RU2564438C1

RU2564438C1 - Method of treating prostatic intraepithelial neoplasia (pin)

Info

Publication number: RU2564438C1
Application number: RU2014127573/15A
Authority: RU
Inventors: Всеволод Иванович Киселев; Вадим Михайлович Друх; Игорь Николаевич Кузнецов
Original assignee: Закрытое акционерное общество "ИльмиксГрупп" (далее - ЗАО "ИльмиксГрупп")
Priority date: 2014-07-07
Filing date: 2014-07-07
Publication date: 2015-09-27

Abstract

FIELD: medicine.

SUBSTANCE: invention can be applied in treatment of prostatic intraepithelial neoplasia (PIN). Method includes application of pharmaceutical composition based on diindolylmethane and fish oil, polysorbate-80 and tocopherol acetate, applied for not less than 12 months in dose 400 mg/day of diindolylmethane.

EFFECT: increased efficiency and rate of achieving therapeutic effect, reduction of side effects.

3 cl, 1 tbl, 3 dwg, 2 ex

Description

Заявленное изобретение относится к области медицины, а именно к способу лечения простатической интраэпителиальной неоплазии (ПИН) и к иммуногистохимическому определению цитокинов в ткани предстательной железы.The claimed invention relates to medicine, namely to a method for the treatment of prostatic intraepithelial neoplasia (IDU) and to immunohistochemical determination of cytokines in prostate tissue.

Гиперпластические процессы в предстательной железе могут приводить к развитию простатической интраэпителиальной неоплазии (ПИН), при которой наблюдается интенсивное деление и изменение структуры эпителиальных клеток. В настоящее время ПИН рассматривается как предраковое состояние, предшествующее развитию рака предстательной железы.Hyperplastic processes in the prostate gland can lead to the development of prostatic intraepithelial neoplasia (IDU), in which there is an intense division and change in the structure of epithelial cells. IDUs are currently considered a precancerous condition preceding the development of prostate cancer.

Ключевая роль в активации гиперпролиферативных процессов в тканях простаты отводится производному тестостерона - дигидротестостерону (Clark RV, Hermann DJ, Cunningham GR, Wilson TH, Morrill BB, Hobbs S. Marked Supression of Dihydrotestosterone in Men with Benign Prostatic Hyperplasia by Dutasteride, a Dual 5-Reductase Inhibitor. J. Clin. Endocrinol. & Metabolism, 2004, (89) N 5, 2179-2184). Известно, что с возрастом у большинства мужчин в предстательной железе увеличивается выработка фермента 5-редуктазы, преобразующего тестостерон в более активный метаболит-5-дигидротестостерон (DHT), что приводит к увеличению его уровня в тканях предстательной железы. В свою очередь, DHT - основной фактор экзокринной секреции простатических эпителиальных клеток - помимо собственной, повышенной по сравнению с тестостероном, пролиферативной активности, индуцирует синтез полипептидных ростовых факторов (IGF-1, TGF и др.). Образовавшиеся в избыточном количестве DHT и полипептидные факторы роста, действуя аутокринно на стромальную простатическую клетку, активируют в ней сигнальные механизмы, приводящие к усиленной клеточной пролиферации, и способствуют инициации гиперпластических процессов. Дигидротестостерон является ключевым веществом для образования интрапростатического и сывороточного простата-специфического антигена PSA.A key role in the activation of hyperproliferative processes in the tissues of the prostate is given to the testosterone derivative - dihydrotestosterone (Clark RV, Hermann DJ, Cunningham GR, Wilson TH, Morrill BB, Hobbs S. Marked Supression of Dihydrotestosterone in Men with Benign Prostatic Hyperplasia by Dutasteride, a Dual 5- Reductase Inhibitor. J. Clin. Endocrinol. & Metabolism, 2004, (89) N 5, 2179-2184). It is known that with age, the majority of men in the prostate gland increase the production of the enzyme 5-reductase, which converts testosterone to the more active metabolite-5-dihydrotestosterone (DHT), which leads to an increase in its level in the tissues of the prostate gland. In turn, DHT, the main factor in exocrine secretion of prostatic epithelial cells, in addition to its own proliferative activity, increased compared with testosterone, induces the synthesis of polypeptide growth factors (IGF-1, TGF, etc.). Excessive DHT and polypeptide growth factors, acting autocrine on the stromal prostatic cell, activate signaling mechanisms in it, leading to enhanced cell proliferation, and contribute to the initiation of hyperplastic processes. Dihydrotestosterone is a key substance for the formation of the intraprostatic and serum prostate-specific antigen PSA.

