время для восполнения недостаточности ЛФ используются различные режимы ее поддержки, включающие препараты прогестерона (Р), хорионического гонадотропина человека (ХГч), эстрадиола (Е2), однако сами препараты и их дозы назначаются врачами эмпирически [4, 5]. В последние годы появились работы, в которых было показано существенное повышение частоты имплантации, клинической беременности, развивающейся беременности и частоты родов живым плодом при добавлении к стандартному режиму поддержки ЛФ микронизированным Р препаратов а-ГнРГ (комбинированная поддержка ЛФ) [4, 6, 7, 8].Thus, the expected result of treatment with the IVF method largely depends on the effectiveness of the ongoing LF support. Currently, various modes of its support are used to compensate for LF deficiency, including preparations of progesterone (P), human chorionic gonadotropin (hCG), estradiol (E2), however, the drugs themselves and their doses are prescribed empirically by doctors [4, 5]. In recent years, works have appeared in which a significant increase in the frequency of implantation, clinical pregnancy, developing pregnancy, and the birth rate of a live fetus was shown when a-GnRH preparations were added to the standard regimen of LF support (combined LF support) [4, 6, 7, 8].
Несмотря на обнадеживающие результаты адъювантного применения препаратов а-ГнРГ для поддержки ЛФ в ряде публикаций, недостатками этих работ являются гетерогенность выборок, различные режимы поддержки ЛФ в группах сравнения, а также отсутствие ясности, для каких именно пациенток комбинированный режим поддержки ЛФ был бы наиболее эффективен, отсутствуют молекулярно-генетические предикторы назначения режимов поддержки ЛФ.Despite the encouraging results of the adjuvant use of a-GnRH drugs to support LF in a number of publications, the drawbacks of these studies are the heterogeneity of the samples, different modes of LF support in the comparison groups, and the lack of clarity for which patients the combined LF support regimen would be most effective. There are no molecular genetic predictors for the appointment of LF support regimens.
Как известно, на индивидуальную реакцию пациентки, использующей различные гормональные препараты, могут влиять сотни генов, но лишь небольшое количество ключевых одиночных нуклеотидных полиморфизмов (SNPs) могут прогнозировать эффективность применения данного препарата. В литературе широко изучаются полиморфизмы генов, которые участвуют в ответе яичников на стимуляцию суперовуляции и могут влиять на адекватность течения ЛФ в стимулированных циклах программ ЭКО [9].As you know, hundreds of genes can affect the individual response of a patient using various hormonal drugs, but only a small number of key single nucleotide polymorphisms (SNPs) can predict the effectiveness of this drug. In the literature, polymorphisms of genes that participate in the response of the ovaries to stimulation of superovulation and can affect the adequacy of the course of LF in stimulated cycles of IVF programs are widely studied [9].
Как следствие, последнее приобретает чрезвычайную актуальность в связи с высокой перспективностью для разработки персонифицированного подхода к ведению ЛФ в программах ВРТ.As a result, the latter is becoming extremely urgent due to the high potential for developing a personalized approach to managing LF in ART programs.
В связи с чем было проведено исследование, целью которого явилось комплексная оценка молекулярно-генетических предикторов с целью предикции исходов программ ВРТ, что позволит индивидуально подобрать оптимальный режим поддержки ЛФ и тем самым увеличить эффективность программ ВРТ.In this connection, a study was conducted, the purpose of which was a comprehensive assessment of molecular genetic predictors with the aim of predicting the outcomes of ART programs, which will allow you to individually select the optimal regimen for LF support and thereby increase the effectiveness of ART programs.
Способ персонифицированного назначения стандартного или комбинированного режимов поддержки лютеиновой фазы в программе ЭКО с использованием молекулярно-генетических маркеров, отличающийся тем, что выделяют ДНК из образцов тканей пациентки с трубно-перитонеальным фактором бесплодия, в качестве предпочитаемого источника ДНК рекомендуют периферическую кровь, определяют генотип по локусам LHCG R:872 A>G (Asn291Ser) [rs 12470652]; PGR: 38 T>C [rs484389] с применением ПЦР в режиме реального времени; если в генотипе пациентки присутствуют 1 или 2 генотипа риска, т.е. для гена PGR генотипы риска 38 Т/С и 38С/С, а для гена LHCGR - генотип риска 872Т/С, то рекомендуют стандартный режим поддержки ЛФ-микронизированным прогестероном, если генотипы риска отсутствуют, то рекомендуют комбинированный режим поддержки ЛФ - микронизированным Р+а-ГнРГ.A method for personifying the standard or combined modes of supporting the luteal phase in an IVF program using molecular genetic markers, characterized in that DNA is isolated from tissue samples from a patient with tubal-peritoneal infertility factor, peripheral blood is recommended as the preferred source of DNA, the genotype is determined by loci LHCG R: 872 A> G (Asn291Ser) [rs 12470652]; PGR: 38 T> C [rs484389] using real-time PCR; if 1 or 2 risk genotypes are present in the patient’s genotype, i.e. for the PGR gene, the risk genotypes are 38 T / C and 38C / C, and for the LHCGR gene, the risk genotype is 872T / C, the standard support regimen for LF-micronized progesterone is recommended; if there are no risk genotypes, then the combined regimen for support of LF-micronized P + is recommended a-GnRH.
