RU2611340C2 - Method of monitoring efficiency of anticancer therapy of non-small cell lung cancer - Google Patents
Method of monitoring efficiency of anticancer therapy of non-small cell lung cancer Download PDFInfo
- Publication number
- RU2611340C2 RU2611340C2 RU2015132291A RU2015132291A RU2611340C2 RU 2611340 C2 RU2611340 C2 RU 2611340C2 RU 2015132291 A RU2015132291 A RU 2015132291A RU 2015132291 A RU2015132291 A RU 2015132291A RU 2611340 C2 RU2611340 C2 RU 2611340C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- microrna
- mirna
- lung cancer
- expression levels
- small cell
- Prior art date
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области медицины, конкретно к онкологии, и касается способов мониторинга эффективности противоопухолевой терапии немелкоклеточного рака легкого.The invention relates to medicine, specifically to oncology, and relates to methods for monitoring the effectiveness of antitumor therapy of non-small cell lung cancer.
Рак легкого в России до настоящего времени занимает лидирующие позиции в структуре онкологической заболеваемости и смертности [1]. В 75-80% выявляется немелкоклеточный рак легкого (НМРЛ), при этом в большинстве случаев на момент постановки диагноза больные имеют распространенные стадии опухолевого процесса, при которых результаты лечения остаются неудовлетворительными. Анализ неудач хирургического лечения показал, что наиболее частой причиной смерти оперированных больных являются гематогенные метастазы (60-70%) и локо-регионарные рецидивы (30-40%). В связи с этим в последние годы активно разрабатываются методы комбинированного лечения НМРЛ и диагностические подходы по раннему выявлению признаков прогрессирования заболевания.Lung cancer in Russia still occupies a leading position in the structure of cancer incidence and mortality [1]. Non-small cell lung cancer (NSCLC) is detected in 75-80%, and in most cases, at the time of diagnosis, patients have common stages of the tumor process, in which the treatment results remain unsatisfactory. An analysis of the failures of surgical treatment showed that the most common cause of death of the operated patients are hematogenous metastases (60-70%) and loco-regional relapses (30-40%). In this regard, in recent years, methods of combined treatment of NSCLC and diagnostic approaches for the early detection of signs of disease progression have been actively developed.
Помимо проведения стандартных клинико-инструментальных исследований существенную помощь в мониторинге эффективности проводимого противоопухолевого лечения оказывают данные об изменении содержания в крови молекулярно-генетических маркеров, информативность которых к настоящему времени изучена при многих злокачественных новообразованиях, в том числе и при раке легкого [2].In addition to conducting standard clinical and instrumental studies, data on changes in blood levels of molecular genetic markers, the information content of which has so far been studied in many malignant neoplasms, including lung cancer, provide significant assistance in monitoring the effectiveness of antitumor treatment [2].
С указанных позиций в последние годы активно проводятся исследования микроРНК, которые являются одними из ключевых участников патогенеза онкологических заболеваний и представляют собой класс коротких некодирующих РНК, играющих важную роль в регуляции многих биологических процессов, таких как клеточный цикл, рост клеток, миграция, апоптоз, дифференцировка и реакция на стресс. Показано, что изменение профиля экспрессии микроРНК обнаружено при развитии практически всех злокачественных опухолей, причем miPHK могут выступать как в роли онкогенов (увеличение их уровня), так и опухолевых супрессоров (снижение их уровня) [3].From these positions, in recent years, microRNA studies have been actively carried out, which are one of the key participants in the pathogenesis of cancer and represent a class of short non-coding RNAs that play an important role in the regulation of many biological processes, such as the cell cycle, cell growth, migration, apoptosis, differentiation and stress response. It was shown that a change in the profile of miRNA expression was detected during the development of almost all malignant tumors, and miPHK can play both oncogenes (increase in their level) and tumor suppressors (decrease in their level) [3].
В настоящее время известно большое количество микроРНК-маркеров, ассоциированных с раком легкого. Так, по данным Chen X. с соавт. [4] была создана диагностическая модель, включающая 10 микроРНК-маркеров, которая позволяет с высокой чувствительностью (93%) и специфичностью (90%) дифференцировать больных раком легкого от здоровых лиц.A large number of microRNA markers associated with lung cancer are currently known. So, according to Chen X. et al. [4] a diagnostic model was created that included 10 miRNA markers, which allows differentiating lung cancer patients from healthy individuals with high sensitivity (93%) and specificity (90%).
В исследованиях последних лет доказано, что изменения уровня и состава циркулирующих нуклеиновых кислот (ДНК, микроРНК) связано с развитием рака легкого, прогрессией заболевания и выживаемостью [5, 6]. Показано, что повышение уровня онкомаркера (в частности, метилированных последовательностей в составе циркулирующих ДНК крови) на несколько месяцев опережает клинические симптомы и возможности инструментальных методов подтверждения рецидива заболевания [7]. Однако, несмотря на растущее число исследований, посвященных циркулирующим микроРНК, до сих пор нет единого мнения о том, панель каких микроРНК может быть использована для клинической диагностики и мониторинга рака легкого.Recent studies have shown that changes in the level and composition of circulating nucleic acids (DNA, miRNAs) are associated with the development of lung cancer, disease progression and survival [5, 6]. It has been shown that an increase in the level of the tumor marker (in particular, methylated sequences in the composition of circulating blood DNA) is several months ahead of clinical symptoms and the possibility of instrumental methods for confirming the recurrence of the disease [7]. However, despite the growing number of studies on circulating miRNAs, there is still no consensus on which miRNA panel can be used for clinical diagnosis and monitoring of lung cancer.
