RU2612147C1 - Method for assessment of wound surface readiness for plastic closure - Google Patents
Method for assessment of wound surface readiness for plastic closure Download PDFInfo
- Publication number
- RU2612147C1 RU2612147C1 RU2015147733A RU2015147733A RU2612147C1 RU 2612147 C1 RU2612147 C1 RU 2612147C1 RU 2015147733 A RU2015147733 A RU 2015147733A RU 2015147733 A RU2015147733 A RU 2015147733A RU 2612147 C1 RU2612147 C1 RU 2612147C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- wound
- plastic closure
- readiness
- copies
- dna
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области клинической лабораторной диагностики и может быть использовано в клинической практике для оценки эффективности комплексной терапии и готовности раны к пластическому закрытию.The invention relates to the field of clinical laboratory diagnostics and can be used in clinical practice to assess the effectiveness of complex therapy and the preparedness of the wound for plastic closure.
Проблема лечения открытых повреждений мягких тканей и костей остается актуальной и на сегодняшний день в связи с увеличением количества дорожно-транспортного травматизма и появлением новых экстремальных видов спорта.The problem of treating open injuries of soft tissues and bones remains relevant today due to an increase in the number of road traffic injuries and the emergence of new extreme sports.
Окончательным этапом хирургического лечения, после купирования воспалительных явлений и перехода раны во вторую фазу раневого заживления, является восстановление целостности покровных тканей. Значение пластических и реконструктивных операций очень велико, поскольку осложненное течение травмы приводит к утрате комплексов тканей и образованию обширных раневых дефектов.The final stage of surgical treatment, after the relief of inflammatory phenomena and the transition of the wound into the second phase of wound healing, is to restore the integrity of the integumentary tissues. The importance of plastic and reconstructive operations is very high, since the complicated course of the injury leads to the loss of tissue complexes and the formation of extensive wound defects.
В лечении ран, осложненных раневой инфекцией, главными факторами, определяющими исход заболевания, являются качество хирургической обработки раны, адекватная противомикробная терапия и правильная оценка готовности раны к окончательному закрытию. Уровень бактериальной обсемененности биоптатов ран в процессе лечения является информативным показателем течения раневого процесса, эффективности назначенной терапии и, как правило, коррелирует с клинической картиной и исходом заживления.In the treatment of wounds complicated by wound infection, the main factors determining the outcome of the disease are the quality of the surgical treatment of the wound, adequate antimicrobial therapy and the correct assessment of the readiness of the wound for final closure. The level of bacterial contamination of biopsy samples of wounds during treatment is an informative indicator of the course of the wound process, the effectiveness of the prescribed therapy and, as a rule, correlates with the clinical picture and the outcome of healing.
Известны способы объективизации готовности раневой поверхности к закрытию.Known methods of objectification of the readiness of the wound surface for closure.
Локальная клиническая картина, наблюдаемая при клиническом осмотре. Показанием к пластике раны являются признаки перехода раневого процесса во вторую фазу: появление ярких мелкозернистых грануляций, отсутствие патологического отделяемого, перифокальной реакции и т.д. Недостатком является то, что визуальная оценка субъективна и не может применяться изолированно. Поэтому учитывают как клиническую картину, так и лабораторные данные.Local clinical picture observed during clinical examination. Indications for wound repair are signs of the transition of the wound process into the second phase: the appearance of bright fine-grained granulations, the absence of pathological discharge, perifocal reaction, etc. The disadvantage is that visual assessment is subjective and cannot be applied in isolation. Therefore, both the clinical picture and laboratory data are taken into account.
Лабораторные анализы крови. Доказано, что рутинные методы лабораторной диагностики, применяемые в общей практике (например, количество лейкоцитов и их незрелых форм, а также исследование уровня С-реактивного белка, лактата), обладают низкой чувствительностью и специфичностью и не могут служить на современном этапе достоверными критериями для оценки эффективности лечения и готовности раны к закрытию. Так, например, прокальцитонин (РСТ), зарекомендовавший себя как один из наиболее объективных маркеров бактериальной инфекции, является неинформативным при инфекционных процессах, вызванных грибками, уровень РСТ может повышаться при состояниях, не связанных с инфекционным процессом, но сопровождающихся развитием синдрома полиорганной недостаточности, синдрома системной воспалительной реакции. Кроме того, РСТ тест не может выступать как независимый биомаркер для назначения антимикробного химиопрепарата, так как, ориентируясь на него, невозможно определить характер возбудителя и его биологические свойства. Белок астроглии S-100 может оказаться чувствительнее РСТ в диагностике инфекционных состояний, но в связи с его низкой специфичностью этот биомаркер в отдельности не может быть использован для оценки эффективности антимикробной терапии. Одним из лабораторных биомаркеров, который в ряде исследований использовали в качестве критерия генерализации инфекции, вызванной грамм-отрицательными бактериями, является высокий уровень липополи-сахарида (ЛПС) в сыворотке крови, а по его динамике пытались оценивать эффективность проводимой комплексной терапии. Данный тест используется в научно-экспериментальных исследованиях. Его диагностическая значимость в клинике подтверждена не была.Laboratory blood tests. It is proved that routine laboratory diagnostic methods used in general practice (for example, the number of leukocytes and their immature forms, as well as the study of the level of C-reactive protein, lactate), have low sensitivity and specificity and cannot serve as reliable criteria for assessment at the present stage treatment effectiveness and wound closure readiness. For example, procalcitonin (PCT), which has established itself as one of the most objective markers of bacterial infection, is uninformative in infectious processes caused by fungi, PCT levels may increase in conditions not associated with the infectious process, but accompanied by the development of multiple organ failure syndrome, syndrome systemic inflammatory response. In addition, the PCT test cannot act as an independent biomarker for the appointment of an antimicrobial chemotherapy drug, since, being guided by it, it is impossible to determine the nature of the pathogen and its biological properties. Protein astroglia S-100 may be more sensitive than PCT in the diagnosis of infectious conditions, but due to its low specificity, this biomarker alone cannot be used to evaluate the effectiveness of antimicrobial therapy. One of the laboratory biomarkers, which in a number of studies was used as a criterion for the generalization of infection caused by gram-negative bacteria, is a high level of lipopolysaccharide (LPS) in the blood serum, and they tried to evaluate the effectiveness of the complex therapy by its dynamics. This test is used in scientific and experimental research. Its diagnostic significance in the clinic has not been confirmed.