Вероятность возникновения рака простаты увеличивается, если действие гормонов и молекулярных факторов происходит на фоне генетических изменений клеток простаты - мутаций генов, кодирующих белки, отвественных за проведение гормон-зависимых сигналов (андрогеновые рецепторы, корегуляторы андрогеновых рецепторов и др.) (Heilen СА, Chang С. Androgen Receptor in Prostate Cancer, Endocrine Reviews, 2004, 25 (2), 276-308).The likelihood of developing prostate cancer increases if the action of hormones and molecular factors occurs against the background of genetic changes in prostate cells - mutations of genes encoding proteins responsible for conducting hormone-dependent signals (androgen receptors, androgen receptor correlators, etc.) (Heilen CA, Chang C Androgen Receptor in Prostate Cancer, Endocrine Reviews, 2004, 25 (2), 276-308).

На практике применяются препараты, основанные на ингибировании 5б-редуктазы, которые снижают уровень внутрипротокового дигидротестостерона без уменьшения содержания гормона в плазме, уменьшают симптомы болезни и снижают объем простаты, однако обладают невысокой эффективностью, замедленным наступлением лечебного эффекта, а также целым комплексом нежелательных побочных эффектов, связанных с их антиандрогенными свойствами.In practice, drugs based on the inhibition of 5b reductase are used, which reduce the level of intraductal dihydrotestosterone without reducing the hormone content in the plasma, reduce the symptoms of the disease and reduce the volume of the prostate, but they have low efficiency, a delayed onset of the therapeutic effect, as well as a whole range of undesirable side effects associated with their antiandrogenic properties.

Также известны блокаторы адренергических рецепторов: селективные, неселективные, расслабляющие гладкую мускулатуру железы и облегчающие активную фазу обструкции. Несмотря на широкое применение препаратов данной группы, считающихся достаточно эффективными, безопасными и селективными, все они имеют в разной степени выраженные побочные эффекты, наиболее серьезные из которых связаны с воздействием на сердечнососудистую систему.Adrenergic receptor blockers are also known: selective, non-selective, relaxing the smooth muscles of the gland and facilitating the active phase of obstruction. Despite the widespread use of drugs of this group, which are considered quite effective, safe and selective, they all have varying degrees of side effects, the most serious of which are associated with effects on the cardiovascular system.

Наиболее близким аналогом является способ лечения простатической интраэпителиальной неоплазии, согласно патенту RU 2373948 С2, 27.11.2009, основанный на селективном ингибировании циклооксигеназы-2 (СОХ-2). Однако данные препараты имеют ряд негативных побочных эффектов связанных с развитием кожной сыпи, гипертензии, задержки жидкости, и желудочно-кишечных патологий, включающих образование эрозий и язв. Кроме того, известный способ не обеспечивает профилактику рака предстательной железы на ранних стадиях.The closest analogue is a method of treating prostatic intraepithelial neoplasia, according to patent RU 2373948 C2, 11/27/2009, based on the selective inhibition of cyclooxygenase-2 (COX-2). However, these drugs have a number of negative side effects associated with the development of skin rashes, hypertension, fluid retention, and gastrointestinal pathologies, including the formation of erosion and ulcers. In addition, the known method does not provide for the prevention of prostate cancer in the early stages.

Исходя из этого задачей изобретения является разработка способа лечения ПИН обладающего повышенной эффективностью и скоростью наступления лечебного эффекта, снижением или исключением негативного воздействия побочных эффектов, а также обеспечение профилактики рака предстательной железы на ранних стадиях.Based on this, the objective of the invention is to develop a method for treating IDUs with increased efficacy and speed of the onset of the therapeutic effect, reducing or eliminating the negative effects of side effects, as well as providing prevention of prostate cancer in the early stages.

Таким образом, задача изобретения решается способом лечения простатической интраэпителиальной неоплазии (ПИН), обеспечивающим регрессию патологических процессов предстательной железы. Причем для лечения используется фармацевтическая композиция на основе дииндолилметана и вспомогательных компонентов, обеспечивающих его высокую биодоступность. Указанная композиция применяется в течение не менее 12 месяцев в дозировке 400 мг/сут дииндолилметана.Thus, the objective of the invention is solved by a method of treating prostatic intraepithelial neoplasia (IDU), which provides regression of pathological processes of the prostate gland. Moreover, for treatment, a pharmaceutical composition based on diindolylmethane and auxiliary components ensuring its high bioavailability is used. The specified composition is used for at least 12 months in a dosage of 400 mg / day of diindolylmethane.

