RU2582981C2 - Method for production of usnic acid from lichens lichen using pre-extraction mechanochemical treatment - Google Patents

Method for production of usnic acid from lichens lichen using pre-extraction mechanochemical treatment Download PDF

Info

Publication number
RU2582981C2
RU2582981C2 RU2014131231/15A RU2014131231A RU2582981C2 RU 2582981 C2 RU2582981 C2 RU 2582981C2 RU 2014131231/15 A RU2014131231/15 A RU 2014131231/15A RU 2014131231 A RU2014131231 A RU 2014131231A RU 2582981 C2 RU2582981 C2 RU 2582981C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
usnic acid
extraction
water
ethanol
acid
Prior art date
Application number
RU2014131231/15A
Other languages
Russian (ru)
Other versions
RU2014131231A (en
Inventor
Михаил Михайлович Шашурин
Илья Андреевич Прокопьев
Галина Валерьевна Филиппова
Алексей Анатольевич Шеин
Ефим Сергеевич Хлебный
Наталия Павловна Гладкина
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт биологических проблем криолитозоны Сибирского отделения Российской академии наук
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт биологических проблем криолитозоны Сибирского отделения Российской академии наук filed Critical Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт биологических проблем криолитозоны Сибирского отделения Российской академии наук
Priority to RU2014131231/15A priority Critical patent/RU2582981C2/en
Publication of RU2014131231A publication Critical patent/RU2014131231A/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2582981C2 publication Critical patent/RU2582981C2/en

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/09—Lichens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2121/00—Preparations for use in therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/10—Preparation or pretreatment of starting material
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/30—Extraction of the material
    • A61K2236/33—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones
    • A61K2236/333—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones using mixed solvents, e.g. 70% EtOH
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
    • A61K2236/51—Concentration or drying of the extract, e.g. Lyophilisation, freeze-drying or spray-drying
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
    • A61K2236/53—Liquid-solid separation, e.g. centrifugation, sedimentation or crystallization
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/34—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having five-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom, e.g. isosorbide
    • A61K31/343—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having five-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom, e.g. isosorbide condensed with a carbocyclic ring, e.g. coumaran, bufuralol, befunolol, clobenfurol, amiodarone
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D11/00—Solvent extraction
    • B01D11/02—Solvent extraction of solids

Abstract

FIELD: pharmaceutics.
SUBSTANCE: invention relates to production of usnic acid from dry lichens Cladonia stellaris. Method comprises performing pre-extraction mechanical-chemical treatment of material in presence of strong alkali for transfer of usnic acid into soluble in water-alcohol mixtures form of sodium usminate, then performing extraction with 50 % water-ethanol mixture; obtained extract is centrifuged; supernatant is filtered, then repeating extraction with 50 % ethanol, then obtained extracts are combined and sodium usimate back to form of usnic acid by bringing pH of medium solution to certain value, then water-ethanol mixture is distilled off, in obtained water concentrate is precipitated sediment, which is separated by centrifugation and drying precipitate in air to powdery state with practical output of usnic acid up to 93-98 % of content in initial raw material.
EFFECT: method described above enables to obtain usnic acid having pronounced antibacterial effect against gram-positive and microbacteria, including strains resistant to other types of antibiotics.
1 cl, 1 dwg

Description

Изобретение относится к биотехнологической промышленности и может использоваться для производства препаратов противомикробного действия.The invention relates to the biotechnological industry and can be used for the production of antimicrobial agents.

Использование механохимической стадии в технологическом цикле получения усниновой кислоты из талломов лишайников на стадии обработки сухого сырья и последующей водно-спиртовой экстракции позволяют выделить более 90% усниновой кислоты, содержащейся в исходном сырье.The use of the mechanochemical stage in the technological cycle of obtaining usnic acid from lichen thalli at the stage of processing dry raw materials and subsequent water-alcohol extraction makes it possible to isolate more than 90% of usnic acid contained in the feedstock.

Техническим эффектом изобретения является получение усниновой кислоты, обладающей выраженным антибактериальным действием против грамположительных и микобактерий (туберкулезная палочка), включая штаммы, устойчивые к другим видам антибиотиков (Cocchietto, et al., 2002; Lauterwein et al., 1995; Stoll et al., 1950). В связи с этим препараты на основе усниновой кислоты нашли свое применение в медицине как противомикробные средства для обработки ран и ожогов (Машковский, 2005). Эффект достигается тем, что использование механохимической обработки лишайникового сырья в присутствии щелочи приводит к переводу водонерастворимой формы усниновой кислоты в водорастворимое состояние.The technical effect of the invention is the production of usnic acid with a pronounced antibacterial effect against gram-positive and mycobacteria (tubercle bacillus), including strains resistant to other types of antibiotics (Cocchietto, et al., 2002; Lauterwein et al., 1995; Stoll et al., 1950). In this regard, drugs based on usnic acid have found their application in medicine as antimicrobial agents for treating wounds and burns (Mashkovsky, 2005). The effect is achieved by the fact that the use of mechanochemical treatment of lichen raw materials in the presence of alkali leads to the transfer of the water-insoluble form of usnic acid to a water-soluble state.

