RU2560689C2 - Method of complex therapy of pre-invasive and invasive cervical cancer - Google Patents
Method of complex therapy of pre-invasive and invasive cervical cancer Download PDFInfo
- Publication number
- RU2560689C2 RU2560689C2 RU2013141056/15A RU2013141056A RU2560689C2 RU 2560689 C2 RU2560689 C2 RU 2560689C2 RU 2013141056/15 A RU2013141056/15 A RU 2013141056/15A RU 2013141056 A RU2013141056 A RU 2013141056A RU 2560689 C2 RU2560689 C2 RU 2560689C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cervical cancer
- invasive
- patients
- treatment
- hpv
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к способам иммунокоррегирующей терапии на послеоперационном этапе лечения инвазивного рака шейки матки, и может быть использовано в гинекологии и онкологии для повышения результативности и эффективности комплексной терапии преинвазивного и инвазивного рака шейки матки.The invention relates to medicine, namely to methods of immunocorrective therapy in the postoperative stage of treatment of invasive cervical cancer, and can be used in gynecology and oncology to increase the effectiveness and efficiency of complex treatment of pre-invasive and invasive cervical cancer.
Термины, используемые в настоящем описанииTerms Used In The Present Description
Цитокины - это гормоноподобные молекулы белково-пептидной природы, которые продуцируются клетками организма. Цитокины осуществляют короткодистантную регуляцию межклеточных и межсистемных взаимодействий, определяют выживаемость клеток, стимуляцию или ингибирование их роста, а также дифференцировку, функциональную активацию и апоптоз клеток.Cytokines are hormone-like molecules of a protein-peptide nature that are produced by body cells. Cytokines carry out short-range regulation of intercellular and intersystem interactions, determine cell survival, stimulation or inhibition of their growth, as well as differentiation, functional activation and apoptosis of cells.
Интерфероны - гликопротеины, представители группы цитокинов. В зависимости от происхождения и, соответственно, строения молекулы интерфероны человека делятся на 3 основных типа: IFNα, продуцентами которого преимущественно являются макрофаги и В-клетки; IFNβ, продуцируемый фибробластами, и IFNγ, который синтезируют главным образом активированные Т-лимфоциты и натуральные киллеры. Молекулярная масса интерферонов варьирует в пределах от 17-45 кДа у IFNα и IFNβ и от 20 до 80 кДа у IFNγ. Считается, что IFNα и IFNβ обладают преимущественно антивирусной, а IFNγ - иммуномодулирующей активностью.Interferons are glycoproteins, representatives of the cytokine group. Depending on the origin and, accordingly, the structure of the molecule, human interferons are divided into 3 main types: IFNα, the producers of which are mainly macrophages and B cells; IFNβ produced by fibroblasts, and IFNγ, which is synthesized mainly by activated T-lymphocytes and natural killer cells. The molecular weight of interferons varies from 17-45 kDa for IFNα and IFNβ and from 20 to 80 kDa for IFNγ. It is believed that IFNα and IFNβ have predominantly antiviral, and IFNγ - immunomodulatory activity.
Интерлейкины - это большая группа цитокинов, синтезируемых в основном Т-лимфоцитами, но в некоторых случаях также натуральными киллерами или другими тканевыми клетками. Интерлейкины обладают разнообразными функциями, но большинство их стимулирует другие клетки для лечения или дифференцировки, при этом каждый из них действует на отдельную, ограниченную группу клеток, экспрессирующих специфичные для данного интерлейкина рецепторы. Это растворимые пептиды, сильные иммунорегуляторы локального действия; активируют Т-клетки.Interleukins are a large group of cytokines synthesized mainly by T-lymphocytes, but in some cases also by natural killer cells or other tissue cells. Interleukins have various functions, but most of them stimulate other cells for treatment or differentiation, and each of them acts on a separate, limited group of cells expressing receptors specific for a given interleukin. These are soluble peptides, strong local immunoregulators; activate T cells.
Натуральные (естественные) киллеры (НК) - это лимфоциты, участвующие в системе врожденного иммунитета. НК были открыты по своей способности убивать клетки опухолей, откуда и получили свое название. Основной функцией активированных НК является распознавание и уничтожение собственных клеток организма, в которых имеются нарушения - опухолевые клетки и клетки, инфицированные патогеном. НК обладают характерной морфологией: основная часть обильной цитоплазмы содержит несколько митохондрий, свободные рибосомы с отдельными элементами шероховатого эндоплазматического ретикулума, аппарат Гольджи и характерные электроноплотные гранулы, связанные с мембраной. На поверхности НК находится множество рецепторов для активации самих клеток с помощью цитокинов, а также для распознавания лигандов на поверхности опухолевых и инфицированных клеток.Natural (natural) killers (NKs) are lymphocytes involved in the innate immunity system. NKs were discovered by their ability to kill tumor cells, from where they got their name. The main function of activated NKs is the recognition and destruction of the body's own cells in which there are disorders - tumor cells and cells infected with the pathogen. NKs have a characteristic morphology: the main part of the abundant cytoplasm contains several mitochondria, free ribosomes with individual elements of a rough endoplasmic reticulum, the Golgi apparatus, and characteristic electron-dense granules associated with the membrane. On the surface of NK there are many receptors for activating the cells themselves with the help of cytokines, as well as for recognizing ligands on the surface of tumor and infected cells.
Вирус папилломы человека (ВПЧ) - инфекция, вызывающая рак шейки матки за счет развития цервикальных интраэпителиальных неоплазий, причиной которых является нарушение контроля пролиферации клетки. Усиление пролиферации инфицированных ВПЧ супрабазальных клеток цервикального эпителия сопровождается экспрессией вирусных онкогенов - белков Е6 и Е7. Способность к неограниченно долгому персистированию в организме больного обусловлена особенностями жизненной стратегии этих вирусов, основанной на блокировании механизмов врожденного и адаптивного антивирусного иммунитета. Риск злокачественного перерождения связан с несколькими типами папилломавирусной инфекции. Их обозначают как вирусы высокого риска онкогенного риска. Это типы 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 и 68. К вирусам низкого риска относят 5 типов - 6, 11, 42, 43, 44.Human papillomavirus (HPV) is an infection that causes cervical cancer due to the development of cervical intraepithelial neoplasia, which is caused by a violation of the control of cell proliferation. Enhanced proliferation of HPV-infected suprabasal cells of the cervical epithelium is accompanied by the expression of viral oncogenes - proteins E6 and E7. The ability to persist for a long time in the patient’s body is determined by the peculiarities of the life strategy of these viruses, based on blocking the mechanisms of innate and adaptive antiviral immunity. The risk of malignant degeneration is associated with several types of papillomavirus infection. They are referred to as high risk oncogenic risk viruses. These are types 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 and 68. There are 5 types of low-risk viruses - 6, 11, 42, 43, 44.
Способ комплексной терапии преинвазивного и инвазивного рака шейки матки - сочетание хирургического метода и иммунокоррегирующего лечения.A combination therapy for preinvasive and invasive cervical cancer is a combination of the surgical method and immunocorrective treatment.
Согласно статистическим данным WHO/ICO (http://www.who.int/hpvcentre) рак шейки матки (РШМ) - второе по встречаемости онкологическое заболевание среди женщин и является одной из главных причин смертности женщин, страдающих онкологическими заболеваниями. Согласно статистическим отчетам Всемирной организации здравоохранения каждый год РШМ диагностируется более чем у 500 тыс. женщин (в России - более чем у 14 тыс.) [Мерабишвили В.М., и соавт., 2012; Мерабишвили В.М., Лалианци Э.И., Субботина О.Ю. Рак шейки матки: заболеваемость, смертность (популяционное исследование) // Вопросы онкологии. 2012, Т.58. №1. С.41-44].According to WHO / ICO statistics (http://www.who.int/hpvcentre) cervical cancer (cervical cancer) is the second most common cancer among women and is one of the leading causes of death for women with cancer. According to the statistical reports of the World Health Organization, more than 500 thousand women are diagnosed with cervical cancer every year (in Russia - more than 14 thousand) [Merabishvili VM, et al., 2012; Merabishvili V.M., Lalantsi E.I., Subbotina O.Yu. Cancer of the cervix uteri: morbidity, mortality (population study) // Oncology Issues. 2012, vol. 58. No. 1. S.41-44].
При этом около 40% на момент выявления, имеют III-IY стадии, а смертность в течение первого года с момента установления диагноза РШМ достигает 19,5% [Чиссов В.И. и соавт., 2012; Чиссов В.И. Злокачественные новообразования в России в 2010 году (заболеваемость и смертность) / Под ред. В.И. Чиссова, В.В. Старинского, Г.В. Петровой. М.: ФГУ «МНИОИ им. П.А. Герцена Росмедтехнологий», 2012. 260 с. Давыдов М.И. и соавт., 2011; Давыдов М.И. Заболеваемость злокачественными новообразованиями населения России и стран СНГ в 2009 г. / М.И. Давыдов, Е.М. Аксель // Вестник РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН. 2011. Т.22. №3, прил.1. С.54-92]. Следует отметить, что меры вторичной профилактики приводят к снижению смертности от РШМ за счет увеличения частоты выявления ранних, доклинических форм рака (преинвазивного и инвазивного РШМ). Однако используемые подходы к терапии РШМ недостаточно эффективны из-за ограниченности методов в отношении точности постановки диагноза, возможности прогнозирования лечения заболевания.At the same time, about 40% at the time of detection, have III-IY stages, and mortality during the first year after the diagnosis of cervical cancer reaches 19.5% [Chisov V.I. et al., 2012; Chissov V.I. Malignant neoplasms in Russia in 2010 (morbidity and mortality) / Ed. IN AND. Chissova, V.V. Starinsky, G.V. Petrova. M .: FGU "MNIII named after P.A. Herzen of the Russian Medical Technologies ”, 2012.260 p. Davydov M.I. et al., 2011; Davydov M.I. The incidence of malignant neoplasms of the population of Russia and the CIS countries in 2009 / M.I. Davydov, E.M. Axel // Bulletin of the Russian Research Center. N.N. Blokhina RAMS. 2011.V.22. No. 3, adj. 1. S.54-92]. It should be noted that secondary prevention measures lead to a reduction in mortality from cervical cancer due to an increase in the frequency of detection of early, preclinical forms of cancer (pre-invasive and invasive cervical cancer). However, the approaches used in the treatment of cervical cancer are not effective enough due to the limited methods with regard to the accuracy of diagnosis, the possibility of predicting the treatment of the disease.
