RU2526160C1 - Biomaterial and preparation with biomaterial, stimulating anti-tumour activity - Google Patents
Biomaterial and preparation with biomaterial, stimulating anti-tumour activity Download PDFInfo
- Publication number
- RU2526160C1 RU2526160C1 RU2013128699/15A RU2013128699A RU2526160C1 RU 2526160 C1 RU2526160 C1 RU 2526160C1 RU 2013128699/15 A RU2013128699/15 A RU 2013128699/15A RU 2013128699 A RU2013128699 A RU 2013128699A RU 2526160 C1 RU2526160 C1 RU 2526160C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- biomaterial
- cancer
- solvent
- lyophilisate
- cells
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Description
Предлагаемая группа изобретений относится к области медицины, а именно к онкологии, и может быть использована для биологической терапии опухолей.The proposed group of inventions relates to medicine, namely to oncology, and can be used for biological therapy of tumors.
Современные достижения клеточной и молекулярной биологии создали реальные предпосылки для активного влияния на противоопухолевый иммунитет. Предполагается, что иммунная система может эффективно противодействовать раковым клеткам, вплоть до полной их элиминации. Лимфатические узлы являются одним из важнейших компонентов противоопухолевой защиты.Modern advances in cell and molecular biology have created real prerequisites for an active influence on antitumor immunity. It is assumed that the immune system can effectively counteract cancer cells, up to their complete elimination. Lymph nodes are one of the most important components of antitumor protection.
Известен способ вакцинной иммунотерапии по принципу реверсивной иммуносупрессии [патент US 7731945, 2010 г.], который заключается в индукционном продуцировании наивных Т-клеток, воздействии на наивные Т-клетки эндогенных или экзогенных антигенов и восстановлении Т-клеточного иммунитета путем введения смеси натуральных цитокинов в качестве адъюванта для эндогенных или экзогенных антигенов рака. Предпочтительно вводить смесь натуральных цитокинов в сочетании с тимозином 61.A known method of vaccine immunotherapy according to the principle of reverse immunosuppression [patent US 7731945, 2010], which consists in the induction production of naive T cells, exposure of naive T cells to endogenous or exogenous antigens and restoration of T cell immunity by introducing a mixture of natural cytokines into as an adjuvant for endogenous or exogenous cancer antigens. It is preferable to introduce a mixture of natural cytokines in combination with thymosin 61.
Известна вакцинотерапия пациентов с иммуносупрессией [патент US 6977072, 2005 г.]. Способ иммунизации предусматривает активацию региональных лимфатических узлов, который включает ряд этапов: (1) перилимфатическое введение смеси натуральных цитокинов. У некоторых пациентов имеется локальное скопление дендритных клеток, которые поглотили антиген или вступили во взаимодействие с ним, но не могут созреть. Перилимфатическое введение цитокинов способствует дифференцированию и созреванию дендритных клеток;Known vaccine therapy for patients with immunosuppression [patent US 6977072, 2005]. The immunization method involves the activation of regional lymph nodes, which includes a number of steps: (1) perilymphatic administration of a mixture of natural cytokines. Some patients have a local accumulation of dendritic cells that have absorbed the antigen or interacted with it, but cannot mature. Perilymphatic administration of cytokines promotes the differentiation and maturation of dendritic cells;
(2) введение пациенту циклофозамида и нестероидных противовоспалительных препаратов. Эти препараты уменьшают Т-клеточную супрессию.(2) administering cyclophosamide and non-steroidal anti-inflammatory drugs to the patient. These drugs reduce T cell suppression.
Известен искусственный лимфатический узел [патент US 8101195, 2012 г.]. Способ получения искусственного лимфатического узла включает следующие стадии: (а) иммунизация животного, с использованием антигена рака и, по крайней мере, одного адъюванта из группы, состоящей из полного адъюванта Фрейнда, CpG-адъюванта, липосомы, БЦЖ, polyI:C, R848 и липополисахарида, (б) трансплантация материала искусственного лимфатического узла, состоящего из полимерного биоматериала, включающего цитокинопродуцирующие стромальные клетки и дендритные клетки для иммунизированного животного. Тем самым, получается искусственный лимфатический узел, который вызывает раковый антиген-специфический иммунный ответ и обогащает IFN производство CDS-положительных киллеров Т-клеток или НК-клеток с раковой цитотоксической активностью.Known artificial lymph node [patent US 8101195, 2012]. A method for producing an artificial lymph node includes the following stages: (a) immunizing an animal using a cancer antigen and at least one adjuvant from the group consisting of Freund's complete adjuvant, CpG adjuvant, liposome, BCG, polyI: C, R848 and lipopolysaccharide, (b) transplantation of artificial lymph node material consisting of a polymer biomaterial, including cytokine-producing stromal cells and dendritic cells for an immunized animal. Thus, an artificial lymph node is obtained that induces a cancer antigen-specific immune response and enriches IFN production of CDS-positive killer T cells or NK cells with cancer cytotoxic activity.
Известен способ лечения диссеминированного рака [патент US 8211425, 2012 г.]. Иммунотерапевтический способ лечения пациента, страдающего от диссеминированного рака, включает:A known method of treating disseminated cancer [patent US 8211425, 2012]. An immunotherapeutic method for treating a patient suffering from disseminated cancer includes:
а) выявление у пациента одного или большего количества сторожевых лимфатических узлов и, как вариант, идентификацию всех или части метастазов распространенного рака; б) резекцию одного или более узлов и, как вариант, всех или часть метастазов; в) выделение метастазо-реактивных Т-лимфоцитов из упомянутых лимфатических узлов; г) in vitro размножение упомянутых метастазо-реактивных Т-лимфоцитов; д) введение полученных таким образом Т-лимфоцитов пациенту, у которого Т-лимфоциты являются CD4+хелперами или CD8+Т-лимфоцитами.a) the identification in the patient of one or more sentinel lymph nodes and, as an option, the identification of all or part of the metastases of advanced cancer; b) resection of one or more nodes and, as an option, all or part of the metastases; c) isolation of metastasis-reactive T-lymphocytes from the aforementioned lymph nodes; d) in vitro reproduction of the aforementioned metastasis-reactive T-lymphocytes; e) administering thus obtained T-lymphocytes to a patient in whom the T-lymphocytes are CD4 + helpers or CD8 + T-lymphocytes.
Недостатком такого способа является использование клеток пораженного злокачественной опухолью органа, что не исключает вероятность прогрессии и рецидива онкологического заболевания.The disadvantage of this method is the use of cells affected by a malignant tumor of the organ, which does not exclude the likelihood of progression and relapse of cancer.
Наиболее близким аналогом предлагаемого биоматериала, стимулирующего противоопухолевую активность, является иммуномодулятор, содержащий полипептиды интактных лимфатических узлов животных, представляющий собой порошок желтовато-белого цвета. Способ получения иммуномодулятора включает гомогенизацию интактных лимфатических узлов животных в растворе хлористого натрия в соотношении 1:3, аутолиз, центрифугирование, нагревание надосадочной жидкости до 80°C, охлаждение, удаление осадка и высушивание супернатанта посредством замораживания и помещения в атмосферную сублимационную установку с последующим досушиванием с помощью ИК-сушки [патент RU 2257904, 2005 г.].The closest analogue of the proposed biomaterial that stimulates antitumor activity is an immunomodulator containing polypeptides of intact lymph nodes of animals, which is a yellowish-white powder. A method for producing an immunomodulator includes homogenizing animal intact lymph nodes in a sodium chloride solution in a ratio of 1: 3, autolysis, centrifugation, heating the supernatant to 80 ° C, cooling, removing the precipitate and drying the supernatant by freezing and placing in an atmospheric freeze-drying unit, followed by drying with using infrared drying [patent RU 2257904, 2005].