Материалы и методыMaterials and methods
В исследование была включена 207 пациенток с трубно-перитонеальным фактором бесплодия, которые получали лечение в программе ЭКО.The study included 207 patients with tubal-peritoneal infertility factor who received treatment in the IVF program.
Стимуляцию функции яичников проводили по фиксированному протоколу с ант-ГнРГ с использованием препаратов рекомбинантного ФСГ (рФСГ) со 2-3 дня менструального цикла. Введение гонадотропинов начинали при наличии условий для начала стимуляции суперовуляции по данным УЗИ: отсутствие кист яичников, толщина эндометрия не более 4 мм. Подбор стартовой дозы индуктора осуществляли исходя из параметров овариального резерва пациенток (возраст, уровень ФСГ, антимюллеровый гормон (АМГ), количество антральных фолликулов и ответ на предыдущую стимуляцию). Дозу индуктора корректировали в соответствии с ответом яичников на стимуляцию. С целью предотвращения паразитарного пика эндогенного ЛГ при достижении диаметра фолликулов 14-15 мм начиналось введение препарата ант-ГнРГ в дозе 0,25 мг/сут подкожно. В качестве триггера овуляции для финального созревания ооцитов назначали ХГч 10000 ME при визуализации трех и более фолликулов ≥17 мм в диаметре и толщине эндометрия 8-10 мм. ТВП яичников осуществляли через 35-36 часов после введения триггера овуляции. Преинкубация, оплодотворение ооцитов или ИКСИ, а также культивирование эмбрионов осуществлялось в средах для культивирования фирмы «ORIGIO» (Дания). Оценка качества полученных ооцитов по степени зрелости и эмбрионов осуществлялась на основании общепринятых критериев. Перенос 1-2 эмбрионов проводили на 3-5 сутки культивирования.Stimulation of ovarian function was performed according to a fixed protocol with ant-GnRH using recombinant FSH (rFSH) preparations from 2-3 days of the menstrual cycle. The introduction of gonadotropins was started if there were conditions for the beginning of stimulation of superovulation according to ultrasound: the absence of ovarian cysts, the thickness of the endometrium was not more than 4 mm. The selection of the starting dose of the inducer was carried out based on the parameters of the ovarian reserve of the patients (age, FSH level, anti-Muller hormone (AMH), the number of antral follicles and the response to previous stimulation). The inducer dose was adjusted in accordance with the response of the ovaries to stimulation. In order to prevent a parasitic peak of endogenous LH when reaching a follicle diameter of 14-15 mm, the administration of ant-GnRH at a dose of 0.25 mg / day subcutaneously began. As an ovulation trigger for the final maturation of oocytes, hCG 10000 ME was prescribed for visualization of three or more follicles ≥17 mm in diameter and thickness of the endometrium of 8-10 mm. Ovarian TBP was performed 35-36 hours after administration of the ovulation trigger. Pre-incubation, fertilization of oocytes or ICSI, as well as the cultivation of embryos was carried out in culture media of the company "ORIGIO" (Denmark). Evaluation of the quality of the obtained oocytes by maturity and embryos was carried out on the basis of generally accepted criteria. Transfer of 1-2 embryos was carried out on 3-5 days of cultivation.
В зависимости от режима ведения ЛФ пациентки были рандомизированы на две группы: в 1-й группе (n=92) получали микронизированный Р-600 мг/день с 1-х суток после оплодотворения и трипторелин-0,1 мг и/к на 6-е сутки после оплодотворения, во 2 группе (n=115)-микронизированный Р-600 мг/день с 1-х суток после оплодотворения.Depending on the LF management regimen, the patients were randomized into two groups: in the 1st group (n = 92), they received micronized P-600 mg / day from the 1st day after fertilization and tryptorelin-0.1 mg and / to 6 day after fertilization, in group 2 (n = 115) -micronized P-600 mg / day from 1 day after fertilization.
