RU2614267C1 - Method for determining toxicity of chemicals generating active oxygen forms - Google Patents

Method for determining toxicity of chemicals generating active oxygen forms Download PDF

Info

Publication number
RU2614267C1
RU2614267C1 RU2016100246A RU2016100246A RU2614267C1 RU 2614267 C1 RU2614267 C1 RU 2614267C1 RU 2016100246 A RU2016100246 A RU 2016100246A RU 2016100246 A RU2016100246 A RU 2016100246A RU 2614267 C1 RU2614267 C1 RU 2614267C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
control
culture
lux
luminescence intensity
test substance
Prior art date
Application number
RU2016100246A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Владимир Анатольевич Чистяков
Евгения Валерьевна Празднова
Мария Сергеевна Мазанко
Тимур Викторович Белик
Виктор Константинович Чмыхало
Анжелика Борисовна Брень
Original Assignee
федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Южный федеральный университет"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Южный федеральный университет" filed Critical федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Южный федеральный университет"
Priority to RU2016100246A priority Critical patent/RU2614267C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2614267C1 publication Critical patent/RU2614267C1/en

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/66—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving luciferase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

FIELD: chemistry.
SUBSTANCE: method provides adding riboflavin to the final concentration of 1⋅10-5 mg/ml - 1⋅10-3 mg/ml into the Escherichia coli K12 MG1655 culture with the pColD-lux plasmid, in which the bioluminescence lux operon of marine photobacteria Photobacterium leiognathi, Vibrio fischeri or Photorabdus luminescens is placed under the control of the pColD promoter. Adding the test substance and determining the luminescence intensity of the resulting suspension and the control are carried out. The damaging effect of the test substance is estimated by the suspension luminescence intensity deviation from the control.
EFFECT: increasing the induction factor.
4 cl, 1 dwg, 2 ex

Description

Изобретение относится к определению токсичности химических веществ, способных за счет генерации активных форм кислорода оказывать негативное воздействие на клетки, приводящее к повреждению генетической информации, в результате которого микрофлора в организме человека (например, принимающего содержащие данные вещества лекарства), может в результате действия их подпороговых концентраций приобрести ряд мутаций, повышающих ее патогенность либо увеличивающих резистентность. Изобретение может быть использовано для оценки побочных эффектов лекарственных препаратов и других химических веществ.The invention relates to the determination of the toxicity of chemicals capable of negatively affecting the cells due to the generation of reactive oxygen species, leading to damage to genetic information, as a result of which microflora in the human body (for example, taking drugs containing these substances) can be subliminal concentrations acquire a number of mutations that increase its pathogenicity or increase resistance. The invention can be used to assess the side effects of drugs and other chemicals.

Увеличение внутриклеточной концентрации активных форм кислорода (АФК) выше уровня антиоксидантной защиты вызывает «окислительный стресс», который сопровождается негативными для жизнедеятельности клеток процессами, такими как перекисное окисление липидов, окислительная модификация белков и нуклеиновых кислот (Zenkov N.K., Lankin V.Z., Menshchikova E.B. 2001. Oxidativestress: biochemical and pathophysiological aspects. Moscow: Int. Acad. Publ. Comp., Science, Interperiodica. 343 P.).An increase in the intracellular concentration of reactive oxygen species (ROS) above the level of antioxidant protection causes “oxidative stress”, which is accompanied by processes negative for cell activity, such as lipid peroxidation, oxidative modification of proteins and nucleic acids (Zenkov NK, Lankin VZ, Menshchikova EB 2001. Oxidativestress: biochemical and pathophysiological aspects. Moscow: Int. Acad. Publ. Comp., Science, Interperiodica. 343 P.).

Окислительные повреждения ДНК связаны с такими процессами, как мутагенез, канцерогенез, старение и ряд связанных с ним болезней пожилого возраста. Значительная часть (60-80%) повреждений ДНК, вызванных радиацией, также формируется за счет АФК, образованных при радиолизе воды. Повреждения молекул ДНК являются одной из основных причин пострадиационной гибели животных (Гудков СВ., Брусков В.И. Гуанозин и инозин (рибоксин). Антиоксидантныеи радиозащитные свойства.

