RU2563812C2 - Method of predicting fast virological response in patients with chronic hepatitis c - Google Patents
Method of predicting fast virological response in patients with chronic hepatitis c Download PDFInfo
- Publication number
- RU2563812C2 RU2563812C2 RU2013145240/15A RU2013145240A RU2563812C2 RU 2563812 C2 RU2563812 C2 RU 2563812C2 RU 2013145240/15 A RU2013145240/15 A RU 2013145240/15A RU 2013145240 A RU2013145240 A RU 2013145240A RU 2563812 C2 RU2563812 C2 RU 2563812C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cells
- blood
- patients
- ipc
- virological response
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области медицины, в частности гепатологии и инфекционным болезням, и может использоваться для прогнозирования быстрого вирусологического ответа на терапию пегилированным интерфероном α и рибавирином у больных хроническим гепатитом C. Для осуществления способа у больных хроническим гепатитом C определяется аллельный вариант гена ИЛ-28B, и в зависимости от аллели названного гена проводится иммунологическое тестирование и рассчитывается коэффициент иммунопрогнозирования (КИП) для благоприятной и неблагоприятной аллели. При сочетании аллельного варианта «CC-TT» (rs12979860CC/rs8099917TT) со значениями КИП благоприятной аллели (КИП-1)<1,5 прогнозируют развитие быстрого вирусологического ответа, при сочетании аллельного варианта CC-TT со значениями КИП-1>1,5 прогнозируют отсутствие быстрого вирусологического ответа, при сочетании аллельного варианта «не СС-ТТ» со значениями КИП такой неблагоприятной аллели (КИП-2)<2,0 прогнозируют развитие быстрого вирусологического ответа, при сочетании аллельного варианта «не CC-TT» со значениями КИП-2>2,0 прогнозируют отсутствие быстрого вирусологического ответа.The invention relates to medicine, in particular hepatology and infectious diseases, and can be used to predict a quick virological response to therapy with pegylated interferon α and ribavirin in patients with chronic hepatitis C. To implement the method in patients with chronic hepatitis C, an allelic version of the IL-28B gene is determined, and depending on the allele of the named gene, immunological testing is carried out and the immunoprediction coefficient (CIP) is calculated for favorable and unfavorable alleles. When the CC-TT allelic variant (rs12979860CC / rs8099917TT) is combined with the favorable allele KIP values (KIP-1) <1.5, the development of a rapid virologic response is predicted, when the CC-TT allelic variant with KIP-1 values> 1.5 is combined predict the absence of a quick virological response, when a combination of the non-SS-TT allelic variant with the KIP values of such an unfavorable allele (KIP-2) <2.0 is predicted, the development of a quick virological response, when a combination of the non-CC-TT allelic variant with KPI values is predicted -2> 2.0 predict the absence of fast sup sologicheskogo response.
Повышение эффективности лечения хронического гепатита С (ХГС) является важной задачей медицины в связи широкой распространенностью этой инфекционной патологии и ее принадлежностью к социально значимым заболеваниям с высокой частотой неблагоприятных исходов (цирроза печени, гепатоклеточной карциномы) [1-3].Improving the effectiveness of treatment of chronic hepatitis C (CHC) is an important task of medicine due to the widespread prevalence of this infectious pathology and its belonging to socially significant diseases with a high incidence of adverse outcomes (liver cirrhosis, hepatocellular carcinoma) [1-3].
Известно, что наиболее информативным прогностическим критерием достижения устойчивого вирусологического ответа (УВО) на стандартную терапию, является наличие быстрого вирусологического ответа (БВО) - отсутствие РНК вируса гепатита C (ВГС) в крови через 4 недели лечения [4]. Причины, обусловливающие снижение уровня виремии быстрыми темпами или, наоборот, наличие так называемого «медленного вирусологического ответа», долгое время оставались неясными.It is known that the most informative prognostic criterion for achieving a stable virologic response (SVR) to standard therapy is the presence of a rapid virological response (BVI) - the absence of hepatitis C virus RNA (HCV) in the blood after 4 weeks of treatment [4]. The reasons for the rapid decline in viremia or, on the contrary, the presence of the so-called “slow virologic response” have remained unclear for a long time.
Определенный прорыв в понимании значения отдельных факторов, ответственных за эффективность лечения, возник в связи с открытием в последние годы феномена ассоциации ответа на лечение пегилированным ИФНα и рибавирином пациентов, инфицированных генотипом 1b вируса гепатита C (ВГС), а также спонтанной элиминации ВГС из организма с вариантом полиморфизма гена ИЛ-28B человека [5-8]. Было установлено, что аллельный вариант rs12979860 СС по сравнению с rs12979860 СТ и rs12979860 ТТ является наиболее благоприятным с точки зрения получения быстрого и устойчивого ответа на лечение (достижение УВО при этом варианте регистрировали у 80% пациентов), так же как генотип rs8099917 ТТ был сопряжен с чувствительностью к названным терапевтическим воздействиям в гораздо большей степени, чем варианты rs8099917TG и rs8099917GG [9].A certain breakthrough in understanding the significance of individual factors responsible for the effectiveness of treatment has arisen in connection with the discovery in recent years of the phenomenon of association of the response to treatment with pegylated IFNα and ribavirin in patients infected with hepatitis C virus genotype 1b (HCV), as well as spontaneous elimination of HCV from the body with a variant of polymorphism of the IL-28B gene [5-8]. It was found that the allelic variant of rs12979860 CC compared with rs12979860 CT and rs12979860 TT is the most favorable in terms of obtaining a quick and stable response to treatment (SVR achievement in this variant was recorded in 80% of patients), just as the rs8099917 TT genotype was conjugated with sensitivity to these therapeutic effects to a much greater extent than the rs8099917TG and rs8099917GG variants [9].
По данным, полученным к настоящему времени, можно заключить, что индивидуальное предсказательное значение генотипа человека не достаточно высоко, поскольку УВО может достичь пациент как с благоприятным, так и неблагоприятным генотипом, и уже известен ряд факторов, которые могут модифицировать влияние генотипа человека на эффективность противовирусной терапии [10-11]. В частности, в литературе есть сведения о взаимосвязи качества вирусологического ответа на лечение пегилированным ИФНα и рибавирином с функциональным состоянием естественных киллерных клеток (ЕК) и уровнем специфического Т-клеточного ответа на антигены ВГС [12-14].According to the data obtained to date, it can be concluded that the individual predictive value of the human genotype is not high enough, since a patient with both a favorable and an unfavorable genotype can achieve SVR, and a number of factors are already known that can modify the effect of the human genotype on the effectiveness of the antiviral therapy [10-11]. In particular, in the literature there is information about the relationship between the quality of the virological response to treatment with pegylated IFNα and ribavirin with the functional state of natural killer cells (EC) and the level of specific T-cell response to HCV antigens [12-14].
В связи с этим целью настоящего исследования было определение дополнительных иммунологических критериев у больных хроническим гепатитом C, которые могли бы повысить предсказательное значение аллельного варианта гена ИЛ-28B у данных больных по развитию или отсутствию у них быстрого вирусологического ответа на терапию препаратами пегилированного ИФНα и рибавирина.In this regard, the aim of this study was to determine additional immunological criteria in patients with chronic hepatitis C that could increase the predictive value of the allelic variant of the IL-28B gene in these patients by the development or absence of a rapid virologic response to therapy with pegylated IFNα and ribavirin drugs.
В настоящее время в международной патентной базе содержится довольно много сведений о способах прогнозирования вирусологического ответа на терапию пегилированным интерфероном α и рибавирином. Среди них есть способы, основанные как на генетических исследованиях, так и на обнаружении отдельных белковых и пептидных маркеров предикции в биологических жидкостях организма.Currently, the international patent base contains a lot of information about methods for predicting the virological response to therapy with pegylated interferon α and ribavirin. Among them, there are methods based both on genetic studies and on the detection of individual protein and peptide prediction markers in body fluids.
Так, например, есть способ прогнозирования формирования вирусологического ответа на терапию у больных ХГС, основанный на соотношении двух сывороточных цитокинов - интерлейкина-18 и фактора некроза опухолей α [15].So, for example, there is a method for predicting the formation of a virological response to therapy in patients with chronic hepatitis C, based on the ratio of two serum cytokines - interleukin-18 and tumor necrosis factor α [15].
Разработаны белковые чипы, а также чипы интерферон-стимулируемых генов (ISG) для прогнозирования результатов интерферонотерапии у больных ХГС [16, 17]. В качестве маркеров чувствительности к терапии пегилированным ИФНα и рибавирином предлагаются тесты по обнаружению в клетках печени определенных микроРНК [18], олигонуклеотидов и мРНК [19, 20].Protein chips have been developed, as well as interferon-stimulated gene (ISG) chips for predicting the results of interferon therapy in patients with chronic hepatitis C [16, 17]. As markers of sensitivity to therapy with pegylated IFNα and ribavirin, tests to detect certain microRNAs [18], oligonucleotides and mRNAs in liver cells are proposed [19, 20].