Исследователи считают, что в подавляющем большинстве случаев при развитии РШМ именно иммунная система формирует эффективный противовирусный/противоопухолевый ответ, при этом признана ведущая роль Т-хелперов и регуляторных Т-клеток [Айбину О.А. Молекулярный патогенез цервикального рака // Биология и Терапия рака. - 2011. - Т11. - №3. - Стр.295-306].Researchers believe that in the vast majority of cases with the development of cervical cancer, it is the immune system that forms an effective antiviral / antitumor response, while the leading role of T-helpers and regulatory T-cells is recognized [O. Aybin. Molecular pathogenesis of cervical cancer // Biology and Cancer Therapy. - 2011. - T11. -
Одним из механизмов супрессорного воздействия опухоли на иммунитет является индукция апоптоза иммунокомпетентных клеток [Джагер Р., Звака P.M. Энигматическая роль каспазы в развитии опухоли // Рак. - 2010. - Разд.2. - №4. - Стр.1952-1979].One of the mechanisms of the suppressor effect of a tumor on immunity is the induction of apoptosis of immunocompetent cells [Jager R., Zwaka P.M. The enigmatic role of caspase in tumor development // Cancer. - 2010. -
Поэтому анализ текущего иммунного статуса женщин с преинвазивным и инвазивным РШМ может помочь в выборе тактики лечения, а также характеризовать результат и эффективность терапии.Therefore, analysis of the current immune status of women with preinvasive and invasive cervical cancer can help in choosing treatment tactics, as well as characterize the result and effectiveness of therapy.
Апоптоз, или программируемая клеточная гибель, - это процесс, направленный на предотвращение передачи дефектного наследственного материала дочерним клеткам и контролирование их численности. Поэтому компоненты апоптотического пути функционально являются онкосупрессорами. Существует большое разнообразие факторов и рецепторов, индуцирующих реакции апоптоза в клетке, однако все сигнальные пути, так или иначе, конвергируют на общих эффекторных молекулах - каспазах.Apoptosis, or programmed cell death, is a process aimed at preventing the transmission of defective hereditary material to daughter cells and controlling their numbers. Therefore, the components of the apoptotic pathway are functionally oncosuppressants. There is a wide variety of factors and receptors that induce apoptosis in the cell, however, all signaling pathways, one way or another, converge on common effector molecules - caspases.
Каспазы - это семейство внутриклеточных цистеиновых эндопептидаз, продуцируемых на конститутивном уровне и в случае поступления соответствующего сигнала активирующихся по каскадному принципу. Активация каспаз осуществляется по двум механизмам: 1) олигомеризация на специальных «молекулярных платформах»; 2) ограниченный протеолиз. Первый способ активации характерен для т.н. инициаторных каспаз, к которым относятся каспазы-2, -8, -9 и -10. Инициаторные каспазы способны воспринимать вне- или внутриклеточные сигналы и активировать соответственно «внешний» или «внутренний» путь апоптоза. «Внешний» путь, как правило, начинается с активации рецептора клеточной смерти: взаимодействие внеклеточного домена рецептора с лигандом приводит к конформационным изменениям его цитоплазматического домена, вокруг которого далее осуществляется сборка макромолекулярного сигнального комплекса (DISC). DISC-комплекс служит «платформой» для сборки и активации мультимеров каспазы-8 или -10. В случае «внутреннего» пути апоптоза такими молекулярными «платформами» являются т.н. апоптосома и PIDD-комплекс, в составе которых происходит активация каспаз-9 и -2 соответственно. Сборка этих комплексов инициируется в ответ на метаболический стресс, нарушение целостности мембран митохондрий или на возникновение нерепарируемых повреждений ДНК. Активированные инициаторные каспазы осуществляют процессинг эффекторных каспаз-3, -6 и -7, мишенями которых являются многочисленные структурные, регуляторные и каталитические белки.Caspases are a family of intracellular cysteine endopeptidases produced at a constitutive level and, in the case of a corresponding signal, are activated according to the cascade principle. Caspases are activated by two mechanisms: 1) oligomerization on special “molecular platforms”; 2) limited proteolysis. The first activation method is characteristic of the so-called initiator caspases, which include caspases-2, -8, -9 and -10. Initiative caspases are able to perceive extra- or intracellular signals and activate the “external” or “internal” apoptosis pathway, respectively. The “external” pathway, as a rule, begins with activation of the cell death receptor: the interaction of the extracellular domain of the receptor with the ligand leads to conformational changes in its cytoplasmic domain, around which the macromolecular signal complex (DISC) is then assembled. DISC-complex serves as a “platform” for the assembly and activation of caspase-8 or -10 multimers. In the case of the "internal" pathway of apoptosis, such molecular "platforms" are the so-called apoptosome and PIDD complex, in which Caspase-9 and -2 activation occurs, respectively. The assembly of these complexes is initiated in response to metabolic stress, a violation of the integrity of mitochondrial membranes, or the occurrence of unrepaired DNA damage. Activated initiator caspases process effector caspases-3, -6, and -7, the targets of which are numerous structural, regulatory, and catalytic proteins.
Развитие злокачественного процесса всегда сопровождается подавлением функций каспаз. В инфицированных клетках значительно снижается мембранная экспрессия основного рецептора клеточной смерти CD95/Fas, нарушается сборка DISC-комплекса в результате усиленной деградации адапторного белка FADD, также происходит деградация каспазы-8 и эндогенных активаторов митохондриального пути апоптоза Bid, Bad и Bax (антагонистов Bcl-2) [Ду Дж. Чен Г.Г., Влантис А.С., et al. Устойчивость к апоптозу вируса папилломы человека 16-инфицированных гортанных раковых клеток, ассоциирующихся с пониженным бензалкония хлоридом или повышенным выражением Б-клетки // Раковые письма. - 2004. - Т.205. - №1. - Стр.81-88. Кабш К., Алонсо А. Вирус папилломы человека типа 16 Е5 вызывает TRAIL- и FasL-опосредованный апоптоз в клетках HaCaT с помощью разных механизмов // Журнал о вирусологии. - 2002. - Т.76. - №23. - Стр.12162-12172. Тунгтеаккхун С.С, Филиппова М., Фодор Н. и др. Полна изоформа папилломавируса человека 16 Е6 и его сплайс-варианта Е6*, связанного с разными местами на доменах прокаспазы 8 // Журнал о вирусологии. - 2010. - Т.84. - №3. - Стр.1453-1463].The development of a malignant process is always accompanied by a suppression of caspase functions. In infected cells, the membrane expression of the main cell death receptor CD95 / Fas is significantly reduced, the assembly of the DISC complex is disrupted as a result of increased degradation of the FADD adapter protein, degradation of caspase-8 and endogenous activators of the mitochondrial pathway of apoptosis Bid, Bad and Bax (Bcl-2 antagonists ) [Doo J. Chen G.G., Vlantis A.S., et al. Resistance to apoptosis of the human papillomavirus of 16 infected laryngeal cancer cells associated with reduced benzalkonium chloride or increased expression of B cells // Cancer letters. - 2004 .-- T.205. - No. 1. - Pages 81-88. Kabsh K., Alonso A. Human papillomavirus type 16 E5 causes TRAIL- and FasL-mediated apoptosis in HaCaT cells using different mechanisms // Journal of Virology. - 2002. - T.76. - No. 23. - Page 12162-12172. Tungteakkhun S.S., Filippova M., Fodor N. et al. The isoform of human papillomavirus 16 E6 and its splice variant E6 *, which is associated with different places on
Инактивация каспаз в опухолевых клетках происходит в результате гиперэкспрессии их ингибиторов или вследствие подавления экспрессии вышестоящих компонентов сигнального пути апоптоза [Филченков А., Завелевич М., Крощак Т. Дж. и др. Каспазы и рак: механизмы инактивации и новые способы лечения // Экспериментальная онкология. - 2004. - Т.26. - №2. - Стр.82-97].Inactivation of caspases in tumor cells occurs as a result of overexpression of their inhibitors or as a result of suppression of the expression of higher components of the apoptosis signaling pathway [Filchenkov A., Zavelevich M., Kroshchak T. J. et al. Caspases and cancer: inactivation mechanisms and new methods of treatment // Experimental oncology. - 2004. - T.26. - No. 2. - Pages 82-97].
В настоящее время препаратов, избирательно воздействующих на ВПЧ, не существует. Наиболее часто для лечения ВПЧ-инфекции используются интерфероны (ИФН). Они представляют собой семейство белков, которые вырабатываются клетками иммунной системы в ответ на стимуляцию вирусными антигенами, митогенами. Чаще используется рекомбинантный препарат а-ИФН, имеющий разные торговые названия: «Этферон» (Egis), «Велферон» (Wellcome), «Реаферон», «Интераль» (Россия), «Реальдирон» (Литва) и др. [Серебряная, 2005; Серебряная Н.Б. Иммунные дисфункции при герпесвирусной инфекции: новые подходы к терапии / Н.Б. Серебряная // Медицинская иммунология. 2005. Т.7. №2-3. С.321-322]. Но в 60% случаев даже длительная ИФН-терапия не приводит к клиническому улучшению. Показано, что эффективность лечения напрямую зависит от уровня синтеза онкобелка Е7. Было установлено, что белок Е7 нейтрализует противовирусную активность а-ИФН за счет того, что избирательно блокирует большинство генов, индуцируемых ИФН. Кроме того, Е7 внутриклеточно инактивирует IRF (фактор регуляции ИФН), который включает транскрипцию генов, кодирующих синтез противовирусных белков. Это говорит о том, что белок Е7 не только выполняет функции основного фактора малигнизации, но и определяет устойчивость клеток к ИФН-терапии. Поэтому перед ИФН-терапией целесообразно определять уровень онкобелка Е7. Его высокие значения могут свидетельствовать о нецелесообразности применения ИФН на первом этапе лечения ВПЧ-зависимой патологии шейки матки.Currently, drugs that selectively affect HPV do not exist. Most often, interferons (IFN) are used to treat HPV infection. They are a family of proteins that are produced by cells of the immune system in response to stimulation by viral antigens, mitogens. The recombinant drug a-IFN, which has different trade names, is often used: Etferon (Egis), Velferon (Wellcome), Reaferon, Interal (Russia), Realdiron (Lithuania), etc. [Serebryanaya, 2005; Silver NB Immune dysfunctions in herpesvirus infection: new approaches to therapy / N.B. Silver // Medical immunology. 2005.V.7. No. 2-3. S.321-322]. But in 60% of cases, even prolonged IFN therapy does not lead to clinical improvement. It was shown that the effectiveness of treatment directly depends on the level of synthesis of the oncoprotein E7. It was found that the E7 protein neutralizes the antiviral activity of a-IFN due to the fact that it selectively blocks most of the genes induced by IFN. In addition, E7 intracellularly inactivates IRF (IFN regulation factor), which involves the transcription of genes encoding the synthesis of antiviral proteins. This suggests that the E7 protein not only performs the functions of the main factor of malignancy, but also determines the resistance of cells to IFN therapy. Therefore, before IFN therapy, it is advisable to determine the level of oncoprotein E7. Its high values may indicate the inappropriateness of the use of IFN at the first stage of treatment of HPV-dependent pathology of the cervix.
