RU2567854C1

RU2567854C1 - Nucleoside inhibitors of rna-polymerase hcv ns5b, methods for production and use thereof

Info

Publication number: RU2567854C1
Application number: RU2014145181/04A
Authority: RU
Inventors: Александр Васильевич Иващенко
Original assignee: Александр Васильевич Иващенко; Асави, Ллс
Priority date: 2014-11-11
Filing date: 2014-11-11
Publication date: 2015-11-10

Abstract

FIELD: chemistry.

SUBSTANCE: invention relates to C₃alkyl ethers (S)-2-{[(2R,3R,5R)-5-(4-amino-2-oxo-2H-pyrimidin-1-yl)-4,4-difluoro-3-hydroxy-tetrahydrofuran-2-ylmethoxy]phenoxy-phosphoryl amino}-propionic acid of general formula 1 and pharmaceutically acceptable salts thereof. The compounds have properties of nucleoside inhibitors of RNA-polymerase HCV NS5B and can be used to treat and prevent viral diseases such as hepatitis C. In formula

R¹ is C₁-C₄alkyl. A pharmaceutical composition based on a compound of formula 1 may further contain an inhibitor of RNA-polymerase NS5A, such as Ribavirin, Ribamidin or methyl ether hydrochloride [(S)-1-((S)-2-{5-[4-(4-{2-[(S)-1-((S)-2-methoxycarbonylamino-3-methyl-butyryl)pyrrolidin-2-yl-3H-imidazol-4-yl]buta-1,3-diinyl)phenyl]-1H-imidazol-2-yl}pyrrolidin-1-carbonyl)-2-methyl-propyl]}-carbamic acid (AV-4025).

EFFECT: high output.

10 cl, 1 tbl, 12 ex

Description

Настоящее изобретение относится к нуклеозидным ингибиторам РНК-полимеразы HCV NS5B, их использованию в качестве средства для ингибитора РНК-полимеразы HCV NS5B и лечения вирусных заболеваний. Более конкретно изобретение относится к нуклеозидным ингибиторам РНК-полимеразы HCV NS5B, которые представляют собой алкиловые эфиры (S)-2-{[(2R,3R,5R)-5-(4-амино-2-оксо-2Н-пиримидин-1-ил)-4,4-дифтор-3-гидрокси-тетрагидрофуран-2-илметокси]фенокси-фосфориламино}-пропионовой кислоты. Эти ингибиторы являются полезными для лечения гепатита С в организме млекопитающих.The present invention relates to nucleoside inhibitors of HCV NS5B RNA polymerase, their use as an agent for HCV NS5B RNA polymerase inhibitor and treatment of viral diseases. More specifically, the invention relates to nucleoside inhibitors of HCV NS5B RNA polymerase, which are the alkyl esters of (S) -2 - {[(2R, 3R, 5R) -5- (4-amino-2-oxo-2H-pyrimidin-1 -yl) -4,4-difluoro-3-hydroxy-tetrahydrofuran-2-ylmethoxy] phenoxy-phosphorylamino} -propionic acid. These inhibitors are useful for treating hepatitis C in mammals.

Примером такого ингибитора может служить PSI-7977 [М. J. Sofia, D. Bao, W. Chang et al. Discovery of a β-D-20-Deoxy-20-r-fluoro-20-β-C-methyluridine Nucleotide Prodrug (PSI-7977) for the Treatment of Hepatitis С Virus. J. Med. Chem. 2010, 53, 7202-7218] известного, как sovaldi and sofosbuvir [http://en.wikipedia.org/wiki/Sofosbuvir].An example of such an inhibitor is PSI-7977 [M. J. Sofia, D. Bao, W. Chang et al. Discovery of a β-D-20-Deoxy-20-r-fluoro-20-β-C-methyluridine Nucleotide Prodrug (PSI-7977) for the Treatment of Hepatitis C Virus. J. Med. Chem. 2010, 53, 7202-7218] known as sovaldi and sofosbuvir [http://en.wikipedia.org/wiki/Sofosbuvir].

В настоящее время существует ограниченное количество одобренных терапевтических методов, которые повсеместно были бы признаны пригодными для лечения HCV-инфекции. В этой связи поиск новых высокоэффективных противофлавивирусных лекарственных препаратов в настоящее время по-прежнему является одним из основных направлений создания новых фармакологических средств для лечения широкого и разнообразного круга вирусных инфекций, в том числе HCV. Поэтому до настоящего времени является актуальным поиск новых ингибиторов NS5B, пригодных в качестве противовирусных активных компонентов для фармацевтических композиций и терапевтических средств для лечения HCV.Currently, there are a limited number of approved therapeutic methods that are universally recognized as suitable for the treatment of HCV infection. In this regard, the search for new highly effective antiflaviviral drugs is currently still one of the main directions of creating new pharmacological agents for the treatment of a wide and diverse range of viral infections, including HCV. Therefore, to date, it is relevant to search for new NS5B inhibitors suitable as antiviral active components for pharmaceutical compositions and therapeutic agents for the treatment of HCV.

Ниже приведены определения терминов, которые использованы в описании этого изобретения.The following are definitions of terms that are used in the description of this invention.

«Алкил» означает алифатическую углеводородную линейную или разветвленную группу с 1-12 атомами углерода в цепи. Разветвленная означает, что алкильная цепь имеет один или несколько «низших алкильных» (C₁-C₆)алкильных заместителей. Предпочтительными алкильными группами являются низший (C₁-C₆) алкил или метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, циклопропилметил, циклобутилметил, циклопентилметил, н-пентил, 2-пентил, 3-пентил, неопентил, н-гексил, циклогексил. Алкил может иметь заместители."Alkyl" means an aliphatic hydrocarbon linear or branched group with 1-12 carbon atoms in the chain. Branched means that the alkyl chain has one or more "lower alkyl" (C ₁ -C ₆ ) alkyl substituents. Preferred alkyl groups are lower (C ₁ -C ₆ ) alkyl or methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, cyclopropylmethyl, cyclobutylmethyl, cyclopentylmethyl, n-pentyl, 2- pentyl, 3-pentyl, neopentyl, n-hexyl, cyclohexyl. Alkyl may have substituents.

«Активный компонент» (лекарственное вещество, лекарственная субстанция, drug-substance) означает физиологически активное вещество синтетического или иного (биотехнологического, растительного, животного, микробного и прочего) происхождения, обладающее фармакологической активностью и являющееся активным началом фармацевтической композиции, используемой для производства и изготовления лекарственного препарата (средства)."Active component" (drug substance, drug substance, drug-substance) means a physiologically active substance of synthetic or other (biotechnological, plant, animal, microbial and other) origin, having pharmacological activity and is the active principle of the pharmaceutical composition used for the manufacture and manufacture medicinal product (means).

«Лекарственное средство (препарат)» - вещество (или смесь веществ в виде фармацевтической композиции) в виде таблеток, капсул, инъекций, мазей и других готовых форм, предназначенное для восстановления, исправления или изменения физиологических функций у человека и животных, а также для лечения и профилактики болезней, диагностики, анестезии, контрацепции, косметологии и прочего.“Medicinal product (preparation)” - a substance (or a mixture of substances in the form of a pharmaceutical composition) in the form of tablets, capsules, injections, ointments and other formulations intended to restore, correct or alter physiological functions in humans and animals, as well as for treatment and disease prevention, diagnosis, anesthesia, contraception, cosmetology and more.

«Низший алкил» означает линейный или разветвленный алкил с 1-6 атомами углерода."Lower alkyl" means a linear or branched alkyl with 1-6 carbon atoms.

«Терапевтический коктейль» представляет одновременно администрируемую комбинацию двух и более лекарственных препаратов, обладающих различным механизмом фармакологического действия и направленных на различные биомишени, участвующие в патогенезе заболевания.A “therapeutic cocktail” is a simultaneously administered combination of two or more drugs with a different mechanism of pharmacological action and aimed at different biological targets involved in the pathogenesis of the disease.

