RU2537036C1 - Способ определения содержания метронидазола в биосубстратах - Google Patents
Способ определения содержания метронидазола в биосубстратах Download PDFInfo
- Publication number
- RU2537036C1 RU2537036C1 RU2013142569/15A RU2013142569A RU2537036C1 RU 2537036 C1 RU2537036 C1 RU 2537036C1 RU 2013142569/15 A RU2013142569/15 A RU 2013142569/15A RU 2013142569 A RU2013142569 A RU 2013142569A RU 2537036 C1 RU2537036 C1 RU 2537036C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- metronidazole
- sample
- concentration
- filter
- calibration solutions
- Prior art date
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, в частности к лабораторным методам исследования, и заключается в проведении хроматографического анализа образца биопробы. Для этого образец наносят на бумажный фильтр и на этот же фильтр наносят радиально стандартные калибровочные растворы метронидазола в интервале концентраций 10-100 мкл. Фильтр обрабатывают реагентом-проявителем, содержащим 5%-ный водный раствор едкого калия и ацетона, взятых в соотношении 2:1, и термостатируют при 100°С до появления окрашенных пятен. Интенсивность окраски пятна пробы сравнивают с окраской пятен стандартных калибровочных растворов, по которым и устанавливают концентрацию метронидазола в анализируемом образце. Способ позволяет быстро и достоверно проводить мониторинг содержания метронидазола и, тем самым, своевременно корректировать процесс лечения. 3 пр.
Description
Предлагаемое изобретение относится к медицине, а именно к терапии, и может быть использовано для контроля содержания метронидазола в жидких средах (кровь, слюна, лимфа, ликвор, моча, гнойное отделяемое) и тканях организма.
Метронидазол используют для лечения неклостридиальной анаэробной инфекции. Контроль за уровнем этого препарата необходим, так как при снижении концентрации, ниже минимальной ингибирующей рост анаэробов в гнойном очаге, не подавляется. Превышение концентрации препарата связано с риском появления нежелательных побочных явлений, таких как тошнота, рвота, диарея, крапивница, головная боль, слабость, сонливость (Справочник Видаль Лекарственные препараты в России: Справочник. М.: АстраФарм Сервис, 1998, с.148).
Известен способ определения концентрации метронидазола в крови, включающий экстракцию образца (кровь, ткань и др.) этанолом, выдерживание в течение суток при нулевой температуре, снятие спектра образовавшейся надосадочной жидкости на спектрофотометре при длине волны 320 нм и расчете концентрации метронидазола с использованием калибровочной кривой. (Байсоголов Г.Д., Бердов Б.А., Коноплянников А.Г. и др. Непосредственные результаты лучевого и комбинированного лечения больных со злокачественными опухолями с использованием метронидазола. - Ж. Мед. радиол. - 1983, №2, с. 7-12).
К недостаткам данного способа следует отнести длительность выполнения анализа (24-30 часов).
Наиболее близким по технической сущности к заявляемому и принятому за прототип является способ определения содержания метронидазола в биосубстратах путем проведения хроматографического анализа.
Для осуществления известного способа берут 1 мл или 1 г образца биосубстрата (кровь, слюна, ликвор, гнойное отделяемое, биоптат ткани), к которому добавляют 1 мл ацетонитрила для осаждения высокомолекулярной фракции. Полученную смесь центрифугируют 20 минут при 3000 об/мин, супернатант упаривают досуха в токе азота при температуре 80-90°С. Сухой остаток полностью растворяют в элюенте ацетонитрил-вода, взятых в соотношении 10:90, после чего центрифугируют в течение 20 минут. Полученную надосадочную жидкость вводят в хроматограф с подвижной фазой: ацетонитрил-вода (10:90), скорость потока 100 мкл/мин. Дегазация элюента гелием в течение 1-2 мин. Количественное определение метронидазола проводят при длине волны 318 нм. Время анализа, включая пробоподготовку, в среднем составляет 2 часа (Кузнецова Э.Э., Горохова В.Г., Андреева Т.А. и др. Высокоэффективная жидкостная хроматография пролонгированного метронидазола - метропола. Хим-фарм. ж-л. 2000, №8, с.46-47).
