RU2573977C2

RU2573977C2 - 4,6-di(3,12-diaza-6,9-diazoniadispiro[5,2,5,2]hexadecan-1-yl)-2-methyl-5-nitropyrimidine tetrachloride hydrochloride hexahydarate for treating herpetic infection, pharmaceutical composition for local application

Info

Publication number: RU2573977C2
Application number: RU2014117294/15A
Authority: RU
Inventors: Вадим Альбертович Макаров; Наталья Сергеевна Монахова; Ольга Борисовна Рябова
Original assignee: Общество с ограниченной ответстсвенностью "НИАРМЕДИК ПЛЮС"
Priority date: 2014-04-30
Filing date: 2014-04-30
Publication date: 2016-01-27
Also published as: WO2015167368A1; RU2014117294A; RU2573977C9

Abstract

FIELD: medicine, pharmaceutics.

SUBSTANCE: invention refers to medicine and represents a pharmaceutical composition in the form of a cream or gel for treating a herpes viral infection, containing 4,6-di(3,12-diaza-6,9-diazoniadispiro[5,2,5,2]hexadecan-1-yl)-2-methyl-5-nitropyrimidine tetrachloride dihydrochloride hexahydrate. The invention consists in a method of treating or preventing a herpetic infection in a human or animal.

EFFECT: providing a pharmaceutical composition of 4,6-di(3,12-diaza-6,9-diazoniadispiro[5,2,5,2]hexadecan-1-yl)-2-methyl-5-nitropyrimidine tetrachloride dihydrochloride hexahydrate in the form of a dosage form for local application possessing a high level of therapeutic efficacy.

4 cl, 2 dwg, 2 tbl, 5 ex

Description

Изобретение относится к применению 4,6-ди(3,12-диаза-6,9-диазониадиспиро[5.2.5.2]гексадекан-1-ил)-2-метил-5-нитропириллидин тетрахлорид дигидрохлорид гексагидрата, обладающего активностью в отношении вируса герпеса, для предупреждения и лечения герпетической инфекции человека и животных с использованием местного способа применения.The invention relates to the use of 4,6-di (3,12-diaza-6,9-diazoniadispiro [5.2.5.2] hexadecan-1-yl) -2-methyl-5-nitropyryllidine tetrachloride dihydrochloride hexahydrate having activity against the herpes virus , for the prevention and treatment of herpetic infection in humans and animals using a local method of application.

Несмотря на многочисленные исследования в области вирусологии проблемы герпес-вирусных инфекций (ГВИ), в особенности ассоциированных с вирусом простого герпеса (Herpes simplex) 1 и 2 типа (ВПГ-1 и ВПГ-2), не теряют своей актуальности и медико-социальной значимости. В структуре инфекционно-вирусных поражений человека ГВИ занимают 2-е место, уступая лишь гриппу. ГВИ способны поражать практически все органы и системы макроорганизама, вызывая латентную, острую и хроническую инфекции.Despite numerous studies in the field of virology, the problems of herpes virus infections (GVI), especially those associated with the herpes simplex virus (Herpes simplex) type 1 and 2 (HSV-1 and HSV-2), do not lose their relevance and medical and social significance . In the structure of human infectious-viral lesions, GVI occupy the 2nd place, second only to influenza. GVI can affect almost all organs and systems of a macroorganism, causing latent, acute and chronic infections.

Данные о распространенности ГВИ, приводимые в литературе, значительно варьируют, что по всей видимости связано с различиями в демографических и клинических характеристиках исследуемых групп больных, использованными методами диагностики. С одной стороны, по данным ряда исследователей, ГВИ клинически проявляется у 20-25% инфицированных, с другой стороны, результаты научных работ показывают, что клинические симптомы ГВИ проявляются в 60-70% случаев. В Российской Федерации широкомасштабных эпидемиологических исследований распространенности ГВИ не проводилось. Однако данные выборочного эпидемиологического исследования среди лиц в возрастной группе от 14 до 64 лет свидетельствуют о том, что частота распространения ВПГ 1 типа достигает 99,4% [Хрянин А.А. с соавт. Многолетние тенденции в распространенности вируса простого герпеса в Сибири. В помощь практическому врачу. 2010. №5] Официальная статистика о распространенности ГВИ, вызванной ВПГ-2, регистрируется в России только с 1993 года. Результаты анализа данных ежегодного государственного статистического наблюдения свидетельствуют о том, что на фоне сокращения заболеваемости инфекциями, передающимися половым путем (ИППП), наблюдается рост показателей заболеваемости ГВИ урогенитального тракта. Такая же ситуация, по данным ВОЗ, наблюдается и по причинам смертности от вирусных инфекций: 35,8% - вирус гриппа и 15,8% - ВПГ. По различным оценкам, в США ежегодно регистрируется до 98 млн случаев лабиального герпеса и 20 млн случаев рецидивирующего герпеса гениталий, 500 тыс. случаев офтальмогерпеса и более 5 тыс. случаев герпетического энцефалита, около 1 тыс. случаев герпеса новорожденных. По сравнению с 80-ми годами к концу тысячелетия число зарегистрированных больных герпесом возросло в США на 13-40%, странах Европы на 7-16%, а в Африке на 30-40%. Сравнительный анализ данных NHANES I и NHANES II показал, что заболеваемость выросла в равных пропорциях во всех возрастных группах.The data on the prevalence of BBVI presented in the literature vary significantly, which is most likely due to differences in the demographic and clinical characteristics of the studied groups of patients used by diagnostic methods. On the one hand, according to a number of researchers, GVI is clinically manifested in 20-25% of infected people, on the other hand, the results of scientific studies show that the clinical symptoms of GVI are manifested in 60-70% of cases. In the Russian Federation, large-scale epidemiological studies of the prevalence of HBV have not been conducted. However, the data of a sample epidemiological study among people in the age group from 14 to 64 years indicate that the prevalence of HSV type 1 reaches 99.4% [Khryanin A.A. et al. Long-term trends in the prevalence of the herpes simplex virus in Siberia. To help a practitioner. 2010. No. 5] Official statistics on the prevalence of HBV caused by HSV-2 have been recorded in Russia only since 1993. The results of the analysis of the data of the annual state statistical observation indicate that against the background of a decrease in the incidence of sexually transmitted infections (STIs), there is an increase in the incidence of HBV of the urogenital tract. The same situation, according to WHO, is also observed for causes of death from viral infections: 35.8% - influenza virus and 15.8% - HSV. According to various estimates, up to 98 million cases of labial herpes and 20 million cases of recurrent genital herpes, 500 thousand cases of ophthalmic herpes and more than 5 thousand cases of herpes encephalitis, about 1 thousand cases of herpes simplex are registered in the United States annually. Compared with the 80s, by the end of the millennium, the number of registered herpes patients increased in the United States by 13-40%, in Europe by 7-16%, and in Africa by 30-40%. A comparative analysis of the NHANES I and NHANES II data showed that the incidence increased in equal proportions in all age groups.

В настоящее время известны следующие группы противогерпетических препаратов [De Clercq Е. The discovery of antiviral agents: Ten different compounds, ten different stories. Med Res Rev 2008; 28: 929-953; De Clercq E. Antiviral drug discovery: Ten more compounds, and ten more stories (part B). Med Res Rev 2009; 29: 571-610; De Clercq E. Another ten stories in antiviral drug discovery (part C): "Old" and "new" antivirals, strategies and perspectives. Med Res Rev 2009; 29: 611-645; De Clercq E. Yet another ten stories on antiviral drug discovery (part D): Paradigms, paradoxes and paraductions. Med Res Rev 2010; 30: 667-707; De Clercq E. The next ten stories on antiviral drug discovery (part E): Advents, advances andadventures. Med Res Rev 2011; 31: 118-160]: класс аномальных нуклеозидов, производные фосфонуксусной и фосфонформатной кислот, производные адамантана гидрохлорида, гетероциклические производные, препараты растительного происхождения, интерферон и его индукторы, вакцины.Currently, the following groups of antiherpetic drugs are known [De Clercq E. The discovery of antiviral agents: Ten different compounds, ten different stories. Med Res Rev 2008; 28: 929-953; De Clercq E. Antiviral drug discovery: Ten more compounds, and ten more stories (part B). Med Res Rev 2009; 29: 571-610; De Clercq E. Another ten stories in antiviral drug discovery (part C): "Old" and "new" antivirals, strategies and perspectives. Med Res Rev 2009; 29: 611-645; De Clercq E. Yet another ten stories on antiviral drug discovery (part D): Paradigms, paradoxes and paraductions. Med Res Rev 2010; 30: 667-707; De Clercq E. The next ten stories on antiviral drug discovery (part E): Advents, advances andadventures. Med Res Rev 2011; 31: 118-160]: a class of abnormal nucleosides, derivatives of phosphonoacetic and phosphonoformic acids, derivatives of adamantane hydrochloride, heterocyclic derivatives, herbal preparations, interferon and its inducers, vaccines.

Класс аномальных нуклеозидов - наиболее изученный и обширный класс противогерпетических соединений и включает в себя пиримидиновые аналоги нуклеозидов, к которым относится идоксуридин (ИДУ) для химиотерапии герпес-вирусных инфекций, вызванных ВПГ, в офтальмологии (для лечения и профилактики герпетического кератита); пуриновые аналоги нуклеозидов, с наиболее известным представителем Видарабином, который был рекомендован для системного назначения при герпетическом энцефалите, однако, утратил свое значение из-за высокой токсичности: в высоких дозах обладал канцерогенным, мутагенным и тератогенным действием; производные азотистых гетероциклов - к этой группе относится химиопрепарат виразол (рибавирин) [Smith DB, Martin JA, Klumpp K, Baker SJ, Blomgren PA, Devos R, Granycome C, Hang J, Hobbs CJ, Jiang WR, Laxton C, Le Pogam S, Leveque V, Ma H, Maile G, Merrett JH, Pichota A, Sarma K, Smith M, Swallow S, Symons J, Vesey D, Najera I, Cammack N. Design, synthesis, and antiviral properties of 4_-substituted ribonucleosides as inhibitors of hepatitis С virus replication: The discovery of R1479. Bioorg Med Chem Lett 2007; 17: 2570-2576] - активен в отношении ДНК и РНК-содержащих вирусов (вирусы гриппа A и B, парагриппа, кори, ВПГ I и II типов, варицелла зостер и др.). Обладает рядом серьезных токсических эффектов: оказывает отрицательное влияние на костный мозг.The class of abnormal nucleosides is the most studied and extensive class of antiherpetic compounds and includes pyrimidine analogs of nucleosides, which include idoxuridine (IMU) for chemotherapy of herpes virus infections caused by HSV in ophthalmology (for the treatment and prevention of herpetic keratitis); purine nucleoside analogues, with the most famous representative Vidarabine, which was recommended for systemic use in herpes encephalitis, however, lost its importance due to its high toxicity: in high doses, it had a carcinogenic, mutagenic and teratogenic effect; derivatives of nitrogen heterocycles - this group includes the chemotherapy drug virazole (ribavirin) [Smith DB, Martin JA, Klumpp K, Baker SJ, Blomgren PA, Devos R, Granycome C, Hang J, Hobbs CJ, Jiang WR, Laxton C, Le Pogam S , Leveque V, Ma H, Maile G, Merrett JH, Pichota A, Sarma K, Smith M, Swallow S, Symons J, Vesey D, Najera I, Cammack N. Design, synthesis, and antiviral properties of 4_-substituted ribonucleosides as inhibitors of hepatitis C virus replication: The discovery of R1479. Bioorg Med Chem Lett 2007; 17: 2570-2576] - active against DNA and RNA-containing viruses (influenza A and B viruses, parainfluenza, measles, HSV types I and II, varicella zoster, etc.). It has a number of serious toxic effects: it has a negative effect on the bone marrow.

