RU2537165C1 - Microspectral method for assessing efficacy of pharmacotherapy accompanying early treatment of avian klebsiella with antibacterial preparations - Google Patents

Microspectral method for assessing efficacy of pharmacotherapy accompanying early treatment of avian klebsiella with antibacterial preparations Download PDF

Info

Publication number
RU2537165C1
RU2537165C1 RU2013109359/15A RU2013109359A RU2537165C1 RU 2537165 C1 RU2537165 C1 RU 2537165C1 RU 2013109359/15 A RU2013109359/15 A RU 2013109359/15A RU 2013109359 A RU2013109359 A RU 2013109359A RU 2537165 C1 RU2537165 C1 RU 2537165C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
nucleic acids
proteins
mucous membrane
bird
zone
Prior art date
Application number
RU2013109359/15A
Other languages
Russian (ru)
Other versions
RU2013109359A (en
Inventor
Сергей Владимирович Акчурин
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Саратовский государственный аграрный университет имени Н.И. Вавилова"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Саратовский государственный аграрный университет имени Н.И. Вавилова" filed Critical Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Саратовский государственный аграрный университет имени Н.И. Вавилова"
Priority to RU2013109359/15A priority Critical patent/RU2537165C1/en
Publication of RU2013109359A publication Critical patent/RU2013109359A/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2537165C1 publication Critical patent/RU2537165C1/en

Links

Images

Landscapes

  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

FIELD: medicine.
SUBSTANCE: invention refers to veterinary science and can be used for assessing the efficacy of pharmacotherapy for the first 7 days of treating avian Klebsiella with antibacterial preparations. A method of two-wave luminescent spectral analysis is used to study histological sections of avian fore-stomach tissue coloured with specific luminescent stain labels, dichlor-symm-triazinylaminofluorescein-1 and ethidium bromide. That is combined with studying the histological sections of the fore-stomach tissue of healthy and analysed birds. An epithelial area of deep alveolar glands of the mucous membrane is localised on each histological section, and five segments with the greatest luminescence intensity are selected in the above area. A luminescence spectrum and an optical density spectrum of each segment is derived They are digitally processed: luminescence intensity is recorded in the luminescence spectrum at a wave length of 528 nm specific for proteins and at a wave length of 624 nm specific for nucleic acids. Optical density is recorded in the optical density spectrum at a wave length of 648 nm, which is used as a photometric area thickness; then an amount of proteins is determined in each segment by formula B = I b D × E ,
Figure 00000015
 and an amount of nucleic acids is determined by formula N = I n D × E ,
Figure 00000016
 wherein B is the amount of proteins in standard units, in each of the five segments of the epithelium, Ib is the luminescence intensity of the analysed epithelium at a wave length of 528 nm, N is the amount of nucleic acids in standard units in each of the five segments of the epithelium, In is the luminescence intensity of the analysed area, D is the optical density of the photometric area; E is the luminescence intensity of uranium glass. An average amount of proteins and nucleic acids is calculated in standard units. Indicators of an intracellular metabolism of proteins and nucleic acids in the fore-stomach of the analysed bird are calculated. If the indicator of the intracellular metabolism of proteins is more than 0.95, and if the indicator of the intracellular metabolism of nucleic acids is more than 0.87, the low efficacy of the pharmacotherapy is stated. If the indicators of the intracellular metabolism of proteins are 0.95-0.25, and those of nucleic acids are 0.87-0.21, the moderate efficacy of the pharmacotherapy is stated. If the indicators of the intracellular metabolism of proteins are less than 0.25, and those of nucleic acids are less than 0.21, the high efficacy of the pharmacotherapy in the analysed bird is stated.
EFFECT: method enables providing the more accurate diagnosis of the intracellular metabolism of proteins and nucleic acids in the avian fore-stomach.
2 tbl, 2 dwg

Description

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для определения степени эффективности фармакотерапии в ранние сроки лечения клебсиеллеза птиц.The invention relates to the field of veterinary medicine and is intended to determine the degree of effectiveness of pharmacotherapy in the early stages of treatment of bird klebsiellosis.

Серьезную угрозу для птицеводческих хозяйств до настоящего времени представляет острая желудочно-кишечная форма клебсиеллеза, которая вызывает массовый падеж птиц и приводит к значительным экономическим потерям. Их гибель наступает, как правило, в ранние сроки заболевания несмотря на использование для его лечения широкого спектра антибактериальных средств, поскольку возбудители клебсиеллеза обладают высокой устойчивостью к большинству широко применяемых в ветеринарной практике лекарственных препаратов. Важным фактором, определяющим выбор необходимого лекарственного средства, является оценка эффективности фармакотерапии, сделанная на ранних этапах лечения заболевания. Поскольку возбудители клебсиеллеза воздействуют на клетки внутренних органов и в первую очередь железистого желудка, в них развиваются глубокие патологические метаболические процессы, сопровождающиеся нарушением внутриклеточного обмена органических веществ, в основном белков и нуклеиновых кислот. Данные органические вещества обеспечивают процессы организации функциональных механизмов защиты клеток от воздействия на них различных неблагоприятных факторов, включая и возбудителей клебсиеллеза, поэтому внутриклеточные изменения количественного содержания белков и нуклеиновых кислот, возникающие при лечении заболевания антибактериальными препаратами, служат одним из основных показателей эффективности фармакотерапии. Различные лекарственные препараты по-разному влияют на снижение патогенности возбудителей заболевания, что отражается на интенсивности восстановления внутриклеточного обмена органических веществ, в том числе количественного содержания в клетках белков и нуклеиновых кислот. При этом эффективность фармакотерапии определяется степенью внутриклеточных изменений количественного содержания данных органических веществ.A serious threat to poultry farms today is the acute gastrointestinal form of Klebsiellosis, which causes a massive mortality of birds and leads to significant economic losses. Their death occurs, as a rule, in the early stages of the disease despite the use of a wide range of antibacterial agents for its treatment, since the causative agents of Klebsiellosis are highly resistant to most drugs widely used in veterinary practice. An important factor determining the choice of the necessary drug is the evaluation of the effectiveness of pharmacotherapy made in the early stages of the treatment of the disease. Since the causative agents of Klebsiellosis affect the cells of internal organs and, first of all, the glandular stomach, deep pathological metabolic processes develop in them, accompanied by a violation of the intracellular metabolism of organic substances, mainly proteins and nucleic acids. These organic substances provide processes for organizing functional mechanisms for protecting cells from exposure to various adverse factors, including pathogens of Klebsiellosis, therefore, intracellular changes in the quantitative content of proteins and nucleic acids that occur in the treatment of diseases with antibacterial drugs are one of the main indicators of the effectiveness of pharmacotherapy. Different drugs have different effects on reducing the pathogenicity of pathogens, which affects the intensity of restoration of intracellular metabolism of organic substances, including the quantitative content of proteins and nucleic acids in cells. In this case, the effectiveness of pharmacotherapy is determined by the degree of intracellular changes in the quantitative content of these organic substances.

Известен способ оценки эффективности фармакотерапии антибактериальными препаратами, заключающийся в определении процента падежа голов птиц в разные периоды лечения клебсиеллеза (О.П. Ольховик. Клебсиеллез бройлеров. - Канд. дисс. вет. наук. - Краснодар, 2009, с.85, таблица 18).There is a method of evaluating the effectiveness of pharmacotherapy with antibacterial drugs, which consists in determining the percentage of mortality of bird heads at different periods of treatment of klebsiellosis (O.P. Olkhovik. Klebsiellosis of broilers. - Cand. Diss. Vet. Sciences. - Krasnodar, 2009, p. 85, table 18 )

Недостатком данного способа является невозможность оценки эффективности фармакотерапии антибактериальными препаратами в ранние сроки лечения данного заболевания, так как процент падежа голов птиц устанавливается не ранее, чем на 14-й день (1-й период) от начала лечения.The disadvantage of this method is the inability to assess the effectiveness of pharmacotherapy with antibacterial drugs in the early stages of treatment of this disease, since the percentage of deaths of bird heads is established no earlier than on the 14th day (1st period) from the start of treatment.