Имеются в числе запатентованных способов и методы, основанные на предсказательном значении для эффективности противовирусной терапии обнаружения полиморфных генов ИЛ-28B [21, 22, 23].Among the patented methods there are methods based on the predictive value for the effectiveness of antiviral therapy for the detection of IL-28B polymorphic genes [21, 22, 23].
Поскольку предлагаемый нами способ носит комплексный характер и сочетает, помимо генетических, еще и иммунологические методы детекции биомаркеров, а также элементы математического моделирования, прототипом данного исследования следует считать патент Великобритании 2004 г. «Bayesian model for the prognosis of hepatitis C virus infection» [24]. Оба патента объединяет интегральный подход к прогнозированию успешности вирусологического ответа на лечение пегилированным ИФНα и рибавирином, объединив результаты нескольких различных по характеру исследований. Общим является и использование математико-статистического аппарата для оценки исследований, хотя в случае зарубежного патента, в отличие от предлагаемого способа, изучаемые вероятности не были частотными.Since our method is complex and combines, in addition to genetic, immunological methods for detecting biomarkers, as well as elements of mathematical modeling, the 2004 British patent “Bayesian model for the prognosis of hepatitis C virus infection” should be considered the prototype of this study [24 ]. Both patents are united by an integrated approach to predicting the success of a virological response to treatment with pegylated IFNα and ribavirin, combining the results of several studies of a different nature. The use of a mathematical-statistical apparatus to evaluate studies is also common, although in the case of a foreign patent, in contrast to the proposed method, the probabilities studied were not frequency.
Наряду с этим, у аналога с позиций поставленной задачи исследования имеются недостатки, важнейший из которых заключается в том, что рассматриваемая в зарубежном патенте модель определяет вероятность риска неблагоприятного течения инфекционного процесса без выявления конкретных показаний к терапии пегилированным ИФНα и рибавирином, в то время как предлагаемый способ решает эту задачу с довольно высокой диагностической точностью.Along with this, the analogue has disadvantages from the perspective of the research task, the most important of which is that the model considered in the foreign patent determines the risk probability of an adverse course of the infectious process without identifying specific indications for therapy with pegylated IFNα and ribavirin, while the proposed the method solves this problem with fairly high diagnostic accuracy.
В связи с этим особенностью данного изобретения является то, что для достижения технического результата используется комбинация генетических и иммунологических тестов, на основе которых для относительно благоприятных и неблагоприятных для развития вирусологического ответа на противовирусную терапию аллелей разработаны способы расчета коэффициентов иммунопрогнозирования, позволяющие в определенных диапазонах значений этих коэффициентов с высокой диагностической точностью предсказывать развитие быстрого вирусологического ответа.In this regard, the feature of this invention is that to achieve a technical result, a combination of genetic and immunological tests is used, based on which, for relatively favorable and unfavorable for the development of a virological response to antiviral therapy of alleles, methods for calculating immunoprediction coefficients have been developed that allow, in certain ranges of values of these factors with high diagnostic accuracy to predict the development of rapid virological response a.
Под наблюдением находились 18 больных с верифицированным диагнозом хронического вирусного гепатита C, подписавших информированное согласие на исследование их образцов крови. Среди больных было 10 женщин и 8 мужчин со средним возрастом 36,1±10,3 (от 18 лет до 47 лет). У большинства больных (13 человек) фиброз печени находился на начальных стадиях формирования (F1 по шкале Metavir), у 3-х больных на стадии F2 и у 2-х больных на стадии F3. 13 больных были инфицированы генотипом 1b ВГС, 1 человек - генотипом 2a ВГС, 4 человека - генотипом 3a ВГС. Все больные получали терапию пегилированным ИФНα2b 1 раз в неделю подкожно и рибавирином 800-1200 мг в сутки в дозах, рассчитанных по массе тела.Under observation were 18 patients with a verified diagnosis of chronic viral hepatitis C, who signed an informed consent to the study of their blood samples. Among the patients there were 10 women and 8 men with an average age of 36.1 ± 10.3 (from 18 years to 47 years). In most patients (13 people), liver fibrosis was in the initial stages of formation (F1 on the Metavir scale), in 3 patients at the F2 stage and in 2 patients at the F3 stage. 13 patients were infected with HCV genotype 1b, 1 person with HCV genotype 2a, 4 people with HCV genotype 3a. All patients received pegylated IFNα2b therapy once a week subcutaneously and with ribavirin 800-1200 mg per day in doses calculated by body weight.
Кровь всех пациентов была использована для выделения геномной ДНК, РНК ВГС и выполнения иммунологических исследований. Для регистрации быстрого вирусологического ответа вирусная нагрузка в образцах крови определялись дважды - до лечения и через 4 недели от начала лечения.The blood of all patients was used to isolate genomic DNA, HCV RNA and perform immunological studies. To register a quick virological response, viral load in blood samples was determined twice - before treatment and 4 weeks after the start of treatment.
Взятие образцов крови проводилось в вакуумные пластиковые пробирки Vacuette объемом 2,0 мл с ЭДТА в конечной концентрации 2,0 мг/мл. Плазму крови получали центрифугированием образцов при 3000 об/мин в течение 20 мин при комнатной температуре (18-25°C).Blood samples were taken in Vacuette 2.0 ml plastic vacuum tubes with EDTA at a final concentration of 2.0 mg / ml. Blood plasma was obtained by centrifugation of samples at 3000 rpm for 20 min at room temperature (18-25 ° C).
Определение полиморфизма гена ИЛ-28B по rs12979860 (генотипы CC, CT или TT) и rs8099917 (генотипы TT, TG или GG) проводилось с помощью модифицированного метода «примыкающих проб», выявляющего однонуклеотидные замены в генах [25]. Выделение геномной ДНК осуществлялось при помощи роботизированного многофункционального диспенсора Biomeck Workstaion 2000 (Beckman Coulter, USA) в соответствии с инструкцией по применению прибора. В подготовленные заранее пробирки, содержащие смесь для амплификации IL28B rs12979860 C>Т или IL28B: rs8099917 T>G (20 мкл), 10 мкл ПЦР-буфера, 10 мкл Taq-AT-полимеразы, 20 мкл минерального масла, добавляли 5 мкл выделенного из крови образца ДНК. После центрифугирования в вортексе в течение 1-3 сек пробирки устанавливали в блок амплификатора детектирующего «IQ-5», BIO RAD (USA). Регистрация и учет результатов ПЦР проводились автоматически на основе программного обеспечения прибора.The polymorphism of the IL-28B gene was determined using rs12979860 (genotypes CC, CT, or TT) and rs8099917 (genotypes TT, TG, or GG) using the modified method of “adjoining samples” revealing single nucleotide substitutions in genes [25]. Genomic DNA was isolated using a Biomeck Workstaion 2000 robotic multifunctional dispenser (Beckman Coulter, USA) in accordance with the instructions for use of the device. To pre-prepared tubes containing the mixture for amplification IL28B rs12979860 C> T or IL28B: rs8099917 T> G (20 μl), 10 μl of PCR buffer, 10 μl of Taq-AT polymerase, 20 μl of mineral oil, 5 μl isolated from blood DNA sample. After centrifugation in a vortex for 1-3 sec, the tubes were installed in the amplifier unit of the detecting IQ-5, BIO RAD (USA). Registration and recording of PCR results was carried out automatically based on the instrument software.
Для выявления РНК вируса гепатита C, его генотипирования и количественной оценки использовался метод обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции (RT-PCR) на оборудовании «IQ-5», BIO RAD (USA) с использованием набора реагентов «ОТ-ГЕПАТОГЕН-C ГЕНОТИП и «ОТ-ГЕПАТОГЕН-C КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ» в соответствии с инструкциями по применению прибора и набора реагентов. Особенностью количественной оценки РНК ВГС являлось использование набора реагентов, включающего калибровочные образцы HCV-PHK в 2-х концентрациях: 1×106 копий/мл и 3×103 копий/мл. При этом результат определялся как положительный с указанием вирусной нагрузки в образце (копий/мл), если значение вирусной нагрузки находилось в пределах 7,5×102-1×108 копий/мл. Наличие быстрого вирусологического ответа констатировалось в тех случаях, если РНК ВГС была ниже уровня детекции анализатора через 4 недели лечения.To detect hepatitis C virus RNA, its genotyping and quantification, the reverse transcription and polymerase chain reaction (RT-PCR) methods were used on IQ-5 equipment, BIO RAD (USA) using the RT-HEPATOGEN-C GENOTYPE reagent kit and "OT-HEPATOGEN-C QUANTITATIVE" in accordance with the instructions for use of the device and reagent kit. A feature of the quantitative assessment of HCV RNA was the use of a reagent kit including calibration samples of HCV-PHK in 2 concentrations: 1 × 106 copies / ml and 3 × 103 copies / ml. In this case, the result was determined as positive with the indication of the viral load in the sample (copies / ml) if the value of the viral load was in the range of 7.5 × 102-1 × 108 copies / ml. The presence of a rapid virologic response was detected in cases where the HCV RNA was below the analyzer detection level after 4 weeks of treatment.
