RU2574914C1 - Non-invasive diagnostic technique for chronic gastroduodenitis in children - Google Patents
Non-invasive diagnostic technique for chronic gastroduodenitis in children Download PDFInfo
- Publication number
- RU2574914C1 RU2574914C1 RU2014151801/15A RU2014151801A RU2574914C1 RU 2574914 C1 RU2574914 C1 RU 2574914C1 RU 2014151801/15 A RU2014151801/15 A RU 2014151801/15A RU 2014151801 A RU2014151801 A RU 2014151801A RU 2574914 C1 RU2574914 C1 RU 2574914C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- defensin
- children
- chronic gastroduodenitis
- antimicrobial peptide
- chronic
- Prior art date
Links
- 230000001684 chronic Effects 0.000 title claims abstract description 26
- 206010048714 Gastroduodenitis Diseases 0.000 title claims abstract description 23
- 238000000034 method Methods 0.000 title abstract description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 10
- 210000003608 Feces Anatomy 0.000 claims abstract description 9
- 102000014133 Antimicrobial Cationic Peptides Human genes 0.000 claims abstract description 7
- 108010050820 Antimicrobial Cationic Peptides Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims description 4
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 claims description 2
- 101710004799 sm-amp-x Proteins 0.000 claims description 2
- 239000003910 polypeptide antibiotic agent Substances 0.000 claims 1
- 210000001156 Gastric Mucosa Anatomy 0.000 abstract description 13
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 abstract 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 18
- 208000007882 Gastritis Diseases 0.000 description 12
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000002496 gastric Effects 0.000 description 7
- 210000002784 Stomach Anatomy 0.000 description 6
- 230000002757 inflammatory Effects 0.000 description 6
- 230000000877 morphologic Effects 0.000 description 6
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 238000001839 endoscopy Methods 0.000 description 5
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N propionic acid Chemical compound CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butanoic acid Chemical class CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000004544 DC2 Anatomy 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 4
- 201000006549 dyspepsia Diseases 0.000 description 4
- 230000002530 ischemic preconditioning Effects 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 210000001035 Gastrointestinal Tract Anatomy 0.000 description 3
- 210000000265 Leukocytes Anatomy 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 108060002187 Def1 Proteins 0.000 description 2
- 210000001198 Duodenum Anatomy 0.000 description 2
- 210000003238 Esophagus Anatomy 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 210000004400 Mucous Membrane Anatomy 0.000 description 2
- 210000003296 Saliva Anatomy 0.000 description 2
- ZFXYFBGIUFBOJW-UHFFFAOYSA-N Theophylline Chemical compound O=C1N(C)C(=O)N(C)C2=C1NC=N2 ZFXYFBGIUFBOJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000000845 anti-microbial Effects 0.000 description 2
- 230000005713 exacerbation Effects 0.000 description 2
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 2
- 200000000018 inflammatory disease Diseases 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 230000004660 morphological change Effects 0.000 description 2
- 210000000056 organs Anatomy 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 208000004300 Atrophic Gastritis Diseases 0.000 description 1
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 description 1
- 210000004369 Blood Anatomy 0.000 description 1
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- 241000949473 Correa Species 0.000 description 1
- 210000000981 Epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 210000000416 Exudates and Transudates Anatomy 0.000 description 1
- 206010017860 Gastritis atrophic Diseases 0.000 description 1
- 210000004072 Lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 Lymphocytes Anatomy 0.000 description 1
- 229940072417 Peroxidase Drugs 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 108090000437 Peroxidases Proteins 0.000 description 1
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 229960000278 Theophylline Drugs 0.000 description 1
- 208000008963 Transient Myeloproliferative Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 230000036462 Unbound Effects 0.000 description 1
- 210000002438 Upper Gastrointestinal Tract Anatomy 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000001154 acute Effects 0.000 description 1
- 230000001058 adult Effects 0.000 description 1
- 210000003484 anatomy Anatomy 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory Effects 0.000 description 1
- 108090001123 antibodies Proteins 0.000 description 1
- 102000004965 antibodies Human genes 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000038129 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007172 antigens Proteins 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000007374 clinical diagnostic method Methods 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000005712 crystallization Effects 0.000 description 1
- 230000001066 destructive Effects 0.000 description 1
- 238000003748 differential diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000001079 digestive Effects 0.000 description 1
- 210000002249 digestive system Anatomy 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cells Anatomy 0.000 description 1
- 238000002181 esophagogastroduodenoscopy Methods 0.000 description 1
- 239000011536 extraction buffer Substances 0.000 description 1
- 230000002550 fecal Effects 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 1
- 230000002390 hyperplastic Effects 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 210000002429 large intestine Anatomy 0.000 description 1
- 239000004973 liquid crystal related substance Substances 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000000051 modifying Effects 0.000 description 1
- 230000007459 negative regulation of leukocyte migration Effects 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological Effects 0.000 description 1
- 230000008855 peristalsis Effects 0.000 description 1
- 238000001050 pharmacotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000001885 phytohemagglutinin Effects 0.000 description 1
- 229920000314 poly p-methyl styrene Polymers 0.000 description 1
- 108091008117 polyclonal antibodies Proteins 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000003449 preventive Effects 0.000 description 1
- 230000000770 pro-inflamatory Effects 0.000 description 1
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 1
- 230000001235 sensitizing Effects 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous Effects 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissues Anatomy 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
Abstract
Description
Изобретение относится к области медицины, а именно к педиатрии и детской гастроэнтерологии, и может быть использовано для диагностики хронического гастродуоденита у детей.The invention relates to medicine, namely to pediatrics and pediatric gastroenterology, and can be used to diagnose chronic gastroduodenitis in children.