Прототипом предлагаемого изобретения является способ оценки состояния внутриклеточного обмена органических веществ методом люминесцентного спектрального анализа с помощью определения соотношения белков и нуклеиновых кислот в гистологических срезах биологических объектов (В.Н. Карнаухов. Люминесцентный спектральный анализ клетки. М.: Наука, теоретическая и прикладная биофизика. - 1978, с.93-97). Способ включает двухволновый метод люминесцентного спектрального анализа клеток головного мозга крысы при изучении гистологических срезов, окрашенных специфическими люминесцентными метками-красителями дихлор-симм-триазиниламинофлуоресцеином-1 и этидиумом бромида, с регистрацией в спектре люминесценции двух полос излучения при длинах волн 527 и 610 нм, характерных для белков и нуклеиновых кислот соответственно.The prototype of the invention is a method for assessing the state of intracellular metabolism of organic substances by luminescence spectral analysis by determining the ratio of proteins and nucleic acids in histological sections of biological objects (V.N. Karnaukhov. Luminescent spectral analysis of cells. M .: Science, theoretical and applied biophysics. - 1978, p. 93-97). The method includes a two-wavelength method for luminescent spectral analysis of rat brain cells in the study of histological sections stained with specific luminescent dye-dichloro-sim-triazinylaminofluorescein-1 dyes and bromide ethidium, with the registration of two emission bands in the luminescence spectrum at wavelengths 527 and 6 of 6 and 10 for proteins and nucleic acids, respectively.

Недостатком такого способа является невозможность определения состояния внутриклеточного обмена органических веществ в железистом желудке птиц с оценкой эффективности фармакотерапии в ранние сроки антибактериального лечения клебсиеллеза, так как способ-прототипThe disadvantage of this method is the inability to determine the state of intracellular metabolism of organic substances in the glandular stomach of birds with an assessment of the effectiveness of pharmacotherapy in the early stages of the antibacterial treatment of Klebsiella, since the prototype method

- устанавливает в спектре люминесценции полосы излучения при длинах волн 527 и 610 нм, характерных для белков и нуклеиновых кислот ткани головного мозга крысы, но не отражает спектральные особенности люминесценции ткани железистого желудка птиц;- sets the emission bands in the luminescence spectrum at wavelengths of 527 and 610 nm, characteristic of proteins and nucleic acids of rat brain tissue, but does not reflect the spectral features of luminescence of glandular stomach tissue of birds;

- не позволяет определять количественное содержание органических веществ (белков и нуклеиновых кислот) в ткани железистого желудка птиц;- does not allow to determine the quantitative content of organic substances (proteins and nucleic acids) in the tissue of the glandular stomach of birds;

- не исключает влияния индивидуальных особенностей функционального состояния клеток, присущих биологическим объектам, в том числе железистому желудку, и заключающихся в неравнозначном содержании в них белков и нуклеиновых кислот на разных участках определенных структур.- does not exclude the influence of individual characteristics of the functional state of cells inherent in biological objects, including the glandular stomach, and consisting in the unequal content of proteins and nucleic acids in them in different parts of certain structures.

Техническим результатом изобретения является повышение точности диагностики состояния внутриклеточного обмена органических веществ (белков и нуклеиновых кислот) в железистом желудке птиц, позволяющего оценивать эффективность фармакотерапии клебсиеллеза в ранние сроки лечения антибактериальными препаратами, посредством учета спектральных особенностей люминесценции исследуемой ткани, определения количественного содержания в ней белков и нуклеиновых кислот и исключения влияния индивидуальных особенностей функционального состояния ее клеток.The technical result of the invention is to improve the accuracy of diagnosis of the state of intracellular metabolism of organic substances (proteins and nucleic acids) in the glandular stomach of birds, which allows to evaluate the effectiveness of pharmacotherapy of Klebsiella in the early treatment with antibacterial drugs, by taking into account the spectral features of the luminescence of the test tissue, determining the quantitative content of proteins and nucleic acids and eliminating the influence of individual characteristics of the functional state niya of its cells.

Технический результат достигается тем, что микроспектральный способ оценки эффективности фармакотерапии в первые 7 суток лечения клебсиеллеза птиц антибактериальными препаратами включает двухволновый метод люминесцентного спектрального анализа при изучении гистологических срезов, окрашенных специфическими люминесцентными метками-красителями дихлор-симм-триазиниламинофлуоресцеином-1 и этидиумом бромида, в котором согласно изобретению проводят исследование гистологических срезов ткани железистого желудка контрольной здоровой птицы и обследуемой птицы, на каждом гистологическом срезе с помощью визуальной микроскопии определяют зону эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки, в которой выделяют пять участков с наибольшей степенью интенсивности люминесценции, с каждого участка получают спектр люминесценции и спектр оптической плотности и проводят их цифровую обработку: в спектре люминесценции регистрируют величину интенсивности люминесценции полосы излучения при длине волны, характерной для белков зоны эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки и равной 528 нм, и при длине волны, характерной для нуклеиновых кислот зоны эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки и равной 624 нм, в спектре оптической плотности регистрируют величину оптической плотности при длине волны 648 нм, которую используют в качестве толщины фотометрируемого участка, затем в каждом участке определяют количество белков по формуле B = I b D × Э

Figure 00000001
и нуклеиновых кислот по формуле N = I n D × Э
Figure 00000002
 , где B - количество белков в условных единицах в каждом из пяти участков зоны эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки, Ib - величина интенсивности люминесценции исследуемого участка зоны эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки при длине волны 528 нм, N - количество нуклеиновых кислот в условных единицах в каждом из пяти участков зоны эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки, In - величина интенсивности люминесценции исследуемого участка зоны эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки при длине волны 624 нм, D - величина оптической плотности фотометрируемого участка при длине волны 648 нм, используемая в качестве его толщины; Э - величина интенсивности люминесценции уранового стекла ЖС-19 толщиной ~1,5 мм при длине волны 548 нм, затем вычисляют среднее значение количества белков и нуклеиновых кислот в условных единицах из пяти полученных по каждому из них результату, по которым, в свою очередь, рассчитывают показатель состояния внутриклеточного обмена белков в железистом желудке обследуемой птицы путем вычитания из среднего значения количества белков в условных единицах контрольной здоровой птицы среднего значения количества белков в условных единицах обследуемой птицы, а также рассчитывают показатель состояния внутриклеточного обмена нуклеиновых кислот в железистом желудке обследуемой птицы путем вычитания из среднего значения количества нуклеиновых кислот в условных единицах контрольной здоровой птицы среднего значения количества нуклеиновых кислот в условных единицах обследуемой птицы и при значениях показателя состояния внутриклеточного обмена белков более 0,95 и показателя состояния внутриклеточного обмена нуклеиновых кислот более 0,87 устанавливают низкую эффективность фармакотерапии обследуемой птицы, при значениях показателя состояния внутриклеточного обмена белков 0,95-0,25 и показателя состояния внутриклеточного обмена нуклеиновых кислот 0,87-0,21 - среднюю эффективность фармакотерапии обследуемой птицы, а при значениях показателя состояния внутриклеточного обмена белков менее 0,25 и показателя состояния внутриклеточного обмена нуклеиновых кислот менее 0,21 - высокую эффективность фармакотерапии обследуемой птицы.The technical result is achieved by the fact that the microspectral method for evaluating the effectiveness of pharmacotherapy in the first 7 days of treating bird klebsiellosis with antibacterial drugs includes a two-wavelength method of luminescent spectral analysis in the study of histological sections stained with specific luminescent dye dichloro-sim-triazinylaminofluorescein-1 and ethidium dyes according to the invention conduct a study of histological sections of the tissue of the glandular stomach control healthy in each histological section using visual microscopy, determine the zone of epithelium of the deep alveolar glands of the mucous membrane, in which five sections with the highest degree of luminescence intensity are distinguished, from each section a luminescence spectrum and an optical density spectrum are obtained and digitally processed: the luminescence spectrum register the magnitude of the luminescence intensity of the emission band at a wavelength characteristic of the proteins of the epithelial zone of the deep alveolar glands with cystic membrane and equal to 528 nm, and at a wavelength characteristic of nucleic acids of the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane and equal to 624 nm, the optical density at the wavelength of 648 nm, which is used as the thickness of the photometer section, is recorded in the spectrum of optical density then, in each plot, the amount of proteins is determined by the formula B = I b D × E
Figure 00000001
 and nucleic acids according to the formula N = I n D × E
Figure 00000002
 where B is the number of proteins in arbitrary units in each of the five sections of the epithelium zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane, I b is the luminescence intensity of the studied section of the epithelium zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane at a wavelength of 528 nm, N is the number of nucleic acids in the conditional units in each of the five sections of the epithelium zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane, I n is the magnitude of the luminescence intensity of the studied section of the epithelium zone of the deep alveolar glands of the mucosa pads at a wavelength of 624 nm, D is the optical density of the photometric region at a wavelength of 648 nm, used as its thickness; E is the magnitude of the luminescence intensity of ZhS-19 uranium glass with a thickness of ~ 1.5 mm at a wavelength of 548 nm, then the average value of the number of proteins and nucleic acids is calculated in arbitrary units from the five results obtained for each of them, which, in turn, calculate the indicator of the state of intracellular protein metabolism in the glandular stomach of the examined bird by subtracting from the average value of the amount of protein in arbitrary units of the control healthy bird the average value of the amount of protein in arbitrary units of the survey my bird, and also calculate the indicator of the state of intracellular exchange of nucleic acids in the glandular stomach of the test bird by subtracting from the average value of the number of nucleic acids in arbitrary units of the control healthy bird the average value of the number of nucleic acids in the standard units of the examined bird and with values of the indicator of the state of intracellular protein metabolism more 0.95 and an indicator of the state of intracellular exchange of nucleic acids more than 0.87 establish a low efficiency of pharmacothe rapii of the examined bird, with the values of the indicator of the state of intracellular protein metabolism 0.95-0.25 and the indicator of the state of intracellular metabolism of nucleic acids 0.87-0.21 - the average efficiency of pharmacotherapy of the examined bird, and with the values of the indicator of the state of intracellular protein metabolism less than 0, 25 and an indicator of the state of intracellular exchange of nucleic acids less than 0.21 - the high efficiency of pharmacotherapy of the examined bird.

