RU2597846C1 - Способ оценки влияния цитомегаловирусной инфекции на активность над-зависимой изоцитратдегидрогеназы в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты на третьем триместре беременности - Google Patents
Способ оценки влияния цитомегаловирусной инфекции на активность над-зависимой изоцитратдегидрогеназы в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты на третьем триместре беременности Download PDFInfo
- Publication number
- RU2597846C1 RU2597846C1 RU2015117064/15A RU2015117064A RU2597846C1 RU 2597846 C1 RU2597846 C1 RU 2597846C1 RU 2015117064/15 A RU2015117064/15 A RU 2015117064/15A RU 2015117064 A RU2015117064 A RU 2015117064A RU 2597846 C1 RU2597846 C1 RU 2597846C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- nad
- isocitrate dehydrogenase
- activity
- trimester
- cytomegalovirus
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для диагностики нарушения энергетического обмена в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты при обострении цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации. Для этого в периферической крови определяют титр антител к цитомегаловирусу, выполняют гистохимическую реакцию на NAD-изоцитратдегидрогеназу, и при титре антител класса G к цитомегаловирусу 1:1600, снижении активности NAD-изоцитратдегидрогеназы до 21,6±1,91 усл. ед. диагностируют нарушение энергетического обмена в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты, отрицательно влияющее на формирование плода в период гестации. Способ позволяет диагностировать нарушение энергетического обмена в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты при простоте его исполнения. 2 ил.
Description
1. Цель изобретения - выявить характер влияния цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации на активность НАД-зависимой изоцитратдегидрогеназы в синцитиотрофобласте плаценты, приводящей к нарушению энергетических процессов в фетоплацентарном барьере.
2. Изобретение относится к медицине, а именно к разработке гистохимического способа диагностики снижения активности НАД-зависимой изоцитратдегидрогеназы, доказывающего нарушение процессов энергообмена в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты при обострении цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре беременности.
3. Раскрытие изобретения
Изоцитратдегидрогеназа катализирует обратимое превращение изоцитрата в α-кетоглутарат и CO2 в двухстадийной реакции [3, 6]. Первый шаг реакции включает окисление изоцитрата в промежуточный оксалосукцинат. На втором этапе реакции происходит декарбоксилирование оксалосукцината в α-кетоглутарат. Существует три изоформы изоцитратдегидрогеназы. Две формы фермента являются НАДФ-зависимыми, одна из них находится в митохондриях, другая - в цитозоле. Окисление изоцитрата, связанное с работой цикла трикарбоновых кислот, осуществляется исключительно НАД-зависимой формой фермента, локализованного в митохондриях. В результате реакции, катализируемой изоцитратдегидрогеназой, производятся восстановительные эквиваленты - НАДН, при прохождении которых по дыхательной цепи генерируются три высокоэнергетические фосфатные связи посредством образования АТФ из АДФ в процессе окислительного фосфорилирования. Считается, что именно эта реакция лимитирует скорость всего цикла трикарбоновых кислот [4]. Снижение активности изоцитратдегидрогеназы указывает на уменьшение интенсивности работы цикла трикарбоновых кислот и, соответственно, аэробных энергетических процессов в плаценте, что, в свою очередь, влияет на формирование плода.
4. Новая техническая задача
Определить уровень активности НАД-зависимой изоцитратдегидрогеназы при обострении цитомегаловирусной инфекции у беременных на третьем триместре гестации с целью оценить характер состояния энергетического обмена в фетоплацентарном барьере, от чего зависит нормальное формирование плода.
5. В доступной литературе имеются упоминания об исследовании изоцитратдегидрогеназы в плаценте при осложненной беременности, однако данная работа касается изучения НАДФ-зависимой формы фермента [2]. Также известно изучение активности НАД- и НАДФ-изоцитратдегидрогеназ в плаценте при физиологической беременности [7], которое выполняется биохимическими методами. Кроме этого активность изоцитратдегидрогеназы изучается иммуногистохимическим методом в солидных опухолях человека [5], недостатком которого является необходимость дорогостоящих реактивов, оборудования и длительного времени исполнения.
