RU2605616C1

RU2605616C1 - Liposomal agent based on ubiquinol and preparation method thereof

Info

Publication number: RU2605616C1
Application number: RU2015151165/15A
Authority: RU
Inventors: Дмитрий Валентинович Демченко; Ольга Николаевна Пожарицкая; Александр Николаевич ШИКОВ; Валерий Геннадьевич Макаров; Марина Николаевна Макарова
Original assignee: Закрытое акционерное общество "Институт экспериментальной фармакологии"
Priority date: 2015-11-27
Filing date: 2015-11-27
Publication date: 2016-12-27

Abstract

FIELD: medicine.

SUBSTANCE: group of inventions relates to medicine, chemical-pharmaceutical and cosmetic industry, namely to method of producing liposomal form ubiquinol (reduced Coenzyme Q₁₀), involving preparation of solution, containing mixture of phospholipid and sterol in weight ratio of 1:0.1-2 respectively, ubiquinol with weight ratio of ubiquinol to mixture of phospholipid and sterol equal to 1:1-4, respectively, and co-solvent in form of nonionic surfactant in ethanol, dispersion of obtained solution, containing lipid fraction, in aqueous medium containing cryoprotectant to obtain suspension of lipid vesicles with ubiqinol in them, homogenization of suspension of lipid vesicles and separation of liposomes with size no more than 220 nm with ubiquinol included therein, as well as to liposomal pharmaceutical and cosmetic compositions including liposomal form of ubiquinol obtained using said method.

EFFECT: group of inventions provides higher bioavailability of coenzyme Q₁₀, higher capture factor and stability of retention of coenzyme Q₁₀ in liposomes.

24 cl, 12 ex, 1 tbl, 1 dwg

Description

Изобретение относится к медицине, химико-фармацевтической и косметической промышленности, а именно к способу получения липосомального средства на основе убихинола. Липосомальная фармацевтическая композиция включает лекарственное вещество (убихинол), липиды в виде фосфолипидов и стеринов, антиоксиданты, криопротекторы и консерванты, причем убихинол заключен во внешнюю оболочку липосом. Благодаря осуществлению изобретения обеспечивается повышение биодоступности лекарственного (активного) вещества за счет активного направленного транспорта к органам и тканям организма, а также повышении коэффициента захвата и стабильности удержания активного вещества в липосомах.The invention relates to medicine, chemical-pharmaceutical and cosmetic industries, and in particular to a method for producing a liposomal agent based on ubiquinol. The liposomal pharmaceutical composition includes a drug substance (ubiquinol), lipids in the form of phospholipids and sterols, antioxidants, cryoprotectants and preservatives, with ubiquinol enclosed in the outer shell of liposomes. Thanks to the implementation of the invention, it is possible to increase the bioavailability of the drug (active) substance due to the active directed transport to the organs and tissues of the body, as well as to increase the capture coefficient and stability of the retention of the active substance in liposomes.

Липосомы представляют собой микроскопические замкнутые везикулы, имеющие внутреннюю фазу, окруженную одним или несколькими липидными бислоями, и способные удерживать водорастворимый материал во внутренней фазе, а маслорастворимый материал - в фосфолипидном бислое. При заключении активного вещества в липосому и доставке его в ткани-мишени важными задачами являются высокоэффективный захват активного соединения в липосому и обеспечение устойчивого удержания активного соединения липосомой.Liposomes are microscopic closed vesicles having an internal phase surrounded by one or more lipid bilayers and capable of retaining water-soluble material in the internal phase, and oil-soluble material in a phospholipid bilayer. When enclosing an active substance in a liposome and delivering it to the target tissue, important tasks are the highly efficient capture of the active compound into the liposome and ensuring the stable retention of the active compound by the liposome.

Одно из преимуществ липосомальных лекарственных форм проявляется в защите здоровых клеток от токсического воздействия лекарственных веществ, а включенной субстанции от деградации в условиях организма; пролонгировании действия лекарственных веществ; селективном накоплении в области поражения; возможности создания водорастворимой лекарственной формы для ряда гидрофобных препаратов и увеличении тем самым их биодоступности (Фармацевтическая разработка: концепция и практические рекомендации. Научно-практическое руководство для фармацевтической отрасли. Под ред. Быковского С.Н. и др. - 2015. - 472 с.).One of the advantages of liposomal dosage forms is manifested in the protection of healthy cells from the toxic effects of drugs, and the included substance from degradation in the body; prolonging the action of drugs; selective accumulation in the affected area; the possibilities of creating a water-soluble dosage form for a number of hydrophobic preparations and thereby increasing their bioavailability (Pharmaceutical development: concept and practical recommendations. Scientific and practical guidance for the pharmaceutical industry. Edited by S. Bykovsky et al. - 2015. - 472 p. )

Очень важное свойство липосом стало основой для конструирования эффективных лекарственных препаратов. Речь идет о соотношении их размеров и диаметра пор капилляров. Так как размер липосом больше диаметра пор капилляров, их объем распределения ограничивается контрпараметрами введения, липосомы будут накапливаться в очагах воспаления и деформации. Это явление получило название пассивное нацеливание. Таким образом, существуют две причины, вследствие которых липосомальные препараты более эффективны по сравнению со стандартными: уменьшение токсичности и пассивное нацеливание (Патент РФ №2462236, дата публикации 27.09.2012).A very important property of liposomes has become the basis for the construction of effective drugs. We are talking about the ratio of their size and pore diameter of the capillaries. Since the size of liposomes is larger than the pore diameter of the capillaries, their distribution volume is limited by the counterparameters of administration, liposomes will accumulate in the foci of inflammation and deformation. This phenomenon is called passive targeting. Thus, there are two reasons why liposome preparations are more effective than standard ones: toxicity reduction and passive targeting (RF Patent No. 2462236, published date September 27, 2012).

В настоящее время на фармацевтическом рынке существует достаточное количество липосомальных препаратов, состав которых многообразен, а выбор того или иного компонента определен на основании анализа большого числа технологических, физико-химических и биологических факторов.Currently, there are a sufficient number of liposomal preparations on the pharmaceutical market, the composition of which is diverse, and the choice of this or that component is determined based on the analysis of a large number of technological, physicochemical and biological factors.

Основными структурными компонентами липосом являются фосфолипиды. Наиболее часто используемый в технологии липосомальных лекарственных форм полярный фосфолипид - фосфатидилхолин, имеет гидрофильную полярную группу (фосфохолин) и гидрофобные ацильные углеводородные цепи. Молекулы фосфатидилхолина нерастворимы в воде и водной среде, они ориентируются таким образом, что жирнокислотные цепи молекул обращены друг к другу, а полярные головки находятся в водной среде. Это позволяет преодолеть нестабильность одиночных молекул и приводит к формированию бислоя. Помимо фосфатидилхолина липосомы могут быть выполнены из фосфатидилэтаноламина, фосфатидилсерина, фосфатидилинозитола, фосфатидилглицерина, фосфатидовой кислоты, сфингофосфолипида, фосфолипидов яиц или соевых бобов или их смесей.The main structural components of liposomes are phospholipids. The most commonly used in the technology of liposomal dosage forms polar phospholipid - phosphatidylcholine, has a hydrophilic polar group (phosphocholine) and hydrophobic acyl hydrocarbon chains. Molecules of phosphatidylcholine are insoluble in water and an aqueous medium, they are oriented in such a way that the fatty acid chains of the molecules are facing each other, and the polar heads are in the aqueous medium. This allows us to overcome the instability of single molecules and leads to the formation of a bilayer. In addition to phosphatidylcholine, liposomes can be made of phosphatidylethanolamine, phosphatidylserine, phosphatidylinositol, phosphatidylglycerol, phosphatidic acid, sphingophospholipid, egg phospholipids or soybeans, or mixtures thereof.

В то же время недостатками липосом как лекарственной формы являются сложности, связанные не только с их производством, но и возникающие при длительном хранении липосомальных суспензий.At the same time, the disadvantages of liposomes as a dosage form are the difficulties associated not only with their production, but also arising during prolonged storage of liposomal suspensions.

Липосомальные суспензии представляют собой термодинамически нестабильные коллоидные системы, которые достаточно быстро, иногда в течение нескольких часов, расслаиваются с образованием двух фаз. Еще одним недостатком липосомальных композиций является то, что попадая в кровоток, липосомы поглощаются макрофагами, что не позволяет достичь специфического эффекта липосомальной лекарственной формы.Liposomal suspensions are thermodynamically unstable colloidal systems that dissociate fairly quickly, sometimes within a few hours, to form two phases. Another disadvantage of liposomal compositions is that once in the bloodstream, liposomes are absorbed by macrophages, which does not allow to achieve a specific effect of the liposomal dosage form.

Сейчас найдены способы, позволяющие увеличить устойчивость липосом. Например, повышению их устойчивости способствует введение в состав липосом холестерина, который повышает стабильность бислоя и снижает его проницаемость. Холестерин может быть включен в липосомальную мембрану в достаточно высоких концентрациях (молярные соотношения фосфолипид/холестерин могут достигать значений 1:1 и даже 1:2). Включение в состав липосом полиэтиленгликоля препятствует их захвату макрофагами (Фармацевтическая разработка: концепция и практические рекомендации. Научно-практическое руководство для фармацевтической отрасли. Под ред. Быковского С.Н. и др. - 2015. - 472 с.).Now found ways to increase the stability of liposomes. For example, the introduction of cholesterol into the liposome composition, which increases the stability of the bilayer and reduces its permeability, helps to increase their stability. Cholesterol can be included in the liposome membrane in sufficiently high concentrations (molar ratios of phospholipid / cholesterol can reach 1: 1 and even 1: 2). The inclusion of polyethylene glycol in liposomes prevents their capture by macrophages (Pharmaceutical development: concept and practical recommendations. Scientific and practical guidance for the pharmaceutical industry. Edited by S. Bykovsky et al. - 2015. - 472 p.).

