RU2540643C1 - Method of taking of biological material for diagnostics of leptospirosis of wild animals - Google Patents
Method of taking of biological material for diagnostics of leptospirosis of wild animals Download PDFInfo
- Publication number
- RU2540643C1 RU2540643C1 RU2013150012/05A RU2013150012A RU2540643C1 RU 2540643 C1 RU2540643 C1 RU 2540643C1 RU 2013150012/05 A RU2013150012/05 A RU 2013150012/05A RU 2013150012 A RU2013150012 A RU 2013150012A RU 2540643 C1 RU2540643 C1 RU 2540643C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- urine
- leptospirosis
- biological material
- wild animals
- frozen
- Prior art date
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к способам получения биологического материала для диагностики лептоспироза у диких животных.The invention relates to the field of veterinary medicine, in particular to methods for producing biological material for the diagnosis of leptospirosis in wild animals.
Известен способ отбора проб для определения возбудителя лептоспироза в моче животных, согласно которого мочу собирают при естественном мочеиспускании в чистые пробирки и микроскопируют непосредственно в хозяйствах. При этом микроскопия мочи должна быть закончена при температуре 30-40°С в течение 3 ч, 25-30°С - 4-5 ч, 20-25°С - 6-8 ч, 16-20°С - 10-12 ч с момента взятия (Животные сельскохозяйственные. Методы лабораторной диагностики лептоспироза. ГОСТ 25386-91. М., 1992).A known method of sampling to determine the causative agent of leptospirosis in animal urine, according to which urine is collected by natural urination in clean tubes and microscopic directly in the farms. In this case, urine microscopy should be completed at a temperature of 30-40 ° C for 3 hours, 25-30 ° C - 4-5 hours, 20-25 ° C - 6-8 hours, 16-20 ° C - 10-12 hours from the time of capture (Agricultural animals. Methods of laboratory diagnosis of leptospirosis. GOST 25386-91. M., 1992).
В соответствии с инструкцией «О мероприятиях по профилактике и оздоровлению животных от лептоспироза» от 23 июня 1992 г., №22-3/40, мочу собирают и микроскопируют непосредственно в хозяйствах, при этом патологический материал должен быть взят и исследован на лептоспироз в течение 6 часов после взятия в летнее время, 10-12 часов после взятия в зимнее время или при хранении в охлажденном состоянии.In accordance with the instruction "On measures for the prevention and recovery of animals from leptospirosis" dated June 23, 1992, No. 22-3 / 40, urine is collected and microscopted directly on farms, while pathological material must be taken and examined for leptospirosis during 6 hours after taking in the summer, 10-12 hours after taking in the winter or when stored in a refrigerated state.
Вышеуказанные способы предполагаю проведение отбора проб биологического материала - мочи, для диагностики лептоспироза у животных в период естественного мочеиспускания непосредственно в хозяйствах, что делает невозможным его применение при исследовании диких животных, а также исключает возможность длительного хранения проб биологического материала.The above methods suggest sampling of biological material - urine, for the diagnosis of leptospirosis in animals during natural urination directly on farms, which makes it impossible to use it in the study of wild animals, and also excludes the possibility of long-term storage of samples of biological material.
Возможно хранение отобранных проб при температуре не выше 16°С, для чего мочу переносят в пробирку и туда же вносят глицерин в пропорции 1/9 (глицерин/моча), тщательного перемешивают, замораживают и хранят (сайт научно-исследовательского центра биобезопасности и экологического контроля ресурсов АПК Днепропетровского государственного аграрного университета http: biosafety-center.dp.ua/viddil-imunohimichniy-molekulyarno-genetichniy-analiz/Bolezni/Leptospirosis.php).It is possible to store the samples at a temperature of no higher than 16 ° C, for which urine is transferred to a test tube and glycerol is added therein in a proportion of 1/9 (glycerin / urine), thoroughly mixed, frozen and stored (website of the Research Center for Biosafety and Environmental Control Resources of the Agro-Industrial Complex of the Dnipropetrovsk State Agrarian University http: biosafety-center.dp.ua/viddil-imunohimichniy-molekulyarno-genetichniy-analiz/Bolezni/Leptospirosis.php).
