RU2522823C2 - Method of long storage in vitro of aspen plants - Google Patents

Method of long storage in vitro of aspen plants Download PDF

Info

Publication number
RU2522823C2
RU2522823C2 RU2012147452/10A RU2012147452A RU2522823C2 RU 2522823 C2 RU2522823 C2 RU 2522823C2 RU 2012147452/10 A RU2012147452/10 A RU 2012147452/10A RU 2012147452 A RU2012147452 A RU 2012147452A RU 2522823 C2 RU2522823 C2 RU 2522823C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
hundred
plants
aspen
vitro
storage
Prior art date
Application number
RU2012147452/10A
Other languages
Russian (ru)
Other versions
RU2012147452A (en
Inventor
Елена Олеговна Видягина
Константин Александрович Шестибратов
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук (ИБХ РАН)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное учреждение науки институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук (ИБХ РАН) filed Critical Федеральное государственное бюджетное учреждение науки институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук (ИБХ РАН)
Priority to RU2012147452/10A priority Critical patent/RU2522823C2/en
Publication of RU2012147452A publication Critical patent/RU2012147452A/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2522823C2 publication Critical patent/RU2522823C2/en

Links

Images

Landscapes

  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)

Abstract

FIELD: biotechnology.
SUBSTANCE: invention is a method of storing aspen plants under conditions in vitro, comprising culturing the microshoots of aspen on the nutrient medium WPM supplemented with sucrose of 10-20 g/l, agar-agar 9 g/l and vitamins MS of 1 ml/l, sorbitol 5-10 g/l, and mannitol 5-10 g/l. Storage of plants is carried out at a temperature of +4°C under conditions of light of 8 h during the day/16 h at night with the intensity of 2000 lux.
EFFECT: invention enables to improve the safety in vitro of cultures of valuable selective genotypes and genetically modified aspen clones.
2 cl, 1 dwg, 3 tbl

Description

Изобретение относится к области биотехнологии растений и лесному хозяйству, и может быть использовано для беспересадочного хранения особо ценных и траснформированных клонов растений осины в условиях in vitro.The invention relates to the field of plant biotechnology and forestry, and can be used for direct storage of especially valuable and transformed clones of aspen plants in vitro.

В современной биотехнологии сохранение in vitro культур растений используется для снижения затрат на пересадку трансгенных и нетрансгенных клонов, и для сохранения особо ценных генотипов. Наиболее приемлемым способом депонирования является хранение in vitro культур при положительных температурах (+4°C).In modern biotechnology, the conservation of in vitro plant cultures is used to reduce the cost of transplanting transgenic and non-transgenic clones, and to preserve particularly valuable genotypes. The most appropriate deposition method is to store in vitro cultures at positive temperatures (+ 4 ° C).

Осина (Populus tremula) и ее гибриды широко используются в биотехнологии как модель для изучения различных аспектов генетики лесных древесных растений по ряду причин: относительно небольшой размер генома и возможность его эффективной трансформации, быстрый рост, простота клонального микроразмножения и выращивания in vitro. В лесном хозяйстве осина начинает занимать приоритетное направление для использования в целлюлозно-бумажной промышленности и получении стройматериалов. Поэтому беспересадочное депонирование in vitro культур на длительный период рассматривается как способ сохранения растений, обладающих ценными свойствами.Aspen (Populus tremula) and its hybrids are widely used in biotechnology as a model for studying various aspects of the genetics of forest tree plants for several reasons: the relatively small genome size and the possibility of its efficient transformation, rapid growth, ease of clonal micropropagation and in vitro cultivation. In forestry, aspen begins to occupy a priority for use in the pulp and paper industry and obtaining building materials. Therefore, non-stop deposition of in vitro crops for a long period is considered as a way to preserve plants with valuable properties.