Изучение болезней органов пищеварения у детей занимает одно из ведущих мест в общем ряду важнейших медицинских проблем XX и XXI века. Это связано, прежде всего, с огромной частотой встречаемости гастродуоденальной патологии, которая в настоящее время составляет более 12000 случаев на 100000 детского населения (Эрдес С. Структура гастроэнтерологической заболеваемости у детей стала иной // Эффективная фармакотерапия. Гастроэнтерология. - №5, 2011. С. 4-6). С другой стороны, отмечается неуклонная тенденция к росту заболеваемости под действием как эндогенных, так и экзогенных факторов. В свою очередь, болезни органов пищеварения значительно снижают качество жизни детей, их способность к обучаемости, приводят к тяжелым осложнениям и, как следствие, - к инвалидизации как детского, так и в последующем взрослого населения (A.M. Запруднов. Современные особенности подростковой гастроэнтерологии // A.M. Запруднов, К.И. Григорьев. Педиатрия, - .№2, 2011. - С. 6). Таким образом, изучение патологии желудочно-кишечного тракта у детей, и хронического гастродуоденита в частности, является одним из наиболее перспективных и значимых направлений в педиатрии, и в частности в решении проблем детской гастроэнтерологии. Выраженные воспалительные изменения в слизистой оболочки желудка, согласно каскаду Correa (Correa P. The gastric precancerous cascade. / P. Correa, M.B. Piazuelo // J. Dig. Dis. - 2012. - Vol. 13(1). - P. 2-9) запускают развитие атрофических процессов. Последние, по мнению Шиманской А.Г., являются стартовой площадкой в многокаскадном процессе канцерогенеза и важным показателем риска развития рака желудка кишечного типа (Шиманская А.Г. Морфологические методы и экспертный подход при верификации атрофии слизистой оболочки желудка в биопсийной диагностике атрофического гастрита / А.Г. Шиманская // Молодой ученый, - №4, 2012. - С. 496-505). Золотым стандартом диагностики заболеваний желудочно-кишечного тракта является эзофагогастродуоденоскопия (ЭГДС), с последующей биопсией слизистой оболочки пищевода, желудка и двенадцатиперстной кишки, позволяющие оценить особенности анатомических структур и перистальтики, просвет и содержимое обследуемых органов, а также определить состояние стенки и слизистой оболочки пищевода, желудка, двенадцатиперстной кишки, в том числе признаки воспалительных, атрофических, гиперпластических и деструктивных изменений (Minimal standart terminology for gastrointestinal endoscopy of European Socienty for Gastrointestinal Endoscopy, 2008). Однако существуют определенные группы детей, которым противопоказаны инвазивные методы диагностики, а также дети, родители которых отказываются от проведения ЭГДС. Кроме того, само морфологическое исследование биоптатов является трудоемким, длительным процессом. В этом аспекте становится наиболее актуальным поиск неинвазивных методов диагностики, позволяющих быстро, просто и точно оценивать состояние слизистой оболочки желудка при хроническом гастродуодените.The study of digestive diseases in children is one of the leading places in the general series of the most important medical problems of the 20th and 21st centuries. This is primarily due to the huge frequency of gastroduodenal pathology, which currently makes up more than 12,000 cases per 100,000 children (Erdes S. The structure of gastroenterological morbidity in children has become different // Effective Pharmacotherapy. Gastroenterology. - No. 5, 2011. P . 4-6). On the other hand, there is a steady tendency towards an increase in incidence under the influence of both endogenous and exogenous factors. In turn, diseases of the digestive system significantly reduce the quality of life of children, their ability to learn, lead to serious complications and, as a result, to disability of both the child and subsequent adult population (AM Zaprudnov. Modern features of adolescent gastroenterology // AM Zaprudnov, K.I. Grigoriev, Pediatrics, - .№2, 2011.