К недостаткам данного способа следует отнести использование дорогостоящего прибора, токсичных растворителей и многостадийность операций.
Задачей заявляемого технического решения является расширение диагностических возможностей лабораторного контроля за концентрацией метронидазола, содержащегося в крови пациента.
Техническим результатом предлагаемого способа является создание простого, доступного экспресс-метода определения концентрации метронидазола в жидких средах и тканях организма, позволяющего круглосуточно осуществлять его мониторинг.
Технический результат достигается тем, что способ определения содержания метронидазола в биосубстратах проводят путем хроматографического анализа образца.
Отличительные приемы заявляемого способа заключаются в том, что образец биопробы наносят на бумажный фильтр и на этот же фильтр, радиально, наносят стандартные калибровочные растворы метронидазола в интервале концентраций 10-100 мкл. После этого фильтр обрабатывают реагентом-проявителем, содержащим 5%-ный водный раствор едкого калия и ацетона, взятых в соотношении 2:1, и термостатируют при 100°С до появления окрашенных пятен. Концентрацию метронидазола в анализируемом образце устанавливают по совпадению интенсивности окрашивания пятна пробы с пятном одного из стандартных калибровочных растворов.
Проведенный сопоставительный анализ с прототипом показал, что предлагаемый способ отличается от известных вышеперечисленными приемами и, следовательно, соответствует критерию изобретения «новизна».
Сравнение заявляемого технического решения не только с прототипом, но и с другими техническими решениями в медицине не позволило выявить в них признаки заявляемого изобретения. В доступной литературе авторами не выявлено способа определения содержания метронидазола в биосубстратах с использованием бумажной хроматографии.
Авторами предлагаемого способа экспериментальным путем установлено, что интенсивность окраски анализируемого образца находится в прямо пропорциональной зависимости при концентрации метронидазола 10-100 мкл.
Особенностью заявляемого способа является и то, что для определения содержания метронидазола в пробах не требуется предварительной пробоподготовки и специальных лабораторных приборов.
Клинические исследования авторов заявляемого способа свидетельствуют о том, что использование предлагаемого технического решения позволяет доступно, просто и быстро осуществлять мониторинг уровня препарата в биосубстратах и вносить соответствующие коррективы в процесс противоанаэробного лечения тяжелой категории больных.
Изложенное позволяет сделать вывод о соответствии технического решения критерию «изобретательский уровень».
Способ, составляющий заявляемое изобретение, предназначен для использования в медицине, а именно в клинической практике (терапия, гнойная хирургия, проктология, онкология и др.). Возможность его осуществления подтверждена описанными в заявке приемами и, следовательно, предлагаемое решение соответствует критерию изобретения «промышленная применимость».
Заявляемый способ осуществляется следующим образом.
На бумажный фильтр микропипеткой наносят образец биопробы (сыворотка крови, слюна, моча, лимфа, ликвор, гнойное отделяемое, экссудат). На этот же фильтр радиально наносят и 10 стандартных калибровочных растворов метронидазола в интервале концентраций 10-100 мкл. После этого на фильтр осторожно распыляют предварительно приготовленный реагент-проявитель, содержащий 5%-ный водный раствор едкого калия и ацетона, взятых в соотношении 2:1. Затем этот фильтр помещают в термостат с температурой 100°С и сушат до появления окрашенных пятен. Интенсивность появившихся желтых пятен зависит от концентрации метронидазола. Концентрацию метронидазола в анализируемом образце устанавливают визуально по совпадению интенсивности окрашивания пятна пробы с пятном одного из стандартных калибровочных растворов. Общее время анализа составляет 20-30 минут.
Предложенный способ поясняется примерами конкретного выполнения.
Пример 1. Больной В., история болезни №19140, поступил в реанимационное отделение гнойно-септического центра Областной клинической больницы с диагнозом - распространенный гнойный перитонит. Для подавления роста анаэробной неклостридиальной инфекции, выделенной у больного, был назначен метронидазол в дозе 500 мг внутривенно. Через 3 и 6 часов после введения метронидазола было проведено определение его содержания в сыворотке крови этого больного по заявляемому способу.