«Фармацевтическая композиция» обозначает композицию, включающую в себя несколько или один активный компонент и фармацевтически приемлемые и фармакологически совместимые наполнители, растворители, разбавители, носители, вспомогательные и распределяющие средства, средства доставки, такие как консерванты, стабилизаторы, наполнители, измельчители, увлажнители, эмульгаторы, суспендирующие агенты, загустители, подсластители, отдушки, ароматизаторы, антибактериальные агенты, фунгициды, лубриканты, регуляторы пролонгированной доставки, выбор и соотношение которых зависит от природы и способа назначения и дозировки. Примерами суспендирующих агентов являются этоксилированный изостеариловый спирт, полиоксиэтилен, сорбитол и сорбитовый эфир, микрокристаллическая целлюлоза, метагидроксид алюминия, бентонит, агар-агар и трагакант, а также смеси этих веществ. Защита от действия микроорганизмов может быть обеспечена с помощью разнообразных антибактериальных и противогрибковых агентов, например, таких как парабены, хлорбутанол, сорбиновая кислота и подобные им соединения. Композиция может включать также изотонические агенты, например, сахара, хлористый натрий и им подобные. Пролонгированное действие композиции может быть обеспечено с помощью агентов, замедляющих абсорбцию активного начала, например, моностеарат алюминия и желатин. Примерами подходящих носителей, растворителей, разбавителей и средств доставки являются вода, этанол, полиспирты, а также их смеси, растительные масла (такие как оливковое масло) и инъекционные органические сложные эфиры (такие как этилолеат). Примерами наполнителей являются лактоза, молочный сахар, цитрат натрия, карбонат кальция, фосфат кальция и им подобные. Примерами измельчителей и распределяющих средств являются крахмал, альгиновая кислота и ее соли, силикаты. Примерами лубрикантов являются стеарат магния, лаурилсульфат натрия, тальк, а также полиэтиленгликоль с высоким молекулярным весом. Фармацевтическая композиция для перорального, сублингвального, трансдермального, внутримышечного, внутривенного, подкожного, местного или ректального введения активного начала, одного или в комбинации с другим активным началом, может быть введена животным и людям в стандартной форме введения в виде смеси с традиционными фармацевтическими носителями. Пригодные стандартные формы введения включают пероральные формы, такие как таблетки, желатиновые капсулы, пилюли, порошки, гранулы, жевательные резинки и пероральные растворы или суспензии, сублингвальные и трансбуккальные формы введения, аэрозоли, имплантаты, местные, трансдермальные, подкожные, внутримышечные, внутривенные, интраназальные или внутриглазные формы введения и ректальные формы введения."Pharmaceutical composition" means a composition comprising several or one active component and pharmaceutically acceptable and pharmacologically compatible excipients, solvents, diluents, carriers, excipients and distributing agents, delivery vehicles such as preservatives, stabilizers, excipients, comminuting agents, humectants, emulsifiers , suspending agents, thickeners, sweeteners, perfumes, flavors, antibacterial agents, fungicides, lubricants, prolonged delivery regulators, in boron and the ratio of which depends on the nature and way of administration and dosage. Examples of suspending agents are ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene, sorbitol and sorbitol ether, microcrystalline cellulose, aluminum metahydroxide, bentonite, agar-agar and tragacanth, as well as mixtures of these substances. Protection against the action of microorganisms can be achieved using a variety of antibacterial and antifungal agents, for example, such as parabens, chlorobutanol, sorbic acid and the like. The composition may also include isotonic agents, for example, sugars, sodium chloride and the like. The prolonged action of the composition can be achieved using agents that slow down the absorption of the active principle, for example, aluminum monostearate and gelatin. Examples of suitable carriers, solvents, diluents and delivery vehicles are water, ethanol, polyalcohols, and also mixtures thereof, vegetable oils (such as olive oil) and injectable organic esters (such as ethyl oleate). Examples of excipients are lactose, milk sugar, sodium citrate, calcium carbonate, calcium phosphate and the like. Examples of grinders and distributors are starch, alginic acid and its salts, silicates. Examples of lubricants are magnesium stearate, sodium lauryl sulfate, talc, and high molecular weight polyethylene glycol. The pharmaceutical composition for oral, sublingual, transdermal, intramuscular, intravenous, subcutaneous, local or rectal administration of the active principle, alone or in combination with another active principle, can be administered to animals and humans in a standard administration form in the form of a mixture with traditional pharmaceutical carriers. Suitable unit dosage forms include oral forms such as tablets, gelatine capsules, pills, powders, granules, chewing gums and oral solutions or suspensions, sublingual and buccal administration forms, aerosols, implants, local, transdermal, subcutaneous, intramuscular, intravenous, intranasal or intraocular administration forms and rectal administration forms.

Известен, изопропиловый эфир (S)-2-{[(2R,3R,5R)-5-(4-амино-2-оксо-2Н-пиримидин-1-ил)-4,4-дифтор-3-гидрокси-тетрагидрофуран-2-илметокси]фенокси-фосфориламино}-пропионовой кислоты (1.1), который используется в качестве полуподукта синтеза его ацилпроизводных общей формулы 2 [Патент РФ 2534613 (2014)]. Известное соединение 1.1 испытывалось также в качестве потенциального противоракового препарата, однако оно показало по отношению к четырем раковым клеточным линиям (L1210, СЕМ, МР-2, ВхРС-3) низкую (IC₅₀>5 μM) активность [M. Slusarczyk, M.H. Lopez, J. Balzarini, at al. Application of ProTide Technology to Gemcitabine: A Successful Approach to Overcome the Key Cancer Resistance Mechanisms Leads to a New Agent (NUC-1031) in Clinical Development. J. Med. Chem. 2014, 57, 1531-1542].Known isopropyl ether (S) -2 - {[(2R, 3R, 5R) -5- (4-amino-2-oxo-2H-pyrimidin-1-yl) -4,4-difluoro-3-hydroxy- tetrahydrofuran-2-ylmethoxy] phenoxy-phosphorylamino} -propionic acid (1.1), which is used as an intermediate for the synthesis of its acyl derivatives of the general formula 2 [RF Patent 2534613 (2014)]. The known compound 1.1 was also tested as a potential anticancer drug, however, it showed low (IC ₅₀ > 5 μM) activity [M. in relation to four cancer cell lines (L1210, CEM, MP-2, BxRS-3) [M. Slusarczyk, MH Lopez, J. Balzarini, at al. Application of ProTide Technology to Gemcitabine: A Successful Approach to Overcome the Key Cancer Resistance Mechanisms Leads to a New Agent (NUC-1031) in Clinical Development. J. Med. Chem. 2014, 57, 1531-1542].

Известен также монофторзамещенный нуклеозид 3, обладающий слабой активностью (IC₉₀=19.15 μM) по отношению к генотипу 1b (GT1b) NS5B [WO 2008121634]Also known is monofluorosubstituted nucleoside 3, which has low activity (IC ₉₀ = 19.15 μM) with respect to genotype 1b (GT1b) NS5B [WO 2008121634]

Авторы данного изобретения неожиданно обнаружили, что известное соединение 1.1 оказалось мощным ингибитором NS5B (GT1b) с IC₅₀=13.1 nM и IC₉₀=28.2 nM (среднее из трех опытов), активность которого не только в 679 раз выше активности своего монофторзамещенного аналога 3, но и в ~5 выше активности PSI-7977 (IC₅₀=64.8 nM и IC₉₀=151.8 nM, в условиях, идентичных с условиями измерения активности соединения 1.1). Активность соединения 1.1 превышает также активность его ацильных аналогов 2 (IC₅₀ от 14.4 nM до 60.9 nM) [Патент РФ 2534613 (2014)].The authors of this invention unexpectedly found that the known compound 1.1 was a potent NS5B inhibitor (GT1b) with IC ₅₀ = 13.1 nM and IC ₉₀ = 28.2 nM (the average of three experiments), the activity of which is not only 679 times higher than the activity of its monofluoro-substituted analog 3, but also ~ 5 higher than the activity of PSI-7977 (IC ₅₀ = 64.8 nM and IC ₉₀ = 151.8 nM, under conditions identical with the conditions for measuring the activity of compound 1.1). The activity of compound 1.1 also exceeds the activity of its acyl analogues 2 (IC ₅₀ from 14.4 nM to 60.9 nM) [RF Patent 2534613 (2014)].

Предметом данного изобретения является нуклеозидный ингибитор РНК-полимеразы, представляющий собой алкиловый эфир (S)-2-{[(2R,3R,5R)-5-(4-амино-2-оксо-2Н-пиримидин-1-ил)-4,4-дифтор-3-гидрокси-тетрагидрофуран-2-илметокси]фенокси-фосфориламино}-пропионовой кислоты общей формулы 1 или его фармацевтически приемлемая сольThe subject of this invention is a nucleoside inhibitor of RNA polymerase, which is an alkyl ester of (S) -2 - {[(2R, 3R, 5R) -5- (4-amino-2-oxo-2H-pyrimidin-1-yl) - 4,4-difluoro-3-hydroxy-tetrahydrofuran-2-ylmethoxy] phenoxy-phosphorylamino} -propionic acid of the general formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof

где R¹ представляют собой C₁-C₄алкил.where R ¹ represent C ₁ -C ₄ alkyl.

Лучшие результаты достигаются, если нуклеозидный ингибитор РНК-полимеразы представляет собой изопропиловый эфир (S)-2-{[(2R,3R,5R)-5-(4-амино-2-оксо-2H-пиримидин-1-ил)-4,4-дифтор-3-гидрокси-тетрагидрофуран-2-илметокси]фенокси-фосфориламино}-пропионовой кислоты (1.1) или его фармацевтически приемлемую соль.Best results are achieved if the nucleoside inhibitor of RNA polymerase is (S) -2 - {[(2R, 3R, 5R) -5- (4-amino-2-oxo-2H-pyrimidin-1-yl) - isopropyl ester 4,4-difluoro-3-hydroxy-tetrahydrofuran-2-ylmethoxy] phenoxy-phosphorylamino} -propionic acid (1.1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

Предметом данного изобретения является активный компонент, обладающий свойствами нуклеозидного ингибитора РНК-полимеразы HCV NS5B, представляющий собой алкиловый эфир (S)-2-{[(2R,3R,5R)-5-(4-амино-2-оксо-2H-пиримидин-1-ил)-4,4-дифтор-3-гидрокси-тетрагидрофуран-2-илметокси]фенокси-фосфориламино}-пропионовой кислоты общей формулы 1 или его фармацевтически приемлемая соль.The subject of this invention is an active component having the properties of a nucleoside inhibitor of RNA polymerase HCV NS5B, which is an alkyl ester of (S) -2 - {[(2R, 3R, 5R) -5- (4-amino-2-oxo-2H- pyrimidin-1-yl) -4,4-difluoro-3-hydroxy-tetrahydrofuran-2-ylmethoxy] phenoxy-phosphorylamino} -propionic acid of the general formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

Более предпочтительным активным компонентом является изопропиловый эфир (S)-2-{[(2R,3R,5R)-5-(4-амино-2-оксо-2Н-пиримидин-1-ил)-4,4-дифтор-3-гидрокси-тетрагидрофуран-2-илметокси]фенокси-фосфориламино}-пропионовой кислоты (1.1) или его фармацевтически приемлемая соль.A more preferred active ingredient is (S) -2 - {[(2R, 3R, 5R) -5- (4-amino-2-oxo-2H-pyrimidin-1-yl) -4,4-difluoro-3 isopropyl ester -hydroxy-tetrahydrofuran-2-ylmethoxy] phenoxy-phosphorylamino} -propionic acid (1.1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

Предметом данного изобретения является фармацевтическая композиция для лечения и профилактики гепатита С в форме таблеток, капсул или инъекций, помещенных в фармацевтически приемлемую упаковку, не обязательно содержащая интерферон или пегилированный интерферон, ингибитор инозин-5-монофосфат дегидрогеназы, и/или ингибитор протеазы гепатита С NS3, и/или ингибитор протеазы гепатита С NS3/4A, и/или ингибитор РНК-полимеразы NS5A, включающая в терапевтически эффективном количестве соединение общей формулы 1 или его фармацевтически приемлемую соль.The subject of this invention is a pharmaceutical composition for the treatment and prevention of hepatitis C in the form of tablets, capsules or injections in a pharmaceutically acceptable package, optionally containing interferon or pegylated interferon, an inosine-5-monophosphate dehydrogenase inhibitor, and / or hepatitis C NS3 protease inhibitor and / or hepatitis C protease inhibitor NS3 / 4A and / or NS5A RNA polymerase inhibitor comprising a therapeutically effective amount of a compound of general formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof .

Предпочтительной является фармацевтическая композиция, в которой в качестве ингибитора инозин-5-монофосфата дегидрогеназы используют Рибамидин, в качестве ингибитора протеазы гепатита С NS3 используют Asunaprevir (BMS-650032), в качестве ингибитора протеазы гепатита С NS3/4A используют Sofosbuvir (ТМС435), а в качестве ингибитора РНК-полимеразы NS5A используют Daclatasvir (BMS-790052) или AV-4025. Использование такой композиции позволяет избежать возникновения резистентных форм HCV.A pharmaceutical composition is preferred in which Ribamidine is used as an inosine 5-monophosphate dehydrogenase inhibitor, Asunaprevir (BMS-650032) is used as a hepatitis C NS3 protease inhibitor, Sofosbuvir (TMS435) is used as an NS3 / 4A hepatitis C protease inhibitor, and An NS5A RNA polymerase inhibitor is Daclatasvir (BMS-790052) or AV-4025. The use of such a composition avoids the occurrence of resistant forms of HCV.

Более предпочтительной является также фармацевтическая композиция, содержащая в терапевтически эффективном количестве изопропиловый эфир (S)-2-{[(2R,3R,5R)-5-(4-амино-2-оксо-2Н-пиримидин-1-ил)-4,4-дифтор-3-гидрокси-тетрагидрофуран-2-илметокси]фенокси-фосфориламино}-пропионовой кислоты (1.1) или его фармацевтически приемлемую соль и гидрохлорид метилового эфира [(S)-1-((S)-2-{5-[4-(4-{2-[(S)-1-((S)-2-метоксикарбониламино-3-метил-бутирил)пирролидин-2-ил-3H-имидазол-4-ил]бута-1,3-диинил)фенил]-1Н-имидазол-2-ил}пирролидин-1-карбонил)-2-метил-пропил]}-карбаминовой кислоты (AV-4025) в качестве ингибитора NS5A по патенту RU 2452735 (2012).Also preferred is a pharmaceutical composition containing in a therapeutically effective amount of isopropyl ether (S) -2 - {[(2R, 3R, 5R) -5- (4-amino-2-oxo-2H-pyrimidin-1-yl) - 4,4-difluoro-3-hydroxy-tetrahydrofuran-2-ylmethoxy] phenoxy-phosphorylamino} -propionic acid (1.1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof and [(S) -1 - ((S) -2- {methyl ester hydrochloride 5- [4- (4- {2 - [(S) -1 - ((S) -2-methoxycarbonylamino-3-methyl-butyryl) pyrrolidin-2-yl-3H-imidazol-4-yl] buta-1 , 3-diynyl) phenyl] -1H-imidazol-2-yl} pyrrolidin-1-carbonyl) -2-methyl-propyl]} - carbamic acid (AV-4025) in honors NS5A inhibitor patent RU 2452735 (2012).

Предметом данного изобретения является лекарственное средство, содержащее в качестве активного начала эффективное количество соединения общей формулы 1 или его фармацевтически приемлемую соль для лечения любого состояния, обусловленного вирусом гепатита С.The subject of this invention is a medicament containing, as an active principle, an effective amount of a compound of general formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof for the treatment of any condition caused by hepatitis C virus.

Предпочтительным является лекарственное средство, содержащее в качестве активного начала эффективное количество изопропилового эфира (S)-2-{[(2R,3R,5R)-5-(4-амино-2-оксо-2Н-пиримидин-1-ил)-4,4-дифтор-3-гидрокси-тетрагидрофуран-2-илметокси]фенокси-фосфориламино}-пропионовой кислоты (1.1) или его фармацевтически приемлемую соль.Preferred is a drug containing as an active principle an effective amount of isopropyl ether (S) -2 - {[(2R, 3R, 5R) -5- (4-amino-2-oxo-2H-pyrimidin-1-yl) - 4,4-difluoro-3-hydroxy-tetrahydrofuran-2-ylmethoxy] phenoxy-phosphorylamino} -propionic acid (1.1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

Более предпочтительным является также лекарственное средство, содержащее в качестве активного начала эффективное количество изопропилового эфира (S)-2-{[(2R,3R,5R)-5-(4-амино-2-оксо-2H-пиримидин-1-ил)-4,4-дифтор-3-гидрокси-тетрагидрофуран-2-илметокси]фенокси-фосфориламино}-пропионовой кислоты (1.1) или его фармацевтически приемлемую соль и гидрохлорида метилового эфира [(S)-1-((S)-2-{5-[4-(4-{2-[(S)-1-((S)-2-метоксикарбониламино-3-метил-бутирил)пирролидин-2-ил-3H-имидазол-4-ил]бута-1,3-диинил)фенил]-1Н-имидазол-2-ил}пирролидин-1-карбонил)-2-метил-пропил]-карбаминовой кислоты (AV-4025).Also preferred is a medicament containing, as an active principle, an effective amount of isopropyl ether (S) -2 - {[(2R, 3R, 5R) -5- (4-amino-2-oxo-2H-pyrimidin-1-yl ) -4,4-difluoro-3-hydroxy-tetrahydrofuran-2-ylmethoxy] phenoxy-phosphorylamino} -propionic acid (1.1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof and methyl ester hydrochloride [(S) -1 - ((S) -2 - {5- [4- (4- {2 - [(S) -1 - ((S) -2-methoxycarbonylamino-3-methyl-butyryl) pyrrolidin-2-yl-3H-imidazol-4-yl] buta -1,3-diinyl) phenyl] -1H-imidazol-2-yl} pyrrolidin-1-carbonyl) -2-methyl-propyl] -carbamic acid (A V-4025).

Лекарственные средства могут вводиться перорально или парентерально (например, внутривенно, подкожно, внутрибрюшинно, местно или ректально). Клиническая дозировка активного компонента (субстанции), фармацевтической композиции или лекарственного комбинированного средства, включающих фармацевтически эффективное количество активного компонента, у пациентов может корректироваться в зависимости от терапевтической эффективности и биодоступности активных ингредиентов в организме, скорости их обмена и выведения из организма, а также в зависимости от возраста, пола и стадии заболевания пациента, при этом суточная доза у взрослых обычно составляет 10-500 мг, предпочтительно - 50-300 мг. Поэтому во время приготовления фармацевтических композиций по настоящему изобретению в виде единиц дозировки необходимо учитывать вышеназванную эффективную дозировку, при этом каждая единица дозировки препарата должна содержать 10-500 мг, предпочтительно - 50-300 мг. В соответствии с указаниями врача или фармацевта данные препараты могут приниматься несколько раз в течение определенных промежутков времени (предпочтительно - от одного до шести раз).Medicines may be administered orally or parenterally (e.g., intravenously, subcutaneously, intraperitoneally, topically or rectally). The clinical dosage of the active component (s), pharmaceutical composition or combination drug comprising a pharmaceutically effective amount of the active component in patients can be adjusted depending on the therapeutic efficacy and bioavailability of the active ingredients in the body, their metabolic rate and excretion from the body, as well as depending on the age, sex and stage of the patient’s disease, while the daily dose in adults is usually 10-500 mg, preferably 50-300 mg . Therefore, during the preparation of the pharmaceutical compositions of the present invention in the form of dosage units, the above effective dosage should be taken into account, with each dosage unit of the preparation containing 10-500 mg, preferably 50-300 mg. In accordance with the instructions of a doctor or pharmacist, these drugs can be taken several times during certain periods of time (preferably from one to six times).

Предметом данного изобретения является способ лечения заболевания, обусловленного вирусом гепатита С, который включает введение терапевтически эффективного количества соединения общей формулы 1, или его фармацевтически приемлемой соли, или фармацевтической композиции, содержащей соединения общей формулы 1 или его фармацевтически приемлемой соли.The subject of this invention is a method of treating a disease caused by hepatitis C virus, which comprises administering a therapeutically effective amount of a compound of general formula 1, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a pharmaceutical composition containing a compound of general formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

Более предпочтительным способом лечения заболевания, обусловленного вирусом гепатита С у субъектов, нуждающихся в этом, является способ, который включает введение терапевтически эффективного количества изопропилового эфира (S)-2-{[(2R,3R,5R)-5-(4-амино-2-оксо-2Н-пиримидин-1-ил)-4,4-дифтор-3-гидрокси-тетрагидрофуран-2-илметокси]фенокси-фосфориламино}-пропионовой кислоты (1.1) или его фармацевтически приемлемой соли.A more preferred method for treating hepatitis C virus disease in subjects in need thereof is a method that comprises administering a therapeutically effective amount of isopropyl ether (S) -2 - {[(2R, 3R, 5R) -5- (4-amino -2-oxo-2H-pyrimidin-1-yl) -4,4-difluoro-3-hydroxy-tetrahydrofuran-2-ylmethoxy] phenoxy-phosphorylamino} -propionic acid (1.1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