Способы формирования липосом разнообразны и могут быть разделены на основные группы:The methods of liposome formation are diverse and can be divided into main groups:

- тонкопленочные методы;- thin film methods;

- методы, основанные на применении растворителей;- solvent based methods;

- ультразвуковой метод;- ultrasonic method;

- методы с применением высокого давления.- methods using high pressure.

Липосомальные формы лекарственных препаратов достаточно широко применяют для лечения пациентов антибиотиками, противоопухолевыми, противовирусными, противовоспалительными препаратами, а также при использовании иммуномодуляторов, антител, рентгеноконтрастных, цитостатических средств и средств для лечения инфаркта миокарда. Липосомы в этих случаях используются для создания препаратов для парентерального и перорального введения.Liposomal forms of drugs are widely used for treating patients with antibiotics, antitumor, antiviral, anti-inflammatory drugs, as well as when using immunomodulators, antibodies, radiopaque, cytostatic agents and agents for the treatment of myocardial infarction. Liposomes in these cases are used to create drugs for parenteral and oral administration.

Несмотря на многочисленные разработки липосомальных препаратов, до настоящего времени проблема получения приемлемой и стабильной при хранении липосомальной формы восстановленного коэнзима Q₁₀ не решена.Despite the numerous developments of liposomal preparations, the problem of obtaining an acceptable and stable liposomal form of the restored coenzyme Q _{10 has} not yet been solved.

Убихинол (восстановленный коэнзим Q₁₀, убидекаренол) относится к группе жирорастворимых бензохинолов является коферментом системы тканевого дыхания митохондрий, который участвует в процессе биохимического окисления. Антиоксидантная и мембраностабилизирующая активность коэнзима Q₁₀ связана в основном с его восстановленной формой. Известно, что применение восстановленной формы коэнзима Q₁₀ повышает его уровень в крови в несколько раз более эффективно, чем использование его окисленной формы. В силу этого применение убихинола возможно в меньших дозах, чем окисленной формы коэнзима Q₁₀, с сохранением эквивалентного биологического эффекта, что доказывает актуальность разработки новых препаратов на основе убихинола.Ubiquinol (reduced coenzyme Q ₁₀ , ubidecarenol) belongs to the group of fat-soluble benzoquinol is a coenzyme of the mitochondrial tissue respiration system, which is involved in the process of biochemical oxidation. The antioxidant and membrane-stabilizing activity of coenzyme Q ₁₀ is associated mainly with its reduced form. It is known that the use of the reduced form of coenzyme Q ₁₀ increases its level in the blood several times more efficiently than the use of its oxidized form. Because of this, the use of ubiquinol is possible in lower doses than the oxidized form of coenzyme Q ₁₀ , while maintaining the equivalent biological effect, which proves the relevance of the development of new drugs based on ubiquinol.

Из уровня техники известна композиция, состоящая из действующего вещества - 6-декапренил-2,3-диметокси-5-метил-1,4-бензохинона, неионогенного ПАВ, антиоксиданта, консерванта, жирорастворимого стабилизатора эмульсии, водорастворимых производных целлюлозы, водорастворимого стабилизатора эмульсии и воды, которая отличается высокой биодоступностью и увеличенным сроком хранения. Способ получения указанной композиции заключается в том, что определенные количества неионогенного ПАВ и антиоксиданта смешивают, нагревают до 40-120°С, растворяют в полученном растворе необходимые количества жирорастворимого стабилизатора эмульсии и 6-декапренил-2,3-диметокси-5-метил-1,4-бензохинона, охлаждают полученную смесь до 30-60°С и при интенсивном перемешивании приливают в предварительно нагретый до 30-60°С смешанный раствор водорастворимых производных целлюлозы, водорастворимого стабилизатора эмульсии и консерванта в воде (Патент РФ №2445079, дата публикации 20.03.2012).The composition known in the art is composed of the active substance 6-decaprenyl-2,3-dimethoxy-5-methyl-1,4-benzoquinone, nonionic surfactant, antioxidant, preservative, fat-soluble emulsion stabilizer, water-soluble cellulose derivatives, water-soluble emulsion stabilizer and water, which is characterized by high bioavailability and increased shelf life. A method of obtaining the specified composition is that certain amounts of a nonionic surfactant and antioxidant are mixed, heated to 40-120 ° C, the required amounts of a fat-soluble emulsion stabilizer and 6-decaprenyl-2,3-dimethoxy-5-methyl-1 are dissolved in the resulting solution. , 4-benzoquinone, cool the resulting mixture to 30-60 ° C and, with vigorous stirring, pour into a mixed solution of water-soluble cellulose derivatives, a water-soluble emulsion stabilizer and a preservative in water pre-heated to 30-60 ° C (Patent R F No. 2445079, publication date 03/20/2012).

Недостатком этого способа является использование коэнзима Q₁₀ в окисленной, а не восстановленной форме, а также использование в качестве готовой формы обычной эмульсии, которые склонны к быстрому расслаиванию и быстрому прогорканию.The disadvantage of this method is the use of coenzyme Q ₁₀ in an oxidized rather than reduced form, as well as the use of a conventional emulsion as a finished form, which is prone to rapid delamination and rapid rancidity.

Известен способ получения жиросодержащего пищевого продукта, обогащенного убихинолом, который содержит масло или жир с температурой плавления не ниже 20°С или с температурой плавления ниже 20°С, при этом продукт представляет собой эмульсию типа «масло в воде». Убихинол доставляют в организм путем приема внутрь жиросодержащего продукта. Способ получения жиросодержащего продукта предусматривает добавление убихинола совместно с эмульгатором и/или пищевым ингредиентом, содержащим масло/жир, к пищевому материалу. Изобретение позволяет обогатить пищевой продукт убихинолом в количествах, превышающих предел его растворимости в масле или жире без разделения на жидкую и твердую фазу при хранении. В продукте для сохранности убихинола предусмотрено содержание антиоксиданта из группы, состоящей из аскорбилпальмитата, аскорбилстеарата, катехина, лецитина, токоферола, токотриенола, лигнана и каротиноида (Патент РФ №2311801, дата публикации 10.12.2007).A known method of obtaining a fat-containing food product enriched with ubiquinol, which contains oil or fat with a melting point of at least 20 ° C or with a melting point below 20 ° C, the product is an oil-in-water emulsion. Ubiquinol is delivered to the body by ingestion of a fat-containing product. A method of obtaining a fat-containing product involves the addition of ubiquinol together with an emulsifier and / or food ingredient containing oil / fat to the food material. EFFECT: invention makes it possible to enrich a food product with ubiquinol in amounts exceeding its solubility limit in oil or fat without separation into a liquid and solid phase during storage. The preservation of ubiquinol contains an antioxidant content from the group consisting of ascorbyl palmitate, ascorbyl stearate, catechin, lecithin, tocopherol, tocotrienol, lignan and carotenoid (RF Patent No. 2311801, publication date 10.12.2007).

Способ представляет собой получение обычной эмульсии и не предусматривает получение липосомальной формы коэнзима Q₁₀. Кроме того, в документе не раскрывается возможность использования продукта для создания лекарственных средств.The method is to obtain a conventional emulsion and does not provide for the liposomal form of coenzyme Q ₁₀ . In addition, the document does not disclose the possibility of using the product to create medicines.

Известен способ получения биологически активной порошковой субстанции в форме достаточно стабильных молекулярных комплексов включения восстановленного коэнзима Q₁₀ в β-циклодекстрине с размерами частиц до 70-100 мкм, обладающей в 10 раз меньшей способностью к окислению по сравнению со свободным восстановленным коэнзимом Q₁₀ и легко переходящей в водном растворе в солюбилизированную форму с размерами частиц 200-700 нм. Эти молекулярные комплексы способны к солюбилизации в воде и являются более стабильными (защищены от окисления) по сравнению с нерастворимым в воде и быстро окисляющимся свободным восстановленным коэнзимом Q₁₀ (Патент РФ №2509760, дата публикации 20.03.2014).A known method of producing a biologically active powder substance in the form of sufficiently stable molecular complexes for the inclusion of reduced coenzyme Q ₁₀ in β-cyclodextrin with particle sizes up to 70-100 μm, which has 10 times less oxidation ability compared to free reduced coenzyme Q ₁₀ and is easily transferred in an aqueous solution in a solubilized form with a particle size of 200-700 nm. These molecular complexes are capable of solubilization in water and are more stable (protected from oxidation) compared to water-insoluble and rapidly oxidizing free reduced coenzyme Q ₁₀ (RF Patent No. 2509760, publication date 03/20/2014).

Недостатком этого способа является получение солюбилизированной формы с комплексом включения достаточно большого размера 200-700 нм, что не позволяет их использовать в качестве препаратов направленного действия.The disadvantage of this method is to obtain a solubilized form with a inclusion complex of a sufficiently large size of 200-700 nm, which does not allow them to be used as directed drugs.

Известен способ получения водорастворимой формы коэнзима Q₁₀, представляющей собой комплекс включения β-циклодекстрина с коэнзимом Q₁₀, в котором молярное соотношение β-циклодекстрина и коэнзима Q₁₀ составляет примерно 1:1, заключающийся в том, что β-циклодекстрин растворяют в воде при температуре от 55°С до температуры кипения, затем коэнзим Q₁₀ добавляют в твердом виде и продолжают перемешивание при температуре 60-70°С, а затем при комнатной температуре (Патент РФ №2375053, дата публикации 10.12.2009).A known method of obtaining a water-soluble form of coenzyme Q ₁₀ , which is a inclusion complex of β-cyclodextrin with coenzyme Q ₁₀ , in which the molar ratio of β-cyclodextrin and coenzyme Q ₁₀ is approximately 1: 1, namely, that β-cyclodextrin is dissolved in water at temperature from 55 ° C to the boiling point, then coenzyme Q _{10 is} added in solid form and stirring is continued at a temperature of 60-70 ° C, and then at room temperature (RF Patent No. 2375053, publication date 10.12.2009).