В отличие от вышеприведенных прототипов в данной работе имеются существенные отличия: 1. Изменения активности изоцитратдегидрогеназы происходят под влиянием обострения цитомегаловирусной инфекции во время беременности. 2. Использование данного метода позволяет судить о состоянии энергетического обмена в фетоплацентарном барьере, влияющего на развитие плода. Метод прост в исполнении, не требует дорогостоящих реактивов, обладает хорошей разрешающей способностью и может быть рекомендован в проведении научно-исследовательских работ и лабораторной диагностики.
6. Осуществление изобретения
6.1. Обследованы 36 беременных женщин 18-25 лет с обострением хронической цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации, контрольную группу составили 30 беременных женщин с хронической цитомегаловирусной инфекцией в латентной стадии. У беременных женщин симптоматически цитомегаловирусная инфекция проявлялась в виде острого респираторного заболевания, сопровождающегося ринофарингитом. Клинический диагноз (обострение хронической цитомегаловирусной инфекции) устанавливается по результатам комплексного исследования периферической крови на наличие ДНК цитомегаловируса (ЦМВ), JgM или увеличение титра антител JgG в парных сыворотках (в 4 раза и более) в динамике через 10 суток, а также индекса авидности (более 65%). Исследования проводят с учетом требований Хельсинкской декларации Всемирной медицинской ассоциации «Этические принципы проведения научных исследований с участием человека» с поправками 2008 г. и правилами клинической практики в РФ, утвержденными приказом Министерства РФ №266 от 19.06.2003 г.
6.2. Верификацию ЦМВ, определение типоспецифических антител, индекса авидности осуществляют методами ИФА на спектрофотометре «Stat Fax-2100» с использованием тест-систем ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск), ДНК ЦМВ выявляют методами ПЦР на аппарате ДТ-96 с использованием наборов НПО «ДНК-технология» (Москва).
6.3. Активность изоцитратдегидрогеназы гистохимически определяют на криостатных срезах свежезамороженной нефиксированной ткани плаценты следующим методом. Метод основан на восстановлении соли тетразолия в формазан электронами, акцептируемыми от субстрата через кофермент НАД [1]. Субстратом служит 0,1 M раствор тринатриевой соли изолимонной кислоты «Sigma» (США). Инкубационный раствор готовится на основе 0,1 M фосфатного буфера рН 7,2-7,4 с добавлением нитросинего тетразолия фирмы «ICN Biomedicals)) (США) в конечной концентрации 5 мМоль, НАД+ фирмы «Applichem» (Германия) - 1 мМоль.
Состав инкубационной среды:
- 0,1 M фосфатный буфер pH 7,2-7,4 - 1 мл;
- нитросиний тетразолий - 1 мг;
- НАД+- 1 мг;
- тринатриевая соль изолимонной кислоты · H2O - 27,6 мг.
6.4. В 1 мл инкубационного раствора помещают свежеприготовленные срезы ткани. Инкубацию проводят при 37°C в течение 30 минут. По окончании инкубации срезы промывают дистиллированной водой, фиксируют в 10%-ном нейтральном формалине при комнатной температуре, вновь промывают дистиллированной водой, подсушивают и заключают в глицерин-желатин. Контрольные срезы инкубировали в среде, содержащей вместо раствора изоцитрата натрия адекватное количество фосфатного буфера. Полученные гистологические препараты изучают цитофотометрическим компьютерным методом с помощью программы Scion (США) на цифровом микроскопе MEIJI (Япония).
6.5. Статистический анализ и обработка данных проводится с использованием пакета прикладных программ «Statistica 6.0». Характеристика вариационных рядов: средняя арифметическая (М), стандартная ошибка (m), коэффициент вариации 95%, доверительный интервал для средних значений M±m, где t определялось по таблице граничных значений критерия Стьюдента при доверительном уровне 95% и числе степеней свободы F=n1+n2-2. Для определения достоверности различий используется непарный параметрический критерий Стьюдента. Принимаются во внимание р<0,05; 0,01; 0,001. Для определения достоверности различий в случае негауссовых распределений - непараметрические критерии Колмогорова-Смирнова и Манна-Уитни.
7. Полученные данные
В процессе исследования получены следующие результаты. Гистохимическая реакция выявления активности НАД-изоцитратдегидрогеназы является достаточно специфичной, так как в отсутствие субстрата в инкубационной среде выпадение гранул формазана в тканевых структурах не наблюдается. На гистохимических препаратах плаценты беременных женщин, перенесших обострение хронической цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации, при регистрации роста титра антител класса G к цитомегаловирусу до 1:1600 отмечается снижение активности NAD-изоцитратдегидрогеназы до 21,6±1,91 усл. ед. (контроль - 35,5±2,28 усл. ед.) (фигура 1, 2).