Ациклические аналоги пуриновых нуклеозидов - наиболее ярким представителем является ацикловир и его производные валацикловир, пенцикловир, фамцикловир, ганцикловир, цидофовир. Это класс соединений, аналогов гуанозина и аденозина, в которых сохранен фрагмент нуклеинового основания. Противогерпетические препараты этого класса (для местного и системного действия) высокоспецифичны и малотоксичны. В инфицированной клетке в процессе копирования материнской вирусной ДНК ацикловир после трехшагового фосфорилирования, выполненного на первом этапе вирусной тимидинкиназой (монофосфорилирование), а на втором и третьем этапе клеточной тимидинкиназой, подхватывается вирусной ДНК-полимеразой и встраивается в цепи строящихся ДНК для дочерних вирионов. В связи с тем, что ацикловир лишен, в отличие от природного гуанозина, 3-гидроксильной группы, необходимой для присоединения к нему следующего нуклеозида из состава цепи, при его раннем включении в синтез ДНК, этот процесс обрывается в самом начале, сборка дочерних вирусных ДНК останавливается и новые вирусные частицы просто не формируются. Очень важно, что, будучи включенным в какой-либо участок новой ДНК, ацикловир никогда не заменяется естественным гуанозином. Применение нуклеозидов обрывает процесс репликации герпес-вирусов на любой стадии, новые генерации вирусов не образуются, и собственно распространение инфекции приостанавливается. Оставшееся в организме ограниченное количество антигенов герпес-вирусов позволяет иммунной системе без помех разобраться в их типах и репертуаре, что приводит к формированию полноценного иммунитета у всех людей с нормально функционирующей иммунной системой. Другие ациклические нуклеозиды [Sofia MJ, Bao D, Chang W, Du J, Nagarathnam D, Rachakonda S, Reddy PG, Ross BS, Wang P, Zhang HR, Bansal S, Espiritu C, Keilman M, Lam AM, Steuer HM, Niu C, Otto MJ, Furman PA. Discovery of a-d-2-deoxy-2-fluoro-2-C-methyluridine nucleotide prodrug (PSI-7977) for the treatment of hepatitis С virus. J Med Chem 2010; 53: 7202-7218; Furman PA, Murakami E, Niu C, Lam AM, Espiritu C, Bansal S, Bao H, Tolstykh T, Micolochick Steuer H, Keilman M, Zennou V, Bourne N, Veselenak RL, Chang W, Ross BS, Du J, Otto MJ, Sofia MJ. Activity and themetabolic activation pathway of the potent and selective hepatitis С virus pronucleotide inhibitor PSI-353661. Antiviral Res 2011; 91: 120-132; Reddy PG, Chun BK, Zhang HR, Rachakonda S, Ross BS, Sofia MJ. Stereoselective synthesis of PSI-352938: A.-D-2-deoxy-2-fluoro-2-C-methyl-3,5-cyclic phosphate nucleotide prodrug for the treatment of HCV. J Org Chem 2011; 76: 3782-3790; Lam AM, Espiritu C, Murakami E, Zennou V, Bansal S, Micolochick Steuer HM, Niu C, Keilman M, Bao H, Bourne N, Veselenak RL, Reddy PG, Chang W, Du J, Nagarathnam D, Sofia MJ, Otto MJ, Furman PA. Inhibition of hepatitis С virus replicon RNA synthesis by PSI-352938, a cyclic phosphate prodrug of D-2-deoxy-2-fluoro-2-C-methylguanosine. Antimicrob Agents Chemother 2011; 55: 2566-2575] используют тот же принцип действия, но ориентированы на другие ферментные группы герпес-вирусов. Однако оказалось, что некоторые химиотерапевтические препараты обладают сильными побочными действиями и неудовлетворительными фармакокинетическими свойствами, что ограничивает показания и/или возможность их применения либо по возрастным, либо по клиническим критериям.Acyclic analogues of purine nucleosides - the most prominent representative is acyclovir and its derivatives valaciclovir, penciclovir, famciclovir, ganciclovir, cidofovir. This is a class of compounds, analogues of guanosine and adenosine, in which a fragment of the nucleic base is stored. Antiherpetic drugs of this class (for local and systemic action) are highly specific and low toxic. In an infected cell, in the process of copying maternal viral DNA, acyclovir after three-step phosphorylation performed in the first stage by viral thymidine kinase (monophosphorylation), and in the second and third stages of cell thymidine kinase, is picked up by viral DNA polymerase and integrates into the chain of DNA under construction for daughter virions. Due to the fact that acyclovir lacks, unlike natural guanosine, the 3-hydroxyl group necessary to attach the next nucleoside to it, when it is included in DNA synthesis early, this process breaks off at the very beginning, the assembly of daughter viral DNA stops and new viral particles simply do not form. It is very important that, when included in any part of the new DNA, acyclovir is never replaced by natural guanosine. The use of nucleosides interrupts the replication of herpes viruses at any stage, new virus generations are not formed, and the actual spread of the infection is stopped. The limited number of herpes virus antigens remaining in the body allows the immune system to understand their types and repertoire without interference, which leads to the formation of full-fledged immunity in all people with a normally functioning immune system. Other acyclic nucleosides [Sofia MJ, Bao D, Chang W, Du J, Nagarathnam D, Rachakonda S, Reddy PG, Ross BS, Wang P, Zhang HR, Bansal S, Espiritu C, Keilman M, Lam AM, Steuer HM, Niu C, Otto MJ, Furman PA. Discovery of a-d-2-deoxy-2-fluoro-2-C-methyluridine nucleotide prodrug (PSI-7977) for the treatment of hepatitis C virus. J Med Chem 2010; 53: 7202-7218; Furman PA, Murakami E, Niu C, Lam AM, Espiritu C, Bansal S, Bao H, Tolstykh T, Micolochick Steuer H, Keilman M, Zennou V, Bourne N, Veselenak RL, Chang W, Ross BS, Du J, Otto MJ, Sofia MJ. Activity and themetabolic activation pathway of the potent and selective hepatitis C virus pronucleotide inhibitor PSI-353661. Antiviral Res 2011; 91: 120-132; Reddy PG, Chun BK, Zhang HR, Rachakonda S, Ross BS, Sofia MJ. Stereoselective synthesis of PSI-352938: A.-D-2-deoxy-2-fluoro-2-C-methyl-3,5-cyclic phosphate nucleotide prodrug for the treatment of HCV. J Org Chem 2011; 76: 3782-3790; Lam AM, Espiritu C, Murakami E, Zennou V, Bansal S, Micolochick Steuer HM, Niu C, Keilman M, Bao H, Bourne N, Veselenak RL, Reddy PG, Chang W, Du J, Nagarathnam D, Sofia MJ, Otto MJ, Furman PA. Inhibition of hepatitis C virus replicon RNA synthesis by PSI-352938, a cyclic phosphate prodrug of D-2-deoxy-2-fluoro-2-C-methylguanosine. Antimicrob Agents Chemother 2011; 55: 2566-2575] use the same principle of action, but are focused on other enzyme groups of herpes viruses. However, it turned out that some chemotherapeutic drugs have strong side effects and unsatisfactory pharmacokinetic properties, which limits the indications and / or the possibility of their use either by age or by clinical criteria.

Производные пиримидиндиспиротрипиперазиния (4,6-ди(3,12-диаза-6,9-диазониадиспиро[5.2.5.2]гексадекан-1-ил)-2-метил-5-нитропиримидин тетрахлорид дигидрохлорид гексагидрат), обнаруженные в результате работ по мишень-направленному поиску новых лекарственных препаратов, обладают способностью специфически блокировать гепарансульфат (HS) содержащие рецепторы на клеточной стенке и таким образом предотвращать адсорбцию вирусов к клеткам хозяина. Наиболее известными патогенными вирусами, использующими такой механизм адсорбции к клеточной стенке, являются вирусы герпеса 1 и 2 типа, папилломы вируса, цитомегаловируса, некоторые разновидности ВИЧ, респираторный синцитиальный вирус и другие.Derivatives of pyrimidinedispirotipiperazinium (4,6-di (3,12-diaza-6,9-diazoniadispiro [5.2.5.2] hexadecan-1-yl) -2-methyl-5-nitropyrimidine tetrachloride dihydrochloride hexahydrate) detected as a result of target -directional search for new drugs, have the ability to specifically block heparan sulfate (HS) containing receptors on the cell wall and thus prevent the adsorption of viruses to host cells. The most famous pathogenic viruses using such a mechanism of adsorption to the cell wall are herpes viruses type 1 and 2, papillomas of the virus, cytomegalovirus, some types of HIV, respiratory syncytial virus and others.

Механизм действия производных диазониадиспиро[5.2.5.2]гексадеканов был изучен на примере вируса герпеса 1-го типа (HSV-1) и клеток почек зеленых обезьян, и доказано, что он связан со специфическим свойством соединений связываться с HS, что приводит к драматическому уменьшению числа репликаций вируса. Показано, что присоединение исследуемых веществ антагонизируется гепарином. Мишенью диазониадиспиро[5.2.5.2]гексадеканов являются две сульфатные группы, расположенные в соседних сахаридных остатках, так, например, для GlcA2S-GlcNS6S, GlcA2S-GlcNS3S, IdoA2S-GIcNAc6S, IdoA2S-GlcNH23SS6S, IdoA2S-GlcNS6S и IdoA2SGlcNS3S наблюдается хорошее электростатическое взаимодействие между отрицательным зарядом на сульфатной группе и положительно заряженными атомами азота 4,6-ди(3,12-диаза-6,9-диазониадиспиро[5.2.5.2]гексадекан-1-ил)-2-метил-5-нитропиримидин тетрахлорид дигидрохлорид гексагидрат. Также показано, что аналогичного рода взаимодействие может происходить и с карбонильной группой октасахарида ΔUA-GlcNSldoUA2S-GlcNAc-UA2S-GlcNS-IdoUA2S-GlcNH23S, являющейся необходимым участком HS для проникновения HSV-1 в клетку хозяина. Таким образом, диазониадиспиро[5.2.5.2]гексадеканы блокируют ключевые функциональные группы HS, предотвращая репликацию вируса, обеспечивая высокую противовирусную активность [Schmidtke М., Riabova О., Dahse Н.-М., Stelzner A., Makarov V., Synthesis, Cytotoxicity and Antiviral Activity of N,N′-bis-5-nitropyrimidyl Derivatives of Dispirotripiperazine, Antiviral Research, 2002, 55, 117-127; Schmidtke M., Karger A., Meerbach A., Egerer R., Stelzner A., Makarov V., Binding of a N,N′-bisheteryl derivative of dispirotripiperazine to heparan sulfate residues on the cell surface specifically prevents infection of viruses from different families, Virology, 2003, V. 311, p. 134-143; Schmidtke, M., Wutzler, P., Makarov, V. Novel opportunities to study and block interactions between viruses and cell surface heparan sulfates, Lett. Drug Design Discov., 2004, 1, p. 293-300].The mechanism of action of diazoniadispiro [5.2.5.2] hexadecane derivatives was studied using the herpes type 1 virus (HSV-1) and green monkey kidney cells as an example, and it was proved to be associated with the specific property of the compounds to bind to HS, which leads to a dramatic decrease virus replication counts. It has been shown that the addition of the test substances is antagonized by heparin. The target of diazoniadispiro [5.2.5.2] hexadecanes is two sulfate groups located in neighboring saccharide residues, for example, for GlcA2S-GlcNS6S, GlcA2S-GlcNS3S, IdoA2S-GIcNAc6S, IdoA2S-GlcNDSNS2S2S2S2S2S2S2S2S2S2S2S2S2 negative charge on the sulfate group and positively charged nitrogen atoms of 4,6-di (3,12-diaza-6,9-diazoniadispiro [5.2.5.2] hexadecan-1-yl) -2-methyl-5-nitropyrimidine tetrachloride dihydrochloride hexahydrate. It was also shown that a similar kind of interaction can occur with the carbonyl group of the ΔUA-GlcNSldoUA2S-GlcNAc-UA2S-GlcNS-IdoUA2S-GlcNH23S octasaccharide, which is the necessary HS site for HSV-1 to enter the host cell. Thus, diazoniadispiro [5.2.5.2] hexadecans block the key functional groups of HS, preventing the replication of the virus, providing high antiviral activity [Schmidtke M., Riabova O., Dahse N.-M., Stelzner A., Makarov V., Synthesis, Cytotoxicity and Antiviral Activity of N, N′-bis-5-nitropyrimidyl Derivatives of Dispirotripiperazrazine, Antiviral Research, 2002, 55, 117-127; Schmidtke M., Karger A., Meerbach A., Egerer R., Stelzner A., Makarov V., Binding of a N, N′-bisheteryl derivative of dispirotripiperazine to heparan sulfate residues on the cell surface specifically prevents infection of viruses from different families, Virology, 2003, V. 311, p. 134-143; Schmidtke, M., Wutzler, P., Makarov, V. Novel opportunities to study and block interactions between viruses and cell surface heparan sulfates, Lett. Drug Design Discov., 2004, 1, p. 293-300].