Недостатком данного способа является невозможность получения по данной технологии восстановленной формы коэнзима, так как процесс получения комплекса идет при повышенных температурах 60-70°С, что приведет к окислению продукта. Кроме того, способ направлен на получение добавки в пищевые продукты, и не раскрываются особенности получения фармацевтических и косметических препаратов на основе комплекса включения.The disadvantage of this method is the impossibility of obtaining a reduced form of coenzyme by this technology, since the process of obtaining the complex proceeds at elevated temperatures of 60-70 ° C, which will lead to oxidation of the product. In addition, the method is aimed at obtaining additives in food products, and features of obtaining pharmaceutical and cosmetic preparations based on inclusion complex are not disclosed.

В уровне техники описана композиция 6-декапренил-2,3-диметокси-5-метил-1,4-бензохинона в форме трансдермального, перорального и инъекционного средства, содержащая ПАВ и представленная в форме липосом (Патент WO 9835660 А1, дата публикации 20.08.1998).The prior art describes a composition of 6-decaprenyl-2,3-dimethoxy-5-methyl-1,4-benzoquinone in the form of a transdermal, oral and injection agent containing surfactant and presented in the form of liposomes (Patent WO 9835660 A1, publication date 20.08. 1998).

Однако в указанном источнике раскрыта только возможность вхождения убихинона в состав липосом и не представлен ни состав, ни технология получения липосом на основе убихинона. Недостатком композиции является использование коэнзима Q₁₀ в окисленной, а не восстановленной форме, что снижает биологическую эффективность средства.However, in the indicated source, only the possibility of the entry of ubiquinone into the composition of liposomes is disclosed and neither the composition nor the technology for producing liposomes based on ubiquinone is presented. The disadvantage of the composition is the use of coenzyme Q ₁₀ in oxidized rather than reduced form, which reduces the biological effectiveness of the drug.

В документе [SHUQIN XIA et al. / Optimization in the Preparation of Coenzyme Q10 Nanoliposomes / Journal of Agriculture and Food Chemistry / 2006, V. 54, pp. 6358-6366] раскрывается способ получения нанолипосом, содержащих убихинон-10 (коэнзим Q₁₀), включающий растворение коэнзима Q₁₀, фосфолипида, холестерина и Твина 80 при их различных соотношениях в этаноле при температуре 55°С, добавление этанольного раствора в фосфатный буфер (pH=7,4) при температуре 55°С и перемешивании, удаление этанола на роторном испарителе, добавление воды, обработку полученной суспензии ультразвуком. Отмечается, что оптимальный состав получен при массовом соотношении фосфолипид/коэнзим Q₁₀/ холестерин/Твин 80 равном 2,5:1,2:0,4:1,8, при этом средний размер липосом составил 68 нм.In the document [SHUQIN XIA et al. / Optimization in the Preparation of Coenzyme Q10 Nanoliposomes / Journal of Agriculture and Food Chemistry / 2006, V. 54, pp. 6358-6366] discloses a method for producing nanoliposomes containing ubiquinone-10 (coenzyme Q ₁₀ ), including dissolving coenzyme Q ₁₀ , phospholipid, cholesterol and Tween 80 at their various ratios in ethanol at a temperature of 55 ° C, adding an ethanol solution to phosphate buffer ( pH = 7.4) at a temperature of 55 ° C and stirring, removing ethanol on a rotary evaporator, adding water, treating the resulting suspension with ultrasound. It is noted that the optimal composition was obtained with a mass ratio of phospholipid / coenzyme Q ₁₀ / cholesterol / Tween 80 equal to 2.5: 1.2: 0.4: 1.8, with an average liposome size of 68 nm.

Недостатком способа является получение липосом, содержащих коэнзим Q₁₀ в окисленной, а не восстановленной форме, что снижает биологическую эффективность средства. Кроме того, данный способ не подразумевает использование криопротекторов, таких как трегалоза, лактоза и др., что не позволяет лиофильно высушить и получить липосомальную форму активного агента в виде сыпучего порошка.The disadvantage of this method is the production of liposomes containing coenzyme Q ₁₀ in oxidized rather than reduced form, which reduces the biological effectiveness of the drug. In addition, this method does not imply the use of cryoprotectants, such as trehalose, lactose, etc., which does not allow freeze-drying and obtain the liposomal form of the active agent in the form of a free-flowing powder.

Обобщая данные по разработке лекарственных форм коэнзима Q₁₀, можно сделать вывод, что в основном в качестве биологически активной субстанции используют коэнзим Q₁₀ в окисленной форме, что с биологической точки зрения менее эффективно, причем включают коэнзим Q₁₀ в основном в состав эмульсий, что не обеспечивает селективность терапевтического действия и повышение биодоступности активной субстанции. Эти недостатки носят принципиальный характер и не могут быть устранены без кардинального изменения технологии получения систем доставки убихинола.Summarizing the data on the development of dosage forms of coenzyme Q ₁₀ , it can be concluded that mainly coenzyme Q ₁₀ in the oxidized form is used as a biologically active substance, which is less effective from a biological point of view, and coenzyme Q ₁₀ is mainly included in the composition of emulsions, which does not provide selectivity of the therapeutic effect and increased bioavailability of the active substance. These shortcomings are fundamental and cannot be eliminated without a fundamental change in the technology for producing ubiquinol delivery systems.

Наиболее близким решением к предлагаемому является способ получения стабильного при хранении раствора липосом, содержащего в качестве действующего вещества восстановленную форму коэнзима Q₁₀. Способ заключается в растворении фосфолипидов, восстановленного коэнзима Q₁₀, в присутствии или в отсутствие ПАВ, в органическом растворителе, удаление органического растворителя с образованием пленки и диспергирование полученной липидной пленки в водной среде с применением ультразвука в течение 30 минут при температуре 4°С с последующим образованием раствора липосом (ЕР 1386905 А1, дата публикации 04.02.2004).The closest solution to the proposed one is a method of obtaining a storage-stable liposome solution containing, as an active substance, a reduced form of coenzyme Q ₁₀ . The method consists in dissolving phospholipids, reduced coenzyme Q ₁₀ , in the presence or absence of a surfactant, in an organic solvent, removing the organic solvent to form a film and dispersing the resulting lipid film in an aqueous medium using ultrasound for 30 minutes at a temperature of 4 ° C followed by the formation of a solution of liposomes (EP 1386905 A1, publication date 02/04/2004).

Недостатком данного способа является то, что данный метод не подразумевает использование криопротекторов, таких как трегалоза, лактоза и др., что не позволяет лиофильно высушить и получить липосомальную форму убихинола в виде сыпучего порошка. Данный факт не позволяет использовать липосомы для создания твердых лекарственных форм, что сокращает область применения липосом убихинола. В данном изобретении липосомы убихинола получают путем ультразвукового диспергирования, что затрудняет возможность внедрения данной технологии на производстве. Кроме того, не указан размер получаемых липосом, что затрудняет их использование для создания инъекционных лекарственных форм и не может подтвердить адресную доставку убихинола. При создании инъекционных липосомальных форм необходимо учитывать тот факт, что для селективного накопления биологически активного вещества в области поражения оптимальный размер липосом составляет от 50 до 200 нм. Также не указаны условия и оборудование для очистки липосом от не включенного в состав липосом убихинола, что не позволяет оценить степень включения убихинола в липосомальную мембрану в процессе получения и хранения. Из технологических моментов следует отметить отсутствие указаний на условия удаления органического растворителя, что важно, так как повышенная температура может повлиять на качество готового продукта. В изобретении указано, что содержание восстановленного коэнзима в липосомах может составлять до 50%, что не учитывает растворимость коэнзима и технологически невозможно осуществить даже в присутствии 20% ПАВ.The disadvantage of this method is that this method does not imply the use of cryoprotectants, such as trehalose, lactose, etc., which does not allow freeze-drying and obtain the liposomal form of ubiquinol in the form of a free-flowing powder. This fact does not allow the use of liposomes to create solid dosage forms, which reduces the scope of ubiquinol liposomes. In this invention, ubiquinol liposomes are obtained by ultrasonic dispersion, which makes it difficult to introduce this technology in production. In addition, the size of the obtained liposomes is not indicated, which complicates their use for the creation of injectable dosage forms and cannot confirm the targeted delivery of ubiquinol. When creating injectable liposome forms, it is necessary to take into account the fact that for the selective accumulation of biologically active substances in the lesion area, the optimal liposome size is from 50 to 200 nm. Also, the conditions and equipment for purification of liposomes from ubiquinol not included in liposomes are not indicated, which does not allow us to assess the degree of incorporation of ubiquinol into the liposome membrane during the preparation and storage. Of the technological issues, it should be noted that there are no indications of the conditions for the removal of the organic solvent, which is important since elevated temperatures can affect the quality of the finished product. The invention indicates that the content of reduced coenzyme in liposomes can be up to 50%, which does not take into account the solubility of the coenzyme and is technologically impossible even in the presence of 20% surfactant.

Технический результат настоящего изобретения заключается в повышении биодоступности коэнзима Q₁₀, а также повышении коэффициента захвата и стабильности удержания коэнзима Q₁₀ в липосомах.The technical result of the present invention is to increase the bioavailability of coenzyme Q ₁₀ , as well as increasing the capture coefficient and stability of retention of coenzyme Q ₁₀ in liposomes.

Технический результат достигается способом получения липосомальной формы биологически активного вещества, включающим приготовление раствора, содержащего смесь фосфолипида и стерина при их массовом соотношении 1:0,1-2 соответственно, биологически активного вещества при его массовом соотношении к смеси фосфолипида и стерина равном 1:1-4 соответственно и сорастворитель в органическом растворителе, диспергирование полученного раствора, содержащего липидную фракцию, в водной среде, содержащей криопротектор, до получения суспензии липидных везикул с включенным в них биологически активным веществом, гомогенизацию суспензии липидных везикул и отделение липосом размером не более 220 нм с включенным в них биологически активным веществом.The technical result is achieved by a method of obtaining a liposomal form of a biologically active substance, including the preparation of a solution containing a mixture of phospholipid and sterol at a mass ratio of 1: 0.1-2, respectively, of a biologically active substance at its mass ratio to a mixture of phospholipid and sterol equal to 1: 1- 4, respectively, and a co-solvent in an organic solvent, dispersing the resulting solution containing the lipid fraction in an aqueous medium containing a cryoprotectant to obtain a lipid suspension vesicles with a biologically active substance included in them, homogenization of a suspension of lipid vesicles and separation of liposomes with a size of not more than 220 nm with a biologically active substance included in them.