Наиболее близким к предлагаемому способу мониторинга противоопухолевого лечения немелкоклеточного рака легкого является способ, выбранный за прототип [8], включающий проведение сравнительного исследования профилей экспрессии микроРНК у больных раком легкого до лечения и через 7-10 дней после хирургического лечения. В процессе работы авторы определяли уровни 90 микроРНК в плазме крови с использованием коммерчески доступного анализа, основанного на ОТ-ПЦР (miRCURY LNA, "Exiqon", Дания). Было показано, что уровни пяти микроРНК: 205, 19а, 19b, 30b и 20а - существенно снижались после оперативного вмешательства и свидетельствовали о ремиссии заболевания. Однако для мониторинга указанный способ имеет ряд недостатков: 1) область применения его ограничена - с помощью известного способа можно проводить мониторинг эффективности лечения только у больных с локализованными формами плоскоклеточного рака легкого, нет данных по больным с аденокарциномой и при наличии местнораспространенных форм НМРЛ;Closest to the proposed method for monitoring antitumor treatment of non-small cell lung cancer is the method selected for the prototype [8], including a comparative study of miRNA expression profiles in patients with lung cancer before treatment and 7-10 days after surgical treatment. In the process, the authors determined the levels of 90 microRNA in blood plasma using a commercially available analysis based on RT-PCR (miRCURY LNA, "Exiqon", Denmark). It was shown that the levels of five miRNAs: 205, 19a, 19b, 30b, and 20a, decreased significantly after surgery and indicated a remission of the disease. However, for monitoring this method has several drawbacks: 1) its scope is limited - using the known method, it is possible to monitor the effectiveness of treatment only in patients with localized forms of squamous cell lung cancer, there are no data on patients with adenocarcinoma and in the presence of locally advanced forms of NSCLC;
2) использование двух контрольных точек (до и после операции) дает возможность мониторировать изменение уровня микроРНК непосредственно после хирургического удаления опухоли, но не позволяет осуществлять регулярную и своевременную диагностику на протяжении первых 24-х месяцев наблюдения, которые являются самыми критичными с позиций риска развития прогрессирования заболевания;2) the use of two control points (before and after surgery) makes it possible to monitor changes in microRNA levels immediately after surgical removal of the tumor, but does not allow regular and timely diagnosis during the first 24 months of observation, which are the most critical from the standpoint of the risk of progression diseases
3) исследование профиля экспрессии микроРНК с использованием данного коммерческого анализа позволяет проводить определение уровня экспрессии одновременно нескольких микроРНК (90 мишеней), но требует большого количества исходного генетического материала (до 500 нг РНК);3) the study of the miRNA expression profile using this commercial analysis allows the determination of the expression level of several miRNAs simultaneously (90 targets), but requires a large amount of initial genetic material (up to 500 ng RNA);
4) высокая стоимость проведения подобного исследования (20000-25000 руб.);4) the high cost of conducting such a study (20,000-25,000 rubles);
5) трудоемкость данного способа для анализа экспрессии микроРНК.5) the complexity of this method for analysis of miRNA expression.
Новый технический результат - повышение точности ранней диагностики прогрессирования немелкоклеточного рака легкого за счет проведения регулярного сравнительного анализа целевых профилей экспрессии микроРНК на этапах динамического наблюдения.A new technical result is an increase in the accuracy of early diagnosis of non-small cell lung cancer progression through regular comparative analysis of target profiles of miRNA expression at the stages of dynamic observation.
Для достижения нового технического результата в способе мониторинга эффективности противоопухолевой терапии немелкоклеточного рака легкого, включающем определение уровней экспрессии микроРНК-маркеров в периферической крови больного после хирургического лечения, определяют уровни микроРНК-19б, микроРНК-125б и сочетания микроРНК-125б/микроРНК-19б через 2 недели, 3 и 6 месяцев, 1 и 2 года после проведенного лечения и при получении линейной модели динамики изменения уровней экспрессии микроРНК, характеризующейся постепенным увеличением микроРНК-19б, снижением микроРНК-125б и сочетания микроРНК-125б/микроРНК-19б относительно исходных значений, определяют прогрессирование заболевания, а при получении квадратичной модели динамики изменения уровней экспрессии микроРНК, характеризующейся чередованием увеличения или снижения уровней экспрессии исследуемых микроРНК на снижение, либо увеличение аналогичных показателей относительно исходных значений, определяют ремиссию заболевания.To achieve a new technical result in a method for monitoring the effectiveness of antitumor therapy of non-small cell lung cancer, including determining the expression levels of miRNA markers in the patient’s peripheral blood after surgical treatment, miRNA-19b, miRNA-125b and miRNA-125b / miRNA-19b combinations are determined in 2 weeks, 3 and 6 months, 1 and 2 years after treatment and upon receipt of a linear model of the dynamics of changes in miRNA expression levels, characterized by a gradual increase in micro NK-19b, a decrease in miRNA-125b and a combination of miRNA-125b / miRNA-19b relative to the initial values, determine the progression of the disease, and when obtaining a quadratic model of the dynamics of changes in the levels of expression of miRNAs, characterized by alternating the increase or decrease in the expression levels of the studied miRNAs to decrease or increase similar indicators relative to the initial values, determine the remission of the disease.
Изобретение соответствует критерию "новизна", так как для мониторинга НМРЛ ранее не использовались микроРНК-196, микроРНК-125б и сочетание микроРНК-125б/микроРНК-19б в указанной схеме и последовательности.The invention meets the criterion of "novelty", since miRNA-196, miRNA-125b and the combination of miRNA-125b / miRNA-19b in the indicated scheme and sequence have not been used to monitor NSCLC.
Изобретение соответствует критерию "изобретательский уровень", так как оно явным образом не следует для специалиста из уровня техники.The invention meets the criterion of "inventive step", as it clearly does not follow for a specialist from the prior art.
Изобретение соответствует критерию "промышленно применимо", так как оно может использоваться в клинической практике для мониторинга НМРЛ.The invention meets the criterion of "industrially applicable", as it can be used in clinical practice for monitoring NSCLC.