Более предпочтительным способом лечения заболевания, обусловленного вирусом гепатита С у субъектов, нуждающихся в этом, является также способ, который включает введение терапевтически эффективного количества изопропилового эфира (S)-2-{[(2R,3R,5R)-5-(4-амино-2-оксо-2Н-пиримидин-1-ил)-4,4-дифтор-3-гидрокси-тетрагидрофуран-2-илметокси]фенокси-фосфориламино}-пропионовой кислоты (1.1) или его фармацевтически приемлемой соли и гидрохлорида метилового эфира [(S)-l-((S)-2-{5-[4-(4-{2-[(S)-1-((S)-2-метоксикарбониламино-3-метил-бутирил)пирролидин-2-ил-3Н-имидазол-4-ил]бута-1,3-диинил)фенил]-1Н-имидазол-2-ил}пирролидин-1-карбонил)-2-метил-пропил]}-карбаминовой кислоты (AV-4025).A more preferred method for treating hepatitis C virus disease in subjects in need thereof is also a method which comprises administering a therapeutically effective amount of isopropyl ether (S) -2 - {[(2R, 3R, 5R) -5- (4- amino-2-oxo-2H-pyrimidin-1-yl) -4,4-difluoro-3-hydroxy-tetrahydrofuran-2-ylmethoxy] phenoxy-phosphorylamino} -propionic acid (1.1) or its pharmaceutically acceptable salt and methyl ester hydrochloride [(S) -l - ((S) -2- {5- [4- (4- {2 - [(S) -1 - ((S) -2-methoxycarbonylamino-3-methyl-butyryl) pyrrolidin- 2-yl-3H-imidazol-4-yl] buta-1,3-di nyl) phenyl] -1H-imidazol-2-yl} pyrrolidin-1-carbonyl) -2-methyl-propyl]} -carbamic acid (AV-4025).

Клиническая дозировка фармацевтической композиции для лечения и профилактики вирусных инфекций, включая гепатит С, в форме таблеток, капсул или инъекций, помещенных в фармацевтически приемлемую упаковку, не обязательно содержащей ингибитор инозин-5-монофосфат дегидрогеназы, и/или ингибитор протеазы гепатита С NS3, и/или ингибитор протеазы гепатита С NS3/4A, и/или ингибитор РНК-полимеразы NS5A, включающая соединение общей формулы 1 или его фармацевтически приемлемую соль, у пациентов может корректироваться в зависимости от: терапевтической эффективности и биодоступности активных ингредиентов в организме, скорости их обмена и выведения из организма, а также в зависимости от возраста, пола и стадии заболевания пациента, при этом суточная доза у взрослых обычно составляет 10~500 мг. Поэтому во время приготовления фармацевтических композиций по настоящему изобретению в виде единиц дозировки необходимо учитывать вышеназванную эффективную дозировку, при этом каждая единица дозировки препарата должна содержать 10~500 мг нового нуклеозидного ингибитора РНК-полимеразы HCV NS5B общей формулы 1 или его фармацевтически приемлемую соль. В соответствии с указаниями врача или фармацевта данные препараты могут приниматься несколько раз в течение определенных промежутков времени (предпочтительно - от одного до шести раз).A clinical dosage of a pharmaceutical composition for treating and preventing viral infections, including hepatitis C, in the form of tablets, capsules or injections in a pharmaceutically acceptable package, optionally containing an inosine-5-monophosphate dehydrogenase inhibitor and / or hepatitis C protease inhibitor NS3, and / or hepatitis C protease inhibitor NS3 / 4A, and / or NS5A RNA polymerase inhibitor, including a compound of general formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof, may be adjusted in patients depending on: therapeutic effect The effectiveness and bioavailability of the active ingredients in the body, the speed of their metabolism and excretion from the body, as well as depending on the age, sex and stage of the patient’s disease, while the daily dose in adults is usually 10 ~ 500 mg. Therefore, when preparing the pharmaceutical compositions of the present invention as dosage units, the above effective dosage should be taken into account, with each dosage unit containing 10 ~ 500 mg of a new nucleoside HCV NS5B RNA polymerase inhibitor of general formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof. In accordance with the instructions of a doctor or pharmacist, these drugs can be taken several times during certain periods of time (preferably from one to six times).

Для комбинированной терапии любые классы агентов, которые могут оказаться полезными, будучи объединены с соединениями настоящего изобретения в фармацевтическую композицию, и которые могут подразумевать, например, нуклеозидные и ненуклеозидные ингибиторы HCV-полимеразы, ингибиторы протеазы, ингибиторы геликазы и медицинские агенты, которые функционально ингибируют внутренний рибосомный сайт вхождения (IRES) и другие медикаменты, которые ингибируют прикрепление или вхождение вируса в клетки, транскрибирование HCV RNA, репликацию, созревание или ослабление вируса. Специфические соединения в этих классах и полезные в этом изобретении включают, но не ограничивают макроциклические, гетероциклические и линейные ингибиторы протеазы HCV, такие как telaprevir (VX-950), boceprevir (SCH-503034), narlaprevir (SCH-900518), ITMN-191 (R-7227), TMC-435350 (a.k.a. TMC-435), MK-7009, BI-201335, BI-2061 (ciluprevir), ACH-1625, ACH-1095 (HCV NS4A ингибитор сопутствующего фактора протеазы) VX-500, VX-813, PHX-1766, PHX2054, IDX-136, IDX-316, АВТ-450 EP-013420 (и родственные) и VBY-376; ингибиторы нуклеозидной HCV-полимеразы (репликазы), полезные в данном изобретении, включают, но не ограничены следующим: R7128, IDX-184, IDX-102, R1479, UNX-08189, PSI-6130, PSI-938 и PSI-879 и различные другие нуклеозиды и нуклеотидные аналоги и HCV-ингибиторы, включающие (но не ограничивающие) происходящие от 2′-С-метил модифицированные нуклеозиды и нуклеотиды; и 7′-деаза модифицированные нуклеозиды и нуклеотиды. Ингибиторы не-нуклеозидной HCV-полимеразы (репликазы), полезные в данном изобретении, включают, но не ограничены: HCV-796, HCV-371, VCH-759, VCH-916, VCH-222, ANA-598, МК-3281, АВТ-333, АВТ-072, PF-00868554, BI-207127, GS-9190, А-837093, JKT-109, GL-59728 и GL-60667.For combination therapy, any classes of agents that may be useful when combined with the compounds of the present invention in a pharmaceutical composition, and which may include, for example, nucleoside and non-nucleoside HCV polymerase inhibitors, protease inhibitors, helicase inhibitors and medical agents that functionally inhibit internal ribosomal entry site (IRES) and other drugs that inhibit the attachment or entry of the virus into cells, transcription of HCV RNA, replication, maturation or attenuated viruses. Specific compounds in these classes and useful in this invention include, but are not limited to, macrocyclic, heterocyclic and linear HCV protease inhibitors such as telaprevir (VX-950), boceprevir (SCH-503034), narlaprevir (SCH-900518), ITMN-191 (R-7227), TMC-435350 (aka TMC-435), MK-7009, BI-201335, BI-2061 (ciluprevir), ACH-1625, ACH-1095 (HCV NS4A concomitant protease factor inhibitor) VX-500, VX-813, PHX-1766, PHX2054, IDX-136, IDX-316, ABT-450 EP-013420 (and related) and VBY-376; nucleoside HCV polymerase inhibitors (replicases) useful in the invention include, but are not limited to: R7128, IDX-184, IDX-102, R1479, UNX-08189, PSI-6130, PSI-938 and PSI-879 and various other nucleosides and nucleotide analogs and HCV inhibitors, including (but not limited to) derived from 2′-C-methyl modified nucleosides and nucleotides; and 7′-dease modified nucleosides and nucleotides. Non-nucleoside HCV polymerase inhibitors (replicases) useful in the present invention include, but are not limited to: HCV-796, HCV-371, VCH-759, VCH-916, VCH-222, ANA-598, MK-3281, АВТ-333, АВТ-072, PF-00868554, BI-207127, GS-9190, А-837093, JKT-109, GL-59728 and GL-60667.