- P. 6). Thus, the study of the pathology of the gastrointestinal tract in children, and chronic gastroduodenitis in particular, is one of the most promising and significant directions in pediatrics, and in particular in solving problems of pediatric gastroenterology. Severe inflammatory changes in the gastric mucosa according to the Correa cascade (Correa P. The gastric precancerous cascade. / P. Correa, MB Piazuelo // J. Dig. Dis. - 2012. - Vol. 13 (1). - P. 2 -9) trigger the development of atrophic processes. The latter, according to Shimanskaya A.G., are a launching pad in a multi-stage carcinogenesis process and an important indicator of the risk of developing gastrointestinal cancer (Shimanskaya A.G. Morphological methods and expert approach for verification of atrophy of the gastric mucosa in biopsy diagnosis of atrophic gastritis / A . G. Shimanskaya // Young scientist, - No. 4, 2012. - P. 496-505). Esophagogastroduodenoscopy (EGD), followed by a biopsy of the mucous membrane of the esophagus, stomach and duodenum, which allows assessing the features of the anatomical structures and peristalsis, the lumen and contents of the examined organs, as well as determining the condition of the wall and mucous membrane of the esophagus, is the gold standard for diagnosing diseases of the gastrointestinal tract, stomach, duodenum, including signs of inflammatory, atrophic, hyperplastic and destructive changes (Minimal standart terminology for gastro intestinal endoscopy of European Socienty for Gastrointestinal Endoscopy, 2008). However, there are certain groups of children who are contraindicated in invasive diagnostic methods, as well as children whose parents refuse to undergo endoscopy. In addition, the morphological study of biopsy samples is a laborious, lengthy process. In this aspect, the search for non-invasive diagnostic methods that make it possible to quickly, simply and accurately assess the state of the gastric mucosa in chronic gastroduodenitis becomes most relevant.
Несмотря на наличие множества современных исследований в области диагностики, профилактики и лечения данного заболевания, всем им присущ ряд недостатков, таких как недостаточное патогенетическое обоснование, а также низкая чувствительность и специфичность разработанных методов, их инвазивность и техническая сложность выполнения.Despite the presence of many modern studies in the field of diagnosis, prevention and treatment of this disease, all of them have a number of disadvantages, such as insufficient pathogenetic justification, as well as low sensitivity and specificity of the developed methods, their invasiveness and technical complexity of execution.
Проведенными исследованиями по патентной информации найдены различные способы диагностики хронического гастродуоденита.Conducted research on patent information found various methods for the diagnosis of chronic gastroduodenitis.
Известен способ диагностики хронического гастродуоденита и функциональной диспепсии (патент РФ №2255337, МПК: G01N 33/49, опубликован 27.06.2005 г.), включающий исследование клинико-лабораторных показателей, при этом дополнительно определяют спонтанную адгезию лейкоцитов и их чувствительность к модуляторам клеточной адгезии - фитогемаглютинину, теофиллину, тималину. При показателях функциональной активности лейкоцитов в пределах нормы устанавливают диагноз функциональной диспепсии. При показателях функциональной активности лейкоцитов, превышающих пределы нормы, диагностируют хронический гастродуоденит.A known method for the diagnosis of chronic gastroduodenitis and functional dyspepsia (RF patent No. 225337, IPC: G01N 33/49, published 06/27/2005), including the study of clinical and laboratory parameters, while additionally determine the spontaneous adhesion of leukocytes and their sensitivity to modulators of cell adhesion - phytohemagglutinin, theophylline, thymalin. With indicators of the functional activity of white blood cells within normal limits, a diagnosis of functional dyspepsia is established. With indicators of the functional activity of leukocytes exceeding normal limits, chronic gastroduodenitis is diagnosed.