В 1999 году группой ученых (Черныш С.И., Ким Су Ин, Веккер Г.П., Махалдиани П., Хоффманн Ж., Вюле Ф., Патент РФ №2172322) были выделены противовирусные пептиды из насекомых с общим названием Аллофероны. Затем на основе пептида Аллоферон-1 был разработан лекарственный препарат «Аллокин-альфа» лиофилизат для приготовления раствора для подкожного введения. Аллоферон-1 индуцирует синтез эндогенных интерферонов и является селективным специфическим стимулятором функциональной активности натуральных киллеров (НК), что связано с непосредственным усилением цитотоксической активности этих клеток, а не с увеличением их количества [Черныш С.И., Ким С.И., Беккер Г. и др. Противовирусные и противораковые пептиды, полученные из насекомых // Доклады Национальной академии наук США. - 2002. - Т.9, - №.20. - Стр.12628-12632, Черныш С.И. Аллокины (цитокиноподобные пептиды насекомых) как модуляторы иммунного ответа человека и других млекопитающих // Russian Journal of Immunology. - 2004. - Vol.9. - S.1. - P.36]. НК узнают определенные структуры высокомолекулярных гликопротеинов, которые экспрессируются на мембране инфицированных вирусом клеток. НК не являются антигенспецифическими клетками, вызывают независимый от антител и комплемента лизис клеток-мишеней, распознают свои клетки-мишени без участия антигенов гистосовместимости и относятся к факторам естественной резистентности. Клетка реагирует на стимулы, к которым есть рецепторы на мембране. У них есть рецепторы для цитокинов (IL-2, 4, 10, 12, IFN-gamma), для антигенов МНС-1, CD16 (Fc-gammaRIIIA), что ведет к литическому эффекту клетки с помощью инициации процессов апоптоза [Хирата Дж., Коган и Дж., Аояма М., Кашивамура С., Уеда X., Курода И., Усами М., Окамура X., Марукава С. Роль IL-18 в апоптозе нейтрофила человека. Шок. 2008 Дек; 30(6):628-331.In 1999, a group of scientists (Chernysh SI, Kim Soo In, Wecker G.P., Makhaldiani P., Hoffmann J., Wule F., RF Patent No. 2172322) isolated antiviral peptides from insects under the general name Alloferons. Then, on the basis of the Alloferon-1 peptide, the drug Allokin-alpha lyophilisate was developed for the preparation of a solution for subcutaneous administration. Alloferon-1 induces the synthesis of endogenous interferons and is a selective specific stimulator of the functional activity of natural killers (NK), which is associated with a direct increase in the cytotoxic activity of these cells, and not with an increase in their number [Chernysh SI, Kim SI, Becker G. et al. Antiviral and anticancer peptides derived from insects // Reports of the US National Academy of Sciences. - 2002. - T.9, - No. 20. - Page 122628-12632, Chernysh S.I. Allocins (cytokine-like insect peptides) as modulators of the immune response of humans and other mammals // Russian Journal of Immunology. - 2004 .-- Vol. 9. - S.1. - P.36]. NKs recognize certain structures of high molecular weight glycoproteins that are expressed on the membrane of virus-infected cells. NKs are not antigen-specific cells, cause lysis of target cells independent of antibodies and complement, recognize their target cells without the participation of histocompatibility antigens, and are factors of natural resistance. The cell responds to stimuli to which there are receptors on the membrane. They have receptors for cytokines (IL-2, 4, 10, 12, IFN-gamma), for MHC-1 antigens, CD16 (Fc-gammaRIIIA), which leads to the lytic effect of the cell by initiating apoptosis processes [Hirata J. , Kogan and J., Aoyama M., Kashiwamura S., Ueda X., Kuroda I., Usami M., Okamura X., Marukawa S. Role of IL-18 in apoptosis of human neutrophil. Shock. Dec 2008 30 (6): 628-331.
Известен способ лечения папилломавирусных инфекций, реализуемый через индукцию интерлейкина-18. Для этого в качестве индуктора используют лекарственные препараты на основе пептида аллоферона с применением механического удаления папилломных образований любого типа. В качестве индуктора используют инъекции препарата «Аллокин-альфа лиофилизат для приготовления раствора для подкожного введения», курсом из 3 инъекций с интервалом 1 день между инъекциями, причем курс может повторяться. В качестве индуктора используют суппозитории на основе аллоферона. В качестве индуктора используют мази, содержащие аллоферон. В способе эффективное лечение достигается за счет стимуляции врожденного иммунитета через индукцию интерлейкина-18 (Патент РФ №2482866, МПК A61K 38/03, A61P 31/22, 27.05.2013 г. - прототип).A known method of treating human papillomavirus infections, implemented through the induction of interleukin-18. To do this, drugs based on the alloferon peptide using mechanical removal of papilloma formations of any type are used as an inducer. As an inducer, injections of the drug Allokin-alpha lyophilisate for the preparation of a solution for subcutaneous administration are used, a course of 3 injections with an interval of 1 day between injections, and the course may be repeated. Suppositories based on alloferon are used as an inductor. As an inducer, ointments containing alloferon are used. In the method, effective treatment is achieved by stimulating innate immunity through the induction of interleukin-18 (RF Patent No. 2482866, IPC A61K 38/03, A61P 31/22, 05/27/2013, prototype).
Недостатком известного способа является то обстоятельство, что в нем рассматривается только снижение титра папилломавирусной инфекции до полной ее элиминации в отличие от данного способа, где речь не только о снижении вирусной нагрузки, но прежде всего о коррекции молекулярно-генетических и иммунологических нарушений у больных раком шейки матки на послеоперационном периоде.The disadvantage of this method is the fact that it considers only a decrease in the titer of papillomavirus infection to its complete elimination, in contrast to this method, where it is not only about reducing the viral load, but primarily about the correction of molecular genetic and immunological disorders in patients with cervical cancer uterus in the postoperative period.
Технической задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является создание нового способа иммунокоррегирующей терапии на послеоперационном этапе лечения инвазивного рака шейки матки, обеспечивающего повышение результативности и эффективности комплексной терапии.The technical problem to be solved by the claimed invention is directed is the creation of a new method of immunocorrective therapy in the postoperative stage of treatment of invasive cervical cancer, which provides an increase in the effectiveness and efficiency of complex therapy.
Поставленная техническая задача достигается тем, что согласно предложенному изобретению, в способе комплексной терапии преинвазивного и инвазивного рака после хирургического удаления опухоли на шейке матки в качестве иммунокоррегирующего индуктора используют лекарственные препараты на основе пептида Аллоферон-1.The stated technical problem is achieved by the fact that according to the proposed invention, in the method of complex treatment of pre-invasive and invasive cancer after surgical removal of a tumor on the cervix, drugs based on the Alloferon-1 peptide are used as an immunocorrective inducer.
Кроме того, в качестве лекарственного препарата на основе пептида Аллоферон-1 используют инъекции препарата «Аллокин-альфа лиофилизат для приготовления раствора для подкожного введения», по меньшей мере, одним курсом из шести инъекций по 1 мг с интервалом в один день между инъекциями.In addition, as a medicine based on the Alloferon-1 peptide, injections of the Allokin-alpha lyophilisate for subcutaneous solution preparation with at least one course of six injections of 1 mg with an interval of one day between injections are used.
Кроме того, в качестве индуктора используют вагинальные и ректальные суппозитории на основе пептида Аллоферон-1.In addition, vaginal and rectal suppositories based on the Alloferon-1 peptide are used as an inducer.
Кроме того, в качестве индуктора используют гели, крема и мази на основе пептида Аллоферон-1.In addition, gels, creams and ointments based on the Alloferon-1 peptide are used as an inductor.
Технический результат, достижение которого обеспечивается реализацией всех существенных признаков заявляемого изобретения, состоит в повышении результативности и эффективности комплексной терапии преинвазивного и инвазивного рака шейки матки.The technical result, the achievement of which is ensured by the implementation of all the essential features of the claimed invention, consists in increasing the effectiveness and efficiency of the complex treatment of pre-invasive and invasive cervical cancer.
Препарат «Аллокин-альфа» с действующим веществом Аллоферон-1, выбранный в качестве послеоперационного индуктора, позитивно влияет на снижение вирусной нагрузки (71,9%) у больных с CIN2-3/CIS шейки матки [Короленкова Л.И. Снижение вирусной нагрузки, определенной методом гибридного захвата (НС2 DNA HPV HR), у больных тяжелыми интраэнителиальными неоплазиями шейки матки как результат эффективной предэксцизионной терапии аллокином-альфа // Акушерство и гинекология. 2012. №4-2. С.78-82].The drug "Allokin-alpha" with the active substance Alloferon-1, selected as a postoperative inducer, has a positive effect on reducing the viral load (71.9%) in patients with CIN2-3 / CIS of the cervix [Korolenkova L.I. Reducing the viral load determined by the hybrid capture method (HC2 DNA HPV HR) in patients with severe intraenithelial neoplasia of the cervix as a result of effective pre-excision therapy with allokin-alpha // Obstetrics and Gynecology. 2012. No. 4-2. S.78-82].
Благодаря этим свойствам использование «Аллокин-альфа» в послеоперационном периоде в заявляемом способе используется в качестве среде для иммунотерапии и профилактики развития рецидива папилломавирусной инфекции, что и повышает эффективность комплексной терапии.Due to these properties, the use of "Allokin-alpha" in the postoperative period in the present method is used as a medium for immunotherapy and prevention of relapse of papillomavirus infection, which increases the effectiveness of complex therapy.