Недостатками данного иммуномодулятора являются:The disadvantages of this immunomodulator are:
В состав иммуномодулятора, изготовленного из интактных лимфатических узлов животных, не входят вещества, содержащиеся в постнатальных индуцированных лимфатических узлах (ПНИЛУ) или вновь образованных лимфатических узлах больных раком [Ганцев Ш.Х. Новые технологии диагностики и лечения рака молочной железы / Креативная хирургия и онкология, 2009. - №1. - С. 6-9]), которые обладают более высокой биологической активностью [Gantsev S.K., Umezawa К., Islamgulov D.V., Husnutdinova Е.К., Ishmuratova R.S., Frolova V.Y., Kzyrgalin S.R. The role of inflammatory chemokines in lymphoid neoorganogenesis in breast cancer / Biomedicine & Pharmacotherapy, 2013. -Vol. 67. - №5. - Р. 363-366]. При этом способе получения биоматериала используется раствор хлористого натрия в соотношении 1:3, аутолиз при 4-6°C в течение 14 ч, нагревание надосадочной жидкости до 80°C. За счет консистенции и физико-химических свойств композиции - 0,15 М NaCl полученный раствор слабо удерживается в тканях, вследствие чего он не оказывает пролонгированного действия. Кроме того, данный способ получения биоматериала длителен и трудоемок.An immunomodulator made from intact lymph nodes of animals does not include substances contained in postnatal induced lymph nodes (PNILU) or newly formed lymph nodes of patients with cancer [Gantsev Sh.Kh. New technologies for the diagnosis and treatment of breast cancer / Creative Surgery and Oncology, 2009. - No. 1. - S. 6-9]), which have higher biological activity [Gantsev S.K., Umezawa K., Islamgulov D.V., Husnutdinova E.K., Ishmuratova R.S., Frolova V.Y., Kzyrgalin S.R. The role of inflammatory chemokines in lymphoid neoorganogenesis in breast cancer / Biomedicine & Pharmacotherapy, 2013.-Vol. 67. - No. 5. - R. 363-366]. In this method of obtaining biomaterial, a sodium chloride solution is used in a ratio of 1: 3, autolysis at 4-6 ° C for 14 hours, heating the supernatant to 80 ° C. Due to the consistency and physico-chemical properties of the composition - 0.15 M NaCl, the resulting solution is poorly retained in the tissues, as a result of which it does not have a prolonged effect. In addition, this method of obtaining biomaterial is long and laborious.
Задачей изобретения является создание нового биоматериала, стимулирующего противоопухолевую активность.The objective of the invention is the creation of a new biomaterial that stimulates antitumor activity.
Технический результат - получение материала для биотерапии опухолей, обеспечивающего уменьшение вероятности прогрессии и рецидива онкологического заболевания, а также регресса опухоли при некоторых локализациях.EFFECT: obtaining material for tumor biotherapy, which reduces the likelihood of progression and relapse of cancer, as well as tumor regression in some localizations.
Указанный технический результат достигается тем, что биоматериал, стимулирующий противоопухолевую активность, содержащий лиофилизат лимфатических узлов млекопитающего, согласно изобретению содержит лиофилизат постнатальных индуцированных лимфатических узлов больного раком.The specified technical result is achieved in that the biomaterial that stimulates antitumor activity containing a lyophilisate of the lymph nodes of a mammal according to the invention contains a lyophilisate of postnatal induced lymph nodes of a cancer patient.
Изобретение иллюстрируется следующими фигурами: на фигуре 1 показан ПНИЛУ при раке молочной железы; на фигуре 2 - то же, поперечный разрез; на фигуре 3 - ПНИЛУ со сформированной стромой, окраска гематоксилином-эозином, ×60; на фигуре 4 - профиль экспрессии воспалительных хемокинов в ПНИЛУ относительно интактных лимфоузлов; на фигуре 5 - иерархический анализ профиля экспрессии воспалительных хемокинов в ПНИЛУ относительно интактных.The invention is illustrated by the following figures: figure 1 shows PNILU for breast cancer; figure 2 is the same, cross section; figure 3 - PNILU with a formed stroma, stained with hematoxylin-eosin, × 60; figure 4 is an expression profile of inflammatory chemokines in PNILU relative to intact lymph nodes; figure 5 is a hierarchical analysis of the expression profile of inflammatory chemokines in PNILU relatively intact.
Мотивацией заявки служат новые данные, которые были получены нами в результате многолетних, мультидисциплинарных исследований процесса образования ПНИЛУ при раке.The motivation for the application is the new data that we obtained as a result of many years of multidisciplinary research on the formation of PNILU in cancer.
Нами был открыт и детально изучен процесс формирования ПНИЛУ. Эти ткани напоминают исходные интактные лимфоидные органы (фигуры 1, 2, 3), развитие которых заканчивается после рождения, с сегрегацией в зоне Т и В клеток, дендритных клеток, фолликулярных дендрических клеток, лимфатических сосудов и больших эндотелиальных венул. При формировании ПНИЛУ активация стромальных клеток приводит к высвобождению молекул, которые контролируют процессы восстановления, распространения и выживания лейкоцитов. Одна из главных ролей в этом процессе принадлежит интерлейкину-7 (IL-7R).We have discovered and studied in detail the process of formation of PNILU. These tissues resemble the original intact lymphoid organs (figures 1, 2, 3), the development of which ends after birth, with segregation in the T and B zone of cells, dendritic cells, follicular dendritic cells, lymphatic vessels and large endothelial venules. During the formation of PNILU, the activation of stromal cells leads to the release of molecules that control the processes of recovery, spread and survival of leukocytes. One of the main roles in this process belongs to interleukin-7 (IL-7R).
Создание ниши для поступающих лейкоцитов происходит опосредованно через сотрудничество с внеклеточными компонентами матрицы молекул адгезии, цитокинами и хемокинами. Фактор некроза опухоли (ФНО) и лимфотоксин α (ЛТ-а) экспрессируются кроветворными клетками и играют важную роль в активации цитокинов и хемокинов в мезенхимальных, стромальных и эндотелиальных клетках, способствуя созданию лимфоидной ниши [Francesca A., Ricardo P. Lymphoid neogenesis in chronic inflammatory diseases / Nature Rev. Immunol., 2006. - Vol. 6. - Р. 205-217].The creation of a niche for incoming leukocytes occurs indirectly through cooperation with the extracellular components of the matrix of adhesion molecules, cytokines and chemokines. Tumor necrosis factor (TNF) and lymphotoxin α (LT-a) are expressed by hematopoietic cells and play an important role in the activation of cytokines and chemokines in mesenchymal, stromal and endothelial cells, contributing to the creation of a lymphoid niche [Francesca A., Ricardo P. Lymphoid neogenesis in chronic inflammatory diseases / Nature Rev. Immunol., 2006. - Vol. 6. - R. 205-217].