В качестве биологически активного вещества используют - субстанцию убихинол (восстановленный коэнзим Q₁₀, убидекаренол), липофильное соединение, практически нерастворимое в воде. Содержание убихинола в составе липосом зависит от создаваемой формы лекарственного препарата и от способа его применения. Предпочтительно включать 0,01-5 масс. % убихинола в состав липосом в форме водной суспензии или 0,1-50 масс. % убихинола в состав липосом в дегидратированной форме.The biologically active substance used is the substance ubiquinol (reduced coenzyme Q ₁₀ , ubidecarenol), a lipophilic compound that is practically insoluble in water. The content of ubiquinol in the composition of liposomes depends on the form of the drug being created and on the method of its use. It is preferable to include 0.01-5 mass. % ubiquinol in the composition of liposomes in the form of an aqueous suspension or 0.1-50 mass. % ubiquinol in the composition of liposomes in dehydrated form.

Фосфолипиды могут представлять смесь любых фосфолипидов животного и/или растительного происхождения, взятых в любом сочетании и соотношении. Предпочтительно, чтобы мембранные составляющие липосом по настоящему изобретению включали фосфолипиды и/или производные фосфолипидов. В качестве фосфолипидов и производных фосфолипидов можно использовать, например, фосфатидилэтаноламин, фосфатидилхолин, фосфатидилсерин, фосфатидилинозитол, фосфатидилглицерин, кардиолипин, сфингомиелин, церамид фосфорилэтаноламин, церамид фосфорилглицерин, церамид фосфорилглицеринфосфат, 1,2-димиристоил-1,2-дезоксифосфатидилхолин, плазмалоген, фосфатидную кислоту и так далее. Можно комбинировать один или несколько этих фосфолипидов и производных фосфолипидов. Не существует конкретных ограничений в отношении остатков жирных кислот в фосфолипидах и производных фосфолипидов и можно использовать, например, остатки насыщенных или ненасыщенных жирных кислот с числом атомов углерода от 12 до 20. Конкретно можно использовать ацильные группы из жирных кислот, таких как лауриновая, миристиновая, пальмитиновая, стеариновая, олеиновая и линолевая.Phospholipids can be a mixture of any animal and / or plant phospholipids, taken in any combination and ratio. Preferably, the membrane constituents of the liposomes of the present invention include phospholipids and / or phospholipid derivatives. As the phospholipids and derivatives of phospholipids, for example, phosphatidylethanolamine, phosphatidylcholine, phosphatidylserine, phosphatidylinositol, phosphatidylglycerol, cardiolipin, sphingomyelin, ceramide phosphorylatechloride-phosphoride-1,2-chloroferide-phosphoride 1,2-phosphoride-1,2-phospholiphenylidene-phospholiphenylidene-phospholiphenylidene-phospholiphenylidene-phospholiphenylidene-phospholiphenolide-phospholiphenolide-phospholiphenolide-phospholiphenylidene phospholipidolide, phosphorylate-phospholiphenolide-phospholiphenolide-phospholiphenylidene-phospholiphenylamine, phosphorylate-phospholiphenylidene-phospholiphenylamine, phosphorylate-phospholiphenylamine and so on. One or more of these phospholipids and phospholipid derivatives can be combined. There are no particular restrictions on fatty acid residues in phospholipids and phospholipid derivatives, and, for example, saturated or unsaturated fatty acid residues with carbon numbers from 12 to 20 can be used. Acyl groups from fatty acids such as lauric, myristic, palmitic, stearic, oleic and linoleic.

Можно также использовать фосфолипиды, полученные из природных веществ, такие как лецитин яичного желтка и соевый лецитин, частично гидрогенизированный лецитин яичного желтка, в котором остаток ненасыщенной жирной кислоты частично или полностью гидрогенизирован, (полностью) гидрогенизированный лецитин яичного желтка, частично гидрогенизированный соевый лецитин, (полностью) гидрогенизированный соевый лецитин и так далее.You can also use phospholipids obtained from natural substances, such as egg yolk lecithin and soya lecithin, partially hydrogenated egg yolk lecithin, in which the unsaturated fatty acid residue is partially or fully hydrogenated, (fully) hydrogenated egg yolk lecithin, partially hydrogenated soya lecithin, ( fully) hydrogenated soya lecithin and so on.

Не существует конкретных ограничений в отношении смешиваемого количества фосфолипидов и/или производных фосфолипидов, которые используют при получении липосом, однако предпочтительно использовать от 10 до 80 масс. % по отношению ко всему составу мембран липосом, и более предпочтительно - от 30 до 60 масс. %.There are no particular restrictions on the mixed amount of phospholipids and / or derivatives of phospholipids that are used in the preparation of liposomes, however, it is preferable to use from 10 to 80 mass. % in relation to the entire composition of the liposome membranes, and more preferably from 30 to 60 mass. %

Что касается компонентов мембран, помимо фосфолипидов и/или производных фосфолипидов липосомы по настоящему изобретению включают в качестве стабилизаторов мембран стерины, например, такие как холестерин. Не существует конкретных ограничений в отношении смешиваемого количества этих стеринов, используемых при получении липосом, однако предпочтительно использовать от 1 до 60 масс. % по отношению ко всему составу мембран липосом, более предпочтительно - от 10 до 50 масс. %).As for membrane components, in addition to phospholipids and / or phospholipid derivatives, the liposomes of the present invention include sterols, such as cholesterol, as membrane stabilizers. There are no particular restrictions on the mixed amount of these sterols used in the preparation of liposomes, however, it is preferable to use from 1 to 60 mass. % in relation to the entire composition of the liposome membranes, more preferably from 10 to 50 mass. %).

В качестве органического растворителя используют этанол. Органический растворитель удаляют отгонкой на роторном испарителе под вакуумом и температуре 30-35°С.Ethanol is used as an organic solvent. The organic solvent is removed by distillation on a rotary evaporator under vacuum and a temperature of 30-35 ° C.

Не существует конкретных ограничений в отношении растворителя во внутренней фазе липосом и можно упомянуть, например, буферные растворы, такие как фосфатный буферный раствор, цитратный буферный раствор и фосфатно-солевой буферный физиологический раствор, физиологический солевой раствор, культуральную среду для культивирования клеток и так далее. Что касается растворителя в случае, когда используют буферный раствор, предпочтительно, чтобы концентрация буферного средства составляла 5-300 мМ, и более предпочтительной является концентрация 10-100 мМ. Не существует конкретных ограничений в отношении pH внутренней фазы липосом, однако предпочтительными являются значения от 3 до 11 и более предпочтительными - от 5 до 9.There are no particular restrictions on the solvent in the internal phase of liposomes and, for example, buffer solutions such as phosphate buffer solution, citrate buffer solution and phosphate-saline physiological saline, physiological saline, cell culture medium and so on can be mentioned. As for the solvent, when a buffer solution is used, it is preferable that the concentration of the buffering agent is 5-300 mM, and a concentration of 10-100 mM is more preferred. There are no particular restrictions on the pH of the internal phase of liposomes, however, values from 3 to 11 are more preferable, and from 5 to 9 are more preferred.

Наиболее предпочтительно в качестве водной среды для диспергирования липидной фракции используют 0,01М фосфатный буфер с pH равным 7,4.Most preferably, 0.01 M phosphate buffer with a pH of 7.4 is used as the aqueous medium for dispersing the lipid fraction.

В качестве сорастворителя субстанции убихинола используют неионогенное поверхностно-активное вещество (ПАВ). В качестве неионогенного ПАВ в данной композиции можно использовать Кремофор RH-40, Твин-20, Твин-60 или Твин-80 и другие, аналогичные им по свойствам поверхностно-активные вещества, а также их смеси.A non-ionic surfactant (surfactant) is used as a co-solvent of the substance ubiquinol. As a nonionic surfactant in this composition, you can use Cremophor RH-40, Tween-20, Tween-60 or Tween-80 and others, surface-active substances similar in their properties, as well as mixtures thereof.

Измельчение липосом проводят с помощью методов экструзии или гомогенизации/микрофлюидизации или замораживания-оттаивания или обработки ультразвуком (УЗ). Наиболее предпочтительно с помощью обработки ультразвуком с частотой 15-30 кГц в течение 1-60 минут в ледяной бане, наиболее предпочтительно в течение 5-40 минут.The grinding of liposomes is carried out using the methods of extrusion or homogenization / microfluidization or freezing-thawing or sonication (ultrasound). Most preferably by sonication at a frequency of 15-30 kHz for 1-60 minutes in an ice bath, most preferably within 5-40 minutes.

Очистку липосом проводят с помощью гельпроникающей хроматографии или фильтрации полученного раствора через фильтры с размером пор 0,45 мкм и 0,22 мкм.Purification of liposomes is carried out using gel permeation chromatography or filtering the resulting solution through filters with pore sizes of 0.45 μm and 0.22 μm.

Для удаления фармацевтического средства, которое не инкапсулировано в липосому, проводится диализ при 4°С в течение 2 часов с применением диализных мешков (OrDial D-Clean, 10 кДа, 25 кДа, производитель Orange Scientific), и 5%-ного раствора глюкозы в качестве внешнего раствора, с перемешиванием на магнитной мешалке. После замены внешнего раствора проводится еще один диализ в течение двух часов с одновременным перемешиванием, с получением таким образом содержащего липосомального средства. Содержащее липосомальное средство, приготовленное таким образом, имеет средний диаметр частиц 160±10 нм.To remove a pharmaceutical that is not encapsulated in a liposome, dialysis at 4 ° C for 2 hours using dialysis bags (OrDial D-Clean, 10 kDa, 25 kDa, manufactured by Orange Scientific), and a 5% glucose solution in as an external solution, with stirring on a magnetic stirrer. After replacing the external solution, another dialysis is carried out for two hours with simultaneous stirring, thereby obtaining a liposome-containing agent. The liposome-containing preparation thus prepared has an average particle diameter of 160 ± 10 nm.

