RU2524624C2 - Система реального времени, способ калибровки системы и одновременное обнаружение остатков антибиотиков и их концентраций в молоке - Google Patents
Система реального времени, способ калибровки системы и одновременное обнаружение остатков антибиотиков и их концентраций в молоке Download PDFInfo
- Publication number
- RU2524624C2 RU2524624C2 RU2012126473/15A RU2012126473A RU2524624C2 RU 2524624 C2 RU2524624 C2 RU 2524624C2 RU 2012126473/15 A RU2012126473/15 A RU 2012126473/15A RU 2012126473 A RU2012126473 A RU 2012126473A RU 2524624 C2 RU2524624 C2 RU 2524624C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- milk
- antibiotics
- enzyme
- concentration
- galactose
- Prior art date
Links
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 title claims abstract description 139
- 239000008267 milk Substances 0.000 title claims abstract description 139
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 title claims abstract description 139
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 title claims abstract description 46
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 title claims abstract description 45
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 12
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title description 7
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 62
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims abstract description 62
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 60
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 57
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 57
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims abstract description 31
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 claims abstract description 31
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims abstract description 31
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 claims abstract description 31
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims abstract description 31
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 claims abstract description 27
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 claims abstract description 27
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 claims abstract description 25
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims abstract description 22
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims abstract description 22
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 20
- 230000007423 decrease Effects 0.000 claims abstract description 17
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 claims abstract description 15
- 230000007704 transition Effects 0.000 claims abstract description 12
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 claims abstract description 8
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 52
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 13
- 108010015133 Galactose oxidase Proteins 0.000 claims description 8
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 7
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 claims description 7
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 claims description 6
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims description 6
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 claims description 5
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 claims description 4
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 claims description 4
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 claims description 4
- 235000020185 raw untreated milk Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 claims description 3
- 230000005684 electric field Effects 0.000 claims description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 claims description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 2
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 claims description 2
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 claims description 2
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 claims description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 claims 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 abstract description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 244000144972 livestock Species 0.000 abstract 1
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 6
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 4
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 4
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 3
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 3
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 2
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 2
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 2
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 2
- 230000004941 influx Effects 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 239000003782 beta lactam antibiotic agent Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-FPRJBGLDSA-N beta-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-FPRJBGLDSA-N 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000013500 data storage Methods 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 1
- VAYGXNSJCAHWJZ-UHFFFAOYSA-N dimethyl sulfate Chemical compound COS(=O)(=O)OC VAYGXNSJCAHWJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000005802 health problem Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 235000019371 penicillin G benzathine Nutrition 0.000 description 1
- 229940056360 penicillin g Drugs 0.000 description 1
- 238000007781 pre-processing Methods 0.000 description 1
- 238000004451 qualitative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 238000012106 screening analysis Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000012549 training Methods 0.000 description 1
- 239000002132 β-lactam antibiotic Substances 0.000 description 1
- 229940124586 β-lactam antibiotics Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/001—Enzyme electrodes
- C12Q1/005—Enzyme electrodes involving specific analytes or enzymes
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/02—Food
- G01N33/04—Dairy products
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Abstract
Группа изобретений относится к области животноводства и молочного производства и предназначена для обнаружения остатков антибиотиков в молоке. Заявлен способ с использованием заявленной системы и способ калибровки данной системы. Система содержит каналы притока молока и термостатированные параллельные каналы потока молока. Каналы содержат кислородные датчики, интегрированные с разными ферментами и один без фермента. Система также содержит средство сепарации нестандартного молока и устройство гидролиза, расположенное между каналом притока молока и параллельными каналами потока молока, и биодатчики. Устройство гидролиза содержит средство для гидролиза лактозы для получения заданных равных концентраций глюкозы и галактозы в каждой исследуемой пробе молока. Каждый биодатчик интегрирован с разным ферментом, который катализирует окисление глюкозы и галактозы молекулярным растворенным кислородом. Каталитическая активность упомянутых ферментов увеличивается или уменьшается в присутствии антибиотиков. Количество упомянутых ферментов достаточно для генерирования уменьшения переходной фазы концентрации кислорода, которая измеряется с заданной точностью перед тем, как анализируемое молоко смешивается с молоком высокого качества. 3 с. и 5 з.п. ф-лы, 1 ил., 1 пр.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к области оценивания качества молока и определения остатков, присутствующих в молоке.
Уровень техники
Антибиотики используются для лечения воспалительных процессов и в некоторых странах как пищевые добавки в сельскохозяйственную продукцию. Неправильное использование антибиотиков может привести к их появлению в молоке и, соответственно, загрязнению молока, что, в свою очередь, может вызвать проблемы, связанные со здоровьем, и риски развития устойчивости микроорганизмов; а также проблемы в молочной отрасли путем оказания воздействия на процессы ферментации. Чтобы устранить проблемы, связанные с загрязнением молока, установлены максимальные остаточные уровни (MRL) для антибиотиков в молоке (Постановление Европейского Совета №2377/90).