Сущность изобретения поясняется рисунками, гдеThe invention is illustrated by drawings, where
На фиг.1 представлено изменение относительной активности каспаз-3, - 6 в клетках цервикального эпителия при развитии РШМ. Пунктирными линиями (здесь и далее) обозначены стандартные отклонения для группы контроля, жирными линиями - медианное значение активности в группе. Относительную активность каспаз вычисляли как ΔS/Δt, где ΔS - изменение интенсивности флуоресценции (оптической плотности) (отн. ед.) за промежуток времени Δt (мин). Для удобства полученную величину умножали на 104. Оценка статистической достоверности изменений активности каспаз проводилась в соответствии с критерием Уилкоксона-Манна-Уитни; n=30 (морфологически нормальный эпителий, «контроль»), n=18 (тяжелая дисплазия), n=26 (РШМ ст.0), n=24 (РШМ IA), n=20 (РШМ II), n=6 (РШМ III-IV). Символом «*» маркированы группы (РШМ), в которых активность каспаз достоверно отличается от контроля (p<0,05). На диаграммах приведены значения p, полученные при сравнении последовательных стадий РШМ.Figure 1 shows the change in the relative activity of caspaz-3, - 6 in cervical epithelial cells during the development of cervical cancer. Dotted lines (hereinafter) indicate standard deviations for the control group, and bold lines indicate the median value of the activity in the group. The relative activity of caspases was calculated as ΔS / Δt, where ΔS is the change in fluorescence intensity (optical density) (rel. Units) over a period of time Δt (min). For convenience, the resulting value was multiplied by 10 4 . Assessment of the statistical significance of changes in caspase activity was carried out in accordance with the Wilcoxon-Mann-Whitney criterion; n = 30 (morphologically normal epithelium, “control”), n = 18 (severe dysplasia), n = 26 (cervical cancer st. 0), n = 24 (cervical cancer IA), n = 20 (cervical cancer II), n = 6 (Cervical cancer III-IV). The symbol "*" marks groups (cervical cancer) in which the activity of caspases significantly differs from the control (p <0.05). The diagrams show the p values obtained by comparing the successive stages of cervical cancer.
На фиг.2 представлено изменение относительной активности каспаз-9 в клетках цервикального эпителия при развитии РШМ. Пунктирными линиями (здесь и далее) обозначены стандартные отклонения для группы контроля, жирными линиями - медианное значение активности в группе. Относительную активность каспаз вычисляли как ΔS/Δt, где ΔS - изменение интенсивности флуоресценции (оптической плотности) (отн. ед.) за промежуток времени Δt (мин). Для удобства полученную величину умножали на 104. Оценка статистической достоверности изменений активности каспаз проводилась в соответствии с критерием Уилкоксона-Манна-Уитни; n=30 (морфологически нормальный эпителий, «контроль»), n=18 (тяжелая дисплазия), n=26 (РШМ ст.0), n=24 (РШМ IA), n=20 (РШМ II), n=6 (РШМ III-IV). Символом «*» маркированы группы (РШМ), в которых активность каспаз достоверно отличается от контроля (p<0,05). На диаграммах приведены значения p, полученные при сравнении последовательных стадий РШМ.Figure 2 presents the change in the relative activity of caspase-9 in cervical epithelial cells with the development of cervical cancer. Dotted lines (hereinafter) indicate standard deviations for the control group, and bold lines indicate the median value of the activity in the group. The relative activity of caspases was calculated as ΔS / Δt, where ΔS is the change in fluorescence intensity (optical density) (rel. Units) over a period of time Δt (min). For convenience, the resulting value was multiplied by 10 4 . Assessment of the statistical significance of changes in caspase activity was carried out in accordance with the Wilcoxon-Mann-Whitney criterion; n = 30 (morphologically normal epithelium, “control”), n = 18 (severe dysplasia), n = 26 (cervical cancer st. 0), n = 24 (cervical cancer IA), n = 20 (cervical cancer II), n = 6 (Cervical cancer III-IV). The symbol "*" marks groups (cervical cancer) in which the activity of caspases significantly differs from the control (p <0.05). The diagrams show p values obtained by comparing the successive stages of cervical cancer.
На фиг.3 Изменение относительной активности каспаз-8 и -6 в МНПК при развитии РШМ. Пунктирными линиями обозначены стандартные отклонения для группы контроля, жирными линиями - медианное значение активности в группе. Относительную активность каспаз вычисляли как ΔS/Δt, где ΔS - изменение интенсивности флуоресценции (оптической плотности) (отн. ед.) за промежуток времени Δt (мин). Для удобства полученную величину умножали на 104. Оценка статистической достоверности изменений активности каспаз проводилась в соответствии с критерием Уилкоксона-Манна-Уитни; n=30 (группа контроля), n=21 (тяжелая дисплазия), n=32 (РШМ ст.0), n=30 (РШМ ст.IA), n=21 (РШМ ст.II), n=14 (РШМ ст.III-IV). Символом «*» маркированы группы, в которых активность каспаз достоверно отличается от контроля. На диаграммах приведены значения p<0,05, полученные при сравнении последовательных стадий РШМ.Figure 3 The change in the relative activity of caspases-8 and -6 in MNPK with the development of cervical cancer. Dotted lines indicate standard deviations for the control group, and bold lines indicate the median value of activity in the group. The relative activity of caspases was calculated as ΔS / Δt, where ΔS is the change in fluorescence intensity (optical density) (rel. Units) over a period of time Δt (min). For convenience, the value obtained was multiplied by 10 April. Assessment of the statistical significance of changes in caspase activity was carried out in accordance with the Wilcoxon-Mann-Whitney criterion; n = 30 (control group), n = 21 (severe dysplasia), n = 32 (cervical cancer Art. 0), n = 30 (cervical cancer Art. IA), n = 21 (cervical cancer Art. II), n = 14 ( Cervical cancer Art. III-IV). The symbol “*” marks groups in which caspase activity is significantly different from control. The diagrams show p <0.05 values obtained by comparing the successive stages of cervical cancer.
На фиг.4 представлено изменение относительной активности каспаз-3, и -9 в МНПК при развитии РШМ. Пунктирными линиями обозначены стандартные отклонения для группы контроля, жирными линиями - медианное значение активности в группе. Относительную активность каспаз вычисляли как ΔS/Δt, где ΔS - изменение интенсивности флуоресценции (оптической плотности) (отн. ед.) за промежуток времени Δt (мин). Для удобства полученную величину умножали на 104. Оценка статистической достоверности изменений активности каспаз проводилась в соответствии с критерием Уилкоксона-Манна-Уитни; n=30 (группа контроля), n=21 (тяжелая дисплазия), n=32 (РШМ ст.0), n=30 (РШМ ст.IA), n=21 (РШМ ст.II), n=14 (РШМ ст.III-IV). Символом «*» маркированы группы, в которых активность каспаз достоверно отличается от контроля. На диаграммах приведены значения p<0,05, полученные при сравнении последовательных стадий РШМ.Figure 4 presents the change in the relative activity of caspase-3, and -9 in MNPK with the development of cervical cancer. Dotted lines indicate standard deviations for the control group, and bold lines indicate the median value of activity in the group. The relative activity of caspases was calculated as ΔS / Δt, where ΔS is the change in fluorescence intensity (optical density) (rel. Units) over a period of time Δt (min). For convenience, the resulting value was multiplied by 10 4 . Assessment of the statistical significance of changes in caspase activity was carried out in accordance with the Wilcoxon-Mann-Whitney criterion; n = 30 (control group), n = 21 (severe dysplasia), n = 32 (cervical cancer Art. 0), n = 30 (cervical cancer Art. IA), n = 21 (cervical cancer Art. II), n = 14 ( Cervical cancer Art. III-IV). The symbol “*” marks groups in which caspase activity is significantly different from control. The diagrams show p <0.05 values obtained by comparing the successive stages of cervical cancer.
На фиг.5 представлено изменение уровня экспрессии мРНК каспаз-3 в МНПК при развитии РШМ. Пунктирными линиями обозначены стандартные отклонения для группы контроля, жирными линиями - медианное значение относительной экспрессии в группе. Относительную экспрессию определяли в соответствии с методом ΔΔCt, мРНК gapdh использовали в качестве референсной. Оценка статистической достоверности изменений экспрессии мРНК каспаз проводилась в соответствии с критерием Уилкоксона-Манна-Уитни; n=30 (группа контроля), n=21 (тяжелая дисплазия), n=32 (РШМ ст.0), n=30 (РШМ ст.IA), n=21 (РШМ ст.II), n=14 (РШМ ст.III-IV). Символом «*» маркированы группы, в которых активность каспаз достоверно отличается от контроля (различия полагали достоверными при p<0,05). На диаграммах приведены значения p, полученные при сравнении последовательных стадий РШМ.Figure 5 presents the change in the level of expression of caspase-3 mRNA in MNPK with the development of cervical cancer. Dotted lines indicate standard deviations for the control group, and bold lines indicate the median value of relative expression in the group. Relative expression was determined in accordance with the ΔΔCt method, gapdh mRNA was used as a reference. Assessment of the statistical significance of changes in caspase mRNA expression was carried out in accordance with the Wilcoxon-Mann-Whitney criterion; n = 30 (control group), n = 21 (severe dysplasia), n = 32 (cervical cancer Art. 0), n = 30 (cervical cancer Art. IA), n = 21 (cervical cancer Art. II), n = 14 ( Cervical cancer Art. III-IV). The symbol “*” marks the groups in which the activity of caspases significantly differs from the control (the differences were considered significant at p <0.05). The diagrams show the p values obtained by comparing the successive stages of cervical cancer.
На фиг.6 представлено изменение относительной активности каспазы-8 в МНПК пациенток с тяжелой дисплазией и РШМ 0-I стадий до и после лечения. Пунктирными линиями обозначены стандартные отклонения для группы контроля, жирными линиями - медианное значение активности в группе. Оценка статистической достоверности изменений активности каспаз проводилась в соответствии с критерием Уилкоксона-Манна-Уитни. Различия полагали достоверными при p<0,01: * - достоверное отличие от контроля, ** - достоверное отличие от соответствующей группы до лечения, *** - достоверное различие между 1 и 3 месяцами после терапии в группе РШМ IA стадии.Figure 6 presents the change in the relative activity of caspase-8 in the MNPC of patients with severe dysplasia and cervical cancer 0-I stages before and after treatment. Dotted lines indicate standard deviations for the control group, and bold lines indicate the median value of activity in the group. Assessment of the statistical significance of changes in caspase activity was carried out in accordance with the Wilcoxon-Mann-Whitney criterion. The differences were considered significant at p <0.01: * - a significant difference from the control, ** - a significant difference from the corresponding group before treatment, *** - a significant difference between 1 and 3 months after therapy in the cervical cancer stage IA group.