Кроме того, заявленное изобретение относится к иммуногистохимическому определению цитокинов в ткани предстательной железы, оценивающему факторы роста IGF и EGF и регулирующий фактор TGF, используемому для динамического контроля эффективности терапии.In addition, the claimed invention relates to immunohistochemical determination of cytokines in prostate tissue, evaluating the growth factors IGF and EGF and the regulatory factor TGF, used to dynamically monitor the effectiveness of therapy.

Использование заявленного способа лечения простатической интраэпителиальной неоплазии (ПИН) позволяет повысить эффективность и скорость наступления лечебного эффекта, а также снизить или исключить негативное воздействие побочных эффектов.Using the claimed method for the treatment of prostatic intraepithelial neoplasia (IDU) can increase the effectiveness and speed of the onset of the therapeutic effect, as well as reduce or eliminate the negative impact of side effects.

Настоящее изобретение относится к методам лечения заболеваний с помощью фармацевтических композиций, содержащих эффективное количество DIM. Обычно DIM демонстрирует низкую растворимость в физиологических жидкостях и имеет ограниченную способность проникать через барьерные мембраны. Исходя из этого, с учетом уникальности и перспективности вещества DIM, был создан препарат «Инфемин», который представляет собой помещенный в твердые желатиновые капсулы раствор, содержащий активное вещество - 3,3′-дииндолилметан (150 мг), а также вспомогательные компоненты органического происхождения - рыбий жир, полисорбат 80 и -токоферола ацетат (витамин Е), обеспечивающие максимальную биодоступность и стабильность препарата при хранении. Препарат может выпускаться в трех дозировках дииндолилметана (по 50, 100 или 150 мг в капсуле) и имеет следующий состав:The present invention relates to methods for treating diseases using pharmaceutical compositions containing an effective amount of DIM. Typically, DIM exhibits low solubility in physiological fluids and has limited ability to penetrate barrier membranes. Proceeding from this, taking into account the uniqueness and promising nature of the DIM substance, the drug “Infemin” was created, which consists of a solution containing 3,3′-diindolylmethane (150 mg), as well as auxiliary components of organic origin, placed in hard gelatin capsules - fish oil, polysorbate 80 and β-tocopherol acetate (vitamin E), providing maximum bioavailability and stability of the drug during storage. The drug can be produced in three doses of diindolylmethane (50, 100 or 150 mg per capsule) and has the following composition:

Известно, что рыбий жир в сочетании с полисорбатом значительно улучшают абсорбцию в желудочно-кишечном тракте и распределение вещества в организме, а витамин Е повышает его стабильность при хранении. В составе новой лекарственной формуляции, созданной нами на основе современного технологического решения, DIM находится в растворенном состоянии, благодаря чему быстро проникает в кровоток и попадает в органы-мишени, где достигает концентраций, многократно превышающих таковые для кристаллического вещества.It is known that fish oil in combination with polysorbate significantly improve the absorption in the gastrointestinal tract and the distribution of the substance in the body, and vitamin E increases its storage stability. As part of the new drug formulation that we created on the basis of a modern technological solution, DIM is in a dissolved state, due to which it quickly penetrates the bloodstream and enters the target organs, where it reaches concentrations many times higher than those for a crystalline substance.

Учитывая вышеупомянутые молекулярные мишени действия DIM, а именно восстановление процессов апоптоза, антипролиферативную, противоопухолевую и антиангиогенную активность, длительная терапия Инфемином предлагается для лечения таких пролиферативных заболеваний, как гиперпластические заболевания предстательной железы.Given the aforementioned molecular targets of DIM action, namely, restoration of apoptosis processes, antiproliferative, antitumor and antiangiogenic activity, long-term therapy with Infeminum is proposed for the treatment of proliferative diseases such as hyperplastic diseases of the prostate gland.

Согласно изобретению для лечения ПИН предлагается использование длительной терапии таргетного препарата Инфемин, действие которого основано на сочетании антигормонального (антиандрогенного) эффекта и ингибировании множественных сигнальных механизмов, активирующих патологическую пролиферацию. Подобная химиопрофилактика предраковых процессов предстательной железы, таких как ПИН, обеспечивает остановку или обратное развитие канцерогенеза.According to the invention, for the treatment of IDUs, the use of long-term therapy of the targeted drug Infemin is proposed, the effect of which is based on a combination of the antihormonal (antiandrogenic) effect and the inhibition of multiple signaling mechanisms that activate pathological proliferation. Such chemoprophylaxis of precancerous processes of the prostate gland, such as IDUs, provides a stop or reverse development of carcinogenesis.