Для определения остатков антибиотиков в молоке используются следующие известные способы:
а) испытания на уменьшение действия микроорганизмов (Delvotest, BrTest и т.д.; ЕР0005891, US5454805, ЕР0285792, ЕР1216307) для проведения, скрининга и качественного анализа на фермах. Эти испытания основаны на колориметрических реакциях, имеющих место во время роста микроорганизмов, используемых в испытаниях (время испытания 2-3 часа);
b) «быстрые испытания», позволяющие обнаружить, в основном, β-lactam антибиотики в течение 10-15 минут, основанные на различных технологиях (испытания Penzym, Betastar, Charm II; ЕР0538447, US6043048);
c) хроматографические анализы, позволяющие осуществить и качественное, и количественное определение остатков антибиотиков. Эти анализы очень дорогие и требуют много времени (предварительная обработка проб и их анализ занимает 1-2 дня).
Также остатки антибиотиков можно определить с помощью технологий QSM (Park и др., Биодатчики и Биоэлектроника. 19, 667-674, 2004) или SPR (Gaudin и др., Analitica Chimica Acta. 436, 191-198, 2001), основанных на биодатчиках.
Ни одна из вышеупомянутых технологий не позволяет обнаружить остатки антибиотиков или определить их концентрации в реальном времени, т.е. во время доения коровы, и не делает возможным производить сепарацию нестандартного молока в реальном времени.
Наиболее близкой к настоящему изобретению является система обнаружения антибиотиков, основанная на применении гаптенов (неполноценных антигенов) в качестве системы биологического опознавания в массиве биодатчиков (Knecht и др., Analytical Chemistry. 76, 646-654, 2004). В данном массиве биодатчиков различные моноклональные антитела фиксируются на стеклянной подложке. Эти антитела, отбираемые по отношению к конкретным антибиотикам, генерируют хемилюминесцентные сигналы в присутствии антибиотиков. Такой массив дает возможность одновременно обнаружить 10 различных антибиотиков. Система очень чувствительна и требуется только 5 минут для обнаружения антибиотиков. Основным недостатком системы является низкая скорость регенерации системы, поэтому система не применяется для приспособлений реального времени.
Раскрытие изобретения
Настоящее изобретение предлагает систему реального времени, способ калибровки системы и одновременное обнаружение остатков антибиотиков и их концентраций в молоке. Изобретение позволяет оценивать качество молока в реальном времени и сепарацию нестандартного молока в реальном времени, чтобы не допустить загрязнение молочной продукции.
Первой целью изобретения является система реального времени для одновременного обнаружения антибиотиков и определения их концентрации в молоке, которая содержит каналы для притока и оттока молока и термостатированные параллельные идентичные каналы для потока молока, каждый из которых содержит кислородный датчик, интегрированный с разным ферментом, и вместе образуют массив биодатчиков. Система содержит устройство обработки сигналов, которое соединено со средством для сепарации нестандартного молока. Чтобы осуществить одновременное обнаружение различных антибиотиков и определение их концентраций в реальном времени, в течение времени доения, система содержит дополнительный параллельный канал для потока молока, включающий в себя кислородный датчик без фермента. Все кислородные датчики, используемые в изложенной системе, могут быть оптическими, амперометрическими или потенциометрическими. Также система содержит термостатированное гидролизное устройство, расположенное между каналом притока молока и параллельными каналами потока молока, которое включает в себя физическое и/или химическое средство стимулирования гидролиза лактозы для генерации равных заданных концентраций глюкозы и галактозы во всех пробах молока. Физическое средство может быть прибором, генерирующим ультразвук, импульсное магнитное поле или электрическое поле, химическим средством может быть катализатор (как β-галактозидаза или другой фермент, катализирующий гидролиз лактозы).
В массиве биодатчиков каждому кислородному датчику присоединен разный фермент, катализирующий окисление глюкозы и галактозы (глюкозооксидаза, оксидаза галактозы или другой фермент, принадлежащий к классу оксидоредуктаз), каталитическая активность которого повышается или понижается, когда антибиотики присутствуют в пробе молока. Количество ферментов должно быть достаточным для генерации уменьшения переходной фазы концентрации кислорода, которое измеряется с определенной (заданной) точностью перед тем, как анализируемое молоко смешивается с молоком высокого качества.