У трансгенных мышей, у которых наблюдается гиперэкспрессия лимфоидных хемокинов или ЛТ-а, происходит развитие органоспецифических лимфоидных органов (ЛО). Известно, что повышенная экспрессия ФНО-α у животных также приводит к образованию ЛО и развитию хронических воспалительных реакций [Alitalo К., Tammela Т., Petrova Т. Lymphangiogenesis in development and human disease / Nature, 2005. - Vol. 15. - P. 946-953; Bende R., van Maldegem F., van Noesel C. Chronic inflammatory disease, lymphoid tissue neogenesis and extranodal marginal zone B-cell lymphomas / Haematologica, 2009. - Vol. 94. - №8. - P. 1109-1123].In transgenic mice, in which overexpression of lymphoid chemokines or LT-a is observed, the development of organ-specific lymphoid organs (LO) occurs. It is known that increased expression of TNF-α in animals also leads to the formation of LO and the development of chronic inflammatory reactions [Alitalo K., Tammela T., Petrova T. Lymphangiogenesis in development and human disease / Nature, 2005. - Vol. 15. - P. 946-953; Bende R., van Maldegem F., van Noesel C. Chronic inflammatory disease, lymphoid tissue neogenesis and extranodal marginal zone B-cell lymphomas / Haematologica, 2009. - Vol. 94. - No. 8. - P. 1109-1123].
Исследования хемокинов и их рецепторов у мышей привело к пониманию молекулярных и межклеточных взаимодействий, которые лежат в основе лимфоидного органогенеза. При развитии лимфоидных органов и поддержании микроархитектуры лимфоидных тканей цитокины воспаления, семейства ФНО и ЛТ-а тесно взаимодействуют с гомеостатическими хемокинами CXCL13, CCL21, CCL19 и CXCL12. [Luther S., Bidgol A., Hargreaves D., Schmidt A., Xu Y., Paniyadi J., Paniyadi J., Matloubian M., Cyster J. Differing activities of homeostatic chemokines CCL19, CCL21, and CXCL12 in lymphocyte and dendritic cell recruitment and lymphoid neogenesis / J. Immunol., 2002. - Vol. 169. - P. 424-433].Studies of chemokines and their receptors in mice have led to an understanding of the molecular and intercellular interactions that underlie lymphoid organogenesis. With the development of lymphoid organs and the maintenance of the microarchitecture of lymphoid tissues, the inflammatory cytokines of the TNF and LT families closely interact with homeostatic chemokines CXCL13, CCL21, CCL19 and CXCL12. [Luther S., Bidgol A., Hargreaves D., Schmidt A., Xu Y., Paniyadi J., Paniyadi J., Matloubian M., Cyster J. Differing activities of homeostatic chemokines CCL19, CCL21, and CXCL12 in lymphocyte and dendritic cell recruitment and lymphoid neogenesis / J. Immunol., 2002. - Vol. 169. - P. 424-433].
Важен факт участия хемокинов в специфичном метастазировании раковых клеток (РК). Установлено, что клетки рака молочной железы (РМЖ) человека экспрессируют рецептор хемокинов CXCR4, тогда как его комплементарный лиганд CXCL12 продуцируется клетками тканей (костный мозг, легкое и лимфатические узлы), в которые чаще всего метастазируют РК [Muller A., Homey В., Soto Н., Ge N., Catron D., Buchanan М.Е., McClanahan Т., Murphy E., Yuan W., Wagner S.N., Barrera J.L., Mohar A., Verastegui E., Zlotnik A. Involvement of chemokine receptors in breast cancer metastasis / Nature, 2001. - Vol. 410. - Р. 50-56].The fact of the participation of chemokines in the specific metastasis of cancer cells (PK) is important. It has been established that human breast cancer (BC) cells express the chemokine receptor CXCR4, while its complementary ligand CXCL12 is produced by tissue cells (bone marrow, lung and lymph nodes), in which PK most often metastasize [Muller A., Homey B., Soto N., Ge N., Catron D., Buchanan M.E., McClanahan T., Murphy E., Yuan W., Wagner SN, Barrera JL, Mohar A., Verastegui E., Zlotnik A. Involvement of chemokine receptors in breast cancer metastasis / Nature, 2001. - Vol. 410. - R. 50-56].
При этом в системе in vitro клетки РМЖ способны мигрировать по направлению к градиенту CXCL12, а антитела, нейтрализующие CXCR4, ингибируют образование метастазов в лимфатических узлах у экспериментальных животных. Клетки лимфатического эндотелия продуцируют и другие специфические хемокины (CCL21), привлекающие к ним РК из первичной опухоли, что коррелирует с наличием метастазов в «сторожевом» лимфатическом узле (СЛУ) [Takeuchi Н., Fujimoto А., Tanaka М., Yamano Т., Hsueh Е, Hoon D. CCL21 chemokine regulates chemokine receptor CCR7 bearing malignant melanoma cells / Clin. Cancer Res., 2004. - Vol. 10. - Р. 2351-2358].Moreover, in an in vitro system, breast cancer cells can migrate towards the CXCL12 gradient, and antibodies that neutralize CXCR4 inhibit the formation of metastases in the lymph nodes in experimental animals. Lymphatic endothelial cells also produce other specific chemokines (CCL21), attracting RKs from the primary tumor to them, which correlates with the presence of metastases in the sentinel lymph node (SLU) [Takeuchi N., Fujimoto A., Tanaka M., Yamano T. , Hsueh E, Hoon D. CCL21 chemokine regulates chemokine receptor CCR7 bearing malignant melanoma cells / Clin. Cancer Res., 2004 .-- Vol. 10. - R. 2351-2358].