Способ осуществляют следующим образом: Больным НМРЛ проводят хирургическое или комбинированное лечение, включающее предоперационную химиолучевую терапию и радикальную операцию. В контрольные точки: через 2 недели, 3 и 6 месяцев, 1 и 2 года после оперативного вмешательства - проводят клинико-инструментальное обследование и исследуют профили экспрессии микроРНК. Методика определения молекулярно-генетических маркеров включает 2 этапа:The method is as follows: NSCLC patients undergo surgical or combined treatment, including preoperative chemoradiotherapy and radical surgery. At the control points: 2 weeks, 3 and 6 months, 1 and 2 years after surgery - they conduct a clinical and instrumental examination and examine the miRNA expression profiles. The method for determining molecular genetic markers includes 2 stages:
1) Получение плазмы крови и выделение микроРНК. Образцы венозной крови стабилизируют и фракционируют на плазму и клетки крови в течение 4 часов с момента ее забора. Образцы центрифугируют 20 мин при 400×g, затем переносят плазму в отдельные пробирки и центрифугируют повторно 20 мин при 1200×g. Полученный супернатант аликвотируют и хранят при t -80°С. Непосредственно перед проведением молекулярно-генетического анализа замороженные образцы плазмы крови размораживают и центрифугируют 5 мин при 3000×g для удаления криопреципитата. Полученный супернатант используют для выделения микроРНК. МикроРНК выделяют с помощью метода, основанного на фенол-хлороформной экстракции [9]. Плазму крови инкубируют с однофазным экстракционным раствором. Тотальную микроРНК очищают на стекловолокнистых фильтрах (BioSilica Ltd, г.Новосибирск, Россия), затем проводят переосаждение РНК с использованием гликогена и растворение в воде (без РНК-аз). 1) Obtaining blood plasma and the allocation of miRNAs. Venous blood samples are stabilized and fractionated into plasma and blood cells within 4 hours from the time of its collection. Samples are centrifuged for 20 min at 400 × g, then the plasma is transferred to separate tubes and centrifuged again for 20 min at 1200 × g. The resulting supernatant is aliquoted and stored at t -80 ° C. Immediately before molecular genetic analysis, frozen blood plasma samples are thawed and centrifuged for 5 min at 3000 × g to remove cryoprecipitate. The resulting supernatant is used to isolate miRNAs. MicroRNAs are isolated using a phenol-chloroform extraction method [9]. Blood plasma is incubated with a single-phase extraction solution. Total microRNA is purified on glass fiber filters (BioSilica Ltd, Novosibirsk, Russia), then RNA is reprecipitated using glycogen and dissolved in water (without RNAse).
2) Реакция обратной транскрипции и количественная ПЦР в режиме реального времени. Реакцию обратной транскрипции проводят по методике, описанной ранее [10]. Каждую реакцию проводят в конечном объеме 10 мкл, содержащем 3 мкл РНК, 50 нМ специфического праймера для каждой микроРНК, 1 U ингибитора RiboLockRNAse (Fermentas, Vilnius, Lithuania), 100 U MMLV обратной транскриптазы (Fermentas, Vilnius, Lithuania), 1×MMLV буфер и 250 мкМ dNTP. Условия реакции были следующими: 16°С - 30 мин, 42°С - 30 мин, 70°С - 10 мин. Далее полученную кДНК используют для постановки количественной TaqMan ПЦР. Амплификацию осуществляют в приборе iCycler iQ5 Real-Time PCR Detection System (Bio-Rad, USA). Анализ проводят в дублях и в качестве стандарта оценивают уровень экспрессии микроРНК-16. Каждую реакцию ставят в общем объеме 30 мкл, содержащем компоненты: 2,5 мкл продукта реакции обратной транскрипции, 1,25 U Taq ДНК полимеразы (BiolabMix, Россия), 1×ПЦР-буфер, 4 мМ MgCl2, 250 мкМ dNTP, 600 нМ прямой праймер, 800 нМ универсальный обратный праймер и 300 нМ специфической TaqMan пробы (табл.1). Амплификацию проводят в течение 50 циклов в следующем режиме: 95°С - 15 сек, 60°С - 60 сек. Специфические праймеры и олигонуклеотидные пробы для реакции обратной транскрипции и количественной ПЦР в режиме реального времени синтезируют в лаборатории медицинской химии (ИХБФМ СО РАН, г. Новосибирск).2) Reverse transcription reaction and quantitative real-time PCR. The reverse transcription reaction is carried out according to the method described previously [10]. Each reaction is carried out in a final volume of 10 μl containing 3 μl of RNA, 50 nM specific primer for each microRNA, 1 U RiboLockRNAse inhibitor (Fermentas, Vilnius, Lithuania), 100 U MMLV reverse transcriptase (Fermentas, Vilnius, Lithuania), 1 × MMLV buffer and 250 μM dNTP. The reaction conditions were as follows: 16 ° C for 30 minutes, 42 ° C for 30 minutes, 70 ° C for 10 minutes. Next, the obtained cDNA is used to quantify TaqMan PCR. Amplification is carried out in an iCycler iQ5 Real-Time PCR Detection System (Bio-Rad, USA). The analysis is performed in duplicates and the level of expression of miRNA-16 is evaluated as a standard. Each reaction was delivered in a total volume of 30 μl containing the components: 2.5 μl of the product of the reverse transcription reaction, 1.25 U Taq DNA polymerase (BiolabMix, Russia), 1 × PCR buffer, 4 mM MgCl 2 , 250 μM dNTP, 600 nM forward primer, 800 nM universal reverse primer and 300 nM specific TaqMan samples (Table 1). Amplification is carried out for 50 cycles in the following mode: 95 ° C - 15 sec, 60 ° C - 60 sec. Specific primers and oligonucleotide samples for the reverse transcription reaction and quantitative PCR in real time are synthesized in the laboratory of medical chemistry (IHBFM SB RAS, Novosibirsk).
Уровень экспрессии микроРНК рассчитывают по методу dCt. В качестве внутреннего стандарта используют микроРНК-16, уровень экспрессии которой относительно стабилен. В связи с этим микроРНК-16 выступает в качестве подходящего рефери при анализе профиля микроРНК в плазме/сыворотке [11]. Таблица 1. Последовательности праймеров и проб, использованных для ПЦР в реальном времениThe miRNA expression level is calculated by the dCt method. MicroRNA-16, the expression level of which is relatively stable, is used as an internal standard. In this regard, miRNA-16 acts as a suitable referee in the analysis of the miRNA profile in plasma / serum [11]. Table 1. The sequence of primers and samples used for real-time PCR
Обоснование способа: Разработка методов, пригодных для выявления НМРЛ на доклинической или ранней стадии по анализу маркеров в крови и других биологических жидкостях, представляет собой важнейшее направление в современной онкологии. С указанных позиций наиболее перспективными кандидатами для мониторинга НМРЛ являются молекулярно-генетические маркеры на основе циркулирующих в крови внеклеточных нуклеиновых кислот, представленных ДНК, РНК и микроРНК.Justification of the method: The development of methods suitable for the detection of NSCLC at the preclinical or early stage in the analysis of markers in blood and other biological fluids is a major area in modern oncology. From these positions, the most promising candidates for monitoring NSCLC are molecular genetic markers based on extracellular nucleic acids circulating in the blood, represented by DNA, RNA, and miRNAs.