Цитологическое исследование мазков-отпечатков ран. Значительное преобладание молодых клеток грануляционной ткани (про- и фибробласты, макрофаги, эндотелий, полибласты) и снижение содержания нейтрофилов до 40-50% при цитологическом исследовании раневых отпечатков указывают на течение второй фазы раневого процесса. При данном исследовании отсутствует качественная и количественная микробиологическая визуализация, что позволяет отнести данное исследование к вспомогательным.Cytological examination of smears, prints of wounds. A significant predominance of young cells of granulation tissue (pro- and fibroblasts, macrophages, endothelium, polyblasts) and a decrease in the neutrophil content to 40–50% during cytological examination of wound prints indicate the course of the second phase of the wound process. In this study, there is no qualitative and quantitative microbiological visualization, which allows us to attribute this study to auxiliary ones.
Лазерная допплеровская флоуметрия. Является аппаратным неинвазивным методом определения степени расстройства микроциркуляции при травмах с размозжением и раздавливанием тканей. Целесообразно использование метода для оперативной оценки состояния кровотока в первые сутки после травмы. К моменту выполнения операции по закрытию раневого дефекта, как правило, все нежизнеспособные участки отграничиваются зоной демаркации.Laser Doppler flowmetry. It is a hardware non-invasive method for determining the degree of microcirculation disorder in injuries with crushing and crushing of tissues. It is advisable to use the method for the rapid assessment of blood flow in the first day after an injury. By the time of the operation to close the wound defect, as a rule, all non-viable areas are delimited by the demarcation zone.
Микробиологическое исследование раневого экссудата, микробиологические посевы. В клинической практике широко распространен метод классической микробиологии, с помощью которого можно получить подробную информацию о характере возбудителя, его количественном содержании, биологических свойствах и чувствительности к антимикробным препаратам. Исследование включает в себя выделение, идентификацию микроорганизмов и количественное определение микробов в расчете на 1 см2 поверхности и на 1 г биоптата раны. Если содержание бактерий в ране становится значительно ниже критического уровня, то заживление ран, как правило, протекает без осложнений, первичным натяжением. В тех случаях, когда развивается нагноение ран, количество бактерий в ране чаще всего составляет более 105 на 1 г ткани (Кузин М.И., Костюченок Б.М. // Раны и раневая инфекция, Москва, «Медицина», 1990).Microbiological examination of wound exudate, microbiological culture. In clinical practice, the method of classical microbiology is widespread, with which you can get detailed information about the nature of the pathogen, its quantitative content, biological properties and sensitivity to antimicrobial drugs. The study includes the isolation, identification of microorganisms and the quantitative determination of microbes per 1 cm 2 surface and 1 g of biopsy wounds. If the bacterial content in the wound becomes much lower than the critical level, then wound healing, as a rule, proceeds without complications, by primary intention. In cases where suppuration of wounds develops, the number of bacteria in the wound more often is more than 10 5 per 1 g of tissue (Kuzin MI, Kostyuchenok BM // Wounds and wound infection, Moscow, “Medicine”, 1990) .
Недостатком этого способа является то, что предварительные результаты возможно получить не ранее чем на вторые сутки, а окончательный результат на 4-5 сутки после доставки материала в лабораторию.The disadvantage of this method is that preliminary results can be obtained no earlier than on the second day, and the final result is 4-5 days after delivery of the material to the laboratory.
Способ микробиологического исследования раневого экссудата выбран нами за прототип.The method of microbiological examination of wound exudate is chosen by us for the prototype.
Задачей изобретения является разработка достоверного способа оценки готовности раневой поверхности к окончательному этапу хирургического лечения - пластическому закрытию.The objective of the invention is to develop a reliable method for assessing the preparedness of the wound surface for the final stage of surgical treatment - plastic closure.
Техническим результатом реализации поставленной задачи является разработка количественного показателя оценки готовности раневой поверхности к пластическому закрытию.The technical result of the implementation of the task is to develop a quantitative indicator for assessing the readiness of the wound surface for plastic closure.
Сущность изобретения заключается в том, что предлагаемый способ оценки готовности раневой поверхности к пластическому закрытию основан на количественном определении ДНК бактерий в ране. Метод количественной ПЦР (полимеразная цепная реакция) диагностики использовали для идентификации бактериального возбудителя инфекции, определения его клинически значимых биологических свойств, для оценки эффективности антибактериальной химиотерапии в динамике и готовности раны к пластическому закрытию путем расчета копий ДНК возбудителя на мл образца.The essence of the invention lies in the fact that the proposed method for assessing the readiness of the wound surface for plastic closure is based on the quantitative determination of bacterial DNA in a wound. The method of quantitative PCR (polymerase chain reaction) diagnostics was used to identify the bacterial pathogen of infection, determine its clinically significant biological properties, to evaluate the effectiveness of antibiotic chemotherapy in dynamics and the readiness of the wound for plastic closure by calculating copies of the pathogen DNA per ml of sample.