На фиг.7 представлены иммунограммы изменений параметров иммунного статуса больных преинвазивного и микроинвазивного. Изменение относительного содержания CD-позитивных клеток выражены в процентах от нормы. Ly - изменение общей численности лимфоцитов в % от нормы.Figure 7 presents the immunogram of changes in the parameters of the immune status of patients with preinvasive and microinvasive. The change in the relative content of CD-positive cells is expressed as a percentage of normal. Ly - change in the total number of lymphocytes in% of normal.
На фиг.8 представлена иммунограмма изменений параметров иммунного статуса больных ЦИН 3 до лечения и через 3 месяца после хирургического или комплексного лечения. Изменение относительного содержания CD-позитивных клеток выражены в процентах от нормы (принятой за 100%).On Fig presents an immunogram of changes in the parameters of the immune status of patients with
Основой заявляемого способа является иммунокоррегирующее лечение путем стимуляции врожденного иммунитета у больных с преинвазивным и инвазивным РШМ в послеоперационном периоде с помощью лекарственных препаратов (инъекций, мазей, суппозиторией, кремов, гелей) на основе пептида Аллоферон-1.The basis of the proposed method is immunocorrective treatment by stimulating innate immunity in patients with pre-invasive and invasive cervical cancer in the postoperative period with the help of drugs (injections, ointments, suppositories, creams, gels) based on the Alloferon-1 peptide.
В частности, предлагается использование инъекций лекарственного средства «Аллокин-альфа» лиофилизата для приготовления раствора для подкожного введения курсом из шести инъекций с интервалом 1 день между инъекциями. При необходимости курс может повторяться. Кроме того, в качестве индуктора могут быть использованы препараты на основе пептида Аллоферон-1 в виде следующих лекарственных форм: мазей, суппозиторией, кремов, гелей.In particular, it is proposed the use of injections of the drug Allokin-alpha lyophilisate for the preparation of a solution for subcutaneous administration with a course of six injections with an interval of 1 day between injections. If necessary, the course may be repeated. In addition, preparations based on the Alloferon-1 peptide in the form of the following dosage forms: ointments, suppositories, creams, gels, can be used as an inducer.
Для определения эффективности и результативности лечения используется комплексная диагностика, которая включает систему известных диагностических тестов, позволяющих проводить динамический контроль эффективности лечения через определение иммунофенотипирования, уровня генов каспаз, вирусной нагрузки ВПЧ-инфекции, количества онкобелка Е7.To determine the effectiveness and efficiency of treatment, a comprehensive diagnosis is used, which includes a system of known diagnostic tests that allow dynamic monitoring of the effectiveness of treatment through the determination of immunophenotyping, the level of caspase genes, the viral load of HPV infection, the number of E7 oncoprotein.
Возможность достижения технической задачи изобретения подтверждается следующим примером.The ability to achieve the technical objectives of the invention is confirmed by the following example.
Материалом для исследования были образцы ткани и периферической крови от 150 пациенток, оперированных в ГБУЗ «Республиканский онкологический диспансер» Республики Карелия в 2010-2012 гг.The material for the study was tissue and peripheral blood samples from 150 patients operated on in the Republican Oncology Dispensary GBUZ of the Republic of Karelia in 2010-2012.
Обследовано 75 женщин с преинвазивным РШМ и 45 - со стадией IA1. У всех больных первоначальный диагноз был верифицирован путем гистологического анализа. Непосредственно перед операцией производился забор венозной крови для выделения фракции мононуклеарных клеток периферической крови (МНПК). Также кровь была взята у 45 здоровых женщин, сопоставимых по возрасту, данным анамнеза и не имеющих патологии шейки матки и ВПЧ-инфекции (контрольная группа №1). Повторный забор крови и исследование иммунологических показателей у больных с преинвазивным и инвазивным раком шейки матки осуществлялся через 1 и 3 мес после операции диатермоконизации и лечения препаратом «Аллокин-альфа» в первые две недели послеоперационного периода. Препарат вводился подкожно в дозе 1 мг 6 раз в течение двух недель. Контрольную группу №2 составили пациентки с преинвазивным (n=15) и инвазивным РШМ (n=15), получившие только хирургическое лечение. По анамнезу, данным вирусологического и гистологического исследований рассматриваемые группы не различались.75 women with preinvasive cervical cancer and 45 women with stage IA1 were examined. In all patients, the initial diagnosis was verified by histological analysis. Immediately before the operation, venous blood was collected to isolate the fraction of peripheral blood mononuclear cells (PBMC). Blood was also taken from 45 healthy women, comparable in age, history, and without cervical pathology and HPV infection (control group No. 1). Repeated blood sampling and study of immunological parameters in patients with pre-invasive and invasive cervical cancer was carried out 1 and 3 months after diathermoconization surgery and treatment with Allokin-alpha in the first two weeks of the postoperative period. The drug was administered subcutaneously at a dose of 1
Также проведено определение ВПЧ-инфицированных пациенток, вирусной нагрузки, онкобелка Е7 в группах здоровых пациентов без патологии шейки матки (n=30), преинвазивного (n=75) и инвазивного (n=45) рака шейки матки до и после лечения. ВПЧ-типирование и выявление вирус-специфических мРНК в исследуемых группах проводилось методом полимеразной цепной реакции. Результаты гипирования представлены в Таблицах 1, 2 и 3.HPV-infected patients, viral load, E7 oncoprotein were also determined in groups of healthy patients without cervical pathology (n = 30), pre-invasive (n = 75) and invasive (n = 45) cervical cancer before and after treatment. HPV typing and detection of virus-specific mRNA in the studied groups was carried out by polymerase chain reaction. The results of the hyphenation are presented in Tables 1, 2 and 3.
Результаты, представленные в таблице 1, показывают увеличение количества ВПЧ-инфицированных пациенток.The results presented in table 1 show an increase in the number of HPV-infected patients.
В группе здоровых женщин (n=30) ДНК ВПЧ был отмечен у 26,7% (8) пациентов. Средний возраст женщин в контрольной группе составил 33,3±1,7 (n=30). ВПЧ высокого риска в группе здоровых женщин (16 и 18 генотипы) выявлены в 3,3% (1) случаях. При преинвазивном и инвазивном РШМ соответственно выявлено в 100% и 90,7% (Таблица 2) (P<0,05), что соответствует данным литературы (Доорбар Дж., 2006; Доорбар Дж. Молекулярная биология инфекции папилломавируса человека и цервикального рака / Дж. Доормар // Клинические науки. 2006. Т.110. Стр.525-541).In a group of healthy women (n = 30), HPV DNA was detected in 26.7% (8) of patients. The average age of women in the control group was 33.3 ± 1.7 (n = 30). High-risk HPV in the group of healthy women (16 and 18 genotypes) was detected in 3.3% (1) cases. In preinvasive and invasive cervical cancer, respectively, were detected in 100% and 90.7% (Table 2) (P <0.05), which corresponds to the literature (Doorbar J., 2006; Doorbar J. Molecular biology of human papillomavirus infection and cervical cancer / J. Doormar // Clinical Sciences. 2006. V.110. P.525-541).
В таблице 4 представлены результаты исследования вирусной нагрузки среди ВПЧ-позитивных лиц. Повышенная (>5 lg) и значимая (>3 lg) вирусные нагрузки наблюдаются у 48,5% и 41,2% у больных с преинвазивным РШМ и 53,5% и 37,2% у больных с инвазивным РШМ соответственно. В 10,2% и 9,3% случаев преинвазивного и инвазивного РШМ вирусная нагрузка малозначима (≤2 lg). В группе ВПЧ(+) здоровых пациентов отмечена у 26,7% только малозначимое (≤2 lg) количество вируса.Table 4 presents the results of a study of viral load among HPV-positive individuals. Elevated (> 5 lg) and significant (> 3 lg) viral loads are observed in 48.5% and 41.2% in patients with preinvasive cervical cancer and 53.5% and 37.2% in patients with invasive cervical cancer. In 10.2% and 9.3% of cases of preinvasive and invasive cervical cancer, the viral load is insignificant (≤2 log). In the HPV (+) group of healthy patients, only insignificant (≤2 lg) amount of virus was observed in 26.7%.
Показано, что частота выявления пациенток с повышенной и значимой вирусной нагрузкой наблюдается у 89,7% и 90,7% больных преинвазивным и инвазивным РШМ, статистически значимо превышая аналогичный показатель для больных с малозначимой вирусной нагрузкой (p<0,05). После комплексного лечения (конизация + «Аллокин-альфа») ВПЧ-позитивных пациентов выявлено 1,7% (2) случаев, при этом определялась незначительная вирусная нагрузка (<3 lg 105) (табл.3 и 4). Напротив, в группе, где было только хирургическое лечение, выявлено 36,7% случаев ВПЧ-положительных пациентов, при этом у 26,7% отмечена значительная вирусная нагрузка (>5 lg 105) и 10% - незначительная вирусная нагрузка (<3 lg 105).It was shown that the detection rate of patients with increased and significant viral load is observed in 89.7% and 90.7% of patients with preinvasive and invasive cervical cancer, statistically significantly exceeding the same indicator for patients with insignificant viral load (p <0.05). After complex treatment (conization + Allokin-alpha) of HPV-positive patients, 1.7% (2) cases were detected, with a slight viral load (<3 log 10 5 ) (Table 3 and 4). On the contrary, in the group where there was only surgical treatment, 36.7% of cases of HPV-positive patients were detected, while 26.7% had a significant viral load (> 5 lg 10 5 ) and 10% had a slight viral load (<3 lg 10 5 ).
Проведено определение онкобелка Е7 в группах здоровых пациентов, преинвазивного и инвазивного рака шейки матки.The oncoprotein E7 was determined in groups of healthy patients, pre-invasive and invasive cervical cancer.