Анализ исходов программы ЭКО проводили с учетом наличия полиморфизмов LHR, PGR.The analysis of the outcomes of the IVF program was carried out taking into account the presence of LHR, PGR polymorphisms.
Определяют генотип по данным позициям с применением полимеразной цепной реакции (ПЦР) или аналогичного метода, позволяющего определить указанные генетические маркеры. ПЦР и определение температуры плавления олигонуклеотидных проб проводят при помощи детектирующего амплификатора ДТ-96 (ООО «НПО ДНК-Технология», Россия). ДНК для генотипирования выделяют из образцов периферической крови взятой с ЭДТА (этилендиаминтетрауксусная кислота) в качестве антикоагулянта, объемом 0,5 мл, смешивают в микроцентрифужных пробирках (объемом 1,5 мл) типа Эппендорф с лизирующим раствором (0,5 мл), состоящим из 10 мМ Трис-HCl pH 7,5, 0,32 М сахарозы, 5 мМ MgCl, 1% Тритона Х-100 центрифугируют. Центрифугирование проводится в течение 1 мин при 10000 об/мин, супернатант удаляется, осадки клеточных ядер двукратно отмывают соответствующим буфером. В последующем протеолиз проводят в буферном растворе (50 мкл), содержащем 10 мМ Трис-HCl pH 8,3, 50 мМ KCl, 0,45% NP40, 045% Твина 20 и 250 мкг/мл протеиназы К, 2,5 мМ MgCl, в течение 20 минут при 37°C. Инактивация протеиназы К производится в течение 20 минут при температурном режиме 98°C. Концентрация ДНК определяется на ДНК-минифлуориметре (Hoefer, США) и составляет около 50-100 мкг/мл. Идентификацию однонуклеотидных полиморфизмов проводят с помощью модифицированного метода «примыкающих проб» (adjacent probes, kissing probes), с использованием оригинальных олигонуклеотидов [10; 11].The genotype is determined from these positions using the polymerase chain reaction (PCR) or a similar method to determine the indicated genetic markers. PCR and determination of the melting temperature of oligonucleotide samples is carried out using a detecting amplifier DT-96 (LLC NPO DNA-Technology, Russia). DNA for genotyping is isolated from peripheral blood samples taken with EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid) as an anticoagulant, with a volume of 0.5 ml, mixed in microcentrifuge tubes (1.5 ml) of Eppendorf type with a lysis solution (0.5 ml) consisting of 10 mM Tris-HCl pH 7.5, 0.32 M sucrose, 5 mM MgCl, 1% Triton X-100 are centrifuged. Centrifugation is carried out for 1 min at 10,000 rpm, the supernatant is removed, the precipitation of cell nuclei is washed twice with the appropriate buffer. Subsequently, proteolysis is carried out in a buffer solution (50 μl) containing 10 mM Tris-HCl pH 8.3, 50 mM KCl, 0.45% NP40, 045%
Определение полиморфизма генов сначала проводится ПЦР с праймерами, которые связываются с комплементарными последовательностями, и между циклами нагревания (для денатурации ДНК) и охлаждения (для обеспечения синтеза) синтезируются копии данной области гена [12]. Праймеры общие для обоих вариантов нуклеотидной последовательности, после чего температуру реакционной смеси для гибридизации матрицы с олигонуклеотидными пробами понижают. Для определения типа последовательности используют два варианта олигонуклеотидов. В первом случае олигонуклеотиды метят флуорофором, во втором - гасителем флуоресценции. Этот процесс протекает при помощи ферментов, способных соединять нуклеотидные основания и выдерживать необходимые для денатурации температурные режимы [12]. В качестве такого фермента используется Taq-полимераза, блокированная специфическими антителами, чтобы предотвратить неспецифический отжиг праймеров и повысить чувствительность тест-систем.Determination of gene polymorphism is first carried out by PCR with primers that bind to complementary sequences, and between the heating (for DNA denaturation) and cooling (for synthesis) cycles, copies of this gene region are synthesized [12]. Primers are common to both variants of the nucleotide sequence, after which the temperature of the reaction mixture for hybridization of the template with oligonucleotide samples is reduced. To determine the type of sequence, two variants of oligonucleotides are used. In the first case, the oligonucleotides are labeled with a fluorophore, in the second - with a fluorescence quencher. This process proceeds with the help of enzymes capable of combining nucleotide bases and withstanding the temperature conditions necessary for denaturation [12]. Taq polymerase blocked by specific antibodies is used as such an enzyme in order to prevent non-specific annealing of primers and increase the sensitivity of test systems.