Технический результат достигается тем, что среднее значение количества белков в условных единицах в зоне эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки рассчитывают по формуле:The technical result is achieved by the fact that the average value of the number of proteins in arbitrary units in the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane is calculated by the formula:

Figure 00000003
;
Figure 00000003
;

где Bc - среднее значение количества белков в условных единицах в зоне эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки;where B c is the average value of the number of proteins in arbitrary units in the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane;

Bn - общее количество белков в условных единицах всех фотометрируемых участков зоны эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки;B n - the total number of proteins in arbitrary units of all photometric sections of the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane;

n - количество фотометрируемых участков зоны эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки.n is the number of photometric sections of the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane.

Технический результат достигается тем, что среднее значение количества нуклеиновых кислот в условных единицах в зоне эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки рассчитывают по формуле:The technical result is achieved by the fact that the average value of the number of nucleic acids in arbitrary units in the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane is calculated by the formula:

Figure 00000004
;
Figure 00000004
;

где Nc - среднее значение количества нуклеиновых кислот в условных единицах в зоне эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки;where N c is the average value of the number of nucleic acids in arbitrary units in the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane;

Nn - общее количество нуклеиновых кислот в условных единицах всех фотометрируемых участков зоны эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки;N n is the total number of nucleic acids in arbitrary units of all photometric sections of the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane;

n - количество фотометрируемых участков зоны эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки.n is the number of photometric sections of the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane.

Технический результат достигается тем, что показатель состояния внутриклеточного обмена белков в железистом желудке обследуемой птицы рассчитывают по формуле:The technical result is achieved by the fact that the indicator of the state of intracellular protein metabolism in the glandular stomach of the examined bird is calculated by the formula:

Kb=Bc-Bzc;K b = B c -B zc ;

где Kb - показатель состояния внутриклеточного обмена белков в железистом желудке обследуемой птицы;where K b is an indicator of the state of intracellular protein metabolism in the glandular stomach of the examined bird;

Bc - среднее значение количества белков в условных единицах в зоне эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки железистого желудка контрольной здоровой птицы;B c - the average value of the number of proteins in arbitrary units in the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane of the glandular stomach of a control healthy bird;

Bzc - среднее значение количества белков в условных единицах в зоне эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки железистого желудка обследуемой птицы.B zc is the average value of the amount of proteins in arbitrary units in the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane of the glandular stomach of the examined bird.

Технический результат достигается тем, что показатель состояния внутриклеточного обмена нуклеиновых кислот в железистом желудке обследуемой птицы рассчитывают по формуле:The technical result is achieved by the fact that the indicator of the state of intracellular exchange of nucleic acids in the glandular stomach of the examined bird is calculated by the formula:

Kn=Nc-Nzc K n = N c -N zc

где Kn - показатель состояния внутриклеточного обмена нуклеиновых кислот в железистом желудке обследуемой птицы;where K n is an indicator of the state of intracellular exchange of nucleic acids in the glandular stomach of the examined bird;

Nc - среднее значение количества нуклеиновых кислот в условных единицах в зоне эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки железистого желудка контрольной здоровой птицы;N c is the average value of the number of nucleic acids in arbitrary units in the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane of the glandular stomach of a control healthy bird;

Nzc - среднее значение количества нуклеиновых кислот в условных единицах в зоне эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки железистого желудка обследуемой птицы.N zc is the average value of the number of nucleic acids in arbitrary units in the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane of the glandular stomach of the examined bird.

На фигуре 1 показана кривая спектра люминесценции зоны эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки гистологического среза, изготовленного из ткани железистого желудка контрольной здоровой птицы и окрашенного специфическими люминесцентными метками-красителями дихлор-симм-триазиниламинофлуоресцеином-1 и этидиумом бромида, где I - величина интенсивности люминесценции, Ib - величина интенсивности люминесценции исследуемого участка зоны эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки, отражающая количество белков, In - величина интенсивности люминесценции исследуемого участка зоны эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки, отражающая количество нуклеиновых кислот. На фигуре 2 показана кривая спектра люминесценции зоны эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки гистологического среза, изготовленного из ткани железистого желудка обследуемой птицы и окрашенного специфическими люминесцентными метками-красителями дихлор-симм-триазиниламинофлуоресцеином-1 и этидиумом бромида, где I - величина интенсивности люминесценции, Izb - величина интенсивности люминесценции исследуемого участка зоны эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки, отражающая количество белков, Izn - величина интенсивности люминесценции исследуемого участка зоны эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки, отражающая количество нуклеиновых кислот.The figure 1 shows a curve of the luminescence spectrum of the epithelium zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane of the histological section, made from the glandular stomach tissue of a control healthy bird and stained with specific luminescent dye-dichloro-triazinylaminofluorescein-1 dyes and luminescence ethidium, where I is the intensity, I b - the magnitude of the luminescence intensity of the studied area of the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane, reflecting the amount of proteins, I n is the magnitude of the luminescence intensity of the studied area of the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane, reflecting the number of nucleic acids. The figure 2 shows a curve of the luminescence spectrum of the epithelium zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane of the histological section, made from the glandular stomach tissue of the examined bird and stained with specific luminescent dye dichloro-symm-triazinylaminofluorescein-1 and ethidium bromide dyes, where I is the intensity luminescence, where I is the intensity zb is the magnitude of the luminescence intensity of the studied area of the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane, reflecting the amount of proteins, I zn is the magnitude at the luminescence intensity of the studied area of the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane, reflecting the number of nucleic acids.