Активным веществом препарата Инфемин является дииндолилметан (DIM) - олигомерный продукт индол-3-карбинола (I3C), для которого показана выраженная избирательная активность в отношении трансформированных клеток различного происхождения (Aggarwal В.В., Ichikawa Р. (2005) Molecular targets and anticancer potential of indole-3-carbinol and its derivatives. Cell Cycle, 4 (9), 1201-1215). Как показали фармакокинетические исследования, под воздействием кислой среды желудка принятый перорально I3C почти мгновенно превращается в DIM (Arneson D.W., Hurwitz A., McMahon L.M., Robaugh D. (1999) Presence of 3,3-diindolylmethane in human plasma after oral administration of indole-3-carbinol (abstr.) Proc. Am. Assoc. Cancer Res, 40, 2833). Экспериментально доказано, что практически все множественные противоопухолевые механизмы, индуцируемые I3C in vitro и in vivo, характерны и для DIM (Chang X., Тоu J.С, Hong С. et al. (2005), при этом так же, как и I3С, реализует свою активность на субмолекулярном уровне, регулируя экспрессию генов, ответственных за процессы пролиферации, дифференцировки и выживаемости (Li Y., Li X., Sarkar F.H. (2003) Gene expression profiles of I3C - and DIM-treated PC3 human prostate cancer cells determined by cDNA microarray analysis. J. Nutr., 133, 1011-1019) и ингибируя множественные сигнальные пути, ведущие к клеточной гиперпролиферации. На гормон-чувствительных клетках предстательной железы (культура LNCaP) показана способность DIM конкурентно связываться с андрогеновыми рецепторами, подавляя, таким образом, транслокацию их в ядро с последующей активацией генной транскрипции, а также экспрессию промотора гена, кодирующего простата-специфический антиген PSA. Белок PSA (специфическая протеаза простаты) является классическим маркером рака предстательной железы, продуцирующимся и секретирующимся в избыточном количестве опухолевыми простатическими клетками. Чрезвычайно важным моментом представляется недавно обнаруженная способность DIM проявлять антиангиогенную активность (приложение, фиг. 1). Патологический рост сосудов практически всегда сопровождает гипер- и неопластические процессы. Показано, что в условиях in vitro микромолярные концентрации DIM эффективно подавляют пролиферацию и миграцию эндотелиальных клеток, а также их способность образовывать сосуды. In vivo введенный подкожно экспериментальным животным DIM (5 мг/кг, ежедневно) на 74% подавлял патологический неоангиогенез (Chang X., Тou J.C., Hong С. et al. (2005) Diindolylmethane inhibits angiogenesis and the growth of transplantable human breast carcinoma in athymic mice. Carcinogenesis, 264 (4), 771-778; McCarty M.F., Block K.I. (2005) Multifocal angiostatic therapy: an update, Integrative Cancer Therapies, 4 (4), 301-314). Важнейшей молекулярной мишенью является ядерный фактор транскрипции NF-kappaB. Доказано, что данный фактор опосредует воспалительный ответ, а также играет важную роль в регуляции пролиферативной (антиапоптотической), ангиогенной, миграционной и инвазивной клеточных активностей, осуществляя заключительный этап сигнальных каскадов, индуцируемых ростовыми факторами и цитокинами. При этом ключевым моментом является транслокация активного фактора в ядро и активация транскрипции генов, ответственных за эти процессы. Установлено, что в условиях in vitro DIM (Rahman K.M., Ali S., Aboukameel A. et al. (2007) Inactivation of NF-kappaB by diindolylmethane contributes to increased apoptosis induced by chemotherapeutic agent in breast cancer cells. Mol. Cancer Ther., 6(10), 2757-2765; Rahman K.M., Sarkar F.H. (2005) Inhibition of nuclear translocation of Nuclear Factor contributes to diindolylmethane-induced apoptosis in breast cancer cells. Cancer Res., 65, 364-371), а также его метаболический предшественник I3C эффективно подавляют ядерную транслокацию и активность фактора NF-kappaB. Это означает, что помимо антипролиферативного и антиангиогенного действия препарат, произведенный на основе DIM, способен подавлять местные воспалительные реакции, которые нередко сопровождают гипер- и неопластические процессы в гормон-зависимых органах и тканях. Также описана иммуномодулирующая активность DIM. Было показано, что в условиях in vitro в опухолевых клетках DIM стимулирует IFN-зависимые сигнальные каскады посредством активации