Кроме того, новые нуклеозидные ингибиторы РНК-полимеразы HCV NS5B общей формулы 1 или их фармацевтически приемлемые соли могут быть использованы в фармацевтической композиции в комбинации с антагонистами циклофиллина и имунофиллина (например, без ограничений DEBIO соединения, NM-811, а также циклоспорин и его производные), ингибиторы киназ, ингибиторы протеинов теплового шока (напр. HSP90, HSP70), другие иммуномодуляторные агенты, которые могут включать без ограничения интерфероны (альфа-, бета-, омега-, гамма-, lambda или синтетические), такие как Intron A™, Roferon- A™, Canferon-A300™, Advaferon™, Infergen™, Humoferon™, Sumiferon MP™, Alfaferon™, IFN-β™, Feron™, и подобные интерфероновые соединения, дериватизированные полиэтиленгликолем (pegylated), такие как: PEG interferon-α-2a (Pegasys™), PEG interferon-α-2b (PEGIntron™), pegylated IFN-α-con 1 и подобные; пролонгированные формулы и производные интерфероновых соединений, такие как альбумин-конденсированный интерферон, Albuferon™, Locteron™, и подобные; интерфероны с различными типами контролируемой доставки (напр, 1ТСА-638, омега-интерферон, доставляемый DUROS подкожной системой доставки); соединения, которые стимулируют синтез интерферона в клетках, такие как resiquimod и подобные; интерлейкины; соединения, которые улучшают развитие отклика клетки type 1 helper T, такие как SCV-07 и подобные; TOLL- подобные агонисты рецепторов, такие как: CpG-10101 (action), isotorabine, ANA773 и подобные; thymosin α-1, ANA-245 и ANA-246, гистамин дигидрохлорид, propagermanium; tetrachlorodecaoxide; ampligen; IMP-321; KRN-7000; антитела, такие как: civacir, XTL-6865 и подобные профилактические и терапевтические вакцины, такие как: Inno Vac, HCV E1E2/MF59 и подобные. В добавление, любой из вышеописанных методов, включающий введение NS5B ингибитора, агонист рецептора интерферона типа 1 (напр. IFN-α) и агонист рецептора интерферона типа Π (напр. IFN-γ) могут быть усилены введением эффективного количества TNF-α антагониста. Типичные неограничивающие TNF-α антагонисты, которые подходят для использования в такой комбинированной терапии, - ENBREL™ и HUMIRA™.In addition, the novel nucleoside HCV NS5B RNA polymerase inhibitors of general formula 1 or their pharmaceutically acceptable salts can be used in the pharmaceutical composition in combination with cyclophillin and imunophylline antagonists (for example, without limitation DEBIO compounds, NM-811, as well as cyclosporin and its derivatives ), kinase inhibitors, heat shock protein inhibitors (e.g. HSP90, HSP70), other immunomodulatory agents, which may include, but are not limited to, interferons (alpha, beta, omega, gamma, lambda or synthetic) such as Intron A ™ Rofero n-A ™, Canferon-A300 ™, Advaferon ™, Infergen ™, Humoferon ™, Sumiferon MP ™, Alfaferon ™, IFN-β ™, Feron ™, and similar pegylated derivatives, such as: PEG interferon -α-2a (Pegasys ™), PEG interferon-α-2b (PEGIntron ™), pegylated IFN-α-con 1 and the like; prolonged formulas and derivatives of interferon compounds, such as albumin-fused interferon, Albuferon ™, Locteron ™, and the like; interferons with different types of controlled delivery (e.g. 1TCA-638, omega-interferon delivered by DUROS subcutaneous delivery system); compounds that stimulate the synthesis of interferon in cells, such as resiquimod and the like; interleukins; compounds that enhance the development of the response of a type 1 helper T cell, such as SCV-07 and the like; TOLL-like receptor agonists, such as: CpG-10101 (action), isotorabine, ANA773 and the like; thymosin α-1, ANA-245 and ANA-246, histamine dihydrochloride, propagermanium; tetrachlorodecaoxide; ampligen; IMP-321; KRN-7000; antibodies, such as: civacir, XTL-6865 and similar prophylactic and therapeutic vaccines, such as: Inno Vac, HCV E1E2 / MF59 and the like. In addition, any of the above methods, including the administration of an NS5B inhibitor, an interferon receptor agonist type 1 (e.g. IFN-α) and an interferon receptor agonist type типа (e.g. IFN-γ) can be enhanced by the administration of an effective amount of a TNF-α antagonist. Typical non-limiting TNF-α antagonists that are suitable for use in such combination therapy are ENBREL ™ and HUMIRA ™.

В дополнение, новый нуклеозидный ингибитор РНК-полимеразы HCV NS5B общей формулы 1 или его фармацевтически приемлемая соль могут быть использованы в фармацевтической композиции в комбинации с антипротозоанами, а другие антивирусы считаются эффективными при лечении HCV-инфекции, такие как: пролекарство nitazoxanide. Nitazoxanide может быть использован как агент в комбинации с соединениями, раскрытыми в этом изобретении, а также в комбинации с другими агентами, полезными при лечении HCV-инфекции, такими как: peginterferon alfa-2a и ribavarin (напр. Rossignol, JF и Keeffe, ЕВ, Future Microbiol. 3:539-545, 2008).In addition, the novel HCV NS5B RNA polymerase inhibitor of general formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof can be used in combination with antiprotozoans in a pharmaceutical composition, and other antiviruses are considered effective in the treatment of HCV infection, such as the nitazoxanide prodrug. Nitazoxanide can be used as an agent in combination with the compounds disclosed in this invention, as well as in combination with other agents useful in the treatment of HCV infection, such as: peginterferon alfa-2a and ribavarin (e.g. Rossignol, JF and Keeffe, EB Future Microbiol. 3: 539-545, 2008).

Новый нуклеозидный ингибитор РНК-полимеразы HCV NS5B общей формулы 1 или его фармацевтически приемлемая соль могут быть также использованы в фармацевтической композиции с альтернативными формами интерферонов и пегилированных интерферонов, ribavirin или его аналоги (напр. Tarabavarin, levovirion), microRNA, маловредные RNA-соединения (напр. SIRPLEX-140-N и подобные), аналоги нуклеотидов или нуклеозидов, иммуноглобулины, гепатопротекторы, противовоспалительные агенты и другие ингибиторы NS5B. Ингибиторы других мишеней в жизненном цикле HCV включают ингибиторы NS3 геликазы; ингибиторы NS4A кофактора, ингибиторы антисмысловых олигонуклеотидов, такие как: ISIS-14803, AVI-4065 и подобные; вектор-зашифрованная короткая «шпилька» RNA (shRNA); HCV специфические рибозимы такие как: heptazyme, RPI, 139199 и подобные; ингибиторы вхождения, такие как: НереХ-С, HuMax-НерС и подобные; ингибиторы альфа-глюкозидазы, такие как: celgosivir, UT-231B и подобные; КРЕ-02003002 и BIVN 401 и IMPDH ингибиторы. Другие показательные соединения - ингибиторы HCV включают ингибиторы, раскрытые в известных научных и патентных публикациях.The novel nucleoside HCV NS5B RNA polymerase inhibitor of general formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof can also be used in a pharmaceutical composition with alternative forms of interferons and pegylated interferons, ribavirin or its analogs (e.g. Tarabavarin, levovirion), microRNA, and harmless RNA compounds ( e.g. SIRPLEX-140-N and the like), nucleotide or nucleoside analogs, immunoglobulins, hepatoprotectors, anti-inflammatory agents and other NS5B inhibitors. Inhibitors of other targets in the HCV life cycle include NS3 helicase inhibitors; cofactor NS4A inhibitors, antisense oligonucleotide inhibitors, such as: ISIS-14803, AVI-4065 and the like; vector-encrypted short hairpin RNA (shRNA); HCV specific ribozymes such as: heptazyme, RPI, 139199 and the like; entry inhibitors such as: HepX-C, HuMax-Heps and the like; alpha glucosidase inhibitors such as: celgosivir, UT-231B and the like; KRE-02003002 and BIVN 401 and IMPDH inhibitors. Other representative compounds, HCV inhibitors include the inhibitors disclosed in well-known scientific and patent publications.

Дополнительно, комбинации, например, рибавирина и интеферона могут быть введены как комбинированная терапия, по крайней мере, с одним новым нуклеозидным ингибитором РНК-полимеразы HCV NS5B общей формулы 1 или его фармацевтически приемлемой солью. Настоящее изобретение не ограничивается вышеуказанными классами или соединениями и рассматривает известные и новые соединения и комбинации биологически активных агентов. Имеется в виду, что комбинированные терапии настоящего изобретения включают любые химические совместимые комбинации нового нуклеозидного ингибитора РНК-полимеразы HCV NS5B общей формулы 1 или его фармацевтически приемлемой соли с другими соединениями этой патентуемой группы или другими соединениями вне этой патентной группы, а также комбинация не исключает антивирусную активность соединения этой патентной группы или антивирусную активность самой фармацевтической композиции.Additionally, combinations of, for example, ribavirin and interferon can be introduced as a combination therapy with at least one new nucleoside HCV NS5B RNA polymerase inhibitor of general formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof. The present invention is not limited to the above classes or compounds, and contemplates known and novel compounds and combinations of biologically active agents. It is understood that combination therapies of the present invention include any chemical compatible combinations of the novel nucleoside HCV NS5B RNA polymerase inhibitor of general formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof with other compounds of this patented group or other compounds outside this patent group, and the combination does not exclude antiviral the activity of the compounds of this patent group or the antiviral activity of the pharmaceutical composition itself.

Комбинированная терапия может быть последовательной, т.е. лечение сначала одним агентом, а затем другим (например, когда каждый этап лечения подразумевает другое соединение настоящего изобретения, или когда один этап лечения включает соединение настоящего изобретения, а другой подразумевает один или более биологически активных агентов) или, может быть, лечение с обоими агентами одновременно. Последовательная терапия может включать существенное время после завершения первой терапии и до начала второй терапии. Лечение обоими агентами в одно и то же время может осуществляться в одной ежедневной дозе или в разных дозах. Комбинированная терапия не нуждается в ограничении двумя агентами и может включать три или более агентов. Дозы для одновременной и последовательной комбинированной терапии будут зависеть от всасывания, распределения, скоростей обмена веществ и выведения компонентов комбинированной терапии, а также других факторов, хорошо известных специалисту. Размер дозы будет также изменяться в зависимости от тяжести состояния, которое нужно облегчить. Следует понимать, что для каждого особого субъекта специфическая схема приема доз и расписание могут быть отрегулированы по времени в соответствии с потребностью индивидуума и профессиональным суждением лица, которое лечит или наблюдает за лечением методом комбинированной терапии.Combination therapy may be sequential, i.e. treatment first with one agent and then with another (for example, when each treatment step involves a different compound of the present invention, or when one treatment step includes a compound of the present invention and the other involves one or more biologically active agents) or, maybe, treatment with both agents at the same time. Sequential therapy may include a significant amount of time after the completion of the first therapy and before the start of the second therapy. Treatment with both agents at the same time can be carried out in a single daily dose or in different doses. Combination therapy does not need to be limited to two agents and may include three or more agents. Doses for simultaneous and sequential combination therapy will depend on absorption, distribution, metabolic rates and excretion of the components of combination therapy, as well as other factors well known to the specialist. The size of the dose will also vary depending on the severity of the condition that needs to be alleviated. It should be understood that for each particular subject, the specific dosage regimen and schedule can be adjusted in time in accordance with the needs of the individual and the professional judgment of the person who treats or monitors the treatment using the combination therapy method.