При системном, в основном пероральном введении противогерпетического агента для лечения требуется продолжительное лечение, а также введение высоких доз (до 1000 мг/сут) противовирусного агента. Недостаток местных лекарственных форм, таких как гели, кремы, растворы, лосьоны, лаки и т.п., заключается в том, что фармацевтически активный агент находится в недостаточно близком контакте с пораженном участком. Правильное проведение комплексного лечения с применением противовирусных препаратов, различающихся по механизму и спектру действия, является одной из важнейших задач, связанной с герпетической патологией человека.With systemic, mainly oral administration of an antiherpetic agent, long-term treatment is required for treatment, as well as the administration of high doses (up to 1000 mg / day) of an antiviral agent. The disadvantage of local dosage forms, such as gels, creams, solutions, lotions, varnishes, etc., is that the pharmaceutically active agent is not in close contact with the affected area. The correct conduct of complex treatment with the use of antiviral drugs that differ in the mechanism and spectrum of action is one of the most important tasks associated with herpetic human pathology.

Задача настоящего изобретения состояла в изыскании лекарственной формы, содержащей 4,6-ди(3,12-диаза-6,9-диазониадиспиро-[5.2.5.2]гексадекан-1-ил)-2-метил-5-нитропиримидин тетрахлорид дигидрохлорид гексагидрат, которая бы обладала высокой активностью в отношении герпетической инфекции, в том числе к штаммам, резистентным к существующим в настоящее время лекарственным препаратам. Результатом решения данной задачи явилась разработка крема, содержащего 4,6-ди(3,12-диаза-6,9-диазониадиспиро[5.2.5.2]гексадекан-1-ил)-2-метил-5-нитропиримидин тетрахлорид дигидрохлорид гексагидрат, обладающего противогерптической активностью.The objective of the present invention was to find a dosage form containing 4,6-di (3,12-diaza-6,9-diazoniadispiro [5.2.5.2] hexadecan-1-yl) -2-methyl-5-nitropyrimidine tetrachloride dihydrochloride hexahydrate , which would have high activity against herpes infection, including strains resistant to currently existing drugs. The result of solving this problem was the development of a cream containing 4,6-di (3,12-diaza-6,9-diazoniadispiro [5.2.5.2] hexadecan-1-yl) -2-methyl-5-nitropyrimidine tetrachloride dihydrochloride hexahydrate, which has antiherpetic activity.

Указанная задача и результат достигаются за счет использования фармацевтической композиции для лечения герпес-вирусной инфекции в виде крема, содержащей в качестве активного вещества 4,6-ди(3,12-диаза-6,9-диазониадиспиро[5.2.5.2]гексадекан-1-ил)-2-метил-5-нитропиримидин тетрахлорид дигидрохлорид гексагидрата от 0,5 до 10,0%. Другой вариант предусматривает, что заявлена фармацевтическая композиция для лечения герпес-вирусной инфекции в виде геля, содержащая в качестве активного вещества 4,6-ди(3,12-диаза-6,9-диазониадиспиро[5.2.5.2]гексадекан-1-ил)-2-метил-5-нитропиримидин тетрахлорид дигидрохлорид гексагидрата от 0,5 до 10,0%. Также заявлено применение фармацевтической композиции в виде вышеуказанного крема, согласно которому крем обладает противогерпесной активностью в отношении штаммов ВПГ-1 и ВПГ-2, в том числе резистентных к существующим в настоящее время лекарственным препаратам.This task and result are achieved through the use of a pharmaceutical composition for the treatment of herpes virus infection in the form of a cream containing 4,6-di (3,12-diaza-6,9-diazoniadispiro [5.2.5.2] hexadecane-1 as an active substance -yl) -2-methyl-5-nitropyrimidine tetrachloride dihydrochloride hexahydrate from 0.5 to 10.0%. Another option provides that the claimed pharmaceutical composition for the treatment of herpes virus infection in the form of a gel containing 4,6-di (3,12-diaza-6,9-diazoniadispiro [5.2.5.2] hexadecan-1-yl as the active substance ) -2-methyl-5-nitropyrimidine tetrachloride dihydrochloride hexahydrate from 0.5 to 10.0%. The claimed use of a pharmaceutical composition in the form of the above cream, according to which the cream has anti-herpes activity against strains of HSV-1 and HSV-2, including those resistant to currently existing drugs.

Также заявлен способ лечения или предупреждения герпетической инфекции у человека или животного, включающий местное введение пациенту фармацевтической композиции по п. 1 и/или п. 2 в эффективном количестве.Also claimed is a method of treating or preventing a herpes infection in a human or animal, comprising topically administering to a patient a pharmaceutical composition according to claim 1 and / or claim 2 in an effective amount.

Введение 4,6-ди(3,12-диаза-6,9-диазониадиспиро[5.2.5.2]гексадекан-1-ил)-2-метил-5-нитропиримидин тетрахлорид дигидрохлорид гексагидрата в виде фармацевтической композиции или лекарственного средства на его основе при лечении или профилактике людей или животных может осуществляться обычными методами в виде форм, пригодных для наружного применения, например в форме мазей, кремов, паст, лосьонов и линиментов, помещенных в упаковку, или пластырей.Administration of 4,6-di (3,12-diaza-6,9-diazoniadispiro [5.2.5.2] hexadecan-1-yl) -2-methyl-5-nitropyrimidine tetrachloride dihydrochloride hexahydrate in the form of a pharmaceutical composition or a medicine based on it in the treatment or prophylaxis of humans or animals, it can be carried out by conventional methods in the form of forms suitable for external use, for example in the form of ointments, creams, pastes, lotions and linimentes placed in a package, or plasters.

В качестве фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ в составе фармацевтической композиции согласно изобретению могут быть использованы любые фармацевтически приемлемые компоненты, которые совместимы с активным ингредиентом, не наносят вреда пациентам и традиционно используются для приготовления лекарственных форм. К ним относятся, например, наполнители, связующие агенты, пластифицирующие агенты, такие как камфора, трифенилфосфат или пентанил диизобутират, диизобутилфталат и др., пигменты, солюбилизирующие агенты, стабилизаторы, разбавители, адъюванты, консерванты, компоненты буферных систем, растворители, диспергирующие агенты, консерванты, загустители, пищевые красители, эмульгаторы, пленкообразующие вещества, такие как гидроксиэтил или пропилцеллюлоза, гидроксипропилхитозан, пролонгаторы, вещества, способствующие улучшению проникновения лекарственного средства, например бензиловый спирт, и др. Фармацевтически приемлемыми вспомогательными веществами являются, например, гуммиарабик, поливинилпирролидон, поливиниловый спирт, альгиновая кислота, альгинат натрия, безводная кремниевая кислота, стеарат магния, тальк, карбоксивиниловый полимер, оксид титана, эфир жирной кислоты и сорбита, натрия лаурилсульфат, глицерин, глицериновый эфир жирной кислоты, ланолин, глицерожелатин, полисорбат, макрогол, растительное масло, воск, парафины, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, вода, этанол, полиспирты, полиоксиэтиленгидрированное касторовое масло, хлорид натрия, гидроксид натрия, соляная кислота, двухосновный фосфат натрия, моноосновный фосфат натрия, лимонная кислота, глутаминовая кислота, бензиловый спирт, метил п-оксибензоат, этил п-оксибензоат и др.As pharmaceutically acceptable excipients in the pharmaceutical composition according to the invention, any pharmaceutically acceptable components that are compatible with the active ingredient can be used, do not harm patients and are traditionally used for the preparation of dosage forms. These include, for example, fillers, binders, plasticizing agents such as camphor, triphenyl phosphate or pentanyl diisobutyrate, diisobutyl phthalate, etc., pigments, solubilizing agents, stabilizers, diluents, adjuvants, preservatives, components of buffer systems, solvents, dispersing agents, preservatives, thickeners, food coloring, emulsifiers, film-forming substances, such as hydroxyethyl or propyl cellulose, hydroxypropylchitosan, prolongators, substances that improve the penetration of drugs a pharmaceutical agent, for example benzyl alcohol, etc. Pharmaceutically acceptable excipients are, for example, gum arabic, polyvinyl pyrrolidone, polyvinyl alcohol, alginic acid, sodium alginate, anhydrous silicic acid, magnesium stearate, talc, carboxyvinyl polymer, titanium oxide and ether fat sorbitol, sodium lauryl sulfate, glycerin, glycerol fatty acid ester, lanolin, glycerol gelatin, polysorbate, macrogol, vegetable oil, wax, paraffins, propylene glycol, polyethylene glycol, water, this nol, polyalcohols, polyoxyethylene hydrogenated castor oil, sodium chloride, sodium hydroxide, hydrochloric acid, dibasic sodium phosphate, monobasic sodium phosphate, citric acid, glutamic acid, benzyl alcohol, methyl p-hydroxybenzoate, ethyl p-hydroxybenzoate, etc.

Композиция для местного применения может также содержать в качестве вспомогательного вещества растительное масло, такое как масло жожоба, оливковое масло, подсолнечное масло, соевое масло, арахисовое масло, рапсовое масло, миндальное масло, пальмовое масло, кокосовое масло или косточковое пальмовое масло. Композиция может содержать в качестве эмульгаторов, например, глицерин, возможно, в смеси в смеси с лауратами сахарозы или сорбитол, эмульгатор М/В (масло/вода), например гидролизат растительного белка.The topical composition may also contain as an adjuvant vegetable oil such as jojoba oil, olive oil, sunflower oil, soybean oil, peanut oil, rapeseed oil, almond oil, palm oil, coconut oil or palm kernel oil. The composition may contain as emulsifiers, for example, glycerin, possibly mixed with sucrose laurates or sorbitol, an M / B emulsifier (oil / water), for example, a vegetable protein hydrolyzate.

Композиция может быть использована также в форме линимента (лат. linimentum) - густой или студнеобразной лекарственной формы для наружного применения, которая втирается в кожу. В качестве вспомогательных веществ линимент может содержать, например, пропиленгликоли, бензалкония хлорид. Эмульсионные жирные линименты могут иметь структуру эмульсий типа "масло в воде" или "вода в масле". Эмульсионные линименты, так же как суспензионные, нуждаются в стабилизации, которую можно повысить с помощью эмульгатора, например эмульгатора Т-2 (эмульгатор Т-2 представляет собой сложные эфиры жирной кислоты и полимера глицерина), Твина 80 и других ПАВ. В некоторых случаях эмульгаторы могут образовываться в результате взаимодействия ингредиентов, входящих в состав линимента.The composition can also be used in the form of liniment (lat. Linimentum) - a thick or gelatinous dosage form for external use, which is rubbed into the skin. As auxiliary substances, liniment may contain, for example, propylene glycols, benzalkonium chloride. Emulsion fat liniments may have an oil-in-water or water-in-oil emulsion structure. Emulsion liniments, as well as suspension ones, need stabilization, which can be increased with an emulsifier, for example, T-2 emulsifier (T-2 emulsifier is a fatty acid ester of glycerol polymer), Tween 80 and other surfactants. In some cases, emulsifiers can be formed as a result of the interaction of the ingredients that make up the liniment.

Фармацевтически приемлемыми вспомогательными веществами при получении фармацевтической композиции для наружного применения являются, например, природные или отверженные масла, например масло какао, воска, жиры, эфир глицерина и насыщенной жирной кислоты, глицерожелатин, макрогол, полужидкие или жидкие полиолы, триглицериды и др. Основа фармацевтической композиции для наружного применения может включать также поверхностно-активное вещество или стабилизатор.Pharmaceutically acceptable excipients for the preparation of a pharmaceutical composition for external use are, for example, natural or rejected oils, for example cocoa butter, waxes, fats, glycerol and saturated fatty acid esters, glycerogelatin, macrogol, semi-liquid or liquid polyols, triglycerides, etc. Pharmaceutical base compositions for external use may also include a surfactant or stabilizer.

Краткое описание чертежейBrief Description of the Drawings

На Фиг. 1 показано течение экспериментальной герпесрирусной инфекции у морских свинок на фоне лечения кремом при местном применении.In FIG. Figure 1 shows the course of an experimental herpes simplex infection in guinea pigs during topical cream treatment.

На Фиг. 2 показано течение экспериментальной герпес-вирусной инфекции у морских свинок на фоне лечения препаратом в виде геля при местном применении.In FIG. Figure 2 shows the course of experimental herpes virus infection in guinea pigs during treatment with a gel preparation for topical application.

Осуществление изобретенияThe implementation of the invention

Соединение 4,6-ди(3,12-диаза-6,9-диазониадиспиро[5.2.5.2]гексадекан-1-ил)-2-метил-5-нитропиримидин тетрахлорид дигидрохлорид гексагидрат может быть получено в соответствии со следующим протоколом синтеза.The compound 4,6-di (3,12-diaza-6,9-diazoniadispiro [5.2.5.2] hexadecan-1-yl) -2-methyl-5-nitropyrimidine tetrachloride dihydrochloride hexahydrate can be prepared according to the following synthesis protocol.