В режиме реального времени измеряют уровень флуоресценции в процессе температурной денатурации дуплексов олигонуклеотидов и полученных матриц. Генотип определяется путем анализа кривых плавления. В том случае, если анализируемый образец содержит только один тип нуклеотидной последовательности гена, т.е. гомозиготен по данному полиморфизму, температура плавления для пробы, образующей совершенный дуплекс, выше, чем для пробы, образующей несовершенный дуплекс.В том случае, если анализировался гетерозиготный образец, содержащий два типа нуклеотидной последовательности, каждый из вариантов проб может образовать совершенный дуплекс, поэтому температуры плавления одинаковы [12].In real time, the level of fluorescence in the process of temperature denaturation of duplexes of oligonucleotides and the resulting matrices is measured. The genotype is determined by analyzing the melting curves. In the event that the analyzed sample contains only one type of nucleotide sequence of the gene, i.e. homozygous for this polymorphism, the melting point for a sample forming a perfect duplex is higher than for a sample forming an imperfect duplex. In the case where a heterozygous sample containing two types of nucleotide sequence was analyzed, each of the sample variants can form a perfect duplex, therefore, the temperatures melting is the same [12].
Результаты исследованияResearch results
Проведена оценка клинико-анамнестических данных, гормональных параметров и параметров стимулированного цикла, раннего оогенезе и эмбриогенеза пациенток, включенных в работу, а также исследованы генетические маркеры, потенциально влияющих на исходы программ ЭКО в зависимости от режима поддержки ЛФ.Clinical anamnestic data, hormonal and stimulated cycle parameters, early oogenesis and embryogenesis of the patients included in the work were evaluated, and genetic markers that potentially affect the outcome of IVF programs depending on the regimen of LF support were studied.
В ходе проведенного анализа выявлена статистически значимая ассоциация полиморфизмов PGR: 38 Т>С [rs484389], LHCG R:872 A>G (Asn291Ser) [rs 12470652] (см. таблицу 1) с частотой наступления беременности при различных режимах поддержки ЛФ. 
Проведен многофакторный дискриминантный анализ распределения генотипов LHCGR: 872 A>G, PGR: 38 Т>С, а также их сочетаний. В результате дискриминантного анализа была получена прогностическая модель неудачи программы ВРТ при различных тактиках ведения ЛФ в зависимости от сочетаний генотипов риска (PGR 38С/С или PGR 38Т/С) и LHCGR: 872Т/С. В качестве предиктора неудачи использовалась переменная, принимающая значение 1 - если в генотипе пациентки присутствовал хотя бы один генотип риска по указанным маркерам, и 2 - если присутствовали оба генотипа риска. При отсутствии генетических маркеров неудачи ВРТ переменная принимала значение 0. Данная переменная продемонстрировала наилучшую предсказательную способность (Лямбда Уилкса 0,968, p=0,011, площадь под кривой при проведении ROC-анализа составила 0,59 (0,51-0,67), p=0,032). Таким образом, у пациенток, получавших комбинированную поддержку ЛФ, при отсутствии генотипов риска частота наступления беременности возрастала до 63% и была существенно выше по сравнению со стандартной поддержкой, а среди пациенток, получавших а-ГнРГ при значении переменной, равном 1 (т.е. при наличии хотя бы одного генотипа риска), вероятность наступления беременности составляла 39,3% и была сопоставима со стандартной поддержкой и 35,7% (фиг. 1).A multivariate discriminant analysis of the distribution of the LHCGR: 872 A> G, PGR: 38 T> C genotypes, as well as their combinations, was performed. As a result of the discriminant analysis, a prognostic model of the failure of the ART program was obtained for various tactics of LF management depending on the combinations of risk genotypes (PGR 38C / C or PGR 38T / C) and LHCGR: 872T / C. As a predictor of failure, we used a variable taking the value 1 - if the patient’s genotype contained at least one risk genotype for the indicated markers, and 2 if both risk genotypes were present. In the absence of genetic markers of ART failure, the variable assumed the
Фиг.1 - Прогностическая модель эффективности программ ЭКО стандартном и комбинированном режиме поддержки лютеиновой фазы.Figure 1 - Predictive model of the effectiveness of IVF programs in the standard and combined mode of support for the luteal phase.
* p<0,05 по сравнению комбинированной поддержки ЛФ с группой со стандартной поддержкой ЛФ при отсутствии генотипа риска (критерий Фишера).* p <0.05 compared with combined LF support with a group with standard LF support in the absence of a risk genotype (Fisher test).