Данный способ также, как и вышеперечисленные, предполагает исследование проб, отобранных от животных непосредственно в хозяйствах, что ограничивает его широкое применение, в частности, для диагностики лептоспироза у диких животных, кроме того, ведет к удорожанию процесса лабораторных исследовании за сет применения глицерина.This method, as well as the above, involves the study of samples taken from animals directly on the farms, which limits its widespread use, in particular, for the diagnosis of leptospirosis in wild animals, in addition, leads to an increase in the cost of laboratory research for the set of glycerol use.
Известен способ определения стериодиных гормонов в фекалиях и моче, собранных со снегом для оценки стрессированности у диких грызунов (Л.А. Герлинская, М.П. Мошкин, В.И. Евсиков ж. Экология, 1993. №1, с. 97 и онлайн http: w-3/rfbr.ru/default.asp?doc_id-4762).There is a method of determining steroid hormones in feces and urine collected with snow to assess stress in wild rodents (L. A. Gerlinskaya, M. P. Moshkin, V. I. Evsikov J. Ecology, 1993. No. 1, p. 97 and online http: w - 3 / rfbr.ru / default.asp? doc_id-4762).
Однако данный способ не для диагностики инфекционных болезней, в частности лептоспироза диких млекопитающихHowever, this method is not for the diagnosis of infectious diseases, in particular leptospirosis of wild mammals.
Техническим результатом, достигаемым в результате решения поставленной задачи, является получение способа отбора биологического материала - мочи, замороженной в местах зимнего содержания для диагностики лептоспироза у диких животных.The technical result achieved by solving the problem is to obtain a method for the selection of biological material - urine, frozen in winter places for the diagnosis of leptospirosis in wild animals.
Поставленная задача достигается тем, что в предполагаемом способе отбор биологического материала - мочи производится в зимний период при наружной температуре воздуха минус 10-50°С в замороженном виде вместе со снегом.The problem is achieved in that in the proposed method, the selection of biological material - urine is carried out in the winter at an external air temperature of minus 10-50 ° C in frozen form along with snow.
Технический результат изобретения достигается следующим образом.The technical result of the invention is achieved as follows.
Отбор биологического материала для диагностики лептоспироза диких животных осуществляется в зимнее время при температуре наружного воздуха минус 10-50°С в местах зимнего пастбищного содержания диких животных в заповеднике или парковых зонах, в также в путях миграции устанавливают наблюдение за животными. В течение 1-12 часов после естественного мочеиспускания животного замерзшую мочу со снегом собирают в стерильную емкость и в замороженном виде направляют в лабораторию. В лаборатории биологический материал исследуют общепринятыми методами - микроскопией мочи или методом полимеразной цепной реакции. Кроме того, предлагаемый способ позволяет хранить отобранные пробы в течение 1-2 месяцев при температуре минус 20°С.The selection of biological material for the diagnosis of leptospirosis of wild animals is carried out in winter at an outside temperature of minus 10-50 ° C in places of winter grazing of wild animals in the reserve or park areas, and monitoring of animals is also established in the migration routes. Within 1-12 hours after the animal's natural urination, frozen urine with snow is collected in a sterile container and sent to the laboratory in frozen form. In the laboratory, biological material is examined by conventional methods - microscopy of urine or the method of polymerase chain reaction. In addition, the proposed method allows you to store selected samples for 1-2 months at a temperature of minus 20 ° C.
Заявляемый способ отбора биологического материала для диагностики лептоспироза у диких животных также может быть использован для исследования мочи лошадей табунного содержания.The inventive method of selecting biological material for the diagnosis of leptospirosis in wild animals can also be used to study urine of horses of herd content.