Определение наличия онкобелка Е7 у больных с преинвазивным и инвазивным РШМ является актуальным, так как интеграция ДНК ВПЧ в геном клеток сопровождается нарушением структуры гена Е2, который является репрессором Е7 [Джейшри Р.С. и др., 2009 Джейшри Р.С. Внутренние и внешние факторы клетки в цервикальном канцерогенезе / Р.С. Джейшри, А. Сринивас, М. Тесси и др. // Индиан Дж. Мед. Иссл. 2009. Т.130. Стр.286-295]. При интеграции ДНК-вируса синтез белка Е2 прекращается вследствие нарушения соответствующего гена и активируется синтез белка Е7 [Ванг С.С., Хилдешейм А., 2003; Ванг С.С. Вирусные и клеточные факторы в персистенции и развитии папилломавируса человека / Ванг С.С., А. Хилдешейм // Журнал монографий Национального института рака. 2003. Т.31. Стр.35-40]. Таким образом, происхождение онкобелка Е7 связано с жизненным циклом интегрированной формы ВПЧ-инфекции и может являться маркером преинвазивного и инвазивного РШМ [Джаббар С.Ф., Абраме Л., Глик А., Ламберг П.Ф. Персистенция высокодифференцированной цервикальной дисплазии и цервикальный рак требуют продолжительного выражения папилломавируса человека онкогена типа 16 Е7 // Иссл. рака. 2009. Т.69. №10. Стр.4407-4014]. Кроме того, измерение уровня онкобелка Е7 позволяет уточнить характер вирусной инфекции, а также возможность злокачественной трансформации при интегрированной форме ВПЧ-инфекции.The determination of the presence of E7 oncoprotein in patients with preinvasive and invasive cervical cancer is relevant, since the integration of HPV DNA into the cell genome is accompanied by a disruption in the structure of the E2 gene, which is an E7 repressor [Jeyshri R.S. et al., 2009 Jeyshri R.S. Internal and external factors of the cell in cervical carcinogenesis / R.S. Jeyshri, A. Srinivas, M. Tessi et al. // Indian J. Honey. Research 2009.V. 130. P.286-295]. When integrating a DNA virus, the synthesis of E2 protein stops due to a violation of the corresponding gene and the synthesis of E7 protein is activated [Wang S. S., Hildesheim A., 2003; Wang S.S. Viral and cellular factors in the persistence and development of human papillomavirus / Wang S.S., A. Hildesheim // Journal of Monographs of the National Cancer Institute. 2003.V.31. Pg. 35-40]. Thus, the origin of E7 oncoprotein is associated with the life cycle of the integrated form of HPV infection and may be a marker of preinvasive and invasive cervical cancer [Jabbar S.F., Abrame L., Glick A., Lamberg P.F. The persistence of highly differentiated cervical dysplasia and cervical cancer require prolonged expression of the human papillomavirus type 16 E7 oncogen // Research. cancer. 2009.V. 69. No. 10. Page 4407-4014]. In addition, measuring the level of the E7 oncoprotein makes it possible to clarify the nature of the viral infection, as well as the possibility of malignant transformation with the integrated form of HPV infection.
Онкобелок Е7 определяется в цервикальном материале только при наличии вируса, так как является продуктом вирусного генома (Таблица 5).Oncoprotein E7 is determined in cervical material only in the presence of a virus, since it is a product of the viral genome (Table 5).
В контрольной группе из 8 случаев ВПЧ положительных образцов не выявлено наличия онкобелка Е7. В группе больных преинвазивного рака шейки матки (n=75) ВПЧ-позитивных больных выявлено 68 (90,6%) случаев, при этом в сочетании с продукцией онкобелка Е7 в 52 (69,3%) случаях, в 25,3% случаев онкобелка Е7 выявлено не было.In the control group of 8 cases of HPV positive samples, the presence of E7 oncoprotein was not detected. In the group of patients with preinvasive cervical cancer (n = 75), HPV-positive patients revealed 68 (90.6%) cases, while in combination with the production of E7 oncoprotein in 52 (69.3%) cases, in 25.3% of cases Oncoprotein E7 was not detected.
В группе инвазивного РШМ (n=31) ВПЧ-позитивных больных выявлено 96,8%, а сочетании с продукцией онкобелка Е7 67,7% случаях. Таким образом, при преинвазивном и инвазивном РШМ имеется одинаково высокие количества белка Е7, что подтверждает данные литературы [Сопов И., Соренсен Т, Магбагбеолу М. И др. Определение профилей генной экспрессии, связанные с раком, в тяжелой цервикальной неоплазии // Международный журнал о раке. - 2004. - Т.112. - Стр.33-43].In the group of invasive cervical cancer (n = 31), HPV-positive patients revealed 96.8%, and in combination with the production of E7 oncoprotein, 67.7% of cases. Thus, with preinvasive and invasive cervical cancer there are equally high amounts of E7 protein, which is confirmed by the literature [Sopov I., Sorensen T, Magbagbeolu M. et al. Determination of gene expression profiles associated with cancer in severe cervical neoplasia // International Journal about cancer. - 2004. - T.112. - Pages 33-43].
В ходе проведения исследований использовались следующие методы исследования:In the course of the research, the following research methods were used:
1. ВПЧ-типирование. Скрининг на наличие ВПЧ-ДНК и идентификация ВПЧ-генотипа (16-ого, 18-ого, 31-ого и 33-его) проводились методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с использованием наборов «АмплиСенс ВПЧ ВКР скрин-EPh» (ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора, Москва).1. HPV typing. The screening for the presence of HPV DNA and identification of the HPV genotype (16th, 18th, 31st and 33rd) was carried out by polymerase chain reaction (PCR) using AmpliSens HPV SRS screen-EPh kits (FBUN CRI Epidemiology of Rospotrebnadzor, Moscow).
2. Уровень экспрессии мРНК генов каспаз в ткани шейки матки или МНПК определяли методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в «режиме реального времени» (ПЦР-РВ)2. The level of expression of casnases mRNA genes in cervical tissue or MNPK was determined by the method of polymerase chain reaction (PCR) in "real time" (PCR-RV)
3. Достоверность интерпретации результатов количественного ПЦР-анализа определяли способом нормализации данных. [ПЦР «в реальном времени» / Ребриков Д.В., Саматов Г.А., Трофимов Д.Ю. и др.; под ред. д.б.н. Д.В. Ребрикова. - М.: БИНОМ. Лаборатория знаний, 2009. - 215 с. Бустин С.А., Количественное выражение иРНК с использованием ПЦР (ПЦР-РВ) с обратной фанскрипцией в реальном времени: тенденции и проблемы // Журнал о молекулярной эндокринологии. - 2002. - Т.29. - Стр.23-39].3. The reliability of the interpretation of the results of quantitative PCR analysis was determined by the method of data normalization. [Real-time PCR / Rebrikov D.V., Samatov G.A., Trofimov D.Yu. and etc.; under the editorship of Doctor of Biological Sciences D.V. Rebrikova. - M .: BINOM. Laboratory of Knowledge, 2009. - 215 p. Bustin S.A., Quantitative expression of mRNA using PCR (PCR-RV) with real-time reverse fancryption: trends and problems // Journal of Molecular Endocrinology. - 2002. - T.29. - Pages 23-39].
4. Эффективность амплификации при текущих условиях эксперимента определяли по графику зависимости порогового цикла от концентрации матрицы. Результаты ПЦР нормализовали по массе суммарной фракции РНК.4. The amplification efficiency under current experimental conditions was determined according to the graph of the dependence of the threshold cycle on the matrix concentration. PCR results were normalized by weight of the total RNA fraction.
5. Анализ относительного уровня экспрессии мРНК генов каспаз в МНПК проводили с использованием gapdh в качестве референсного гена по методу ΔΔCt [Ливак К.Дж., Шмиттген Т.Д. Анализ относительных данных генной экспрессии с использованием количественного выражения ПЦР в реальном времени и метода 2(-Дельта Дельта С(Т)) // Методы. 2001. Т.25. №4. Стр.402-408].5. Analysis of the relative level of caspase gene mRNA expression in PBMCs was performed using gapdh as the reference gene according to the ΔΔCt method [Livak K.J., Schmittgen TD Analysis of relative data of gene expression using quantitative expression of real-time PCR and method 2 (Delta Delta C (T)) // Methods. 2001.V.25.
6. Определение активности каспаз проводили стандартным методом с использованием специфических субстратов, меченных флуоресцентной меткой (7-амино-4-фифторметилкумарин - AFC) («BioRad», США), детектируемой по изменению флуоресценции или оптической плотности. МНПК (106 клеток).6. Caspase activity was determined by the standard method using specific substrates labeled with a fluorescent label (7-amino-4-fluoromethylcoumarin - AFC) (BioRad, USA), detected by changes in fluorescence or optical density. MNPK (106 cells).
Результаты исследования.The results of the study.
1. Экспрессия генов каспаз-3, -6 и -9 в ткани преинвазивного и инвазивного РШМ.1. Expression of caspase-3, -6, and -9 genes in tissue of preinvasive and invasive cervical cancer.
Была проведена оценка степени нарушений апонтотической программы при преинвазивном и инвазивном РШМ через определение экспрессии каспаз-3, -6 и -9 на уровне протеолитической активности и содержания соответствующих мРНК. Выявлено в группе преинвазивного рака в значительном количестве случаев увеличение активности эффекторных каспаз-3 и -6 по сравнению с уровнем контроля (фиг.1 и 2).The extent of apontotic program disorders in preinvasive and invasive cervical cancer was assessed by determining the expression of caspases-3, -6, and -9 at the level of proteolytic activity and the content of the corresponding mRNA. Identified in a group of preinvasive cancers in a significant number of cases, an increase in the activity of effector caspases-3 and -6 compared with the control level (Figs. 1 and 2).
При РШМ IA стадии наблюдается снижение активности всех исследуемых каспаз (в случае каспаз-3 и -9 - достоверно ниже уровня контроля). В 6 (из 26) образцах РШМ стадии IA (23%) активность каспазы-6 оставалось значительно повышенной. Степень подавления активности каспаз-3 и -9 достоверно коррелировала со стадией заболевания в ряду преинвазивный РШМ→РШМ IA-IV.In cervical cancer of the IA stage, a decrease in the activity of all caspases studied is observed (in the case of caspases-3 and -9, they are significantly lower than the control level). In 6 (out of 26) cervical cancer samples of stage IA (23%), caspase-6 activity remained significantly increased. The degree of suppression of caspase-3 and -9 activity was significantly correlated with the stage of the disease in the series preinvasive cervical cancer → cervical cancer IA-IV.