Второй целью изобретения является способ калибровки вышеизложенной системы, содержащий следующие этапы:
а) лактоза в пробе молока без антибиотиков и в пробе молока, которая загрязняется определенным количеством различных антибиотиков, быстро гидролизируется для генерации определенных (заданных) равных концентраций продуктов гидролиза лактозы, глюкозы и галактозы, превышающих концентрации глюкозы и галактозы в необработанном молоке, по меньшей мере, в 10 раз. Этот гидролиз позволяет получить равные концентрации глюкозы и галактозы во всех пробах молока, так как типичная концентрация лактозы в молоке очень стабильна (140±3 тМ) и превышает типичные концентрации глюкозы и галактозы в молоке более чем в 1000 раз;
b) каждая проба молока, полученная на этапе а) (т.е. пробы, в которых концентрации глюкозы и галактозы достигли определенных (заданных) значений после гидролиза лактозы), направляется в параллельные каналы потока молока, где благодаря каталитической активности ферментов, присутствующих в биодатчиках, глюкоза и галактоза окисляются молекулярным растворенным кислородом, и уменьшения концентрации кислорода в переходной фазе во время реакции окисления в каждом параллельном канале потока молока измеряются массивом биодатчиков в каждой пробе молока;
c) первоначальная концентрация молекулярного растворенного кислорода в каждой пробе молока, полученная на этапе а), измеряется одновременно с помощью кислородного датчика без ферментов;
d) для проб молока без антибиотиков вычисляются параметр стационарного состояния и кинетический параметр для каждой реакции, протекающей в другом биодатчике и катализируемой ферментом, имеющимся в этом биодатчике, на основе уменьшения переходной фазы концентрации кислорода во время реакции окисления глюкозы и галактозы и концентрации молекулярного растворенного кислорода, измеряемой кислородным датчиком без ферментов, и эти вычисленные параметры для различных биодатчиков комбинируются для формирования характерного образа пробы молока без антибиотиков;
е) для проб молока, загрязненных определенными количествами различных антибиотиков, вычисляются параметр стационарного состояния и кинетический параметр для каждой реакции, протекающей в другом биодатчике и катализируемой ферментом, имеющимся в этом биодатчике, на основе уменьшения переходной фазы концентрации кислорода во время реакции окисления глюкозы и галактозы и концентрации молекулярного растворенного кислорода, измеряемой кислородным датчиком без ферментов. На основании комбинации этих вычисленных параметров для различных биодатчиков формируется характерный образ или характерный признак каждого антибиотика и его концентрации.
Следующей целью изложенного изобретения является способ одновременного обнаружения в реальном времени различных антибиотиков и определения их концентраций в молоке с использованием вышеизложенной системы.
Способ содержит следующие этапы:
a) лактоза в исследуемых термостатированных пробах молока быстро гидролизируется для получения определенных (заданных) равных концентраций глюкозы и галактозы, превышающих концентрации глюкозы и галактозы в необработанном молоке, по меньшей мере, в 10 раз;
b) уменьшение переходной фазы концентраций кислорода во время реакций окисления глюкозы и галактозы измеряется массивом биодатчиков в исследуемой пробе молока;
c) концентрация молекулярного растворенного кислорода в исследуемой пробе молока одновременно измеряется с помощью кислородного датчика без ферментов;
d) для исследуемых проб молока вычисляются параметр стационарного состояния и кинетический параметр для каждой реакции, протекающей в другом биодатчике и катализируемой ферментом, имеющимся в этом биодатчике, на основе уменьшения переходной фазы концентрации кислорода во время реакции окисления глюкозы и галактозы и концентрации молекулярного растворенного кислорода, измеряемой кислородным датчиком без ферментов, и на основании комбинации всех параметров для различных биодатчиков формируется характерный образ исследуемой пробы молока;
e) образ исследуемой пробы молока сравнивается с калиброванными характерными признаками различных антибиотиков, и если образ исследуемой пробы и калиброванный характерный признак антибиотика идентичны или подобны, обнаруживается присутствие остатков антибиотиков;
f) концентрация остатка антибиотиков в исследуемой пробе молока вычисляется в диапазоне изменения параметров, формирующих характерный признак антибиотика;
g) если концентрация антибиотика превышает его определенную концентрацию, устройство обработки сигнала активирует средство сепарации нестандартного молока в реальном времени. Определенная (заданная) концентрация антибиотиков в исследуемых пробах молока определяется в соответствии с законом.
Изложенная в настоящем изобретении система реального времени, способ ее калибровки и одновременного обнаружения различных антибиотиков и определения их концентраций в молоке имеют несколько преимуществ в сравнении с известными решениями, так как они позволяют
- обнаружить в реальном времени потенциальные остатки антибиотиков в молоке;
- определить качество молока в реальном времени;
- удалить нестандартное молоко перед выливанием молока в резервуар.
Система проста в применении, не требует специального обучения, может быть полностью автоматизирована, обеспечивает сохранение данных и может быть многократно использована. Если требуется, система может быть легко регенерирована и обновлена за пару минут.
Краткое описание чертежей
На чертеже показана система реального времени для одновременного обнаружения различных антибиотиков и определения их концентраций в молоке.
1 - канал притока молока
2 - параллельные идентичные каналы потока молока
3а - кислородный датчик
3b - биодатчик
4 - массив биодатчиков
5 - средство сепарации нестандартного молока
6 - устройство обработки сигналов
7 - канал оттока молока
8 - кислородный датчик с носителем фермента, но без фермента
9 - устройство гидролиза
Осуществление изобретения
Для обнаружения антибиотиков в молоке сконструировали систему, откалибровали ее в отношении различных изученных антибиотиков и измерили концентрации различных антибиотиков в пробах молока.