** p<0,05 по сравнению комбинированной поддержки ЛФ при наличии генотипа риска с комбинированной поддержкой при отсутствии генотипа риска (критерий Фишера).** p <0.05 compared with combined LF support in the presence of a risk genotype with combined support in the absence of a risk genotype (Fisher criterion).
Пример 1Example 1
Персонифицированное назначение стандартного или комбинированного режимов поддержки лютеиновой фазы в программе ЭКО у пациентки X 29 лет, обратившейся для проведения программы ЭКО и ПЭ по поводу трубно-перитонеального фактора бесплодия. Из анамнеза: беременностей 0, в 2013 г. проведена лапароскопия, двухсторонняя тубэктомия по поводу гидросальпинксов. Данная попытка ЭКО первая.The personalized appointment of the standard or combined modes of support for the luteal phase in the IVF program for a patient X 29 years old who applied for an IVF and PE program for tubal-peritoneal infertility factor. From the anamnesis:
Результат генотипирования пациентки X:Genotyping result of patient X:
LHCGR 872 A>G (Asn291Ser) [rs12470652] - Т/СLHCGR 872 A> G (Asn291Ser) [rs12470652] - T / C
PGR: 38 T>C [rs484389]-C/CPGR: 38 T> C [rs484389] -C / C
Пациентка направлена в программу ЭКО, для поддержки ЛФ назначена стандартная поддержка ЛФ, в результате проведенной программы ЭКО наступила беременность.The patient was referred to the IVF program, standard LF support was assigned to support the LF, as a result of the IVF program, she became pregnant.
Пример 2Example 2
Персонифицированное назначение стандартного или комбинированного режимов поддержки лютеиновой фазы в программе ЭКО у пациентки А 34 лет, обратившейся для проведения программы ЭКО и ПЭ по поводу трубно-перитонеального фактора бесплодия. Из анамнеза: беременностей 0, по данным гистеросальпингографии от 2012 г. - маточные трубы не проходимы, в 2014 программа ЭКО, беременность не наступила. Данная попытка ЭКО вторая.The personalized appointment of the standard or combined modes of luteal phase support in the IVF program for patient A, 34 years old, who applied for the IVF and PE program for tubal peritoneal infertility factor. From the anamnesis: 0 pregnancies, according to hysterosalpingography from 2012 - fallopian tubes are not passable, in 2014 IVF program, pregnancy did not occur. This IVF attempt is the second.
Результат генотипирования пациентки X:Genotyping result of patient X:
LHCGR 872 A>G (Asn291Ser) [rs12470652] - Т/ТLHCGR 872 A> G (Asn291Ser) [rs12470652] - T / T
PGR: 38 T>C [rs484389]-T/TPGR: 38 T> C [rs484389] -T / T
Пациентка направлена в программу ЭКО, для поддержки ЛФ назначена комбинированная поддержка ЛФ, в результате проведенной программы ЭКО наступила беременность.The patient was referred to the IVF program, combined support of the LF was assigned to support the LF, as a result of the IVF program, she became pregnant.
Список литературыBibliography
1. Beckers NG, Macklon NS, Eijkemans MJ, Ludwig M, Felberbaum RE, Diedrich K, Bustion S, Loumaye E, Fauser ВС. Nonsupplemented luteal phase characteristics after the administration of recombinant human chorionic gonadotropin, recombinant luteinizing hormone, or gonadotropin-releasing hormone (GnRH) agonist to induce final oocyte maturation in in vitro fertilization patients after ovarian stimulation with recombinant follicle-stimulating hormone and GnRH antagonist cotreatment. J Clin Endocrinol Metab. - 2003. - Vol. 88. - P. 4186-1192.1. Beckers NG, Macklon NS, Eijkemans MJ, Ludwig M, Felberbaum RE, Diedrich K, Bustion S, Loumaye E, Fauser BC. Nonsupplemented luteal phase characteristics after the administration of recombinant human chorionic gonadotropin, recombinant luteinizing hormone, or gonadotropin-releasing hormone (GnRH) agonist to induce final oocyte maturation in in vitro fertilization patients after ovarian stimulation with recombinant follicle-stimulating hormone. J Clin Endocrinol Metab. - 2003. - Vol. 88. - P. 4186-1192.