Через 3 часа концентрация введенного препарата составила 4,34 мкг/мл, через 6 часов концентрация метронидазола в сыворотке крови этого больного составила 3,24 мкг/мл.
Выявленное количество метронидазола оказалось ниже минимальной бактерицидной концентрации, что вызвало последующую коррекцию его дозы.
Пример 2. Больной Г., история болезни №17390, поступил в гнойно-септическое отделение ОКБ с диагнозом распространенный гнойный перитонит, анаэробная неклостридиальная инфекция. В комплекс лекарственной терапии был включен метронидазол эндолимфатически в дозе 500 мг.
Через 3, 6 и 9 часов после введения метронидазола было определенно его содержание в лимфе этого больного предлагаемым способом: через 3 часа - 35,3 мкг/мл, через 6 часов - 29,7 мкг/мл и через 9 часов - 25,3 мкг/мл.
Полученные данные свидетельствовали о том, что в исследуемый период содержание метронидазола превысило его минимальную бактерицидную концентрацию, что не потребовало внесения изменений в тактику антимикробной терапии.
Пример 3. Больной К., история болезни №21019, поступил в гнойно-септическое отделение ОКБ с диагнозом флегмона бедра. Из раны была выделена анаэробная инфекция (Bac. fragilis).
Пациенту был назначен метронидазол внутривенно в дозе 500 мг. Через 3 и 6 часов после введения было проведено определение содержания метронидазола в гнойном отделяемом из раны. Было определено: через 3 часа - 3,8 мкг/мл, через 6 часов - 2,9 мкг/мл.
Установленная концентрация метронидазола оказалось ниже минимальной бактерицидной, что потребовало увеличение его дозы.
Клинические исследования заявляемого способа проведены на базе клиники ФБГУ «НЦРВХ» СО РАМН в Областной клинической больнице. Было обследовано 39 больных, из них: с распространенным гнойным перитонитом - 20, панкреонекрозом - 9, флегмоной бедра - 5, язвенным колитом - 5.
Для сравнения концентрация метронидазола в сыворотке крови у этих больных так же была определена и методом спектрофотометрии. При сравнении полученных результатов ошибка определения не превысила 3,2%. При этом чувствительность предлагаемого способа составляет 89,8%, специфичность - 87,8%.
Таким образом, предлагаемый способ позволяет просто, быстро и достоверно определить содержание метронидазола в биосубстратах, что обеспечивает возможность проведения экспресс-анализа и, тем самым, позволяет своевременно внести коррективы в процесс лечения. Способ не предусматривает предварительной пробоподготовки и не требует специальной приборной техники.
Claims (1)
- Способ определения содержания метронидазола в биосубстратах путем хроматографического анализа образца, отличающийся тем, что образец биопробы наносят на бумажный фильтр и на этот же фильтр радиально наносят стандартные калибровочные растворы метронидазола в интервале концентраций 10-100 мкл, после чего фильтр обрабатывают реагентом-проявителем, содержащим 5%-ный водный раствор едкого калия и ацетона, взятых в соотношении 2:1, и термостатируют при 100°С до появления окрашенных пятен, интенсивность окраски пятна пробы сравнивают с окраской пятен стандартных калибровочных растворов, по которым и определяют концентрацию метронидазола в анализируемом образце.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2013142569/15A RU2537036C1 (ru) | 2013-09-17 | 2013-09-17 | Способ определения содержания метронидазола в биосубстратах |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2013142569/15A RU2537036C1 (ru) | 2013-09-17 | 2013-09-17 | Способ определения содержания метронидазола в биосубстратах |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2537036C1 true RU2537036C1 (ru) | 2014-12-27 |
Family
ID=53287552
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2013142569/15A RU2537036C1 (ru) | 2013-09-17 | 2013-09-17 | Способ определения содержания метронидазола в биосубстратах |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2537036C1 (ru) |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2440574C2 (ru) * | 2009-12-08 | 2012-01-20 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Иркутский государственный университет путей сообщения" (ИрГУПС (ИрИИТ)) | Способ определения метронидазола |
-
2013