Сущность изобретения состоит в том, что предэкстракционная механохимическая обработка сухих талломов лишайников с добавлением сухой щелочи позволяет переводить плохо растворимую в воде и водно-спиртовых смесях усниновую кислоту в хорошо растворимый в водно-спиртовых смесях фенолят (уснинат натрия, рис.).The essence of the invention lies in the fact that the pre-extraction mechanochemical treatment of dry thalli of lichens with the addition of dry alkali allows usnic acid to be poorly soluble in water and water-alcohol mixtures to be easily soluble in water-alcohol mixtures phenolate (sodium usnate, Fig.).

Аналогом предлагаемому способу получения усниновой кислоты является метод, описанный в патенте «Способ получения усниновой кислоты» (RU 2317076), который основан на экстракции усниновой кислоты из воздушно-сухого сырья хлороформом, четыреххлористым углеродом, ацетоном, гексаном, петролейный эфиром, нефрасом и их смесями при кипячении, с последующей перекристаллизацией. Недостатком данного способа является использование токсичных и легко воспламеняющихся органических растворителей, что может создать дополнительные трудности при организации технологического цикла получения усниновой кислоты.An analogue of the proposed method for producing usnic acid is the method described in the patent “Method for producing usnic acid” (RU 2317076), which is based on the extraction of usnic acid from air-dried raw materials with chloroform, carbon tetrachloride, acetone, hexane, petroleum ether, nefras and mixtures thereof upon boiling, followed by recrystallization. The disadvantage of this method is the use of toxic and flammable organic solvents, which can create additional difficulties in organizing the production cycle of producing usnic acid.

Наиболее близким аналогом (прототипом) является способ получения препарата, содержащего в составе усниновую кислоту, с широким спектром фармакологического действия «ЯГЕЛЬ-М», реализуемый путем механохимической обработки талломов лишайников в присутствии сильной щелочи с последующей водно-спиртовой экстракцией (патент RU 2385159). Отличием предложенного нами способа является получение сухого порошка, содержащего до 93,3-98,5% по массе усниновой кислоты.The closest analogue (prototype) is a method for producing a preparation containing usnic acid with a wide spectrum of pharmacological action “YAGEL-M”, realized by mechanochemical treatment of thalli of lichens in the presence of strong alkali followed by water-alcohol extraction (patent RU 2385159). The difference of our proposed method is to obtain a dry powder containing up to 93.3-98.5% by weight of usnic acid.

Изобретение может быть реализовано следующим образом. Высушенные талломы лишайников, содержащие усниновую кислоту (например, Cladonia stellaris), подвергают предэкстракционной механохимической обработке на шаровой мельнице (например, АГО-3) в присутствии сильной щелочи при скорости вращения ротора 1800 об/мин в течение двух минут для перевода усниновой кислоты в растворимую форму уснината (см. рис.). Для этого в каждый стальной стакан объемом 2 л помещалось по 2.5 кг стальных шариков с d=0.5 см, 142.5 г воздушно-сухих талломов лишайников и 7.5 г сухого гидрооксида натрия.The invention can be implemented as follows. Dried lichen thalli containing usnic acid (e.g., Cladonia stellaris) are subjected to pre-extraction mechanochemical processing on a ball mill (e.g., AGO-3) in the presence of strong alkali at a rotor speed of 1800 rpm for two minutes to convert usnic acid to soluble Usnat form (see. Fig.). For this, 2.5 kg of steel balls with d = 0.5 cm, 142.5 g of air-dried thalli of lichens and 7.5 g of dry sodium hydroxide were placed in each 2-liter steel glass.

Полученный высокодисперный порошок экстрагировали 50%-ной водно-этанольной смесью в соотношении 1:20 по массе в течение 14 суток при температуре 20-25°С.The obtained fine powder was extracted with a 50% aqueous ethanol mixture in a ratio of 1:20 by weight for 14 days at a temperature of 20-25 ° C.