экспрессии рецепторов IFN, а также других IFN-респонсивных регуляторных белков.The active substance of the drug Infemin is diindolylmethane (DIM) - the oligomeric product of indole-3-carbinol (I3C), which shows a pronounced selective activity against transformed cells of different origin (Aggarwal B.V., Ichikawa R. (2005) Molecular targets and anticancer potential of indole-3-carbinol and its derivatives. Cell Cycle, 4 (9), 1201-1215). As shown by pharmacokinetic studies, under the influence of the acidic environment of the stomach, oral I3C taken almost instantly turns into DIM (Arneson DW, Hurwitz A., McMahon LM, Robaugh D. (1999) Presence of 3,3-diindolylmethane in human plasma after oral administration of indole -3-carbinol (abstr.) Proc. Am. Assoc. Cancer Res, 40, 2833). It has been experimentally proven that almost all of the multiple antitumor mechanisms induced by I3C in vitro and in vivo are also characteristic of DIM (Chang X., Tou J.C., Hong C. et al. (2005), in the same way as I3C , realizes its activity at the submolecular level, regulating the expression of genes responsible for proliferation, differentiation and survival (Li Y., Li X., Sarkar FH (2003) Gene expression profiles of I3C - and DIM-treated PC3 human prostate cancer cells determined by cDNA microarray analysis. J. Nutr., 133, 1011-1019) and inhibiting multiple signaling pathways leading to cell hyperproliferation. prostate gland cells (LNCaP culture) have been shown to be able to DIM competitively bind to androgen receptors, thus inhibiting their translocation into the nucleus followed by activation of gene transcription, as well as the expression of the promoter of the gene encoding the prostate-specific antigen PSA. PSA protein (specific protease prostate) is a classic marker of prostate cancer that is produced and secreted in excess by prostate tumor cells. An extremely important point is the recently discovered ability of DIM to exhibit anti-angiogenic activity (Appendix, Fig. 1). Pathological vascular growth almost always accompanies hyper- and neoplastic processes. It has been shown that in vitro micromolar concentrations of DIM effectively inhibit the proliferation and migration of endothelial cells, as well as their ability to form vessels. In vivo, DIM (5 mg / kg, daily) administered subcutaneously to experimental animals suppressed pathological neoangiogenesis by 74% (Chang X., Tou JC, Hong C. et al. (2005) Diindolylmethane inhibits angiogenesis and the growth of transplantable human breast carcinoma in athymic mice. Carcinogenesis, 264 (4), 771-778; McCarty MF, Block KI (2005) Multifocal angiostatic therapy: an update, Integrative Cancer Therapies, 4 (4), 301-314). The most important molecular target is the nuclear transcription factor NF-kappaB. It is proved that this factor mediates the inflammatory response, and also plays an important role in the regulation of proliferative (antiapoptotic), angiogenic, migratory and invasive cellular activities, performing the final stage of signaling cascades induced by growth factors and cytokines. The key point is the translocation of the active factor into the nucleus and the activation of transcription of the genes responsible for these processes. In vitro DIM (Rahman KM, Ali S., Aboukameel A. et al. (2007) Inactivation of NF-kappaB by diindolylmethane contributes to increased apoptosis induced by chemotherapeutic agent in breast cancer cells. Mol. Cancer Ther. 6 (10), 2757-2765; Rahman KM, Sarkar FH (2005) Inhibition of nuclear translocation of Nuclear Factor contributes to diindolylmethane-induced apoptosis in breast cancer cells. Cancer Res., 65, 364-371), as well as his the metabolic precursor I3C effectively inhibits nuclear translocation and the activity of factor NF-kappaB. This means that, in addition to antiproliferative and antiangiogenic effects, a drug produced on the basis of DIM is able to suppress local inflammatory reactions, which often accompany hyper- and neoplastic processes in hormone-dependent organs and tissues. The immunomodulatory activity of DIM is also described. In vitro in tumor cells, DIM has been shown to stimulate IFN-dependent signaling cascades by activating expression of IFN receptors as well as other IFN-responsive regulatory proteins.