В последние годы выявлено большое количество циркулирующих микроРНК, ассоциированных с раком легкого [6]. Важно, что по изменению уровня экспрессии микроРНК можно на несколько месяцев раньше выявить развитие или прогрессирование НМРЛ, чем при проведении клинико-инструментальных исследований. В связи с этим в мировой науке стремительно увеличивается количество исследований по циркулирующим микроРНК, которые проводятся с целью ранней диагностики рака легкого, определения прогноза, оценки эффективности лечения и выживаемости [8, 12, 13]. Необходимо отметить, что менее всего освещены вопросы мониторинга НМРЛ. Так, в доступной литературе отсутствует четкое мнение о том, какие микроРНК необходимо исследовать и в какие временные интервалы. Это может быть обусловлено рядом причин как технического, так и общего характера, а именно: отсутствие универсальных эффективных протоколов подготовки образцов, выделения и анализа микроРНК, разные способы нормировки данных, не всегда корректно формируются группы больных (ввиду недоучета патогенетически значимых признаков) и др.In recent years, a large number of circulating miRNAs associated with lung cancer have been identified [6]. It is important that by changing the level of microRNA expression it is possible to detect the development or progression of NSCLC a few months earlier than when conducting clinical and instrumental studies. In this regard, the number of studies on circulating microRNAs, which are carried out with the aim of early diagnosis of lung cancer, determining the prognosis, evaluating the effectiveness of treatment and survival, is rapidly increasing in world science [8, 12, 13]. It should be noted that the issues of monitoring NSCLC are least covered. So, in the available literature there is no clear opinion about which microRNAs should be studied and at what time intervals. This may be due to a number of reasons, both technical and general, namely: the lack of universal effective protocols for sample preparation, isolation and analysis of microRNAs, different methods of data normalization, groups of patients are not always correctly formed (due to underestimation of pathogenetically significant signs), etc.
Отбор микроРНК для использования их в качестве маркеров в предлагаемом способе осуществлялся по следующим критериям: а) доказано их присутствие в плазме крови; б) уровень экспрессии этих микроРНК значимо отличается (увеличение уровня) у больных раком легкого по сравнению со здоровыми донорами [14, 15]. Так, были выбраны следующие микроРНК-мишени:The selection of miRNAs for use as markers in the proposed method was carried out according to the following criteria: a) their presence in the blood plasma was proved; b) the expression level of these miRNAs is significantly different (increase in level) in patients with lung cancer compared with healthy donors [14, 15]. So, the following microRNA targets were selected:
1) микроРНК-19b – опухоль, ассоциированная микроРНК, усиливает пролиферацию и ангиогенез посредством ТР53, BCL2, PTEN и Prkaa-1 (согласно базе данных miRTarBase - http://mirtarbase.mbc.nctu.edu.tw).1) miRNA-19b - a tumor associated with miRNA that enhances proliferation and angiogenesis through TP53, BCL2, PTEN and Prkaa-1 (according to the miRTarBase database - http://mirtarbase.mbc.nctu.edu.tw).
2) микроРНК-125b – опухоль, ассоциированная микроРНК, принимает участие в регуляции клеточного цикла и апоптоза через р53, ВАК и erbВ2-3 (согласно базе данных miRTarBase - http://mirtarbase.mbc.nctu.edu.tw).2) miRNA-125b - a tumor associated with miRNA, takes part in the regulation of the cell cycle and apoptosis through p53, VAC and erbB2-3 (according to the miRTarBase database - http://mirtarbase.mbc.nctu.edu.tw).
3) сочетание микроРНК-125б/микроРНК-19б.3) a combination of miRNA-125b / miRNA-19b.
Анализ изменения уровня экспрессии вышеуказанных микроРНК в крови больных НМРЛ на этапах динамического наблюдения - через 2 недели, 3 и 6 месяцев, 1 и 2 года после хирургического лечения позволяет точно и своевременно диагностировать рецидив заболевания на ранней (субклинической) стадии, когда опухоль еще не визуализируется при проведении стандартного инструментального обследования и не имеет клинических проявлений. При выявлении маркерного рецидива НМРЛ больным показано углубленное клинико-инструментальное обследование, на основании которого вырабатывается стратегия дальнейшего противоопухолевого лечения.Analysis of changes in the level of expression of the above microRNAs in the blood of patients with NSCLC at the stages of dynamic observation - 2 weeks, 3 and 6 months, 1 and 2 years after surgical treatment allows accurate and timely diagnosis of disease recurrence at an early (subclinical) stage when the tumor is not yet visualized during a standard instrumental examination and does not have clinical manifestations. When detecting marker recurrence of NSCLC, patients are shown an in-depth clinical and instrumental examination, on the basis of which a strategy for further antitumor treatment is developed.