Известно несколько способов хранения растений при положительных температурах, в частности известен способ депонирования растений винограда «Способ длительного сохранения in vitro растений винограда» (патент России №2110172). Он включает перенос фрагментов растений длиной 10-12 мм на твердую питательную среду, в которую добавляют тонкоизмолотые зерна винограда. Возможность использования данного способа для других растений не описана и, очевидно, потребует дополнительных модификаций метода и финансовых затрат.Several methods are known for storing plants at positive temperatures, in particular, a method for depositing grape plants “A method for the long-term preservation of in vitro grape plants” is known (Russian patent No. 2110172). It includes the transfer of plant fragments 10-12 mm long onto a solid nutrient medium into which finely ground grains of grapes are added. The possibility of using this method for other plants is not described and, obviously, will require additional modifications of the method and financial costs.

Известен также состав питательной среды для длительного хранения растений in vitro (патент России №94011805). Новым в питательной среде является совместное введение в ее состав сорбита в концентрации 1-10 г/л и 6-бензиламинопурина в концентрации 0,1-1,0 мг/л. Влияние на культуру древесных растений, в частности осины, не оценивалось.The composition of the nutrient medium for long-term storage of plants in vitro is also known (Russian patent No. 94011805). New in the nutrient medium is the joint introduction of sorbitol at a concentration of 1-10 g / l and 6-benzylaminopurine at a concentration of 0.1-1.0 mg / l. The impact on the culture of woody plants, in particular aspen, was not evaluated.

Наиболее близким техническим решением из описанных является «Effect of abscisic acid, cold hardening, and photoperiod on recovery of cryopreserved in vitro shoot tips of silver birch» (Ryynänen L. // Cryobiology, 1998, №36, PP.32-39). В статье описывается методика предварительного кратковременного хранения перед криоконсервацией почек микрорастений березы серебристой. Для введения в состояние покоя использовалось добавление абсцизовой кислоты в концентрации 10-6, 10-5 и 10-4 М в питательную среду для укоренения и хранения MS (Murashige T., Skoog F. A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures. Physiol Plant. 1962. 15 (3): P.473-497), а также изменялись условия инкубации - понижение температуры до +4°C и режим освещения (8 ч день/16 ч ночь). Однако при таких условиях растения долго не хранили, а лишь вводили в состояние покоя in vitro для последующих манипуляций. Пригодность метода введения в состояние покоя для других древесных растений в данной работе не оценивали.The closest technical solution described is “Effect of abscisic acid, cold hardening, and photoperiod on recovery of cryopreserved in vitro shoot tips of silver birch” (Ryynänen L. // Cryobiology, 1998, No. 36, PP.32-39). The article describes the method of preliminary short-term storage before cryopreservation of buds of silver birch microplants. For dormancy, the addition of abscisic acid at a concentration of 10 -6 , 10 -5, and 10 -4 M was added to the nutrient medium for rooting and storing MS (Murashige T., Skoog F. A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures. Physiol Plant. 1962. 15 (3): P.473-497), and the incubation conditions changed - the temperature decreased to + 4 ° C and the lighting mode (8 hours a day / 16 hours a night). However, under such conditions, the plants did not store for a long time, but were only introduced into a resting state in vitro for subsequent manipulations. The suitability of the dormant method for other woody plants was not evaluated in this work.

Целью предлагаемого изобретения является повышение сохранности микрорастений осины в условиях in vitro при хранении на +4°C, без пересадок культур в течение 12 месяцев.The aim of the invention is to increase the safety of aspen microplants in vitro when stored at + 4 ° C, without transplantation of crops for 12 months.

Поставленная цель достигается за счет того, что используются оптимальные концентрации минеральных и органических компонентов питательной среды и изменяется режим освещения (длительность и интенсивность).This goal is achieved due to the fact that optimal concentrations of mineral and organic components of the nutrient medium are used and the lighting mode (duration and intensity) is changed.