В работе 2003 г. Li Y. и соавт., использовавших современные методы генетического анализа, было показано, что I3C и DIM, в числе многих других молекулярных мишеней, контролирующих процессы канцерогенеза, ингибируют экспрессию ряда ростовых факторов и их рецепторов, а именно EGFR, TGFb2, FGF.In 2003, Li Y. et al., Using modern methods of genetic analysis, it was shown that I3C and DIM, among many other molecular targets that control carcinogenesis, inhibit the expression of a number of growth factors and their receptors, namely EGFR, TGFb2, FGF.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.The invention is illustrated by the following examples.

Пример 1. Исследование влияния препарата Инфемин на выживаемость гормон-зависимых и гормон-независимых опухолевых клеток предстательной железы в условиях in vitro.Example 1. The study of the effect of the drug Infemin on the survival of hormone-dependent and hormone-independent tumor cells of the prostate in vitro.

В данном исследовании влияние препарата Инфемин на выживаемость гормон-зависимых клеток рака предстательной железы линии LNCaP и гормон-независимых клеток рака предстательной железы линии РС3 оценивалось с помощью МТТ-теста. Водно-спиртовой раствор Инфемин добавлялся к клеткам в такой концентрации, чтобы конечная концентрация входящего в его состав дииндолилметана находилась в диапазоне 10-100 мкМ. Было установлено, что препарат Инфемин оказывал выраженный ингибирующий эффект на выживаемость как гормон-зависимых опухолевых клеток простаты линии LNCaP, так и гормон-резистентных клеток линии РС3. Величина IC50 (для DIM-активного вещества препарата Инфемин) для клеток LNCaP составляла 40 мкМ, а для клеток РС3 50 мкМ (приложение, фиг. 2). При концентрации DIM ~70 мкМ количество живых клеток линии LNCaP и линии РС3 составляло около 20%. Таким образом, данный препарат приблизительно одинаково эффективно подавлял выживаемость гормон-чувствительных и гормон-нечувствительных опухолевых клеток простаты. Для того чтобы исключить возможный цитотоксический эффект препарата Инфемин на исследуемые клеточные линии, исследовался уровень фермента лактатдегидрогеназы (ЛДГ) - общепринятого маркера клеточного лизиса - в аликвотах внеклеточной жидкости после инкубации клеток LNCaP и РС3 с препаратом. Было установлено, что добавленный к опухолевым клеткам Инфемин в концентрации, эквивалентной конечной концентрации DIM, равной 150 мкМ, не вызывал каких-либо статистически значимых изменений уровня ЛДГ во внеклеточной жидкости по сравнению с контролем и, следовательно, не оказывал токсического воздействия на опухолевые клеточные линии. Выраженное подавление выживаемости исследуемых клеточных линий обусловлено их апоптотической гибелью.In this study, the effect of Infemin on the survival of hormone-dependent prostate cancer cells of the LNCaP line and hormone-independent prostate cancer cells of the PC3 line was evaluated using the MTT test. Infemin water-alcohol solution was added to the cells in such a concentration that the final concentration of diindolylmethane included in its composition was in the range of 10-100 μM. It was found that the drug Infemin had a pronounced inhibitory effect on the survival of both hormone-dependent prostate tumor cells of the LNCaP line and hormone-resistant cells of the PC3 line. The IC50 value (for the DIM-active substance of the drug Infemin) for LNCaP cells was 40 μM, and for PC3 cells 50 μM (Appendix, Fig. 2). At a DIM concentration of ~ 70 μM, the number of living cells of the LNCaP line and PC3 line was about 20%. Thus, this drug approximately equally effectively suppressed the survival of hormone-sensitive and hormone-insensitive prostate tumor cells. In order to exclude the possible cytotoxic effect of Infemin on the studied cell lines, we studied the level of the enzyme lactate dehydrogenase (LDH) - a common marker of cell lysis - in aliquots of extracellular fluid after incubation of LNCaP and PC3 cells with the drug. It was found that Infemin added to tumor cells at a concentration equivalent to a final concentration of DIM of 150 μM did not cause any statistically significant changes in LDH levels in extracellular fluid compared to the control and, therefore, did not have a toxic effect on tumor cell lines . A marked suppression of the survival of the studied cell lines is due to their apoptotic death.