Материалом для нашего исследования послужили образцы РНК, выделенные из ткани лимфоузлов 15 больных с клинически и цитологически установленным диагнозом РМЖ T2N1-3M0 стадии. Возраст больных РМЖ находился в пределах от 36 до 68 лет (медиана - 48 лет). Тотальную РНК выделяли из 200-300 мг ткани гистологически установленных нормальных лимфоузлов и из ПНИЛУ, реагентом Trizol (Invitrogen, США) по стандартному протоколу. Качество выделенной РНК определяли на спектрофотометре NanoDrop 1000 (Thermo FS) по соотношению оптических плотностей A260/A280 (использовались образцы только с коэффициентом 1,9-2,1). Выделенную РНК обрабатывали ДНКазой. Профиль экспрессии хемокинов и их рецепторов определяли методом флуоресцентной ПЦР в реальном времени с использованием набора Human Chemokines&Receptors PCR Array (Qiagen) в двух повторностях. Проведен анализ экспрессии следующих генов: хемокиновые (С-С мотив) лиганды: CCL1, CCL11, CCL13, CCL15, CCL16, CCL17, CCL18, CCL19, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CCL7, CCL8; хемокиновые (C-X-C мотив) лиганды: CXCL1, CXCL10, CXCL11, CXCL12, CXCL13, CXCL2, CXCL3, CXCL5, CXCL6, CXCL9; хемокиновые (С-С мотив) рецепторы: CCR1, CCR2, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR10, CCRLl, CCRL2; хемокиновые (С-Х-С мотив) рецепторы: CXCR5, CXCR3, CXCR4, CXCR6, CYFIP2; другие хемокины и родственные гены: APLNR, BDNF, С5, C5AR1 GPR77), CCBP2, CKLF, CMTM1, CMTM2, CMTM3, CMTM4, CMKLR1, CSF3, CX3CL1, CX3CR1, TYMP, GDF5, GPR31, HCAR1, HIF1A, IL13, IL16, IL18, IL1A, IL4, IL8, CXCR1, LTB4R, MMP2, MMP7, MYD88, NFKB1, AIMP1, SDF2, SLIT2, ТСР10, TLR2, TLR4, TNF, TNFRSF1A, TNFSF14, TREM1, VHL, XCL1, XCR1.The material for our study was RNA samples isolated from the lymph node tissue of 15 patients with a clinically and cytologically established diagnosis of breast cancer T 2 N 1-3 M 0 stage. The age of patients with breast cancer ranged from 36 to 68 years (median - 48 years). Total RNA was isolated from 200-300 mg of histologically established normal lymph node tissue and from PNILU, Trizol reagent (Invitrogen, USA) according to the standard protocol. The quality of the isolated RNA was determined on a NanoDrop 1000 spectrophotometer (Thermo FS) according to the ratio of optical densities A260 / A280 (only samples with a coefficient of 1.9-2.1 were used). Isolated RNA was treated with DNase. The expression profile of chemokines and their receptors was determined by real-time fluorescence PCR using the Human Chemokines & Receptors PCR Array kit (Qiagen) in duplicate. The expression of the following genes was analyzed: chemokine (CC motif) ligands: CCL1, CCL11, CCL13, CCL15, CCL16, CCL17, CCL18, CCL19, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CCL7, CCL8; chemokine (CXC motif) ligands: CXCL1, CXCL10, CXCL11, CXCL12, CXCL13, CXCL2, CXCL3, CXCL5, CXCL6, CXCL9; chemokine (CC motif) receptors: CCR1, CCR2, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR10, CCRLl, CCRL2; chemokine (C-X-C motive) receptors: CXCR5, CXCR3, CXCR4, CXCR6, CYFIP2; other chemokines and related genes: APLNR, BDNF, C5, C5AR1 GPR77), CCBP2, CKLF, CMTM1, CMTM2, CMTM3, CMTM4, CMKLR1, CSF3, CX3CL1, CX3CR1, TYMP, GDF5, GPR31, HC16 IL16, IL16 IL18, IL1A, IL4, IL8, CXCR1, LTB4R, MMP2, MMP7, MYD88, NFKB1, AIMP1, SDF2, SLIT2, TCP10, TLR2, TLR4, TNF, TNFRSF1A, TNFSF14, TREM1, VHL, XCL1, XCR1.
Анализ результатов экспрессии генов, построение точечных диаграмм и кластерограмм проводились с использованием облачного приложения, основанного на анализе ΔΔCt, на сайте производителя тестового набора [http://www.sabiosciences.com].Analysis of the results of gene expression, the construction of scatter charts and clusterograms was carried out using a cloud application based on ΔΔCt analysis on the site of the manufacturer of the test kit [http://www.sabiosciences.com].
Проведенный нами анализ экспрессии генов цитокинов и их рецепторов при образовании ПНИЛУ выявил повышение экспрессии генов CCL16, XCR1, CYFIP2, TNFSF14 и снижение экспрессии генов CXCL5 и CXCL12 (фиг.4).Our analysis of the expression of cytokine genes and their receptors during the formation of PNILU revealed an increase in the expression of the CCL16, XCR1, CYFIP2, TNFSF14 genes and a decrease in the expression of the CXCL5 and CXCL12 genes (Fig. 4).
В нашем исследовании экспрессия гена TNFRSF14 была повышена в 4,82 раза в ПНИЛУ. Белок, кодируемый геном TNFRSF14, является членом семейства лигандов рецепторов ФНО. Белок данного гена активирует два клеточных рецептора - рецептор клеточного проникновения вируса герпеса (HVEM, TNFRSF14) и рецептор лимфотоксина-β (РЛТ-б) [Marsters S.A., Ayres T.M., Skubatch M, Gray C.L., Rothe M, Ashkenazi A. Herpesvirus entry mediator, a member of the tumor necrosis factor receptor (TNFR) family, interacts with members of the TNFR-associated factor family and activates the transcription factors NF-kappaB and AP-1 / J.Biol. Chem., 1997. - Vol.272. -№22. - Р. 14029-14032]. Взаимодействие TNFRSF14-PЛT-б индуцирует каскад реакций, опосредованных транскрипционными факторами NF-кВ (Re1A и Re1B), индуцирующих экспрессию генов, участвующих в гомеостазе, таких как гены хемокинов организации ткани (CCL21, CXCL16 и др.) и межклеточных молекул адгезии (ICAM-1). TNFRSF14 совместно со своими лигандами-парологами, ФНО, ЛТ-а и ЛТ-б, иммуноглобулинами, аттенюатором В и Т лимфоцитов и CD160 формирует сложную мультисигнальную систему регуляции воспаления и гомеостаза иммунной системы [Soroosh P., Doherty Т., So Т. Herpesvirus entry mediator (TNFRSF14) regulates the persistence of T helper memory cell populations / J. Exp. Med., 2011. - Vol.208. - №4. - Р. 797-809].In our study, TNFRSF14 gene expression was 4.82-fold increased in PNILU. The protein encoded by the TNFRSF14 gene is a member of the TNF receptor ligand family. The protein of this gene activates two cell receptors - the herpes virus cell penetration receptor (HVEM, TNFRSF14) and the lymphotoxin-β receptor (RLT-b) [Marsters SA, Ayres TM, Skubatch M, Gray CL, Rothe M, Ashkenazi A. Herpesvirus entry mediator , a member of the tumor necrosis factor receptor (TNFR) family, interacts with members of the TNFR-associated factor family and activates the transcription factors NF-kappaB and AP-1 / J. Biol. Chem., 1997 .-- Vol. 272. -№22. - R. 14029-14032]. The interaction of TNFRSF14-PLT-b induces a cascade of reactions mediated by transcription factors NF-kB (Re1A and Re1B), inducing the expression of genes involved in homeostasis, such as tissue organization chemokine genes (CCL21, CXCL16, etc.) and intercellular adhesion molecules (ICAM -one). TNFRSF14 together with its parologic ligands, TNF, LT-a and LT-b, immunoglobulins, B and T attenuator of lymphocytes and CD160 forms a complex multisignal system for regulating inflammation and homeostasis of the immune system [Soroosh P., Doherty T., So T. Herpesvirus entry mediator (TNFRSF14) regulates the persistence of T helper memory cell populations / J. Exp. Med., 2011 .-- Vol. 208. - No. 4. - R. 797-809].