Клинический пример 1: Больной С., 62 года, под наблюдением в Томском НИИ онкологии с 10.03.2009 г. При обследовании установлен диагноз: Центральный рак н/долевого бронха слева с переходом на междолевую шпору и главный бронх. Ст. III, T3N1M0. Гистология - Плоскоклеточный неороговевающий рак низкой степени дифференцировки. В плане комбинированного лечения проведено 2 курса химиотерапии по схеме паклитаксел/карбоплатин с эффектом - стабилизация опухолевого процесса. 15.07.2009 г.выполнена операция - Комбинированная пневмонэктомия слева с резекцией перикарда и левого предсердия. В послеоперационном периоде в запланированные контрольные точки согласно предлагаемому способу проводили забор крови на молекулярно-генетические исследования (табл. 2) параллельно с клинико-инструментальным обследованием. Через 6 месяцев после операции выявлена линейная зависимость в нарастании уровня экспрессии микроРНК-19b и снижении уровня экспрессии уровня микроРНК-125b и сочетания микроРНК-125б/микроРНК-19б. Состояние больного было удовлетворительное, жалоб не предъявлял, объективный статус - без отрицательной динамики. При проведении комплексного инструментального обследования - признаков прогрессирования заболевания выявлено не было. По прошествии 3-х месяцев у больного появились боли в груди справа и сухой кашель, отмечалась потеря веса. Проведено инструментальное обследование, по результатам которого диагностирован отдаленный метастаз в нижнюю долю правого легкого. В связи с этим больной получал паллиативную химиолучевую терапию, однако через 6 месяцев умер от прогрессирования основного заболевания.Clinical example 1: Patient S., 62 years old, under observation at the Tomsk Research Institute of Oncology since 03/10/2009. During the examination, the diagnosis was established: Central cancer of the n / lobar bronchus on the left with a transition to the interlobar spur and the main bronchus. Art. III, T 3 N 1 M 0 . Histology - Squamous non-keratinizing cancer of a low degree of differentiation. In terms of combined treatment, 2 courses of chemotherapy were performed according to the paclitaxel / carboplatin scheme with the effect of stabilization of the tumor process. July 15, 2009 the operation was performed - Combined pneumonectomy on the left with resection of the pericardium and left atrium. In the postoperative period, at the planned control points according to the proposed method, blood was taken for molecular genetic studies (Table 2) in parallel with the clinical and instrumental examination. 6 months after the operation, a linear relationship was revealed in the increase in the expression level of miRNA-19b and the decrease in the expression level of miRNA-125b and miRNA-125b / miRNA-19b combination. The patient's condition was satisfactory, did not present complaints, objective status - without negative dynamics. When conducting a comprehensive instrumental examination - there were no signs of disease progression. After 3 months, the patient developed chest pains on the right and a dry cough, weight loss was noted. An instrumental examination was carried out, according to the results of which distant metastasis was diagnosed in the lower lobe of the right lung. In this regard, the patient received palliative chemoradiotherapy, but after 6 months he died from the progression of the underlying disease.
Клинический пример 2:Clinical example 2:
Больной Т., 57 лет, под наблюдением в Томском НИИ онкологии с 16.06.2009 г. При обследовании установлен диагноз: Центральный рак н/долевого бронха справа с переходом на промежуточный и с/долевой бронх. Ст.III, T3N2M0. Гистология №17225-41/09 от 24.09.09 – Умеренно дифференцированный неороговевающий плоскоклеточный рак с метастазами в 4 бифуркационных лимфоузла. В рамках комбинированного лечения проведено 2 курса химиотерапии по схеме паклитаксел/карбоплатин с эффектом - частичная регрессия опухолевого процесса. 17.09.2009 г. выполнена операция - Пневмонэктомия справа с интраоперационной лучевой терапией в дозе 15 Гр на фоне радиосенсибилизации гемзаром. В послеоперационном периоде согласно предлагаемому способу проводили забор крови на молекулярно-генетические исследования (табл. 3) параллельно с клинико-инструментальным обследованием. Динамика изменений уровня экспрессии микроРНК была представлена квадратичной моделью (увеличение/снижение уровня экспрессии микроРНК чередовалось со снижением/увеличением показателя относительно исходных значений). По результатам комплексного клинико-инструментального обследования, проводимого на протяжении 2-х лет, признаков прогрессирования НМРЛ выявлено не было.Patient T., 57 years old, under observation at the Tomsk Scientific Research Institute of Oncology since 06.16.2009. The diagnosis was established: Central cancer of the n / lobar bronchus on the right with a transition to the intermediate and s / lobar bronchus. St. III, T 3 N 2 M 0 . Histology No. 17225-41 / 09 of 09.24.09 - Moderately differentiated non-keratinizing squamous cell carcinoma with metastases in 4 bifurcation lymph nodes. As part of the combined treatment, 2 courses of chemotherapy were performed according to the paclitaxel / carboplatin regimen with the effect of partial regression of the tumor process. September 17, 2009, an operation was performed - Pneumonectomy on the right with intraoperative radiation therapy at a dose of 15 Gy against the background of gemzar radiosensitization. In the postoperative period according to the proposed method, blood was taken for molecular genetic studies (Table 3) in parallel with clinical and instrumental examination. The dynamics of changes in the level of miRNA expression was represented by a quadratic model (an increase / decrease in the level of miRNA expression was alternated with a decrease / increase in the index relative to the initial values). According to the results of a comprehensive clinical and instrumental examination conducted over the course of 2 years, there were no signs of progression of NSCLC.
Данным способом мониторинг эффективности противоопухолевого лечения НМРЛ после хирургического лечения проведен у 4 больных в возрасте 57-62 года. В 3 случаях больные - мужчины, в 1 случае - женщина. Распространенность опухолевого процесса соответствовала III стадии. По гистологическому типу преобладал плоскоклеточный рак (3 случая) над аденокарциномой (1 случай). Хирургическое лечение проведено у всех больных в радикальном объеме - выполнено 3 пульмонэктомии и 1 лобэктомия. При динамическом наблюдении из 4-х больных прогрессирование НМРЛ выявлено у 2-х больных: в обоих случаях на 6 месяце зафиксирован маркерный рецидив - динамика изменений уровней экспрессии микроРНК была представлена линейной моделью (постепенное увеличение микроРНК-19б, снижение микроРНК-125б и сочетания микроРНК-19б-микроРНК-125б относительно исходных значений), при этом по данным инструментального обследования рецидив заболевания зафиксирован только через 9 месяцев после операции. В случае ремиссии НМРЛ после проведенного лечения у 2-х больных динамика изменений уровней экспрессии микроРНК была представлена квадратичной моделью (увеличение или снижение уровней экспрессии микроРНК чередовались со снижением либо увеличением аналогичных показателей относительно исходных значений).In this way, the effectiveness of the antitumor treatment of NSCLC after surgical treatment was monitored in 4 patients aged 57-62 years. In 3 cases, patients are men, in 1 case - a woman. The prevalence of the tumor process corresponded to stage III. According to the histological type, squamous cell carcinoma (3 cases) prevailed over adenocarcinoma (1 case). Surgical treatment was performed in all patients in a radical volume - 3 pulmonectomies and 1 lobectomy were performed. During dynamic observation of 4 patients, the progression of NSCLC was detected in 2 patients: in both cases, a marker relapse was recorded at 6 months - the dynamics of changes in miRNA expression levels was represented by a linear model (gradual increase in miRNA-19b, decrease in miRNA-125b and miRNA combination -19b-miRNA-125b relative to the initial values), while according to the instrumental examination, the disease recurrence was recorded only 9 months after surgery. In the case of NSCLC remission after treatment in 2 patients, the dynamics of changes in miRNA expression levels was represented by a quadratic model (an increase or decrease in miRNA expression levels alternated with a decrease or increase in similar indicators relative to the initial values).