2. Экспрессия каспаз в МНПК больных преинвазивным и РШМ2. The expression of caspases in MNPK patients with preinvasive and cervical cancer
Далее был исследован уровень протеолитической активности рецептор-регулируемой каспазы-8, эффекторных каспаз-3 и -6 и каспазы-9 в МНПК больных с преинвазивным и инвазивным РШМ и группы контроля (фиг.3 и 4).Next, the level of proteolytic activity of receptor-regulated caspase-8, effector caspase-3 and -6, and caspase-9 in MNPK patients with preinvasive and invasive cervical cancer and the control group (Figs. 3 and 4) was investigated.
По мере увеличения стадии РШМ наблюдалось достоверное увеличение активности каспазы-8 в МНПК (r=0,92; R2=0,86; p<0,01), для каспазы-6 (r=0,77; R2=0,59; p<0,01). Активность каспазы-9 при прогрессии РШМ снижается относительно группы контроля; (r=-0,60; R2=0,36; p<0,01). В 26% случаев РШМ IA стадии был зарегистрирован повышенный уровень активности каспазы-9.As the cervical cancer stage increased, a significant increase in caspase-8 activity was observed in PBMCs (r = 0.92; R 2 = 0.86; p <0.01), for caspase-6 (r = 0.77; R 2 = 0 , 59; p <0.01). Caspase-9 activity in cervical cancer progression decreases relative to the control group; (r = -0,60; R 2 = 0,36; p <0,01). In 26% of cases of cervical cancer of stage IA, an increased level of caspase-9 activity was recorded.
При этом отмечено изменение относительного содержания мРНК каспазы-3 (фиг.5) при увеличении стадии РШМ от 0→II стадии в сравнении с 1 руиной контроля.At the same time, there was a change in the relative content of caspase-3 mRNA (Fig. 5) with an increase in the cervical cancer stage from 0 → II stage in comparison with 1 control ruin.
Для каспазы-6 наблюдалась тенденция к повышению уровня экспрессии мРНК при развитии РШМ (p<0,01). Для относительного уровня мРНК каспазы-9 корреляция со стадией заболевания не была выявлена.For caspase-6, there was a tendency to increase the level of mRNA expression during the development of cervical cancer (p <0.01). For a relative caspase-9 mRNA level, no correlation with the disease stage was detected.
3. Экспрессия каспаз в МНПК больных преинвазивным РШМ и РШМ IA стадии после курса терапии Аллокином-альфа3. The expression of caspases in MNPK patients with preinvasive cervical cancer and cervical cancer stage IA after a course of therapy with Allokin-alpha
Изучена экспрессия каспаз в постоперационном периоде на фоне приема Аллокина-альфа, с учетом того факта, что через 1 и 3 месяца выявлена постепенная нормализация количества циркулирующих CD95-позитивных лимфоцитов.Caspase expression in the postoperative period was studied with Allokin-alpha, taking into account the fact that after 1 and 3 months a gradual normalization of the number of circulating CD95-positive lymphocytes was revealed.
Процесс нормализации активности каспаз после этапа лечения был наиболее выраженным в случае каспазы-8 (фиг.6): в группах РШМ 0 и IA стадий активность достоверно снижалась до уровня контроля. Для каспазы-6 после курса лечения регистрируется существенное повышение уровня активности. Профиль активности каспазы-3 в МНПК больных с преинвазивным РШМ после курса лечения сохраняется таким же, как и в группах до лечения.The process of normalizing the activity of caspases after the treatment stage was most pronounced in the case of caspase-8 (Fig.6): in the
Активность каспазы-6 в крови пациенток с РШМ 0-I стадий после лечения в большинстве исследованных случаев соответствует контролю или сохраняется повышенный уровень. После терапии в МНПК всех обследованных групп больных регистрируется контрольный уровень активности каспазы-9 или его повышение. Таким образом, наиболее существенные изменения экспрессии каспаз были выявлены на уровне протеолитической активности.The activity of caspase-6 in the blood of patients with cervical cancer of the 0-I stage after treatment in most of the studied cases corresponds to control or remains at an elevated level. After therapy, the control level of caspase-9 activity or its increase is recorded in the MNPC of all examined groups of patients. Thus, the most significant changes in caspase expression were identified at the level of proteolytic activity.
Уровень экспрессии мРНК каспаз в МНПК пациенток с указанными стадиями заболевания через 1 месяц после лечения у пациенток с дисплазией тяжелой степени после лечения наблюдалось увеличение уровня экспрессии мРНК каспаз-3 и -6. В группах РШМ стадии 0 и стадии IA уровень экспрессии мРНК каспазы-3 до и после лечения достоверно не различался и для обеих стадий он был выше уровня контроля, что согласуется с результатами по активности каспазы-3. Аналогично каспазе-3, содержание мРНК каспазы-6 в МНПК больных с РШМ стадий 0 и IA после лечения изменяется в том же диапазоне, что и до лечения. В отличие от каспаз-3 и -6 уровень экспрессии мРНК каспазы-9 в группе пациенток с тяжелой дисплазией после лечения оставался равным контролю. При РШМ стадии 0 отмечается тенденция к повышению содержания мРНК до уровня контроля, что соответствует данным, полученным для активности каспазы-9.The level of caspase mRNA expression in MNPCs of patients with the indicated stages of the
Полученные результаты указывают на то, что по прохождении курса лечения наблюдается восстановление нормального уровня активности каспаз в циркулирующих лимфоцитах больных преинвазивным и инвазивным РШМ.The obtained results indicate that after the course of treatment there is a restoration of the normal level of caspase activity in the circulating lymphocytes of patients with pre-invasive and invasive cervical cancer.
4. Иммунофенотинирование МНПК больных преинвазивным и инвазивным РШМ4. Immunophenotination of PBMCs in patients with preinvasive and invasive cervical cancer
В группе преинвазивного РШМ выявлены достоверные различия по относительному содержанию CD4(+), CD4(+)CD25(+), CD8(+) Т-клеток и CD20(+)-лимфоцитов и численности CD16(+) натуральных киллеров (НК) и CD20(+) В-клеток. Содержание циркулирующих НК- и В-клеток достоверно увеличивалось при преинвазивном РШМ относительно контрольных значений и достигало максимума при РШМ I стадии.In the preinvasive cervical cancer group, significant differences were revealed in the relative contents of CD4 (+), CD4 (+) CD25 (+), CD8 (+) T cells and CD20 (+) - lymphocytes and the number of CD16 (+) natural killers (NK) and CD20 (+) B cells. The content of circulating NK and B cells significantly increased with preinvasive cervical cancer compared to control values and reached a maximum with cervical cancer I stage.
В предъявленных иммунограммах (Фиг.5) видно, что численность популяции CD95(+)-лимфоцитов существенно увеличивалась по мере увеличения стадии заболевания (r=-0,91; R2=0,82; p<0,01).The presented immunograms (Figure 5) show that the population of CD95 (+) - lymphocytes increased significantly with increasing stage of the disease (r = -0.91; R 2 = 0.82; p <0.01).
5. Влияние иммуномодулирующей терапии на показатели клеточного иммунитета больных ЦИН 3 и инвазивным РШМ.5. The effect of immunomodulating therapy on the cellular immunity of patients with
Оценен процесс восстановления иммунного статуса больных с преинвазивным и инвазивным РШМ в постоперационном периоде при использовании препарата иммуномодулирующего действия Аллокина-альфа.The process of restoration of the immune status of patients with preinvasive and invasive cervical cancer in the postoperative period using the immunomodulatory drug Allokin-alpha was evaluated.
Для этого у пациенток с преинвазивным и инвазивным РШМ IA стадии осуществлялся повторный забор крови и исследование иммунологических показателей через 1 и 3 месяца после операции диатермоконизации и лечения препаратом Аллокин-альфа. Препарат вводился подкожно в дозе 1 мг 6 раз в течение двух недель. Контрольную группу №2 составили пациентки с преинвазивным (n=15) и РШМ IA стадии (n=15), получившие только хирургическое лечение. В обеих группах был проведен анализ ВПЧ-инфекции до лечения и через 3 месяца после терапии (таблица 1 и 2).For this, in patients with preinvasive and invasive cervical cancer of the IA stage, repeated blood sampling and study of immunological parameters were carried out 1 and 3 months after the operation of diathermoconization and treatment with Allokin-alpha. The drug was administered subcutaneously at a dose of 1
Результаты иммунофенотипирования периферической крови больных указанных групп приведены в таблицах 8 и 9.The results of immunophenotyping of peripheral blood of patients of these groups are shown in tables 8 and 9.
В течение 3-х месяцев после лечения в крови пациенток с преинвазивным и РШМ IA стадии отмечается увеличение численности CD4(+)-клеток и уменьшение числа CD4(+)CD25(+)-лимфоцитов; при этом в группе пациенток, получавших препарат, в отличие от пациенток контрольной группы №2, через 3 месяца происходит восстановление данных показателей до значений, определяемых в группе здоровых (контроль №1). В отношении CD8(+) ЦТЛ также выявлена тенденция к нормализации численности после лечения, однако закономерные различия между группами больных, получавших и не получавших препарат, на данном этапе работы не обнаружены. Достоверное изменение количества CD20(+)-лимфоцитов в периферической крови пациенток с преинвазивным и РШМ IA наблюдалось только на фоне иммуномодулирующей терапии.Within 3 months after treatment in the blood of patients with preinvasive and cervical cancer stage IA, an increase in the number of CD4 (+) cells and a decrease in the number of CD4 (+) CD25 (+) lymphocytes is noted; at the same time, in the group of patients receiving the drug, in contrast to the patients of the control group No. 2, after 3 months, these indicators are restored to the values determined in the healthy group (control No. 1). With respect to CD8 (+) CTLs, a tendency toward normalization of the number after treatment was also revealed, however, no regular differences between groups of patients who received and did not receive the drug were not detected at this stage of the work. A significant change in the number of CD20 (+) - lymphocytes in the peripheral blood of patients with preinvasive and cervical cancer IA was observed only on the background of immunomodulating therapy.
В крови пациенток с преинвазивный РШМ выраженная нормализация содержания CD16(+)-клеток отмечалась только через 3 месяца после комплексного лечения. У пациенток с РШМ IA стадии снижение численности данной субпопуляции наблюдалось через 1 и 3 месяца, причем через 1 месяц в группе больных, получавших препарат, эти изменения более заметны.In the blood of patients with preinvasive cervical cancer, a pronounced normalization of the content of CD16 (+) - cells was observed only 3 months after complex treatment. In patients with stage III cervical cancer, a decrease in the number of this subpopulation was observed after 1 and 3 months, and after 1 month in the group of patients receiving the drug, these changes are more noticeable.