При аутоиммунных заболеваниях, характеризующихся хроническим воспалением, в генезисе которого принимают участие цитокины семейства ФНО (TNFRSF14), происходят характерные события, которые заключаются в проникновении антигенспецифических Т-клеток в орган-мишень, привлечении других Т-клеток, В-клеток и макрофагов, а также активации клеток, находящихся в этом месте. Длительная продукция цитокинов ФНО приводит к формированию организованных лимфоидных структур [там же].In autoimmune diseases characterized by chronic inflammation, in the genesis of which TNF family cytokines (TNFRSF14) take part, characteristic events occur that involve the penetration of antigen-specific T cells into the target organ, the involvement of other T cells, B cells and macrophages, and also activation of cells located in this place. Long-term production of TNF cytokines leads to the formation of organized lymphoid structures [ibid.].
В ходе проведенного анализа выявлено 30-кратное повышение экспрессии гена хемокина CCL16 в ПНИЛУ. Хемокиновый (С-С мотив) лиганд 16 (CCL16) является представителем небольшого семейства СС хемокинов, который известен под разными именами, в том числе хемокин, экспрессирующийся в печени (LEC) и Monotactin-1 (MTN-1). Хемокин CCL16 экспрессируется в тимусе, печени, селезенке и стимулирует миграцию моноцитов и лимфоцитов. Клеточная экспрессия CCL16 в моноцитах в значительной степени индуцируется IL-10, ИФ-γ и бактериальными липополисахаридами. Ген CCL16 располагается на хромосоме 17, в кластере генов CC хемокинов. CCL16 запускает каскад реакций, взаимодействуя с хемокиновыми рецепторами на поверхности клетки, такими как CCR1, CCR2, CCR5 и CCR8 [Nomiyama Н., Hieshima К., Nakayama Т., Sakaguchi Т. Human СС chemokine liver-expressed chemokine/CCL16 is a functional ligand for CCR1, CCR2 and CCR5, and constitutively expressed by hepatocytes / Int. Immunol., 2001. - Vol. 8. - P. 1021-1029]. В нашем исследовании также выявлено увеличение более чем в 4 раза экспрессии хемокина XCL1, отвечающего за миграцию Т-лимфоцитов. Хемокин XCL1 относится к небольшому семейству С хемокинов, сохранивших только 2 из 4 консервативных цистеинов, свойственных всем хемокинам, для хемотаксиса с Т-клетками. Ген располагается вместе с родственным хемокином XCL2 на длинном плече хромосомы 1. Экспрессируется CD8+Т клетками и активированными NK клетками [Dorner B.G., Dorner М.В., Zhou X., Opitz C., Kroczek R.A. Selective expression of the chemokine receptor XCR1 on cross-presenting dendritic cells determines cooperation with CD8+T cells / Immunity, 2009. - Vol. 31. - №5. - Р. 823-833].The analysis revealed a 30-fold increase in the expression of the chemokine CCL16 gene in PNILU. The chemokine (CC motif) ligand 16 (CCL16) is a member of the small family of CC chemokines, which is known by various names, including liver-expressed chemokine (LEC) and Monotactin-1 (MTN-1). Chemokine CCL16 is expressed in the thymus, liver, spleen and stimulates the migration of monocytes and lymphocytes. Cellular expression of CCL16 in monocytes is largely induced by IL-10, IF-γ, and bacterial lipopolysaccharides. The CCL16 gene is located on chromosome 17, in the cluster of CC chemokine genes. CCL16 triggers a cascade of reactions by interacting with chemokine receptors on the cell surface, such as CCR1, CCR2, CCR5 and CCR8 [Nomiyama N., Hieshima K., Nakayama T., Sakaguchi T. Human CC chemokine liver-expressed chemokine / CCL16 is a functional ligand for CCR1, CCR2 and CCR5, and constitutively expressed by hepatocytes / Int. Immunol., 2001. - Vol. 8. - P. 1021-1029]. Our study also revealed a more than 4-fold increase in the expression of the chemokine XCL1, which is responsible for the migration of T-lymphocytes. Chemokine XCL1 belongs to the small family C chemokines that retained only 2 of the 4 conserved cysteines common to all chemokines for chemotaxis with T cells. The gene is located together with the related chemokine XCL2 on the long arm of
Обнаружено увеличение экспрессии гена CYFIP2 в ПНИЛУ в 4,7 раза. Ген CYFIP2 кодирует цитоплазматический белок, взаимодействующий с продуктом гена ломкой хромосомы X (FMR1), экспрессируется, в основном, в тканях головного мозга, лейкоцитах и в почках. В настоящее время предполагается роль CYFIP2 в регуляции апоптоза. Считается, что индуцибельный онкосупрессором р53 белок CYFIP2 выполняет проапоптотическую функцию в РК [Jackson R.S. 2nd, Cho Y.J., Stein S., Liang P. CYFIP2, a direct p53 target, is leptomycin-B sensitive / Cell Cycle, 2007. - Vol.6. -№l. - Р.95-103].A 4.7-fold increase in CYFIP2 gene expression in PNILU was detected. The CYFIP2 gene encodes a cytoplasmic protein interacting with the fragile chromosome X gene product (FMR1) and is expressed mainly in brain tissues, white blood cells, and kidneys. The role of CYFIP2 in the regulation of apoptosis is currently contemplated. It is believed that the CY53IP2 inducible oncosuppressor p53 protein performs a proapoptotic function in the PK [Jackson R.S. 2nd, Cho Y.J., Stein S., Liang P. CYFIP2, a direct p53 target, is leptomycin-B sensitive / Cell Cycle, 2007 .-- Vol. 6. -№l. - P.95-103].
Исследования ряда авторов показали, что хемокиновые рецепторы CCR7 и CXCR4 экспрессируются на высоком уровне в клетках РМЖ. Тогда как их соответствующие лиганды, вторичные лимфоидные хемокины (SLC/CCL21) и CXCL12 продуцируются лимфатическим эндотелием в лимфатических узлах, костном мозге, легких, печени, которые представляют собой преимущественные места метастазирования при РМЖ [Muller A., Homey В., Soto Н., Ge N., Catron D., Buchanan M.E., McClanahan Т., Murphy E., Yuan W., Wagner S.N., Barrera J.L., Mohar A., Verastegui E., Zlotnik A. Involvement of chemokine receptors in breast cancer metastasis / Nature, 2001. - Vol. 410. - P. 50-56; GunnM., Tangemann K., Tam C, Cyster J., Rosen S., Williams L. A chemokine expressed in lymphoid high endothelial venules promotes the adhesion and chemotaxis of naive T lymphocytes / Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1998. - Vol.95. - P. 258-263]. Ингибирование взаимодействия CXCL12/CXCR4 существенно редуцирует метастазирование РК при РМЖ в лимфатические узлы и легкие [там же]. Такого типа молекулярные сигналы должны представлять собой наиболее общий механизм наведения опухолевых клеток на специфические места предназначения и могут представлять собой потенциальную терапевтическую мишень для ингибирования прогрессирования опухолей до летальных заболеваний от метастазов [Zlotnik A. Chemokines in neoplastic progression / Semin. Cancer Biol., 2004. - Vol.14. - №3. - Р. 181-185]. Полученные нами данные показали снижение экспрессии вторичных лимфоидных хемокинов CXCL12 в 5,8 раз и CXCL5 в 5,27 раза в ПНИЛУ (фиг.5).Studies by several authors have shown that the chemokine receptors CCR7 and CXCR4 are expressed at a high level in breast cancer cells. Whereas their respective ligands, secondary lymphoid chemokines (SLC / CCL21) and CXCL12 are produced by the lymphatic endothelium in the lymph nodes, bone marrow, lungs, and liver, which are the predominant metastasis sites for breast cancer [Muller A., Homey B., Soto N. , Ge N., Catron D., Buchanan ME, McClanahan T., Murphy E., Yuan W., Wagner SN, Barrera JL, Mohar A., Verastegui E., Zlotnik A. Involvement of chemokine receptors in breast cancer metastasis / Nature, 2001. - Vol. 410. - P. 50-56; GunnM., Tangemann K., Tam C, Cyster J., Rosen S., Williams L. A chemokine expressed in lymphoid high endothelial venules promotes the adhesion and chemotaxis of naive T lymphocytes / Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1998 .-- Vol. 95. - P. 258-263]. Inhibition of the interaction of CXCL12 / CXCR4 significantly reduces the metastasis of PK in breast cancer to the lymph nodes and lungs [ibid.]. Molecular signals of this type should represent the most general mechanism for targeting tumor cells to specific destinations and may represent a potential therapeutic target for inhibiting tumor progression to fatal diseases from metastases [Zlotnik A. Chemokines in neoplastic progression / Semin. Cancer Biol., 2004 .-- Vol. 14. - Number 3. - R. 181-185]. Our data showed a decrease in the expression of secondary lymphoid chemokines CXCL12 by 5.8 times and CXCL5 by 5.27 times in PNILU (Fig. 5).