Иммунологическое исследование включало анализ количественного содержания в крови лимфоцитов различного популяционного/субпопуляционного состава, а также пролиферирующих лимфоцитов с использованием проточного цитофлуориметра BD FACSCanto II (Becton Dickinson, США). Для определения количественного содержания Т-лимфоцитов, их основных субпопуляций, В-лимфоцитов, а также естественных киллерных клеток среди лимфоцитов крови (CD45+ клеток) использовался стандартизированный комплект моноклональных антител (МКАТ) BD Multitest 6-Color TBNK Reagent (BD Biosciences, США), содержащий меченные PerCP-Cy5.5 anti-CD45 МКАТ, меченные FITC anti-CD3 МКАТ, меченные PE-Cy7 anti-CD4 МКАТ, меченные АРС-Cy7 anti-CD8 МКАТ, меченные АРС anti-CD19 МКАТ, меченные РЕ anti-CD16/anti-CD56 МКАТ. Для определения экспрессии поверхностного маркера активации CD25 использовали смесь МКАТ, содержащую anti-human-CD3 МКАТ, меченные PerCP (BD Biosciences, США), и anti-human-CD25 МКАТ, меченные АРС (BD Biosciences, США). Для числа CD3+ клеток определялась субпопуляция регуляторных Т-клеток по экспрессии внутриклеточного маркера PoxP3, регистрируемого с помощью anti-human-FoxP3 МКАТ, меченных PE (BD Biosciences, США), и пермабилизирующих компонентов фирмы Beckman Coulter (США). Для числа CD3+, CD3+/CD4+, CD3+/CD8+ и CD3-/CD56+ клеток определялась пролиферативная активность по наличию внутриклеточного маркера пролиферирующих клеток - Ki67 (Ki-67+), для чего использовались моноклональные антитела, меченные PE (BD Biosciences, США), и пермабилизирующие компоненты фирмы Beckman Coulter (США).An immunological study included analysis of the quantitative blood count of lymphocytes of different population / subpopulation composition, as well as proliferating lymphocytes using a BD FACSCanto II flow cytometer (Becton Dickinson, USA). To determine the quantitative content of T-lymphocytes, their main subpopulations, B-lymphocytes, as well as natural killer cells among blood lymphocytes (CD45 + cells), a standardized set of monoclonal antibodies (MKAT) BD Multitest 6-Color TBNK Reagent (BD Biosciences, USA) was used containing PerCP-Cy5.5 labeled anti-CD45 MKAT labeled with FITC anti-CD3 MKAT labeled with PE-Cy7 anti-CD4 MKAT labeled with APC-Cy7 anti-CD8 MKAT labeled with APC anti-CD19 MKAT labeled with PE anti-CD16 / anti-CD56 MKAT. A mixture of MKAT containing anti-human-CD3 MKAT labeled with PerCP (BD Biosciences, USA) and anti-human-CD25 MKAT labeled with APC (BD Biosciences, USA) were used to determine the expression of the surface marker of activation of CD25. For the number of CD3 + cells, a subpopulation of regulatory T cells was determined by expression of the intracellular marker PoxP3 registered using anti-human-FoxP3 MKAT labeled with PE (BD Biosciences, USA) and permabilizing components from Beckman Coulter (USA). For the number of CD3 +, CD3 + / CD4 +, CD3 + / CD8 + and CD3- / CD56 + cells, proliferative activity was determined by the presence of an intracellular marker of proliferating cells - Ki67 (Ki-67 +), for which monoclonal antibodies labeled with PE were used (BD Biosciences, USA), and permabilizing components from Beckman Coulter (USA).
Статистическая обработка данных осуществлялась на основе пакета программ SPSS, версия 17. Использовались методы дискриптивной статистики, сопоставление показателей в группах исследования осуществлялось непараметрическим методом по критерию Манна-Уитни. Определение диагностического значения информативных показателей сопровождалось расчетом их 95% доверительных интервалов, построением ROC-кривой и определением величины AUROC.Statistical data processing was carried out on the basis of the SPSS software package, version 17. Methods of discriminative statistics were used, indicators in the study groups were compared using a nonparametric method according to the Mann-Whitney test. The determination of the diagnostic value of informative indicators was accompanied by the calculation of their 95% confidence intervals, the construction of the ROC curve and the determination of the AUROC value.
Результаты генотипирования больных представлены в таблице 1, из которой следует, что относительно часто встречающейся среди больных ХГС была комбинация аллельных вариантов СС гена rs 12979860 и TT гена rs 8099917 - 10 человек. Эта категория больных расценивалась с позиций относительно «благоприятного» прогноза по ответу на стандартную противовирусную терапию. К относительно «неблагоприятному» генотипу были отнесены несколько вариантов, в частности комбинации аллелей CT-TT (2 человека), CT-TG (5 человек) и TT-TG (1 человек), то есть все случаи, когда хотя бы одна аллель считалась неблагоприятной. В результате все обследованные были поделены на 2 группы: (1) пациенты с относительно благоприятным генотипом CC-TT - 10 человек, (2) пациенты с относительно неблагоприятными генотипами CT-TT, CT-TG, TT-TG - 8 человек.The results of the genotyping of patients are presented in Table 1, from which it follows that a relatively common among HCV patients was a combination of allelic variants of the SS gene rs 12979860 and TT gene rs 8099917 - 10 people. This category of patients was evaluated from the perspective of a “favorable” prognosis for the response to standard antiviral therapy. Several variants were assigned to the relatively “unfavorable” genotype, in particular, the combination of CT-TT (2 people), CT-TG (5 people) and TT-TG (1 people) alleles, that is, all cases where at least one allele was considered unfavorable. As a result, all the examined were divided into 2 groups: (1) patients with a relatively favorable genotype CC-TT - 10 people, (2) patients with a relatively unfavorable genotype CT-TT, CT-TG, TT-TG - 8 people.
Сочетание различных аллельных вариантов гена ИЛ-28B с развитием быстрого вирусологического ответа (БВО) у наблюдаемых больных представлено на фиг.1, из которого следует, что предсказательное значение поморфизмов гена ИЛ-28B не абсолютно, поскольку как у лиц с благоприятной аллелью возможно отсутствие БВО, так и у лиц с неблагоприятной аллелью возможно его наличие.The combination of different allelic variants of the IL-28B gene with the development of a rapid virological response (BVI) in the observed patients is shown in Fig. 1, from which it follows that the predictive value of the pomorphisms of the IL-28B gene is not absolute, since in individuals with a favorable allele the absence of BVO is possible , and in individuals with an unfavorable allele, its presence is possible.
Анализ иммунного статуса проводился раздельно в группах пациентов с благоприятным и неблагоприятными генотипами с разграничением подгрупп по наличию и отсутствию быстрого вирусологического ответа. Результаты иммунологического исследования представлены в таблице 2.The analysis of the immune status was carried out separately in groups of patients with favorable and unfavorable genotypes, with the division of subgroups by the presence and absence of a rapid virologic response. The results of immunological studies are presented in table 2.
Поскольку основной целью исследования служил прогноз развития БВО, то в этой ситуации при анализе каждого аллельного варианта необходимо было выделить в них дифференциальные иммунологические признаки, характеризующие наличие или отсутствие БВО. Обращает на себя внимание тот факт, что не удалось установить ни одного показателя, который позволял бы дифференцировать все 4 группы одновременно.Since the main objective of the study was the prognosis of the development of BVI, in this situation, when analyzing each allelic variant, it was necessary to isolate the differential immunological signs characterizing the presence or absence of BVO. It is noteworthy that it was not possible to establish a single indicator that would differentiate all 4 groups at the same time.
При наличии у пациентов «благоприятного» варианта гена ИЛ-28B (CC-TT) с разным результатом по БВО (+/-) основные отличия коснулись параметров базовой иммунограммы, то есть, в первую очередь, абсолютного содержания в крови CD3+, CD3+/CD4+, CD3+/CD8+, CD19+ лимфоцитов. В то же время в группах пациентов с «неблагоприятными» вариантами гена ИЛ-28B и разным результатом по достижимости БВО основные отличия относились к активационно-пролиферативному статусу лимфоцитов и затрагивали процентное содержание в крови CD3+/CD25high, CD3+/CD25high/FoxP3+, CD56+/CD16+/ki-67+ клеток.If patients have a “favorable” variant of the IL-28B gene (CC-TT) with a different BVO result (+/-), the main differences affected the parameters of the basic immunogram, that is, first of all, the absolute blood content of CD3 +, CD3 + / CD4 + , CD3 + / CD8 +, CD19 + lymphocytes. At the same time, in groups of patients with “unfavorable” variants of the IL-28B gene and different outcomes for BVO attainability, the main differences related to the activation-proliferative status of lymphocytes and affected the percentage of blood CD3 + / CD25high, CD3 + / CD25high / FoxP3 +, CD56 + / CD16 + / ki-67 + cells.