Получение гидрохлорида N-бензоилпиперазинаObtaining N-benzoylpiperazine hydrochloride

К 10 г (0,116 моль) безводного пиперазина добавляют 45 мл уксусной кислоты при охлаждении и интенсивном перемешивании. Затем добавляют 20 мл ацетона и 20 мл воды. Через 20 мин перемешивания добавляют 6,7 мл (0,058 моль) хлористого бензоила. Раствор перемешивают 3 ч. Затем реакционную массу упаривают на половину. Добавляют 450 мл 40% раствора NaOH. Выпавший осадок отфильтровывают, водный маточный раствор экстрагируют хлороформом 3 раза по 100 мл. Высушивают. Упаривают досуха. Получают 13,4 г желтого масла, содержащего около 60% основного вещества.45 ml of acetic acid are added to 10 g (0.116 mol) of anhydrous piperazine under cooling and vigorous stirring. Then add 20 ml of acetone and 20 ml of water. After 20 minutes of stirring, 6.7 ml (0.058 mol) of benzoyl chloride are added. The solution was stirred for 3 hours. Then the reaction mass was evaporated by half. 450 ml of a 40% NaOH solution are added. The precipitate formed is filtered off, the aqueous mother liquor is extracted with chloroform 3 times, 100 ml each. Dried. It is evaporated to dryness. 13.4 g of a yellow oil are obtained containing about 60% of the basic substance.

Полученное масло растворяют в 5 мл воды, раствор нагревают до 45°C и при перемешивании добавляют 0,78 мл формалина порциями по 0,25 мл через каждые 10 мин. После прибавления формалина перемешивают 40 мин при 55°C. Охлаждают до 7°C и выдерживают при этой температуре 1,5 часа. Осадок отфильтровывают и промывают водой 3 раза. Сушат при 80°C 15 часов. Получают 6,7 г метилен-бис-4(1-бензоилпиперазина). Перед следующей стадией продукт измельчают. Т_пл=125-127°C.The resulting oil is dissolved in 5 ml of water, the solution is heated to 45 ° C and 0.78 ml of formalin is added in 0.25 ml portions every 10 minutes with stirring. After the addition of formalin was stirred for 40 min at 55 ° C. It is cooled to 7 ° C and maintained at this temperature for 1.5 hours. The precipitate is filtered off and washed with water 3 times. Dried at 80 ° C for 15 hours. 6.7 g of methylene bis-4 (1-benzoylpiperazine) are obtained. Before the next step, the product is ground. _Mp = 125-127 ° C.

К суспензии 6,6 г измельченного метилен-бис-4(1-бензоилпиперазина) в 35 мл этилового спирта при интенсивном перемешивании и охлаждении до 10-15°C прикапывают 12% спиртовой раствор хлористого водорода до рН=1-2. Далее выдерживают реакционную массу 3 часа при 10°C. Осадок отфильтровывают и промывают этиловым спиртом по 50 мл 4 раза. Сушат при 80°C 10 часов. Получают 5,9 г продукта. Т_пл=274°C с разложением. Получение гидрохлорида N-бензоил-N′-(2-оксиэтил)пиперазина.To a suspension of 6.6 g of crushed methylene bis-4 (1-benzoylpiperazine) in 35 ml of ethyl alcohol, with intensive stirring and cooling to 10-15 ° C, a 12% alcohol solution of hydrogen chloride was added dropwise to pH = 1-2. Then stand the reaction mass for 3 hours at 10 ° C. The precipitate is filtered off and washed with 50 ml of ethanol 4 times. Dried at 80 ° C for 10 hours. 5.9 g of product are obtained. _Mp = 274 ° C with decomposition. Preparation of N-benzoyl-N ′ - (2-hydroxyethyl) piperazine hydrochloride.

К раствору КОН (0,024 моль) в 14 мл этилового спирта добавляют при перемешивании гидрохлорид N-бензоилпиперазина (0,02 моль) и перемешивают 1 час. В полученную суспензию прибавляют этиленхлоргидрин (0,05 моль) и начинают прикапывать раствор КОН (0,052 моль) в 25 мл этилового спирта. При этом температуру в реакционной массе поддерживают не более 20°C. После прибавления раствора КОН реакционную массу перемешивают 20 часов. Отфильтровывают KCl, к маточному раствору добавляют 12% спиртовой раствор хлористого водорода до рН=1-2 и охлаждают при -5°C в течение 5 часов. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают этиловым спиртом. Сушат при 50°C 5 часов. Выход продукта составляет 70%. Т_пл=207-210°C.To a solution of KOH (0.024 mol) in 14 ml of ethyl alcohol, N-benzoylpiperazine hydrochloride (0.02 mol) was added with stirring and stirred for 1 hour. Ethylene chlorohydrin (0.05 mol) is added to the resulting suspension and a solution of KOH (0.052 mol) in 25 ml of ethanol is added dropwise. In this case, the temperature in the reaction mass is maintained no more than 20 ° C. After adding a solution of KOH, the reaction mass is stirred for 20 hours. KCl is filtered off, a 12% alcoholic solution of hydrogen chloride is added to the mother liquor to pH = 1-2 and cooled at -5 ° C for 5 hours. The precipitate formed is filtered off and washed with ethyl alcohol. Dried at 50 ° C for 5 hours. The product yield is 70%. _Mp = 207-210 ° C.

Получение гидрохлорида N-бензоил-N′-(2-хлорэтил)пиперазинаObtaining N-benzoyl-N ′ - (2-chloroethyl) piperazine hydrochloride

К суспензии гидрохлорида N-бензоил-N′-(2-оксиэтил)пиперазина (0,013 моль) в 22 мл хлороформа при перемешивании прикапывают тионилхлорид (0,028 моль) и медленно нагревают. Выдерживают 30 мин при 45°C, 30 мин при 45°C и 3 часа при 70°C. При этом выпадает осадок сначала в виде масла, а затем затвердевает в кристаллическую массу. Реакционную массу охлаждают до 6-8°C и перемешивают при этой температуре 1 час. Осадок отфильтровывают, промывают хлороформом 3 раза по 10 мл. Сушат при 70°C 10 часов. Выход продукта 72%. Т_пл=226-227°C.To a suspension of N-benzoyl-N ′ - (2-hydroxyethyl) piperazine hydrochloride (0.013 mol) in 22 ml of chloroform, thionyl chloride (0.028 mol) is added dropwise with stirring and slowly heated. Stand 30 minutes at 45 ° C, 30 minutes at 45 ° C and 3 hours at 70 ° C. This precipitates first in the form of oil, and then solidifies into a crystalline mass. The reaction mass is cooled to 6-8 ° C and stirred at this temperature for 1 hour. The precipitate is filtered off, washed with chloroform 3 times in 10 ml. Dried at 70 ° C for 10 hours. Product yield 72%. _Mp = 226-227 ° C.

Получение дигидрохлорида N,N-дибензоила-N′,N′′-диспиротрипиперазинияObtaining dihydrochloride N, N-dibenzoyl-N ′, N ′ ′ - dispirotripiperazinia

К раствору NaOH (0,017 моль) в 25 мл этилового спирта прибавляют гидрохлорид N-бензоил-N′-(2-оксиэтил)пиперазина (0,0156 моль). Перемешивают суспензию 1,5 часа. NaCl отфильтровывают. Маточный спиртовой раствор кипятят 1 час. Затем упаривают и сухой остаток нагревают на масляной бане 10 часов. Температура бани 120°C. Охлаждают до комнатной температуры, добавляют этиловый спирт и осадок отфильтровывают. Промывают этиловым спиртом. Сушат при 100°C 3 часа. Выход продукта 60%. Т_пл более 300°C с разложением.N-benzoyl-N ′ - (2-hydroxyethyl) piperazine hydrochloride (0.0156 mol) is added to a solution of NaOH (0.017 mol) in 25 ml of ethyl alcohol. Stir the suspension for 1.5 hours. NaCl is filtered off. The mother liquor is boiled for 1 hour. Then it is evaporated and the dry residue is heated in an oil bath for 10 hours. The temperature of the bath is 120 ° C. It is cooled to room temperature, ethyl alcohol is added and the precipitate is filtered off. Washed with ethyl alcohol. Dried at 100 ° C for 3 hours. Product yield 60%. _Mp over 300 ° C with decomposition.

Получение 3,12-диаза-6,9-диазониадиспиро[5.2.5.2]гексадекана дихлорида дигидрохлоридаPreparation of 3,12-diaza-6,9-diazoniadispiro [5.2.5.2] hexadecane dichloride dihydrochloride

Смесь дигидрохлорида N,N′′′-дибензоила-N′,N′′-диспиротрипиперазиния (0,002 моль) и 7 мл 10% соляной кислоты кипятят 4 часа. Охлаждают до 15°C и отфильтровывают бензойную кислоту, промывают водой. Маточный раствор упаривают досуха, добавляют метиловый спирт. Осадок отфильтровывают и промывают метанолом. Сушат при 90°C 5 часов. Выход продукта 85%. Т_пл более 300°C с разложением.A mixture of dihydrochloride N, N ″ ″ - dibenzoyl-N ’, N ″ - dispirotripiperazinia (0.002 mol) and 7 ml of 10% hydrochloric acid are boiled for 4 hours. It is cooled to 15 ° C and the benzoic acid is filtered off, washed with water. The mother liquor is evaporated to dryness, methyl alcohol is added. The precipitate was filtered off and washed with methanol. Dried at 90 ° C for 5 hours. Product yield 85%. _Mp over 300 ° C with decomposition.

Получение 3,12-диаза-6,9-диазониадиспиро[5.2.5.2]гексадекана дихлоридаPreparation of 3,12-diaza-6,9-diazoniadispiro [5.2.5.2] hexadecane dichloride

К суспензии 3,12-диаза-6,9-диазониадиспиро[5.2.5.2]гексадекана дихлорида дигидрохлорида (0,0017 моль) в 3 мл воды добавляют LiOH (0,0033 моль). При этом контролируют рН=8,5-9. Через 30 мин в реакционную массу добавляют активированный уголь, перемешивают 20 мин. Отфильтровывают уголь, к фильтрату добавляют 25 мл метилового спирта и оставляют на 16 часов при 5-10°C. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают метанолом и сушат при 90°C 3 часа. Выход составляет 90%. Т_пл более 320°C с разложением.To a suspension of 3,12-diaza-6,9-diazoniadispiro [5.2.5.2] hexadecane dihydrochloride dichloride (0.0017 mol) in 3 ml of water, LiOH (0.0033 mol) is added. At the same time control pH = 8.5-9. After 30 minutes, activated carbon is added to the reaction mass, and stirred for 20 minutes. Charcoal is filtered off, 25 ml of methyl alcohol are added to the filtrate and left for 16 hours at 5-10 ° C. The precipitate formed is filtered off, washed with methanol and dried at 90 ° C for 3 hours. The yield is 90%. _Mp over 320 ° C with decomposition.

Получение 4,6-ди(3,12-диаза-6,9-диазониадиспиро[5.2.5.2]гексадекан-1-ил)-2-метил-5-нитропиримидин тетрахлорид дигидрохлоридаPreparation of 4,6-di (3,12-diaza-6,9-diazoniadispiro [5.2.5.2] hexadecan-1-yl) -2-methyl-5-nitropyrimidine dihydrochloride tetrachloride

К раствору 4,6-дихлоро-2-метил-5-нитропиримидина (0,12 моль) в 940 мл этилового спирта добавляют раствор 3,12-диаза-6,9-диазониадиспиро[5.2.5.2]гексадекана дихлорида (0,24 моль) в 220 мл воды при интенсивном перемешивании. Суспензию нагревают 4 часа при 70°C. Охлаждают до комнатной температуры, осадок отфильтровывают, промывают этиловым спиртом. Сушат при 110°C 18 часов и затем на воздухе 4 суток. Выход 4,6-ди(3,12-диаза-6,9-диазониадиспиро[5.2.5.2]гексадекан-1-ил)-2-метил-5-нитропиримидин тетрахлорид дигидрохлорида 87%.To a solution of 4,6-dichloro-2-methyl-5-nitropyrimidine (0.12 mol) in 940 ml of ethyl alcohol is added a solution of 3,12-diaza-6,9-diazoniadispiro [5.2.5.2] hexadecane dichloride (0.24 mol) in 220 ml of water with vigorous stirring. The suspension is heated for 4 hours at 70 ° C. It is cooled to room temperature, the precipitate is filtered off, washed with ethanol. It is dried at 110 ° C for 18 hours and then in air for 4 days. The yield of 4,6-di (3,12-diaza-6,9-diazoniadispiro [5.2.5.2] hexadecan-1-yl) -2-methyl-5-nitropyrimidine dihydrochloride tetrachloride is 87%.

Т_пл=216-220°C с разложением. _Mp = 216-220 ° C with decomposition.