Возможно, снижение экспрессии лигандов к хемокиновым рецепторам CXCR2 и CXCR4, высоко представленных на мембране РК, уменьшает вероятность миграции клеток в ПНИЛУ, препятствуя метастазированию опухоли.Possibly, a decrease in the expression of ligands to the chemokine receptors CXCR2 and CXCR4, highly represented on the PK membrane, reduces the probability of cell migration to PNILU, preventing tumor metastasis.
Выполненное исследование позволило выдвинуть гипотезу о том, что полученную из ПНИЛУ биологическую субстанцию можно будет использовать для лечения рака, третичной профилактики онкологических заболеваний.The study made it possible to put forward a hypothesis that the biological substance obtained from PNILU can be used to treat cancer and tertiary cancer prevention.
В региональной лимфатической системе в области опухоли по току лимфы отмечается рост ПНИЛУ [патент RU №2422914, 2011 г.]. Способ получения предлагаемого биоматериала заключается в гомогенизации ПНИЛУ, его последующей экстракции и отделении супернатанта путем центрифугирования с последующей лиофилизацией. При получении данного биоматериала не используются клетки, полученные из пораженного злокачественной опухолью органа. Биоматериал представляет собой лиофильно высушенный экстракт ПНИЛУ серого цвета с желтым оттенком.In the regional lymphatic system in the area of the tumor along the lymphatic current, there is an increase in PNILU [patent RU No. 2422914, 2011]. A method of obtaining the proposed biomaterial is the homogenization of PNILU, its subsequent extraction and separation of the supernatant by centrifugation followed by lyophilization. Upon receipt of this biomaterial, cells obtained from an organ affected by a malignant tumor are not used. The biomaterial is a freeze-dried PNILO extract of gray color with a yellow tint.
Пример 1. После иссечения у больного раком ПНИЛУ, из него готовят гомогенат и разбавляют 0,85-0,9% раствором натрия хлорида в соотношении 1:10. Экстракцию производят 24 часа при температуре 3±0,5°C и значении pH 7,0, центрифугируют 10 минут при 3000 об/мин при температуре 1°C. Полученный супернатант сливают в емкость и лиофилизируют. Полученный биоматериал представляет собой лиофильно высушенный экстракт ПНИЛУ серого цвета с желтым оттенком.Example 1. After excision in a patient with cancer, PNILU, a homogenate is prepared from it and diluted with 0.85-0.9% sodium chloride solution in a ratio of 1:10. The extraction is carried out for 24 hours at a temperature of 3 ± 0.5 ° C and a pH value of 7.0, centrifuged for 10 minutes at 3000 rpm at a temperature of 1 ° C. The resulting supernatant is poured into a container and lyophilized. The resulting biomaterial is a lyophilized dried PNILU extract of gray color with a yellow tint.
Наиболее близким аналогом средства с биоматериалом, стимулирующим противоопухолевую активность, является средство для лечения онкологических заболеваний в виде раствора для инъекций при следующем соотношении компонентов (мас.%): 5-фторурацил - 0,087, метронидазол - 0,5, вода для инъекций - 1,841, низкомолекулярный полиэтилен - 66,527, эмульгатор Т-2 - 16,778, лутрол F 127 (Lutrol F 127) -1,677, кремофор RH 40 (Cremofor RH 40) - 2,520, масло оливковое - 10,070 [патент RU 2445097, 2012 г.].The closest analogue of an agent with biomaterial that stimulates antitumor activity is an agent for the treatment of cancer in the form of a solution for injection in the following ratio of components (wt.%): 5-fluorouracil - 0.087, metronidazole - 0.5, water for injection - 1.841, low molecular weight polyethylene - 66.527, emulsifier T-2 - 16.778, lutrol F 127 (Lutrol F 127) -1.677, cremophor RH 40 (Cremofor RH 40) - 2.520, olive oil - 10.070 [patent RU 2445097, 2012].
Задачей изобретения является расширение арсенала средств для лечения онкологических заболеваний.The objective of the invention is to expand the arsenal of funds for the treatment of cancer.
Технический результат - получение нового средства отечественного производства, содержащего предлагаемый биоматериал, стимулирующий противоопухолевую активность, эффективного при инъекционном пути введения с равномерным распределением в тканях за счет композиции инъекционного растворителя, с выраженным пролонгированным действием, удобного в применении.EFFECT: obtaining a new domestic product containing the proposed biomaterial that stimulates antitumor activity, is effective for the injection route of administration with a uniform distribution in the tissues due to the composition of the injection solvent, with a pronounced prolonged action, convenient to use.
Указанный технический результат достигается тем, что средство, стимулирующее противоопухолевую активность, в виде раствора для инъекций, содержащего действующее вещество и растворитель, включающий воду для инъекций, кремофор RH-40, эмульгатор Т-2 и масло растительное, согласно изобретению действующее вещество и растворитель взяты в соотношении 1:2, при этом в качестве действующего вещества содержит лиофилизат постнатальных индуцированных лимфатических узлов больного раком, растворитель дополнительно содержит глицерин, коллидон CL-M и бензиловый спирт, а в качестве масла растительного содержит масло персиковое при следующем соотношении компонентов, мас.%:The specified technical result is achieved in that the agent that stimulates the antitumor activity in the form of an injection for injection containing the active substance and a solvent including water for injection, Cremophor RH-40, T-2 emulsifier and vegetable oil, according to the invention, the active substance and solvent are taken in a ratio of 1: 2, while the active substance contains a lyophilisate of postnatal induced lymph nodes of a cancer patient, the solvent additionally contains glycerin, CL-M collidone and bin yl alcohol, and as the vegetable oil comprises oil peach in the following ratio, wt.%:
Масло персиковое (ГОСТ 21314-75) - растительное масло, извлекаемое из персиковых косточек. Персиковое масло применяется для приготовления инъекционных растворов витаминов (эргокальциферола, ретинола ацетата), гормонов (прогестерона, синестрола, тестостерона пропионата и др.), камфоры, кризанола, а также взвесей (бийохинола).Peach oil (GOST 21314-75) is a vegetable oil extracted from peach kernels. Peach oil is used for the preparation of injection solutions of vitamins (ergocalciferol, retinol acetate), hormones (progesterone, sinestrol, testosterone propionate, etc.), camphor, krizanol, as well as suspensions (bioquinol).