Способ осуществляют следующим образом. Для оценки состояния внутриклеточного обмена органических веществ в железистом желудке обследуемой птицы, которое позволяет судить об эффективности фармакотерапии в ранние сроки (в первые пять суток) лечения клебсиеллеза антибактериальными препаратами, следует установить средние значения количества белков и нуклеиновых кислот в условных единицах в зоне эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки в гистологическом срезе железистого желудка контрольной здоровой птицы соответствующей породы и возрастной категории; полученные при этом результаты используют в дальнейшей работе. Для этого в гистологическом срезе железистого желудка контрольной здоровой птицы, окрашенном специфическими люминесцентными метками-красителями дихлор-симм-триазиниламинофлуоресцеином-1 и этидиумом бромида, определяют зону эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки при помощи, например, микроскопа-спектрофотометра МСФУ-К, в которой методом визуальной микроскопии находят пять участков с наибольшей степенью интенсивности люминесценции. В каждом участке зоны эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки получают спектр люминесценции и спектр оптической плотности и проводят их цифровую обработку. Концентрация (количество) каждого из двух органических веществ, изучаемых с помощью двухволнового метода люминесцентного спектрального анализа, определяется величинами интенсивности люминесценции (I) каждой полосы излучения в спектре люминесценции гистологического среза, окрашенного двумя специфическими люминесцентными метками-красителями, при длинах волн, соответствующих максимальным величинам интенсивности люминесценции примененных красителей. При использовании в качестве меток-красителей дихлор-симм-триазиниламинофлуоресцеина-1, количественно связывающегося с белком, и этидиума бромида, количественно связывающегося с нуклеиновыми кислотами, в спектре люминесценции определяют две полосы излучения, которые соответствуют концентрации (количеству) белков и нуклеиновых кислот в исследуемом объекте. При окрашивании гистологических срезов железистого желудка птиц метками-красителями дихлор-симм-триазиниламинофлуоресцеином-1 и этидиумом бромида в спектре люминесценции зоны эпителия глубоких альвеолярных желез его слизистой оболочки максимальные величины интенсивности люминесценции регистрируются при длинах волн - 528 нм, которая соответствует концентрации белков, и 624 нм, которая соответствует концентрации нуклеиновых кислот. Поэтому количество белков и нуклеиновых кислот определяют по величине интенсивности люминесценции полос излучения при указанных длинах волн. Данные спектральные особенности люминесценции ткани железистого желудка птиц установлены автором изобретения при исследовании спектров люминесценции зоны эпителия глубоких альвеолярных желез его слизистой оболочки. Вместе с тем величина интенсивности люминесценции зависит не только от количества содержащихся в исследуемом участке органических веществ, но и от толщины фотометрируемого участка гистологического среза, которая является неравномерной, и от параметров режима работы, при котором регистрируют спектры люминесценции. Поэтому для получения сопоставимых результатов количественного содержания белков и нуклеиновых кислот оно должно быть выражено в условных единицах, что достигается с помощью учета толщины фотометрируемого участка и эталона. В качестве толщины фотометрируемого участка используют величину оптической плотности, которая находится в прямой пропорциональной зависимости от толщины поглощающего слоя, при длине волны, равной 648 нм. Данная длина волны установлена автором изобретения при исследовании спектров оптической плотности фотометрируемых участков зоны эпителия глубоких альвеолярных желез. В качестве эталона используют величину интенсивности люминесценции при длине волны 548 нм промышленно изготавливаемого и имеющего постоянный спектр люминесценции уранового стекла ЖС-19 толщиной ~1,5 мм.The method is as follows. To assess the state of intracellular metabolism of organic substances in the glandular stomach of the examined bird, which allows us to judge the effectiveness of pharmacotherapy in the early stages (in the first five days) of antibiotic treatment of Klebsiellosis, average values of the amount of proteins and nucleic acids in arbitrary units in the zone of deep alveolar epithelium should be established glands of the mucous membrane in the histological section of the glandular stomach of a control healthy bird of the corresponding breed and age category; The results obtained in this case are used in further work. For this, in the histological section of the glandular stomach of a control healthy bird stained with specific luminescent dye dichloro-sym-triazinylaminofluorescein-1 dyes and bromide ethidium, the epithelium zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane is determined using, for example, an MSFU-K microscope spectrophotometer five sections with the highest degree of luminescence intensity are found by visual microscopy. In each section of the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane, a luminescence spectrum and an optical density spectrum are obtained and digitally processed. The concentration (quantity) of each of the two organic substances studied using the two-wavelength method of luminescence spectral analysis is determined by the luminescence intensity (I) of each emission band in the luminescence spectrum of a histological section stained with two specific luminescent dye labels at wavelengths corresponding to the maximum values luminescence intensities of the applied dyes. When dichloro-sym-triazinylaminofluorescein-1, which quantitatively binds to a protein, and ethidium bromide, which binds quantitatively to nucleic acids, are used as dye labels, two emission bands are determined in the luminescence spectrum that correspond to the concentration (amount) of proteins and nucleic acids in the studied object. When staining histological sections of the glandular stomach of birds with dye-dichloro-sym-triazinylaminofluorescein-1 dyes and bromide ethidium in the luminescence spectrum of the epithelium zone of the deep alveolar glands of its mucous membrane, maximum luminescence intensities are recorded at wavelengths of 528 nm, which corresponds to a protein concentration of 6, and 6, and 6 nm, which corresponds to the concentration of nucleic acids. Therefore, the amount of proteins and nucleic acids is determined by the magnitude of the luminescence intensity of the emission bands at the indicated wavelengths. These spectral features of the luminescence of the glandular stomach tissue of birds were established by the author of the invention when studying the luminescence spectra of the epithelial zone of the deep alveolar glands of its mucous membrane. At the same time, the magnitude of the luminescence intensity depends not only on the amount of organic substances contained in the studied area, but also on the thickness of the photometric section of the histological section, which is uneven, and on the parameters of the operating mode at which the luminescence spectra are recorded. Therefore, to obtain comparable results of the quantitative content of proteins and nucleic acids, it should be expressed in arbitrary units, which is achieved by taking into account the thickness of the photometric portion and the standard. As the thickness of the photometric section, the optical density is used, which is in direct proportion to the thickness of the absorbing layer, at a wavelength of 648 nm. This wavelength was established by the author of the invention in the study of the optical density spectra of photometric sections of the epithelial zone of deep alveolar glands. As a reference, the magnitude of the luminescence intensity at a wavelength of 548 nm is industrially manufactured and having a constant luminescence spectrum of ZhS-19 uranium glass with a thickness of ~ 1.5 mm.

Количество белков в условных единицах в каждом из пяти участков зоны эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки рассчитывают по формуле:The amount of proteins in arbitrary units in each of the five sections of the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane is calculated by the formula:

Figure 00000005
;
Figure 00000005
;

где B - количество белков в условных единицах в каждом из пяти участков зоны эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки;where B is the number of proteins in arbitrary units in each of the five sections of the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane;

Ib - величина интенсивности люминесценции исследуемого участка зоны эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки при длине волны 528 нм;I b - the magnitude of the luminescence intensity of the investigated area of the epithelium of the deep alveolar glands of the mucous membrane at a wavelength of 528 nm;

D - величина оптической плотности фотометрируемого участка при длине волны 648 нм, используемая в качестве его толщины;D is the optical density of the photometric region at a wavelength of 648 nm, used as its thickness;

Э - величина интенсивности люминесценции уранового стекла ЖС-19 толщиной ~1,5 мм при длине волны 548 нм, используемая в качестве эталона.E is the luminescence intensity of ZhS-19 uranium glass with a thickness of ~ 1.5 mm at a wavelength of 548 nm, used as a reference.

Количество нуклеиновых кислот в условных единицах в каждом из пяти участков зоны эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки рассчитывают по формуле:The number of nucleic acids in arbitrary units in each of the five sections of the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane is calculated by the formula:

Figure 00000006
;
Figure 00000006
;

где N - количество нуклеиновых кислот в условных единицах в каждом из пяти участков зоны эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки;where N is the number of nucleic acids in arbitrary units in each of the five sections of the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane;

In - величина интенсивности люминесценции исследуемого участка зоны эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки при длине волны 624 нм;I n is the magnitude of the luminescence intensity of the studied area of the epithelium of the deep alveolar glands of the mucous membrane at a wavelength of 624 nm;

D - величина оптической плотности фотометрируемого участка при длине волны 648 нм, используемая в качестве его толщины;D is the optical density of the photometric region at a wavelength of 648 nm, used as its thickness;

Э - величина интенсивности люминесценции уранового стекла ЖС-19 толщиной ~1,5 мм при длине волны 548 нм, используемая в качестве эталона.E is the luminescence intensity of ZhS-19 uranium glass with a thickness of ~ 1.5 mm at a wavelength of 548 nm, used as a reference.

Учитывая, что биологические объекты имеют индивидуальные особенности функционального состояния клеток, расположенных на разных участках определенных структурных зон, обусловленного неравнозначным количественным содержанием в них органических веществ, для получения объективной картины необходимо определение среднего значения нескольких показателей содержания органических веществ, полученных с различных участков зоны определенной структуры при прочих равных условиях. Поэтому для исключения влияния индивидуальных особенностей функционального состояния клеток на объективное отражение количественного содержания белков и нуклеиновых кислот в зоне эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки принимают во внимание среднее значение от общего количества данных органических веществ из пяти полученных результатов. В связи с этим среднее значение количества белков в условных единицах в зоне эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки рассчитывают по формуле:Given that biological objects have individual characteristics of the functional state of cells located in different parts of certain structural zones, due to unequal quantitative content of organic substances in them, to obtain an objective picture, it is necessary to determine the average value of several indicators of the content of organic substances obtained from different parts of the zone of a certain structure ceteris paribus. Therefore, to exclude the influence of individual characteristics of the functional state of cells on the objective reflection of the quantitative content of proteins and nucleic acids in the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane, the average value of the total number of these organic substances from the five results is taken into account. In this regard, the average value of the number of proteins in arbitrary units in the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane is calculated by the formula:

Figure 00000007
;
Figure 00000007
;

где Bc - среднее значение количества белков в условных единицах в зоне эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки;where B c is the average value of the number of proteins in arbitrary units in the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane;

Bn - общее количество белков в условных единицах всех фотометрируемых участков зоны эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки;B n - the total number of proteins in arbitrary units of all photometric sections of the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane;

n - количество фотометрируемых участков зоны эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки.n is the number of photometric sections of the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane.