Таким образом, снижение активности НАД-зависимой изоцитратдегидрогеназы при нарастании титра антител класса G к цитомегаловирусу 1:1600 указывает на нарушение энергообмена в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты, влияющего на формирование плода в период гестации.
8. Литература
1. Лойда З., Госсрау Р., Шиблер Т. Гистохимия ферментов. Лабораторные методы: пер. с англ. М.: Мир, 1982. 272 с.
2. Назыров А.Т., Шафранова Н.Г., Алманиязова К.К. Изоцитратдегидрогеназа плаценты при осложненной беременности // Акушерство и гинекология. 1977. №5. С. 47-49.
3. Frey Р.А., Abies R.H., Hegeman A.D. Enzymatic Reaction Mechanisms. United Kingdom: Oxford University Press, 2006. 848p.
4. Kim Y.O., Koh H.J., Kim S.H., Jo S.H, Huh J.W., Jeong K.S., Lee I.J., Song B.J., Huh T.L. Identification and functional characterization of a novel, tissue-specific NAD+ dependent isocitrate dehydrogenase beta-subunit isoform. // J. Biochem. 1999. Vol, 274. P. 36866-36875.
5. Mauzo S.H., Lee M., Petros J., Hunter S., Chang С.М., Shu H.K., Bellail A.C., Hao C., Cohen C. Immunohistochemical demonstration of isocitrate dehydrogenase 1 (IDH1) mutation in a small subset of prostatic carcinomas. // Appl. Immunohistochem. Mol. Morphol. 2014. Vol. 22, №4. P. 284-287.
6. Qi F., Chen X., Beard DA. Detailed kinetics and regulation of mammalian NAD-linked isocitrate dehydrogenase. // Biochim. Biophys. Acta. 2008. Vol. 1784, №11. P. 1641-1651.
7. Scislowski P.W., Zolnierowicz S., Zelewski L. Subcellular distribution of isocitrate dehydrogenase in early and term human placenta // Biochem. J. 1983. Vol. 214, №2. P. 339-343.
Claims (1)
- Способ диагностики нарушения энергетического обмена в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты беременных при обострении цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации, включающий определение в периферической крови титра антител к цитомегаловирусу, выполнение гистохимической реакции на NAD-изоцитратдегидрогеназу, и при титре антител класса G к цитомегаловирусу 1:1600, снижении активности NAD-изоцитратдегидрогеназы до 21,6±1,91 усл. ед. диагностируют нарушение энергетического обмена в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты, отрицательно влияющее на формирование плода в период гестации.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2015117064/15A RU2597846C1 (ru) | 2015-05-05 | 2015-05-05 | Способ оценки влияния цитомегаловирусной инфекции на активность над-зависимой изоцитратдегидрогеназы в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты на третьем триместре беременности |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2015117064/15A RU2597846C1 (ru) | 2015-05-05 | 2015-05-05 | Способ оценки влияния цитомегаловирусной инфекции на активность над-зависимой изоцитратдегидрогеназы в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты на третьем триместре беременности |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2597846C1 true RU2597846C1 (ru) | 2016-09-20 |
Family
ID=56937752
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2015117064/15A RU2597846C1 (ru) | 2015-05-05 | 2015-05-05 | Способ оценки влияния цитомегаловирусной инфекции на активность над-зависимой изоцитратдегидрогеназы в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты на третьем триместре беременности |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2597846C1 (ru) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1914553A1 (en) * | 2006-10-20 | 2008-04-23 | The University Of Newcastle Research Associates Limited | Method for identifying women with an increased risk of foetal growth retardation |
| RU2428936C2 (ru) * | 2009-06-02 | 2011-09-20 | Ирина Олеговна Буштырева | Способ ранней диагностики угрожающего состояния плода |
-
2015
- 2015-05-05 RU RU2015117064/15A patent/RU2597846C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1914553A1 (en) * | 2006-10-20 | 2008-04-23 | The University Of Newcastle Research Associates Limited | Method for identifying women with an increased risk of foetal growth retardation |