На основании проведенного исследования было показано, что при прогрессировании заболевания динамика изменений уровня экспрессии микроРНК в плазме крови больного позволяет на 3 месяца раньше диагностировать рецидив НМРЛ, чем клинико-инструментальные методы обследования, в результате чего анализ уровня экспрессии микроРНК-19б, микроРНК-125б и их сочетания может эффективно применяться для мониторинга рака легких.Based on the study, it was shown that with the progression of the disease, the dynamics of changes in the level of miRNA expression in the patient's blood plasma allows diagnosing NSCLC recurrence 3 months earlier than clinical and instrumental examination methods, as a result of which the analysis of the miRNA-19b, miRNA-125b expression level and combinations thereof can be effectively used to monitor lung cancer.
Таким образом, предлагаемый способ мониторинга основан на экспериментальных и клинических исследованиях. Как показали клинические исследования, использование данного способа мониторинга позволяет достичь нового технического результата, а именно повысить точность ранней диагностики прогрессирования немелкоклеточного рака легкого за счет проведения регулярного сравнительного анализа целевых профилей экспрессии микроРНК на этапах динамического наблюдения.Thus, the proposed monitoring method is based on experimental and clinical studies. As clinical studies have shown, the use of this monitoring method allows to achieve a new technical result, namely, to increase the accuracy of early diagnosis of non-small cell lung cancer progression by conducting a regular comparative analysis of target profiles of miRNA expression at the stages of dynamic observation.
Источники информацииInformation sources
1. Злокачественные новообразования в России в 2011 году (заболеваемость и смертность) / Под ред. В.И. Чиссова, В.В. Старинского, Г.В. Петровой. М.: ФГБУ «МНИОИ им. П.А. Герцена» Минздрава России. - 2013. - 289 с.1. Malignant neoplasms in Russia in 2011 (morbidity and mortality) / Ed. IN AND. Chissova, V.V. Starinsky, G.V. Petrova. M .: Federal State Budgetary Institution "Moscow P.A. Herzen »Ministry of Health of Russia. - 2013 .-- 289 p.
2. Пономарева А.А., Рыкова Е.Ю., Чердынцева Н.В. и др. Сравнительный анализ эпигенетических и белковых маркеров в крови больных немелкоклеточным раком легкого // Сибирский онкологический журнал. - 2011. - №5 (47). - С. 40-45.2. Ponomareva A.A., Rykova E.Yu., Cherdyntseva N.V. et al. Comparative analysis of epigenetic and protein markers in the blood of patients with non-small cell lung cancer // Siberian Oncological Journal. - 2011. - No. 5 (47). - S. 40-45.
3. Yuxia М., Zhennan Т., Wei Z. Circulating miR-125b is a novel biomarker for screening non-small cell lung cancer and predicts poor prognosis // J. Cancer Res. Clin. Oncol. - 2012. - Vol.38. - P. 2045-2050.3. Yuxia M., Zhennan T., Wei Z. Circulating miR-125b is a novel biomarker for screening non-small cell lung cancer and predicts poor prognosis // J. Cancer Res. Clin. Oncol. - 2012 .-- Vol.38. - P. 2045-2050.
4. Chen X., Hu Z., Wang W. et al. Identification of ten serum microRNAs from a genome-wide serum microRNA expression profile as novel noninvasive biomarkers for non small cell lung cancer diagnosis // Int. J. Cancer. - 2012. - Vol.130. - P. 1620-1628.4. Chen X., Hu Z., Wang W. et al. Identification of ten serum microRNAs from a genome-wide serum microRNA expression profile as novel noninvasive biomarkers for non small cell lung cancer diagnosis // Int. J. Cancer. - 2012 .-- Vol. 130. - P. 1620-1628.
5. Vlassov V.V., Laktionov P.P., Rykova E.Y. Circulating nucleic acids as a potential source for cancer biomarkers // Curr. Mol. Med. - 2010. - Vol.10. - P. 142-165.5. Vlassov V.V., Laktionov P.P., Rykova E.Y. Circulating nucleic acids as a potential source for cancer biomarkers // Curr. Mol. Med. - 2010 .-- Vol.10. - P. 142-165.
6. Власов B.B., Рыкова Е.Ю., Пономарева A.A. и др. Циркулирующие микроРНК крови при раке легкого: перспективы использования для диагностики, прогноза и оценки эффективности терапии // Молекулярная биология. - 2015. - Т. 49. - №1. - С. 55-66.6. Vlasov B.B., Rykova E.Yu., Ponomareva A.A. et al. Circulating blood microRNAs in lung cancer: prospects for use in the diagnosis, prognosis and evaluation of the effectiveness of therapy // Molecular Biology. - 2015. - T. 49. - No. 1. - S. 55-66.
7. Ponomaryova A., Rykova Е., Cherdyntseva N. et al. Potentialities of aberrantly methylated circulating DNA for diagnostics and post-treatment follow-up of lung cancer patients // Lung Cancer. - 2013. - Vol.81. - P. 397-403.7. Ponomaryova A., Rykova E., Cherdyntseva N. et al. Potentialities of aberrantly methylated circulating DNA for diagnostics and post-treatment follow-up of lung cancer patients // Lung Cancer. - 2013 .-- Vol.81. - P. 397-403.
8. Aushev V.N., Zborovskaya I.B., Laktionov K.K. et al. Comparisons of microRNA patterns in plasma before and after tumor removal reveal new biomarkers of lung squamous cell carcinoma // PLoS One. - 2013. - Vol.8. - P. e78649.8. Aushev V.N., Zborovskaya I.B., Laktionov K.K. et al. Comparisons of microRNA patterns in plasma before and after tumor removal reveal new biomarkers of lung squamous cell carcinoma // PLoS One. - 2013 .-- Vol. 8. - P. e78649.