Среднее значение количества нуклеиновых кислот в условных единицах в зоне эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки рассчитывают по формуле:The average number of nucleic acids in arbitrary units in the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane is calculated by the formula:

Figure 00000008
,
Figure 00000008
,

где Nc - среднее значение количества нуклеиновых кислот в условных единицах в зоне эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки;where N c is the average value of the number of nucleic acids in arbitrary units in the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane;

Nn - общее количество нуклеиновых кислот в условных единицах всех фотометрируемых участков зоны эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки;N n is the total number of nucleic acids in arbitrary units of all photometric sections of the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane;

n - количество фотометрируемых участков зоны эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки.n is the number of photometric sections of the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane.

Полученные средние значения количества белков и нуклеиновых кислот в условных единицах зоны эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки железистого желудка контрольной здоровой птицы используют для получения показателей состояния внутриклеточного обмена белков и нуклеиновых кислот и оценки эффективности фармакотерапии обследуемой птицы.The obtained average values of the amount of proteins and nucleic acids in arbitrary units of the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane of the glandular stomach of a control healthy bird are used to obtain indicators of the state of intracellular exchange of proteins and nucleic acids and evaluate the effectiveness of pharmacotherapy of the examined bird.

Аналогичным способом с гистологического среза ткани железистого желудка обследуемой птицы, окрашенного специфическими люминесцентными метками-красителями дихлор-симм-триазиниламинофлуоресцеинм-1 и этидиумом бромида, получают спектр люминесценции и спектр оптической плотности в каждом из пяти участков зоны эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки и проводят их цифровую обработку следующим образом.In a similar way, from a histological section of the tissue of the glandular stomach of the examined bird stained with specific luminescent dye dichloro-sym-triazinylaminofluoresceinm-1 dyes and ethidium bromide, a luminescence spectrum is obtained and the optical density spectrum in each of the five sections of the epithelium zone of the deep alveolar glands of their mucous membrane digital processing as follows.

На спектре оптической плотности устанавливают величину Dz при длине волны 648 нм («Dz» подставляют в формулу вместо «D»).On the spectrum of optical density set the value of D z at a wavelength of 648 nm ("D z " is substituted in the formula instead of "D").

Рассчитывают количество белков в условных единицах в каждом из пяти участков зоны эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки, каждое из которых устанавливают по формуле B = I b D × Э

Figure 00000009
(где «Bz» подставляют в формулу вместо «B», «Izb» - вместо «Ib», «Dz» - вместо «D», «Эz» - вместо «Э») при помощи следующих величин:Calculate the number of proteins in arbitrary units in each of the five sections of the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane, each of which is established by the formula B = I b D × E
Figure 00000009
 (where “B z ” is substituted into the formula instead of “B”, “I zb ” - instead of “I b ”, “D z ” - instead of “D”, “E z ” - instead of “E”) using the following values:

Bz - количество белков в условных единицах в каждом из пяти участков зоны эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки;B z - the number of proteins in arbitrary units in each of the five sections of the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane;

Izb - величина интенсивности люминесценции исследуемого участка зоны эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки при длине волны 528 нм;I zb is the magnitude of the luminescence intensity of the investigated area of the epithelium of the deep alveolar glands of the mucous membrane at a wavelength of 528 nm;

Dz - величина оптической плотности фотометрируемого участка при длине волны 648 нм, используемая в качестве его толщины;D z - the optical density of the photometric plot at a wavelength of 648 nm, used as its thickness;

Эz - величина интенсивности люминесценции уранового стекла ЖС-19 толщиной ~1,5 мм при длине волны 548 нм, используемая в качестве эталона.Э z is the luminescence intensity of ZhS-19 uranium glass with a thickness of ~ 1.5 mm at a wavelength of 548 nm, used as a reference.

Устанавливают среднее значение количества белков в условных единицах в зоне эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки по формуле

Figure 00000007
(где «Bzc» подставляют в формулу вместо «Bc», «Bzn» - вместо «Bn») при помощи следующих величин:Set the average value of the number of proteins in arbitrary units in the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane according to the formula
Figure 00000007
(where “B zc ” is substituted into the formula instead of “B c ”, “B zn ” - instead of “B n ”) using the following values:

Bzc - среднее значение количества белков в условных единицах в зоне эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки;B zc is the average value of the amount of proteins in arbitrary units in the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane;

Bzn - общее количество белков в условных единицах всех фотометрируемых участков зоны эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки;B zn is the total number of proteins in arbitrary units of all photometric sections of the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane;

n - количество фотометрируемых участков зоны эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки.n is the number of photometric sections of the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane.

Рассчитывают количество нуклеиновых кислот в условных единицах в каждом из пяти участков зоны эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки, каждое из которых устанавливают по формуле

Figure 00000006
при помощи следующих величин (где «Nz» подставляют в формулу вместо «N», «Izn» - вместо «In», «Dz» - вместо «D», «Эz» - вместо «Э»):Calculate the number of nucleic acids in arbitrary units in each of the five sections of the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane, each of which is established by the formula
Figure 00000006
using the following values (where “N z ” is substituted into the formula instead of “N”, “I zn ” is replaced by “I n ”, “D z ” is replaced by “D”, and “E z ” is replaced by “E”):

Nz - количество нуклеиновых кислот в условных единицах в каждом из пяти участков зоны эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки;N z - the number of nucleic acids in arbitrary units in each of the five sections of the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane;

In - величина интенсивности люминесценции исследуемого участка зоны эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки при длине волны 624 нм;I n is the magnitude of the luminescence intensity of the studied area of the epithelium of the deep alveolar glands of the mucous membrane at a wavelength of 624 nm;

Dz - величина оптической плотности фотометрируемого участка при длине волны 648 нм, используемая в качестве его толщины;D z - the optical density of the photometric plot at a wavelength of 648 nm, used as its thickness;

Эz - величина интенсивности люминесценции уранового стекла ЖС-19 толщиной ~1,5 мм при длине волны 548 нм, используемая в качестве эталона.Э z is the luminescence intensity of ZhS-19 uranium glass with a thickness of ~ 1.5 mm at a wavelength of 548 nm, used as a reference.

Устанавливают среднее значение количества нуклеиновых кислот в условных единицах в зоне эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки по формуле

Figure 00000008
при помощи следующих величин (где «Nzc» подставляют в формулу вместо «Nc», «Nzn» - вместо «Nn»):Set the average value of the number of nucleic acids in arbitrary units in the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane according to the formula
Figure 00000008
using the following values (where “N zc ” is substituted into the formula instead of “N c ”, “N zn ” is replaced by “N n ”):

где Nzc - среднее значение количества нуклеиновых кислот в условных единицах в зоне эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки;where N zc is the average number of nucleic acids in arbitrary units in the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane;

Nzn - общее количество нуклеиновых кислот в условных единицах всех фотометрируемых участков зоны эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки;N zn is the total number of nucleic acids in arbitrary units of all photometric sections of the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane;

n - количество фотометрируемых участков зоны эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки.n is the number of photometric sections of the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane.

Определяют показатель показатель состояния внутриклеточного обмена белков в железистом желудке обследуемой птицы по формуле Kb=Bc-Bz при помощи следующих величин:The indicator is determined by the indicator of the state of intracellular protein metabolism in the glandular stomach of the examined bird according to the formula K b = B c -B z using the following values:

Kb - показатель степени нарушения внутриклеточного обмена белков в железистом желудке обследуемой птицы;K b is an indicator of the degree of violation of intracellular protein metabolism in the glandular stomach of the examined bird;

Bc - среднее значение количества белков в условных единицах в зоне эпителии глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки железистого желудка контрольной здоровой птицы;B c is the average value of the amount of proteins in arbitrary units in the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane of the glandular stomach of a control healthy bird;

Bzc - среднее значение количества белков в условных единицах в эпителии глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки железистого желудка обследуемой птицы.B zc is the average value of the amount of proteins in arbitrary units in the epithelium of the deep alveolar glands of the mucous membrane of the glandular stomach of the examined bird.