В качестве антиоксидантов используют гидрофильные и липофильные антиоксиданты, такие как: α-токоферол, смесь токоферолов, аскорбиновая кислота и другие подходящие для стабилизации липосомальных форм антиоксиданты. Что касается количества антиоксидантов, достаточно если добавляют количество, способное обеспечить антиоксидантный эффект, однако предпочтительно использовать от 0,01 до 5 масс. % по отношению ко всему составу липосом, более предпочтительно - от 0,01 до 0,5 масс. %.Hydrophilic and lipophilic antioxidants are used as antioxidants, such as: α-tocopherol, a mixture of tocopherols, ascorbic acid and other antioxidants suitable for stabilizing liposomal forms. As for the amount of antioxidants, it is sufficient if an amount capable of providing an antioxidant effect is added, however, it is preferable to use from 0.01 to 5 mass. % in relation to the entire composition of liposomes, more preferably from 0.01 to 0.5 mass. %

С целью увеличения сроков годности липосом и снижения степени гидролиза липосомы подвергают лиофильной сушке.In order to increase the shelf life of liposomes and reduce the degree of hydrolysis of liposomes, they are subjected to freeze drying.

Для предотвращения слияния и агрегации, защиты от повреждения кристаллами льда лиофилизацию липосом проводят в присутствии криопротекторов, относящиеся к разным классам химических веществ, в частности: спирты (глицерин, диглицерин, полиглицерин, пропиленгликоль, полипропиленгликоль, этиленгликоль, диэтиленгликоль, триэтиленгликоль, полиэтиленгликоль, моноалкиловый эфир этиленгликоля, моноалкиловый эфир диэтиленгликоля, 1,3-бутиленгликольмоносахариды), амиды (диметилацетамид); оксиды (диметилсульфоксид), синтетические полимеры (поливинилпирролидон, синтетически модифицированные крахмалы), сахара (моносахариды такие как глюкоза, галактоза, манноза, фруктоза, инозит, рибоза и ксилоза; дисахариды, такие как лактоза, сахароза, целлобиоза, трегалоза и мальтоза; трисахариды, такие как раффиноза и мелицитоза; полисахариды, такие как циклодекстрин) и сахарные спирты (эритрит, ксилит, сорбит, маннит и мальтит). Наиболее предпочтительно в качестве криопротектора использовать углеводы (сахарозу, лактозу и трегалозу) или спирты (глицерин, полиэтиленгликоль, пропиленгликоль). В этом случае твердые препараты могут стабильно храниться в течение длительного периода времени.To prevent fusion and aggregation, to protect against damage by ice crystals, liposome lyophilization is carried out in the presence of cryoprotectants belonging to different classes of chemicals, in particular: alcohols (glycerin, diglycerin, polyglycerol, propylene glycol, polypropylene glycol, ethylene glycol, diethylene glycol, polyethylene glycol, ethylene glycol ethylene glycol, diethylene glycol monoalkyl ether, 1,3-butylene glycol monosaccharides), amides (dimethylacetamide); oxides (dimethyl sulfoxide), synthetic polymers (polyvinylpyrrolidone, synthetically modified starches), sugars (monosaccharides such as glucose, galactose, mannose, fructose, inositol, ribose and xylose; disaccharides such as lactose, sucrose, cellobiose, trehalose and malam; such as raffinose and melicytosis; polysaccharides such as cyclodextrin) and sugar alcohols (erythritol, xylitol, sorbitol, mannitol and maltitol). It is most preferable to use carbohydrates (sucrose, lactose and trehalose) or alcohols (glycerin, polyethylene glycol, propylene glycol) as a cryoprotectant. In this case, solid preparations can be stably stored for a long period of time.

Не существует конкретных ограничений в отношении концентрации сахара или спирта, содержащегося в липосомальной композиции, однако в ситуации, когда, например, липосомы диспергированы в растворителе, предпочтительно, чтобы концентрация сахара составляла от 2 до 20% (вес/объем), и более предпочтительно - от 5 до 10% (вес/объем). Что касается концентрации спирта, предпочтительными значениями являются от 1 до 5% (вес/объем), и более предпочтительными - от 2 до 2,5% (вес/объем).There are no specific restrictions on the concentration of sugar or alcohol contained in the liposome composition, however, in a situation where, for example, the liposomes are dispersed in a solvent, it is preferable that the sugar concentration is from 2 to 20% (weight / volume), and more preferably from 5 to 10% (weight / volume). With regard to alcohol concentration, preferred values are from 1 to 5% (w / v), and more preferred from 2 to 2.5% (w / v).

В качестве консервантов липосомы могут содержать: метилпарабен, пропилпарабен, фенол и др. Содержание консервантов в растворе, предпочтительно использовать от 0,01 до 0,5 масс. %, и более предпочтительно от 0,1 до 0,3 масс. %As preservatives, liposomes may contain: methylparaben, propylparaben, phenol, etc. The preservative content in the solution, it is preferable to use from 0.01 to 0.5 mass. %, and more preferably from 0.1 to 0.3 mass. %

Очищенные липосомы убихинола можно использовать для создания различных фармацевтических средств, в том числе в различных лекарственных формах: инъекционных, пероральных и наружных.Purified ubiquinol liposomes can be used to create various pharmaceuticals, including in various dosage forms: injectable, oral and external.

В настоящем изобретении средневзвешенный размер частиц липосом определяли методом лазерной фотон-корреляционной спектроскопии, с помощью лазерного анализатора размеров наночастиц HORIBASZ-100Z (Horiba, Japan).In the present invention, the weighted average particle size of liposomes was determined by laser photon correlation spectroscopy using a laser nanoparticle size analyzer HORIBASZ-100Z (Horiba, Japan).

Размер липосомальных частиц можно дополнительно корректировать по мере необходимости, например, путем проведения экструдирования липосомальных дисперсий под высоким давлением с помощью поликарбонатных мембран с порами различного размера. Корректировку размеров частиц можно проводить в любое время в процессе производства липосом по настоящему изобретению.The size of the liposome particles can be further adjusted as necessary, for example, by extruding the liposome dispersions under high pressure using polycarbonate membranes with pores of various sizes. Particle size adjustments can be made at any time during the production of the liposomes of the present invention.

Сущность предлагаемого способа иллюстрируется следующими примерами конкретного осуществления.The essence of the proposed method is illustrated by the following examples of specific implementation.

Пример 1. Предварительно готовят 100 мл 0,01М фосфатного буфера (pH 7,4) и растворяют в нем 5 г лактозы и 0,05 г аскорбиновой кислоты. Растворяют в 10 мл 95% спирта этилового 2,2 г смеси фосфолипидов фосфатидилхолина и холестерина при их массовом соотношении 4:1 соответственно, 0,05 г α-токоферола ацетата и 1,5 г сорастворителя твина-80 при температуре 55°С. В полученном спиртовом растворе растворяют убихинол в количестве 1 г, до получения прозрачного раствора. После этого быстро переносят полученный раствор в раствор лактозы в фосфатном буфере при температуре 55°С и перемешивают в течение 30 минут. Затем этанол отгоняют на роторном испарителе IKA (Германия) под вакуумом при температуре 30-35°С, а полученный раствор доводят водой до 100 мл. Полученную суспензию обрабатывают ультразвуком частоты 15 кГц в течение 40 минут, непрерывно охлаждая ледяной водой (ультразвуковой диспергатор 4710 Cole-Parmer Instruments, США). Липосомы отделяют от низкомолекулярных ингредиентов, используя гельпроникающую хроматографию - Sephadex G-25 и стерильно квалифицировали через фильтр с размером пор 0,22 мкм. Полученные липосомы фасуют во флаконы и укупоривают в токе азота.Example 1. Previously prepare 100 ml of 0.01 M phosphate buffer (pH 7.4) and dissolve in it 5 g of lactose and 0.05 g of ascorbic acid. Dissolve in 10 ml of 95% ethyl alcohol 2.2 g of a mixture of phosphatidylcholine phospholipids and cholesterol at a mass ratio of 4: 1, respectively, 0.05 g of α-tocopherol acetate and 1.5 g of tween-80 co-solvent at a temperature of 55 ° C. In the resulting alcohol solution, ubiquinol is dissolved in an amount of 1 g, until a clear solution is obtained. After that, the resulting solution is quickly transferred to a solution of lactose in phosphate buffer at a temperature of 55 ° C and stirred for 30 minutes. Then ethanol is distilled off on a rotary evaporator IKA (Germany) under vacuum at a temperature of 30-35 ° C, and the resulting solution is brought with water to 100 ml. The resulting suspension is treated with ultrasound at a frequency of 15 kHz for 40 minutes, continuously cooled with ice water (ultrasonic disperser 4710 Cole-Parmer Instruments, USA). Liposomes are separated from low molecular weight ingredients using gel permeation chromatography - Sephadex G-25 and sterile qualified through a filter with a pore size of 0.22 μm. The resulting liposomes are Packed in bottles and sealed in a stream of nitrogen.