Figure 00000001
Lambert Academic Pulishing. 2011).Oxidative damage to DNA is associated with processes such as mutagenesis, carcinogenesis, aging, and a number of related elderly diseases. A significant part (60-80%) of DNA damage caused by radiation is also formed due to ROS formed during the radiolysis of water. Damage to DNA molecules is one of the main causes of post-radiation death of animals (Gudkov SV., Bruskov VI. Guanozin and inosine (riboxin). Antioxidant and radioprotective properties.
Figure 00000001
Lambert Academic Pulishing. 2011).

Известны способы определения токсичности химических веществ, вызывающих усиление образования АФК, на основе биосенсоров (культур клеток бактерий, в которых присутствуют гены, обеспечивающие свечение бактериальной клетки), свечение которых усиливается или подавляется под действием определенных химических веществ (Development of human cell biosensor system for genotoxicity detection based on DNA damage-induced gene expression. Zager V, Cemazar M, Hreljac I, Lah TT, Sersa G, Filipic M. RadiolOncol. 2010 Mar; 44(1):42-51; патент RU №2179581, МПК C12Q 1/02, C12Q 1/66, 2002 г.; патент RU №2297450, МПК C12N 1/21, 2007 г.; патент RU №2355760, МПК C12N 1/21, 2009 г.; патент RU №2179581, МПК C12Q 1/02, 2002 г.).Known methods for determining the toxicity of chemicals that cause increased formation of ROS, based on biosensors (cultures of bacterial cells in which there are genes that provide luminescence of a bacterial cell), the luminescence of which is enhanced or suppressed by certain chemicals (Development of human cell biosensor system for genotoxicity detection based on DNA damage-induced gene expression. Zager V, Cemazar M, Hreljac I, Lah TT, Sersa G, Filipic M. RadiolOncol. 2010 Mar; 44 (1): 42-51; patent RU No. 2179581, IPC C12Q 1 / 02, C12Q 1/66, 2002; RU patent No. 2297450, IPC C12N 1/21, 2007; RU patent No. 2355760, IPC C12N 1/21, 2009; RU patent No. 217958 1, IPC C12Q 1/02, 2002).

Наиболее близким по выполнению является способ определения генотоксичности химических веществ, включающий инкубацию тестируемого химического вещества с рекомбинантным штаммом Е. coli, несущим плазмиду, в котором lux оперон находится под контролем SOS-lux-промотора, измерение интенсивности биолюминесценции контрольных культур и содержащих тестируемое химическое вещество и определение генотоксичности по фактору индукции I=Lc/Lk, где I - фактор индукции; Lc - интенсивность свечения суспензии SOS-lux штамма, содержащего тестируемое химическое вещество; Lк - интенсивность свечения контрольной суспензии SOS-lux штамма (Анализ SOS-ответа клеток E. coli с помощью бактериальной люминесценции. Всесоюз. конф. "Генетические исследования действия биологических, химических и физических факторов окружающей среды", по проблеме "Человек и Биосфера ", Киев, 1988, с. 95).The closest to implementation is a method for determining the genotoxicity of chemicals, including incubating the test chemical with a recombinant E. coli strain carrying a plasmid in which the lux operon is controlled by the SOS-lux promoter, measuring the bioluminescence intensity of the control cultures and containing the test chemical and determination of genotoxicity by induction factor I = Lc / Lk, where I is the induction factor; Lc is the luminous intensity of the suspension of the SOS-lux strain containing the test chemical; Lк is the luminescence intensity of the control suspension of the SOS-lux strain (Analysis of the SOS response of E. coli cells using bacterial luminescence. All-Union conference. Genetic studies of the action of biological, chemical and physical environmental factors, on the problem "Man and the Biosphere", Kiev, 1988, p. 95).