Несмотря на то, что вышеприведенное изобретение было описано в некоторых деталях с помощью иллюстраций и примеров с целью облегчить понимание, для специалиста в этой области совершенно очевидно, что с учетом основной идеи этого изобретения возможны некоторые изменения и модификации, не отклоняясь от цели и объема изобретения, как определено в приложенной формуле изобретения.Despite the fact that the above invention has been described in some detail with the help of illustrations and examples in order to facilitate understanding, for a person skilled in this field it is obvious that, taking into account the main idea of this invention, some changes and modifications are possible without deviating from the purpose and scope of the invention as defined in the attached claims.

Представленные ниже примеры иллюстрируют, но не ограничивают данное изобретение.The following examples illustrate but do not limit the invention.

Пример 1. Способ получения алкил (S)-2-{[(2R,3R,5R)-5-(4-амино-2-оксо-2H-пиримидин-1-ил)-4,4-дифтор-3-гидрокси-тетрагидрофуран-2-илметокси]фенокси-фосфориламино}-пропионатов общей формулы 1. Раствор 1,83 ммоль 4-амино-1-((2R,4R,5R)-3,3-дифтор-4-гидрокси-5-гидроксиметил-тетрагидрофуран-2-ил)-lH-пиримидин-2-она и 10,98 ммоль (875 мкл) N-метилимидазола в 10 мл ТГФ перемешивают 30 мин при 0°C, добавляют по каплям раствор 5,49 ммоль (S)-алкил-2-(хлор(фенокси)фосфориламино)пропионата в 10 мл дихлорметана при 0°C и перемешивают в течение 16 часов при комнатной температуре. К реакционной массе добавляют 0,3 мл метанола, перемешивают 10 мин. Затем к реакционной массе добавляют 20 мл этилацетата, промывают 5% соляной кислотой, нас. раствором NaHCO₃, сушат над NA₂SO₄ и упаривают в вакууме. Остаток хроматографируют на силикагеле, элюент хлороформ:метанол 9:1. Если необходимо, проводят дополнительную очистку при помощи ВЭЖХ без кислоты. Получают целевой продукт общей формулы 1, в том числе: изопропил (S)-2-{[(2R,3R,5R)-5-(4-амино-2-оксо-2H-пиримидин-l-ил)-4,4-дифтор-3-гидрокси-тетрагидрофуран-2-илметокси]фенокси-фосфориламино}-пропионат (1.1), LC-MS m/e 533 (М+1), ¹H ЯМР (DMSO-d₆, 400 МГц):7,70 (д, J=9,6 Гц, 1H), 7,40 (м, 4Н), 7,21 (м, 3Н), 6,30 (м, 1Н), 6,20 (м, 1Н), 5,80 (д, J=9,6 Гц, 1Н), 5,20 (уш. с, 1Н), 5,01 (м, 1Н), 4,86 (м, 1Н), 4,05 (м, 1Н), 3,78 (м, 2Н), 3,61 (м, 1Н), 1,25 (м, 3Н), 1,16 (м, 6Н); метил (S)-2-{[(2R,3R,5R)-5-(4-амино-2-оксо-2Н-пиримидин-1-ил)-4,4-дифтор-3-гидрокси-тетрагидрофуран-2-илметокси]фенокси-фосфориламино}-пропионат (1.2), LC-MS m/r 505 (М+1).Example 1. The method of producing alkyl (S) -2 - {[(2R, 3R, 5R) -5- (4-amino-2-oxo-2H-pyrimidin-1-yl) -4,4-difluoro-3- hydroxy-tetrahydrofuran-2-ylmethoxy] phenoxy-phosphorylamino} -propionates of the general formula 1. A solution of 1.83 mmol of 4-amino-1 - ((2R, 4R, 5R) -3,3-difluoro-4-hydroxy-5- hydroxymethyl-tetrahydrofuran-2-yl) -lH-pyrimidin-2-one and 10.98 mmol (875 μl) of N-methylimidazole in 10 ml of THF are stirred for 30 minutes at 0 ° C, a solution of 5.49 mmol is added dropwise (S ) -alkyl-2- (chloro (phenoxy) phosphorylamino) propionate in 10 ml of dichloromethane at 0 ° C and stirred for 16 hours at room temperature. 0.3 ml of methanol is added to the reaction mass, stirred for 10 minutes. Then to the reaction mass add 20 ml of ethyl acetate, washed with 5% hydrochloric acid, us. NaHCO ₃ solution, dried over NA ₂ SO ₄ and evaporated in vacuo. The residue was chromatographed on silica gel, eluent chloroform: methanol 9: 1. If necessary, carry out additional purification using HPLC without acid. Get the target product of General formula 1, including: isopropyl (S) -2 - {[(2R, 3R, 5R) -5- (4-amino-2-oxo-2H-pyrimidin-l-yl) -4, 4-difluoro-3-hydroxy-tetrahydrofuran-2-ylmethoxy] phenoxyphosphorylamino} propionate (1.1), LC-MS m / e 533 (M + 1), ¹ H NMR (DMSO-d ₆ , 400 MHz): 7.70 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 7.40 (m, 4H), 7.21 (m, 3H), 6.30 (m, 1H), 6.20 (m, 1H ), 5.80 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 5.20 (br.s, 1H), 5.01 (m, 1H), 4.86 (m, 1H), 4.05 (m, 1H), 3.78 (m, 2H), 3.61 (m, 1H), 1.25 (m, 3H), 1.16 (m, 6H); methyl (S) -2 - {[(2R, 3R, 5R) -5- (4-amino-2-oxo-2H-pyrimidin-1-yl) -4,4-difluoro-3-hydroxy-tetrahydrofuran-2 -ylmethoxy] phenoxy-phosphorylamino} -propionate (1.2), LC-MS m / r 505 (M + 1).

Пример 2. Фармацевтическая композиция в форме таблеток. Смешивают 34 г крахмала, 34 г измельченной лактозы, 10 г талька и 20 г изопропил (S)-2-{[(2R,3R,5R)-5-(4-амино-2-оксо-2Н-пиримидин-1-ил)-4,4-дифтор-3-гидрокси-тетрагидрофуран-2-илметокси]фенокси-фосфориламино}-пропионата (1.1). Полученный брусок измельчают в гранулы и просеивают через сита, собирая гранулы размером 14-16 меш. Полученные гранулы таблетируют в подходящую форму таблетки весом 600 мг каждая.Example 2. A pharmaceutical composition in the form of tablets. 34 g of starch, 34 g of ground lactose, 10 g of talc and 20 g of isopropyl (S) -2 - {[(2R, 3R, 5R) -5- (4-amino-2-oxo-2H-pyrimidin-1- il) -4,4-difluoro-3-hydroxy-tetrahydrofuran-2-ylmethoxy] phenoxyphosphorylamino} propionate (1.1). The resulting bar is crushed into granules and sieved through sieves, collecting granules with a size of 14-16 mesh. The granules obtained are tabletted into a suitable tablet form weighing 600 mg each.

Пример 3. Фармацевтическая композиция в форме таблеток. Смешивают 34 г крахмала, 34 г измельченной лактозы, 10 г талька и 20 г изопропил (S)-2-{[(2R,3R,5R)-5-(4-амино-2-оксо-2Н-пиримидин-1-ил)-4,4-дифтор-3-гидрокси-тетрагидрофуран-2-илметокси]фенокси-фосфориламино}-пропионата (1.1) и 2 г гидрохлорида метилового эфира [(S)-1-((S)-2-{5-[4-(4-{2-[(S)-1-((S)-2-метоксикарбониламино-3-метил-бутирил)пирролидин-2-ил-3Н-имидазол-4-ил]бута-1,3-диинил)фенил]-1Н-имидазол-2-ил}пирролидин-1-карбонил)-2-метил-пропил]}-карбаминовой кислоты (AV-4025). Полученный брусок измельчают в гранулы и просеивают через сита, собирая гранулы размером 14-16 меш. Полученные гранулы таблетируют в подходящую форму таблетки весом 600 мг каждая.Example 3. A pharmaceutical composition in the form of tablets. 34 g of starch, 34 g of ground lactose, 10 g of talc and 20 g of isopropyl (S) -2 - {[(2R, 3R, 5R) -5- (4-amino-2-oxo-2H-pyrimidin-1- il) -4,4-difluoro-3-hydroxy-tetrahydrofuran-2-ylmethoxy] phenoxy-phosphorylamino} propionate (1.1) and 2 g of methyl ester hydrochloride [(S) -1 - ((S) -2- {5 - [4- (4- {2 - [(S) -1 - ((S) -2-methoxycarbonylamino-3-methyl-butyryl) pyrrolidin-2-yl-3H-imidazol-4-yl] buta-1, 3-diinyl) phenyl] -1H-imidazol-2-yl} pyrrolidin-1-carbonyl) -2-methyl-propyl]} -carbamic acid (AV-4025). The resulting bar is crushed into granules and sieved through sieves, collecting granules with a size of 14-16 mesh. The granules obtained are tabletted into a suitable tablet form weighing 600 mg each.

Пример 4. Фармацевтическая композиция в форме таблеток. Смешивают 34 г крахмала, 34 г измельченной лактозы, 10 г талька и 20 г изопропил (S)-2-{[(2R,3R,5R)-5-(4-амино-2-оксо-2Н-пиримидин-1-ил)-4,4-дифтор-3-гидрокси-тетрагидрофуран-2-илметокси]фенокси-фосфориламино}-пропионата (1.1). Полученный брусок измельчают в гранулы и просеивают через сита, собирая гранулы размером 14-16 меш. Полученные гранулы таблетируют в подходящую форму таблетки весом 600 мг каждая, которые используют совместно с таблетками AV-4025.Example 4. A pharmaceutical composition in the form of tablets. 34 g of starch, 34 g of ground lactose, 10 g of talc and 20 g of isopropyl (S) -2 - {[(2R, 3R, 5R) -5- (4-amino-2-oxo-2H-pyrimidin-1- il) -4,4-difluoro-3-hydroxy-tetrahydrofuran-2-ylmethoxy] phenoxyphosphorylamino} propionate (1.1). The resulting bar is crushed into granules and sieved through sieves, collecting granules with a size of 14-16 mesh. The granules obtained are tabletted into a suitable tablet form weighing 600 mg each, which are used in conjunction with the AV-4025 tablets.