MS (m/z): 694 (М+) C₂₉H₅₃Cl₃N₁₁O₂ (М+)MS (m / z): 694 (M +) C ₂₉ H ₅₃ Cl ₃ N ₁₁ O ₂ (M +)

Микроэлементный анализ, %Microelement analysis,%

Рассчитано: C₂₉H₆₇Cl₆N₁₁O₈: С, 38.25; Н, 7.42; Cl 23.36; N, 16.92Calculated: C ₂₉ H ₆₇ Cl ₆ N ₁₁ O ₈ : C, 38.25; H, 7.42; Cl 23.36; N, 16.92

Найдено: С, 38.44; Н, 7.38; Cl 22.98; N, 16.78Found: C, 38.44; H, 7.38; Cl 22.98; N, 16.78

Анализ воды по ФишеруFisher water analysis

Рассчитано: 11.86%Calculated: 11.86%

Найдено: 11.72%Found: 11.72%

Примеры получения фармацевтических композиций в виде различных форм, пригодных для использования в качестве наружного лекарственного средства и содержащих 4,6-ди(3,12-диаза-6,9-диазониадиспиро[5.2.5.2]-гексадекан-1-ил)-2-метил-5-нитропиримидин тетрахлорид дигидрохлоридExamples of the preparation of pharmaceutical compositions in the form of various forms suitable for use as an external medicine and containing 4,6-di (3,12-diaza-6,9-diazoniadispiro [5.2.5.2] -hexadecan-1-yl) -2 methyl 5-nitropyrimidine tetrachloride dihydrochloride

Пример 1. Приготовление фармацевтической композиции в форме кремаExample 1. Preparation of a pharmaceutical composition in the form of a cream

Активное вещество 4,6-ди(3,12-диаза-6,9-диазониадиспиро[5.2.5.2]гексадекан-1-ил)-2-метил-5-нитропиримидин тетрахлорид дигидрохлорид гексагидратActive ingredient 4,6-di (3,12-diaza-6,9-diazoniadispiro [5.2.5.2] hexadecan-1-yl) -2-methyl-5-nitropyrimidine tetrachloride dihydrochloride hexahydrate 10,0 г10.0 g ВазелинPetroleum jelly 10,0 г10.0 g Полоксамер (Эмуксол 268)Poloxamer (Emuxol 268) 8,0 г8.0 g Воск эмульсионныйEmulsion Wax 3,0 г3.0 g Сорбитан моностеарат (Спан-60)Sorbitan Monostearate (Span-60) 0,5 г0.5 g Сорбиновая кислотаSorbic acid 0,125 г0.125 g Вода очищеннаяPurified water до 100,0 млup to 100.0 ml

Растворяют активное вещество, полоксамер и сорбиновую кислоту в 50 мл воды, при энергичном перемешивании добавляют воск эмульсионный и сорбитан моностеарат, затем выдерживают. Получают крем, который далее может быть использован в качестве противовирусного средства.The active substance, poloxamer and sorbic acid are dissolved in 50 ml of water, emulsion wax and sorbitan monostearate are added with vigorous stirring, then they are kept. A cream is obtained, which can then be used as an antiviral agent.

Пример 2. Фармацевтическая композиция в виде геляExample 2. The pharmaceutical composition in the form of a gel

Соединение 4,6-ди(3,12-диаза-6,9-диазониадиспиро[5.2.5.2]гексадекан-1-ил)-2-метил-5-нитропиримидин тетрахлорид дигидрохлорид гексагидратCompound 4,6-di (3,12-diaza-6,9-diazoniadispiro [5.2.5.2] hexadecan-1-yl) -2-methyl-5-nitropyrimidine tetrachloride dihydrochloride hexahydrate 10,0 г10.0 g Метилцеллюлоза-35Cellulose-35 7,5 г7.5 g Сорбиновая кислотаSorbic acid 0,150 г0.150 g ВодаWater до 100,0 гup to 100.0 g

В 50 мл воды растворяют действующее вещество, добавляют метилцеллулозу-35 и сорбиновую кислоту и при энергичном перемешивании добавляют оставшуюся воду и затем выдерживают для разбухания. Получают гель, который далее может быть использован в качестве противовирусного средства.The active substance is dissolved in 50 ml of water, methylcellulose-35 and sorbic acid are added and the remaining water is added with vigorous stirring and then allowed to swell. Get a gel, which can then be used as an antiviral agent.

Пример 3. Приготовление фармацевтической композиции в форме мазиExample 3. Preparation of a pharmaceutical composition in the form of an ointment

Мазь может быть изготовлена следующим образом: 0,5-3% вес. от общей массы активного вещества расплавляют в небольшом количестве мазевой, кремовой или свечной основе. Получившийся расплав тщательно перемешивают с необходимым количеством основы, разогретой до (35-80)°C. Полученную смесь гомогенизируют. Готовую смесь в растопленном состоянии разливают в тубы.Ointment can be made as follows: 0.5-3% weight. from the total mass of the active substance is melted in a small amount of ointment, cream or candle base. The resulting melt is thoroughly mixed with the required amount of base, heated to (35-80) ° C. The resulting mixture is homogenized. The melted mixture is poured into tubes.

Пример 4. Приготовление фармацевтической композиции в форме линиментаExample 4. Preparation of a pharmaceutical composition in the form of liniment

Линимент получают в виде 5% прозрачной жидкости желтого цвета, со слабым специфическим запахом, содержащей: 1-2 мг активного соединении формулы (I), 50 мг бензалкония хлорида и 1,2-пропиленгликоля. Пропиленгликоль используется в качестве увлажнителя.Liniment is obtained in the form of a 5% transparent yellow liquid with a faint specific odor, containing: 1-2 mg of the active compound of formula (I), 50 mg of benzalkonium chloride and 1,2-propylene glycol. Propylene glycol is used as a moisturizer.

Пример 5. Фармацевтическая композиция в виде жирного эмульсионного линиментаExample 5. The pharmaceutical composition in the form of a fat emulsion liniment

3 г активного вещества, кремния диоксид коллоидный (аэросил) 5 г, касторовое масло 89 г. Возможно добавление эмульгатора, например эмульгатора Т-2 или Твина 80.3 g of active substance, colloidal silicon dioxide (Aerosil) 5 g, castor oil 89 g. It is possible to add an emulsifier, for example T-2 or Tween 80 emulsifier.

Описание противовирусной активности крема по изобретениюDescription of antiviral activity of the cream of the invention

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫMATERIALS AND METHODS

Изучаемые препаратыStudy drugs

В исследованиях использованы 10% крем (Пример А) и 10% гель (Пример Б), приготовленные на основе субстанции соединения 4,6-ди(3,12-диаза-6,9-диазониадиспиро[5.2.5.2]гексадекан-1-ил)-2-метил-5-нитропиримидин тетрахлорид дигидрохлорид гексагидрат, далее субстанции.In the studies, 10% cream (Example A) and 10% gel (Example B) were used, prepared on the basis of the substance of the compound 4,6-di (3,12-diaza-6,9-diazoniadispiro [5.2.5.2] hexadecane-1- il) -2-methyl-5-nitropyrimidine tetrachloride dihydrochloride hexahydrate, further substances.

В качестве препарата сравнения использовали ацикловир (9-(2-гидроксиэтоксиметил) гуанин) - препарат в форме крема для наружного применения Зовиракс, содержащий 5% ацикловира (GlaxoSmithKline, «ГлаксоСмитКляйн Консьюмер Хелскер», Великобритания). В качестве плацебо в опытах с морскими свинками использовали крем и гель такого же состава без субстанции активного вещества.Acyclovir (9- (2-hydroxyethoxymethyl) guanine), a topical cream preparation Zovirax containing 5% acyclovir (GlaxoSmithKline, GlaxoSmithKline Consumer Helsker, Great Britain) was used as a comparison drug. As a placebo in experiments with guinea pigs, a cream and gel of the same composition were used without the substance of the active substance.

ЖивотныеAnimals

Самцов морских свинок массой 250-300 г получали из питомника РАМН «Андреевка» (Московская обл.). Содержание животных соответствовало правилам по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник (вивариев). Кормили животных брикетированными кормами в соответствии с утвержденными нормами. Маркировка животных по группам производилась с помощью окраски красителями (эозин) поверхности тела. Исследования были проведены в соответствии с этическими нормативными документами, действующими на территории РФ, после утверждения Этического Комитета ФГБУ НИИВС им. И.И. Мечникова, а также принимая во внимание рекомендации международных разрешительных органов (1-4).Male guinea pigs weighing 250-300 g were obtained from the nursery RAMS "Andreevka" (Moscow region). The keeping of animals corresponded to the rules for the design, equipment and maintenance of experimental biological clinics (vivariums). The animals were fed with briquetted feed in accordance with the approved standards. Marking of animals in groups was carried out using staining with dyes (eosin) of the body surface. The studies were conducted in accordance with ethical regulatory documents in force on the territory of the Russian Federation, after the approval of the Ethics Committee of the FSBI NIIIVS im. I.I. Mechnikov, as well as taking into account the recommendations of international licensing authorities (1-4).

Вирусы и клеткиViruses and cells

Культура клеток. В работе использовали перевиваемую культуру клеток почек зеленых мартышек Vero, полученную из АТТС (Американская коллекция клеточных культур и вирусов). Клетки культивировали в среде роста, представляющей собой среду ДМЕМ (Минимальная среда ИГЛА, «ПанЭко, Россия) с добавлением 10% инактивированной нагреванием эмбриональной телячьей сыворотки (ЭТС, «ПанЭко, Россия), 2 мМ L-глутамина (Sigma, USA) и антибиотиков (100 Ед./мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина). Среда поддержки содержала все указанные выше ингредиенты и 2% ЭТС. Клетки инкубировали в термостате в атмосфере 5% CO₂ при +37°C.Cell culture. We used a transplantable Vero green monkey kidney cell culture obtained from ATTS (American Collection of Cell Cultures and Viruses). Cells were cultured in growth medium, which was DMEM (Minimum IgLA medium, PanEco, Russia) supplemented with 10% heat inactivated calf serum (ETS, PanEco, Russia), 2 mM L-glutamine (Sigma, USA) and antibiotics (100 U / ml penicillin and 100 μg / ml streptomycin). The support medium contained all of the above ingredients and 2% ETS. Cells were incubated in a thermostat in an atmosphere of 5% CO ₂ at + 37 ° C.

Вирусы. В опытах использовали вирус простого герпеса ВПГ-2-го антигенного типа, штамм ВН, полученный из Государственной коллекции вирусов НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского. Вирус поддерживали в серийных пассажах и титровали на перевиваемой культуре клеток почек зеленых мартышек VERO. Титры вируса оценивали по стандартной методике (по Риду и Менчу) микрометодом в 96-луночных культуральных планшетах с использованием культуры клеток и выражали в Ig ТЦД₅₀/мл. За ТЦД₅₀ вируса принимали минимальное разведение вируса, вызывающее 50% поражение клеточного монослоя при отсутствии дегенерации клеточного монослоя в контроле без инфицирования (50% тканевая цитопатическая доза вируса ТЦД₅₀). В экспериментах использовали вирус в виде вируссодержащей взвеси с инфекционным титром 6,0 Ig ТЦД₅₀/мл. Полученные вирусы хранились в аликвотах замороженными.Viruses. The experiments used the herpes simplex virus HSV-2 antigenic type, strain BH, obtained from the State collection of viruses of the Research Institute of Virology. DI. Ivanovsky. The virus was maintained in serial passages and titrated on a transplanted culture of green monkey kidney cells VERO. Virus titers were evaluated according to standard methods (according to Reed and Mench) using a micromethod in 96-well culture plates using cell culture and expressed in Ig TCD ₅₀ / ml. Minimal virus dilution was taken for TCD ₅₀ of the virus, causing 50% damage to the cell monolayer in the absence of degeneration of the cell monolayer in the control without infection (50% tissue cytopathic dose of TCD ₅₀ virus). In the experiments, a virus was used in the form of a virus-containing suspension with an infectious titer of 6.0 Ig TCD ₅₀ / ml. The resulting viruses were stored in aliquots frozen.

Оценка эффективности препаратов на модели генитального герпеса морских свинокEvaluation of the effectiveness of drugs on the model of genital herpes

Самцов морских свинок заражали культуральной, вируссодержащей жидкостью (ВПГ-2, "ВН"). Вируссодержащую жидкость (в дозе 100 ТЦД₅₀) наносили с помощью пипетки (с последующим втиранием) на предварительно скарифицированную кожу пениса. Скарифицирование проводили с помощью хирургического ланцета, после того как животные были анестезированы анестетиком - лидокаином (1%). Размер площади скарификации составлял 4-7 мм². Каждая группа содержала 4-5 животных.Male guinea pigs were infected with culture, virus-containing liquid (HSV-2, "VN"). Virus-containing liquid (at a dose of 100 TCD ₅₀ ) was applied using a pipette (followed by rubbing) onto the previously scarified penis skin. Scarification was performed using a surgical lancet after the animals were anesthetized with anesthetic lidocaine (1%). The size of the scarification area was 4-7 mm ² . Each group contained 4-5 animals.