Таким образом, разным группам аллельных вариантов гена ИЛ-28B («благоприятный» и «неблагоприятные» варианты) и наличию или отсутствию БВО соответствовали принципиально различные сдвиги иммунограмм. С использованием программы SPSS (17) были получены «коэффициенты иммунопрогнозирования» (КИП), которые были результатом решения 2-х уравнений линейной регрессии успеха/неуспеха достижения БВО при наличии разных аллельных вариантов ИЛ-28B (КИП1 - формула 1 и КИП2 - формула 2).Thus, different groups of allelic variants of the IL-28B gene (“favorable” and “unfavorable” variants) and the presence or absence of BVI corresponded to fundamentally different shifts of immunograms. Using the SPSS program (17), “immunoprediction coefficients” (CIP) were obtained that were the result of solving 2 equations of linear regression of success / failure to achieve BVI in the presence of different allelic variants of IL-28B (CIP1 - formula 1 and CIP2 - formula 2 )
где [CD3+] - абсолютное содержание CD3+ клеток в 1 л крови, [CD4+] - абсолютное содержание CD3+/CD4+ клеток в 1 л крови, [CD8+] - абсолютное содержание CD3+/CD8+ клеток в 1 л крови, [CD19+] - абсолютное содержание CD19+ клеток в 1 л крови.where [CD3 +] is the absolute content of CD3 + cells in 1 liter of blood, [CD4 +] is the absolute content of CD3 + / CD4 + cells in 1 liter of blood, [CD8 +] is the absolute content of CD3 + / CD8 + cells in 1 liter of blood, [CD19 +] is the absolute content CD19 + cells in 1 liter of blood.
где [CD56+/ki-67+] - процент CD16+/CD56+/ki-67+ клеток среди лимфоцитов крови, [CD25hi] - процент CD3+/CD25high клеток среди лимфоцитов крови, [CD25hi/FoxP3+] - процент CD3+/CD25high/FoxP3+ клеток среди лимфоцитов крови.where [CD56 + / ki-67 +] is the percentage of CD16 + / CD56 + / ki-67 + cells among blood lymphocytes, [CD25hi] is the percentage of CD3 + / CD25high cells among blood lymphocytes, [CD25hi / FoxP3 +] is the percentage of CD3 + / CD25high / FoxP3 + cells among blood lymphocytes.
На фиг.2 и 4 представлены 95% доверительные интервалы коэффициентов иммунопрогнозирования успеха и неуспеха БВО, рассчитанные для всех групп пациентов с разными аллельными вариантами гена ИЛ-28B и разным успехом по БВО, а также ROC-кривые для дифференциации групп (фиг.3 и 5).Figures 2 and 4 show 95% confidence intervals of the BVI success and failure immunoprediction coefficients calculated for all groups of patients with different allelic variants of the IL-28B gene and different BVI success, as well as ROC curves for group differentiation (Fig. 3 and 5).
Как показывает фиг.2, группы пациентов с благоприятным аллельным вариантом и наличием БВО достоверно отличалась от группы пациентов с такой же благоприятной аллелью гена ИЛ-28B, но без БВО, по величине КИП1, в то время как неблагоприятные аллели такого различия не демонстрировали. При этом значения КИП1<1,5 с практически абсолютной информативностью свидетельствовали о вероятности получения БВО, а >1,5 - в пользу отсутствия БВО у пациентов с CC-TT вариантом генотипа по ИЛ-28B, что подтверждается величиной AUROC, равной 1, на фиг.3.As shown in Fig. 2, the group of patients with a favorable allelic variant and the presence of BVO was significantly different from the group of patients with the same favorable allele of the IL-28B gene, but without BVO, in the value of KIP1, while the unfavorable alleles did not show such a difference. At the same time, KIP1 values <1.5 with almost absolute informativeness testified to the likelihood of receiving BVI, and> 1.5 - in favor of the absence of BVI in patients with CC-TT variant of the IL-28B genotype, which is confirmed by the AUROC value of 1, by figure 3.
Как видно из фиг.4, в случае неблагоприятных аллельных вариантов гена ИЛ-28B «не CC-TT» (CT-TT, CT-TG, TT-TG) диагностически значимым показателем становится другой коэффициент - КИП2. Так, в случае неблагоприятного аллельного варианта гена ИЛ-28B значения этого коэффициента <3,0 свидетельствуют в пользу развития БВО, а >3,0 - о практически абсолютной вероятности его отсутствия, что подтверждается величиной AUROC, равной 1, представленной на фиг.5.As can be seen from figure 4, in the case of unfavorable allelic variants of the IL-28B gene "non-CC-TT" (CT-TT, CT-TG, TT-TG), a different coefficient becomes another diagnostic factor - KIP2. So, in the case of an unfavorable allelic variant of the IL-28B gene, the values of this coefficient <3.0 indicate in favor of the development of BVI, and> 3.0 indicate the almost absolute probability of its absence, which is confirmed by the AUROC value of 1, shown in Fig. 5 .
Таким образом, прогнозирование успеха терапии пегилированным ИФНα и рибавирином на основе варианта полиморфизма гена ИЛ-28B не является абсолютным и требует дополнительных критериев. Предлагаемый нами способ показывает, что эти критерии были получены на основе иммунологических показателей и они различны для благоприятных и неблагоприятных аллелей гена ИЛ-28B.Thus, predicting the success of therapy with pegylated IFNα and ribavirin based on the variant polymorphism of the IL-28B gene is not absolute and requires additional criteria. Our proposed method shows that these criteria were obtained on the basis of immunological parameters and they are different for favorable and unfavorable alleles of the IL-28B gene.
Способ иллюстрируется следующими чертежами.The method is illustrated by the following drawings.
Фиг.1. Частота встречаемости наличия и отсутствия быстрого вирусологического ответа на терапию пегилированным интерфероном α и рибавирином у больных хроническим гепатитом C с различными аллельными вариантами гена ИЛ-28B.Figure 1. The frequency of occurrence of the presence and absence of a rapid virological response to therapy with pegylated interferon α and ribavirin in patients with chronic hepatitis C with various allelic variants of the IL-28B gene.
Фиг.2. 95% доверительные интервалы коэффициента иммунопрогнозирования 1 (КИП1) у больных хроническим гепатитом C с наличием и отсутствием быстрого вирусологического ответа на стандартную терапию при разных аллельных вариантах гена ИЛ-28B.Figure 2. 95% confidence intervals of the immunoprediction coefficient 1 (CIP1) in patients with chronic hepatitis C with and without a rapid virological response to standard therapy for different allelic variants of the IL-28B gene.
Фиг.3. ROC-кривая различий по величине КИП1 у больных хроническим гепатитом C с благоприятным аллельным вариантом (CC-TT) гена ИЛ-28B при наличии и отсутствии быстрого вирусологического ответа на стандартную терапию.Figure 3. ROC-curve of differences in the value of KIP1 in patients with chronic hepatitis C with a favorable allelic variant (CC-TT) of the IL-28B gene in the presence and absence of a rapid virologic response to standard therapy.
Фиг.4. 95% доверительные интервалы коэффициента иммунопрогнозирования 2 (КИП2) у больных хроническим гепатитом C с наличием и отсутствием быстрого вирусологического ответа на стандартную терапию при разных аллельных вариантах гена ИЛ-28B.Figure 4. 95% confidence intervals immunoprediction coefficient 2 (CIP2) in patients with chronic hepatitis C with and without a rapid virological response to standard therapy for different allelic variants of the IL-28B gene.
Фиг.5. ROC-кривая различий по величине КИП2 у больных хроническим гепатитом C с неблагоприятными аллельными вариантами (не CC-TT) гена ИЛ-28B при наличии и отсутствии быстрого вирусологического ответа на стандартную терапию.Figure 5. ROC-curve of differences in the value of KIP2 in patients with chronic hepatitis C with unfavorable allelic variants (not CC-TT) of the IL-28B gene in the presence and absence of a quick virological response to standard therapy.
Способ иллюстрируется следующими клиническими примерами.The method is illustrated by the following clinical examples.
Пример 1Example 1
Пациент Т., 46 лет, наблюдался в гепатологическом центре ИКБ №1. Антитела к вирусу впервые обнаружены в декабре 2011 г. при обследовании по поводу случая желтушной формы гепатита у коллеги по работе. В анамнезе у пациента не было хронических заболеваний и полостных оперативных вмешательств. В прошлом в течение порядка 10 лет злоупотреблял алкогольными напитками.Patient T., 46 years old, was observed at the Hepatology Center IKB No. 1. Antibodies to the virus were first detected in December 2011 during an examination for a case of icteric hepatitis in a colleague. The patient had no history of chronic diseases or abdominal surgery. In the past, for about 10 years, he abused alcohol.