Развитие молекулярной биологии позволило выделять ДНК и РНК микроорганизмов. И, если ранее использование ПЦР-диагностики в рутинной клинической практике ставилось под сомнение, то на сегодняшний день современные технологии и изменения в законодательстве существенно увеличило практику применения данного метода. Исследования подтверждают, что современные методы ПЦР в режиме реал-тайм по срокам и точности диагностики превосходят классические культуральные методы, более того позволяют более точно установить возбудителя инфекционного процесса. Малейшие количества ДНК возбудителя могут быть идентифицированы за счет многократного копирования специфических последовательностей генетического материала патогенного микроорганизма. Методом ПЦР можно обнаружить ДНК микроорганизмов намного быстрее и с более высокой чувствительностью. Не требуется предшествующая инкубация или получение культуры, и лаборатория может выдать результат в течение нескольких часов (1-6 часов) с момента взятия биоматериала на исследование. Возможно также определение «проблемной» резистентности для определенных штаммов микроорганизмов, например метициллинрезистентного стафилококка (MRSA). Дополнительным преимуществом диагностики является независимость от проводимой противомикробной терапии, а также большая вероятность получения результата в случае микст-ифекции по сравнению с исследованием культуральным методом. Кроме этого, в отличие от традиционного способа микробиологического исследования, которое выявляет только количество жизнеспособных клеток, с помощью ДНК диагностики возможно определение живых и разрушенных микробных клеток, что очень важно, так как воспалительные реакции вызывают и фрагменты клеток. Существует множество коммерческих тест-систем, основанных на ПЦР-диагностике для выявления возбудителей инфекционного процесса. Но до сих пор метод не применялся в лечении ран и раневой инфекции для мониторинга эффективности проводимой комплексной терапии (операция хирургическая обработка раны, местное лечение раны, противомикробная медикаментозная терапия и т.д.) и готовности раневой поверхности к окончательному этапу хирургического лечения - пластическому закрытию.The development of molecular biology has allowed the isolation of DNA and RNA of microorganisms. And, if earlier the use of PCR diagnostics in routine clinical practice was called into question, then today the modern technology and changes in the legislation have significantly increased the practice of using this method. Studies confirm that modern PCR methods in real time in terms of timing and diagnostic accuracy are superior to classical cultural methods, moreover, they can more accurately establish the causative agent of the infectious process. The smallest amounts of pathogen DNA can be identified by repeatedly copying specific sequences of the genetic material of a pathogenic microorganism. PCR can detect the DNA of microorganisms much faster and with higher sensitivity. No previous incubation or culture is required, and the laboratory can produce the result within a few hours (1-6 hours) from the moment the biomaterial is taken for examination. It is also possible to determine “problematic” resistance for certain strains of microorganisms, for example methicillin-resistant staphylococcus (MRSA). An additional advantage of the diagnosis is independence from the antimicrobial therapy, as well as a greater likelihood of obtaining a result in the case of mixed infection compared with the study by the cultural method. In addition, unlike the traditional method of microbiological research, which reveals only the number of viable cells, with the help of DNA diagnostics it is possible to determine live and destroyed microbial cells, which is very important, since inflammatory fragments also cause cell fragments. There are many commercial test systems based on PCR diagnostics to identify pathogens. But until now, the method has not been used in the treatment of wounds and wound infections to monitor the effectiveness of the complex therapy (surgical treatment of the wound, local wound treatment, antimicrobial drug therapy, etc.) and the preparedness of the wound surface for the final stage of surgical treatment - plastic closure .
Способ осуществляют следующим образом. Стерильной одноразовой палочкой с ватным тампоном осуществляется забор раневого отделяемого. Материал погружают в разовую пробирку с плотно закрывающейся крышкой. Образцы могут находиться при комнатной температуре не более 2-х часов. При необходимости более длительного хранения пробы могут быть помещены в холодильник с температурой 2-8°С на срок не более суток. Более продолжительное хранение (до 2-х недель) допустимо в замороженном виде в морозильной камере при температуре минус 20°С. Не допускается повторное замораживание-оттаивание проб. Если ПЦР-диагностическая лаборатория и процедурный кабинет для забора проб территориально разобщены, то транспортировка проб должна осуществляться в термосах или термоконтейнерах с соблюдением правил хранения образцов и правил транспортировки инфекционных материалов. Для ПЦР-анализа тампон с образцом погружают в 0,5 мл транспортной среды «ТСМ» (ИнтерЛабСервис, Россия). Способ оценки эффективности противомикробной терапии и готовности раневого ложа к закрытию методом количественной ПЦР был отработан на примере количественной оценки ДНК MRSA, Pseudomonas aeruginosa и может быть с успехом воспроизведен на ДНК других бактериальных и грибковых возбудителей инфекционных процессов (MRCoNS (метициллин-резистентные коагулазонегативные стафилококки), Streptococcus pyogenes), при наличии соответствующих праймеров.The method is as follows. A sterile disposable stick with a cotton swab is used to fence the wound. The material is immersed in a single tube with a tight-fitting lid. Samples can be kept at room temperature for no more than 2 hours. If necessary, longer storage of samples can be placed in a refrigerator with a temperature of 2-8 ° C for a period of not more than a day. Longer storage (up to 2 weeks) is permissible frozen in a freezer at a temperature of minus 20 ° C. Repeated freezing-thawing of samples is not allowed. If the PCR diagnostic laboratory and the procedure room for sampling are geographically separated, then the transportation of samples should be carried out in thermoses or thermo containers in accordance with the rules for storing samples and the rules for the transport of infectious materials. For PCR analysis, a swab with a sample is immersed in 0.5 ml of TSM transport medium (InterLabService, Russia). A method for evaluating the effectiveness of antimicrobial therapy and the preparedness of the wound bed for quantitative PCR was developed using the example of quantitative assessment of MRSA DNA, Pseudomonas aeruginosa and can be successfully reproduced on the DNA of other bacterial and fungal pathogens of infectious processes (MRCoNS (methicillin-resistant coagulase-negative staphylococci) Streptococcus pyogenes), with appropriate primers.