- 2013-09-17 RU RU2013142569/15A patent/RU2537036C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2440574C2 (ru) * | 2009-12-08 | 2012-01-20 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Иркутский государственный университет путей сообщения" (ИрГУПС (ИрИИТ)) | Способ определения метронидазола |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Кузнецова Э.Э., Горохова В.Г., Андреева Т.А. и др. Высокоэффективная жидкостная хроматография пролонгированного метронидазола - метропола. Хим-фарм. ж. - 2000. - N8. - с.46 - 47. А.Н. Теплых, Е.А. Илларионова. Количественное определение метронидазола спектрофотометрическим методом. Сибирский медицинский журнал, 2009, N 5. с.48-50. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Feng et al. | Naringin attenuates cerebral ischemia-reperfusion injury through inhibiting peroxynitrite-mediated mitophagy activation | |
Sebori et al. | Resveratrol decreases oxidative stress by restoring mitophagy and improves the pathophysiology of dystrophin‐deficient mdx Mice | |
Chang et al. | Neuroprotective mechanisms of puerarin in middle cerebral artery occlusion-induced brain infarction in rats | |
Song et al. | Hydrogen sulfide inhibits the renal fibrosis of obstructive nephropathy | |
Djabarouti et al. | Determination of levofloxacin in plasma, bronchoalveolar lavage and bone tissues by high-performance liquid chromatography with ultraviolet detection using a fully automated extraction method | |
Siewert | Validation of a levofloxacin HPLC assay in plasma and dialysate for pharmacokinetic studies | |
Czyrski et al. | An HPLC method for levofloxacin determination and its application in biomedical analysis | |
Mozar et al. | Red blood cell nitric oxide synthase modulates red blood cell deformability in sickle cell anemia | |
Chen et al. | Sodium selenite promotes neurological function recovery after spinal cord injury by inhibiting ferroptosis | |
Huo et al. | Cabazitaxel-induced autophagy via the PI3K/Akt/mTOR pathway contributes to A549 cell death | |
Naicker et al. | A UHPLC–MS/MS method for the simultaneous determination of piperacillin and tazobactam in plasma (total and unbound), urine and renal replacement therapy effluent | |
Sury et al. | Restoration of Akt activity by the bisperoxovanadium compound bpV (pic) attenuates hippocampal apoptosis in experimental neonatal pneumococcal meningitis | |
Martens-Lobenhoffer et al. | Validated high performance liquid chromatography–UV detection method for the determination of daptomycin in human plasma | |
Ozansoy et al. | Melatonin affects the release of exosomes and tau-content in in vitro amyloid-beta toxicity model | |
Tariq et al. | Development and validation of a simple, accurate and economical method for the analysis of vancomycin in human serum using ultracentrifuge protein precipitation and UV spectrophotometer | |
Chen et al. | Moderate intensity of treadmill exercise rescues TBI-induced ferroptosis, neurodegeneration, and cognitive impairments via suppressing STING pathway | |
Chaihongsa et al. | Cardiorenal dysfunction and hypertrophy induced by renal artery occlusion are normalized by galangin treatment in rats | |
RU2537036C1 (ru) | Способ определения содержания метронидазола в биосубстратах | |
Chen et al. | Quantification of aesculin in rabbit plasma and ocular tissues by high performance liquid chromatography using fluorescent detection: Application to a pharmacokinetic study | |
Zhu et al. | Targeting CB2R in astrocytes for Parkinson's disease therapy: unraveling the Foxg1-mediated neuroprotective mechanism through autophagy-mediated NLRP3 degradation | |
Stendel et al. | Pharmacokinetics of taurolidine following repeated intravenous infusions measured by HPLC-ESI-MS/MS of the derivatives taurultame and taurinamide in glioblastoma patients | |
Anwer et al. | Development and validation of RP-HPLC method for estimation of Cefotaxime sodium in bulk and formulation | |
Hasan et al. | Novel HPLC method for quantitative determination of cefazolin sodium in pharmaceutical formulations | |
Olga et al. | The Development of Identification and Quantitative Definition Methodic of Active substances of the Ointment “Allergolic” | |
Wong et al. | Inflammasome activation mediates apoptotic and pyroptotic death in astrocytes under ischemic conditions |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20160918 |
|
PD4A | Correction of name of patent owner |