Экстракт центрифугировали при 4000g в течение 10 мин, надосадочную жидкость фильтровали для удаления из нее нерастворившейся взвеси и сливали в отдельную емкость. Для исчерпывающего извлечения уснината натрия проводили повторную экстракцию 50%-ным этанолом, после чего полученные экстракты объединяли.The extract was centrifuged at 4000 g for 10 min, the supernatant was filtered to remove insoluble suspension from it and poured into a separate container. For exhaustive extraction of sodium usninate, re-extraction with 50% ethanol was carried out, after which the resulting extracts were combined.

Для перевода уснината натрия обратно в усниновую кислоту рН-среды фильтрата доводили лимонной кислотой до значения ≈6.0, после чего водно-этанольную смесь отгоняли при помощи роторного испарителя до ≈20% от исходного объема. Этанол после вакуумной перегонки (регенерация этанола) не требовал дополнительной очистки и использовался для повторных экстракций. В полученном водном концентрате выпадал желтый осадок, который отделяли центрифугированием при 4000g в течение 10 мин, после чего проводили высушивание осадка на воздухе до порошкообразного состояния.To transfer sodium usninate back to usnic acid, the pH of the filtrate was adjusted with citric acid to ≈6.0, after which the water-ethanol mixture was distilled off using a rotary evaporator to ≈20% of the initial volume. Ethanol after vacuum distillation (ethanol recovery) did not require additional purification and was used for repeated extraction. A yellow precipitate formed in the obtained aqueous concentrate, which was separated by centrifugation at 4000 g for 10 min, after which the precipitate was dried in air to a powder state.

Для определения содержание усниновой кислоты в полученном порошке брали навеску массой 0.01 г и растворяли в 100 мл ацетонитрила. Полученный раствор пропускали через мембранный фильтр с диаметром пор 0,2 мкм. Анализ проводили методом ВЭЖХ на микроколоночном хроматографе Милихром А-02 фирмы «ЭкоНова» (Россия) с последующей компьютерной обработкой результатов исследования, используя программу «МультиХром для «Windows».To determine the content of usnic acid in the obtained powder, a weighed mass of 0.01 g was taken and dissolved in 100 ml of acetonitrile. The resulting solution was passed through a membrane filter with a pore diameter of 0.2 μm. The analysis was carried out by HPLC on a Milichrome A-02 microcolumn chromatograph from EkoNova (Russia) followed by computer processing of the results of the study using the MultiKhrom for Windows program.

Разделение проводили на обращено-фазовой колонке ProntoSIL 120-5-С18 AQ размером 2×75 мм. В качестве оптимальных были выбраны условия: подвижная фаза «А» - 0.1% водный раствор уксусной кислоты, «В» - ацетонитрил, градиентный режим элюирования с возрастанием доли «В» от 10 до 50% в течение 5 мин и от 50 до 100% в течение 20 мин при скорости потока 100 мкл/мин и температуре колонки 40°С. Объем вносимой пробы - 4 мкл. Детектирование осуществляли с помощью сканирующего УФ-спектрофотометрического детектора при длинах волн 230, 240, 260 и 280 нм. Длина волны 230 нм была взята в качестве опорной и аналитической, так как на нее приходится максимум поглощения усниновой кислоты.Separation was performed on a ProntoSIL 120-5-C18 AQ reversed-phase column measuring 2 × 75 mm. The optimal conditions were selected: the mobile phase “A” - 0.1% aqueous solution of acetic acid, “B” - acetonitrile, the gradient elution regime with increasing proportion of “B” from 10 to 50% for 5 min and from 50 to 100% for 20 min at a flow rate of 100 μl / min and a column temperature of 40 ° C. The volume of the introduced sample is 4 μl. Detection was carried out using a scanning UV spectrophotometric detector at wavelengths of 230, 240, 260 and 280 nm. The wavelength of 230 nm was taken as the reference and analytical, since it accounts for the maximum absorption of usnic acid.

В качестве стандарта использовали усниновую кислоту производства Sigma-Aldrich. Стандартные образцы готовили в концентрациях 6.25, 12.5, 25.0, 50.0, 100.0 и 200.0 мкг/мл в ацетонитриле. Построение калибровочных графиков проводили на основе линейной регрессии площади пиков усниновой кислоты и ее концентраций. Идентификацию усниновой кислоты в исследуемых образцах проводили путем сопоставления времен удерживания и спектральных отношений пиков аналита и стандарта.The standard used was usnic acid manufactured by Sigma-Aldrich. Standard samples were prepared at concentrations of 6.25, 12.5, 25.0, 50.0, 100.0 and 200.0 μg / ml in acetonitrile. The construction of calibration plots was carried out on the basis of linear regression of the peak area of usnic acid and its concentrations. The identification of usnic acid in the test samples was carried out by comparing the retention times and spectral ratios of the analyte peaks and the standard.