Выделение ДНК проводили с использованием набора «Рибо-преп» (Интер-ЛабСервис, Россия) согласно прилагаемой инструкции. Реакцию амплификации проводили на приборах с системой детекции флуоресцентного сигнала в режиме «реального времени» «Rotor-Gene» 6000 («CorbettResearch», Австралия) и «iQ5» («Вio-Rad», США). Например, по одному из каналов детектируется фрагмент ДНК Staphylococcus aureus для дифференцировки метициллинрезистентного Staphylococcusaureus (MRSA) отметициллинрезистентных коагулазонегативных стафилококков (MRCoNS). По второму каналу набор реагентов выявляет фрагмент ДНК гена mecA, обнаруживаемый только у метициллинрезистентных штаммов стафилококков (MRS). По третьему каналу происходит регистрация флуоресцентного сигнала внутреннего контрольного образца, который добавляется в каждую исследуемую пробу на этапе выделения ДНК, что позволяет контролировать процедуру анализа каждого образца и при количественных расчетах учитывать потери во время экстракции нуклеиновых кислот. В состав тест-системы входят положительный контрольный образец (ПКО) и калибраторы (стандартные образцы с заданной концентрацией). Калибраторы представляют собой смесь модифицированных плазмид pGEM-t, полученных путем клонирования в них участков специфической ДНК, концентрация которых измерена при подсчете копийности плазмидного гена β-лактамазы тест-системой «CQS-Bla-System». В динамике фиксируют количество содержания идентифицированного возбудителя и при значении менее 500 копий/мл делают вывод о готовности раны к пластическому закрытию.DNA isolation was performed using the Ribot-prep kit (Inter-LabService, Russia) according to the attached instructions. The amplification reaction was carried out on devices with a system for detecting a fluorescent signal in real-time mode Rotor-Gene 6000 (CorbettResearch, Australia) and iQ5 (Bio-Rad, USA). For example, a DNA fragment of Staphylococcus aureus is detected through one of the channels to differentiate methicillin-resistant Staphylococcusaureus (MRSA) remarkicillin-resistant coagulase-negative staphylococci (MRCoNS). On the second channel, the reagent kit reveals a DNA fragment of the mecA gene that is found only in methicillin-resistant staphylococcus strains (MRS). The third channel records the fluorescent signal of the internal control sample, which is added to each test sample at the stage of DNA extraction, which allows you to control the analysis procedure of each sample and take into account losses during the extraction of nucleic acids in quantitative calculations. The test system includes a positive control sample (FFP) and calibrators (standard samples with a given concentration). Calibrators are a mixture of modified pGEM-t plasmids obtained by cloning specific DNA sections in them, the concentration of which was measured by counting the copy number of the β-lactamase plasmid gene by the CQS-Bla-System test system. In the dynamics, the amount of the content of the identified pathogen is fixed and, with a value of less than 500 copies / ml, a conclusion is made that the wound is ready for plastic closure.
Клинический пример 1. Больной С., 16 лет, через 80 мин от момента травмы (попал под поезд в метро) был доставлен бригадой СМП в стационар. Выставлен диагноз: Поездная травма. Тяжелая сочетанная травма. ЗЧМТ. Сотрясение головного мозга. Ушиб мягких тканей и подкожная гематома правой и левой теменно-височных областей. Закрытый оскольчатый перелом нижней трети левой плечевой кости со смещением. Ушиб мягких тканей и обширная ссадина грудной клетки справа. Ушибленно-рваная рана правой ягодичной области. Ушибленно-рваные раны в/3 правой бедренной области. Диагноз: обширная ушибленно-рваная скальпированная рана правой голени с размозжением мягких тканей. Открытый многооскольчатый перелом медиальной лодыжки со смещением. Состояние после травматического вывиха стопы в голеностопном суставе. Травматический шок 1 степени. После первичного обследования и стабилизации общего состояния пациент взят в экстренную операционную. При ревизии поврежденной конечности имелась обширная ушибленно-рваная скальпированная рана правой голени с отслойкой практически всей кожи голени циркулярно. По задней и боковым поверхностям н/3 голени имелось массивное размозжение мягких тканей с полным перерывом практически всех мышц передней группы и задней поверхностной группы голени. Кроме этого, обнаружено травматическое повреждение надкостницы и кортикального слоя латеральной поверхности н/3 малоберцовой (на протяжении 4 см) и большеберцовой костей (на протяжении 3 см). Также выявлен открытый перелом внутренней лодыжки со смещением и выявлена патологическая подвижность в голеностопном суставе. Выполнен тщательный туалет раны растворами 3% перекиси водорода и 1% йодопирона. Выполнены хирургическая обработка раны, все участки размозженной и загрязненной подкожно-жировой клетчатки, а также размозженной мышечной ткани удалены, металлоостеосинтез костей голени наружным спицевым аппаратом внешней фиксации (Илизарова), гемостаз и тампонирование раны повязками с мазью левомеколь. При поступлении проведено исследование раневого отделяемого двумя различными методами: методом классической микробиологии (4 суток) и методом ПЦР (4 часа). Роста не обнаружено. Но, учитывая характер травмы и общее состояние больного, назначена антибактериальная терапия широкого спектра действия. В течение 10 дней проводилось местное лечение раны мазями на полиэтиленгликолевой основе и йодофорами. В данные сроки классическое микробиологическое исследование показало наличие следующих микроорганизмов: St. Aureus, Ps. Aeruginosa, Proteusspp. Забор раневого отделяемого для ПЦР-диагностики осуществляется стерильной (одноразовой) палочкой с ватным тампоном. Материал был погружен в раствор транспортной среды и в течение 2-х часов был доставлен в лабораторию. Выполнено исследование материала на наличие копий ДНК основных видов болезнетворных микроорганизмов, выявлены метициллин-резистентные коагулазонегативные стафилококки в количестве 2100 копий/мл.Clinical example 1. Patient S., 16 years old, after 80 minutes from the moment of injury (got under the train in the subway) was taken by the ambulance team to the hospital. Diagnosed with Train Trauma. Severe concomitant