Суть изобретения заключается в том, что для пассажа на укоренение и последующее хранение используют среду WPM (Lloyd G., McCown В., Commercially feasiblemicropropagation of mountain laural (Kalmla latlfolia) by use of shoot tip cultures. Ccmb Proc Intl Soc 1980. 30: PP.421-427.) с добавлением к легко метаболизируемой сахарозе (10-20 г/л) таких осмолитиков, как сорбитол (5-10 г/л) и маннитол (5-10 г/л), а также агар-агара (9 г/л) и витаминов MS 1 мл/л. После инкубации растений в течение 2 недель при интенсивном (примерно 5000 люкс) длиннодневном режиме освещения (16 ч день/8 ч ночь) при температуре +22°C растения переносятся в условия хранения на +4°C при пониженном освещении (примерно 2000 люкс) и режиме короткого дня (8 ч день/16 ч ночь). В результате использование осмолитиков в составе питательной среды и подбор правильного освещения во время хранения способствуют постепенному переходу растений в состояние покоя, что повышает до 100% их сохранность в течение года. Способ подходит для хранения in vitro культур осины как генетически модифицированных клонов, так и ценных селекционных генотипов, отобранных в природе.The essence of the invention lies in the fact that for passage to rooting and subsequent storage using the WPM environment (Lloyd G., McCown B., Commercially feasiblemicropropagation of mountain laural (Kalmla latlfolia) by use of shoot tip cultures. Ccmb Proc Intl Soc 1980.30: PP.421-427.) With the addition of osmolytics such as sorbitol (5-10 g / l) and mannitol (5-10 g / l), as well as agar-agar, to easily metabolized sucrose (10-20 g / l) (9 g / l) and MS vitamins 1 ml / l. After incubating the plants for 2 weeks under intensive (approximately 5000 lux) long-day lighting (16 hours day / 8 hours night) at a temperature of + 22 ° C, the plants are transferred to storage conditions at + 4 ° C under low light (approximately 2000 lux) and short day mode (8 hours a day / 16 hours a night). As a result, the use of osmolytics in the composition of the nutrient medium and the selection of the correct lighting during storage contribute to the gradual transition of plants to a state of rest, which increases their preservation to 100% throughout the year. The method is suitable for storing in vitro aspen cultures of both genetically modified clones and valuable selection genotypes selected in nature.

Анализ известных способов хранения микрорастений трансгенной и нетрансгенной осины при температуре +4°C в условиях in vitro, проведенный по научно-технической и патентной документации, показал, что совокупность существенных признаков заявляемого способа неизвестна из уровня техники, следовательно, он соответствует такому условию патентоспособности изобретения, как «новизна».The analysis of known methods for storing microplants of transgenic and non-transgenic aspen at a temperature of + 4 ° C in vitro, carried out according to scientific, technical and patent documentation, showed that the set of essential features of the proposed method is unknown from the prior art, therefore, it meets this condition of patentability of the invention as "novelty."

Предлагаемый способ реализуется следующим образом.The proposed method is implemented as follows.

1. В нестерильных условиях готовится питательная среда для укоренения и последующего хранения. В нее добавляются необходимые количества макро-, микроэлементов, хелата железа, мио-инозита, объем доводится дистиллированной водой, pH 5,6-5,8. Растворяются необходимые количества сахарозы, сорбитола и маннитола. После этого добавляется навеска агара. Среда разливается по колбам; автоклавирование проводится при 1 атм (=1 изб. атм) в течение 25 минут. В охлажденную до 55°C среду в ламинар-боксе добавляются стерильные растворы витаминов. Полученный раствор разливается по стерильным культуральным сосудам. Все манипуляции с растительным материалом производятся в ламинар-боксе в условиях стерильного воздуха. Число эксплантов в одном сосуде составляет 20 штук.1. In non-sterile conditions, a nutrient medium is prepared for rooting and subsequent storage. The necessary quantities of macro-, microelements, iron chelate, myo-inositol are added to it, the volume is adjusted with distilled water, pH 5.6-5.8. The required amounts of sucrose, sorbitol and mannitol are dissolved. After this, a weighed agar is added. The medium is bottled; autoclaving is carried out at 1 atm (= 1 atm atm) for 25 minutes. Sterile solutions of vitamins are added to the medium cooled to 55 ° C in a laminar box. The resulting solution is poured into sterile culture vessels. All manipulations with plant material are carried out in a laminar box in sterile air. The number of explants in one vessel is 20 pieces.