К недостатку данного способа относится использование сложных инвазивных методик. Кроме того, вышеуказанные показатели являются неспецифическими и участвуют в развитии различных патологических процессов, что снижает чувствительность и специфичность метода, а также усложняет интерпретацию полученных результатов, снижая степень их достоверности.The disadvantage of this method is the use of complex invasive techniques. In addition, the above indicators are nonspecific and participate in the development of various pathological processes, which reduces the sensitivity and specificity of the method, and also complicates the interpretation of the results, reducing the degree of their reliability.
Известен также способ диагностики хронического гастродуоденита и функциональной диспепсии (патент РФ №2270610, МПК: G01N 33/483, опубликован 27.02.2006 г.), включающий определение газохроматографическим методом в слюне уксусной, пропионовой и масляной кислот, и при концентрации любой из трех кислот: уксусной больше 0,910 ммоль/л, пропионовой больше 0,150 ммоль/л, масляной больше 0,013 ммоль/л диагностируют хронический гастродуоденит, а при концентрациях кислот: уксусной в пределах больше 0,010 до 0,910 ммоль/л, пропионовой до 0,150 ммоль/л, масляной до 0,013 ммоль/л диагностируют функциональную диспепсию.There is also known a method for the diagnosis of chronic gastroduodenitis and functional dyspepsia (RF patent No. 2270610, IPC: G01N 33/483, published 02.27.2006), including determination by gas chromatographic method in the saliva of acetic, propionic and butyric acids, and at a concentration of any of the three acids : acetic acid is greater than 0.910 mmol / l, propionic acid is greater than 0.150 mmol / l, butyric acid is greater than 0.013 mmol / l, chronic gastroduodenitis is diagnosed, and at acid concentrations: acetic acid in the range of more than 0.010 to 0.910 mmol / l, propionic to 0.150 mmol / l, oil to 0.013 mmol / L diag they have functional dyspepsia.
Недостатками данного способа являются трудоемкость исследования, что затрудняет широкое использование вышеуказанного метода в практическом использовании, а также невозможность оценки степени поражения слизистой оболочки желудка.The disadvantages of this method are the complexity of the study, which complicates the widespread use of the above method in practical use, as well as the inability to assess the degree of damage to the gastric mucosa.
Известен также способ определения патологии гастродуоденальной зоны (патент РФ №2128335, МПК G01N 33/48, опубликован 27.03.1999 г.), включающий кристаллографическое исследование с NaCl слюны, анализ результатов по системе кристаллизации NaCl и величине морфотипов жидкокристаллических структур, а также кристаллографическое исследование экссудата.There is also a method for determining the pathology of the gastroduodenal zone (RF patent No. 2128335, IPC G01N 33/48, published March 27, 1999), including a crystallographic study with NaCl saliva, analysis of the results on the NaCl crystallization system and the magnitude of morphotypes of liquid crystal structures, as well as a crystallographic study exudate.
Недостатками данного способа являются трудоемкость исследования и субъективность при интерпретации полученных результатов анализа, что снижает его достоверность.The disadvantages of this method are the complexity of the study and subjectivity in the interpretation of the results of the analysis, which reduces its reliability.
Известен также способ неинвазивной диагностики активного гастрита (патент РФ №2216022, МПК: G01N 33/48, опубликован 10.11.2003 г.), основанный на иммунологическом исследовании крови больных путем количественной оценки сенсибилизации лимфоцитов к тканевому антигену желудка в реакции торможения миграции лейкоцитов. При проценте миграции более 80% диагностируют неактивный гастрит, в пределах 70-80% - гастрит с минимальной активностью, менее 70% - гастрит с умеренной и выраженной активностью.There is also a method of non-invasive diagnosis of active gastritis (RF patent No. 2216022, IPC: G01N 33/48, published November 10, 2003), based on an immunological study of the blood of patients by quantifying the sensitization of lymphocytes to tissue antigen of the stomach in the inhibition of leukocyte migration. With a migration percentage of more than 80%, inactive gastritis is diagnosed, in the range of 70-80% - gastritis with minimal activity, less than 70% - gastritis with moderate and pronounced activity.
Данный способ диагностики является инвазивным и не может использоваться в качестве скринингового метода.This diagnostic method is invasive and cannot be used as a screening method.
Таким образом, разработка новых высокоэффективных способов диагностики гастродуоденита является актуальной задачей современной медицины.Thus, the development of new highly effective methods for the diagnosis of gastroduodenitis is an urgent task of modern medicine.
Однако при проведении анализа научно-медицинской и патентной литературы нами не было найдено наиболее близкого технического решения для реализации поставленной задачи, которое можно бы было взять за прототип.However, when conducting an analysis of the medical, scientific and patent literature, we did not find the closest technical solution for the implementation of the task, which could be taken as a prototype.