Животные-лептоспироносители выделяют лептоспир во внешнюю среду с мочой и инфицируют воду, корма, пастбища, почву, подстилку и другие объекты внешней среды, через которые заражаются здоровые животные. Водный путь передачи возбудителя инфекции основной. При этом лептоспиры весьма устойчивы к низким температурам, они остаются жизнеспособными после длительного замораживании во льду. При плюсовых температурах лептоспиры погибают.Leptospiraceous animals secrete leptospira into the external environment with urine and infect water, feed, pastures, soil, litter and other environmental objects through which healthy animals become infected. Waterway transmission of the main pathogen. Moreover, leptospira are very resistant to low temperatures, they remain viable after prolonged freezing in ice. At plus temperatures, leptospira die.
При температуре наружного воздуха минус 10-50°С моча животного замерзает в течение 1 часа, при этом лептоспиры, находящиеся в моче, остаются жизнеспособными и определяются при лабораторных исследованиях. Поскольку отбор биологического материала производится после естественного мочеиспускания животного, материал - замерзшую мочу отбирают в стерильную емкость со снегом. Пробы мочи отбирают при температурах минус 10°С, 20°С, 30°С, 40°С и 50°С (5-6 проб в каждом интервале температуры).At an outside temperature of minus 10-50 ° C, the animal’s urine freezes for 1 hour, while the leptospira in the urine remains viable and is determined by laboratory tests. Since the selection of biological material is carried out after the natural urination of the animal, material - frozen urine is taken into a sterile container with snow. Urine samples are taken at temperatures minus 10 ° C, 20 ° C, 30 ° C, 40 ° C and 50 ° C (5-6 samples in each temperature range).
Отобранный биологический материал в замороженном виде направляют для исследования в лабораторию.The selected biological material in frozen form is sent for research to the laboratory.
При температуре выше минус 10°С сбор замороженной мочи имеет определенные трудности. Так как при этом не формируется замороженный «комок», моча растекается на поверхности и в глубь снега. При взятии пробы снижается концентрация лептоспир. Следовательно, снижается достоверность диагностики.At temperatures above minus 10 ° C, collecting frozen urine has certain difficulties. Since this does not form a frozen “lump”, urine spreads on the surface and deep into the snow. When taking a sample, the concentration of leptospira decreases. Therefore, the reliability of the diagnosis is reduced.
Мочу можно исследовать непосредственно после оттаивания или после центрифугирования. Прозрачную мочу, не содержащую кристаллов, солей, хлопьев, спермиев и других посторонних частиц, центрифугируют при 10000-12000 об/мин в течение 30 минут, сливают надосадочную жидкость, осадок ресеспендируют в оставшейся капле мочи и микроскопируют. В моче больных и носителей возбудителя обнаруживают лептоспиры в пробах, собранных в любом интервале температуры. Мочу, содержащую значительное количество посторонних частиц, очищают центрифугированием при 3000 об/мин, в течение 10 минут, затем сливают надосадочную жидкость и центрифугируют ее для осаждения лептоспир при 10000-12000 об/мин в течение 30 минут.Urine can be examined immediately after thawing or after centrifugation. Transparent urine that does not contain crystals, salts, flakes, sperm and other foreign particles is centrifuged at 10,000-12,000 rpm for 30 minutes, the supernatant is drained, the sediment is resuspended in the remaining drop of urine and microscopic. In the urine of patients and carriers of the pathogen, leptospira is found in samples collected in any temperature range. Urine containing a significant amount of foreign particles is cleaned by centrifugation at 3000 rpm for 10 minutes, then the supernatant is drained and centrifuged to precipitate leptospira at 10000-12000 rpm for 30 minutes.
Дополнительно можно установить диагноз на лептоспироз исследованием мочи полимеразной цепной реакцией. Результат выявления болезни составляет 100% (лептоспироз).Additionally, you can establish a diagnosis of leptospirosis by a urine test by polymerase chain reaction. The result of the detection of the disease is 100% (leptospirosis).