Система содержит канал 1 притока молока и термостатированные параллельные каналы 2 потока молока, каждый из которых содержит кислородный датчик 3а с различными ферментами, формирующий биодатчик 3b, вместе формирующие массив 4 биодатчиков 3b. Для интеграции ферментов, катализирующих окисление глюкозы и галактозы, фиксировали различные ферменты на нерастворимом носителе и присоединяли их с этим носителем к каждому кислородному датчику 3а в массиве 4 биодатчиков 3b. В канале, параллельном вышеупомянутым параллельным идентичным каналам 2 потока молока, имеется кислородный датчик 8 без ферментов, к которому присоединили носитель без ферментов, подобный носителю, используемому для фиксации ферментов.
Также система содержит средство 5 сепарации нестандартного молока, подключенное к устройству 6 обработки сигналов, канал 7 для оттока молока и устройство 9 гидролиза, расположенное между каналом 1 притока молока и параллельными каналами 2 потока молока (см. чертеж).
Ферментами, используемыми в биодатчиках 3b, являлись оксидаза глюкозы (GOD, EC 1.1.3.4.) и оксидаза галактозы (GAO, ЕС 1.1.3.9). Эти ферменты были ковалентно зафиксированы на нитях нейлон-6,6 с помощью диметилсульфата и глутарового альдегида. Нейлоновые нити, содержащие фиксированные ферменты, были намотаны вокруг наружной поверхности оптического кислородного датчика (ЕЕ04250 B1). Использовали нити вышеупомянутых ферментов длиной 25 см, специфическая активность которых составила (0.014±0.001) IU/cm и (0.63±0.02) IU/cm соответственно. 25 сантиметров носителя без ферментов было намотано вокруг наружной поверхности кислородного датчика 8 без ферментов. Волоконно-оптические кислородные датчики были использованы в качестве кислородных датчиков 3а и датчиков 8 без ферментов.
Между каналом 1 притока молока и параллельными каналами 2 потока молока находилось устройство 9 гидролиза, в котором применялся ультразвук для увеличения скорости гидролиза лактозы, катализированного β-галактозидазой (β-GAL, ЕС 3.2.1.23).
Система была термостатирована при 38°С.
Калибровка системы
а) Гидролиз лактозы
Для ускоренного гидролиза лактозы молока в глюкозу и галактозу использовали ультразвук для повышения скорости ферментативного гидролиза, катализированного β-галактозидазой, концентрация которой составляла 10.1 IU/cm. Для частичного гидролиза лактозы использовали ультразвук в течение 30 секунд (средний выходной сигнал 12.6 Вт). В результате происходил гидролиз 1% лактозы, и концентрации глюкозы и галактозы в пробах молока увеличивались на 1.4 мМ. При прикладывании более высоких или более низких выходных ультразвуковых сигналов ускорение гидролиза лактозы было меньше. Также ультразвук вызывал уменьшение концентрации растворенного кислорода в пробах молока, но оставшееся количество растворенного кислорода в пробах было достаточным для окисления глюкозы и галактозы. В некоторых случаях также добавляли 1.6 М NaCl для ускорения гидролиза лактозы.
Ускорение ферментного гидролиза лактозы импульсным электрическим полем или магнитным полем было менее эффективным, чем ультразвуком.
Изучили скорость гидролиза лактозы, кинетику реакций окисления глюкозы и галактозы в массиве 4 биодатчиков 3b и чувствительность биодатчиков 3b при низких температурах (4-38°С), чем 38°С, используемых в системе. Хотя время проведения анализа было более длительным, чем при более высоких температурах, можно было использовать систему даже при 4°С (температура молока в резервуарах с молоком), так как молоко хранится в резервуарах в течение более длительного времени.
b) Измерение концентрации кислорода
Гидролизированные пробы молока направлялись в параллельные каналы 2 потока молока: в первом канале находился биодатчик 3b, содержащий волоконно-оптический кислородный датчик 3а и оксидазу глюкозы; во втором канале находился биодатчик 3b, содержащий волоконно-оптический датчик 3а и оксидазу галактозы; и в третьем канале находился волоконно-оптический кислородный датчик 8 с носителем фермента, но без фермента.
Когда параллельные каналы 2 потока молока наполнялись пробами молока, канал 7 оттока молока закрывался и начиналось измерение концентрации кислорода в пробе. В каналах 2 потока молока, которые содержали биодатчики, концентрация растворенного кислорода начинала уменьшаться благодаря реакциям окисления, катализированным фиксированными ферментами в биодатчиках 3b, формирующих массив 4. Так как ферменты имели различную селективность в отношении глюкозы, галактозы и лактозы, уменьшение концентрации кислорода было различным в разных каналах потока молока.