Недостатком данного способа является недостаточно высокий фактор индукции, (усиление биолюминесценции тестируемой токсичной пробы по сравнению с биолюминесценцией контрольной пробы), а также неспецифичность в отношении генотоксического действия активных форм кислорода, которое является наиболее опасным проявлением токсичности.The disadvantage of this method is the insufficiently high induction factor (increased bioluminescence of the tested toxic sample compared to the bioluminescence of the control sample), as well as nonspecificity with respect to the genotoxic effect of reactive oxygen species, which is the most dangerous manifestation of toxicity.

Техническим результатом изобретения является увеличение фактора индукции.The technical result of the invention is to increase the induction factor.

Технический результат достигается тем, что в культуру Escherichia coli К12 MG1655, содержащую плазмиду PkatG-lux, в которой lux оперон биолюминесценции морских фотобактерий Photobacterium leiognathi, Vibrio fischeri или Photorabdus luminescens поставлен под контроль промотора PkatG (выделенного из регулона, отвечающего за реакцию клетки на активные формы кислорода), добавляют рибофлавин до конечной концентрации 1⋅10-5 мг/мл - 1⋅10-3 мг/мл, добавляют анализируемое вещество в концентрации, не подавляющей жизнедеятельность Escherichia coli, определяют интенсивность люминесценции полученной суспензии и контроля, а о повреждающем действии исследуемого вещества судят по отклонению интенсивности люминесценции суспензии от контроля (повреждающее действие отсутствует, если нет отклонения от контроля).The technical result is achieved by the fact that the Escherichia coli K12 MG1655 culture containing the PkatG-lux plasmid, in which the lux bioluminescence operon of marine photobacteria Photobacterium leiognathi, Vibrio fischeri or Photorabdus luminescens, is placed under the control of the PkatG promoter (which is active from the cell oxygen form), riboflavin was added to a final concentration 1⋅10 -5 mg / ml - 1⋅10 -3 mg / ml, was added at a concentration of analyte, not suppressing life activity Escherichia coli, determined luminescence intensity resulting suspension and, control and damaging effect of the test substance is judged by the deviation of luminescence intensity suspensions from control (no damaging effect, if there is no deviation from the control).

Культуру предварительно выращивают предпочтительно на жидкой питательной полноценной среде Луриа-Бертани.The culture is pre-grown preferably in a full-bodied liquid nutrient medium Luria-Bertani.

После выращивания плотность культуры доводят предпочтительно до 0,01-0,1 единицы Мак-Фарланда и концентрации 3⋅107-3⋅106 клеток/мл.After growing, the culture density is preferably adjusted to 0.01-0.1 McFarland units and a concentration of 3 × 10 7 -3 × 10 6 cells / ml.

Контроль содержит в качестве вещества сравнения (контрольного вещества) предпочтительно деионизированную воду в эквивалентном объеме.The control contains, as a reference substance (control substance), preferably deionized water in an equivalent volume.

Отличием предлагаемого способа является добавление в культуру клеток Е. coli, несущей плазмиду PkatG-lux, в которой lux оперон поставлен под контроль промотора PkatG, рибофлавина в концентрации 1⋅10-5 мг/мл - 1⋅10-3 мг/мл.The difference of the proposed method is to add a cell culture of E. coli, a plasmid carrying lux-PkatG, wherein the lux operon is placed under the control of a promoter PkatG, riboflavin concentration 1⋅10 -5 mg / ml - 1⋅10 -3 mg / ml.