В опытах также использовали плацебо, представляющие крем и гель такого же состава, только без добавления субстанции PDSTP. Кроме того, в качестве контрольного препарата была использована лекарственная форма в виде 5% мази препарата Зовиракс (ацикловир). Лечение проводилось местно по лечебной схеме: через 3 или 48 часов после инфицирования (при выраженных проявлениях болезни). Препараты наносили методом аппликации тонким слоем на очаги поражения 2 раза в сутки, ежедневно, в течение 5 дней. Площадь нанесения препарата составляла 1,3 см².A placebo was also used in the experiments, representing a cream and gel of the same composition, only without the addition of the substance PDSTP. In addition, as a control preparation, a dosage form in the form of a 5% ointment of Zovirax (acyclovir) was used. Treatment was carried out locally according to the treatment regimen: 3 or 48 hours after infection (with severe manifestations of the disease). The preparations were applied by thin-layer application on the lesions 2 times a day, daily, for 5 days. The area of application of the drug was 1.3 cm ² .

Тяжесть инфекционного процесса оценивали ежедневно перед проведением лечения и прослеживали в течение всего периода болезни по следующим параметрам: наличие и степень специфических поражений (везикулы, пустулы, изъязвления, эрозии, корочки); отека, гиперемии, орхита. Максимальная выраженность каждого признака составляла 4 балла. Общая продолжительность наблюдения за животными составила 21 день.The severity of the infection process was assessed daily before treatment and was monitored throughout the period of the disease according to the following parameters: the presence and degree of specific lesions (vesicles, pustules, ulcerations, erosion, crusts); edema, hyperemia, orchitis. The maximum severity of each trait was 4 points. The total duration of observation of animals was 21 days.

Эффективность препаратов оценивали на пике выраженности патологического процесса по стандартной методике. Критериями оценки лечебного действия препаратов являлись: снижение интенсивности клинических проявлений, индекс лечебного действия (ИЛД), сокращение длительности заболевания в опытных группах по сравнению с контрольной.The effectiveness of the drugs was evaluated at the peak of the severity of the pathological process according to standard methods. The criteria for evaluating the therapeutic effect of the drugs were: a decrease in the intensity of clinical manifestations, an index of therapeutic effect (IPD), a reduction in the duration of the disease in the experimental groups compared to the control.

ИЛД (в %) = (сумма баллов в контрольной группе - сумма баллов в группе животных, леченных препаратом) × 100/сумма баллов в контрольной группеILD (in%) = (total score in the control group - total score in the group of animals treated with the drug) × 100 / total score in the control group

У морских свинок на 5 день после заражения получали смывы со слизистой урогенитального тракта в стерильные пробирки с 1,8 мл культуральной среды ДМЕМ.In guinea pigs, 5 days after infection, swabs were obtained from the mucosa of the urogenital tract in sterile tubes with 1.8 ml of DMEM culture medium.

Определение титра вируса, выделенного из урогенитальных смывов морских свинокDetermination of virus titer isolated from urogenital swabs of guinea pigs

Титрование вируса из содержимого смывов со слизистой урогенитального тракта у морских свинок проводили in vitro на культуре клеток VERO с использованием стандартных вирусологических методов исследования.Titration of the virus from the contents of swabs from the mucosa of the urogenital tract in guinea pigs was carried out in vitro on a VERO cell culture using standard virological research methods.

Образцы в эксперименте после взятия до исследования хранили при 70°C.Samples in the experiment after sampling before the study were stored at 70 ° C.

Клетки VERO выращивали в 96-луночных планшетах для культивирования клеток фирмы «Costar». Клетки в полной культуральной среде вносили по 100 мкл в каждую лунку планшета в концентрации 10⁴ кл./мл, инкубировали в термостате при 37°C в атмосфере 5% CO₂. После образования полного монослоя (через 24 часа) среду удаляли, трижды промывали питательной средой без сыворотки и использовали в дальнейших экспериментах.VERO cells were grown in 96 well Costar cell culture plates. Cells in a complete culture medium were added 100 μl to each well of the plate at a concentration of 10 ⁴ cells / ml, incubated in an incubator at 37 ° C in an atmosphere of 5% CO ₂ . After the formation of a complete monolayer (after 24 hours), the medium was removed, washed three times with nutrient-free medium without serum, and used in further experiments.

Перед внесением образцов во все лунки планшета вносили по 90 мкл питательной среды без сыворотки (в полной культуральной среде DMEM (ПанЭко, РФ) с добавлением антибиотиков, 0,008% раствора гентамицина сульфата (ФЕРЕЙН, РФ), 300 мг глутамина (ГУ ПиВЭ им. М.П. Чумакова РАМН, РФ) на 500 мл среды). Исследуемые образцы вносили по 10 мкл/лунку (разведение 1:100). Далее путем серийных разведений в планшетах проводили титрование в диапазоне 10¹-10⁵ ТИЦД₅₀/мл. Параллельно титровали вирус в диапазоне 10³-10⁹ ТИЦД₅₀/мл.Before introducing samples, 90 μl of serum-free culture medium was added to all wells of the plate (in complete DMEM culture medium (PanEco, RF) with antibiotics, a 0.008% solution of gentamicin sulfate (FEREYN, RF), 300 mg of glutamine (M PiVE GU .P. Chumakova RAMS, RF) per 500 ml of medium). The test samples were added at 10 μl / well (1: 100 dilution). Then, by serial dilutions in tablets, titration was performed in the range of 10 ¹ -10 ⁵ TICD ₅₀ / ml. In parallel, the virus was titrated in the range of 10 ³ -10 ⁹ TICD ₅₀ / ml.

В качестве контроля служила интактная культура клеток (негативный контроль). Далее клетки инкубировали в термостате при 37°C в атмосфере 5% CO₂ в течение 5 суток. Клеточный монослой ежедневно просматривали под световым микроскопом с целью оценки степени его интактности и обнаружения специфического цитопатического действия вируса (ЦПД). Учет результатов оценивали визуально, используя инвертированный микроскоп LABOVERT FS (фирмы "Leitz"). Цитопатические изменения, которые выражались в виде сгруппированных, увеличенных в размере округлых клеток, оценивали по следующей шкале:An intact cell culture (negative control) served as a control. Then the cells were incubated in an incubator at 37 ° C in an atmosphere of 5% CO ₂ for 5 days. The cell monolayer was examined daily under a light microscope in order to assess the degree of its intactness and to detect the specific cytopathic effect of the virus (CPD). Analysis of results was evaluated visually using an inverted microscope LABOVERT FS (Leitz). Cytopathic changes, which were expressed as grouped, increased in the size of rounded cells, were evaluated on the following scale:

+ - незначительные изменения в монослое (25%);+ - minor changes in the monolayer (25%);

++ - наличие небольших разрывов в монослое (50);++ - the presence of small discontinuities in the monolayer (50);

+++ - разрушение около 50% монослоя (75%);+++ - destruction of about 50% of the monolayer (75%);

++++ - практически полное разрушение монослоя (100%).++++ - almost complete destruction of the monolayer (100%).

Для количественного определения цитопатического действия образцов использовали модифицированный метод подсчета живых и мертвых клеток с использованием красителя Neutral Red (NR). После промывки (3 раза) раствор NR (концентрация 1,11 мкг/мл) вносили по 50 мкл в каждую лунку планшета, после инкубации в течение 2 часов при 37°C в атмосфете 5% CO₂ планшет трижды промывали и вносили по 100 мкл раствора 50% EtOH/ 50% 0,1 М NH₄H₂PO₄ (pH 3,5). Через 30 мин инкубации подсчет проводили на спектрофотометре при длине волны 490 нм.To quantify the cytopathic effect of the samples, a modified method of counting living and dead cells using the Neutral Red (NR) dye was used. After washing (3 times), an NR solution (concentration 1.11 μg / ml) was added 50 μl to each well of the plate, after incubation for 2 hours at 37 ° C in an atmosphere of 5% CO _{2, the} tablet was washed three times and made 100 μl a solution of 50% EtOH / 50% 0.1 M NH ₄ H ₂ PO ₄ (pH 3.5). After 30 minutes of incubation, counting was performed on a spectrophotometer at a wavelength of 490 nm.

Каждый исследуемый образец испытан в 4-х точках (лунках), а каждое значение представляет среднее арифметическое.Each test sample was tested at 4 points (wells), and each value represents the arithmetic mean.

Статистическая обработка полученных данных проводилась общепринятыми методами вариационной статистики с использованием прикладных программ "Ecxell-5.0", оценивая доверительный интервал для 95% вероятности.Statistical processing of the obtained data was carried out by generally accepted methods of variation statistics using the Ecxell-5.0 application programs, estimating the confidence interval for 95% probability.

РЕЗУЛЬТАТЫRESULTS

1. Дизайн исследования1. Study Design

Лечение с использованием препаратов для наружного применения - крем, гель, содержащих субстанцию 4,6-ди(3,12-диаза-6,9-диазониадиспиро[5.2.5.2]гексадекан-1-ил)-2-метил-5-нитропиримидин тетрахлорид дигидрохлорид гексагидрата, и референс-препарата Зовиракс - крем проводили по лечебной схеме в двух вариантах: а) через 3 часа после инфицирования; б) через 48 часов после инфицирования (при выраженных проявлениях болезни). Препараты для наружного применения наносили (методом аппликации) тонким слоем на очаги поражения 2 раза в сутки, ежедневно, в течение 5 дней.Treatment with topical preparations - cream, gel, containing the substance 4,6-di (3,12-diaza-6,9-diazoniadispiro [5.2.5.2] hexadecan-1-yl) -2-methyl-5-nitropyrimidine tetrachloride dihydrochloride hexahydrate, and the reference drug Zovirax cream were carried out according to the treatment scheme in two versions: a) 3 hours after infection; b) 48 hours after infection (with severe manifestations of the disease). Preparations for external use were applied (by the method of application) with a thin layer on the lesions 2 times a day, daily, for 5 days.

Описание исследуемых группDescription of study groups

С учетом цели эксперимента все животные были разделены на 7 групп, по 4 свинки в каждой, восьмая группа содержала 6 животных.Taking into account the purpose of the experiment, all animals were divided into 7 groups, 4 pigs each, the eighth group contained 6 animals.

Первая группа содержала животных, инфицированных ВПГ-2 и леченных кремом для наружного применения по лечебной схеме через 3 ч после инфицирования ежедневно 2 раза в сутки в течение 5 дней.The first group contained animals infected with HSV-2 and treated with cream for external use according to the treatment regimen 3 hours after infection daily 2 times a day for 5 days.

Вторая группа содержала животных, инфицированных ВПГ-2 и леченных кремом для наружного применения по лечебной схеме через 48 ч после инфицирования ежедневно 2 раза в сутки в течение 5 дней.The second group contained animals infected with HSV-2 and treated with cream for external use according to the treatment regimen 48 hours after infection daily 2 times a day for 5 days.

Третья группа содержала инфицированных животных, обработанных гелем для наружного применения по лечебной схеме через 3 часа после инфицирования ежедневно 2 раза в сутки в течение 5 дней.The third group contained infected animals treated with gel for external use according to the treatment regimen 3 hours after infection daily 2 times a day for 5 days.

Четвертая группа содержала инфицированных животных, обработанных гелем для наружного применения по лечебной схеме через 48 часов после инфицирования ежедневно 2 раза в сутки в течение 5 дней.The fourth group contained infected animals treated with gel for external use according to the treatment regimen 48 hours after infection daily 2 times a day for 5 days.

Пятая группа содержала инфицированных животных, обработанных препаратом «Зовиракс» в виде крема для наружного применения по лечебной схеме через 3 часа после инфицирования ежедневно 2 раза в сутки в течение 5 дней.The fifth group contained infected animals treated with Zovirax in the form of a cream for external use according to the treatment regimen 3 hours after infection daily 2 times a day for 5 days.

Шестая группа содержала инфицированных животных, обработанных препаратом «Зовиракс» по лечебной схеме через 48 часов после инфицирования ежедневно 2 раза в сутки в течение 5 дней.The sixth group contained infected animals treated with Zovirax according to the treatment schedule 48 hours after infection daily 2 times a day for 5 days.