2. Kerin JF, Broom TJ, Ralph MM, Edmonds DK, Warnes GM, Jeffrey R, Crocker JM et al. Human luteal phase function following oocyte aspiration from the immediately preovular graafian follicle of spontaneous ovular cycles. Br J Obstet Gynaecol - 1981- Vol. 88. - P. 1021-1028.2. Kerin JF, Broom TJ, Ralph MM, Edmonds DK, Warnes GM, Jeffrey R, Crocker JM et al. Human luteal phase function following oocyte aspiration from the immediately preovular graafian follicle of spontaneous ovular cycles. Br J Obstet Gynaecol - 1981- Vol. 88. - P. 1021-1028.
3. Kolibianakis EM, Devroey P. The luteal phase after ovarian stimulation. Reprod Biomed Online - 2002a- Vol.5. - P.26-35.3. Kolibianakis EM, Devroey P. The luteal phase after ovarian stimulation. Reprod Biomed Online - 2002- Vol. 5. - P.26-35.
4. Michelle van der Lindenl, Karen Buckingham, Cindy Farquhar, Jan AM Kremer, Mostafa Metwally. Editorial Group: Cochrane Menstrual Disorders and Subfertility Group Published Online: 5 OCT 2011 Assessed as up-to-date: 25 MAY 2011.4. Michelle van der Lindenl, Karen Buckingham, Cindy Farquhar, Jan AM Kremer, Mostafa Metwally. Editorial Group: Cochrane Menstrual Disorders and Subfertility Group Published Online: 5 OCT 2011 Assessed as up-to-date: May 25, 2011.
5. Ludwig M, Finas A, Katalinic A, Strik D, Kowalcek I, Schwartz P et al. Prospective, randomized study to evaluate the success rates using hCG, vaginal progesterone or a combination of both for luteal phase support. Acta Obstetricia et Gynecologica Scandinavica - 2001 - Vol. 80. - P. 574-82.5. Ludwig M, Finas A, Katalinic A, Strik D, Kowalcek I, Schwartz P et al. Prospective, randomized study to evaluate the success rates using hCG, vaginal progesterone or a combination of both for luteal phase support. Acta Obstetricia et Gynecologica Scandinavica - 2001 - Vol. 80. - P. 574-82.
6. Tesarik J, Hazout A, Mendoza-Tesarik R, Mendoza N, Mendoza C. Beneficial effect of luteal-phase GnRH agonist administration on embryo implantation after ICSI in both GnRH agonist- and antagonist-treated ovarian stimulation cycles. Hum Reprod - 2006. - Vol. 21. - P. 2572-2579.6. Tesarik J, Hazout A, Mendoza-Tesarik R, Mendoza N, Mendoza C. Beneficial effect of luteal-phase GnRH agonist administration on embryo implantation after ICSI in both GnRH agonist- and antagonist-treated ovarian stimulation cycles. Hum Reprod - 2006 .-- Vol. 21. - P. 2572-2579.
7. Zafardoust S, Jeddi-Tehrani M, Akhondi MM, Sadeghi MR, Kamali K, Mokhtar S, et al. Effect of Administration of Single Dose GnRH Agonist in Luteal Phase on Outcome of ICSI-ET Cycles in Women with Previous History of IVF/ICSI Failure: A Randomized.7. Zafardoust S, Jeddi-Tehrani M, Akhondi MM, Sadeghi MR, Kamali K, Mokhtar S, et al. Effect of Administration of Single Dose GnRH Agonist in Luteal Phase on Outcome of ICSI-ET Cycles in Women with Previous History of IVF / ICSI Failure: A Randomized.
8. Razieh DF, Maryam AR, Nasim T: Beneficial effect of luteal-phase gonadotropin-releasing hormone agonist administration on implantation rate after intracytoplasmic sperm injection. Taiwan J Obstet Gynecol - 2009- Vol. 48. - P. 245-248.8. Razieh DF, Maryam AR, Nasim T: Beneficial effect of luteal-phase gonadotropin-releasing hormone agonist administration on implantation rate after intracytoplasmic sperm injection. Taiwan J Obstet Gynecol - 2009- Vol. 48. - P. 245-248.
9. Cramer DW, Hornstein MD, McShane P, Douglas Powers R, Lescault PJ, VitonisAF, De VivoI. Human progesterone receptor polymorphisms and implantation failure during in vitro fertilization American Journal of Obstetrics and Gynecology. - 2003 - Vol. 189. - №4. - P. 1085-1092.9. Cramer DW, Hornstein MD, McShane P, Douglas Powers R, Lescault PJ, VitonisAF, De VivoI. Human progesterone receptor polymorphisms and implantation failure during in vitro fertilization American Journal of Obstetrics and Gynecology. - 2003 - Vol. 189. - No. 4. - P. 1085-1092.