Определяют показатель состояния внутриклеточного обмена нуклеиновых кислот в железистом желудке обследуемой птицы по формуле Kn=Nc-Nz при помощи следующих величин:The indicator of the state of intracellular exchange of nucleic acids in the glandular stomach of the examined bird is determined by the formula K n = N c -N z using the following values:

Kn - показатель состояния внутриклеточного обмена нуклеиновых кислот в железистом желудке обследуемой птицы;K n is an indicator of the state of intracellular exchange of nucleic acids in the glandular stomach of the examined bird;

Nc - среднее значение количества нуклеиновых кислот в условных единицах в зоне эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки железистого желудка контрольной здоровой птицы;N c is the average value of the number of nucleic acids in arbitrary units in the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane of the glandular stomach of a control healthy bird;

Nz - среднее значение количества нуклеиновых кислот в условных единицах в зоне эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки железистого желудка обследуемой птицы.N z is the average value of the number of nucleic acids in arbitrary units in the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane of the glandular stomach of the examined bird.

По полученным показателям состояния внутриклеточного обмена белков и нуклеиновых кислот в железистом желудке контрольной здоровой птицы и обследуемой птицы оценивают эффективность фармакотерапии обследуемой птицы.According to the obtained indicators of the state of intracellular exchange of proteins and nucleic acids in the glandular stomach of the control healthy bird and the examined bird, the effectiveness of pharmacotherapy of the examined bird is evaluated.

Исходя из вышеизложенного предлагаем следующую классификацию эффективности фармакотерапии на ранних этапах лечения клебсиеллеза птиц антибактериальными препаратами по показателям состояния внутриклеточного обмена белков и нуклеиновых кислот в зоне эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки железистого желудка (таблица 1).Based on the foregoing, we offer the following classification of the effectiveness of pharmacotherapy in the early stages of treatment of bird klebsiellosis with antibacterial drugs according to indicators of the state of intracellular exchange of proteins and nucleic acids in the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane of the glandular stomach (table 1).

Figure 00000010
Figure 00000010

Данный способ позволяет надежно определить состояние внутриклеточного обмена органических веществ (белков и нуклеиновых кислот) в стенке железистого желудка птиц, больных клебсиеллезом, в ранние сроки (в первые пять суток) антибактериальной терапии с учетом спектральных особенностей люминесценции ткани, количественного содержания в ней белков и нуклеиновых кислот и исключения влияния индивидуальных особенностей функционального состояния ее клеток. При этом обязательным является условие, согласно которому гистологические срезы должны быть получены при одинаковых условиях их изготовления, а все спектры люминесценции и оптической плотности фотометрируемых участков зоны эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки, а также уранового стекла ЖС-19 толщиной ~1,5 мм - при одинаковых параметрах режима работы.This method allows you to reliably determine the state of intracellular metabolism of organic substances (proteins and nucleic acids) in the wall of the glandular stomach of birds with Klebsiellosis, in the early stages (in the first five days) of antibiotic therapy, taking into account the spectral features of tissue luminescence, the quantitative content of proteins and nucleic acids and eliminating the influence of individual characteristics of the functional state of its cells. At the same time, the condition that histological sections should be obtained under the same conditions for their manufacture is mandatory, and all the luminescence and optical density spectra of the photometric sections of the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane and ZhS-19 uranium glass ~ 1.5 mm thick with the same parameters of the operating mode.

Предложенный способ проиллюстрирован на следующем экспериментально-клиническом примере: при проведении опыта использовали группу (80 голов) цыплят породы Хайсекс коричневый, заражение которых проводили per os (в ротовую полость) на вторые сутки жизни смывами культуры Klebsiella pneumoniae, при этом использовали полевой штамм. Лечение цыплят проводили лекарственным средством «Энрофлон» в соответствии с инструкцией к препарату путем дачи в разведении с водой.The proposed method is illustrated by the following experimental clinical example: during the experiment, a group (80 goals) of Haysex brown chickens was used, the infection of which was carried out per os (in the oral cavity) on the second day of life with Klebsiella pneumoniae culture washes, and a field strain was used. The treatment of chickens was carried out with the Enroflon drug in accordance with the instructions for the preparation by giving in dilution with water.

Для определения состояния внутриклеточного обмена органических веществ в ткани железистого желудка обследуемой птицы отбирали по одному цыпленку из группы зараженных птиц. Микроспектральное исследование гистологических срезов железистого желудка цыплят проводили по следующей схеме: до начала лечения: появления клинических признаков заболевания на пятые сутки после заражения и в процессе лечения: в течение первых, вторых, четвертых, пятых и седьмых суток (таблица 2).To determine the state of intracellular metabolism of organic substances in the glandular stomach tissue of the examined birds, one chicken was selected from the group of infected birds. Microspectral examination of histological sections of the glandular stomach of chickens was carried out according to the following scheme: before treatment: the onset of clinical signs of the disease on the fifth day after infection and during treatment: during the first, second, fourth, fifth and seventh days (table 2).

При оценке эффективности фармакотерапии клебсиеллеза птиц при лечении антибактериальным препаратом «Энрофлон» учитывали показатели состояния внутриклеточного обмена белков и нуклеиновых кислот в зоне эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки железистого желудка контрольной птицы данной породы Хайсекс коричневый и соответствующей возрастной категории.When evaluating the effectiveness of pharmacotherapy of bird klebsiellosis in the treatment with the Enroflon antibacterial drug, the indicators of the state of intracellular exchange of proteins and nucleic acids in the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane of the glandular stomach of the control bird of this breed Haysex brown and the corresponding age category were taken into account.

Figure 00000011
Figure 00000011

Из таблицы видно, что до лечения средние значения количества белков и нуклеиновых кислот в условных единицах в зоне эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки железистого желудка обследуемой птицы были низкими, а показатели состояния внутриклеточного обмена данных органических веществ этой зоны (белков>0,95, нуклеиновых кислот>0,87) имели высокие значения. В процессе лечения внутриклеточные обменные процессы постепенно восстанавливались, средние значения количества белков и нуклеиновых кислот в условных единицах в зоне эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки повышались, и, как следствие, уменьшались показатели состояния внутриклеточного обмена данных органических веществ. Уже в период со вторых по пятые сутки лечения выявленные показатели состояния внутриклеточного обмена белков (0,77-0,29) и нуклеиновых кислот (0,68-0,24) указывали на среднюю эффективность фармакотерапии клебсиеллеза, а на седьмые сутки лечения эти показатели составили 0,22 для белков и 0,19 для нуклеиновых кислот, что согласно предложенной классификации свидетельствует о восстановлении внутриклеточного обмена органических веществ в железистом желудке обследуемых птиц и соответственно о высокой эффективности фармакотерапии клебсиеллеза птиц при лечении антибактеральным препаратом «Энрофлон». Предлагаемый микроспектральный способ позволил выявить показатели состояния внутриклеточного обмена органических веществ (белков и нуклеиновых кислот) в железистом желудке больных клебсиеллезом птиц и проследить динамику его значений в процессе лечения данного заболевания антибактериальным препаратом «Энрофлон». Это, в свою очередь, позволило оценить эффективность фармакотерапии уже в ранние сроки лечения клебсиеллеза и своевременно решить вопрос о целесообразности дальнейшего применения этого лекарственного средства.The table shows that before treatment, the average values of the amount of proteins and nucleic acids in arbitrary units in the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane of the glandular stomach of the examined birds were low, and the indicators of the state of intracellular exchange of data of organic substances in this zone (proteins> 0.95, nucleic acids> 0.87) were high. During treatment, intracellular metabolic processes were gradually restored, the average values of the amount of proteins and nucleic acids in arbitrary units in the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane increased, and, as a result, the indicators of the state of intracellular metabolism of these organic substances decreased. Already in the period from the second to the fifth day of treatment, the revealed indicators of the state of intracellular metabolism of proteins (0.77-0.29) and nucleic acids (0.68-0.24) indicated the average efficacy of Klebsiellosis pharmacotherapy, and on the seventh day of treatment these indicators amounted to 0.22 for proteins and 0.19 for nucleic acids, which according to the proposed classification indicates the restoration of intracellular metabolism of organic substances in the glandular stomach of the examined birds and, accordingly, the high efficacy of pharmacotherapy of bird klebsiellosis and treatment with the antibacterial drug Enroflon. The proposed microspectral method made it possible to identify indicators of the state of intracellular metabolism of organic substances (proteins and nucleic acids) in the glandular stomach of patients with bird klebsiellosis and to trace the dynamics of its values during the treatment of this disease with the antibacterial drug Enroflon. This, in turn, made it possible to evaluate the effectiveness of pharmacotherapy already in the early stages of the treatment of Klebsiella and to timely resolve the issue of the appropriateness of further use of this drug.