Задачей предложенного изобретения является разработка способа неинвазивной диагностики хронических воспалительных заболеваний верхних отделов желудочно-кишечного тракта у детей с помощью молекулярного биомаркера β-2-дефензина, позволяющего с помощью неинвазивной методики точно, просто и быстро оценивать состояние слизистой оболочки желудка, что необходимо для определения дальнейшей тактики лечения и выбора профилактических мероприятий.The objective of the proposed invention is to develop a method for non-invasive diagnosis of chronic inflammatory diseases of the upper gastrointestinal tract in children using the molecular biomarker β-2-defensin, which allows using a non-invasive technique to accurately, simply and quickly assess the state of the gastric mucosa, which is necessary to determine further tactics of treatment and the choice of preventive measures.
Поставленная задача достигается тем, что определяют у детей уровень катионного антимикробного пептида β-2-дефензина в кале методом иммуноферментного анализа. При этом, при достижении концентрации катионного антимикробного пептида β-2-дефензина в интервале величин от 31,2 нг/г до 87 нг/г, диагностируют наличие активного хронического гастродуоденита. При достижении концентрации катионного антимикробного пептида β-2-дефензина величины равной или более 87 нг/г диагностируют наличие хронического гастродуоденита высокой степени активности.This object is achieved in that they determine the level of cationic antimicrobial peptide β-2-defensin in feces in children by enzyme-linked immunosorbent assay. In this case, when the concentration of the cationic antimicrobial peptide β-2-defensin is reached in the range from 31.2 ng / g to 87 ng / g, the presence of active chronic gastroduodenitis is diagnosed. Upon reaching a concentration of the cationic antimicrobial β-2-defensin peptide equal to or greater than 87 ng / g, a high degree of chronic gastroduodenitis is diagnosed.
Техническим результатом, объективно проявляющимся при осуществлении предлагаемого способа диагностики, является диагностика степени воспалительных изменений при хроническом гастродуодените у детей, подтвержденная результатами фиброгастродуоденоскопии с биопсией антрального отдела желудка и статистической обработкой полученных результатов.The technical result objectively manifested in the implementation of the proposed diagnostic method is the diagnosis of the degree of inflammatory changes in chronic gastroduodenitis in children, confirmed by the results of fibrogastroduodenoscopy with a biopsy of the antrum and statistical processing of the results.
Антимикробные пептиды и в частности β-2-дефензин играют важную роль в развитии хронической патологии, в связи с множеством их биологических эффектов, таких как про- и противовоспалительное, антимикробное, ранозаживляющее и другие действия. Эспрессия β-2-дефензина эпителиоцитами желудка усиливается лишь индуцибельно под действием различных факторов. В связи с тем, что β-2-дефензин (кроме эпителия желудка) синтезируется клетками толстого кишечника, а также альвеоцитами 2 типа в легких, отсутствие у ребенка заболеваний вышеперечисленных органов дает возможность использовать β-2-дефензин в качестве диагностического маркера воспалительных заболеваний верхнего отдела пищеварительного тракта.Antimicrobial peptides and in particular β-2-defensin play an important role in the development of chronic pathology, in connection with many of their biological effects, such as pro- and anti-inflammatory, antimicrobial, wound healing and other actions. The expression of β-2-defensin by gastric epithelial cells is enhanced only inducibly by various factors. Due to the fact that β-2-defensin (except for the epithelium of the stomach) is synthesized by cells of the large intestine, as well as type 2 alveocytes in the lungs, the absence of diseases of the above organs in a child makes it possible to use β-2-defensin as a diagnostic marker of inflammatory diseases of the upper digestive tract.
Способ неинвазивной диагностики хронического гастродуоденита у детей осуществлялся следующим образом.The method of non-invasive diagnosis of chronic gastroduodenitis in children was carried out as follows.