Пример 2. Изучение клинической эффективности длительной терапии Инфемином (капсулы) у пациентов с аденомой предстательной железы (АПЖ) и интраэпителиальной неоплазией простаты (ПИН).Example 2. The study of the clinical efficacy of long-term therapy with Infeminum (capsules) in patients with prostate adenoma (APA) and intraepithelial neoplasia of the prostate (IDU).

Задачи исследования: - Оценить влияние препаратов на динамику симптомов нарушения функции нижних мочевых путей (СНМП) и качество жизни больных аденомой предстательной железы АПЖ/ - Оценить влияние препаратов на основные уродинамические показатели: максимальную скорость потока мочи (Qmax) и объем остаточной мочи (Vres). - Оценить влияние препаратов на динамику PSA. - Оценить влияние препаратов на объем предстательной железы. - Оценить характер морфологических эффектов препаратов на ткань предстательной железы в сравнении с плацебо. - Оценить безопасность препаратов на основании анализа частоты нежелательных явлений, побочных эффектов и динамики основных биохимических параметров сыворотки крови. Для проведения испытаний были сформированы следующие группы пациентов: Инфемин (группа I) - 2 капсулы/2 раза в день (400 мг/сут дииндолилметана); фармацевтическая композиция с кристаллическим DIM (группа II) - 2 капсулы/2 раза в день (400 мг/сут дииндолилметана). Для оценки клинической эффективности, морфологических эффектов и безопасности препаратов обследовано и пролечено 34 пациента с аденомой предстательной железы (АПЖ) и интраэпителиальной неоплазией простаты (ПИН). Группа I (18 пациентов) принимала Инфемин по 2 капсулы 2 раза в день, группа II (16 пациентов) принимала фармацевтическую композицию с кристаллическим DIM по 2 капсулы 2 раза в день в течение 12 месяцев. Больные были отобраны на лечение по следующим критериям - амбулаторные и стационарные больные с симптоматической и морфологически подтвержденной АПЖ и ПИН;Research objectives: - To assess the effect of drugs on the dynamics of symptoms of dysfunction of the lower urinary tract (LUTS) and the quality of life of patients with prostate adenoma of the AFA / - To assess the effect of drugs on the main urodynamic indicators: maximum urine flow rate (Qmax) and residual urine volume (Vres) . - Assess the effect of drugs on the dynamics of PSA. - Assess the effect of drugs on prostate volume. - To evaluate the nature of the morphological effects of drugs on prostate tissue in comparison with placebo. - Assess the safety of drugs based on the analysis of the frequency of adverse events, side effects and dynamics of the main biochemical parameters of blood serum. The following patient groups were formed for testing: Infemin (group I) - 2 capsules / 2 times a day (400 mg / day of diindolylmethane); pharmaceutical composition with crystalline DIM (group II) - 2 capsules / 2 times a day (400 mg / day of diindolylmethane). To assess the clinical efficacy, morphological effects, and safety of the drugs, 34 patients with prostate adenoma (AP) and prostate intraepithelial neoplasia (IDU) were examined and treated. Group I (18 patients) took Infemin 2 capsules 2 times a day, group II (16 patients) took a pharmaceutical composition with crystalline DIM 2 capsules 2 times a day for 12 months. Patients were selected for treatment according to the following criteria: outpatients and inpatients with symptomatic and morphologically confirmed AJ and IDU;

- возраст старше 50 лет;- age older than 50 years;

- пациенты, давшие письменное согласие и соблюдающие указания врача, относительно назначенной терапии;- patients who have given written consent and follow the doctor’s instructions regarding the prescribed therapy;

- выраженность симптомов по шкале I-PSS более 7 баллов; - Qmax более 5 и менее 15 мл/с;- the severity of symptoms on an I-PSS scale of more than 7 points; - Qmax more than 5 and less than 15 ml / s;

- остаточной мочи не более 200 мл;- residual urine of not more than 200 ml;

- объем простаты более 25 куб. см;- the volume of the prostate is more than 25 cubic meters. cm;

- PSA - до 10 нг/мл.- PSA - up to 10 ng / ml.