Рибофлавин известен в качестве кофактора фермента люциферазы, монооксигеназы КФ 144413 (J.W. Hastings. 1983 "Biological diversity, chemical mechanisms, and the evolutionary origins of bioluminescent systems." Journal of Molecular Evolution, v. 19: p. 309-321). Однако неизвестен характер влияния рибофлавина (усиление или ослабление люминесценции) и неизвестны пределы концентраций, способствующие увеличению фактора индукции в отношении бактерий Escherichia coli 12К MG1655, содержащей плазмиду PkatG-lux, с опероном Photobacterium leiognathi, Vibriofischeri или Photorabdusluminescens.Riboflavin is known as a cofactor of the enzyme luciferase, monooxygenase CF 144413 (J.W. Hastings. 1983 "Biological diversity, chemical mechanisms, and the evolutionary origins of bioluminescent systems." Journal of Molecular Evolution, v. 19: p. 309-321). However, the nature of the effect of riboflavin (increase or decrease in luminescence) is unknown and the concentration limits promoting an increase in the induction factor for Escherichia coli 12K MG1655 bacteria containing the PkatG-lux plasmid with the operon Photobacterium leiognathi, Vibriofischeri, or Photorabdusluminescens are unknown.

Ниже приведены примеры осуществления способа.The following are examples of the method.

Пример 1 Example 1

Определение токсичности перекиси водорода по способу прототипаDetermination of toxicity of hydrogen peroxide by the method of the prototype

В качестве тестируемого вещества взята перекись водорода концентрацией 10-3 М. Культуру Е. coli выращивают на среде LBP (пептон - 10 г, дрожжевой экстракт - 5 г, хлористый натрий - 10 г на 1 л раствора; pH 7.0) в присутствии 50 мкг/мл ампициллина. В 50 мл среды вносят 0,1 мл ночной культуры Е. coli С 600 и инкубируют в термостате в течение одного часа при t=37°C. Затем добавляют среду LBP до достижения оптической плотности культуры 0,1 (550 нм). Аликвоты этой культуры по 1 мл переносят в стерильные пробирки и добавляют в них по 10 мкл тестируемого химического вещества. Содержимое пробирок тщательно перемешивают. Пробирки помещают на 1 час в термостат при t=37°C. В процессе инкубации пробирки несколько раз встряхивают.Hydrogen peroxide with a concentration of 10 -3 M was taken as a test substance. The E. coli culture was grown on LBP medium (peptone - 10 g, yeast extract - 5 g, sodium chloride - 10 g per 1 liter of solution; pH 7.0) in the presence of 50 μg / ml ampicillin. In 50 ml of medium, 0.1 ml of night culture of E. coli C 600 is added and incubated in an incubator for one hour at t = 37 ° C. Then add LBP medium to achieve an optical density of culture of 0.1 (550 nm). 1 ml aliquots of this culture are transferred to sterile tubes and 10 μl of the test chemical are added to them. The contents of the tubes are thoroughly mixed. The tubes are placed for 1 hour in a thermostat at t = 37 ° C. During the incubation, the tubes are shaken several times.

По окончании инкубации культуры охлаждают до комнатной температуры. На люминометре LM-01T (Immunotech, Чехия), измеряют интенсивности биолюминесценции контрольных культур и содержащих анализируемое химическое вещество. Получают следующие данные. Интенсивность люминесценции для перекиси водорода составляет 14680,3 у.е., для контроля 1366,7 у.е. То есть фактор индукции равен 10,7.At the end of the incubation, the cultures are cooled to room temperature. On the luminometer LM-01T (Immunotech, Czech Republic), the bioluminescence intensities of the control cultures and containing the analyzed chemical substance are measured. Receive the following data. The luminescence intensity for hydrogen peroxide is 14680.3 cu, for control 1366.7 cu That is, the induction factor is 10.7.

Пример 2Example 2

В качестве тестируемого вещества взята перекись водорода.Hydrogen peroxide was taken as the test substance.

Культуру клеток Е. coli К12 MG1655 с плазмидой PkatG-lux, в которой оперон биолюминесценции морских фотобактерий Photobacterium leiognathi поставлен под контроль промотора PkatG, растят на жидкой питательной полноценной среде Луриа-Бертани (Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование. // -М.: Мир, 1984, 480 стр.) при постоянной аэрации на круговой качалке при 37°C. В среду добавляют антибиотик ампициллин (100 мкг/мл).The cell culture of E. coli K12 MG1655 with the PkatG-lux plasmid, in which the bioluminescence operon of marine photobacteria Photobacterium leiognathi is placed under the control of the PkatG promoter, is grown on Luria-Bertani liquid nutrient medium (Maniatis T., Fritsch E., Sambruck J. Methods. Engineering, Molecular Cloning. // -M.: Mir, 1984, 480 p.) with continuous aeration on a circular rocking chair at 37 ° C. Ampicillin antibiotic (100 μg / ml) is added to the medium.