Концентрация растворенного кислорода в пробах молока, впускаемых в каналы потока молока, измерялась кислородным датчиком 8 с носителем фермента, но без фермента. Уменьшение кислорода в каналах потока молока измерялось в течение 20 секунд. В течение этого периода концентрация растворенного кислорода в пробах молока без антибиотиков уменьшилась, по меньшей мере, на 5%.
с) Вычисление параметров стационарного состояния и кинетических параметров реакции и комбинирование этих параметров реакции для формирования характерного образа для проб молока без антибиотиков и для формирования образов или характерных признаков для проб молока, которые загрязняются определенными количествами различных антибиотиков.
Параметр стационарного состояния (параметр А) и кинетический параметр (параметр В) вычислялись для каждой реакции, протекающей в различных биодатчиках для каждой пробы молока на основании уменьшения переходной фазы концентрации кислорода, вызываемого реакциями окисления, и концентрации молекулярного растворенного кислорода, измеренной кислородным датчиком без ферментов. Использовали динамическую модель биодатчиков (Rinken and Tenno, Biosensors and Bioelectronics. 16, 53-59, 2001), которая была дополнена факторами, характеризующими волоконно-оптические кислородные датчики для вычисления вышеупомянутых параметров, так как эта модель позволяет производить вычисления параметра стационарного состояния и кинетического параметра реакции из параметров сигналов переходной фазы биодатчика.
При комбинировании параметров А и В для различных биодатчиков для проб молока, где концентрации глюкозы и галактозы составляли 1.4 мМ, получили образ для проб молока без антибиотиков (в нашей системе GOD биодатчик А=0.159 и В=222.2 сек-1; GAO биодатчик А=0.640 и В=53.0 сек-1).
Когда определенное количество антибиотика (бензилпенициллин, стрептомицин или хлорамфеникол) добавлялось в пробу молока, комбинации параметров реакции изменялись - некоторые параметры увеличивались, а некоторые уменьшались в зависимости от природы добавленного антибиотика и сущности параметра [параметра А или параметра В]. Например, значения двух параметров А и В биодатчика GOD уменьшались с увеличением концентрации бензинпенициллина в пробах молока (например, при концентрации бензинпенициллина 1000 ppb значение параметра стационарного состояния А составляло 0.141, а значение кинетического параметра составляло 146.0 сек-1), но, что касается биодатчика GAO, значение параметра А уменьшалось, а значение параметра В увеличивалось (например, при концентрации бензинпенициллина 1000 ppb значение установившегося параметра А составляло 0.435, а значение кинетического параметра составляло 97.8 сек-1).
Диапазон изменений значений этих параметров был изучен в случае, когда стрептомицин, хлорамфеникол или смеси пенициллина и стрептомицина добавлялись в пробы молока.
Обнаружение остатков антибиотиков и определение их концентраций в молоке
Систему применяли для анализа проб молока от коров, которых лечили антибиотиками (Penstrep внутримышечные инъекции), и молоко этих коров проверили на положительную реакцию на антибиотики путем проведения Delvotest. Последнюю обработку антибиотиками провели раньше на 24-72 часа.
Результаты анализа молока, проведенного с помощью вышеупомянутой системы и Delvotest, были в хорошей корреляции. Среднее время анализа, проведенного с помощью системы, составило 30-40 секунд, что позволило произвести сепарацию нестандартного молока в реальном времени до его смешивания с молоком высокого качества.
Концентрация остатков антибиотиков в молоке, которая считается нестандартной, определяется в соответствии с количеством животных, молоко которых собирается в один и тот же резервуар, но также с учетом экономических расчетов. Оптимальная концентрация определенного антибиотика в молоке одной коровы примерно в 10 раз выше, чем MRL (максимальные остаточные уровни) для того же антибиотика.
Изложенные варианты иллюстрируют принципы изобретения и не являются исчерпывающими или ограничивающими изобретение представленной формой; предполагается, что сущность изобретения определяется пунктами приложенной формулы и их эквивалентами.
Claims (8)
1. Система обнаружения остатков антибиотиков и определения их концентраций в молоке, содержащая канал 1 притока молока и термостатированные параллельные каналы 2 потока молока, каждый из которых содержит кислородный датчик 3а, интегрированный с разным ферментом, формирующий датчик 3b, которые вместе формируют массив 4 биодатчиков 3b, и средство 5 сепарации нестандартного молока, подключенное к устройству 6 обработки сигналов, и канал 7 оттока молока, отличающаяся тем, что для одновременного обнаружения различных антибиотиков и определения их концентрации во время дойки в реальном времени система содержит дополнительный параллельный канал 2 потока молока, включающий в себя кислородный датчик 8 с носителем фермента, но без фермента, и устройство 9 гидролиза, расположенное между каналом 1 притока молока и параллельными каналами 2 потока молока, и упомянутое устройство 9 гидролиза содержит физическое и/или химическое средство для регулируемого гидролиза лактозы для получения заданных равных концентраций глюкозы и галактозы в каждой исследуемой пробе молока, и каждый биодатчик 3b в массиве 4 биодатчиков интегрирован с разным ферментом, который катализирует окисление глюкозы и галактозы молекулярным растворенным кислородом, и каталитическая активность упомянутых ферментов увеличивается или уменьшается в присутствии антибиотиков, и количество упомянутых ферментов достаточно для генерирования уменьшения переходной фазы концентрации кислорода, которая измеряется с заданной точностью перед тем, как анализируемое молоко смешивается с молоком высокого качества.