Образец кала собирают в чистую пробирку в день поступления ребенка в стационар до начала получения стандартной терапии, утром, не позднее 8.00. После этого экстрагируют 30 мг исходного образца в пробирку (типа «эппендорф»). Количественное определение содержания β-2-дефензина в образцах стула проводят методом иммуноферментного анализа (ELISA) на анализаторе Tecan Sunrise (Швейцария) с помощью стандартного набора реагентов для определения уровня β-2-дефензина (ВСМ DIAGNOSTICS, Германия). В пробирку с образцом кала добавляют 1,5 мл буферного раствора для экстракции (фактор разведения: 1:50). Смесь в течение 30 минут энергично встряхивают на вортексе, затем 1,5 мл гомогената переносят в чистую пробирку и центрифугируют в течение 5 мин при 10000 об/мин. Дальнейшее тестирование в дублях проводят следующим образом: β-2-дефензин, содержащийся в стандартах и образцах, связывается с присутствующими в избытке поликлональными антителами к β-2-дефензину, сорбированными в лунках микропланшета. При последующей промывке из лунок удалялись все несвязавшиеся компоненты, а количественная оценка связавшегося β-2-дефензина выполнялась при добавлении биотинилированных поликлональных антител к β-2-дефензину, которые выявлялись с помощью стрептавидина, конъюгированного с пероксидазой. Количество субстрата, конвертированного пероксидазой, прямо пропорционально количеству связавшегося β-2-дефензина и было измерено фотометрически на микропланшетном фотометре при длине волны 450 нм. Расчет концентрации дефензина проводился с помощью метода 4-параметрической аппроксимации.A sample of feces is collected in a clean tube on the day the child enters the hospital before starting standard therapy, in the morning, no later than 8.00. After that, 30 mg of the original sample is extracted into a test tube (Eppendorf type). Quantitative determination of β-2-defensin content in stool samples is carried out by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) on a Tecan Sunrise analyzer (Switzerland) using a standard set of reagents for determining the level of β-2-defensin (BCM DIAGNOSTICS, Germany). 1.5 ml of extraction buffer solution (dilution factor: 1:50) was added to the stool sample tube. The mixture is vigorously shaken for 30 minutes on a vortex, then 1.5 ml of the homogenate is transferred to a clean tube and centrifuged for 5 minutes at 10,000 rpm. Further testing in duplicates is carried out as follows: β-2-defensin contained in the standards and samples binds to excess polyclonal anti-β-2-defensin antibodies sorbed in the wells of the microplate. Upon subsequent washing, all unbound components were removed from the wells, and the bound β-2-defensin was quantified by adding biotinylated polyclonal antibodies to β-2-defensin, which were detected using streptavidin conjugated with peroxidase. The amount of peroxidase-converted substrate is directly proportional to the amount of β-2-defensin bound and was measured photometrically on a microplate photometer at a wavelength of 450 nm. The calculation of the concentration of defensin was carried out using the method of 4-parameter approximation.
С целью апробации данного метода нами было обследовано 70 детей в возрасте от 8 до 14 лет с хроническим гастродуоденитом в стадии обострения и 21 здоровый ребенок I и IIa групп здоровья. У всех родителей было получено письменное информированное согласие на участие в исследовании.In order to test this method, we examined 70 children aged 8 to 14 years with chronic gastroduodenitis in the acute stage and 21 healthy children of health groups I and IIa. All parents received written informed consent to participate in the study.
Постановка предварительного диагноза осуществлялась на основании жалоб, данных анамнеза заболевания, результатов объективного обследования больных. Окончательный диагноз подтверждался данными фиброэзофагогастродуоденоскопии (ФЭГДС), гистологического исследования гастробиоптатов. Для получения достоверной информации полное обследование пациентов проводилось в первые дни с момента госпитализации в стационар, при этом все исследования проводили натощак во временном интервале с 8.00 ч до 10.00 ч утра. Всем детям было проведено ФЭГДС, исследование выполнялось утром, натощак, по стандартной методике в эндоскопическом кабинете с применением видеосистемы EXERA II (NBI-технологии) с последующей прицельной биопсией антрального отдела слизистой оболочки желудка, необходимой для уточнения диагноза.A preliminary diagnosis was made on the basis of complaints, the medical history, the results of an objective examination of patients. The final diagnosis was confirmed by the data of fibroesophagogastroduodenoscopy (FEGDS), histological examination of gastrobioptates. To obtain reliable information, a complete examination of the patients was carried out in the first days from the moment of hospitalization to the hospital, while all studies were performed on an empty stomach in the time interval from 8.00 to 10.00 in the morning. FEGDS was performed for all children, the study was performed in the morning, on an empty stomach, according to the standard method in an endoscopic cabinet using the EXERA II video system (NBI technology), followed by a targeted biopsy of the antrum of the gastric mucosa, necessary to clarify the diagnosis.