В МНПК-фракции пациенток с преинвазивным РШМ и РШМ IA стадии, составляющих контрольную группу №2, в течение 3-х месяцев экспрессия CD95-маркера практически не изменяется, в то время как прохождение курса иммуномодулирующей терапии сопряжено со значимым уменьшением количества CD95-позитивных лимфоцитов.In the MNPC fraction of patients with preinvasive cervical cancer and cervical cancer of stage IA, comprising the control group No. 2, the expression of the CD95 marker remains practically unchanged for 3 months, while the course of immunomodulating therapy is associated with a significant decrease in the number of CD95-positive lymphocytes .
Таким образом, при использовании иммуномодулирующей терапии препаратам Аллокин-альфа в комплексе со стандартным подходом наиболее выраженные изменения численности (в направлении нормы) претерпевают субпопуляции CD4(+)CD25(+)Tregs, CD16(+) НК-клетки и CD20(+) В-лимфоциты, что наглядно иллюстрирует иммунограмма, представленная на Фиг. 6 (на примере преинвазивного РШМ).Thus, when using immunomodulating therapy with Allokin-alpha drugs in combination with the standard approach, the most pronounced changes in the number (in the normal direction) undergo subpopulations of CD4 (+) CD25 (+) Tregs, CD16 (+) NK cells and CD20 (+) B lymphocytes, which is clearly illustrated by the immunogram shown in FIG. 6 (on the example of preinvasive cervical cancer).
При этом в группе больных преинвазивного и инвазивного рака ВПЧ-позитивных больных выявлено соответственно 90,7% и 95,6% случаев, в сочетании с продукцией онкобелка Е7 в 74,6% и 71,1% (табл.1, 2, 3). После комплексного лечения ВПЧ-позитивных пациентов в основной группе выявлено 1,7% (2) случаев, определялась незначительная вирусная нагрузка (<3 lg 105) и не было онкобелка Е7 (таблицы 4 и 5). Напротив, в контрольной группе, где было только хирургическое лечение, выявлено 36,7% случаев ВПЧ-положительных пациентов; 26,7% (8) - со значительной вирусной нагрузкой (>5 lg 105), 10% (3) - с незначительной вирусной нагрузкой (<3 lg 105) и онкобелок Е7 определялся у 16,7%) (5) пациентов.At the same time, in the group of patients with pre-invasive and invasive cancer of HPV-positive patients, 90.7% and 95.6% of cases were detected, respectively, in combination with the production of E7 oncoprotein in 74.6% and 71.1% (Tables 1, 2, 3 ) After complex treatment of HPV-positive patients, 1.7% (2) cases were detected in the main group, a slight viral load (<3 lg 10 5 ) was determined, and there was no E7 oncoprotein (tables 4 and 5). In contrast, in the control group, where there was only surgical treatment, 36.7% of cases of HPV-positive patients were detected; 26.7% (8) - with a substantial viral load (> 10 5 5 lg), 10% (3) - with low viral load (<10 5 3 lg) and the E7 oncoprotein was determined at 16.7%) (5) patients.
Таким образом, результаты проведенного исследования комплексной терапии (сочетание хирургического метода и иммунокоррегирующего лечения) у больных с CIN2-3/CIS шейки матки в сравнении с результатами монохирургии демонстрируют, что применение препарата «Аллокин-альфа» после хирургического лечения восстанавливает молекулярно-генетическую и иммунологическую «матрицы» пациентов до нормы. Напротив, у пациентов, получивших только хирургическое лечение, данных изменений отмечено не было. Важно отметить, что эффективное и адекватное лечение должно всегда сопровождаться снижением апоптоза в лейкоцитах периферической крови. При этом маркерами эффективности и адекватности комплексного лечения будут экспрессия CD3, CD4, CD8, CD4+CD25+, CD95+ и активность каспаз в лимфоцитах периферической крови.Thus, the results of the study of complex therapy (a combination of the surgical method and immunocorrective treatment) in patients with CIN2-3 / CIS of the cervix in comparison with the results of monosurgery demonstrate that the use of the drug Allokin-alpha after surgical treatment restores the molecular genetic and immunological "Matrix" of patients to normal. In contrast, in patients who received only surgical treatment, these changes were not noted. It is important to note that effective and adequate treatment should always be accompanied by a decrease in apoptosis in peripheral blood leukocytes. In this case, the expression of CD3, CD4, CD8, CD4 + CD25 + , CD95 + and the activity of caspases in peripheral blood lymphocytes will be markers of the effectiveness and adequacy of complex treatment.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013141056/15A RU2560689C2 (en) | 2013-09-06 | 2013-09-06 | Method of complex therapy of pre-invasive and invasive cervical cancer |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013141056/15A RU2560689C2 (en) | 2013-09-06 | 2013-09-06 | Method of complex therapy of pre-invasive and invasive cervical cancer |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2013141056A RU2013141056A (en) | 2015-03-20 |
| RU2560689C2 true RU2560689C2 (en) | 2015-08-20 |
Family
ID=53285339
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2013141056/15A RU2560689C2 (en) | 2013-09-06 | 2013-09-06 | Method of complex therapy of pre-invasive and invasive cervical cancer |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2560689C2 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2735660C1 (en) * | 2019-12-23 | 2020-11-05 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Петрозаводский государственный университет" | Method for differential diagnosis of cervical intraepithelial neoplasia of grade iii and microinvasive cervical cancer associated with human papilloma virus |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2172322C1 (en) * | 1999-12-27 | 2001-08-20 | Энтофарм Ко., Лтд. | Allopherones as immunomodulating peptides |
| WO2005068491A1 (en) * | 2004-01-15 | 2005-07-28 | Sergey Ivanovich Chernysh | Antitumoral and antiviral peptides |
| RU2482866C2 (en) * | 2010-10-07 | 2013-05-27 | Общество с ограниченной ответственностью "Аллоферон" | Method of treating papilloma viral infections implemented through interleukin-18 induction |
-
2013
- 2013-09-06 RU RU2013141056/15A patent/RU2560689C2/en active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2172322C1 (en) * | 1999-12-27 | 2001-08-20 | Энтофарм Ко., Лтд. | Allopherones as immunomodulating peptides |
| WO2005068491A1 (en) * | 2004-01-15 | 2005-07-28 | Sergey Ivanovich Chernysh | Antitumoral and antiviral peptides |
| RU2482866C2 (en) * | 2010-10-07 | 2013-05-27 | Общество с ограниченной ответственностью "Аллоферон" | Method of treating papilloma viral infections implemented through interleukin-18 induction |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| САФРОННИКОВА Н.Р. и др. Папилломавирусные инфекции: новые подходы к лечению // Всероссийский журнал для врачей всех специальностей "TERRA MEDICA NOVA", 2010, N2, стр.31-35 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2735660C1 (en) * | 2019-12-23 | 2020-11-05 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Петрозаводский государственный университет" | Method for differential diagnosis of cervical intraepithelial neoplasia of grade iii and microinvasive cervical cancer associated with human papilloma virus |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2013141056A (en) | 2015-03-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Velloso et al. | NOD-like receptors: major players (and targets) in the interface between innate immunity and cancer | |
| Zeng et al. | COVID-19 mRNA booster vaccines elicit strong protection against SARS-CoV-2 Omicron variant in patients with cancer | |
| de Freitas et al. | hrHPV E5 oncoprotein: immune evasion and related immunotherapies | |
| Xiao et al. | IFNAR1 controls autocrine type I IFN regulation of PD-L1 expression in myeloid-derived suppressor cells | |
| Zhan et al. | The regulation of the development and function of dendritic cell subsets by GM-CSF: more than a hematopoietic growth factor | |
| Durrant et al. | IL-1R1 signaling regulates CXCL12-mediated T cell localization and fate within the central nervous system during West Nile Virus encephalitis | |
| Azar et al. | Preimplantation factor reduces graft-versus-host disease by regulating immune response and lowering oxidative stress (murine model) | |
| Couper et al. | Anti-CD25 antibody-mediated depletion of effector T cell populations enhances susceptibility of mice to acute but not chronic Toxoplasma gondii infection | |
| Maher et al. | Candida albicans stimulates IL-23 release by human dendritic cells and downstream IL-17 secretion by Vδ1 T cells | |
| Goswami et al. | Targeting STAT3 phosphorylation by neem leaf glycoprotein prevents immune evasion exerted by supraglottic laryngeal tumor induced M2 macrophages | |
| Marsden et al. | Herpes simplex virus type 2–infected dendritic cells produce TNF-α, which enhances CCR5 expression and stimulates HIV production from adjacent infected cells | |
| Yu et al. | Antagonist-mediated down-regulation of toll-like receptors increases the prevalence of human papillomavirus infection in systemic lupus erythematosus | |
| Zhang et al. | T follicular helper cells restricted by IRF8 contribute to T cell-mediated inflammation | |
| Nouroz et al. | Natural killer cells enhance the immune surveillance of cancer | |
| Daniilidis et al. | Cytokines of cervical mucosa and human papilloma virus infection of the cervix: a descriptive study | |
| DAVRONOVICH et al. | Dynamics of the Immune Status of Women in the Treatment of Human Papilloma Virus (Hpv) of the Cervix | |
| Chessler et al. | Trypanosoma cruzi triggers an early type I IFN response in vivo at the site of intradermal infection | |
| Cumming et al. | Type I IFNs in the female reproductive tract: The first line of defense in an ever-changing battleground | |
| Escarra-Senmarti et al. | Loss of CD28 within CD4+ T cell subsets from cervical cancer patients is accompanied by the acquisition of intracellular perforin, and is further enhanced by NKG2D expression | |
| Kis-Toth et al. | Engagement of SLAMF2/CD48 prolongs the time frame of effective T cell activation by supporting mature dendritic cell survival | |
| RU2560689C2 (en) | Method of complex therapy of pre-invasive and invasive cervical cancer | |
| Hall et al. | RIP2 contributes to Nod signaling but is not essential for T cell proliferation, T helper differentiation or TLR responses | |
| Szeto et al. | Interferon and toll-like receptor 7 response in COVID-19: Implications of topical imiquimod for prophylaxis and treatment | |
| RU2394586C2 (en) | Application of skeleton of nocardia rubra cell wall for obtaining medication against human papilloma virus (hpv) | |
| Xu et al. | Advanced lung cancer is associated with decreased expression of perforin, CD95, CD38 by circulating CD3+ CD8+ T lymphocytes |