9. Zaporozhchenko I.A., Morozkin E.S., Skvortsova Т.Е. et al. A phenol-free method for isolation of microRNA from biological fluids // Anal. Biochem. - 2015. - Vol.479. - P. 43-47.9. Zaporozhchenko I.A., Morozkin E.S., Skvortsova T.E. et al. A phenol-free method for isolation of microRNA from biological fluids // Anal. Biochem. - 2015 .-- Vol.479. - P. 43-47.
10. Chen X., Ba Y., Ma L. et al. Characterization of microRNAs in serum: A novel class of biomarkers for diagnosis of cancer and other diseases // Cell Res. - 2008. - Vol.18. - P. 997-1006.10. Chen X., Ba Y., Ma L. et al. Characterization of microRNAs in serum: A novel class of biomarkers for diagnosis of cancer and other diseases // Cell Res. - 2008 .-- Vol. 18. - P. 997-1006.
11. Huang Z., Huang D., Ni S. et al. Plasma microRNAs are promising novel biomarkers for early detection of colorectal cancer // Int. J. Cancer. - 2010. - Vol.127. - P. 118.11. Huang Z., Huang D., Ni S. et al. Plasma microRNAs are promising novel biomarkers for early detection of colorectal cancer // Int. J. Cancer. - 2010 .-- Vol. 127. - P. 118.
12. Hu Z., Chen X., Zhao Y. et al. Serum microRNA signatures identified in a genome-wide serum microRNA expression profiling predict survival of non-small cell lung cancer // J. Clin. Oncol. - 2010. - Vol.28. - P. 1721-1726.12. Hu Z., Chen X., Zhao Y. et al. Serum microRNA signatures identified in a genome-wide serum microRNA expression profiling predict survival of non-small cell lung cancer // J. Clin. Oncol. - 2010 .-- Vol. 28. - P. 1721-1726.
13. Le H.B., Zhu W.Y., Chen D.D. et al. Evaluation of dynamic change of serum miR-21 and miR-24 in pre- and postoperative lung carcinoma patients // Med. Oncol. - 2012. - Vol.29. - P. 3190-3197.13. Le H.B., Zhu W.Y., Chen D.D. et al. Evaluation of dynamic change of serum miR-21 and miR-24 in pre- and postoperative lung carcinoma patients // Med. Oncol. - 2012 .-- Vol.29. - P. 3190-3197.
14. Markou A., Sourvinou I., Vorkas P.A., et al. Clinical evaluation of microRNA expression profiling in non small cell lung cancer // Lung Cancer. - 2013. - Vol.8. - P. 388-396.14. Markou A., Sourvinou I., Vorkas P.A., et al. Clinical evaluation of microRNA expression profiling in non small cell lung cancer // Lung Cancer. - 2013 .-- Vol. 8. - P. 388-396.
15. Vosa U., Vooder Т., Kolde R. et al. Meta-analysis of microRNA expression in lung cancer // Int. J. Cancer. - 2013. - Vol.132. - P. 2884-2893.15. Vosa U., Vooder T., Kolde R. et al. Meta-analysis of microRNA expression in lung cancer // Int. J. Cancer. - 2013 .-- Vol.132. - P. 2884-2893.
Приложениеapplication
Таблица 1. Последовательности праймеров и проб, использованных для ПЦР в реальном времени.Table 1. The sequence of primers and samples used for real-time PCR.
Примечания: RT - праймер для обратной транскрипции; F - прямой праймер; Pr - олигонуклеотидная пробаNotes: RT - primer for reverse transcription; F is a direct primer; Pr - oligonucleotide probe
Таблица 2. Динамика показателей уровня микроРНК при прогрессировании, dCtTable 2. Dynamics of microRNA level indicators during progression, dCt
Таблица 3. Динамика показателей уровня микроРНК при ремиссии, dCtTable 3. Dynamics of microRNA level indicators in remission, dCt
Claims (1)
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2015132291A RU2611340C2 (en) | 2015-08-03 | 2015-08-03 | Method of monitoring efficiency of anticancer therapy of non-small cell lung cancer |
| EA201600668A EA030290B1 (en) | 2015-08-03 | 2016-10-21 | Method of monitoring efficiency of anticancer therapy of non-small cell lung cancer |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2015132291A RU2611340C2 (en) | 2015-08-03 | 2015-08-03 | Method of monitoring efficiency of anticancer therapy of non-small cell lung cancer |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2015132291A RU2015132291A (en) | 2017-02-06 |
| RU2611340C2 true RU2611340C2 (en) | 2017-02-21 |
Family
ID=58228606
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2015132291A RU2611340C2 (en) | 2015-08-03 | 2015-08-03 | Method of monitoring efficiency of anticancer therapy of non-small cell lung cancer |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| EA (1) | EA030290B1 (en) |
| RU (1) | RU2611340C2 (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2733160C1 (en) * | 2019-04-09 | 2020-09-29 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Томский национальный исследовательский медицинский центр" Российской академии наук" (Томский НИМЦ) | Method for prediction of risk of hematogenous metastases in non-small-cell lung cancer patients after operation |
| RU2813653C1 (en) * | 2023-02-03 | 2024-02-14 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Томский национальный исследовательский медицинский центр" Российской академии наук ("Томский НИМЦ") | Method of early diagnosis of rectal cancer relapses while monitoring course of disease |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2021620C1 (en) * | 1991-08-12 | 1994-10-15 | Франциянц Елена Михайловна | Method of determination of antitumorigenic therapy effectiveness |
| RU2151399C1 (en) * | 1998-07-20 | 2000-06-20 | Ростовский научно-исследовательский онкологический институт МЗ РФ | Method for evaluating effectiveness of antitumoral therapy |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2365339C1 (en) * | 2008-05-12 | 2009-08-27 | Федеральное государственное учреждение "Научно-исследовательский институт онкологии имени Н.Н. Петрова Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи" | Method of combined endoscopic control of malignant tumours of trachea and-or bronchuses treatment efficiency |
| CN101824475B (en) * | 2010-03-31 | 2012-08-08 | 华东师范大学 | Mi RNA marker related to side effect of platinum-based chemotherapy to advanced NSCLC patient and application thereof |