Пример 5. Фармацевтическая композиция в форме таблеток. Смешивают 34 г крахмала, 34 г измельченной лактозы, 10 г талька и 20 г изопропил (S)-2-{[(2R,3R,5R)-5-(4-амино-2-оксо-2Н-пиримидин-1-ил)-4,4-дифтор-3-гидрокси-тетрагидрофуран-2-илметокси]фенокси-фосфориламино}-пропионата (1.1). Полученный брусок измельчают в гранулы и просеивают через сита, собирая гранулы размером 14-16 меш. Полученные гранулы таблетируют в подходящую форму таблетки весом 600 мг каждая, которые используют совместно с таблетками Рибавирина.Example 5. A pharmaceutical composition in the form of tablets. 34 g of starch, 34 g of ground lactose, 10 g of talc and 20 g of isopropyl (S) -2 - {[(2R, 3R, 5R) -5- (4-amino-2-oxo-2H-pyrimidin-1- il) -4,4-difluoro-3-hydroxy-tetrahydrofuran-2-ylmethoxy] phenoxyphosphorylamino} propionate (1.1). The resulting bar is crushed into granules and sieved through sieves, collecting granules with a size of 14-16 mesh. The granules obtained are tabletted into a suitable tablet form weighing 600 mg each, which are used in conjunction with Ribavirin tablets.

Пример 6. Фармацевтическая композиция в форме капсул. Тщательно смешивают изопропил (S)-2-{[(2R,3R,5R)-5-(4-амино-2-оксо-2H-пиримидин-1-ил)-4,4-дифтор-3-гидрокси-тетрагидрофуран-2-илметокси]фенокси-фосфориламино}-пропионат (1.1) с порошком лактозы в соотношении 2:1. Полученную порошкообразную смесь упаковывают по 300 мг в желатиновые капсулы подходящего размера.Example 6. A pharmaceutical composition in the form of capsules. Isopropyl (S) -2 - {[(2R, 3R, 5R) -5- (4-amino-2-oxo-2H-pyrimidin-1-yl) -4,4-difluoro-3-hydroxy-tetrahydrofuran is thoroughly mixed -2-ylmethoxy] phenoxy-phosphorylamino} -propionate (1.1) with lactose powder in a ratio of 2: 1. The resulting powder mixture is packaged in 300 mg in a suitable size gelatin capsule.

Пример 7. Фармацевтическая композиция в форме капсул. Тщательно смешивают изопропил (S)-2-{[(2R,3R,5R)-5-(4-амино-2-оксо-2H-пиримидин-1-ил)-4,4-дифтор-3-гидрокси-тетрагидрофуран-2-илметокси]фенокси-фосфориламино}-пропионат (1.1) с порошком лактозы в соотношении 2:1. Полученную порошкообразную смесь упаковывают по 300 мг в желатиновые капсулы подходящего размера, которые используют совместно с таблетками или капсулами AV-4025.Example 7. A pharmaceutical composition in the form of capsules. Isopropyl (S) -2 - {[(2R, 3R, 5R) -5- (4-amino-2-oxo-2H-pyrimidin-1-yl) -4,4-difluoro-3-hydroxy-tetrahydrofuran is thoroughly mixed -2-ylmethoxy] phenoxy-phosphorylamino} -propionate (1.1) with lactose powder in a ratio of 2: 1. The resulting powder mixture is packaged in 300 mg in a suitable size gelatin capsule, which is used in conjunction with tablets or capsules AV-4025.

Пример 8. Фармацевтическая композиция в форме капсул. Тщательно смешивают изопропил (S)-2-{[(2R,3R,5R)-5-(4-амино-2-оксо-2Н-пиримидин-1-ил)-4,4-дифтор-3-гидрокси-тетрагидрофуран-2-илметокси]фенокси-фосфориламино}-пропионат (1.1) и с порошком лактозы в соотношении 2:1. Полученную порошкообразную смесь упаковывают по 300 мг в желатиновые капсулы подходящего размера, которые используют совместно с таблетками Рибавирина.Example 8. A pharmaceutical composition in the form of capsules. Isopropyl (S) -2 - {[(2R, 3R, 5R) -5- (4-amino-2-oxo-2H-pyrimidin-1-yl) -4,4-difluoro-3-hydroxy-tetrahydrofuran is thoroughly mixed -2-ylmethoxy] phenoxy-phosphorylamino} -propionate (1.1) and with lactose powder in a ratio of 2: 1. The resulting powdery mixture is packaged in 300 mg in a suitable size gelatin capsule, which is used in conjunction with Ribavirin tablets.

Пример 9. Фармацевтическая композиция в форме капсул. Тщательно смешивают изопропил (S)-2-{[(2R,3R,5R)-5-(4-амино-2-оксо-2Н-пиримидин-1-ил)-4,4-дифтор-3-гидрокси-тетрагидрофуран-2-илметокси]фенокси-фосфориламино}-пропионат (1.1) и AV-4025 с порошком лактозы в соотношении 2: 0,2: 1. Полученную порошкообразную смесь упаковывают по 320 мг в желатиновые капсулы подходящего размера.Example 9. A pharmaceutical composition in the form of capsules. Isopropyl (S) -2 - {[(2R, 3R, 5R) -5- (4-amino-2-oxo-2H-pyrimidin-1-yl) -4,4-difluoro-3-hydroxy-tetrahydrofuran is thoroughly mixed -2-ylmethoxy] phenoxy-phosphorylamino} -propionate (1.1) and AV-4025 with lactose powder in a ratio of 2: 0.2: 1. The resulting powder mixture is packaged in 320 mg gelatin capsules of the appropriate size.

Пример 10. Фармацевтическая композиция в форме капсул. Тщательно смешивают изопропил (S)-2-{[(2R,3R,5R)-5-(4-амино-2-оксо-2Н-пиримидин-1-ил)-4,4-дифтор-3-гидрокси-тетрагидрофуран-2-илметокси]фенокси-фосфориламино}-пропионат (1.1) и AV-4025 с порошком лактозы в соотношении 2: 0,2: 1. Полученную порошкообразную смесь упаковывают по 640 мг в желатиновые капсулы подходящего размера.Example 10. A pharmaceutical composition in the form of capsules. Isopropyl (S) -2 - {[(2R, 3R, 5R) -5- (4-amino-2-oxo-2H-pyrimidin-1-yl) -4,4-difluoro-3-hydroxy-tetrahydrofuran is thoroughly mixed -2-ylmethoxy] phenoxy-phosphorylamino} -propionate (1.1) and AV-4025 with lactose powder in a ratio of 2: 0.2: 1. The resulting powdery mixture was packaged in 640 mg gelatin capsules of the appropriate size.

Пример 11. Определение противовирусной активности (EC₅₀) нуклеозидных ингибиторов РНК-полимеразы HCV NS5B общей формулы 1.Example 11. Determination of antiviral activity (EC ₅₀ ) of nucleoside inhibitors of HCV NS5B RNA polymerase of general formula 1.