При дальнейшем обследовании выявлен 3a генотип вируса гепатита C. По данным пункционной биопсии печени (в марте 2012 г.) выявлен фиброз 1 (Metavir). Определялся генотип пациента по аллельному варианту полиморфизмов rs12979860 и rs8099917 гена интерлейкина 28B и был установлен генотип CC-TT («благоприятный» генотип для УВО).Further examination revealed the genotype 3a of the hepatitis C virus. According to puncture biopsy of the liver (in March 2012), fibrosis 1 (Metavir) was detected. The patient’s genotype was determined from the allelic variant of the rs12979860 and rs8099917 polymorphisms of the interleukin 28B gene and the CC-TT genotype was established (“favorable” genotype for SVR).
Пациент Т. был мотивирован к проведению терапии ХГС и включен в настоящее исследование с проведением иммунологического обследования. В общем анализе крови не наблюдалось отклонений от общепопуляционных норм, в биохимическом анализе обращали на себя внимание небольшое повышение уровней АЛТ - 83 ЕД, ACT - 56 ЕД, общий билирубин - 12 ммоль/л, прямой - 0,8 ммоль/л, непрямой - 11,2 ммоль/л. РНК HCV до лечения - 4,8×105 МЕ/мл.Patient T. was motivated to conduct HCV therapy and was included in the present study with immunological examination. In the general blood test, no deviations from the general population norms were observed, in the biochemical analysis, a slight increase in ALT levels - 83 PIECES, ACT - 56 PIECES, total bilirubin - 12 mmol / L, direct - 0.8 mmol / L, indirect - was noteworthy. 11.2 mmol / L. HCV RNA before treatment - 4.8 × 10 5 IU / ml.
Показатели иммунограммы по абсолютному содержанию в крови лимфоцитов, необходимых для тестирования, до лечения: CD3+ - 1,93*109/л, CD3+/CD4+ - 0,94*109/л, CD3+/CD4+ - 0,97*109/л, CD19+ - 0,53*109/л.Immunogram indices for the absolute content of lymphocytes in the blood necessary for testing before treatment: CD3 + - 1.93 * 10 9 / L, CD3 + / CD4 + - 0.94 * 10 9 / L, CD3 + / CD4 + - 0.97 * 10 9 / l, CD19 + - 0.53 * 10 9 / l.
Учитывая благоприятный аллельный вариант гена ИЛ-28B, была использована следующая формула для расчета коэффициента иммунопрогнозирования: КИП1=2,774-0,833*[CD3+]-0,016*[CD4+]-0,063*[CD8+]-0,525*[CD19+]. КИП1 у данного больного составлял 0,81 (меньше 1,5), что позволяло прогнозировать у него развитие быстрого вирусологического ответа.Given the favorable allelic variant of the IL-28B gene, the following formula was used to calculate the immunoprediction coefficient: KIP1 = 2.774-0.833 * [CD3 +] - 0.016 * [CD4 +] - 0.063 * [CD8 +] - 0.525 * [CD19 +]. KIP1 in this patient was 0.81 (less than 1.5), which allowed him to predict the development of a rapid virologic response.
Пациенту была назначена противовирусная терапия (Альгерон 1,5 мкг/кг/нед, Ребетол 1000 мг/сут). На фоне лечения на 4 неделе при вирусологическом обследовании в крови вирус не определялся, то есть был достигнут быстрый вирусологический ответ. Лечение продолжалось в течение 24 недель, и были достигнуты ранний вирусологический ответ, ответ в конце терапии и устойчивый вирусологический ответ.The patient was prescribed antiviral therapy (Algeron 1.5 μg / kg / week, Rebetol 1000 mg / day). Against the background of treatment at 4 weeks during a virological examination in the blood, the virus was not detected, that is, a quick virological response was achieved. Treatment continued for 24 weeks, and an early virologic response, an end-of-therapy response, and a sustained virologic response were achieved.
Пример 2Example 2
Пациент З., 37 лет, наблюдался в гепатологическом центре ИКБ №1. Антитела к вирусу впервые обнаружены в 1998 г. при обследовании на донорство. В анамнезе у пациента не было хронических заболеваний. С 1990 по 1992 гг. перенес 6 операций на коленном суставе по поводу спортивной травмы.Patient Z., 37 years old, was observed at the hepatological center of the hospital No. 1. Antibodies to the virus were first detected in 1998 during a donation test. The patient had no history of chronic diseases. From 1990 to 1992 suffered 6 operations on the knee due to sports injury.
При дальнейшем обследовании выявлен 3a генотип вируса гепатита C. По данным пункционной биопсии печени (в июне 2010 г.) выявлен фиброз 2 (Metavir). Определялся генотип пациента по аллельному варианту полиморфизмов rs12979860 и rs8099917 гена интерлейкина 28B и был установлен генотип CC-TT («благоприятный» генотип для УВО).Further examination revealed the genotype 3a of the hepatitis C virus. According to the puncture biopsy of the liver (in June 2010), fibrosis 2 (Metavir) was detected. The patient’s genotype was determined from the allelic variant of the rs12979860 and rs8099917 polymorphisms of the interleukin 28B gene and the CC-TT genotype was established (“favorable” genotype for SVR).
Пациент З. был мотивирован к проведению терапии ХГС и включен в настоящее исследование с углубленным иммунологическим обследованием. В общем анализе крови не наблюдалось отклонений от общепопуляционных норм, в биохимическом анализе обращали на себя внимание небольшое повышение уровней АЛТ - 114 ЕД, ACT - 67 ЕД, общий билирубин - 11,8 ммоль/л, прямой - 3,8 ммоль/л, непрямой - 8 ммоль/л. РНК HCV до лечения - 4,72×106 МЕ/мл. Показатели иммунограммы по абсолютному содержанию в крови лимфоцитов, необходимых для тестирования, до лечения: CD3+ - 1,03*109/л, CD3+/CD4+ - 0,69*109/л, CD3+/CD4+ - 0,31*109/л, CD19+ - 0,17*109/л.Patient Z. was motivated to conduct HCV therapy and was included in the present study with an in-depth immunological examination. In the general blood test, no deviations from the general population norms were observed, in the biochemical analysis, a slight increase in ALT levels was noted - 114 units, ACT - 67 units, total bilirubin - 11.8 mmol / l, direct - 3.8 mmol / l, indirect - 8 mmol / l. HCV RNA before treatment - 4.72 × 10 6 IU / ml. Immunogram indices for the absolute content of blood lymphocytes necessary for testing before treatment: CD3 + - 1.03 * 10 9 / L, CD3 + / CD4 + - 0.69 * 10 9 / L, CD3 + / CD4 + - 0.31 * 10 9 / l, CD19 + - 0.17 * 10 9 / l.
Учитывая благоприятный аллельный вариант гена ИЛ-28B, была использована следующая формула для расчета коэффициента иммунопрогнозирования: КИП1=2,774-0,833*[CD3+]-0,016*[CD4+]-0,063*[CD8+]-0,525*[CD19+]. КИП1 у данного больного составлял 1,80 (больше 1,5), что позволяло прогнозировать у него, несмотря на благоприятный генотип, отсутствие быстрого вирусологического ответа.Given the favorable allelic variant of the IL-28B gene, the following formula was used to calculate the immunoprediction coefficient: KIP1 = 2.774-0.833 * [CD3 +] - 0.016 * [CD4 +] - 0.063 * [CD8 +] - 0.525 * [CD19 +]. KIP1 in this patient was 1.80 (more than 1.5), which allowed him to predict, despite a favorable genotype, the absence of a quick virological response.
Пациенту была назначена противовирусная терапия (Альгерон 2,0 мкг/кг/нед, Ребетол 1200 мг/сут). На фоне лечения на 4 неделе при вирусологическом обследовании в крови определялся вирус в количестве менее 15 МЕ/мл, то есть быстрый вирусологический ответ не был достигнут. Лечение продолжалось в течение 24 недель, в ходе терапии был достигнут ранний вирусологический ответ, но ответ в конце лечения и устойчивый вирусологический ответ достигнуты не были.The patient was prescribed antiviral therapy (Algeron 2.0 μg / kg / week, Rebetol 1200 mg / day). Against the background of treatment at 4 weeks during a virological examination, a virus of less than 15 IU / ml was determined in the blood, that is, a quick virological response was not achieved. The treatment lasted for 24 weeks, during the course of therapy an early virological response was achieved, but a response at the end of the treatment and a stable virologic response were not achieved.
Пример 3Example 3
Пациентка Г., 32 года, наблюдалась в гепатологическом центре ИКБ №1. Антитела к вирусу впервые обнаружены в июне 2006 г. при обследовании по поводу сопутствующей гинекологической патологии. В анамнезе у пациентки аденомиоз, хронический сальпингооофорит, в 2007 г. - резекция левого яичника (киста), сальпингоовариолизис, в 2010 - сальпингит, удаление левой маточной трубы.Patient G., 32 years old, was observed at the hepatological center of the hospital No. 1. Antibodies to the virus were first detected in June 2006 during an examination for concomitant gynecological pathology. The patient had a history of adenomyosis, chronic salpingo-oophoritis, in 2007 - resection of the left ovary (cyst), salpingo-ovariolysis, in 2010 - salpingitis, removal of the left fallopian tube.