Эндоскопическую картину оценивали согласно MST 3.0 version (Minimal standart terminology for gastrointestinal endoscopy of European Socienty for Gastrointestinal Endoscopy, 2008), морфологические изменения слизистой оболочки желудка оценивались согласно «визуально-аналоговой» шкале Модифицированной Сиднейской системы (1996 г.) с учетом «Новой классификации хронического гастрита» (Аруин Л.И., Кононов А.В., Мозговой С.И. Новая классификация хронического гастрита. - М., 2009. - 19 с.).The endoscopic picture was evaluated according to MST 3.0 version (Minimal standart terminology for gastrointestinal endoscopy of European Socienty for Gastrointestinal Endoscopy, 2008), morphological changes in the gastric mucosa were evaluated according to the “visual-analogue” scale of the Modified Sydney system (1996) taking into account the “New Classification chronic gastritis ”(Aruin L.I., Kononov A.V., Mozgovoy S.I. New classification of chronic gastritis. - M., 2009. - 19 p.).
При анализе зависимости между уровнем β-2-дефензина в кале и выраженностью морфологических изменений в слизистой оболочке желудка были получены следующие результаты: средний уровень β-2-дефензина в кале среди детей с низкой степенью активности гастрита составил 41,8 нг/г, тогда как с высокой степенью активности гастрита 96,1 нг/г, что является достоверным показателем (р=0,000001), и значительно превышает концентрацию β-2-дефензина группы контроля (р=0,001) (см. таблицу 1).When analyzing the relationship between the level of β-2-defensin in feces and the severity of morphological changes in the gastric mucosa, the following results were obtained: the average level of β-2-defensin in feces among children with a low degree of gastritis activity was 41.8 ng / g, then as with a high degree of gastritis activity, 96.1 ng / g, which is a reliable indicator (p = 0.000001), and significantly exceeds the concentration of β-2-defensin of the control group (p = 0.001) (see table 1).
Примечание:
Согласно проведенному ROC-анализу при уровне β-2 дефензина в кале выше 31,2 нг/г диагностируют у ребенка наличие активного хронического гастродуоденита (р=0,0122), а при уровне 87 нг/г и более этой величины - наличие хронического гастродуоденита с выраженными воспалительными изменениями в слизистой оболочке желудка (p<0,0001).According to the ROC analysis, when the level of β-2 defensin in feces is higher than 31.2 ng / g, the child is diagnosed with the presence of active chronic gastroduodenitis (p = 0.0122), and with a level of 87 ng / g or more of this value, the presence of chronic gastroduodenitis with severe inflammatory changes in the gastric mucosa (p <0.0001).
Пример 1. Девочка С., 11 лет. На основании данных комплексного клинико-лабораторного обследования, а также результатов фиброгастроскопии с морфологическим исследованием гастробиоптатов был поставлен окончательный диагноз: хронический поверхностный гастрит, период обострения. Морфологический диагноз: Гастрит поверхностный, 1 степени активности воспалительных изменений. Уровень β-2-дефензина в кале 37,5 нг/г.Example 1. Girl S., 11 years old. Based on the data of a comprehensive clinical and laboratory examination, as well as the results of fibrogastroscopy with a morphological study of gastrobiopathies, the final diagnosis was made: chronic superficial gastritis, period of exacerbation. Morphological diagnosis: Superficial gastritis, 1 degree of activity of inflammatory changes. The fecal β-2-defensin level is 37.5 ng / g.
Пример 2. Мальчик А., 10 лет. На основании данных комплексного клинико-лабораторного обследования, а также результатов фиброгастроскопии с морфологическим исследованием гастробиоптатов был поставлен окончательный диагноз: хронический поверхностный гастрит, период обострения. Морфологический диагноз: Гастрит поверхностный, 2 степени активности воспалительных изменений. Уровень β-2-дефензина в кале 150 нг/г.Example 2. Boy A., 10 years old. Based on the data of a comprehensive clinical and laboratory examination, as well as the results of fibrogastroscopy with a morphological study of gastrobiopathies, the final diagnosis was made: chronic superficial gastritis, period of exacerbation. Morphological diagnosis: Superficial gastritis, 2 degrees of activity of inflammatory changes. The level of β-2-defensin in feces is 150 ng / g.
Таким образом, уровень β-2-дефензина в кале имеет высокую корреляционную связь со степенью активности воспаления в слизистой оболочке желудка. Разработанный способ не имеет аналогов, неинвазивен, прост в исполнении и может использоваться в качестве скринингового метода, а также с целью дифференциальной диагностики тяжести поражения слизистой оболочки желудка при хроническом гастродуодените.Thus, the level of β-2-defensin in feces has a high correlation with the degree of inflammation activity in the gastric mucosa. The developed method has no analogues, is non-invasive, simple to perform, and can be used as a screening method, as well as for the differential diagnosis of the severity of damage to the gastric mucosa in chronic gastroduodenitis.