Таким образом, заявленный способ отбора биологического материала - мочи, замороженной со снегом при минус 10-50°С в местах естественной среды обитания диких млекопитающих без их изъятия и отлова, позволяет провести оперативно диагностику лептоспироза и с наименьшими затратами, что обеспечивает своевременное проведение специальных профилактических мероприятий по выявлению больных и носителей лептоспир.Thus, the claimed method for the selection of biological material - urine frozen with snow at minus 10-50 ° C in places of the natural habitat of wild mammals without their removal and trapping, allows you to quickly diagnose leptospirosis and at the lowest cost, which ensures timely special preventive measures to identify patients and carriers of leptospira.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013150012/05A RU2540643C1 (en) | 2013-11-11 | 2013-11-11 | Method of taking of biological material for diagnostics of leptospirosis of wild animals |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013150012/05A RU2540643C1 (en) | 2013-11-11 | 2013-11-11 | Method of taking of biological material for diagnostics of leptospirosis of wild animals |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2540643C1 true RU2540643C1 (en) | 2015-02-10 |
Family
ID=53286911
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2013150012/05A RU2540643C1 (en) | 2013-11-11 | 2013-11-11 | Method of taking of biological material for diagnostics of leptospirosis of wild animals |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2540643C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2700478C1 (en) * | 2018-10-01 | 2019-09-17 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Кубанский государственный аграрный университет имени И.Т. Трубилина" | Method for detecting dna of leptospirosis (leptospira spp) causative agent in farm animals |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2161802C2 (en) * | 1999-03-30 | 2001-01-10 | Московское государственное предприятие - объединенный эколого-технологический и научно-исследовательский центр по обезвреживанию РАО и охране окружающей среды (МосНПО "Радон") | Method for applying radiation monitoring of ecological systems in the field of radioactive territory pollution indication concerning animals being objects of hunting with examination of hoof animal winter defecation (taking and preparing samples) |
| RU2363939C1 (en) * | 2007-12-29 | 2009-08-10 | Институт биологии Коми Научного центра Уральского отделения РАН | Method of detecting sulphate pollution of snow cover (versions) and device for taking snow samples with surface frost |
| FR2953858A1 (en) * | 2009-12-11 | 2011-06-17 | Envt Toulouse | Use of rpoB gene for in vitro diagnosis of a pathogenic strain of Leptospira in a biological sample, where the biological sample is blood, urine, cerebrospinal fluid, aqueous humor, serum, and organs such as the kidney |
-
2013
- 2013-11-11 RU RU2013150012/05A patent/RU2540643C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2161802C2 (en) * | 1999-03-30 | 2001-01-10 | Московское государственное предприятие - объединенный эколого-технологический и научно-исследовательский центр по обезвреживанию РАО и охране окружающей среды (МосНПО "Радон") | Method for applying radiation monitoring of ecological systems in the field of radioactive territory pollution indication concerning animals being objects of hunting with examination of hoof animal winter defecation (taking and preparing samples) |
| RU2363939C1 (en) * | 2007-12-29 | 2009-08-10 | Институт биологии Коми Научного центра Уральского отделения РАН | Method of detecting sulphate pollution of snow cover (versions) and device for taking snow samples with surface frost |