injury. ZHMT. Brain concussion. Soft tissue contusion and subcutaneous hematoma of the right and left parietal-temporal regions. Closed comminuted fracture of the lower third of the left humerus with displacement. Soft tissue bruise and extensive abrasion of the chest on the right. Bruised-lacerated right gluteal region. Bruised-lacerated wounds in / 3 of the right femoral region. Diagnosis: extensive bruised-ragged scalp wound of the right lower leg with crushing of soft tissues. Open multi-fragmented fracture of the medial ankle with displacement. Condition after traumatic dislocation of the foot in the ankle joint. Traumatic shock of 1 degree. After the initial examination and stabilization of the general condition, the patient was taken to an emergency operating room. During the audit of the injured limb, there was an extensive bruised-ragged scalped wound of the right lower leg with detachment of almost the entire skin of the lower leg circularly. On the back and side surfaces of the n / 3 lower leg there was a massive crushing of soft tissues with a complete break of almost all the muscles of the anterior group and the posterior surface group of the lower leg. In addition, traumatic damage to the periosteum and cortical layer of the lateral surface n / 3 of the fibula (over 4 cm) and the tibia (over 3 cm) was found. An open fracture of the inner ankle with a shift was also revealed, and pathological mobility in the ankle joint was revealed. A thorough wound toilet was performed with solutions of 3% hydrogen peroxide and 1% iodopyrone. Surgical treatment of the wound was performed, all parts of the crushed and contaminated subcutaneous fat, as well as the crushed muscle tissue were removed, the osteosynthesis of the lower leg bones by the external spoke apparatus of external fixation (Ilizarova), hemostasis and plugging of the wound with dressings with levomekol ointment. Upon admission, a study of the wound was carried out by two different methods: the classical microbiology method (4 days) and the PCR method (4 hours). No growth was found. But, given the nature of the injury and the general condition of the patient, antibacterial therapy of a wide spectrum of action has been prescribed. Within 10 days, local wound treatment was performed with polyethylene glycol-based ointments and iodophors. In these periods, a classical microbiological study showed the presence of the following microorganisms: Aureus, Ps. Aeruginosa, Proteusspp. The wound discharge for PCR diagnostics is carried out with a sterile (disposable) stick with a cotton swab. The material was immersed in a solution of the transport medium and was delivered to the laboratory within 2 hours. A study of the material for the presence of DNA copies of the main types of pathogens was performed; methicillin-resistant coagulase-negative staphylococci was detected in the amount of 2100 copies / ml.
За данное время окончательно определились ткани сомнительной жизнеспособности, появились зоны демаркации, сохранялось умеренное серозно-геморрагическое отделяемое, отек тканей уменьшился. Выполнена повторная хирургическая обработка раны и определена чувствительность микроорганизмов к антибактериальным препаратам, выполнена коррекция медикаментозного лечения согласно чувствительности. Это дало положительный результат на контрольном исследовании (2-е сутки после повторной хирургической обработки) в виде уменьшения видового состава микроорганизмов по данным традиционной микробиологии (St. Aureus, St. Epiderrnidis) и снижения количества MRCoNS по ПЦР до 400 копий/мл. Местное лечение было продолжено в течение 2-х недель. К этому времени рана активно гранулировала, патологического отделяемого не было, перифокальная реакция купировалась, клинически была готова к закрытию. Результат посева методом классической микробиологии роста микроорганизмов не дал. В это же время динамика изменений количественного состава микрофлоры методом ПЦР-диагностики показала уменьшение числа микроорганизмов MRCoNS до полной эрадикации микроорганизмов. На основании полученных результатов сделан вывод о том, что рана перешла во вторую фазу раневого заживления и готова к закрытию. Методом выбора, учитывая площадь раневой поверхности, которая составляла 700 см2, являлась дерматомная пластика перфорированными аутодермальными кожными трансплантатами. Приживление лоскутов произошло на 10 сутки без осложнений. Благодаря точной количественной оценки MRCoNS, выявленных при ПЦР-диагностике, удалось объективизировать сроки пластического закрытия раневого дефекта.During this time, tissues of dubious viability were finally determined, demarcation zones appeared, moderate serous-hemorrhagic discharge persisted, tissue edema decreased. Repeated surgical treatment of the wound was performed, and the sensitivity of microorganisms to antibacterial drugs was determined, and drug treatment was adjusted according to sensitivity. This gave a positive result in a control study (2 days after repeated surgical treatment) in the form of a decrease in the species composition of microorganisms according to traditional microbiology (St. Aureus, St. Epiderrnidis) and a decrease in the number of MRCoNS by PCR to 400 copies / ml. Local treatment was continued for 2 weeks. By this time, the wound was actively granulating, there was no pathological discharge, the perifocal reaction was stopped, and it was clinically ready to close. The result of inoculation by the method of classical microbiology of the growth of microorganisms did not give. At the same time, the dynamics of changes in the quantitative composition of microflora by PCR diagnostics showed a decrease in the number of MRCoNS microorganisms before the complete eradication of microorganisms. Based on the results obtained, it was concluded that the wound went into the second phase of wound healing and is ready to close. The method of choice, given the area of the wound surface, which was 700 cm 2 , was dermatoma plastic with perforated autodermal skin grafts. The flap engraftment occurred on the 10th day without complications. Thanks to an accurate quantitative assessment of MRCoNS revealed by PCR diagnostics, it was possible to objectify the terms of plastic closure of a wound defect.