Claims (1)
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2574914C1 true RU2574914C1 (en) | 2016-02-10 |
Family
ID=
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2006050737A1 (en) * | 2004-11-12 | 2006-05-18 | Novozymes A/S | Polypeptides having antimicrobial activity and polynucleotides encoding same |
RU2517069C1 (en) * | 2012-11-21 | 2014-05-27 | Мария Георгиевна Ильяшенко | Method for prediction of risk of developing recurrent inflammatory intestinal diseases |
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2006050737A1 (en) * | 2004-11-12 | 2006-05-18 | Novozymes A/S | Polypeptides having antimicrobial activity and polynucleotides encoding same |
RU2517069C1 (en) * | 2012-11-21 | 2014-05-27 | Мария Георгиевна Ильяшенко | Method for prediction of risk of developing recurrent inflammatory intestinal diseases |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
БУДИХИНА А.С. и др., Дефензины; мультифункциональные катионные пептиды человека, Иммунопатология, аллергология, инфектология, 2008, N2, с. 31-40. ДУДНИКОВА Э.В. и др., Роль CATT-полиморфизма фактора торможения миграции макрофагов и бета-2-дефензина в формировании заболеваний верхнего отдела желудочно-кишечного тракта у детей., Известия Сочинского государственного университета. 2014, N3 (31), с. 236-239. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Costa et al. | Role of faecal calprotectin as non-invasive marker of intestinal inflammation | |
Sutherland et al. | Review of fecal biomarkers in inflammatory bowel disease | |
US9285373B2 (en) | Methods and products for diagnosing autoimmune disease and gastric cancer linked with atrophic gastritis | |
US7906291B2 (en) | Method for diagnosing multiple sclerosis | |
JP5571657B2 (en) | Markers for engraftment and death | |
Graham et al. | Noninvasive versus histologic detection of gastric atrophy in a Hispanic population in North America | |
JP4348083B2 (en) | Test method for atrophic gastritis | |
AU2002220029A1 (en) | Method for differentiating between irritable bowel syndrome and inflammatory bowel disease using lactoferrin as marker | |
WO2002039883A2 (en) | Method for differentiating between irritable bowel syndrome and inflammatory bowel disease using lactoferrin as marker | |
EP1554580A2 (en) | Inflammatory bowel disease and irritable bowel syndrome ibd-first chek diagnostic panel | |
RU2407451C1 (en) | Method of diagnosing bronchial asthma in children of early age using data of induces sputum cytology | |
Picarelli et al. | Reactivity to dietary gluten: new insights into differential diagnosis among gluten-related gastrointestinal disorders | |
RU2574914C1 (en) | Non-invasive diagnostic technique for chronic gastroduodenitis in children | |
Hanafy et al. | A simple noninvasive score predicts disease activity and deep remission in ulcerative colitis | |
CN105242045A (en) | Use of gastrin-17 as biomarker for atrophic gastritis with increased risk of several related sequels | |
Añó et al. | Fecal immunochemical test for hemoglobin versus fecal calprotectin to monitor endoscopic activity in inflammatory bowel disease | |
Lim et al. | The assessment of a rapid noninvasive immunochromatographic assay test for fecal lactoferrin in patients with suspected inflammation of the ileal pouch | |
RU2672600C1 (en) | Method of diagnostics of inflammatory lesions of upper git | |
RU2796318C1 (en) | Method for predicting allergic rhinitis in children with food allergy to cow's milk | |
RU2755492C1 (en) | Method for predicting the risk of ulcerative colitis recurrence | |
Wang et al. | Fecal keratin 8 is a noninvasive and specific marker for intestinal injury in necrotizing enterocolitis | |
RU2807947C1 (en) | Method of predicting the formation of post-covid syndrome in the gastrointestinal tract based on the determination of immunological markers | |
RU2761732C1 (en) | Method for differential diagnostics of uremic pseudoperitonitis and peritonitis in patients receiving renal replacement therapy - program hemodialysis | |
RU2675846C2 (en) | Method of early diagnosis of risk of essential arterial hypertension development | |
Genov et al. | Role of Serum Uromodulin in the Early Diagnosis of Chronic Kidney Disease |