При дальнейшем обследовании выявлен 2a генотип вируса гепатита C. По данным фиброэластометрии определялся фиброз 0. Генотип по аллельному варианту полиморфизмов rs12979860 и rs8099917 гена интерлейкина 28B был CT-TT («неблагоприятный» генотип для УВО).Further examination revealed hepatitis C virus genotype 2a.
Пациентка Г. была мотивирована к проведению терапии ХГС и включена в настоящее исследование с углубленным иммунологическим обследованием. В общем анализе крови не наблюдалось отклонений от общепопуляционных норм, в биохимическом анализе обращали на себя внимание повышение уровней АЛТ - 154 ЕД, ACT - 67 ЕД, общий билирубин - 9,9 ммоль/л, прямой - 3,8 ммоль/л, непрямой - 6,1 ммоль/л. РНК HCV до лечения - 2,35×106 МЕ/мл.Patient G. was motivated to conduct HCV therapy and was included in the present study with an in-depth immunological examination. In the general blood test, deviations from the general population norms were not observed, in the biochemical analysis, an increase in ALT levels of 154 units, ACT, 67 units, total bilirubin, 9.9 mmol / l, direct, 3.8 mmol / l, indirect - 6.1 mmol / l. HCV RNA before treatment is 2.35 × 10 6 IU / ml.
При углубленном иммунологическом анализе было установлено: пролиферирующие ЕК не определялись (0), CD3+/CD25high клетки - 0,2%, CD3+/CD25high/FoxP3+ клетки - 38,5%. Учитывая неблагоприятный аллельный вариант гена ИЛ-28B, была использована следующая формула для расчета коэффициента иммунопрогнозирования: КИП2=3,994+0,014*[CD56+/ki-67+]-0,408*[CD25high]-0,69*[CD25high/FoxP3]. КИП2 у данной больной составлял -22,65 (меньше 3,0), что позволяло прогнозировать у нее наличие быстрого вирусологического ответа.An in-depth immunological analysis showed that proliferating ECs were not detected (0), CD3 + / CD25high cells - 0.2%, CD3 + / CD25high / FoxP3 + cells - 38.5%. Given the unfavorable allelic variant of the IL-28B gene, the following formula was used to calculate the immunoprediction coefficient: KIP2 = 3.994 + 0.014 * [CD56 + / ki-67 +] - 0.408 * [CD25high] -0.69 * [CD25high / FoxP3]. KIP2 in this patient was -22.65 (less than 3.0), which allowed her to predict the presence of a quick virological response.
Пациентке была назначена противовирусная терапия (Альгерон 1,5 мкг/кг/нед, Ребетол 1000 мг/сут). На фоне лечения при вирусологическом обследовании на 4 неделе терапии вирус в крови не определялся, был достигнут быстрый вирусологический ответ. Лечение продолжалось в течение 24 недель, и были достигнуты ранний вирусологический ответ, ответ в конце терапии и устойчивый вирусологический ответ.The patient was prescribed antiviral therapy (Algeron 1.5 μg / kg / week, Rebetol 1000 mg / day). Against the background of treatment during virological examination at 4 weeks of therapy, the virus in the blood was not detected, a quick virological response was achieved. Treatment continued for 24 weeks, and an early virologic response, an end-of-therapy response, and a sustained virologic response were achieved.
Пример 4Example 4
Пациент К., 43 года, наблюдался в гепатологическом центре ИКБ №1. Антитела к вирусу впервые обнаружены в ноябре 2010 г. при обследовании в стационаре по поводу токсико-аллергической реакции. В анамнезе у пациента не было хронических заболеваний и полостных оперативных вмешательств. В 1986 году проводилось переливание крови по поводу укуса гюрзы.Patient K., 43 years old, was observed at the hepatological center of the hospital No. 1. Antibodies to the virus were first detected in November 2010 during an examination in a hospital about a toxic-allergic reaction. The patient had no history of chronic diseases or abdominal surgery. In 1986, a blood transfusion was performed for a bite of a gyurza.
При дальнейшем обследовании выявлен 1b генотип вируса гепатита C. По данным пункционной биопсии печени (в марте 2011 г.) выявлен фиброз 3 (Metavir). Определялся также генотип пациента по аллельному варианту полиморфизмов rs12979860 и rs8099917 гена интерлейкина 28B и был установлен CT-TG («неблагоприятный» генотип для УВО).Further examination revealed hepatitis C virus genotype 1b. According to puncture biopsy of the liver (in March 2011), fibrosis 3 (Metavir) was detected. The patient’s genotype was also determined from the allelic variant of the rs12979860 and rs8099917 polymorphisms of the interleukin 28B gene and CT-TG (“unfavorable” genotype for SVR) was established.
Пациент К. был мотивирован к проведению терапии ХГС и включен в настоящее исследование с углубленным иммунологическим обследованием. В общем анализе крови не наблюдалось отклонений от общепопуляционных норм, в биохимическом анализе обращали на себя внимание повышение уровней АЛТ - 372 ЕД, ACT - 233 ЕД, общий билирубин - 24,4 ммоль/л, прямой - 7,1 ммоль/л, непрямой - 17,3 ммоль/л. PHK HCV до лечения - 4,07×105 МЕ/мл. Показатели стандартной иммунограммы до лечения соответствовали среднестатистическим показателям здоровых взрослых лиц.Patient K. was motivated to conduct HCV therapy and was included in the present study with an in-depth immunological examination. In the general blood test, no deviations from the general population norms were observed, in the biochemical analysis, an increase in ALT levels of 372 units, ACT, 233 units, total bilirubin, 24.4 mmol / l, direct, 7.1 mmol / l, indirect - 17.3 mmol / l. HCV PHK before treatment - 4.07 × 10 5 IU / ml. The indicators of the standard immunogram before treatment corresponded to the average indicators of healthy adults.
При углубленном иммунологическом анализе было установлено: число пролиферирующих ЕК - 5,0%, CD3+/CD25high и CD3+/CD25high/FoxP3+ клетки не обнаружены. Учитывая неблагоприятный аллельный вариант гена ИЛ-28B, была использована следующая формула для расчета коэффициента иммунопрогнозирования: КИП2=3,994+0,014*[CD56+/ki-67+]-0,408*[CD25high]-0,69*[CD25high/FoxP3]. КИП2 у данного больного составлял 4,06 (больше 3,0), что позволяло прогнозировать у него отсутствие быстрого вирусологического ответа.An in-depth immunological analysis showed that the number of proliferating ECs was 5.0%, no CD3 + / CD25high and CD3 + / CD25high / FoxP3 + cells were detected. Given the unfavorable allelic variant of the IL-28B gene, the following formula was used to calculate the immunoprediction coefficient: KIP2 = 3.994 + 0.014 * [CD56 + / ki-67 +] - 0.408 * [CD25high] -0.69 * [CD25high / FoxP3]. KIP2 in this patient was 4.06 (more than 3.0), which allowed him to predict the absence of a quick virological response.
Пациенту была назначена противовирусная терапия (Пегинтрон 1,5 мкг/кг/нед, Ребетол 1200 мг/сут) на 48 недель. При вирусологическом обследовании на 4-й неделе терапии в крови определялся вирус в количестве 3,5×103 МЕ/мл, то есть быстрый вирусологический ответ не был достигнут. На фоне терапии у пациента отмечалось развитие панцитопении (анемии тяжелой степени, лейкопении и тромбоцитопении), что потребовало госпитализации в гематологическое отделение и исключения из исследования через 6 недель от начала противовирусной терапии.The patient was prescribed antiviral therapy (Pegintron 1.5 μg / kg / week, Rebetol 1200 mg / day) for 48 weeks. During a virological examination at the 4th week of therapy, the virus was determined in the amount of 3.5 × 10 3 IU / ml in blood, that is, a quick virological response was not achieved. During therapy, the patient noted the development of pancytopenia (severe anemia, leukopenia and thrombocytopenia), which required hospitalization in the hematology department and exclusion from the study 6 weeks after the start of antiviral therapy.
ЛитератураLiterature
1. Fung, J. Hepatitis B and C virus-related carcinogenesis / J. Fung, C.L. Lai, M.F. Yuen // Clin Microbiol Infect. - 2009. - Vol.15, N11. - P.964-970.1. Fung, J. Hepatitis B and C virus-related carcinogenesis / J. Fung, C. L. Lai, M.F. Yuen // Clin Microbiol Infect. - 2009 .-- Vol.15, N11. - P.964-970.
2. Pham, T.N. Occult persistence and lymphotropism of hepatitis C virus infection / T.N. Pham, T.I. Michalak // World J Gastroenterol. - 2008. - Vol.14, N18. - P.2789-2793.2. Pham, T.N. Occult persistence and lymphotropism of hepatitis C virus infection / T.N. Pham, T.I. Michalak // World J Gastroenterol. - 2008 .-- Vol.14, N18. - P.2789-2793.