Пример 2. Предварительно готовят 100 мл 0,01М фосфатного буфера (pH 7,4) и растворяют в нем 10 г трегалозы. Растворяют в 10 мл 95% спирта этилового 1,45 г смеси фосфолипидов фосфатидилхолина и холестерина при их массовом соотношении 4,8:1 соответственно, 0,2 г смеси токоферолов и 1,0 г смеси сорастворителей твина-80 и твина-20, массового соотношения 8:2, при температуре 55°С. В полученном спиртовом растворе растворяют убихинол в количестве 1 г, до получения прозрачного раствора. После этого быстро переносят полученный раствор в раствор трегалозы в фосфатном буфере при температуре 55°С и перешивают в течение 30 минут. Затем этанол отгоняют на роторном испарителе IKA (Германия) под вакуумом при температуре 30-35°С, а полученный раствор доводят водой до 100 мл. Полученную суспензию обрабатывают ультразвуком частоты 15 кГц в течение 30 минут, непрерывно охлаждая ледяной водой (ультразвуковой диспергатор 4710 Cole-Parmer Instruments, США). Липосомы отделяют от низкомолекулярных ингредиентов, используя гельпроникающую хроматографию - Sephadex G-25 и стерильно квалифицировали через фильтр с размером пор 0,22 мкм. Полученные липосомы фасуют во флаконы и лиофильно высушивают до получения порошка липосом.Example 2. Pre-prepare 100 ml of 0.01 M phosphate buffer (pH 7.4) and 10 g of trehalose are dissolved in it. 1.45 g of a mixture of phosphatidylcholine phospholipids and cholesterol are dissolved in 10 ml of 95% ethyl alcohol with a mass ratio of 4.8: 1, respectively, 0.2 g of a mixture of tocopherols and 1.0 g of a mixture of cosolvents of tween-80 and tween-20, mass 8: 2 ratio, at a temperature of 55 ° C. In the resulting alcohol solution, ubiquinol is dissolved in an amount of 1 g, until a clear solution is obtained. After that, the resulting solution is quickly transferred to a solution of trehalose in phosphate buffer at a temperature of 55 ° C and alter for 30 minutes. Then ethanol is distilled off on a rotary evaporator IKA (Germany) under vacuum at a temperature of 30-35 ° C, and the resulting solution is brought with water to 100 ml. The resulting suspension was treated with ultrasound at a frequency of 15 kHz for 30 minutes, continuously cooled with ice water (ultrasonic disperser 4710 Cole-Parmer Instruments, USA). Liposomes are separated from low molecular weight ingredients using gel permeation chromatography - Sephadex G-25 and sterile qualified through a filter with a pore size of 0.22 μm. The resulting liposomes are Packed in bottles and freeze-dried to obtain a powder of liposomes.

Пример 3. Растворяют в 10 мл 95% спирта этилового 2,45 г смеси фосфолипидов фосфатидилхолина и холестерина при их массовом соотношении 6,25:1 соответственно и 1,5 г сорастворителя твина-60 при температуре 55°С. В полученном спиртовом растворе растворяют убихинол в количестве 1 г, до получения прозрачного раствора. После этого быстро переносят полученный раствор в 100 мл водной среды (0,01М фосфатный буфер, pH 7,4) при температуре 55°С и перешивают в течение 30 минут. Затем этанол отгоняют на роторном испарителе IKA (Германия) под вакуумом при температуре 30-35°С, а полученный раствор доводят водой до 100 мл. Полученную суспензию обрабатывают ультразвуком частоты 15 кГц в течение 5 минут, непрерывно охлаждая ледяной водой (ультразвуковой диспергатор 4710 Cole-Parmer Instruments, США). Липосомы квалифицировали через фильтр с размером пор 0,22 мкм.Example 3. Dissolve in 10 ml of 95% ethyl alcohol 2.45 g of a mixture of phosphatidylcholine phospholipids and cholesterol with a mass ratio of 6.25: 1, respectively, and 1.5 g of Tween-60 cosolvent at a temperature of 55 ° C. In the resulting alcohol solution, ubiquinol is dissolved in an amount of 1 g, until a clear solution is obtained. After that, the resulting solution is quickly transferred to 100 ml of an aqueous medium (0.01 M phosphate buffer, pH 7.4) at a temperature of 55 ° C and alter for 30 minutes. Then ethanol is distilled off on a rotary evaporator IKA (Germany) under vacuum at a temperature of 30-35 ° C, and the resulting solution is brought with water to 100 ml. The resulting suspension is treated with ultrasound at a frequency of 15 kHz for 5 minutes, continuously cooled with ice water (ultrasonic disperser 4710 Cole-Parmer Instruments, USA). Liposomes were qualified through a 0.22 μm filter.

Пример 4. Предварительно растворяют 9 г трегалозы и 1 г полиэтиленгликоля 400 в изотоническом стерильном растворе NaCl. Растворяют в 10 мл 95% спирта этилового 1,7 г смеси фосфолипидов фосфатидилхолина и холестерина при их массовом соотношении 5,8:1 соответственно, 0,1 г α-токоферола ацетата и 1,1 твина-20 при температуре 55°С. В полученном спиртовом растворе растворяют убихинол в количестве 1 г, до получения прозрачного раствора. После этого быстро переносят полученный раствор в раствор трегалозы и ПЭГ400 в изотоническом растворе при температуре 55°С и перешивают в течение 20 минут. Затем этанол отгоняют на роторном испарителе IKA (Германия) под вакуумом при температуре 30-35°С, а полученный раствор доводят водой до 100 мл. Полученную суспензию обрабатывают ультразвуком частоты 20 кГц в течение 10 минут, непрерывно охлаждая ледяной водой (ультразвуковой диспергатор 4710 Cole-Parmer Instruments, США). Липосомы отделяют от низкомолекулярных ингредиентов, используя гельпроникающую хроматографию - Sephadex G-25 и стерильно квалифицировали через фильтр с размером пор 0,22 мкм. Полученные липосомы фасуют во флаконы и лиофильно высушивают до получения порошка липосом.Example 4. Pre-dissolved 9 g of trehalose and 1 g of polyethylene glycol 400 in an isotonic sterile NaCl solution. 1.7 g of a mixture of phosphatidylcholine phospholipids and cholesterol are dissolved in 10 ml of 95% ethyl alcohol at a mass ratio of 5.8: 1, respectively, 0.1 g of α-tocopherol acetate and 1.1 tween-20 at a temperature of 55 ° C. In the resulting alcohol solution, ubiquinol is dissolved in an amount of 1 g, until a clear solution is obtained. After that, the resulting solution is quickly transferred to a solution of trehalose and PEG400 in an isotonic solution at a temperature of 55 ° C and alter for 20 minutes. Then ethanol is distilled off on a rotary evaporator IKA (Germany) under vacuum at a temperature of 30-35 ° C, and the resulting solution is brought with water to 100 ml. The resulting suspension is treated with ultrasound at a frequency of 20 kHz for 10 minutes, continuously cooled with ice water (ultrasonic disperser 4710 Cole-Parmer Instruments, USA). Liposomes are separated from low molecular weight ingredients using gel permeation chromatography - Sephadex G-25 and sterile qualified through a filter with a pore size of 0.22 μm. The resulting liposomes are Packed in bottles and freeze-dried to obtain a powder of liposomes.

Пример 5. Растворяют в 10 мл 95% спирта этилового 2,5 г смеси фосфолипидов фосфатидилхолина и холестерина при их массовом соотношении 6:1 соответственно и 1,5 г сорастворителя Кремофора RH-40 при температуре 55°С. В полученном спиртовом растворе растворяют убихинол в количестве 1 г, до получения прозрачного раствора. После этого спиртовой раствор отгоняют под вакуумом на роторном испарителе IKA (Германия) при температуре 30-35°С до получения тонкой пленки. Полученную пленку диспергируют в 100 мл 0,01М фосфатном буфере (pH 7,4) в течение 1 часа до полного перехода высушенных веществ в водную фазу. Полученную суспензию обрабатывали ультразвуком частоты 15 кГц в течение 30 минут, непрерывно охлаждая ледяной водой (ультразвуковой диспергатор 4710 Cole-Parmer Instruments, США). Липосомы квалифицировали через фильтр с размером пор 0,22 мкм.Example 5. Dissolve in 10 ml of 95% ethyl alcohol 2.5 g of a mixture of phosphatidylcholine phospholipids and cholesterol at a mass ratio of 6: 1, respectively, and 1.5 g of Cremophor RH-40 co-solvent at a temperature of 55 ° C. In the resulting alcohol solution, ubiquinol is dissolved in an amount of 1 g, until a clear solution is obtained. After that, the alcohol solution is distilled off under vacuum on an IKA rotary evaporator (Germany) at a temperature of 30-35 ° C until a thin film is obtained. The resulting film was dispersed in 100 ml of 0.01 M phosphate buffer (pH 7.4) for 1 hour until the complete transition of the dried substances into the aqueous phase. The resulting suspension was treated with ultrasound at a frequency of 15 kHz for 30 minutes, continuously cooled with ice water (ultrasonic disperser 4710 Cole-Parmer Instruments, USA). Liposomes were qualified through a 0.22 μm filter.

Пример 6. Растворяют в 10 мл 95% спирта этилового 3,5 г смеси фосфолипидов фосфатидилхолина и холестерина при их массовом соотношении 1:1 соответственно и 2 г сорастворителя твина-80 при температуре 55°С. В полученном спиртовом растворе растворяют убихинол в количестве 1 г, до получения прозрачного раствора. После этого спиртовой раствор отгоняют под вакуумом на роторном испарителе IKA (Германия) при температуре 30-35°С до получения тонкой пленки. Полученную пленку диспергируют в 100 мл деионизированной воде в течение 45 минут до полного перехода высушенных веществ в водную фазу. Полученную суспензию гомогенизируют при высоком давлении. Липосомы квалифицировали через фильтр с размером пор 0,22 мкм.Example 6. Dissolve in 10 ml of 95% ethyl alcohol 3.5 g of a mixture of phosphatidylcholine phospholipids and cholesterol at a mass ratio of 1: 1, respectively, and 2 g of Tween-80 cosolvent at a temperature of 55 ° C. In the resulting alcohol solution, ubiquinol is dissolved in an amount of 1 g, until a clear solution is obtained. After that, the alcohol solution is distilled off under vacuum on an IKA rotary evaporator (Germany) at a temperature of 30-35 ° C until a thin film is obtained. The resulting film is dispersed in 100 ml of deionized water for 45 minutes until the complete transition of the dried substances into the aqueous phase. The resulting suspension is homogenized at high pressure. Liposomes were qualified through a 0.22 μm filter.