Ночную культуру разбавляют свежей средой до плотности 0,01 единица Мак-Фарланда (концентрация 3⋅107 клеток/мл), и добавляют рибофлавин до конечной концентрации 1⋅10-4 мг/мл. Аликвоты этой культуры (по 90 мкл) переносят в ячейки (стрипы) планшета и добавляют в них по 10 мкл перекиси водорода концентрацией 10-3 М. Указанная концентрация подобрана в соответствии с предварительно исследованной зависимостью доза-эффект, согласно которой данная концентрация является максимально эффективной. В контрольные ячейки добавляют 10 мкл деионизированной воды.The overnight culture was diluted with fresh medium to a density of 0.01 McFarland unit (concentration of 3 × 10 7 cells / ml), and riboflavin was added to a final concentration of 1 × 10 -4 mg / ml. Aliquots of this culture (90 μl each) are transferred to the cells (strips) of the plate and 10 μl of hydrogen peroxide with a concentration of 10 -3 M are added to them. The indicated concentration is selected in accordance with the previously studied dose-response relationship, according to which this concentration is most effective . 10 μl of deionized water was added to control wells.

После обработки планшет с пробами помещают в люминометр, инкубируют при 30°C и измеряют интенсивность биолюминесценции (Люминесценцию измеряют на люминометре LM-01T (Immunotech, Чехия). Интенсивность люминесценции для пробы с перекисью водорода составляет 27296.3 у.е., а для контроля 1822,7 у.е. То есть фактор индукции как их соотношение равен 14,98. Интенсивность люминесценции пробы с перекисью водорода без добавления рибофлавина (положительный контроль) составляет 18114,1 у.е. То есть фактор индукции равен 9,94.After processing, the sample plate is placed in a luminometer, incubated at 30 ° C and the bioluminescence intensity is measured (Luminescence is measured on an LM-01T luminometer (Immunotech, Czech Republic). The luminescence intensity for a sample with hydrogen peroxide is 27296.3 cu, and for control 1822 , 7 cu That is, the induction factor as their ratio is 14.98. The luminescence intensity of the sample with hydrogen peroxide without the addition of riboflavin (positive control) is 18114.1 cu That is, the induction factor is 9.94.

Аналогично ночную культуру разбавляют свежей средой до плотности 0,1 единица Мак-Фарланда (концентрация 3⋅106 клеток/мл).Similarly, night culture is diluted with fresh medium to a density of 0.1 McFarland unit (concentration of 3 × 10 6 cells / ml).

Аналогично в качестве lux оперона используют оперон биолюминесценции морских фотобактерий Vibriofischeri и Photorabdusluminescens.Similarly, the bioluminescence operon of marine photobacteria Vibriofischeri and Photorabdusluminescens is used as a lux operon.

Результаты по показателям интенсивности свечения аналогичны.The results in terms of luminous intensity are similar.

На рис. 1 приведены значения фактора индукции анализируемого вещества - перекиси водорода концентрацией 10-3 М при различных концентрациях рибофлавина и без добавления рибофлавина к культуре. Как видно из рис. 1, при заявляемых концентрациях (1⋅10-5-1⋅10-3 мг/мл) фактор индукции превышает таковой без добавления рибофлавина. То есть добавление рибофлавина в концентрациях 1⋅10-5-1⋅10-3 мг/мл позволяет увеличить интенсивность свечения анализируемой пробы.In fig. 1 shows the values of the induction factor of the analyte - hydrogen peroxide with a concentration of 10 -3 M at various concentrations of riboflavin and without adding riboflavin to the culture. As can be seen from fig. 1, at the claimed concentrations (1⋅10 -5 -1⋅10 -3 mg / ml), the induction factor exceeds that without the addition of riboflavin. That is, the addition of riboflavin in concentrations of 1⋅10 -5 -1⋅10 -3 mg / ml allows you to increase the glow intensity of the analyzed sample.