Противовирусную активность (EC₅₀) нуклеозидных ингибиторов РНК-полимеразы HCV NS5B общей формулы 1 (далее - тестируемые вещества) определяли в клеточной линии гепатомы человека Huh7, содержащей субгеномный РНК-репликон HCV (генотип 1b, 1а и 2а). Для количественного определения вирусной репликации был использован вариант иммунного теста ИФА на вирусный кор-антиген в 96-луночном формате. Цитотоксичность (ЦК₅₀) тестируемых веществ оценивали в параллельном режиме. В качестве препарата сравнения использовался PSI-7977. Клетки Huh7 высевались в 96-луночные планшеты (7.5×103 клеток на лунку в 100 мкл питательной среды). Растворы тестируемых соединений в среде ДМЕМ {DMEM) IX; Источник: Cellgro; Каталог: 10-013-CV} готовились непосредственно перед использованием. Всего готовилось одиннадцать серийных трехкратных разведений с концентрацией от 20 нМ до 0,2 пМ. Через 4 часа после высевания клеток серийные разведения препаратов добавлялись к клеткам (100 мкл на лунку). Конечная концентрация тестируемых соединений составляла от 10 нМ до 0,1 пМ, а ДМСО - 0.5%. При необходимости исследовались более высокие концентрации тестируемых веществ. Каждое разведение препарата тестировалось на двух идентичных лунках. Далее клетки инкубировали в течение трех дней при 37°C/5% CO₂. Клетки фиксировали добавлением 250 мкл/лунку смеси ацетон/метанол (1:1). Через 1 минуту клетки трижды промывали раствором PBS (Phosphate Buffered Saline). После этого клетки блокировали добавлением 150 мкл/лунку 10% фетальной телячьей сыворотки в растворе PBS на 1 час при комнатной температуре. Далее клетки инкубировали с мышиными моноклональными антителами к кор-антигену HCV, клон С7-50 (Источник: Affinity BioReagents; Каталог: МА1-080) (100 мкл/лунку, рабочее разведение - 1:500 в 10% фетальной телячьей сыворотке в растворе PBS) в течение двух часов при 37°C. Клетки промывали 6 раз раствором PBS/0.05% Твин 20, после чего инкубировали в течение 1 часа с антителами козы к иммуноглобулинам мыши (конъюгированными с пероксидазой хрена, 100 мкл/лунку, рабочее разведение - 1:2500 в 10% фетальной телячьей сыворотке в растворе PBS). Клетки промывали 6 раз раствором PBS/0.05% Твин 20, один раз раствором PBS, после чего добавляли 100 мкл/лунку субстрата (1 таблетка ОПД + 12 мл цитрат/фосфатного буфера + 5 мкл 30% H₂O₂). Планшеты выдерживали 30 мин в темноте при комнатной температуре. Реакцию останавливали добавлением 100 мкл/лунку 2N H₂SO₄, и измеряли оптическую плотность (длина волны 490 нм) при помощи многоканального спектрофотометра Victor3 V 1420 (Perkin Elmer). Значения ИК₅₀ (концентрация тестируемого вещества, понижающая уровень вирусного РНК-репликона на 50%) для каждого вещества рассчитывали при помощи программы XLfit 4. Результаты представлены в Таблице 1.The antiviral activity (EC ₅₀ ) of nucleoside inhibitors of HCV NS5B RNA polymerase of general formula 1 (hereinafter, the test substances) was determined in the Huh7 human hepatoma cell line containing the HCV subgenomic RNA replicon (genotype 1b, 1a and 2a). For the quantitative determination of viral replication, a 96-well format ELISA for the viral core antigen was used. Cytotoxicity (CK ₅₀ ) of the test substances was evaluated in parallel. As a comparison drug, PSI-7977 was used. Huh7 cells were seeded in 96-well plates (7.5 × 103 cells per well in 100 μl of culture medium). Solutions of the tested compounds in the medium DMEM {DMEM) IX; Source: Cellgro; Catalog: 10-013-CV} prepared immediately before use. In total, eleven serial triplicate dilutions were prepared with a concentration of 20 nM to 0.2 pM. 4 hours after plating of cells, serial dilutions of the preparations were added to the cells (100 μl per well). The final concentration of the tested compounds ranged from 10 nM to 0.1 pM, and DMSO - 0.5%. If necessary, higher concentrations of test substances were investigated. Each dilution of the drug was tested on two identical wells. The cells were then incubated for three days at 37 ° C / 5% CO ₂ . Cells were fixed by adding 250 μl / well of acetone / methanol (1: 1). After 1 minute, the cells were washed three times with PBS (Phosphate Buffered Saline). After that, the cells were blocked by adding 150 μl / well of 10% fetal calf serum in PBS for 1 hour at room temperature. The cells were then incubated with murine monoclonal antibodies to HCV core antigen, clone C7-50 (Source: Affinity BioReagents; Catalog: MA1-080) (100 μl / well, working dilution 1: 500 in 10% fetal calf serum in PBS solution ) for two hours at 37 ° C. Cells were washed 6 times with PBS / 0.05% Tween 20 solution, after which they were incubated for 1 hour with goat antibodies to mouse immunoglobulins (conjugated with horseradish peroxidase, 100 μl / well, working dilution 1: 2500 in 10% fetal calf serum in solution PBS). Cells were washed 6 times with PBS / 0.05% Tween 20 solution, once with PBS solution, after which 100 μl / well of substrate was added (1 tablet of OPD + 12 ml of citrate / phosphate buffer + 5 μl of 30% H ₂ O ₂ ). The plates were held for 30 minutes in the dark at room temperature. The reaction was stopped by adding 100 μl / well of 2N H ₂ SO ₄ , and the optical density (wavelength 490 nm) was measured using a Victor3 V 1420 multichannel spectrophotometer (Perkin Elmer). IC ₅₀ values (concentration of the test substance that lowers the level of viral RNA replicon by 50%) for each substance was calculated using the XLfit 4 program. The results are presented in Table 1.

Пример 12. Определение цитотоксичности нуклеозидных ингибиторов РНК-полимеразы HCV NS5B общей формулы 1.Example 12. The determination of the cytotoxicity of nucleoside inhibitors of RNA polymerase HCV NS5B of General formula 1.

Цитотоксичность (ЦК₅₀) тестируемых веществ изучалась в опытах на культуре линии клеток гепатомы человека Huh7. Метаболическую активность клеток определяли при помощи набора ATPLite (Perkin Elmer, Бостон, США) в соответствии с инструкциями производителя. Цитотоксическое действие оценивали, высеивая клетки в черной микроплате с прозрачным дном (96 ячеек, 104 клеток на лунку). Для каждого тестируемого вещества использовали три независимых повтора. Тестируемые вещества добавляли через 18 часов, после чего клетки инкубировали с веществами в течение 96 часов. Промывали дважды каждую лунку фосфатно-солевым буфером (0,2 мл/лун) и затем лизировали клетки добавлением клеточного буфера (50 мкл/лун) (все указанные реактивы входят в комплект набора ATPLite). Микроплату инкубировали в течение 5 минут на вращающейся платформе при 600 об/мин, после чего добавляли в каждую лунку 50 мкл раствора субстрата (часть набора ATPLite). Инкубировали еще 5 минут на вращающейся платформе при 600 об/мин, выдерживали 10 минут в темноте и затем измеряли люминесценцию на приборе TopCount NXT (Packard, Perkin Elmer). В качестве количественного параметра для оценки цитотоксичности использовали величину ЦК₅₀, которая соответствует концентрации тестируемого вещества, при которой погибает 50% клеток. Расчет параметра ЦК₅₀: для расчета эффективности ингибирования (% Инг) использовали формулу: % Инг=[(Л_поз-Л_экс)/Л_поз-Л_отр)]*100%, где Л_поз - положительный контроль, люминесценция в ячейках с клетками без вещества; Л_отр - отрицательный контроль, люминесценция в ячейках со средой без клеток; Лэкс - люминесценция в ячейках с веществом в определенной концентрации. Значения ЦК₅₀ затем расчитывали при помощи программы XLfit 4. Результаты представлены в Таблице 1.Cytotoxicity (CK ₅₀ ) of the tested substances was studied in experiments on the culture of the human hepatoma cell line Huh7. Cell metabolic activity was determined using the ATPLite kit (Perkin Elmer, Boston, USA) in accordance with the manufacturer's instructions. The cytotoxic effect was evaluated by plating cells in a black microplate with a transparent bottom (96 cells, 104 cells per well). Three independent repeats were used for each test substance. Test substances were added after 18 hours, after which the cells were incubated with substances for 96 hours. Washed twice each well with phosphate-buffered saline (0.2 ml / moon) and then lysed the cells by adding cell buffer (50 μl / moon) (all of these reagents are included in the ATPLite kit). The microplate was incubated for 5 minutes on a rotating platform at 600 rpm, after which 50 μl of substrate solution (part of the ATPLite kit) was added to each well. Incubated for another 5 minutes on a rotating platform at 600 rpm, kept for 10 minutes in the dark and then measured the luminescence on a TopCount NXT instrument (Packard, Perkin Elmer). The value of CK ₅₀ , which corresponds to the concentration of the test substance, at which 50% of the cells die, was used as a quantitative parameter for assessing cytotoxicity. Calculation of the CK ₅₀ parameter: to calculate the inhibition efficiency (% Ing), we used the formula:% Ing = [(L _pos -L _ex ) / L _pos -L _neg )] * 100%, where L _pos is the positive control, luminescence in cells with cells without substance; L _neg - negative control, luminescence in cells with a medium without cells; LEX - luminescence in cells with a substance in a certain concentration. The values of CC _{50 were} then calculated using the XLfit 4 program. The results are presented in Table 1.

Claims

1. Alkyl ether (S) -2 - {[(2R, 3R, 5R) -5- (4-amino-2-oxo-2H-pyrimidin-1-yl) -4,4-difluoro-3-hydroxy- tetrahydrofuran-2-ylmethoxy] phenoxy-phosphorylamino} -propionic acid of the general formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof having the properties of a nucleoside inhibitor of HCV NS5B RNA polymerase

where R ¹ represent C ₃ alkyl.

2. The use of a compound of general formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active component having the properties of a nucleoside inhibitor of HCV NS5B RNA polymerase

wherein R ¹ has the abovementioned meaning.

3. The use according to claim 2, where the active component is isopropyl ether (S) -2 - {[(2R, 3R, 5R) -5- (4-amino-2-oxo-2H-pyrimidin-1-yl) -4,4-difluoro-3-hydroxy-tetrahydrofuran-2-ylmethoxy] phenoxy-phosphorylamino} -propionic acid of the formula 1.1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof

4. A method of inhibiting HCV NS5B RNA polymerase by contacting HCV NS5B RNA polymerase with a compound of general formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

5. A pharmaceutical composition having the properties of an HCV NS5B RNA polymerase inhibitor suitable for the treatment and prevention of hepatitis C, containing in a therapeutically effective amount a compound of general formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof according to claim 1 or an active component according to any one of claims. 2 and 3.

6. A pharmaceutical composition having the properties of an HCV NS5B RNA polymerase inhibitor suitable for the treatment and prophylaxis of hepatitis C, containing in a therapeutically effective amount a compound of general formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof according to claim 1, the active component according to any one of claims. 2 and 3, and an active component selected from the group consisting of an inosine-5-monophosphate dehydrogenase inhibitor and an NS5A RNA polymerase inhibitor.

7. The pharmaceutical composition according to claim 6, in which Ribavirin or Ribamidin is selected as an inhibitor of inosine 5-monophosphate dehydrogenase.

8. The pharmaceutical composition according to claim 6, in which the methyl ester hydrochloride [(S) -1 - ((S) -2- {5- [4- (4- {2 - [( S) -1 - ((S) -2-methoxycarbonylamino-3-methyl-butyryl) pyrrolidin-2-yl-3H-imidazol-4-yl] buta-1,3-diinyl) phenyl] -1H-imidazol-2 -yl} pyrrolidine-1-carbonyl) -2-methyl-propyl]} - carbamic acid (AV-4025).

9. A drug for the treatment and prevention of hepatitis C, containing in an effective amount a compound of general formula 1, or a pharmaceutically acceptable salt thereof according to claim 1, or an active component according to any one of claims. 2 and 3, or a pharmaceutical composition according to any one of paragraphs. 5-8.

10. A method for the prevention and treatment of a disease caused by hepatitis C virus, the introduction of a therapeutically effective amount of a compound of General formula 1, or its pharmaceutically acceptable salt according to claim 1, or the active component according to any one of paragraphs. 2 and 3, or a pharmaceutical composition according to any one of paragraphs. 5-8, or the drug according to claim 9.