Пример 7. Предварительно готовят 100 мл 0,01М фосфатного буфера (pH 7,4) и растворяют в нем 10 г трегалозы. Растворяют в 10 мл 95% спирта этилового 2,4 г смеси фосфолипидов фосфатидилхолина и холестерина при их массовом соотношении 5,5:1 соответственно и 1,3 г сорастворителя твина-80 при температуре 55°С. В полученном спиртовом растворе растворяют убихинол в количестве 1 г, до получения прозрачного раствора. После этого, используя шприц, быстро переносят полученный раствор в раствор трегалозы в фосфатном буфере при температуре 55°С и перешивают в течение 30 минут, используя магнитную мешалку. Затем этанол отгоняют на роторном испарителе IKA (Германия) под вакуумом при температуре 30-35°С, а полученный раствор доводят водой до 100 мл. Полученную суспензию обрабатывают ультразвуком частоты 15 кГц в течение 40 минут, непрерывно охлаждая ледяной водой (ультразвуковой диспергатор 4710 Cole-Parmer Instruments, США). Для удаления субстанции, которая не инкапсулирована в липосому, проводится диализ при 4°С в течение 2 часов с применением диализных мешков 25 кДа (OrDial D-Clean, производитель Orange Scientific), и 5%-ного раствора глюкозы в качестве внешнего раствора, с перемешиванием на магнитной мешалке. После замены внешнего раствора проводится еще один диализ в течение двух часов с одновременным перемешиванием. Далее липосомы стерильно квалифицировали через фильтр с размером пор 0,22 мкм. Полученные липосомы фасуют во флаконы и лиофильно высушивают до получения порошка липосом.Example 7. Pre-prepare 100 ml of 0.01 M phosphate buffer (pH 7.4) and dissolve in it 10 g of trehalose. Dissolve in 10 ml of 95% ethyl alcohol 2.4 g of a mixture of phosphatidylcholine phospholipids and cholesterol at a mass ratio of 5.5: 1, respectively, and 1.3 g of Tween-80 cosolvent at a temperature of 55 ° C. In the resulting alcohol solution, ubiquinol is dissolved in an amount of 1 g, until a clear solution is obtained. After that, using a syringe, quickly transfer the resulting solution to a solution of trehalose in phosphate buffer at 55 ° C and alter for 30 minutes using a magnetic stirrer. Then ethanol is distilled off on a rotary evaporator IKA (Germany) under vacuum at a temperature of 30-35 ° C, and the resulting solution is brought with water to 100 ml. The resulting suspension is treated with ultrasound at a frequency of 15 kHz for 40 minutes, continuously cooled with ice water (ultrasonic disperser 4710 Cole-Parmer Instruments, USA). To remove a substance that is not encapsulated in a liposome, dialysis is performed at 4 ° C for 2 hours using 25 kDa dialysis bags (OrDial D-Clean, manufactured by Orange Scientific), and a 5% glucose solution as an external solution, s stirring on a magnetic stirrer. After replacing the external solution, another dialysis is carried out for two hours with simultaneous stirring. Next, the liposomes were sterile qualified through a filter with a pore size of 0.22 μm. The resulting liposomes are Packed in bottles and freeze-dried to obtain a powder of liposomes.

Пример 8. Растворяют в 10 мл 95% спирта этилового 3 г смеси липоид С45 (LIPOID GmbH (Германия)) и холестерина при их массовом соотношении 5:1 соответственно и 1,3 г сорастворителя твина-80 при температуре 55°С. В полученном спиртовом растворе растворяют убихинол в количестве 1 г, до получения прозрачного раствора. После этого, используя шприц, быстро переносят полученный раствор в 100 мл деионизированной воды при температуре 55°С и перешивают в течение 30 минут. Затем этанол отгоняют на роторном испарителе IKA (Германия) под вакуумом при температуре 30-35°С, а полученный раствор доводят водой до 100 мл. Полученную суспензию гомогенизируют при высоком давлении. Липосомы квалифицировали через фильтр с размером пор 0,22 мкм. Полученные липосомы используют для создания косметических средств, смешивая в необходимых пропорциях со вспомогательными веществами.Example 8. Dissolve in 10 ml of 95% ethyl alcohol 3 g of a mixture of C45 lipoid (LIPOID GmbH (Germany)) and cholesterol at a mass ratio of 5: 1, respectively, and 1.3 g of Tween-80 cosolvent at a temperature of 55 ° C. In the resulting alcohol solution, ubiquinol is dissolved in an amount of 1 g, until a clear solution is obtained. After that, using a syringe, quickly transfer the resulting solution to 100 ml of deionized water at a temperature of 55 ° C and alter for 30 minutes. Then ethanol is distilled off on a rotary evaporator IKA (Germany) under vacuum at a temperature of 30-35 ° C, and the resulting solution is brought with water to 100 ml. The resulting suspension is homogenized at high pressure. Liposomes were qualified through a 0.22 μm filter. The resulting liposomes are used to create cosmetics, mixing in the necessary proportions with excipients.

Пример 9. Растворяют в 10 мл 95% спирта этилового 2 г смеси соевого лецитина и холестерина при их массовом соотношении 4,5:1 соответственно и 1,1 г сорастворителя твина-80 при температуре 55°С. В полученном спиртовом растворе растворяют убихинол в количестве 1 г, до получения прозрачного раствора. После этого быстро переносят полученный раствор в 100 мл водной среды (0,01М боратном буфере pH 9,2) при температуре 55°С и перешивают в течение 30 минут. Затем этанол отгоняют на роторном испарителе IKA (Германия) под вакуумом при температуре 30-35°С, а полученный раствор доводят водой до 100 мл. Полученную суспензию обрабатывают ультразвуком частоты 15 кГц в течение 5 минут, непрерывно охлаждая ледяной водой (ультразвуковой диспергатор 4710 Cole-Parmer Instruments, США). После этого проводят экструдирование липосомальной дисперсии под высоким давлением с помощью поликарбонатных мембран с порами различного размера (от 450 до 50 нм). Средневзвешенный размер частиц липосом определяли методом лазерной фотон-корреляционной спектроскопии, с помощью лазерного анализатора размеров наночастиц HORIBASZ-100Z (Horiba, Japan). Липосомы, приготовленные таким образом, имеют средний диаметр частиц 160±10 нм.Example 9. Dissolve in 10 ml of 95% ethyl alcohol 2 g of a mixture of soya lecithin and cholesterol at a mass ratio of 4.5: 1, respectively, and 1.1 g of co-solvent Tween-80 at a temperature of 55 ° C. In the resulting alcohol solution, ubiquinol is dissolved in an amount of 1 g, until a clear solution is obtained. After that, the resulting solution is quickly transferred to 100 ml of an aqueous medium (0.01 M borate buffer, pH 9.2) at a temperature of 55 ° C and alter for 30 minutes. Then ethanol is distilled off on a rotary evaporator IKA (Germany) under vacuum at a temperature of 30-35 ° C, and the resulting solution is brought with water to 100 ml. The resulting suspension is treated with ultrasound at a frequency of 15 kHz for 5 minutes, continuously cooled with ice water (ultrasonic disperser 4710 Cole-Parmer Instruments, USA). After that, the liposome dispersion is extruded under high pressure using polycarbonate membranes with pores of various sizes (from 450 to 50 nm). The weighted average particle size of liposomes was determined by laser photon correlation spectroscopy using a laser nanoparticle size analyzer HORIBASZ-100Z (Horiba, Japan). Liposomes prepared in this way have an average particle diameter of 160 ± 10 nm.

Пример 10. Сравнение биодоступности убихинола (восстановленного коэнзима Q₁₀) и окисленного коэнзима Q₁₀ in vivo из липосом.Example 10. Comparison of the bioavailability of ubiquinol (reduced coenzyme Q ₁₀ ) and oxidized coenzyme Q ₁₀ in vivo from liposomes.

При сравнении использовали липосомы, содержащие убихиннол, полученные по примеру 1, и липосомы, содержащие окисленный коэнзим Q₁₀, которые были получены аналогично примеру 1 за исключением того, что вместо убихинола использовали окисленный коэнзим Q₁₀ (сравнительный пример 1).When comparing used liposomes containing ubiquinol obtained in example 1, and liposomes containing oxidized coenzyme Q ₁₀ , which were obtained analogously to example 1 except that instead of ubiquinol used oxidized coenzyme Q ₁₀ (comparative example 1).

Образцы липосом вводили белым крысам однократно перорально через зонд в дозе 24 мг/кг. Образцы крови забирали через 5 ч. К отобранным и отцентрифугированным образцам плазмы крови (1 мл) добавляли внутренний стандарт (100 мкл раствора ретинола пальмитата с концентрацией 0,26 мг/мл), 1,7 мл метанола, интенсивно встряхивали, добавляли 4 мл гексана и экстрагировали в течение 10 мин. Гексановый экстракт отделяли, растворитель удаляли. Сухой остаток растворяли в 0,1 мл метанола и полученный раствор анализировали методом обратнофазной высокоэффективной жидкостной хроматографией на хроматографе высокого давления LC-20 (Shimadzu, Япония). Регистрация и обработка хроматограмм выполнена с помощью программного обеспечения LC Solution (Shimadzu, Япония). Полученные результаты приведены на фиг. 1, которые свидетельствуют о более высокой биодоступности восстановленного коэнзима Q₁₀ в составе липосом, чем окисленного коэнзима Q₁₀ в составе липосом.Liposome samples were administered to white rats once orally through a probe at a dose of 24 mg / kg. Blood samples were taken after 5 h. To the selected and centrifuged blood plasma samples (1 ml) was added an internal standard (100 μl of a solution of retinol palmitate with a concentration of 0.26 mg / ml), 1.7 ml of methanol, was vigorously shaken, 4 ml of hexane was added and extracted for 10 minutes The hexane extract was separated, the solvent was removed. The dry residue was dissolved in 0.1 ml of methanol and the resulting solution was analyzed by reverse phase high performance liquid chromatography on an LC-20 high pressure chromatograph (Shimadzu, Japan). Registration and processing of chromatograms was performed using LC Solution software (Shimadzu, Japan). The results are shown in FIG. 1, which indicate a higher bioavailability of the reduced coenzyme Q ₁₀ in the composition of liposomes than the oxidized coenzyme Q ₁₀ in the composition of liposomes.