Клинический пример 2. Больная А., 13 лет, получила травму в результате ДТП. Переведена на 8-е сутки после получения травмы. Выставлен диагноз: Множественная и сочетанная травма. Обширные гнойно-некротические раны левого бедра и левой голени. Множественные ушибленные раны туловища. Состояние после ПХО ран. Закрытый перелом средней трети левой ключицы без смещения. При осмотре в области левого бедра по передне-латеральной поверхности имелась частично ушитая лоскутная рана длиной до 30,0 см, неправильной формы, в продольном направлении, в проксимальном отделе имелся раневой дефект 6,0×8,0 см, глубоко тампонированный салфетками. Последние удалены (пропитаны серозно-гнойным отделяемым), определяется глубокий "карман" на всю протяженность раны в дистальном направлении. По краю лоскута вдоль линии швов практически на всем протяжении отмечались ишемические изменения кожи (синюшно-багрового цвета), на расстоянии 2-3 см от края. В области левой голени по задне-латеральной поверхности имелась ушитая рана длиной до 10,0 см, неправильной формы в косо-поперечном направлении, края раны сопоставлены редкими узловыми швами, между швами отмечалось обильное серозное отделяемое. После предварительной подготовки ребенок взят в операционную. Выполнена хирургическая обработка раны. Швы в области раны бедра и голени были сняты. Проведено исследование раневого отделяемого двумя различными методами: методом классической микробиологии и методом ПЦР. При ревизии обнаружены и удалены инородные тела. Измененные мышечные ткани иссечены, удалены. Гнойно-некротические массы, размозженная подкожная клетчатка обработаны гидрохирургическим скальпелем. Выполнены туалет раны растворами антисептиков (3% перекись водорода и 1% йодопирон), гемостаз, начато лечение отрицательным давлением (установлена VAC-система с активной аспирацией). На 5-е сутки после перевода классическое микробиологическое исследование показало наличие следующих микроорганизмов: St. Aureus, St. Epidermidis, Ps. Aeruginosa, E. Coli, Proteusspp. Но уже к этому моменту времени ребенку была выполнена смена антибактериальной терапии широкого спектра действия (назначена в первые часы после травмы) на этиотропное лечение, согласно данным ПЦР-диагностики (получены в течение суток в день перевода). Что дало положительный результат в виде уменьшения количественного и качественного состава микроорганизмов. На 12 сутки после перевода при микробиологическом обследовании выявлены St. Aureus, Ps. Aeruginosa. Забор раневого отделяемого для ПЦР-диагностики осуществляется стерильной (одноразовой) палочкой с ватным тампоном. Материал был погружен в раствор транспортной среды, помещен в термоконтейнер и в течение 4-х часов был доставлен в лабораторию. Выполнено исследование материала на наличие копий ДНК основных видов болезнетворных микроорганизмов. При ПЦР-диагностике в динамике отмечается снижение количества выявленных микроорганизмов: в день перевода ДНК MRSA 800 копий/мл, ДНК Pseudomonas aeruginosa 1600 копий/мл, ДНК MRCoNS 106 копий/мл, на 12 сутки ДНК MRSA 400 копий/мл, ДНК Pseudomonas aeruginosa 600 копий/мл, ДНК MRCoNS 102 копий/мл. Выполнена повторная хирургическая обработка раны, иссечены и удалены оставшиеся измененные ткани. На 21 сутки после перевода при микробиологическом обследовании роста нет. А при ПЦР-диагностике отмечается снижение количества выявленных микроорганизмов до минимальных значений или до полной эрадикации (ДНК MRSA - не обнаружено, ДНК Pseudomonas aeruginosa - не обнаружено, ДНК MRCoNS - 500 копий/мл). Таким образом, через 3 недели после перевода ребенка раны перешли во вторую фазу раневого заживления, раневые поверхности активно гранулировали и готовы к закрытию. Учитывая возможности пластической и реконструктивной хирургии в данных областях, раневые дефекты были закрыты местными полнослойными тканями.Clinical example 2. Patient A., 13 years old, was injured in an accident. Translated to the 8th day after the injury. Diagnosed with Multiple and combined trauma. Extensive purulent-necrotic wounds of the left thigh and left lower leg. Multiple bruised trunk wounds. Condition after PHO wounds. Closed fracture of the middle third of the left clavicle without displacement. When viewed in the area of the left thigh along the front-lateral surface, there was a partially sutured patchwork wound up to 30.0 cm long, irregular in shape, in the longitudinal direction, in the proximal section there was a wound defect of 6.0 × 8.0 cm, deeply swabbed with napkins. The latter are removed (saturated with serous-purulent discharge), a deep "pocket" is determined for the entire length of the wound in the distal direction. Along the edge of the flap along the suture line, ischemic changes of the skin (cyanotic-crimson color) were observed almost throughout their length, 2-3 cm from the edge. In the region of the left tibia along the posterior lateral surface there was a sutured wound up to 10.0 cm long, irregularly shaped in the oblique-transverse direction, the edges of the wound were compared with rare interrupted sutures, and there was a profuse serous discharge between the sutures. After preliminary preparation, the child is taken to the operating room. Surgical treatment of the wound. Sutures in the area of the wound of the thigh and lower leg were removed. The study of the wound separated by two different methods: the classical microbiology method and the PCR method. During the audit, foreign bodies were discovered and removed. Altered muscle tissue is excised, removed. Purulent necrotic masses, crushed subcutaneous tissue are treated with a hydrosurgical scalpel. Toilet wounds with antiseptic solutions (3% hydrogen peroxide and 1% iodopyrone), hemostasis were performed, treatment with negative pressure was started (a VAC system with active aspiration was installed). On the 5th day after the transfer, a classical microbiological study showed the presence of the following microorganisms: Aureus, St. Epidermidis, Ps. Aeruginosa, E. Coli, Proteusspp. But already at this point in time, the child was replaced with a broad spectrum of antibacterial therapy (assigned in the first hours after the injury) to etiotropic treatment, according to PCR diagnostics (received during the day on the day of transfer). That gave a positive result in the form of a decrease in the quantitative and qualitative composition of microorganisms. On the 12th day after the transfer, microbiological examination revealed St. Aureus, Ps. Aeruginosa. The wound discharge for PCR diagnostics is carried out with a sterile (disposable) stick with a cotton swab. The material was immersed in a solution of the transport medium, placed in a thermal container and was delivered to the laboratory within 4 hours. The study of the material for the presence of DNA copies of the main types of pathogens. During PCR diagnostics, a decrease in the number of detected microorganisms is observed in dynamics: on the day of DNA transfer, MRSA 800 copies / ml, DNA Pseudomonas aeruginosa 1600 copies / ml, DNA MRCoNS 10 6 copies / ml, on day 12, MRSA DNA 400 copies / ml, Pseudomonas DNA aeruginosa 600 copies / ml, MRCoNS DNA 10 2 copies / ml. Repeated surgical treatment of the wound was performed, the remaining changed tissues were excised and removed. On the 21st day after the transfer, there is no growth during microbiological examination. And during PCR diagnostics, there is a decrease in the number of detected microorganisms to minimum values or to complete eradication (MRSA DNA was not detected, Pseudomonas aeruginosa DNA was not detected, MRCoNS DNA was 500 copies / ml). Thus, 3 weeks after the transfer of the child, the wounds went into the second phase of wound healing, wound surfaces were actively granulated and ready to be closed. Given the possibilities of plastic and reconstructive surgery in these areas, wound defects were covered by local full-layer tissues.
Способ может быть реализован с использованием стандартного лабораторного оборудования с привлечением персонала, владеющего методикой выполнения ПЦР-диагностики.The method can be implemented using standard laboratory equipment with the involvement of personnel owning the methodology for performing PCR diagnostics.
Основным преимуществом ПЦР-диагностики по сравнению с традиционными методами количественного исследования микроорганизмов является возможность получения результатов в день забора материала. При удовлетворительных результатах исследования возможно выполнение операции, пластического закрытия раневого дефекта, в тот же день. По результатам лечения 30 больных определен уровень числа копий (500 копий) микроорганизмов, при котором отсутствовали осложнения после пластического закрытия.The main advantage of PCR diagnostics in comparison with traditional methods of quantitative research of microorganisms is the possibility of obtaining results on the day of sampling. With satisfactory results of the study, it is possible to perform an operation, plastic closure of a wound defect, on the same day. According to the results of treatment of 30 patients, the level of the number of copies (500 copies) of microorganisms was determined, in which there were no complications after plastic closure.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2015147733A RU2612147C1 (en) | 2015-11-06 | 2015-11-06 | Method for assessment of wound surface readiness for plastic closure |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2015147733A RU2612147C1 (en) | 2015-11-06 | 2015-11-06 | Method for assessment of wound surface readiness for plastic closure |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2612147C1 true RU2612147C1 (en) | 2017-03-02 |
Family
ID=58459268
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2015147733A RU2612147C1 (en) | 2015-11-06 | 2015-11-06 | Method for assessment of wound surface readiness for plastic closure |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2612147C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2696565C1 (en) * | 2018-08-14 | 2019-08-05 | Анжела Абдуль-Вахабовна Аль-Адлах | Method for assessment of clinical course of wound process in patients with diabetic foot syndrome |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1997886A1 (en) * | 2006-02-21 | 2008-12-03 | National University Corporation University of Toya | Rapid method for identifying causative microorganism of infectious disease |
| WO2013033749A1 (en) * | 2011-09-07 | 2013-03-14 | Human Genetic Signatures Pty Ltd | Molecular detection assay |
-
2015
- 2015-11-06 RU RU2015147733A patent/RU2612147C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1997886A1 (en) * | 2006-02-21 | 2008-12-03 | National University Corporation University of Toya | Rapid method for identifying causative microorganism of infectious disease |
| WO2013033749A1 (en) * | 2011-09-07 | 2013-03-14 | Human Genetic Signatures Pty Ltd | Molecular detection assay |
Non-Patent Citations (6)
| Title |
|---|
| RHOADS D.D. ET AL. Comparison of culture and molecular identification of bacteria in chronic wounds. International journal of molecular sciences. 2012. V.13. P.2535-2550. * |