Седьмая группа (позитивный контроль) содержала только инфицированных ВПГ-2 животных, не получавших лечения.The seventh group (positive control) contained only infected HSV-2 animals that did not receive treatment.

Восьмая группа содержала 6 животных, которые подвергались только скарифицированию, при этом 2 свинки далее не подвергались лечению, а по 2 свинки подвергались обработке плацебо, соответствующим кремом и гелем по схеме через 3 часа после инфицирования ежедневно 2 раза в сутки в течение 5 дней. Эти животные рассматривались как негативный контроль, по отношению к которому сравнивали выраженность вирус-обусловленного патологического процесса и местное раздражающее действие препаратов.The eighth group contained 6 animals that were only scarified, while 2 pigs were not further treated, and 2 pigs were treated with placebo, the appropriate cream and gel according to the scheme 3 hours after infection daily 2 times a day for 5 days. These animals were considered as a negative control, in relation to which the severity of the virus-caused pathological process and the local irritating effect of the drugs were compared.

Характеристика инфекционного процесса у инфицированных животныхCharacterization of the infectious process in infected animals

В контрольной группе инфицированных животных (группа №7), не получавших лечения, типичные местные проявления генитального герпеса развивались через 24-48 часов после инфицирования. Вначале на слизистой оболочке полового члена и прилежащих участках кожи отмечали появление единичных везикулезных высыпаний на эритематозном фоне, затем, при прогрессировании заболевания возникали сливные очаги с геморрагическим содержимым, кровоточащие эрозии, изъязвления, умеренно выраженный орхит. В последующие дни эрозии и язвы эпителизировались либо под коркой, либо без ее образования. Специфичность местных проявлений ГГ была подтверждена нами методом выделения вируса из содержимого везикул, смывов, взятых с урогенитальной области инфицированных животных.In the control group of infected animals (group No. 7) not receiving treatment, typical local manifestations of genital herpes developed 24-48 hours after infection. Initially, on the mucous membrane of the penis and adjacent areas of the skin, the appearance of single vesicular eruptions on an erythematous background was noted, then, with the progression of the disease, drainage foci with hemorrhagic contents appeared, bleeding erosion, ulceration, moderate orchitis. In the following days, erosion and ulcers epithelized either under the crust or without its formation. The specificity of local manifestations of GH was confirmed by us by the method of isolating the virus from the contents of the vesicles, swabs taken from the urogenital area of infected animals.

Процесс отличало наличие выраженных отечно-воспалительных явлений, длительное сохранение гиперемии, «вялое» заживление эрозивно-язвенных элементов. Максимальное развитие симптоматики отмечали на 5-е сутки после инфицирования: суммарный индекс выраженности симптоматики (СИВС) в этой группе равен 34,74 балла, средняя продолжительность болезни (СПЗ) - 15,0±2,46 суток.The process was distinguished by the presence of pronounced edematous-inflammatory phenomena, prolonged preservation of hyperemia, “sluggish" healing of erosive-ulcerative elements. The maximum development of symptoms was observed on the 5th day after infection: the total symptom severity index (SIWS) in this group was 34.74 points, the average disease duration (SDR) was 15.0 ± 2.46 days.

2. Результаты лечения экспериментального генитального герпеса у морских свинок с использованием крема и геля, содержащих субстанцию 4,6-ди(3,12-диаза-6,9-диазониадиспиро[5.2.5.2]гексадекан-1-ил)-2-метил-5-нитропиримидин тетрахлорид дигидрохлорид гексагидрат для местного применения2. The results of the treatment of experimental genital herpes in guinea pigs using a cream and gel containing the substance 4,6-di (3,12-diaza-6,9-diazoniadispiro [5.2.5.2] hexadecan-1-yl) -2-methyl -5-nitropyrimidine tetrachloride dihydrochloride hexahydrate for topical application

Результаты лечения экспериментального генитального герпеса у морских свинок с использованием крема и геля, содержащих субстанцию 4,6-ди(3,12-диаза-6,9-диазониадиспиро[5.2.5.2]гексадекан-1-ил)-2-метил-5-нитропиримидин тетрахлорид дигидрохлорид гексагидрат, и референс-препарата Зовиракс для местного применения, представлены в таблице 1, на фиг.1 и 2.The results of the treatment of experimental genital herpes in guinea pigs using a cream and gel containing the substance 4,6-di (3,12-diaza-6,9-diazoniadispiro [5.2.5.2] hexadecan-1-yl) -2-methyl-5 -nitropyrimidine tetrachloride dihydrochloride hexahydrate, and the reference preparation Zovirax for topical use are presented in table 1, in figures 1 and 2.

Как следует из данных, представленных в таблице 1, на фиг.1 и 2, использование крема и геля, содержащих субстанцию 4,6-ди(3,12-диаза-6,9-диазониадиспиро[5.2.5.2]гексадекан-1-ил)-2-метил-5-нитропиримидин тетрахлорид дигидрохлорид гексагидрата для местного применения, оказывало на течение генитального герпеса у самцов морских свинок воздействие разной степени выраженности.As follows from the data presented in table 1, in figures 1 and 2, the use of cream and gel containing the substance 4,6-di (3,12-diaza-6,9-diazoniadispiro [5.2.5.2] hexadecane-1- sludge) -2-methyl-5-nitropyrimidine tetrachloride dihydrochloride hexahydrate for topical application, had an effect of varying severity on the course of genital herpes in male guinea pigs.

Наиболее значимые результаты лечения получены в группе инфицированных животных, получавших крем по лечебной схеме - через 3 часа после инфицирования.The most significant treatment results were obtained in the group of infected animals that received the cream according to the treatment regimen - 3 hours after infection.

Установлено, что применение препарата в виде крема на ранней стадии инфекционного процесса (через 3 часа после инфицирования) приводило к статистически достоверному терапевтическому эффекту, снижению в 1,5 раза выраженности симптоматики и значительному сокращению средней продолжительности заболевания по сравнению с аналогичными показателями в группе инфицированных животных, не получавших лечения (положительный контроль). ИЛД составил 32,64%, СПЗ - 9,0±1,0 суток (см. табл. 1, Фиг. 1). Животные, леченные кремом, выздоравливали в среднем на 6,0 суток ранее, чем те, которые не получали лечения. Инфекционный процесс характеризовался наличием умеренно выраженных экссудативно-воспалительных явлений, сокращением сроков экссудативно-воспалительных явлений и разрешения элементов. Проведенные исследования не выявили значимых различий между показателями эффективности крема и референс-препарата Зовиракс по всем изучаемым параметрам (по влиянию на показатели ИЛД, СИВС, СПЗ, на характер течения инфекционного процесса), (p>0,05). На фоне лечения референс-препаратом Зовиракс (шестая группа) СПЗ составила - 8,33±0,57 суток; ИЛД - 35,23%.It was established that the use of the drug in the form of a cream at an early stage of the infectious process (3 hours after infection) led to a statistically significant therapeutic effect, a 1.5-fold decrease in the severity of symptoms and a significant reduction in the average duration of the disease compared with similar indicators in the group of infected animals not receiving treatment (positive control). The IPD amounted to 32.64%, SDR - 9.0 ± 1.0 days (see table. 1, Fig. 1). Animals treated with the cream recovered an average of 6.0 days earlier than those that did not receive treatment. The infectious process was characterized by the presence of moderately expressed exudative-inflammatory phenomena, a reduction in the duration of exudative-inflammatory phenomena and resolution of elements. The studies did not reveal significant differences between the effectiveness of the cream and the reference drug Zovirax for all the studied parameters (according to the effect on the parameters of IPD, SIWS, SDR, on the nature of the course of the infectious process), (p> 0.05). Against the background of treatment with the reference drug Zovirax (sixth group), the SDR was - 8.33 ± 0.57 days; IPD - 35.23%.

Применение крема у инфицированных животных на фоне выраженных проявлений патологического процесса (группа №2) приводило также к статистически достоверному лечебному эффекту и сокращению сроков продолжительности заболевания по сравнению с инфицированными животными, не получавшими лечения. В то же время препарат по показателю терапевтического действия (26,59%) уступал таковому как в группе животных, получавших крем в ранние сроки после инфицирования (32,64%), так и в группе животных, получавших референс-препарат Зовиракс (30,05%), однако был сопоставим с первой группой по показателю СПЗ. Так, СПЗ у животных во второй группе составила - 9,33±1,52 сут, у животных в первой группе - 9,0±1,0 суток, p>0,5. При сравнении СПЗ у животных второй группы и у животных, леченных референс препаратом, было установлено, что инфицированные животные, получавшие исследуемый крем, выздоравливали на 1,33 суток позже, p<0,5. Необходимо также отметить, что в группе позднего лечения кремом (начало через 48 часов) экссудативно-воспалительные явления были более выраженными и продолжительными, чем у животных как в первой группе, получавших раннее лечение этим же препаратом, так и у животных, получавших референс-препарат Зовиракс.The use of cream in infected animals against the background of pronounced manifestations of the pathological process (group No. 2) also led to a statistically significant therapeutic effect and a reduction in the duration of the disease compared with infected animals that did not receive treatment. At the same time, the drug in terms of therapeutic effect (26.59%) was inferior to that in the group of animals that received the cream early after infection (32.64%) and in the group of animals that received the reference drug Zovirax (30, 05%), but was comparable with the first group in terms of SDR. So, SDR in animals in the second group was 9.33 ± 1.52 days, in animals in the first group - 9.0 ± 1.0 days, p> 0.5. When comparing the SDR in animals of the second group and in animals treated with the reference drug, it was found that the infected animals receiving the test cream recovered 1.33 days later, p <0.5. It should also be noted that in the group of the late cream treatment (beginning after 48 hours), exudative inflammatory phenomena were more pronounced and lasting than in animals in the first group who received early treatment with the same drug and in animals that received the reference drug Zovirax.

Анализ применения геля для наружного применения по лечебной схеме на модели экспериментального генитального герпеса у морских свинок показал, так же как и в случае с кремом, что данная форма препарата проявляла более выраженную активность при использовании в ранние сроки после инфицирования.Analysis of the use of the gel for external use according to the treatment regimen on the model of experimental genital herpes in guinea pigs showed, as in the case of cream, that this form of the drug showed more pronounced activity when used in the early stages after infection.

Так, применение геля через 3 часа после инфицирования (группа №3) приводило к достоверному ИЛД, равному 25,73%, и достоверному снижению СПЗ на 3,34 суток по сравнению с группой животных, не получавших лечения. По эффективности применения гель, используемый по схеме - через 3 часа после инфицирования, был сопоставим с эффективностью крема, используемого на фоне выраженных проявлений инфекционного процесса (группа №2, начало лечения через 48 часов после инфицирования), однако уступал в среднем на 2,4 суток по влиянию на продолжительность заболевания по сравнению как с действием крема, используемого по схеме через 3 после инфицирования, так и с действием референс-препарата (см. табл. 1).So, the use of the gel 3 hours after infection (group No. 3) led to a reliable IPD of 25.73% and a significant decrease in SDR by 3.34 days compared with the group of animals that did not receive treatment. According to the effectiveness of the application, the gel used according to the scheme - 3 hours after infection, was comparable to the effectiveness of the cream used against the background of pronounced manifestations of the infectious process (group No. 2, the start of treatment 48 hours after infection), but was 2.4 times less on average days according to the effect on the duration of the disease compared with the action of the cream used according to the scheme 3 after infection, and with the action of the reference drug (see table. 1).

Проведенные исследования показали, что применение у инфицированных животных геля через 48 часов после инфицирования в течение 5 дней (группа №4) приводило к терапевтическому эффекту, равному 22,01%, и сокращению СПЗ на 2,66 суток по сравнению с инфицированными животными, не получавшими лечения. Тем не менее, применение геля по схеме +48 ч было менее эффективным по всем оценочным параметрам по сравнению с использованием как крема в различные сроки инфекционного процесса, так и референс-препарата Зовиракс (группа №6). Наблюдение за животными из 8 группы показало, что у 2 животных, которые подвергались только скарифицированию, произошло быстрое (в течение 1-2 дней) заживление, после этого никаких выраженных явлений у свинок в этой группе не наблюдалось. Кроме того, у 4 свинок, подвергавшихся обработке плацебо, соответствующим крему и гелю по схеме через 3 часа после инфицирования ежедневно 2 раза в сутки в течение 5 дней, не было выявлено отечности, видимого местного раздражающего действия препаратов и общих побочных эффектов.Studies have shown that the use of gel in infected animals 48 hours after infection for 5 days (group No. 4) led to a therapeutic effect of 22.01% and a decrease in SDR of 2.66 days compared with infected animals, not receiving treatment. Nevertheless, the use of the gel according to the +48 h schedule was less effective in all assessment parameters compared to using both cream at different times of the infection process and the reference drug Zovirax (group No. 6). Observation of animals from group 8 showed that 2 animals, which were subjected to scarification only, experienced rapid (within 1-2 days) healing, after which no pronounced phenomena were observed in pigs in this group. In addition, in 4 pigs treated with a placebo corresponding to a cream and gel according to the scheme 3 hours after infection daily 2 times a day for 5 days, there was no swelling, visible local irritating effect of the drugs and general side effects.