3. Stauber, R.E., Lackner C (2007). Noninvasive diagnosis of hepatic fibrosis in chronic hepatitis C / R.E. Stauber, C. Lackner // World J Gastroenterol. - 2007. - Vol.13, N32. - P.4287-4294.3. Stauber, R.E., Lackner C (2007). Noninvasive diagnosis of hepatic fibrosis in chronic hepatitis C / R.E. Stauber, C. Lackner // World J Gastroenterol. - 2007 .-- Vol.13, N32. - P.4287-4294.
4. Craxi, A. (2011). EASL Clinical Practice Guidelines: management of hepatitis C virus infection / A. Craxi A // J Hepatol. - 2011. - Vol.55, N2. - P.245-264.4. Craxi, A. (2011). EASL Clinical Practice Guidelines: management of hepatitis C virus infection / A. Craxi A // J Hepatol. - 2011 .-- Vol.55, N2. - P.245-264.
5. Ge, D. Genetic variation in IL28B predicts hepatitis C treatment-induced viral clearance / D. Ge, J. Fellay, A.J. Thompson et al. // Nature. - 2009. - Vol.461, N7262. - P.399-401.5. Ge, D. Genetic variation in IL28B predicts hepatitis C treatment-induced viral clearance / D. Ge, J. Fellay, A.J. Thompson et al. // Nature. - 2009 .-- Vol.461, N7262. - P.399-401.
6. Suppiah, V. IL28B is associated with response to chronic hepatitis C interferon-alpha and ribavirin therapy / V. Suppiah, M. Moldovan, G. Ahlenstiel et al. // Nat Genet. - 2009. - Vol.41, N10. - P.1100-1104.6. Suppiah, V. IL28B is associated with response to chronic hepatitis C interferon-alpha and ribavirin therapy / V. Suppiah, M. Moldovan, G. Ahlenstiel et al. // Nat Genet. - 2009 .-- Vol.41, N10. - P.1100-1104.
7. Tanaka, Y. Genome-wide association of IL28B with response to pegylated interferon-alpha and ribavirin therapy for chronic hepatitis C / Y. Tanaka, N. Nishida, M. Sugiyama et al. // Nat Genet. - 2009. - Vol.41, N10. - P.1105-1109.7. Tanaka, Y. Genome-wide association of IL28B with response to pegylated interferon-alpha and ribavirin therapy for chronic hepatitis C / Y. Tanaka, N. Nishida, M. Sugiyama et al. // Nat Genet. - 2009 .-- Vol.41, N10. - P.1105-1109.
8. Thomas, D.L. Genetic variation in IL28B and spontaneous clearance of hepatitis C virus / D.L. Thomas, C.L. Thio, M.P. Martin et al. // Nature. - 2009. - Vol.461, N7263. - P.798-801.8. Thomas, D.L. Genetic variation in IL28B and spontaneous clearance of hepatitis C virus / D.L. Thomas, C.L. Thio, M.P. Martin et al. // Nature. - 2009 .-- Vol.461, N7263. - P.798-801.
9. Ridruejo, E. Genetic variation in interleukin-28B predicts SVR in hepatitis C genotype 1 Argentine patients treated with PEG IFN and ribavirin / E. Ridruejo, A. Solano, S. Marciano et al. // Ann Hepatol. - 2011. - Vol.10, N4. - P.452-457.9. Ridruejo, E. Genetic variation in interleukin-28B predicts SVR in hepatitis C genotype 1 Argentine patients treated with PEG IFN and ribavirin / E. Ridruejo, A. Solano, S. Marciano et al. // Ann Hepatol. - 2011 .-- Vol.10, N4. - P. 452-457.
10. Darling, J.M. Quantitation of pretreatment serum interferon-γ-inducible protein-10 improves the predictive value of an IL28B gene polymorphism for hepatitis C treatment response / J.M. Darling, J. Aerssens, G. Fanning et al. // Hepatology. - 2011. - Vol.53, N1. - P.14-22.10. Darling, J.M. Quantitation of pretreatment serum interferon-γ-inducible protein-10 improves the predictive value of an IL28B gene polymorphism for hepatitis C treatment response / J.M. Darling, J. Aerssens, G. Fanning et al. // Hepatology. - 2011 .-- Vol. 53, N1. - P.14-22.
11. Clark, P.J. IL28B Genomic-based treatment paradigms for patients with chronic hepatitis C infection: the future of personalized HCV therapies / P.J. Clark, A.J. Thompson, J.G. McHutchison // Am J Gastroenterol. - 2011. - Vol.106, N1. - P.38-45.11. Clark, P.J. IL28B Genomic-based treatment paradigms for patients with chronic hepatitis C infection: the future of personalized HCV therapies / P.J. Clark, A.J. Thompson, J.G. McHutchison // Am J Gastroenterol. - 2011 .-- Vol.106, N1. - P.38-45.
12. dos Santos, D.C. Activated lymphocytes and high liver expression of IFN-γ are associated with fulminant hepatic failure in patients / D.C. dos Santos, P.C. Neves, E.L. Azeredo et al. // Liver Int. - 2012. - Vol.32, N1. - P.147-157.12. dos Santos, D.C. Activated lymphocytes and high liver expression of IFN-γ are associated with fulminant hepatic failure in patients / D.C. dos Santos, P.C. Neves, E.L. Azeredo et al. // Liver Int. - 2012 .-- Vol.32, N1. - P.147-157.
13. Tatsumi, Т. Hepatitis C virus-specific CD8+ Т cell frequencies are associated with the responses of pegylated interferon-α and ribavirin combination therapy in patients with chronic hepatitis C virus infection / T. Tatsumi, T. Takehara, T. Miyagi et al. // Hepatol Res. - 2011. - Vol.41, N1. - P.30-38.13. Tatsumi, T. Hepatitis C virus-specific CD8 + T cell frequencies are associated with the responses of pegylated interferon-α and ribavirin combination therapy in patients with chronic hepatitis C virus infection / T. Tatsumi, T. Takehara, T. Miyagi et al. // Hepatol Res. - 2011 .-- Vol.41, N1. - P.30-38.
14. Zhang, Y. Hepatitis C virus nonstructural protein specific Т cells are associated with virological responses to combination therapy in chronic HCV patients / Y. Zhang, Y. Liu, Y. Zhao et al. // Liver Int, - 2012. - Vol.32, N1. - P.102-109.14. Zhang, Y. Hepatitis C virus nonstructural protein specific T cells are associated with virological responses to combination therapy in chronic HCV patients / Y. Zhang, Y. Liu, Y. Zhao et al. // Liver Int, - 2012 .-- Vol.32, N1. - P.102-109.
15. Флоряну, А.И. Способ прогнозирования формирования вирусологического ответа у больных хроническим гепатитом C / А.И. Флоряну, В.В. Макашова, М.А. Яковенко с соавт. // Патент РФ №2431834 (C1), опубл. 20.09.2012.15. Floryanu, A.I. A method for predicting the formation of a virological response in patients with chronic hepatitis C / A.I. Floryanu, V.V. Makashova, M.A. Yakovenko et al. // RF patent No. 2431834 (C1), publ. 09/20/2012.
16. Xiaoben, P., Protein chip for chronic hepatitis C outcome prediction in chronic hepatitis C interferon treatment / P. Xiaoben, W. Lai // Patent CN 102486474 (A), publ. 2010-12-06.16. Xiaoben, P., Protein chip for chronic hepatitis C outcome prediction in chronic hepatitis C interferon treatment / P. Xiaoben, W. Lai // Patent CN 102486474 (A), publ. 2010-12-06.
17. Xiaoben, P. Gene chip for chronic hepatitis C outcome prediction in chronic hepatitis C interferon treatment / P. Xiaoben, W. Lai // Patent CN 102485907 (A), publ. 2012-06-06.17. Xiaoben, P. Gene chip for chronic hepatitis C outcome prediction in chronic hepatitis C interferon treatment / P. Xiaoben, W. Lai // Patent CN 102485907 (A), publ. 2012-06-06.
18. Murakami, Y. Method for predicting therapeutic effect on chronic hepatitis C / Y. Murakami // Patent US 2012238459 (A1), publ. 2012-09-20.18. Murakami, Y. Method for predicting therapeutic effect on chronic hepatitis C / Y. Murakami // Patent US 2012238459 (A1), publ. 2012-09-20.
19. Oshima, H. Method for predicting therapeutic effect of chronic type C hepatitis / H. Oshima, T. Fukushima, Y. Murakami, H. Fujita // Patent JP 2011155866 (A), publ. 2011-08-18.19. Oshima, H. Method for predicting therapeutic effect of chronic type C hepatitis / H. Oshima, T. Fukushima, Y. Murakami, H. Fujita // Patent JP 2011155866 (A), publ. 2011-08-18.