| Методические указания по детекции патогенной микрофлоры в клиническом материале, пищевых продуктах, объектах внешней среды и выполнению генетической идентификации клеток с помощью полимеразной цепной реакции, утвержденные Госкомсанэпиднадзором РФ. 1996. RHOADS D.D. ET AL. Comparison of culture and molecular identification of bacteria in chronic wounds. International journal of molecular sciences. 2012. V.13. P.2535-2550. * |
| МИТИШ В.А. И ДР. Лечение отрицательным давлением открытых переломов у детей. Тезисы международной научно-практической конференции "Вакуумная терапия ран у детей и взрослых". М.:2013. С.43-44. * |
| ПОПОВ Д.А. И ДР. Первый опыт применения метода пцр-диагностики в режиме реального времени при подозрении на бактериемию в раннем послеоперационном периоде у кардиохирургических больных. Бюллетень НЦССХ им. А.Н. БАКУЛЕВА РАМН Сердечно-сосудистые заболевания. 2010. Т.11. NO.S3. C.152. SPROCKETT D.D. ET AL. Use of 16s rrna sequencing and quantitative pcr to correlate venous leg ulcer bacterial bioburden dynamics with wound expansion, antibiotic therapy, and healing. Wound repair regen. 2015 september. V.23. NO.5. P.765-771;. DONEGAN R.J. ET AL. An overview of factors maximizing successful split-thickness skin grafting in diabetic wounds. Citation: diabetic foot & ankle. 2014. V.5. P.1-11. * |
| РОШАЛЬ Л. М. И ДР. Применение гидрохирургических технологий в лечении обширных ран у детей. Методические рекомендации. Журнал им. проф. Б.М. Костючёнка Раны и раневые инфекции. 2014. Т.1. NO.2. С.61-70. * |
| РОШАЛЬ Л. М. И ДР. Применение гидрохирургических технологий в лечении обширных ран у детей. Методические рекомендации. Журнал им. проф. Б.М. Костючёнка Раны и раневые инфекции. 2014. Т.1. NO.2. С.61-70. МИТИШ В.А. И ДР. Лечение отрицательным давлением открытых переломов у детей. Тезисы международной научно-практической конференции "Вакуумная терапия ран у детей и взрослых". М.:2013. С.43-44. Методические указания по детекции патогенной микрофлоры в клиническом материале, пищевых продуктах, объектах внешней среды и выполнению генетической идентификации клеток с помощью полимеразной цепной реакции, утвержденные Госкомсанэпиднадзором РФ. 1996. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2696565C1 (en) * | 2018-08-14 | 2019-08-05 | Анжела Абдуль-Вахабовна Аль-Адлах | Method for assessment of clinical course of wound process in patients with diabetic foot syndrome |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Suda et al. | Diagnosis of periprosthetic joint infection using alpha-defensin test or multiplex-PCR: ideal diagnostic test still not found | |
| Janz et al. | Evaluation of sonicate fluid cultures in comparison to histological analysis of the periprosthetic membrane for the detection of periprosthetic joint infection | |
| Fink et al. | Periprosthetic joint infection of shoulder arthroplasties: diagnostic and treatment options | |
| Dąbrowski et al. | Usefulness of C-reactive protein, serum amyloid A component, and haptoglobin determinations in bitches with pyometra for monitoring early post-ovariohysterectomy complications | |
| Tarabichi et al. | Diagnosis of Streptococcus canis periprosthetic joint infection: the utility of next-generation sequencing | |
| Patel et al. | Cutibacterium acnes: a threat to shoulder surgery or an orthopedic red herring? | |
| Swanson et al. | Biofilm-infected wounds in a dog | |
| Gille et al. | Is non-union of tibial shaft fractures due to nonculturable bacterial pathogens? A clinical investigation using PCR and culture techniques | |
| Rupp et al. | Polymicrobial infections and microbial patterns in infected nonunions–a descriptive analysis of 42 cases | |
| Iqbal et al. | Micro-organisms and risk factors associated with prosthetic joint infection following primary total knee replacement—our experience in Pakistan | |
| Bhardwaj et al. | An unusual presentation of native valve endocarditis caused by Staphylococcus warneri | |
| Takada et al. | Is drain tip culture prognostic of surgical site infection? Results of 1380 drain tip cultures in total hip arthroplasty | |
| Rakotovao-Ravahatra et al. | Assessment of the coagulase test in the identification of Staphylococcus aureus strains | |
| Kwan et al. | Mycobacterium chelonae and Mycobacterium fortuitum infection following open fracture: a case report and review of the literature | |
| Roziboev et al. | Microbes And Their Sensitivity To Antibiotics In Samples From The Joints Of Horses With Purulous Inflammation Processes | |
| Bernard et al. | The Value of Bacterial Culture During Clean Orthopedic Surgery a Prospective Study of 1,036 Patients | |
| RU2612147C1 (en) | Method for assessment of wound surface readiness for plastic closure | |
| O'Meara et al. | Outcomes of primary fascial closure after open abdomen for nontrauma emergency general surgery patients | |
| Adler et al. | Significance of positive mediastinal cultures in pediatric cardiovascular surgical procedure patients undergoing delayed sternal closure | |
| Melin et al. | Cryopreservation of autologous bone flaps following decompressive craniectomy: A new method reduced positive cultures without increase in post-cranioplasty infection rate | |
| Bhaskar et al. | Microbial contamination assessment of cryostored autogenous cranial bone flaps: should bone biopsies or swabs be performed? | |
| RU2627442C2 (en) | Method of diagnostics of infection in sustainable infection in the field of the joint | |
| Ellsworth et al. | Ten-day culture incubation time can accurately detect bacterial infection in periprosthetic infection in shoulder arthroplasty | |
| Swinbourne | 19 Antibiotic Use in Surgical Patients | |
| RU2342656C2 (en) | Prognostic method for complicated phlegmon clinical course |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20171107 |