Таким образом, предложенный микроспектральный способ оценки состояния внутриклеточного обмена органических веществ в железистом желудке птиц при ранних сроках антибактериальной терапии клебсиеллеза позволяет повысить точность диагностики состояния внутриклеточного обмена органических веществ (белков и нуклеиновых кислот) посредством учета спектральных особенностей люминесценции исследуемой ткани, определения количественного содержания в ней белков и нуклеиновых кислот и исключения влияния индивидуальных особенностей функционального состояния ее клеток.Thus, the proposed microspectral method for assessing the state of intracellular metabolism of organic substances in the glandular stomach of birds in the early stages of antibiotic therapy for klebsiellosis allows to increase the accuracy of diagnosis of the state of intracellular metabolism of organic substances (proteins and nucleic acids) by taking into account the spectral features of the luminescence of the studied tissue, determining the quantitative content in it proteins and nucleic acids and elimination of the influence of individual features of func cial state of its cells.

Claims (5)

1. Микроспектральный способ оценки эффективности фармакотерапии в первые 7 суток лечения клебсиеллеза птиц антибактериальными препаратами, включающий двухволновый метод люминесцентного спектрального анализа при изучении гистологических срезов, окрашенных специфическими люминесцентными метками-красителями дихлор-симм-триазиниламинофлуоресцеином-1 и этидиумом бромида, отличающийся тем, что проводят исследование гистологических срезов ткани железистого желудка контрольной здоровой птицы и обследуемой птицы, на каждом гистологическом срезе с помощью визуальной микроскопии определяют зону эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки, в которой выделяют пять участков с наибольшей степенью интенсивности люминесценции, с каждого участка получают спектр люминесценции и спектр оптической плотности и проводят их цифровую обработку: в спектре люминесценции регистрируют величину интенсивности люминесценции полосы излучения при длине волны, характерной для белков зоны эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки и равной 528 нм, и при длине волны, характерной для нуклеиновых кислот зоны эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки и равной 624 нм, в спектре оптической плотности регистрируют величину оптической плотности при длине волны 648 нм, которую используют в качестве толщины фотометрируемого участка, затем в каждом участке определяют количество белков по формуле B = I b D × Э
Figure 00000001
 и нуклеиновых кислот по формуле N = I n D × Э
Figure 00000002
 , где B - количество белков в условных единицах в каждом из пяти участков зоны эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки, Ib - величина интенсивности люминесценции исследуемого участка зоны эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки при длине волны 528 нм, N - количество нуклеиновых кислот в условных единицах в каждом из пяти участков зоны эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки, In - величина интенсивности люминесценции исследуемого участка зоны эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки при длине волны 624 нм, D - величина оптической плотности фотометрируемого участка при длине волны 648 нм, используемая в качестве его толщины; Э - величина интенсивности люминесценции уранового стекла ЖС-19 толщиной ~1,5 мм при длине волны 548 нм, затем вычисляют среднее значение количества белков и нуклеиновых кислот в условных единицах из пяти полученных по каждому из них результату, по которым, в свою очередь, рассчитывают показатель состояния внутриклеточного обмена белков в железистом желудке обследуемой птицы путем вычитания из среднего значения количества белков в условных единицах контрольной здоровой птицы среднего значения количества белков в условных единицах обследуемой птицы, а также рассчитывают показатель состояния внутриклеточного обмена нуклеиновых кислот в железистом желудке обследуемой птицы путем вычитания из среднего значения количества нуклеиновых кислот в условных единицах контрольной здоровой птицы среднего значения количества нуклеиновых кислот в условных единицах обследуемой птицы и при значениях показателя состояния внутриклеточного обмена белков более 0,95 и показателя состояния внутриклеточного обмена нуклеиновых кислот более 0,87 устанавливают низкую эффективность фармакотерапии обследуемой птицы, при значениях показателя состояния внутриклеточного обмена белков 0,95-0,25 и показателя состояния внутриклеточного обмена нуклеиновых кислот 0,87-0,21 - среднюю эффективность фармакотерапии обследуемой птицы, а при значениях показателя состояния внутриклеточного обмена белков менее 0,25 и показателя состояния внутриклеточного обмена нуклеиновых кислот менее 0,21 - высокую эффективность фармакотерапии обследуемой птицы.1. A microspectral method for assessing the effectiveness of pharmacotherapy in the first 7 days of treating bird klebsiellosis with antibacterial drugs, including the two-wavelength method of luminescent spectral analysis in the study of histological sections stained with specific luminescent dye-dichloro-triazinylaminofluorescein-1 dyes, which is carried out with ethidium b the study of histological sections of the glandular stomach tissue of the control healthy bird and the examined bird, on each histological using a visual microscope, the epithelium zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane is determined, in which five sections with the highest degree of luminescence intensity are distinguished, a luminescence spectrum and an optical density spectrum are obtained from each section and digitally processed: the band luminescence intensity is recorded in the luminescence spectrum radiation at a wavelength characteristic of proteins of the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane and equal to 528 nm, and at a wavelength characteristic for nucleic acids of the epithelium zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane and equal to 624 nm, the optical density at the wavelength of 648 nm is recorded in the spectrum of optical density, which is used as the thickness of the photometric region, then the amount of proteins is determined in each region by the formula B = I b D × E
Figure 00000001
 and nucleic acids according to the formula N = I n D × E
Figure 00000002
 where B is the number of proteins in arbitrary units in each of the five sections of the epithelium zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane, I b is the luminescence intensity of the studied section of the epithelium zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane at a wavelength of 528 nm, N is the number of nucleic acids in the conditional units in each of the five sections of the epithelium zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane, I n is the magnitude of the luminescence intensity of the studied section of the epithelium zone of the deep alveolar glands of the mucosa pads at a wavelength of 624 nm, D is the optical density of the photometric region at a wavelength of 648 nm, used as its thickness; E is the magnitude of the luminescence intensity of ZhS-19 uranium glass with a thickness of ~ 1.5 mm at a wavelength of 548 nm, then the average value of the number of proteins and nucleic acids is calculated in arbitrary units from the five results obtained for each of them, which, in turn, calculate the indicator of the state of intracellular protein metabolism in the glandular stomach of the examined bird by subtracting from the average value of the amount of protein in arbitrary units of the control healthy bird the average value of the amount of protein in arbitrary units of the survey my bird, and also calculate the indicator of the state of intracellular exchange of nucleic acids in the glandular stomach of the test bird by subtracting from the average value of the number of nucleic acids in arbitrary units of the control healthy bird the average value of the number of nucleic acids in the standard units of the examined bird and with values of the indicator of the state of intracellular protein metabolism more 0.95 and an indicator of the state of intracellular exchange of nucleic acids more than 0.87 establish a low efficiency of pharmacothe rapii of the examined bird, with the values of the indicator of the state of intracellular protein metabolism 0.95-0.25 and the indicator of the state of intracellular metabolism of nucleic acids 0.87-0.21 - the average efficiency of pharmacotherapy of the examined bird, and with the values of the indicator of the state of intracellular protein metabolism less than 0, 25 and an indicator of the state of intracellular exchange of nucleic acids less than 0.21 - the high efficiency of pharmacotherapy of the examined bird. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что среднее значение количества белков в условных единицах в зоне эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки рассчитывают по формуле:
Figure 00000012
;
где Bc - среднее значение количества белков в условных единицах в зоне эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки;
Bn - общее количество белков в условных единицах всех фотометрируемых участков зоны эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки;
n - количество фотометрируемых участков зоны эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки.2. The method according to claim 1, characterized in that the average number of proteins in arbitrary units in the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane is calculated by the formula:
Figure 00000012
;
where B c is the average value of the number of proteins in arbitrary units in the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane;
B n - the total number of proteins in arbitrary units of all photometric sections of the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane;
n is the number of photometric sections of the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane. 3. Способ по п.1, отличающийся тем, что среднее значение количества нуклеиновых кислот в условных единицах в зоне эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки рассчитывают по формуле:
Figure 00000013
;
где Nc - среднее значение количества нуклеиновых кислот в условных единицах в зоне эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки;
Nn - общее количество нуклеиновых кислот в условных единицах всех фотометрируемых участков зоны эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки;
n - количество фотометрируемых участков зоны эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки.3. The method according to claim 1, characterized in that the average number of nucleic acids in arbitrary units in the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane is calculated by the formula:
Figure 00000013
;
where N c is the average value of the number of nucleic acids in arbitrary units in the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane;
N n is the total number of nucleic acids in arbitrary units of all photometric sections of the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane;
n is the number of photometric sections of the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane. 4. Способ по п.1, отличающийся тем, что показатель состояния внутриклеточного обмена белков в железистом желудке обследуемой птицы рассчитывают по формуле:
Kb=Bc-Bzc;
где Kb - показатель состояния внутриклеточного обмена белков в железистом желудке обследуемой птицы;
Bc - среднее значение количества белков в условных единицах в зоне эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки железистого желудка контрольной здоровой птицы;
Bzc - среднее значение количества белков в условных единицах в зоне эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки железистого желудка обследуемой птицы.4. The method according to claim 1, characterized in that the indicator of the state of intracellular protein metabolism in the glandular stomach of the examined bird is calculated by the formula:
K b = B c -B zc ;
where K b is an indicator of the state of intracellular protein metabolism in the glandular stomach of the examined bird;
B c - the average value of the number of proteins in arbitrary units in the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane of the glandular stomach of a control healthy bird;
B zc is the average value of the amount of proteins in arbitrary units in the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane of the glandular stomach of the examined bird. 5. Способ по п.1, отличающийся тем, что показатель состояния внутриклеточного обмена нуклеиновых кислот в железистом желудке обследуемой птицы рассчитывают по формуле:
Kn=Nc-Nzc
где Kn - показатель состояния внутриклеточного обмена нуклеиновых кислот в железистом желудке обследуемой птицы;
Nc - среднее значение количества нуклеиновых кислот в условных единицах в зоне эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки железистого желудка контрольной здоровой птицы;
Nzc - среднее значение количества нуклеиновых кислот в условных единицах в зоне эпителия глубоких альвеолярных желез слизистой оболочки железистого желудка обследуемой птицы. 5. The method according to claim 1, characterized in that the indicator of the state of intracellular exchange of nucleic acids in the glandular stomach of the examined bird is calculated by the formula:
K n = N c -N zc
where K n is an indicator of the state of intracellular exchange of nucleic acids in the glandular stomach of the examined bird;
N c is the average value of the number of nucleic acids in arbitrary units in the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane of the glandular stomach of a control healthy bird;
N zc is the average value of the number of nucleic acids in arbitrary units in the epithelial zone of the deep alveolar glands of the mucous membrane of the glandular stomach of the examined bird.
RU2013109359/15A 2013-05-30 2013-05-30 Microspectral method for assessing efficacy of pharmacotherapy accompanying early treatment of avian klebsiella with antibacterial preparations RU2537165C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2013109359/15A RU2537165C1 (en) 2013-05-30 2013-05-30 Microspectral method for assessing efficacy of pharmacotherapy accompanying early treatment of avian klebsiella with antibacterial preparations