20. Younossi, Z.M. Prognostic chronic hepatitis C biomarkers / Z.M. Younossi // Patent TW 200907070 (A), publ. 2009-02-16.20. Younossi, Z.M. Prognostic chronic hepatitis C biomarkers / Z.M. Younossi // Patent TW 200907070 (A), publ. 2009-02-16.
21. Bochud, P.-Y. Methods for diagnosing or predicting hepatitis C outcome in HCV infected patients / P.-Y. Bochud, A. Rauch // Patent US 20110165124 A1, publ. 2011-07-07.21. Bochud, P.-Y. Methods for diagnosing or predicting hepatitis C outcome in HCV infected patients / P.-Y. Bochud, A. Rauch // Patent US 20110165124 A1, publ. 2011-07-07.
22. Univ, O. Test method and test kit for predicting therapeutic effect for chronic hepatitis C / O. Univ, G. Kawasaki // Patent JP 2012105634 (A), publ. 2012-06-07.22. Univ, O. Test method and test kit for predicting therapeutic effect for chronic hepatitis C / O. Univ, G. Kawasaki // Patent JP 2012105634 (A), publ. 2012-06-07.
23. Univ, O. Examination method and marker for predicting therapeutic effect for chronic hepatitis C / O. Univ, G. Kawasaki // Patent JP 2013005801 (A), publ. 2013-01-10.23. Univ, O. Examination method and marker for predicting therapeutic effect for chronic hepatitis C / O. Univ, G. Kawasaki // Patent JP 2013005801 (A), publ. 2013-01-10.
24. Wright, M. Bayesian model for the prognosis of hepatitis C virus infection / M. Wright, M. Thursz // Patent WO 2004086031 (A3), publ. 2004-10-07.24. Wright, M. Bayesian model for the prognosis of hepatitis C virus infection / M. Wright, M. Thursz // Patent WO 2004086031 (A3), publ. 2004-10-07.
25. Trofimov, D.Y. The delta-TF method for real-time PCR data standardization / D.Y. Trofimov, D.V. Rebrikov, G.A. Samatov et al. // Dokl Biol Sci. - 2008. - Vol.419. - P.118-121.25. Trofimov, D.Y. The delta-TF method for real-time PCR data standardization / D.Y. Trofimov, D.V. Rebrikov, G.A. Samatov et al. // Dokl Biol Sci. - 2008 .-- Vol.419. - P.118-121.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013145240/15A RU2563812C2 (en) | 2013-10-09 | 2013-10-09 | Method of predicting fast virological response in patients with chronic hepatitis c |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013145240/15A RU2563812C2 (en) | 2013-10-09 | 2013-10-09 | Method of predicting fast virological response in patients with chronic hepatitis c |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2013145240A RU2013145240A (en) | 2015-05-10 |
| RU2563812C2 true RU2563812C2 (en) | 2015-09-20 |
Family
ID=53283207
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2013145240/15A RU2563812C2 (en) | 2013-10-09 | 2013-10-09 | Method of predicting fast virological response in patients with chronic hepatitis c |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2563812C2 (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109929024A (en) * | 2017-12-19 | 2019-06-25 | 中国农业科学院生物技术研究所 | 3 interferon mutant of sheep λ and its preparation method and application |
| RU2723387C1 (en) * | 2019-12-20 | 2020-06-11 | Федеральное бюджетное учреждение науки «Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора) | Method for predicting the absence of regress of hepatic fibrosis in the patients with chronic hepatitis c |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2379689C1 (en) * | 2008-06-16 | 2010-01-20 | ФГУ "Нижегородский НИИ детской гастроэнтерологии Росмедтехнологий" | Method for prediction of if therapy effectiveness for viral hepatitis in children |
-
2013
- 2013-10-09 RU RU2013145240/15A patent/RU2563812C2/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2379689C1 (en) * | 2008-06-16 | 2010-01-20 | ФГУ "Нижегородский НИИ детской гастроэнтерологии Росмедтехнологий" | Method for prediction of if therapy effectiveness for viral hepatitis in children |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| КОЗИНА А.Н. и др. Возможности персонифицированного подхода к лечению гепатита С на основании разработанных генетических тестов определения варианта полиморфизма гена ИЛ // Лечащий врач, 2011, N10, [он-лайн], [найдено 10.10. 2014]. Найдено из Интернет: URL: < http://www.lvrach.ru/2011/10/15435276/>. TANAKA Y. Et al. Genome-wide association of IL28B with response to pegylated interferon-alpha and ribavirin therapy for chronic hepatitis C // Nat Genet. 2009 Oct;41(10), abstract * |
| ЛАПШИН А.В. и др. Влияние генетических полиморфизмов гена IL28B на эффективность противовирусной терапии хронического гепатита С стандартным интерфероном-α // Российский журнал гастроэнтологии, гепатологии, колопроктологии, 2013, т.23, N1, стр.23. * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109929024A (en) * | 2017-12-19 | 2019-06-25 | 中国农业科学院生物技术研究所 | 3 interferon mutant of sheep λ and its preparation method and application |
| CN109929024B (en) * | 2017-12-19 | 2021-02-19 | 中国农业科学院生物技术研究所 | Sheep lambda 3 interferon mutant and preparation method and application thereof |
| RU2723387C1 (en) * | 2019-12-20 | 2020-06-11 | Федеральное бюджетное учреждение науки «Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора) | Method for predicting the absence of regress of hepatic fibrosis in the patients with chronic hepatitis c |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2013145240A (en) | 2015-05-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| McGuinness et al. | Increases in intrahepatic CD68 positive cells, MAC387 positive cells, and proinflammatory cytokines (particularly interleukin 18) in chronic hepatitis C infection | |
| Kimball et al. | Ethnicity and cytokine production gauge response of patients with hepatitis C to interferon‐α therapy | |
| Mehta et al. | Association between IL28b rs12979860 single nucleotide polymorphism and the frequency of colonic T reg in chronically HCV-infected patients | |
| Kerget et al. | Frequency of interleukin-6 rs1800795 (-174G/C) and rs1800797 (-597G/A) polymorphisms in COVID-19 patients in Turkey who develop macrophage activation syndrome | |
| JP2010520744A (en) | Method and kit for examining drug sensitivity of patients infected with HCV | |
| Fattovich et al. | Hepatitis C virus genotypes: distribution and clinical significance in patients with cirrhosis type C seen at tertiary referral centres in Europe | |
| Neuman et al. | Predictors of sustained response to alpha interferon therapy in chronic hepatitis C | |
| RU2563812C2 (en) | Method of predicting fast virological response in patients with chronic hepatitis c | |
| Tyurin et al. | Correlation of the imbalance in the circulating lymphocyte subsets with c-reactive protein and cardio-metabolic conditions in patients with covid-19 | |
| Hasegawa et al. | Th1 cytokine endotype discriminates and predicts severe complications in COVID-19 | |
| TrehanPati et al. | Gene expression profiles of T cells from hepatitis E virus infected patients in acute and resolving phase | |
| WO2021250028A1 (en) | Methods for detecting and treating covid patients requiring intensive care | |
| Nan et al. | microRNA‑1273g‑3p is a useful non‑invasive test for the prediction of liver fibrosis in patients with chronic hepatitis C | |
| Alkhouri et al. | Monitoring peripheral blood CD4+ adenosine triphosphate activity in recurrent hepatitis C and its correlation to fibrosis progression | |
| AU2021258334A1 (en) | Methods of predicting susceptibility to infectious disease and related methods of treatment | |
| Wang et al. | Increased BATF expression is associated with the severity of liver damage in patients with chronic hepatitis B | |
| Sarmis et al. | Can Hemogram Parameters Predict a Positive PCR Result in COVID-19? | |
| Ullah et al. | CORRELATION OF COVID-19 SEVERITY with HEMATOLOGICAL, BIOCHEMICAL, COAGULA-TION AND INFLAMMATORY MARKERS-A CROSS-SECTIONAL STUDY | |
| CN105567805A (en) | Kit for detecting cytomegalovirus infection of organ transplantation patients | |
| Hasan et al. | Evaluation Role of IL-17 and Some Hematological Markers in COVID-19 Infection | |
| Yi et al. | The levels of soluble CD137 are increased in tuberculosis patients and associated with disease severity and prognosis | |
| Ghazal et al. | Comparative cross-sectional study of Interferon Gamma inducible protein-10 in mono and co-infected human Immunodeficiency Virus patients in Alexandria, Egypt | |
| Zhang | Use of interferon-stimulated gene expression level in renal transplant patients’ blood as biomarkers for diagnosis of rejection | |
| Mostafa et al. | Absence of HCV RNA from the Peripheral Blood Mononuclear Cells is a Predictor of Good Response after Treatment of Egyptian Chronic Hepatitis C Patients with Sofosbuvir Based Therapy: a prospective study | |
| Atef et al. | The role of TREM-1 gene expression and soluble TREM-1 as prognostic markers of sepsis |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20151010 |