Таким образом, способ позволяет увеличить фактор индукции по сравнению со способом прототипа (для которого фактор индукции в соответствии с примером 1 составляет 10,7) и может быть использован для определения токсичности химических веществ, генерирующих активные формы кислорода (в частности, перекиси водорода).Thus, the method allows to increase the induction factor compared with the prototype method (for which the induction factor in accordance with example 1 is 10.7) and can be used to determine the toxicity of chemicals that generate reactive oxygen species (in particular, hydrogen peroxide).

Claims (4)

1. Способ определения токсичности химических веществ, генерирующих активные формы кислорода, характеризующийся тем, что в культуру Escherichia col К12 MG1655, содержащую плазмиду PkatG-lux, в которой lux оперон биолюминесценции морских фотобактерий Photobacterium leiognathi, Vibrio fischeri или Photorabdus luminescens поставлен под контроль промотора PkatG, добавляют рибофлавин до конечной концентрации 1⋅10-3 мг/мл - 1⋅10-5 мг/мл, добавляют тестируемое вещество и определяют интенсивность люминесценции полученной суспензии и контроля, а о повреждающем действии тестируемого вещества судят по отклонению интенсивности люминесценции суспензии от контроля.1. A method for determining the toxicity of chemicals that generate reactive oxygen species, characterized in that Escherichia col K12 MG1655 culture containing the PkatG-lux plasmid, in which the lux bioluminescence operon of marine photobacteria Photobacterium leiognathi, Vibrio fischeri or Photorabdus luminescens, is controlled was added to a final concentration of riboflavin 1⋅10 -3 mg / ml - 1⋅10 -5 mg / ml, were added a test substance and determining the luminescence intensity obtained suspension and control, damaging effect of the test substance is judged by the deviation of the luminescence intensity of the suspension from the control. 2. Способ по п.1, характеризующийся тем, что культуру Escherichia coli предварительно выращивают на жидкой питательной полноценной среде Луриа-Бертани.2. The method according to claim 1, characterized in that the culture of Escherichia coli is pre-grown on a liquid nutrient full medium Luria-Bertani. 3. Способ по п.1, характеризующийся тем, что культуру Escherichia coli после предварительного выращивания доводят до плотности 0,01-0,1 единица Мак-Фарланда и концентрация 3⋅107-3⋅106 клеток/мл.3. The method according to claim 1, characterized in that the culture of Escherichia coli after pre-cultivation is adjusted to a density of 0.01-0.1 Mac-Farland unit and a concentration of 3 × 10 7 -3 × 10 6 cells / ml. 4. Способ по п.1, характеризующийся тем, что контроль в качестве вещества сравнения содержит деионизированную воду в эквивалентном объеме.4. The method according to claim 1, characterized in that the control as a reference substance contains deionized water in an equivalent volume.
RU2016100246A 2016-01-12 2016-01-12 Method for determining toxicity of chemicals generating active oxygen forms RU2614267C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2016100246A RU2614267C1 (en) 2016-01-12 2016-01-12 Method for determining toxicity of chemicals generating active oxygen forms

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2016100246A RU2614267C1 (en) 2016-01-12 2016-01-12 Method for determining toxicity of chemicals generating active oxygen forms

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2614267C1 true RU2614267C1 (en) 2017-03-24

Family

ID=58453324

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2016100246A RU2614267C1 (en) 2016-01-12 2016-01-12 Method for determining toxicity of chemicals generating active oxygen forms

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2614267C1 (en)