Глицерин (ФС 42-2202-84) - нелетучий сорастворитель.Glycerin (FS 42-2202-84) is a non-volatile co-solvent.
Кремофор RH-40 (Cremofor® RH-40) BASF (Германия) №013635/01-2002 - оксиэтилированное гидрогенизированное касторовое масло, улучшает структуру растворителя, повышает биодоступность введенных в состав действующих веществ за счет поверхностно-активных свойств.Cremophor RH-40 (Cremofor® RH-40) BASF (Germany) No. 013635 / 01-2002 - ethoxylated hydrogenated castor oil, improves the structure of the solvent, increases the bioavailability of the active ingredients introduced into the composition due to surface-active properties.
Эмульгатор Т-2 (ТУ 18-17-05-76) придает массе достаточную упругость, использован в качестве стабилизатора, пластификатора и эмульгатора, улучшает структуру растворителя, повышает биодоступность введенных в состав действующих веществ за счет поверхностно-активных свойств.The emulsifier T-2 (TU 18-17-05-76) gives the mass sufficient elasticity, is used as a stabilizer, plasticizer and emulsifier, improves the structure of the solvent, increases the bioavailability of the active ingredients introduced into the composition due to surface-active properties.
Коллидон CL-M Kollidon® CL-M BASF (Германия) - белый гигроскопичный порошок. Загуститель. Нетоксичен, представляет собой тонкодисперсный порошок с низкой объемной плотностью, причем 90% частиц имеют размер менее 15 микрон. Это вещество служит стабилизатором суспензий в жидких лекарственных формах для перорального применения. При введении в организм коллидон способствует рассасыванию действующего вещества из места инъекции, что, в свою очередь, повышает биодоступность композиции, а также снижает риск местных побочных явлений. Увеличение содержания коллидона выше 5,5 мас.% приводит к сильному увеличению вязкости и соответственно ухудшению прохождения композиции через иглу шприца. Концентрации коллидона менее 0,1% в композиции недостаточно для стабильного комплексообразования.Kollidon CL-M Kollidon® CL-M BASF (Germany) is a white hygroscopic powder. Thickener. Non-toxic, it is a fine powder with a low bulk density, with 90% of the particles having a size of less than 15 microns. This substance serves as a stabilizer for suspensions in liquid dosage forms for oral administration. When introduced into the body, collidone promotes the resorption of the active substance from the injection site, which, in turn, increases the bioavailability of the composition, and also reduces the risk of local side effects. The increase in the content of collidone above 5.5 wt.% Leads to a strong increase in viscosity and, accordingly, the deterioration of the passage of the composition through the syringe needle. A collidone concentration of less than 0.1% in the composition is not sufficient for stable complexation.
Бензиловый спирт ГОСТ 8751-72 - консервант, применяется для обеззараживания масляных растворов препаратов для внутримышечного введения в фармакологии.GOST 8751-72 benzyl alcohol is a preservative; it is used to disinfect oily solutions of drugs for intramuscular administration in pharmacology.
Пример 2. Состав 100,0 эмульсии растворителя биоматериала: вода для инъекций - 61,76; масло персиковое - 10,64; глицерин - 10,64; кремофор RH-40 (Cremofor RH-40) - 5,32; эмульгатор Т-2 - 5,32; коллидон CL-M - 5,32; бензиловый спирт - 1,0.Example 2. The composition of a 100.0 biomaterial solvent emulsion: water for injection - 61.76; peach oil - 10.64; glycerin - 10.64; Cremophor RH-40 (Cremofor RH-40) - 5.32; emulsifier T-2 - 5.32; collidone CL-M - 5.32; benzyl alcohol - 1.0.
Получают эмульсию инъекционного растворителя следующим образом.An injection solvent emulsion is prepared as follows.
На водяной бане расплавляют кремофор RH-40 (Cremofor RH-40), эмульгатор Т-2, коллидон CL-M при температуре 70°C в выпарительной чашке. К сплаву добавляют масло персиковое, глицерин и 5% воды для инъекций. Водную фазу эмульгируют. К полученному составу добавляют остальное количество воды для инъекций. Состав эмульгируют в течение 20 минут. К полученной смеси добавляют бензиловый спирт. Полученную композицию тщательно перемешивают, фильтруют, расфасовывают в стерильные флаконы под обкатку и стерилизуют при 100°C 30 минут.In a water bath, cremophor RH-40 (Cremofor RH-40), emulsifier T-2, collidone CL-M are melted at a temperature of 70 ° C in an evaporation cup. Peach oil, glycerin and 5% water for injection are added to the alloy. The aqueous phase is emulsified. The remaining amount of water for injection is added to the resulting composition. The composition is emulsified for 20 minutes. Benzyl alcohol is added to the resulting mixture. The resulting composition is thoroughly mixed, filtered, packaged in sterile bottles for running in and sterilized at 100 ° C for 30 minutes.
Готовое средство инъекционного растворителя биоматериала в виде эмульсии представляет собой однородную вязкую массу белого цвета с желтоватым оттенком, плотность - 1,14 г/см3, pH - 6,2. Полученный раствор - эмульсия для инъекций имеет жидкую однородную вязкую консистенцию.The finished product of the injection solvent of the biomaterial in the form of an emulsion is a homogeneous viscous mass of white color with a yellowish tint, density - 1.14 g / cm 3 , pH - 6.2. The resulting solution - an emulsion for injection has a liquid uniform viscous consistency.
Пример 3.Example 3
После иссечения ПНИЛУ из него готовят гомогенат и разбавляют 0,85-0,9% раствором натрия хлорида в соотношении 1:10. Экстракцию производят 24 часа при температуре 3±0,5°C и значении pH 7,0, центрифугируют 10 минут при 3000 об/мин при температуре 1°C. Полученный супернатант сливают в емкость, лиофилизируют и растворяют в эмульсии инъекционного растворителя в соотношении 2:1 (эмульсия: лиофилизат). За счет консистенции и физико-химических свойств композиции полученный раствор надежно удерживается в тканях при инъекционном введении, за счет компонентов растворителя оказывает пролонгированное действие действующего вещества. Получаемый раствор инъекционный биоматериала удобен и гигиеничен в применении.After excising PNILU, a homogenate is prepared from it and diluted with 0.85-0.9% sodium chloride solution in a ratio of 1:10. The extraction is carried out for 24 hours at a temperature of 3 ± 0.5 ° C and a pH value of 7.0, centrifuged for 10 minutes at 3000 rpm at a temperature of 1 ° C. The resulting supernatant is poured into a container, lyophilized and dissolved in an emulsion of an injection solvent in a ratio of 2: 1 (emulsion: lyophilisate). Due to the consistency and physicochemical properties of the composition, the resulting solution is reliably retained in the tissues by injection, due to the components of the solvent it has a prolonged action of the active substance. The resulting injection solution of biomaterial is convenient and hygienic to use.