| RU2428936C2 (ru) * | 2009-06-02 | 2011-09-20 | Ирина Олеговна Буштырева | Способ ранней диагностики угрожающего состояния плода |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| АФАНАСЬЕВА Н.В. и др. "Исходы беременности и родов при фетоплацентарной недостаточности различной степени тяжести"// Вопросы гинекологии, акушерства и перинатологии, 2004, т.n3, n2, с.7-13. * |
| АФАНАСЬЕВА Н.В. и др. "Исходы беременности и родов при фетоплацентарной недостаточности различной степени тяжести"// Вопросы гинекологии, акушерства и перинатологии, 2004, т.n3, n2, с.7-13. NIGRO J et al. Antibody treatment promotes compensation for human cytomegalovirus-induced pathogenesis and a hypoxia-like condition in placentas with congenital infection// Am J Pathol. 2010 Sep;177(3):1298-310. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Dabra et al. | Salivary enzymes as diagnostic markers for detection of gingival/periodontal disease and their correlation with the severity of the disease | |
| Rinaldo et al. | Sudden and unexpected neonatal death: a protocol for the postmortem diagnosis of fatty acid oxidation disorders | |
| Tokita et al. | Non-alcoholic fatty liver disease is a risk factor for type 2 diabetes in middle-aged Japanese men and women | |
| WO2021223349A1 (zh) | 用于稳态速效检测新型冠状病毒的保护序列、引物、探针、组合物、试剂盒及应用和方法 | |
| Wei et al. | Predictive significance of the prognostic nutritional index (PNI) in patients with severe COVID-19 | |
| Ahelik et al. | Systemic oxidative stress could predict assisted reproductive technique outcome | |
| Bala et al. | Hyperhomocysteinemia and low vitamin B12 are associated with the risk of early pregnancy loss: A clinical study and meta-analyses | |
| Wu et al. | Plasma mtDNA analysis aids in predicting pancreatic necrosis in acute pancreatitis patients: A pilot study | |
| Liang et al. | Novel risk scoring system for predicting acute respiratory distress syndrome among hospitalized patients with coronavirus disease 2019 in Wuhan, China | |
| Guo et al. | High maternal selenium levels are associated with increased risk of congenital heart defects in the offspring | |
| Askarova et al. | THE IMPORTANCE OF STUDYING THE STRUCTURE OF BLOOD SERUM IN GYNECOLOGY | |
| Ishikawa et al. | Evaluation of the branched-chain amino acid-to-tyrosine ratio prior to treatment as a prognostic predictor in patients with liver cirrhosis | |
| RU2597846C1 (ru) | Способ оценки влияния цитомегаловирусной инфекции на активность над-зависимой изоцитратдегидрогеназы в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты на третьем триместре беременности | |
| Son et al. | Cerebrospinal fluid lactate levels, brain lactate metabolism and neurologic outcome in patients with out-of-hospital cardiac arrest | |
| Kok et al. | Body mass index is not a predictor of biochemical recurrence after radical prostatectomy in Dutch men diagnosed with prostate cancer | |
| Mao et al. | Diagnostic and Prognostic Value of Red Blood Cell Distribution Width in Children with Respiratory Tract Infections. | |
| Yi et al. | Elevated plasma levels of hypermethylated RASSF1A gene sequences in pregnant women with intrahepatic cholestasis | |
| CN114636826B (zh) | Cd177+中性粒细胞在制备新生儿坏死性小肠结肠炎检测产品中的应用 | |
| Bogavac et al. | Bacterial vaginosis and biomarkers of oxidative stress in amniotic fluid | |
| Mantjoro et al. | Positive association of plasma homocysteine levels with cardio-ankle vascular index in a prospective study of Japanese men from the general population | |
| Serafim et al. | Maternal obesity in sheep impairs foetal hepatic mitochondrial respiratory chain capacity | |
| Ababio et al. | Effects of lactate dehydrogenase (LDH) in preeclampsia. | |
| Liu et al. | Immunocapture and microplate-based activity and quantity measurement of pyruvate dehydrogenase in human peripheral blood mononuclear cells | |
| RU2574937C1 (ru) | Способ оценки влияния цитомегаловирусной инфекции на активность nad-зависимой малатдегидрогеназы в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты на третьем триместре беременности | |
| Jelski et al. | The Activity of Alcohol Dehydrogenase Isoenzymes and Aldehyde Dehydrogenase in the Sera of Patients with Autoimmune Hepatitis. |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20170506 |