Оценка влияния препарата на клиническое состояние. В исходной временной точке (VI) в обеих группах было зафиксировано 2 морфологические характеристики: L-PIN и H-PIN. В результате воздействия препарата состояние пациента ухудшалось, оставалось неизменным или наблюдалось улучшение. Всего возможно 7 вариантов клинического ответа в интервале времени между V1 и V2. В данном случае представляется возможным отнести оценку клинического изменения (между V1 и V2) к порядковой шкале. На основании полученного двустороннего уровня значимости по результатам воздействия терапии группы I (Инфемин) и II (принимали фармацевтическую композицию с кристаллическим DIM) значимо различались (p=0.002). Отдельно изучалось различие частоты малигнизации в исследуемых группах. В основной группе (Инфемин, 18 пациентов) случаев малигнизации не отмечено. В контрольной группе (фармацевтическая композиция с кристаллическим DIM, 16 пациентов) зафиксированы 4 случая развития рака предстательной железы.Assessment of the effect of the drug on the clinical condition. At the initial time point (VI) in both groups, 2 morphological characteristics were recorded: L-PIN and H-PIN. As a result of exposure to the drug, the patient's condition worsened, remained unchanged, or there was improvement. A total of 7 clinical response options are possible in the time interval between V1 and V2. In this case, it seems possible to attribute the assessment of the clinical change (between V1 and V2) to the ordinal scale. Based on the obtained bilateral significance level according to the results of the effects of group I therapy (Infemin) and II (they took the pharmaceutical composition with crystalline DIM), they significantly differed (p = 0.002). We separately studied the difference in the frequency of malignancy in the studied groups. In the main group (Infemin, 18 patients) there were no cases of malignancy. In the control group (pharmaceutical composition with crystalline DIM, 16 patients), 4 cases of prostate cancer were recorded.

Иммуногистохимический анализ проводился у двух групп пациентов, насчитывающих по четыре человека из группы принимавших Инфемин, содержащий фармацевтическую композицию DIM в новой форме (группа I) и фармацевтическую композицию с кристаллическим DIM (группа II), соответственно. Оценивались такие показатели, как факторы роста IGF (инсулиноподобный фактор роста) и EGF (эпидермальный фактор роста), регулирующий фактор TGF-β (трансформирующий фактор роста бета). При статистически однородных исходных значениях IGF, EGF и TGF-β отмечались значимые изменения уровня исследуемых параметров при последующем измерении. А именно, произошло статистически достоверное снижение факторов роста IGF (p=0.004) и EGF (p=0.002), а также повышение уровня TGF-β (p=0.047) в группе пациентов, принимавших Инфемин. В контрольной группе достоверной динамики не отмечено. Более наглядно полученные данные отображены на нижеприведенном чертеже (фиг. 3).Immunohistochemical analysis was performed in two groups of patients, four people each from the group receiving Infemin, containing the pharmaceutical composition DIM in the new form (group I) and the pharmaceutical composition with crystalline DIM (group II), respectively. Indicators such as growth factors IGF (insulin-like growth factor) and EGF (epidermal growth factor), regulatory factor TGF-β (transforming growth factor beta) were evaluated. At statistically uniform initial values of IGF, EGF and TGF-β, significant changes in the level of the studied parameters were noted during subsequent measurement. Namely, there was a statistically significant decrease in growth factors IGF (p = 0.004) and EGF (p = 0.002), as well as an increase in the level of TGF-β (p = 0.047) in the group of patients taking Infemin. In the control group, no reliable dynamics were noted. More clearly obtained data are displayed in the drawing below (Fig. 3).

Полученные данные достоверного снижения факторов роста IGF и EGF, повышения уровня TGF-β в группе принимающих заявленную фармацевтическую композицию с DIM говорят о влиянии действующих веществ препарата Инфемин на основные сигнальные механизмы патологической клеточной пролиферации, а также на индукцию апоптоза трансформированных клеток.The obtained data of a significant decrease in IGF and EGF growth factors, an increase in TGF-β in the group receiving the claimed pharmaceutical composition with DIM indicate the effect of the active substances of the drug Infemin on the main signaling mechanisms of pathological cell proliferation, as well as on the induction of apoptosis of transformed cells.

Claims

1. A method of treating prostatic intraepithelial neoplasia (IDU), characterized in that for the treatment using a pharmaceutical composition based on diindolylmethane and fish oil, polysorbate-80 and tocopherol acetate, used for at least 12 months at a dosage of 400 mg / day of diindolylmethane.

2. A method for the treatment of prostatic intraepithelial neoplasia (IDU) according to claim 1, which provides for the prevention of prostate cancer in the early stages in patients with a high risk of developing it.

3. A method of treating prostatic intraepithelial neoplasia (IDU) according to claim 1, providing a therapeutic effect by simultaneously affecting cytokines that regulate apoptosis and proliferation in prostate cells, leading to a decrease in the production of growth factors IGF and EGF and increased secretion of TGF.