Для определения содержания усниновой кислоты в исходном лишайниковом сырье на примере Cladonia stellaris брали навеску из измельченных воздушно-сухих талломов лишайников массой 0.1 г и экстрагировали в 10 мл ацетонитрила при постоянном перемешивании в течение 24 ч и комнатной температуре, после чего полученный экстракт пропускали через мембранный фильтр и анализировали по вышеописанной методике.To determine the content of usnic acid in the initial lichen raw material, for example, Cladonia stellaris, a sample of ground air-dried lichen thalli weighing 0.1 g was taken and extracted into 10 ml of acetonitrile with constant stirring for 24 h at room temperature, after which the resulting extract was passed through a membrane filter and analyzed by the above method.

Проведенный анализ исходного лишайникового сырья на примере Cladonia stellaris показал, что содержание в нем усниновой кислоты составляет 1.1% от сухой массы талломов, что можно считать теоретически возможным выходом продукта. Использование предложенного нами способа получения усниновой кислоты дало выход 11.4 г продукта с содержанием 90-95% усниновой кислоты в пересчете на 1 кг сырья, то есть практический выход усниновой кислоты составил 93-98% от содержащейся в исходном сырье.The analysis of the original lichen raw material using the example of Cladonia stellaris showed that the content of usnic acid in it is 1.1% of the dry weight of thalli, which can be considered a theoretically possible yield of the product. Using our proposed method for producing usnic acid gave a yield of 11.4 g of product with a content of 90-95% usnic acid in terms of 1 kg of raw material, that is, the practical yield of usnic acid was 93-98% of that contained in the feedstock.

Claims (1)

Способ получения усниновой кислоты из сухих талломов лишайников Cladonia stellaris с применением стадии предэкстракционной механохимической обработки сырья в присутствии сильной щелочи для перевода усниновой кислоты в хорошо растворимую в водно-спиртовых смесях форму уснината натрия, отличающийся тем, что экстракцию проводят 50%-ной водно-этанольной смесью в соотношении 1:20 по массе в течение 14 суток при температуре 20-25°C, полученный экстракт центрифугируют, надосадочную жидкость фильтруют, затем проводят повторную экстракцию 50% этанолом, после чего полученные экстракты объединяют и переводят уснинат натрия обратно в форму усниновой кислоты путем доведения pH-среды раствора до значения 6.0 лимонной кислотой, затем водно-этанольную смесь отгоняют при помощи роторного испарителя, в полученном водном концентрате выпадает желтый осадок, который отделяют центрифугированием и проводят высушивание осадка на воздухе до порошкообразного состояния с практическим выходом усниновой кислоты до 93-98% от содержания ее в исходном сырье. A method of producing usnic acid from dry thalli of Cladonia stellaris lichens using the stage of pre-extraction mechanochemical processing of raw materials in the presence of strong alkali to convert usnic acid to sodium usninate, which is highly soluble in water-alcohol mixtures, characterized in that the extraction is carried out with 50% aqueous ethanol the mixture in a ratio of 1:20 by weight for 14 days at a temperature of 20-25 ° C, the resulting extract is centrifuged, the supernatant is filtered, then re-extraction with 50% ethanol is carried out, after whereby the obtained extracts are combined and sodium usnate is converted back to usnic acid by adjusting the pH of the solution to 6.0 with citric acid, then the aqueous-ethanol mixture is distilled off using a rotary evaporator, a yellow precipitate forms in the resulting aqueous concentrate, which is separated by centrifugation and drying precipitate in air to a powder state with a practical yield of usnic acid up to 93-98% of its content in the feedstock.
RU2014131231/15A 2014-07-28 2014-07-28 Method for production of usnic acid from lichens lichen using pre-extraction mechanochemical treatment RU2582981C2 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2014131231/15A RU2582981C2 (en) 2014-07-28 2014-07-28 Method for production of usnic acid from lichens lichen using pre-extraction mechanochemical treatment

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2014131231/15A RU2582981C2 (en) 2014-07-28 2014-07-28 Method for production of usnic acid from lichens lichen using pre-extraction mechanochemical treatment

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2014131231A RU2014131231A (en) 2016-02-20
RU2582981C2 true RU2582981C2 (en) 2016-04-27

Family

ID=55313378

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2014131231/15A RU2582981C2 (en) 2014-07-28 2014-07-28 Method for production of usnic acid from lichens lichen using pre-extraction mechanochemical treatment

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2582981C2 (en)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2624865C1 (en) * 2016-05-04 2017-07-07 федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Красноярский медицинский университет имени профессора В.Ф. Войно-Ясенецкого" Министерства здравоохранения Российской Федерации Method for extract obtaining from cladonia lichen with bactericide properties