10. Кофиади И.А., Ребриков Д.В. Методы детекции однонуклеотидных полиморфизмов: аллель-специфичная ПЦР и гибридизация с олигонуклеотидной пробой // Генетика 2006 - Т. 42 (1) С. 22-32.10. Kofiadi I.A., Rebrikov D.V. Methods for the detection of single nucleotide polymorphisms: allele-specific PCR and hybridization with an oligonucleotide probe // Genetics 2006 - V. 42 (1) P. 22-32.
11. Lyon Е. Mutation detection using fluorescent hybridization probes and melting curve analysis // Expert Rev Mol Diagn. - 2001. - Vol. 1. - №1. - P. 92-101.11. Lyon E. Mutation detection using fluorescent hybridization probes and melting curve analysis // Expert Rev Mol Diagn. - 2001. - Vol. 1. - No. 1. - P. 92-101.
12. Элдер К., Дэйл Б. Экстракорпоральное оплодотворение / М.: МЕДпресс-информ, 2008. - 276 с.12. Elder K., Dale B. In Vitro Fertilization / M .: MEDpress-inform, 2008. - 276 p.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016125835A RU2617047C1 (en) | 2016-06-29 | 2016-06-29 | Method of personified administration of standard or combined luteal phase maintenance modes in ivf program using molecular-genetic markers |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016125835A RU2617047C1 (en) | 2016-06-29 | 2016-06-29 | Method of personified administration of standard or combined luteal phase maintenance modes in ivf program using molecular-genetic markers |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2617047C1 true RU2617047C1 (en) | 2017-04-19 |
Family
ID=58642853
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2016125835A RU2617047C1 (en) | 2016-06-29 | 2016-06-29 | Method of personified administration of standard or combined luteal phase maintenance modes in ivf program using molecular-genetic markers |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2617047C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT202200006443A1 (en) * | 2022-03-31 | 2023-10-01 | Carlo Alviggi | METHOD FOR THE DETECTION AND PHARMACOGENOMIC INTERPRETATION OF THE ALLELIC VARIANT OF THE LUTENIZING HORMONE RECEPTOR IN POSITION 291 (RS 12470652), IN ASSOCIATION WITH OTHER SPECIFIC ALLELIC VARIANTS OF THE GONADOTROPINS AND THEIR RECEPTORS, IN WOMEN CANDIDATE FOR OVARIAN STIMULATION . |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2273031C1 (en) * | 2004-07-09 | 2006-03-27 | Ростовский НИИ акушерства и педиатрии МЗ РФ | Method for predicting ecf and et program results |
-
2016
- 2016-06-29 RU RU2016125835A patent/RU2617047C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2273031C1 (en) * | 2004-07-09 | 2006-03-27 | Ростовский НИИ акушерства и педиатрии МЗ РФ | Method for predicting ecf and et program results |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| КИНДАРОВА Л.Б. и др. Поддержка периода после переноса эмбрионов в программе ЭКО и ПЭ. Акушерство и гинекология. 2003; N4. Информация из сайта bono-esse.ru [Найдено 21.03.2017] [он-лайн]. Найдено из Интернет: URL: http://bono-esse.ru/blizzard/Gyn/ECO/aig_03.htmlWU Y.G. et al. Aging-related premature luteinization of granulosa cells is avoided by early oocyte retrieval. J Endocrinol. 2015 Sep; 226(3): 167-180. Epub 2015 Aug 11 [Найдено 21.03.2017] [он-лайн]. Найдено из Интернет: URL: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/26264981GUZMAN L. et al. Human antral follicles <6 mm: a comparison between in vivo maturation and in vitro maturation in non-hCG primed cycles using cumulus cell gene expression. Mol Hum Reprod. 2013 Jan; 19(1): 7-16. Epub 2012 Sep 6 [Найдено 21.03.2017] [он-лайн]. Найдено из Интернет: URL: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22956770 * |
| КИНДАРОВА Л.Б. и др. Поддержка периода после переноса эмбрионов в программе ЭКО и ПЭ. Акушерство и гинекология. 2003; N4. Информация из сайта bono-esse.ru [Найдено 21.03.2017] [он-лайн]. Найдено из Интернет: URL: http://bono-esse.ru/blizzard/Gyn/ECO/aig_03.htmlWU Y.G. et al. Aging-related premature luteinization of granulosa cells is avoided by early oocyte retrieval. J Endocrinol. 2015 Sep; 226(3): 167-180. Epub 2015 Aug 11 [Найдено 21.03.2017] [он-лайн]. Найдено из Интернет: URL: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/26264981GUZMAN L. et al. Human antral follicles <6 mm: a comparison between in vivo maturation and in vitro maturation in non-hCG primed cycles using cumulus cell gene expression. Mol Hum Reprod. 