| FR2953858A1 (en) * | 2009-12-11 | 2011-06-17 | Envt Toulouse | Use of rpoB gene for in vitro diagnosis of a pathogenic strain of Leptospira in a biological sample, where the biological sample is blood, urine, cerebrospinal fluid, aqueous humor, serum, and organs such as the kidney |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ГОСТ 25386-91 «;Животные сельскохозяйственные. Методы лабораторной диагностики лептоспироза, Москва, 1992; Вестник РФФИ, «;Популярная физиология и этология млекопитающих и птиц в проектах РФФИ»; со ссылкой на грант 96-04-49931, Герлинская и др., 1993, а также Walner et al., 1999, и Harper, Austad, 2000; * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2700478C1 (en) * | 2018-10-01 | 2019-09-17 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Кубанский государственный аграрный университет имени И.Т. Трубилина" | Method for detecting dna of leptospirosis (leptospira spp) causative agent in farm animals |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Mendoza-Ibarra et al. | High prevalence of Tritrichomonas foetus infection in Asturiana de la Montaña beef cattle kept in extensive conditions in Northern Spain | |
| Sanhueza et al. | Contribution of Leptospira, Neospora caninum and bovine viral diarrhea virus to fetal loss of beef cattle in New Zealand | |
| Mohammed et al. | The use of FAMACHA in estimation of gastrointestinal nematodes and total worm burden in Damara and Barbados Blackbelly cross sheep | |
| Wolf et al. | Sampling location, herd size, and season influence Mycobacterium avium ssp. paratuberculosis environmental culture results | |
| Mgode et al. | Prevalence of leptospirosis and toxoplasmosis: A study of rodents and shrews in cultivated and fallow land, Morogoro rural district, Tanzania | |
| Falzon et al. | Pilot project to investigate over-wintering of free-living gastrointestinal nematode larvae of sheep in Ontario, Canada | |
| Wasee Ullah et al. | Detection of peste des petits ruminants viral RNA in fecal samples of goats after an outbreak in Punjab province of Pakistan: A longitudinal study | |
| RU2540643C1 (en) | Method of taking of biological material for diagnostics of leptospirosis of wild animals | |
| Sowemimo | Prevalence and intensity of Toxocara canis (Werner, 1782) in dogs and its potential public health significance in Ile-Ife, Nigeria | |
| Muwonge et al. | Prevalence and associated risk factors of mycobacterial infections in slaughter pigs from Mubende district in Uganda | |
| Arango-Sabogal et al. | Detection of Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis in tie-stall dairy herds using a standardized environmental sampling technique and targeted pooled samples | |
| Salisu et al. | Seroprevalence of Brucella antibodies in camels in Katsina State, Nigeria | |
| Tariq et al. | Feline lower urinary tract disease (FLUTD)–an emerging problem of recent era | |
| Gaglio et al. | Use of the FLOTAC technique for the diagnosis of Aelurostrongylus abstrusus in the cat | |
| Rine et al. | Evaluation of seed germination inhibition test for early detection of pregnancy in cross breed dairy cattle in Bangladesh | |
| Borkowski et al. | Correlation of salivary antibody to carbohydrate larval antigen (CarLA) with health and gastrointestinal nematode parasitism in sheep under Ontario grazing conditions | |
| Menamvar et al. | Seropositivity and associated risk factors for bovine leptospirosis in dairy farms | |
| Tan et al. | Detection of Schistosoma spindale ova and associated risk factors among Malaysian cattle through coprological survey | |
| Ranjan et al. | Rapid diagnosis of tuberculosis in dromedary camel (Camelus dromedarius) using lateral flow assay-based kit | |
| Lemecha et al. | Prevalence and distribution of camel trypanosomosis in the semi-arid and arid Awash Valley of Ethiopia | |
| Klawonn et al. | Johne's disease: reliability of environmental sampling to characterize Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis (MAP) infection in beef cow-calf herds | |
| Yabsley et al. | Filarial worm infections in shelter dogs and cats from northwestern South Carolina, USA | |
| Huțu et al. | Retrospective analysis on somatic cells count trend in Staphylococcus aureus cows' mastitis | |
| Sh et al. | METHODS OF DIAGNOSIS OF HELMINTHIASIS IN VETERINARY MEDICINE (ACCORDING TO LITERATURE ANALYSIS) | |
| Hendrick | Diagnosis, epidemiology and fecal shedding of Mycobacterium paratuberculosis in Ontario dairy cattle. |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20191112 |