2. Система по п.1, отличающаяся тем, что физическим средством, используемым в устройстве 9 гидролиза, является прибор, генерирующий ультразвук, импульсное магнитное поле или электрическое поле.
3. Система по п.1, отличающаяся тем, что химическим средством, используемым в устройстве 9 гидролиза, является катализатор или соединение, повышающее ионную силу раствора.
4. Система по п.3, отличающаяся тем, что упомянутым катализатором является β-галактозидаза или другой фермент, катализирующий гидролиз лактозы.
5. Система по п.1, отличающаяся тем, что каждый кислородный датчик 3а в массиве 4 биодатчиков 3b интегрируется с разным ферментом, которым является оксидаза глюкозы, оксидаза галактозы или другая оксидоредуктаза.
6. Система по п.1, отличающаяся тем, что кислородным датчиком 3а в массиве 4 биодатчиков 3b и кислородным датчиком 8 с носителем фермента, но без фермента является оптический, амперометрический или потенциометрический датчик.
7. Способ калибровки системы по п.1, содержащий следующие этапы:
а) гидролизация лактозы в пробе молока без антибиотиков и в пробе молока, загрязненной определенными количествами различных антибиотиков, для получения заданных равных концентраций глюкозы и галактозы, превышающих концентрации глюкозы и галактозы в необработанном молоке, по меньшей мере, в 10 раз;
b) измерение уменьшений переходной фазы концентрации кислорода в течение реакций окисления глюкозы и галактозы массивом 4 биодатчиков 3b в пробе молока без антибиотиков и в каждой пробе молока, загрязненной определенными количествами различных антибиотиков;
c) одновременное измерение концентрации молекулярного растворенного кислорода в каждой пробе молока кислородным датчиком 8 с носителем фермента, но без фермента;
d) на основании результатов измерения на этапах b) и с) для пробы молока без антибиотиков вычисление параметра стационарного состояния и кинетического параметра реакций, катализированных ферментами каждого биодатчика 3b, и комбинирование всех упомянутых параметров для формирования характерного образа для пробы молока без антибиотиков;
е) на основании результатов измерения на этапах b) и с) для проб молока, загрязненных определенными количествами различных антибиотиков, вычисление параметра стационарного состояния и кинетического параметра реакций, катализированных ферментами каждого биодатчика 3b, и комбинирование всех упомянутых параметров для формирования характерного образа или характерного признака для каждого антибиотика.
а) гидролизация лактозы в пробе молока без антибиотиков и в пробе молока, загрязненной определенными количествами различных антибиотиков, для получения заданных равных концентраций глюкозы и галактозы, превышающих концентрации глюкозы и галактозы в необработанном молоке, по меньшей мере, в 10 раз;
b) измерение уменьшений переходной фазы концентрации кислорода в течение реакций окисления глюкозы и галактозы массивом 4 биодатчиков 3b в пробе молока без антибиотиков и в каждой пробе молока, загрязненной определенными количествами различных антибиотиков;
c) одновременное измерение концентрации молекулярного растворенного кислорода в каждой пробе молока кислородным датчиком 8 с носителем фермента, но без фермента;
d) на основании результатов измерения на этапах b) и с) для пробы молока без антибиотиков вычисление параметра стационарного состояния и кинетического параметра реакций, катализированных ферментами каждого биодатчика 3b, и комбинирование всех упомянутых параметров для формирования характерного образа для пробы молока без антибиотиков;
е) на основании результатов измерения на этапах b) и с) для проб молока, загрязненных определенными количествами различных антибиотиков, вычисление параметра стационарного состояния и кинетического параметра реакций, катализированных ферментами каждого биодатчика 3b, и комбинирование всех упомянутых параметров для формирования характерного образа или характерного признака для каждого антибиотика.