2013 Jan; 19(1): 7-16. Epub 2012 Sep 6 [Найдено 21.03.2017] [он-лайн]. Найдено из Интернет: URL: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22956770RU 2273031 C1, 27.03.2006. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT202200006443A1 (en) * | 2022-03-31 | 2023-10-01 | Carlo Alviggi | METHOD FOR THE DETECTION AND PHARMACOGENOMIC INTERPRETATION OF THE ALLELIC VARIANT OF THE LUTENIZING HORMONE RECEPTOR IN POSITION 291 (RS 12470652), IN ASSOCIATION WITH OTHER SPECIFIC ALLELIC VARIANTS OF THE GONADOTROPINS AND THEIR RECEPTORS, IN WOMEN CANDIDATE FOR OVARIAN STIMULATION . |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US10731218B2 (en) | Methods employing circulating DNA and miRNA as biomarkers for female infertility | |
| Ubaldi et al. | Preimplantation genetic diagnosis for aneuploidy testing in women older than 44 years: a multicenter experience | |
| Scalici et al. | Circulating microRNAs in follicular fluid, powerful tools to explore in vitro fertilization process | |
| Liu et al. | Single-cell analysis of differences in transcriptomic profiles of oocytes and cumulus cells at GV, MI, MII stages from PCOS patients | |
| Guzman et al. | The number of biopsied trophectoderm cells may affect pregnancy outcomes | |
| Xu et al. | The effect of chromosomal polymorphisms on the outcomes of fresh IVF/ICSI–ET cycles in a Chinese population | |
| Anagnostou et al. | ESR1, ESR2 and FSH receptor gene polymorphisms in combination: a useful genetic tool for the prediction of poor responders | |
| Li et al. | Chromosomal polymorphisms associated with reproductive outcomes after IVF-ET | |
| Trevisan et al. | Effects of a polymorphism in the promoter region of the follicle-stimulating hormone subunit beta (FSHB) gene on female reproductive outcomes | |
| Motawi et al. | The role of gene polymorphisms and AMH level in prediction of poor ovarian response in Egyptian women undergoing IVF procedure | |
| WO2014125129A1 (en) | Marker genes for oocyte competence | |
| Najmutdinova et al. | STUDY OF THE ROLE OF POLYMORPHIC VARIANTS OF THE Arg72Pro LOCUS OF THE TP53 GENE IN THE DEVELOPMENT OF CERVICAL INTRAEPITHELIAL NEOPLASIA IN THE FEMALE POPULATION OF TASHKENT | |
| Karagiorga et al. | Single nucleotide polymorphisms in the Anti-Müllerian hormone (AMH Ile 49 Ser) and Anti-Müllerian hormone type II receptor (AMHRII− 482 A> G) as genetic markers in assisted reproduction technology | |
| Ramaraju et al. | Role of Lh polymorphisms and r-hLh supplementation in GnRh agonist treated ART cycles: a cross sectional study | |
| Deng et al. | Preimplantation genetic testing for aneuploidy in poor ovarian responders with four or fewer oocytes retrieved | |
| Tong et al. | Comparison of day 5 blastocyst with day 6 blastocyst: evidence from NGS-based PGT-A results | |
| Wu et al. | Controlled ovarian stimulation protocols alter endometrial histomorphology and gene expression profiles | |
| WO2013013303A1 (en) | Ovarian markers of follicular maturity and uses thereof | |
| Weizman et al. | Triggering method in assisted reproduction alters the cumulus cell transcriptome | |
| Won et al. | Pre-implantation genetic diagnosis and pre-implantation genetic screening: two years experience at a single center | |
| RU2617047C1 (en) | Method of personified administration of standard or combined luteal phase maintenance modes in ivf program using molecular-genetic markers | |
| Christofolini et al. | Promoter‐817C> T Variant of B Lymphocyte Stimulator Gene (BLyS) and Susceptibility to Endometriosis‐Related Infertility and Idiopathic Infertility in Brazilian Population | |
| Nakano et al. | Analysis of clinical outcomes and meiotic segregation modes following preimplantation genetic testing for structural rearrangements using aCGH/NGS in couples with balanced chromosome rearrangement | |
| Ahmed et al. | Association between FSHR and ESR1 gene variants and ovarian response to gonadotropin in Egyptian women undergoing ICSI treatment | |
| Dai et al. | Correlation of human telomerase reverse transcriptase single nucleotide polymorphisms with in vitro fertilisation outcomes |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20180630 |