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2385159C2 (en) * 2007-09-05 2010-03-27 Общество с ограниченной ответственностью "Биотех" Method for making preparation of jagel-m with antituberculous action

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2385159C2 (en) * 2007-09-05 2010-03-27 Общество с ограниченной ответственностью "Биотех" Method for making preparation of jagel-m with antituberculous action

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Н.Г.ПАВЛОВ и др. Влияние экстрактов слоевищ лишайников на биологические свойства микобактерий туберкулеза//Вестник СВФУ, 2012, том 9, N4. С. 146. В.Ф.ТУРЕЦКОВА и др. Экстракционные препараты из сырья растительного происхождения и животного происхождения: учебное пособие для студентов фармацевтического факультета.-Барнаул: Изд-во ГОУ ВПО АГМУ Росздрава, 2007. С.15. С.А.МИНИНА и др. Химия и технология фитопрепаратов. М.: "Медицина", 2009. С.88. *

Also Published As

Publication number Publication date
RU2014131231A (en) 2016-02-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Jeong et al. Highly efficient extraction of anthocyanins from grape skin using deep eutectic solvents as green and tunable media
He et al. Extraction and purification of Quercitrin, Hyperoside, Rutin, and Afzelin from Zanthoxylum Bungeanum maxim leaves using an aqueous two‐phase system
Wang et al. Ball mill assisted rapid mechanochemical extraction method for natural products from plants
Rambo et al. Box–Behnken experimental design for extraction optimization of alkaloids from Erythrina verna Vell. trunk barks and LC Method Validation
Abizov et al. Composition of biologically active substances isolated from the fruits of Russian olive (Elaeagnus angustifolia) introduced in the European part of Russia
Wu et al. Determination of caffeoylquinic acid derivatives in Azolla imbricata by chitosan-based matrix solid-phase dispersion coupled with HPLC–PDA
Jing et al. Comparison of antioxidant and antiproliferative activity between Kunlun Chrysanthemum flowers polysaccharides (KCCP) and fraction PII separated by column chromatography
RU2582981C2 (en) Method for production of usnic acid from lichens lichen using pre-extraction mechanochemical treatment
Shen et al. Large-scale targetedly isolation of biflavonoids with high purity from industrial waste Ginkgo biloba exocarp using two-dimensional chromatography coupled with macroporous adsorption resin enrichment
Ying et al. Quantitative determination of total and individual flavonoids in stems and leaves of Buddleja davidii and Buddleja albiflora
CN101531590B (en) Ginkgoic acid preparation method using macroporous adsorption resin
KR102294341B1 (en) Simultaneous Analytical Method of Marker Compounds in a Mixed Extract of Schizandra chinensis and Ribes fasciculatum
RU2530501C1 (en) Method of production of water-soluble polysaccharides from leaves of waybread
KR102485101B1 (en) Bisacron Extraction Method
AlAjmi et al. Quantification of bioactive marker β-amyrin by validated high-performance thin-layer chromatographic-densitometric method in different species of Maytenus grown in Saudi Arabia
Lopes et al. Preliminary assessment of the chemical stability of dried extracts from Guazuma ulmifolia Lam.(Sterculiaceae)
Pan et al. Purification and the effects on structure and bioactivity for polysaccharide from Actinidia valvata Dunn. using macroporous adsorption resin
Minakhmetov et al. Analysis of flavonoids in Silybum marianum fruit by HPLC
RU2431495C2 (en) Antipyretic agent and method for preparing thereof
Dinu et al. The obtaining and characterization of a rich-phenolic extract from Amaranthus hypochondriacus L
Hohnova et al. Pressurized hot water extraction followed by high-performance liquid chromatography for determination of polyphenols in Sambucus nigra L. branches in dependence on vegetative period of the plant.
RU2750730C1 (en) Method for isolating the sum of tannins used to obtain the substance of the anticancer drug "hanerol" from narrow-leaved fireweed (ivan tea) (chamaenerion angustifolium (l.) scop.)
RU2656398C1 (en) Method for producing water-soluble polysaccharides from leaves of great burdock
Sipkina et al. Detection and determination of some phenolic and cinnamic acids in plant extracts
Salunke et al. Phytochemical analysis of Acanthophora najadiformis using High-Resolution Liquid Chromatography Mass Spectrometry (HR-LCMS) and FTIR

Legal Events

Date Code Title Description
PC43 Official registration of the transfer of the exclusive right without contract for inventions

Effective date: 20200413

PD4A Correction of name of patent owner