8. Способ одновременного обнаружения в реальном времени различных антибиотиков и определения их концентраций в молоке с помощью системы по п.1, содержащий дойку животного и взятие пробы молока, которая термостатируется, отличающаяся тем, что способ содержит следующие этапы:
a) быстрая гидролизация лактозы в анализируемой пробе молока для получения заданных равных концентраций глюкозы и галактозы, превышающих концентрации глюкозы и галактозы в необработанном молоке, по меньшей мере, в 10 раз;
b) измерение уменьшений переходной фазы концентрации кислорода в течение реакций окисления глюкозы и галактозы массивом 4 биодатчиков 3b в исследуемой пробе молока;
c) одновременное измерение концентрации молекулярного растворенного кислорода в исследуемой пробе молока кислородным датчиком 8 с носителем фермента, но без фермента;
d) на основании результатов измерения на этапах b) и с) для исследуемой пробы молока вычисление параметра стационарного состояния и кинетического параметра реакции, катализированной ферментами каждого биодатчика 3b, и комбинирование всех упомянутых параметров для формирования характерного образа для анализируемой пробы молока;
e) сравнение образа исследуемой пробы молока с калиброванными характерными признаками различных антибиотиков и обнаружение присутствия остатка (остатков) антибиотиков в случае, если образ исследуемой пробы молока и калиброванный характерный признак антибиотика идентичны или подобны;
f) вычисление концентрации остатка антибиотика в пробе молока из диапазона изменений параметров, формирующих характерный признак антибиотика;
g) активация средства 5 сепарации нестандартного молока в реальном времени устройством 6 обработки сигналов, если концентрация антибиотика (антибиотиков) в исследуемой пробе молока превышает его (их) заданную концентрацию.
a) быстрая гидролизация лактозы в анализируемой пробе молока для получения заданных равных концентраций глюкозы и галактозы, превышающих концентрации глюкозы и галактозы в необработанном молоке, по меньшей мере, в 10 раз;
b) измерение уменьшений переходной фазы концентрации кислорода в течение реакций окисления глюкозы и галактозы массивом 4 биодатчиков 3b в исследуемой пробе молока;
c) одновременное измерение концентрации молекулярного растворенного кислорода в исследуемой пробе молока кислородным датчиком 8 с носителем фермента, но без фермента;
d) на основании результатов измерения на этапах b) и с) для исследуемой пробы молока вычисление параметра стационарного состояния и кинетического параметра реакции, катализированной ферментами каждого биодатчика 3b, и комбинирование всех упомянутых параметров для формирования характерного образа для анализируемой пробы молока;
e) сравнение образа исследуемой пробы молока с калиброванными характерными признаками различных антибиотиков и обнаружение присутствия остатка (остатков) антибиотиков в случае, если образ исследуемой пробы молока и калиброванный характерный признак антибиотика идентичны или подобны;
f) вычисление концентрации остатка антибиотика в пробе молока из диапазона изменений параметров, формирующих характерный признак антибиотика;
g) активация средства 5 сепарации нестандартного молока в реальном времени устройством 6 обработки сигналов, если концентрация антибиотика (антибиотиков) в исследуемой пробе молока превышает его (их) заданную концентрацию.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PCT/EE2010/000004 WO2011091805A1 (en) | 2010-01-29 | 2010-01-29 | On-line system, method of its calibration and simultaneous detection of antibiotic residues and their concentration in milk |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2012126473A RU2012126473A (ru) | 2014-03-10 |
| RU2524624C2 true RU2524624C2 (ru) | 2014-07-27 |
Family
ID=42109957
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2012126473/15A RU2524624C2 (ru) | 2010-01-29 | 2010-01-29 | Система реального времени, способ калибровки системы и одновременное обнаружение остатков антибиотиков и их концентраций в молоке |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20130011528A1 (ru) |
| EP (1) | EP2529217B1 (ru) |
| RU (1) | RU2524624C2 (ru) |
| WO (1) | WO2011091805A1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2757226C1 (ru) * | 2021-01-26 | 2021-10-12 | Игорь Сан-Сенович Дю | Способ определения антибиотиков в сыром молоке |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US10637115B2 (en) | 2013-02-09 | 2020-04-28 | C2Cnt Llc | Molten air rechargeable batteries |
| US11644453B2 (en) | 2017-11-07 | 2023-05-09 | S.C.R. Engineers Limited | System and method for analysis of a fluid |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2213973C2 (ru) * | 1998-06-25 | 2003-10-10 | ЮСиБи С.А. | СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИБИОТИКОВ, СОДЕРЖАЩИХ β-ЛАКТАМНЫЙ ЦИКЛ, В ЖИДКОСТИ БИОЛОГИЧЕСКОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ И АНАЛИТИЧЕСКИЙ НАБОР ДЛЯ ЕГО ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ |
| EP1712914A1 (fr) * | 2005-04-14 | 2006-10-18 | Unisensor S.A. | Procédé in vitro pour la detection et l'identification simultanées d'antibiotiques de classes differentes et trousse de diagnostic correspondante |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NL7806086A (nl) | 1978-06-05 | 1979-12-07 | Gist Brocades Nv | Analyse-unit. |