Пример 11. Определение коэффициента захвата (коэффициента инкапсуляции) убихинола в липосомы.Example 11. Determination of the capture coefficient (encapsulation coefficient) of ubiquinol in liposomes.

Использовали липосомы, полученные по примеру 2 и по примеру 6, в которых массовое соотношение убихинола к смеси фосфолипида и стерина составляло 1:1,45 и 1:3,5 соответственно. Для сравнения определяли коэффициент захвата убихинола в липосомы, полученные аналогично примеру 2 за исключением соотношения убихинола к смеси фосфолипида и стерина: сравнительный пример 2 - соотношение убихинола к смеси фосфолипида и стерина составляло 1:0,5; сравнительный пример 3 - соотношение убихинола к смеси фосфолипида и стерина составляло 1:5. Липосомальную композицию с захваченным (инкапсулированным) активным соединением (убихинолом) подвергали диализу по методике, описанной в (Совершенствование технологии и разработка новых лекарственных форм. Учебно-методическое пособие к выполнению практических занятий по заводской технологии лекарственных средств. - 2007. - 16 с.). Концентрацию убихинола в фильтрате измеряли спектрофотометрическим методом при длине волны 290 нм, определяя количество убихинола, не включенного в липосомы. Коэффициент захвата (коэффициент инкапсуляции) убихинола рассчитывали по формуле:Used liposomes obtained in example 2 and in example 6, in which the mass ratio of ubiquinol to a mixture of phospholipid and sterol was 1: 1.45 and 1: 3.5, respectively. For comparison, the capture coefficient of ubiquinol in liposomes was determined, obtained analogously to example 2 except for the ratio of ubiquinol to a mixture of phospholipid and sterol: comparative example 2 - the ratio of ubiquinol to a mixture of phospholipid and sterol was 1: 0.5; comparative example 3 - the ratio of ubiquinol to a mixture of phospholipid and sterol was 1: 5. The liposomal composition with the captured (encapsulated) active compound (ubiquinol) was subjected to dialysis according to the method described in (Improving the technology and development of new dosage forms. A training manual for practical exercises on the factory technology of medicines. - 2007. - 16 p.) . The concentration of ubiquinol in the filtrate was measured spectrophotometrically at a wavelength of 290 nm, determining the amount of ubiquinol not included in liposomes. The capture coefficient (encapsulation coefficient) of ubiquinol was calculated by the formula:

где КЗ - коэффициент захвата, или коэффициент инкапсуляции, C₀(Q₁₀) - изначально взятое количество убихинола, С₁(Q₁₀) - количество убихинола, не включенного в липосомы. Полученные результаты показаны в таблице 1.where KZ is the capture coefficient, or encapsulation coefficient, C ₀ (Q ₁₀ ) is the initially taken amount of ubiquinol, C ₁ (Q ₁₀ ) is the amount of ubiquinol not included in liposomes. The results obtained are shown in table 1.

Приведенные данные демонстрируют, что наиболее эффективная инкапсуляция убихинола в липосомы достигается при заявленных в настоящем изобретении соотношениях убихинола к смеси фосфолипида и стерина.These data demonstrate that the most effective encapsulation of ubiquinol in liposomes is achieved when the ratios of ubiquinol to a mixture of phospholipid and sterol are stated in the present invention.

Пример 12. Оценка стабильности полученных образцов липосом при длительном хранении.Example 12. Evaluation of the stability of the obtained liposome samples during long-term storage.

Стабильность полученных образцов липосом при длительном хранении определяли, измеряя их средний размер в нм методом динамического светорассеяния. При этом стабильность липосом заключается в сохранении в течение долгого времени их среднего размера, измеренного сразу после получения образцов липосом (отсутствие слипания, агрегации и разрушения липосом, сопровождающихся сильным увеличением размера липосом). Установлено, что после 12 месяцев хранения при температуре +2…+8°С размеры полученных в примерах 1-9 липосом, содержащих убихинол, не изменяются. На основе полученных данных можно сделать вывод, что липосомальная форма убихинола размером до 220 нм стабильна при хранении как минимум в течение 1 года.The stability of the obtained liposome samples during long-term storage was determined by measuring their average size in nm by dynamic light scattering. Moreover, the stability of liposomes consists in maintaining for a long time their average size, measured immediately after obtaining liposome samples (lack of adhesion, aggregation and destruction of liposomes, accompanied by a strong increase in the size of liposomes). It was found that after 12 months of storage at a temperature of + 2 ... + 8 ° C, the sizes obtained in examples 1-9 of liposomes containing ubiquinol do not change. Based on the data obtained, it can be concluded that the liposomal form of ubiquinol up to 220 nm in size is stable during storage for at least 1 year.

Для сравнения была оценена стабильность липосом, содержащих убихинол, полученных аналогично примеру 1 за исключением того, что в одном варианте при получении липосом не использовали Твин-80 (неионогенное ПАВ) - сравнительный пример 4, а в другом варианте при получении липосом не использовали лактозу (криопротектор) - сравнительный пример 5. Липосомы, полученные согласно сравнительному примеру 4 были стабильны не более 8 месяцев, а полученные согласно сравнительному примеру 5 - не более 6 месяцев.For comparison, the stability of liposomes containing ubiquinol obtained analogously to Example 1 was evaluated, except that in one embodiment, Tween-80 (nonionic surfactant) was not used in the preparation of liposomes - comparative example 4, and in another embodiment, lactose was not used in the preparation of liposomes ( cryoprotectant) - comparative example 5. Liposomes obtained according to comparative example 4 were stable for no more than 8 months, and obtained according to comparative example 5 - no more than 6 months.

Claims

1. A method of obtaining a liposomal form of ubiquinol, comprising preparing a solution containing a mixture of phospholipid and sterol with a mass ratio of 1: 0.1-2, respectively, ubiquinol with a mass ratio of ubiquinol to a mixture of phospholipid and sterol equal to 1: 1-4, respectively, and co-solvent, which is used as a nonionic surfactant, in ethanol, dispersing the resulting solution containing the lipid fraction in an aqueous medium containing a cryoprotectant to obtain a suspension of lipid vesicles with ubiquinol contained in them, homogenization of a suspension of lipid vesicles and separation of liposomes with a size of not more than 220 nm with ubiquinol included in them.

2. The method according to p. 1, characterized in that tween-80 is used as a co-solvent.

3. The method according to p. 1, characterized in that the removal of ethanol from the solution occurs before the dispersion of the solution in an aqueous medium or after dispersion of the solution in an aqueous medium.

4. The method according to p. 1, characterized in that the ethanol is removed under vacuum on a rotary evaporator at a temperature of 30-35 ° C.

5. The method according to p. 1, characterized in that as an aqueous medium for dispersion of the lipid fraction using a buffer solution with a concentration of 0.001-0.1 mol / l and a pH of 3-11.

6. The method according to p. 1, characterized in that as an aqueous medium for dispersion of the lipid fraction using 0.01 M phosphate buffer with a pH of 7.4.

7. The method according to p. 1, characterized in that the isotonic sterile NaCl solution or deionized water is used as the aqueous medium for dispersing the lipid fraction.

8. The method according to p. 1, characterized in that the grinding of liposomes is carried out using methods of extrusion, or homogenization / microfluidization, or freezing-thawing, or sonication with a frequency of 15-30 kHz or at high pressure for 5-40 minutes.

9. The method according to p. 1, characterized in that the separation of liposomes is carried out using gel permeation chromatography or filtering the resulting solution through filters with pore sizes of 0.45 μm and 0.22 μm.

10. The method according to p. 1, characterized in that to remove ubiquinol, which is not encapsulated in the liposome, dialysis is carried out at 4 ° C for 2 hours using dialysis bags of 10-25 kDa.

11. The method according to p. 10, characterized in that the determination of ubiquinol included in liposomes is carried out spectrophotometrically.

12. The method according to p. 1, characterized in that in the process of obtaining liposomes, antioxidants and / or preservatives are additionally introduced.

13. The method according to p. 1, characterized in that the finished liposomes are subjected to freeze drying.

14. Liposomal pharmaceutical composition comprising the liposomal form of ubiquinol obtained by the method according to claim 1.

15. The composition according to p. 14, characterized in that it further comprises hydrophilic and / or lipophilic antioxidants in an amount of from 0.01 to 5 wt.% With respect to the entire composition of liposomes.

16. The composition according to p. 15, characterized in that as a hydrophilic antioxidant contains ascorbic acid.

17. The composition according to p. 15, characterized in that as a lipophilic antioxidant contains α-tocopherol or a mixture of tocopherols.

18. The composition according to p. 14, characterized in that as a cryoprotectant contains sugar, preferably trehalose, in a concentration of from 2 to 20 wt.% In relation to the entire composition of liposomes in liquid form.

19. The composition according to p. 14, characterized in that as a cryoprotectant contains alcohols in a concentration of from 1 to 5 wt.% In relation to the entire composition of liposomes in liquid form.

20. The composition according to p. 14, characterized in that it contains preservatives from 0.01 to 0.5 wt.% In relation to the entire composition of liposomes.

21. The composition according to any one of paragraphs. 14-20, characterized in that it is used to create various pharmaceuticals, including in various dosage forms: injectable, ophthalmic, oral and external.

22. The composition according to any one of paragraphs. 14-20, characterized in that it is in dehydrated form or in the form of an aqueous suspension.

23. The composition according to p. 22, characterized in that the dehydrated form is a powder.

24. Liposomal cosmetic composition comprising the liposomal form of ubiquinol obtained by the method according to claim 1.