| RU2472161C1 (en) * | 2011-07-22 | 2013-01-10 | Федеральное государственное учреждение "Московский научно-исследовательский онкологический институт им. П.А. Герцена Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации" (ФГУ "МНИОИ им. П.А. Герцена" Минздравсоцразвития России) | Method for estimating risk of progressing non-small-cell lung cancer following surgical management |
-
2015
- 2015-08-03 RU RU2015132291A patent/RU2611340C2/en not_active IP Right Cessation
-
2016
- 2016-10-21 EA EA201600668A patent/EA030290B1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2021620C1 (en) * | 1991-08-12 | 1994-10-15 | Франциянц Елена Михайловна | Method of determination of antitumorigenic therapy effectiveness |
| RU2151399C1 (en) * | 1998-07-20 | 2000-06-20 | Ростовский научно-исследовательский онкологический институт МЗ РФ | Method for evaluating effectiveness of antitumoral therapy |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Aushev V.N., Zborovskaya I.B., Laktionov K.K. et al. Comparisons of microRNA patterns in plasma before and after tumor removal reveal new biomarkers of lung squamous cell carcinoma // PLoS One. 2013. Vol. 8. P. e78649.. * |
| Wang ZX et al. Prognostic significance of serum miRNA-21 expression in human non-small cell lung cancer. J Surg Oncol. 2011 Dec;104(7):847-51. PMID: 21721011. Kouji Banno et al. MicroRNA in Cervical Cancer: OncomiRs and Tumor Suppressor miRs in Diagnosis and Treatment. The Scientific World Journal. Volume 2014 (2014).. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2733160C1 (en) * | 2019-04-09 | 2020-09-29 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Томский национальный исследовательский медицинский центр" Российской академии наук" (Томский НИМЦ) | Method for prediction of risk of hematogenous metastases in non-small-cell lung cancer patients after operation |
| RU2813653C1 (en) * | 2023-02-03 | 2024-02-14 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Томский национальный исследовательский медицинский центр" Российской академии наук ("Томский НИМЦ") | Method of early diagnosis of rectal cancer relapses while monitoring course of disease |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EA201600668A2 (en) | 2017-02-28 |
| EA030290B1 (en) | 2018-07-31 |
| RU2015132291A (en) | 2017-02-06 |
| EA201600668A3 (en) | 2017-05-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20210130905A1 (en) | Micro-rna biomarkers and methods of using same | |
| Tian et al. | Aberrant miR-181b-5p and miR-486-5p expression in serum and tissue of non-small cell lung cancer | |
| US20150057159A1 (en) | METHOD TO IDENTIFY ASYMPTOMATIC HIGH-RISK INDIVIDUALS WITH EARLY STAGE LUNG CANCER BY MEANS OF DETECTING miRNAs IN BIOLOGIC FLUIDS | |
| Zhou et al. | Combination of serum miRNAs with Cyfra21-1 for the diagnosis of non-small cell lung cancer | |
| CN103642914B (en) | Plasma/serum circulation microRNA marker related to mlignnt melnom and application of marker | |
| JP2020525050A (en) | A novel biomarker for detecting senescent cells | |
| US20170073764A1 (en) | Method for assisting detection of pancreatic cancer | |
| JP7085235B2 (en) | Pancreatic Cancer Diagnostic Kit | |
| CN103320504A (en) | Detection of microRNAs in excreta as early diagnosis biomarker of lung cancer, colorectal cancer and bladder cancer | |
| EP2596136B1 (en) | Marker consisting of plasma microrna and new method for diagnosis of hepatocellular carcinoma | |
| RU2611340C2 (en) | Method of monitoring efficiency of anticancer therapy of non-small cell lung cancer | |
| US20190316207A1 (en) | Mir-320e and colorectal cancer | |
| KR101381894B1 (en) | Serum miRNA as a marker for the diagnosis of lymph node metastasis of gastric cancer | |
| Wang et al. | Decreased expression of microRNA-206 correlates with poor clinical outcome in patients with malignant astrocytomas | |
| US20130280720A1 (en) | Tissue biomarkers for indication of progression from barrett's esophagus to esophageal adenocarcinoma | |
| CN115125304B (en) | CERNA regulation network for early diagnosis or detection of non-small cell lung cancer and application thereof | |
| CN115261472B (en) | Marker for predicting curative effect of radiotherapy of locally advanced esophageal squamous carcinoma, application of marker and kit | |
| KR102602134B1 (en) | Method of providing information for diagnosing metastasis of cervical cancer | |
| Altamemi et al. | Circulating microRNA (143, 21) as biomarker for prostate cancer. | |
| US20230295733A1 (en) | Marker consisting of plasma microrna and a new method for diagnosis of hepatocellular carcinoma | |
| PL237994B1 (en) | Method of amplifying complementary DNA in real-time polymerase chain reaction with reverse transcription using gene and region-specific primers for the miRNA-944 precursor | |
| ITMI20110174A1 (en) | PROCEDURE AND EQUIPMENT TO IDENTIFY INDIVIDUALS AT RISK OF PULMONARY AND / OR TO DIAGNOSE A PULMONARY CANCER, AS WELL AS COMPOSITION AND METHOD TO REDUCE OR ELIMINATE THE RISK OF PULMONARY CANCER | |
| ITMI20110173A1 (en) | PROCEDURE AND EQUIPMENT TO IDENTIFY INDIVIDUALS AT RISK OF PULMONARY AND / OR TO DIAGNOSE A PULMONARY CANCER, AS WELL AS COMPOSITION AND METHOD TO REDUCE OR ELIMINATE THE RISK OF PULMONARY CANCER | |
| ITMI20110172A1 (en) | PROCEDURE AND EQUIPMENT TO IDENTIFY INDIVIDUALS AT RISK OF PULMONARY AND / OR TO DIAGNOSE A PULMONARY CANCER, AS WELL AS COMPOSITION AND METHOD TO REDUCE OR ELIMINATE THE RISK OF PULMONARY CANCER | |
| JPWO2011126089A1 (en) | Method for detecting rhabdomyosarcoma using body fluid-derived specimen |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20170804 |
|
| NF4A | Reinstatement of patent |
Effective date: 20181008 |
|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20200804 |