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BACHMANN H. et al. Luciferase detection during stationary phase in Lactococcus lactis // Applied and Environmental Microbiology, 2007, pp. 4704-4706. *
ГОРЯНИН И.И. и др. Определение генотоксического действия 1,1-диметилгидразина алкилирующими соединениями, возникающими при его окислении, и перекисью водорода. // ТРУДЫ МФТИ, 2013, т. 5, n. 1, с. 103-111. *
ПТИЦЫН Л.Р. Метаболическая инженерия штаммов Escherichia coli - биосенсоров, продуцентов цитокинов, факторов роста и низкомолекулярных веществ. Диссертация. Москва - 2013, с. 1-110. *
ПТИЦЫН Л.Р. Метаболическая инженерия штаммов Escherichia coli - биосенсоров, продуцентов цитокинов, факторов роста и низкомолекулярных веществ. Диссертация. Москва - 2013, с. 1-110. ГОРЯНИН И.И. и др. Определение генотоксического действия 1,1-диметилгидразина алкилирующими соединениями, возникающими при его окислении, и перекисью водорода. // ТРУДЫ МФТИ, 2013, т. 5, n. 1, с. 103-111. BACHMANN H. et al. Luciferase detection during stationary phase in Lactococcus lactis // Applied and Environmental Microbiology, 2007, pp. 4704-4706. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Bareia et al. Self-sensing in Bacillus subtilis quorum-sensing systems
Yip et al. A novel, conserved cluster of genes promotes symbiotic colonization and σ54‐dependent biofilm formation by Vibrio fischeri
Crofts et al. Enterotoxigenic E. coli virulence gene regulation in human infections
Kuchma et al. A three-component regulatory system regulates biofilm maturation and type III secretion in Pseudomonas aeruginosa
Hietpas et al. Experimental illumination of a fitness landscape
Spiers et al. The Pseudomonas fluorescens SBW25 wrinkly spreader biofilm requires attachment factor, cellulose fibre and LPS interactions to maintain strength and integrity
Sampedro et al. Pseudomonas chemotaxis
Dietrich et al. Bacterial community morphogenesis is intimately linked to the intracellular redox state
Deng et al. Two sRNA RyhB homologs from Yersinia pestis biovar microtus expressed in vivo have differential Hfq-dependent stability
Speare et al. Environmental viscosity modulates interbacterial killing during habitat transition
Heuner et al. The expression of the flagellum of Legionella pneumophila is modulated by different environmental factors
Rupani et al. Characterization of the stress response of a bioluminescent biological sensor in batch and continuous cultures
EP0793729B1 (en) Lyophilized bioluminescent bacterial reagent for the detection of toxicants
Zhou et al. Deciphering the regulon of a GntR family regulator via transcriptome and ChIP‐exo analyses and its contribution to virulence in Xanthomonas citri
Aleksic et al. Development of a novel biosensor for the detection of arsenic in drinking water
Ferrer-Navarro et al. Abundance of the quorum-sensing factor Ax21 in four strains of Stenotrophomonas maltophilia correlates with mortality rate in a new zebrafish model of infection
Wasilko et al. Sulfur availability for Vibrio fischeri growth during symbiosis establishment depends on biogeography within the squid light organ
Joshi et al. Novel approaches to biosensors for detection of arsenic in drinking water
Han et al. Design of growth‐dependent biosensors based on destabilized GFP for the detection of physiological behavior of Escherichia coli in heterogeneous bioreactors
Li et al. Bacterial bioluminescence assay for bioanalysis and bioimaging
Kim et al. Regulation of cid and lrg expression by CcpA in Streptococcus mutans
Junker et al. Global analysis of candidate genes important for fitness in a competitive biofilm using DNA-array-based transposon mapping
US5776681A (en) Method for determining a metal present in a sample
Heindl et al. Reciprocal control of motility and biofilm formation by the PdhS2 two-component sensor kinase of Agrobacterium tumefaciens
Colton et al. Growth on glucose decreases cAMP‐CRP activity while paradoxically increasing intracellular cAMP in the light‐organ symbiont V ibrio fischeri