В доступной научно-медицинской и патентной литературе не было обнаружено сведений об известности предлагаемого биоматериала, стимулирующего противоопухолевую активность, содержащего лиофилизат ПНИЛУ больного раком, а также средства, содержащего лиофилизат ПНИЛУ больного раком в качестве действующего вещества, а в качестве растворителя воду для инъекций, кремофор RH-40, эмульгатор Т-2, масло персиковое, глицерин, коллидон CL-M и бензиловый спирт. Таким образом, заявляемая группа изобретений соответствует критерию «новизна».In the available scientific, medical and patent literature, no information was found on the popularity of the proposed biomaterial that stimulates antitumor activity containing the PNILU lyophilizate of a patient with cancer, as well as the agent containing the PNILU lyophilizate of a cancer patient as an active substance, and as a solvent, water for injection, cremophor RH-40, T-2 emulsifier, peach oil, glycerin, CL-M collidone and benzyl alcohol. Thus, the claimed group of inventions meets the criterion of "novelty."
Исследованиями авторов установлено, что предлагаемый биоматериал, стимулирующий противоопухолевую активность, содержащий лиофилизат ПНИЛУ больного раком, при, например, инъекционном введении в виде раствора, содержащего биоматериал в качестве действующего вещества, а в качестве растворителя воду для инъекций, кремофор RH-40, эмульгатор Т-2, масло персиковое, глицерин, коллидон CL-M и бензиловый спирт при определенном соотношении компонентов, обеспечивает торможение роста опухоли и увеличение продолжительности жизни. Таким образом, заявляемая группа изобретений соответствует критерию «изобретательский уровень».The authors found that the proposed biomaterial that stimulates antitumor activity containing the PNILU lyophilizate of a patient with cancer, for example, by injection in the form of a solution containing biomaterial as an active substance, and as a solvent water for injection, cremophor RH-40, emulsifier T -2, peach oil, glycerin, CL-M collidone and benzyl alcohol at a certain ratio of components, provides inhibition of tumor growth and an increase in life expectancy. Thus, the claimed group of inventions meets the criterion of "inventive step".
Получение предлагаемых биоматериала и средства с биоматериалом, стимулирующих противоопухолевую активность, легко воспроизводимо и при использовании достигается указанный технический результат. Таким образом, заявляемая группа изобретений соответствует критерию «промышленная применимость».Obtaining the proposed biomaterial and funds with biomaterial that stimulate antitumor activity is easily reproducible and when using this technical result is achieved. Thus, the claimed group of inventions meets the criterion of "industrial applicability".
Claims (3)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013128699/15A RU2526160C1 (en) | 2013-06-25 | 2013-06-25 | Biomaterial and preparation with biomaterial, stimulating anti-tumour activity |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013128699/15A RU2526160C1 (en) | 2013-06-25 | 2013-06-25 | Biomaterial and preparation with biomaterial, stimulating anti-tumour activity |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2526160C1 true RU2526160C1 (en) | 2014-08-20 |
Family
ID=51384756
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2013128699/15A RU2526160C1 (en) | 2013-06-25 | 2013-06-25 | Biomaterial and preparation with biomaterial, stimulating anti-tumour activity |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2526160C1 (en) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2257904C2 (en) * | 2003-05-21 | 2005-08-10 | Восточно-Сибирский государственный технологический университет | Immunomodulator preparation method |
| RU2445097C1 (en) * | 2010-12-03 | 2012-03-20 | Виталий Алексеевич Лиходед | Method for treating female genital cancer with 5-fluorouracil and metronidazole |
-
2013
- 2013-06-25 RU RU2013128699/15A patent/RU2526160C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2257904C2 (en) * | 2003-05-21 | 2005-08-10 | Восточно-Сибирский государственный технологический университет | Immunomodulator preparation method |
| RU2445097C1 (en) * | 2010-12-03 | 2012-03-20 | Виталий Алексеевич Лиходед | Method for treating female genital cancer with 5-fluorouracil and metronidazole |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Xiang et al. | Targeting tumor-associated macrophages to synergize tumor immunotherapy | |
| Vieira et al. | A crucial role for TNF‐α in mediating neutrophil influx induced by endogenously generated or exogenous chemokines, KC/CXCL1 and LIX/CXCL5 | |
| Netea et al. | Circulating cytokines as mediators of fever | |
| CN105008521B (en) | The method for adjusting the immunoregulation effect of stem cell | |
| Gantsev et al. | The role of inflammatory chemokines in lymphoid neoorganogenesis in breast cancer | |
| AU2009329544B2 (en) | Pharmaceutical preparation | |
| KR20190084207A (en) | Medium regeneration medium of adipose tissue-derived mesenchymal stromal cells and their preparation and use | |
| BR112019020214A2 (en) | replacement of cytotoxic preconditioning before cell immunotherapy | |
| CN107530376A (en) | Combined immunization therapy and cell factor control therapy for treatment of cancer | |
| JP5036546B2 (en) | Thymus-specific protein | |
| EP1753452B1 (en) | A method for altering the cd4/cd8 ratio and the mononuclear cellular infiltrate into a tumor | |
| CA3006302C (en) | Method of ex vivo enhancement of immune cell activity for cancer immunotherapy with a small molecule ablative compound | |
| WO2007043630A1 (en) | Nkt cell-stimulating agent for administration through upper respiratory tract mucous membrane | |
| EP3111945B1 (en) | Dendritic cells for use in the treatment of myocardial infarction | |
| Zhang et al. | Enhancement of innate and adaptive anti-tumor immunity by serum obtained from vascular photodynamic therapy-cured BALB/c mouse | |
| MX2010012985A (en) | Mechanism of action of primary cell derived biologic. | |
| KR20190039145A (en) | Use of IL-12 as an alternative immunotherapy | |
| RU2526160C1 (en) | Biomaterial and preparation with biomaterial, stimulating anti-tumour activity | |
| TW202206591A (en) | Method for ex vivo expanding natural killer cells and natural killer t cells | |
| Shinde et al. | Optimal CD4 T cell priming after LPS-based adjuvanticity with CD134 costimulation relies on CXCL9 production | |
| CN107299138B (en) | Gene screening method for treating tumor and accelerating tumor re-proliferation after chemotherapy by CXCL4 monoclonal antibody | |
| EP1367393A1 (en) | Methods for using the CD 163 pathway for modulating an immune response | |
| Chernykh et al. | Autologous bone marrow cells in the treatment of cirrhosis of the liver | |
| US20080131396A1 (en) | Method for altering the CD4/CD8 ratio and the mononuclear cellular infiltrate into a tumor | |
| JP2022527697A (en) | A composition for the prevention or treatment of graft-versus-host disease containing a TLR5 agonist derived from flagellin as an active ingredient. |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20160626 |
|
| TK4A | Correction to the publication in the bulletin (patent) |
Free format text: AMENDMENT TO CHAPTER -MM4A - IN JOURNAL: 7-2017 |
|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20190626 |