Таким образом, по степени снижения эффективности исследуемые модификации препаратов, содержащих субстанцию 4,6-ди(3,12-диаза-6,9-диазониадиспиро[5.2.5.2]гексадекан-1-ил)-2-метил-5-нитропиримидин тетрахлорид дигидрохлорид гексагидрата, для наружного применения можно расположить следующим образом: группа №1 (крем +3 ч после инфицирования) > группа №3 (гель +3 ч после инфицирования) / группа №2 (крем +48 ч после инфицирования) > группа №4 (гель +48 ч после инфицирования).Thus, according to the degree of decrease in effectiveness, the studied modifications of preparations containing the substance 4,6-di (3,12-diaza-6,9-diazoniadispiro [5.2.5.2] hexadecan-1-yl) -2-methyl-5-nitropyrimidine tetrachloride dihydrochloride hexahydrate, for external use, can be positioned as follows: group No. 1 (cream +3 hours after infection)> group No. 3 (gel +3 hours after infection) / group No. 2 (cream +48 hours after infection)> group No. 4 (gel +48 h after infection).

3. Изучение влияния крема и геля, содержащих субстанцию 4,6-ди(3,12-диаза-6,9-диазониадиспиро[5.2.5.2]гексадекан-1-ил)-2-метил-5-нитропиримидин тетрахлорид дигидрохлорид гексагидрата, для наружного применения на частоту и уровень выделения вируса простого герпеса 2 типа у самцов морских свинок3. The study of the effect of cream and gel containing the substance 4,6-di (3,12-diaza-6,9-diazoniadispiro [5.2.5.2] hexadecan-1-yl) -2-methyl-5-nitropyrimidine tetrachloride dihydrochloride hexahydrate, for external use on the frequency and level of isolation of herpes simplex virus type 2 in male guinea pigs

Для определения влияния крема и геля, содержащих субстанцию 4,6-ди(3,12-диаза-6,9-диазониадиспиро[5.2.5.2]гексадекан-1-ил)-2-метил-5-нитропиримидин тетрахлорид дигидрохлорид гексагидрат, на частоту выделения ВПГ-2 и уровень его репликации у инфицированных животных нами проведено исследование образцов смывов с очагов поражения, собранных у животных на 5-е сутки после инфицирования, с использованием стандартной методики выделения вируса на культуре клеток VERO.To determine the effect of cream and gel containing the substance 4,6-di (3,12-diaza-6,9-diazoniadispiro [5.2.5.2] hexadecan-1-yl) -2-methyl-5-nitropyrimidine tetrachloride dihydrochloride hexahydrate, on the frequency of HSV-2 isolation and its replication level in infected animals, we studied samples of swabs from lesions collected from animals on the 5th day after infection using a standard technique for virus isolation in a VERO cell culture.

Таблица 2table 2

Влияние крема и геля, содержащих субстанцию 4,6-ди(3,12-диаза-6,9-диазониадиспиро[5.2.5.2]гексадекан-1-ил)-2-метил-5-нитропиримидин тетрахлорид дигидрохлорид гексагидрат, для наружного применения на частоту выделения и уровень репликации вируса из очагов поражения у самцов морских свинок, инфицированных ВПГ-2 (по данным вирусологического метода)Effect of cream and gel containing the substance 4,6-di (3,12-diaza-6,9-diazoniadispiro [5.2.5.2] hexadecan-1-yl) -2-methyl-5-nitropyrimidine tetrachloride dihydrochloride hexahydrate, for external use on the frequency of isolation and the level of virus replication from lesions in male guinea pigs infected with HSV-2 (according to the virological method)

Как видно из данных таблицы 2, на 5-е сутки после инфицирования частота выделения вируса у инфицированных животных как в опытных группах, так и в группах контроля составила 100%. Полученные результаты, в свою очередь, подтвердили специфичность наблюдаемых нами симптомов генитального герпеса у экспериментально инфицированных животных.As can be seen from the data in table 2, on the 5th day after infection, the frequency of virus isolation in infected animals both in the experimental groups and in the control groups was 100%. The obtained results, in turn, confirmed the specificity of the symptoms of genital herpes observed by us in experimentally infected animals.

Установлено, что применение крема и геля, содержащих субстанцию 4,6-ди(3,12-диаза-6,9-диазониадиспиро[5.2.5.2]гексадекан-1-ил)-2-метил-5-нитропиримидин тетрахлорид дигидрохлорид гексагидрата, у инфицированных животных (группы №1-4) приводило к снижению уровня репликации и инфекционной активности вируса, изолированного из образцов смывов с пораженной области, по сравнению с инфекционной активностью вируса, выделенного у инфицированных животных, не получавших лечения (см. табл. 2). Так, титры вируса, выделенного у животных на фоне лечения кремом, составили 1,9±0,52 Ig ТЦД₅₀/мл и 2,41±0,4 Ig ТЦД₅₀/мл, соответственно; на фоне лечения гелем - 2,25±0,5 Ig ТЦД₅₀/мл и 3,0±0,11 Ig ТЦД₅₀/мл, соответственно.It was found that the use of a cream and gel containing the substance 4,6-di (3,12-diaza-6,9-diazoniadispiro [5.2.5.2] hexadecan-1-yl) -2-methyl-5-nitropyrimidine tetrachloride dihydrochloride hexahydrate, in infected animals (groups No. 1-4) led to a decrease in the level of replication and infectious activity of the virus isolated from swab samples from the affected area, compared with the infectious activity of the virus isolated from infected animals that were not treated (see table. 2) . So, the titers of the virus isolated from animals during treatment with cream were 1.9 ± 0.52 Ig TCD ₅₀ / ml and 2.41 ± 0.4 Ig TCD ₅₀ / ml, respectively; during gel treatment, 2.25 ± 0.5 Ig TCD ₅₀ / ml and 3.0 ± 0.11 Ig TCD ₅₀ / ml, respectively.

Наиболее выраженное снижение инфекционной активности вируса - в 100 раз - отмечено при использовании крема на ранних этапах инфекционного процесса, в то время как использование крема на фоне выраженных проявлений герпес-вирусной инфекции приводило к снижению инфекционной активности вируса в 30 раз.The most pronounced decrease in the infectious activity of the virus - 100 times - was noted when using the cream in the early stages of the infectious process, while the use of the cream against the background of pronounced manifestations of herpes virus infection led to a decrease in the infectious activity of the virus by 30 times.

Применение геля, в зависимости от схемы применения, приводило к снижению инфекционной активности вируса в 50 и 10 раз.The use of the gel, depending on the application, led to a decrease in the infectious activity of the virus by 50 and 10 times.

Титры вируса у инфицированных животных под влиянием референс-препарата Зовиракс статистически значимо снижались более чем в 100 раз по сравнению с титрами вируса в контроле (p<0.05) и составили 1,66-1,75 Ig ТЦД₅₀/мл.Virus titers in infected animals under the influence of the reference drug Zovirax statistically significantly decreased by more than 100 times compared to the virus titers in the control (p <0.05) and amounted to 1.66-1.75 Ig TCD ₅₀ / ml.

Таким образом, в опытах по изоляции и титрованию вируса из образцов биоматериала у инфицированных животных с ГГ в культуре клеток VERO нами получены данные, свидетельствующие о наличии селективной противовирусной активности у ионного крема и геля, содержащих субстанцию 4,6-ди(3,12-диаза-6,9-диазониадиспиро[5.2.5.2]гексадекан-1-ил)-2-метил-5-нитропиримидин тетрахлорид дигидрохлорид гексагидрата, при местном применении. Данные, полученные с помощью вирусологического метода, коррелируют с данными по эффективности действия препаратов, полученными с использованием характеристик инфекционного процесса, вызванного ВПГ-2. Таким образом: крем и гель, содержащие субстанцию 4,6-ди(3,12-диаза-6,9-диазониадиспиро[5.2.5.2]гексадекан-1-ил)-2-метил-5-нитропиримидин тетра-хлорид дигидрохлорид гексагидрата, при местном применении по лечебной схеме (двухкратной аппликации в течение 5 дней) на модели генитального герпеса у морских свинок обладают достоверным лечебным эффектом, позволяющим подавлять развитие герпес-вирусной инфекции, обусловленной ВПГ-2. Наиболее эффективным было лечение кремом, содержащем субстанцию 4,6-ди(3,12-диаза-6,9-диазониадиспиро[5.2.5.2]гексадекан-1-ил)-2-метил-5-нитропиримидин тетрахлорид дигидрохлорид гексагидрата, по лечебной схеме в ранние сроки (через 3 часа) после инфицирования (группа №1), который оказывал выраженное терапевтическое воздействие на течение инфекции у животных, способствуя достоверному снижению выраженности симптоматики, сокращению сроков разрешения элементов, средней продолжительности заболевания, инфекционной активности ВПГ-2. Эффект лечения кремом в ранние сроки (через 3 часа) после инфицирования подтверждается результатами вирусологического метода исследования, в котором выявлено достоверное снижение титра у леченных животных по сравнению с группой вирусного контроля. Эффективность крема при использовании по лечебной схеме в ранние сроки после инфицирования как по характеристикам инфекционного процесса, так и по снижению титра вируса у леченных животных по сравнению с группой вирусного контроля сопоставима с референс-препаратом Зовиракс, применяемым по аналогичной схеме.Thus, in experiments on the isolation and titration of the virus from biomaterial samples in infected animals with GH in a VERO cell culture, we obtained data indicating the presence of selective antiviral activity in ion cream and gel containing the substance 4,6-di (3,12- diaz-6,9-diazoniadispiro [5.2.5.2] hexadecan-1-yl) -2-methyl-5-nitropyrimidine tetrachloride dihydrochloride hexahydrate, when applied topically. Data obtained using the virological method correlate with data on the effectiveness of the drugs obtained using the characteristics of the infectious process caused by HSV-2. Thus: a cream and gel containing the substance 4,6-di (3,12-diaza-6,9-diazoniadispiro [5.2.5.2] hexadecan-1-yl) -2-methyl-5-nitropyrimidine tetrachloride dihydrochloride hexahydrate , when applied topically according to the treatment regimen (two-time application for 5 days) on the model of genital herpes in guinea pigs, they have a reliable therapeutic effect that allows to suppress the development of herpes virus infection caused by HSV-2. The most effective was the treatment with a cream containing the substance 4,6-di (3,12-diaza-6,9-diazoniadispiro [5.2.5.2] hexadecan-1-yl) -2-methyl-5-nitropyrimidine tetrachloride dihydrochloride hexahydrate the scheme in the early stages (3 hours) after infection (group No. 1), which had a pronounced therapeutic effect on the course of infection in animals, contributing to a significant decrease in the severity of symptoms, a reduction in the resolution of elements, the average duration of the disease, and the infection activity of HSV-2. The effect of cream treatment in the early stages (3 hours) after infection is confirmed by the results of the virological research method, which revealed a significant decrease in titer in the treated animals compared with the viral control group. The effectiveness of the cream when used according to the treatment schedule in the early stages after infection, both in terms of the characteristics of the infection process and in reducing the titer of the virus in the treated animals compared with the virus control group, is comparable to the reference drug Zovirax used according to a similar scheme.

Claims

1. The pharmaceutical composition in the form of a cream for the treatment of herpes virus infection, containing as an active substance from 0.5 to 10.0% wt./about. 4,6-di (3,12-diaza-6,9-diazoniadispiro [5.2.5.2] hexadecan-1-yl) -2-methyl-5-nitropyrimidine tetrachloride dihydrochloride hexahydrate.

2. The pharmaceutical composition in the form of a gel for the treatment of herpes virus infection, containing as an active substance from 0.5 to 10.0% of the mass. 4,6-di (3,12-diaza-6,9-diazoniadispiro [5.2.5.2] hexadecan-1-yl) -2-methyl-5-nitropyrimidine tetrachloride dihydrochloride hexahydrate.

3. The pharmaceutical composition according to claim 1, where the cream has anti-herpes activity against strains of HSV-1 and HSV-2, including those resistant to currently existing drugs.

4. A method of treating or preventing a herpes infection in a human or animal, comprising topically administering to the patient a pharmaceutical composition according to claims 1 and 2 in an effective amount.