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2013109359/15A RU2537165C1 (en) 2013-05-30 2013-05-30 Microspectral method for assessing efficacy of pharmacotherapy accompanying early treatment of avian klebsiella with antibacterial preparations

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2013109359A RU2013109359A (en) 2014-12-10
RU2537165C1 true RU2537165C1 (en) 2014-12-27

Family

ID=53287593

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2013109359/15A RU2537165C1 (en) 2013-05-30 2013-05-30 Microspectral method for assessing efficacy of pharmacotherapy accompanying early treatment of avian klebsiella with antibacterial preparations

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2537165C1 (en)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2303254C2 (en) * 2005-07-12 2007-07-20 Валерий Леонидович Ермолаев Mode of simultaneous luminescent definition of concentration of several compounds using difference in times of fading
US20120234678A1 (en) * 2009-08-25 2012-09-20 Thomas Diller Quantitative fluorescent protein standards

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2303254C2 (en) * 2005-07-12 2007-07-20 Валерий Леонидович Ермолаев Mode of simultaneous luminescent definition of concentration of several compounds using difference in times of fading
US20120234678A1 (en) * 2009-08-25 2012-09-20 Thomas Diller Quantitative fluorescent protein standards

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ЛАРИОНОВ С.В. и др., Использование метода люминесцентного спектрального анализа клеток железистого желудка цыплят для идентификации кишечных инфекций.,Российский ветеринарный журнал. Сельскохозяйственные животные, 2012, N3, С. 27-30. Найдено из Интернета [он-лайн] 06.03.2014 на сайте http://logospress.ru/data/shg/shg_2012/pdf_shg_2012/shg-nomer-3-2012.pdf. АКЧУРИН С.В. и др., Изучение соотношений нуклеиновых кислот и белков в стенке железистого желудка цыплят при экспериментальных желудочно-кишечных инфекциях.,Ветеринарная медицина XXI века. Инновации, обмен опытом и перспективы развития: Материалы международной научно-практической конференции.- ФГБОУ ВПО "ГАУ", 2012, С.5-10. Найдено из Интернета [он-лайн] 06.03.2014 на сайте http://old.sgau.ru/assets/files/konferenc/sb_vet_2012.pdf *

Also Published As

Publication number Publication date
RU2013109359A (en) 2014-12-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Dong et al. Evaluation of dermoscopy in the diagnosis of naturally occurring dermatophytosis in cats
Clare et al. Assessing the ability of swab data to determine the true burden of infection for the amphibian pathogen Batrachochytrium dendrobatidis
Zhdanov et al. Quantitative analysis of mucosal oxygenation using ex vivo imaging of healthy and inflamed mammalian colon tissue
Zanna et al. Dermoscopic evaluation of skin in healthy cats
Fischer et al. Comparison of conventional and computer-assisted semen analysis in cockatiels (Nymphicus hollandicus) and evaluation of different insemination dosages for artificial insemination
Coyner Clinical atlas of canine and feline dermatology
Megía-Palma et al. Brighter is darker: the Hamilton–Zuk hypothesis revisited in lizards
Xu et al. Optical redox imaging of fixed unstained muscle slides reveals useful biological information
US20200367756A1 (en) Method and system for in vivo detection of adipose tissue browning
CN102023207B (en) Method for carrying out enzyme-linked immunoadsorption detection on integral zebra fish and application thereof
RU2537165C1 (en) Microspectral method for assessing efficacy of pharmacotherapy accompanying early treatment of avian klebsiella with antibacterial preparations
Labelle et al. Effects of ophthalmic disease on concentrations of plasma fibrinogen and serum amyloid A in the horse
Klapper et al. Intrinsic properties of anisakid nematode larvae as a potential tool for the detection in fish products
Skuratovskaya et al. The Influence of Parasitic Infection on the Black Sea Whiting, Merlangius merlangus euxinus (Gadidae)
EP4132347B1 (en) Method for quantitative imaging of the metabolic status of a lesion
RU2469296C1 (en) Luminescent-microscopic method to assess state of intracellular metabolism of organic substances in wall of glandular stomach of birds in case of klebsiellosis
Guselnikova et al. A Novel Method for Amyloid Detection in Human Tissue Load Using a Fluorescent Dye—Congo Red Analogue
Rzhechitskiy et al. Adipose Fin as a Natural “Optical Window” for Implantation of Fluorescent Sensors into Salmonid Fish
Patriche et al. Determination of some normal serum parameters in juvenile Sevruga sturgeons Acipenser stellatus (Pallas, 1771).
Caridha et al. In vivo bioluminescent monitoring of parasites in BALB/c mouse models of cutaneous leishmaniasis drug discovery
Sutherland et al. Recommended Health Care and Disease-Prevention Programs for Herds/Flocks of Exotic Animals
Chen et al. Label-free optical metabolic imaging of adipose tissues for prediabetes diagnosis
Akchurin et al. Application of luminescence spectral assay to evaluate the results of a scientific experiment
RU2596498C1 (en) Method of non-invasive lifetime estimation of physiological state of fish
RU2716512C1 (en) Method for determining age-related human being during forensic medical examination

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20150531