| FI75865C (fi) | 1987-04-07 | 1988-08-08 | Valio Meijerien | Testanordning och foerfarande foer bestaemning av antibiotika i mjoelk samt i dessa anvaendbar ny streptococcus thermophilus-stam. |
| ES2102505T3 (es) | 1991-05-06 | 1997-08-01 | Dade Microscan Inc | Prueba rapida de deteccion de beta-lactamasas inducibles. |
| US5454805A (en) | 1994-03-14 | 1995-10-03 | Brony; Seth K. | Medicine vial link for needleless syringes |
| DK1216307T4 (da) | 1999-10-04 | 2010-03-29 | Dsm Ip Assets Bv | Fremgangsmåde til detektion af rester af antimikrobielle midler |
| EE9900442A (et) | 1999-11-29 | 2001-08-15 | Tartu Ülikool | Bioloogiliselt aktiivne materjal |
-
2010
- 2010-01-29 WO PCT/EE2010/000004 patent/WO2011091805A1/en active Application Filing
- 2010-01-29 US US13/575,669 patent/US20130011528A1/en not_active Abandoned
- 2010-01-29 RU RU2012126473/15A patent/RU2524624C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2010-01-29 EP EP10705091.6A patent/EP2529217B1/en not_active Not-in-force
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2213973C2 (ru) * | 1998-06-25 | 2003-10-10 | ЮСиБи С.А. | СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИБИОТИКОВ, СОДЕРЖАЩИХ β-ЛАКТАМНЫЙ ЦИКЛ, В ЖИДКОСТИ БИОЛОГИЧЕСКОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ И АНАЛИТИЧЕСКИЙ НАБОР ДЛЯ ЕГО ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ |
| EP1712914A1 (fr) * | 2005-04-14 | 2006-10-18 | Unisensor S.A. | Procédé in vitro pour la detection et l'identification simultanées d'antibiotiques de classes differentes et trousse de diagnostic correspondante |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| RINKEN T. Determination of antibiotic residues and their interaction in milk with lactate biosensor//J. Biochem.Biophys. 2006, 66, p.13-21. N.ADANAY. Multi-enzyme biosensors with amperometric detection for determination of lactose in milk and dairy products// European Food Research and Technology, August 1999, Volume 209, Issue 3-4, pp. 220-226 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2757226C1 (ru) * | 2021-01-26 | 2021-10-12 | Игорь Сан-Сенович Дю | Способ определения антибиотиков в сыром молоке |
| WO2022164341A1 (ru) * | 2021-01-26 | 2022-08-04 | Игорь Сан-Сенович ДЮ | Способ определения антибиотиков в сыром молоке |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2011091805A1 (en) | 2011-08-04 |
| RU2012126473A (ru) | 2014-03-10 |
| EP2529217A1 (en) | 2012-12-05 |
| US20130011528A1 (en) | 2013-01-10 |
| EP2529217B1 (en) | 2013-10-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Chandler et al. | Predicting hyperketonemia by logistic and linear regression using test-day milk and performance variables in early-lactation Holstein and Jersey cows | |
| Granseth et al. | Clathrin-mediated endocytosis is the dominant mechanism of vesicle retrieval at hippocampal synapses | |
| KR102278346B1 (ko) | 고암모니아혈증을 검출하기 위한 장치 및 장치의 사용 방법 | |
| US20040092027A1 (en) | Rapid test for biological substances using ftir | |
| Titova et al. | " Electronic tongue" in the food industry | |
| RU2524624C2 (ru) | Система реального времени, способ калибровки системы и одновременное обнаружение остатков антибиотиков и их концентраций в молоке | |
| Zhang et al. | Improved biosensor for glucose based on glucose oxidase-immobilized silk fibroin membrane | |
| AU2009347606A1 (en) | Method for the detection of mastitis and milk quality, and mastitis sensor | |
| CA2988833A1 (en) | Method and apparatus for monitoring the state of health of dairy cows | |
| Pérez-González et al. | Bioelectronic tongue dedicated to the analysis of milk using enzymes linked to carboxylated-PVC membranes modified with gold nanoparticles | |
| Kivirand et al. | Calibrating biosensors in flow-through set-ups: Studies with glucose Optrodes | |
| EP0851027B1 (en) | Method for controlling culture of lactic bacteria | |
| Gonçalves et al. | Exploiting digital images and videos for urea determination in milk based on enzymatic hydrolysis monitoring | |
| Hanuš et al. | Milk acetone determination by the photometrical method after microdiffusion and via FT infra-red spectroscopy. | |
| Kulkarni et al. | Biosensors for food and dairy industry | |
| Luzzana et al. | Milk lactose and lactulose determination by the differential pH technique | |
| WO2004048968A1 (en) | Method and apparatus for detecting mastitis | |
| Mottram et al. | Biosensing techniques for detecting abnormal and contaminated milk. | |
| JPS6325301B2 (ru) | ||
| US20230050412A1 (en) | Medical diagnostic device | |
| EP4346387B1 (en) | Determination of haptoglobin quantity in milk | |
| Leth et al. | A feasibility study of the use of a SIRE biosensor in the monitoring of H2O2 added to milk samples. A possible new technology for early detection of mastitis? | |
| Titova et al. | Food Science and Applied Biotechnology | |
| Amine et al. | Rapid on-line analysis to ensure the safety of milk | |
| US20220163542A1 (en) | Methods of blood sample suspension |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20180130 |