2. После переноса растительного материала на среду для укоренения и последующего хранения инкубацию побегов проводят 2 недели при интенсивном (5000 люкс) длиннодневном (16 ч день/8 ч ночь) режиме освещения, при температуре +22°C.2. After transferring the plant material to the rooting medium and subsequent storage, shoot incubation is carried out for 2 weeks under intensive (5000 lux) long-day (16 hours day / 8 hours night) lighting conditions, at a temperature of + 22 ° C.

3. Укорененные микрорастения затем переносят в условия хранения. Режим освещения на протяжении всего периода хранения короткодневный - 8 часов «день», 16 часов «ночь», интенсивность освещения должна не превышать 2000 люкс. Температура хранения +4°C.3. Rooted microplants are then transferred to storage conditions. The lighting mode throughout the entire storage period is short-day - 8 hours “day”, 16 hours “night”, the lighting intensity should not exceed 2000 lux. Storage temperature + 4 ° C.

4. Пересадку верхушечной почки растений на среду для восстановления (WPM с добавлением сахарозы 30 г/л, агар-агара 9 г/л, гиббереллиновой кислоты 0,5 мг/л) необходимо провести через год депонирования. Восстановление осуществляется при длиннодневном режиме освещения 16 часов «день», 8 часов «ночь» интенсивностью 5000 люкс, при температуре +22°C. Процент выживания оценивается после 2 недель инкубации на среде для восстановления.4. Transplantation of the apical bud of plants on recovery medium (WPM with the addition of sucrose 30 g / l, agar-agar 9 g / l, gibberellic acid 0.5 mg / l) must be carried out after a year of deposition. Recovery is carried out under a long-day lighting mode of 16 hours “day”, 8 hours “night” with an intensity of 5000 lux, at a temperature of + 22 ° C. The survival rate is estimated after 2 weeks of incubation on recovery medium.

В таблицах 1-2 представлены результаты выживаемости растений осины в зависимости от условий хранения. Для подтверждения неочевидности представленного изобретения нами был проведены исследования роли каждого из основополагающих, по нашему мнению, факторов для хранения культуры осины in vitro (таблица 1).Tables 1-2 show the results of the survival of aspen plants depending on storage conditions. To confirm the non-obviousness of the presented invention, we conducted a study of the role of each of the fundamental, in our opinion, factors for the storage of aspen culture in vitro (table 1).

Для сравнения была использована методика кратковременного хранения, предложенная Ryynänen L. (1998). Показано, что абсцизовая кислота действительно ускоряет процесс перехода в состояние покоя, но после переноса на среду для восстановления образуются витрифицированные побеги с измененной формой листа, что не происходит при использовании разработанного нами способа (таблица 2).For comparison, the short-term storage technique proposed by Ryynänen L. (1998) was used. It was shown that abscisic acid actually accelerates the transition to a dormant state, but after transfer to a recovery medium, vitrified shoots with a changed leaf shape are formed, which does not occur when we use the method developed by us (table 2).

Данный способ хранения подходит как для растений дикого типа, так и для трансформированных растений осины. Было проведено хранение разных нетрансформированных генотипов осины (Pt, f2, PtV22) и трансгенных растений осины с разными рекомбинантными генами (GFP, Gus, Bar, Xeg, GS). Сохранность и трансгенных, и нетрансгенных клонов всех генотипов после года хранения составляла 100% (таблица 3). Сохранение экспрессии рекомбинантных генов в трансгенных растениях осины после года хранения при температуре +4°C, интенсивностью освещения 2000 люкс и режиме 8 день/16 ночь подтверждено методом ОТ-ПЦР (рисунок 1).This storage method is suitable for both wild-type plants and transformed aspen plants. Various non-transformed aspen genotypes (Pt, f2, PtV22) and transgenic aspen plants with different recombinant genes (GFP, Gus, Bar, Xeg, GS) were stored. The safety of both transgenic and non-transgenic clones of all genotypes after a year of storage was 100% (table 3). Preservation of the expression of recombinant genes in transgenic aspen plants after a year of storage at a temperature of + 4 ° C, an illumination intensity of 2000 lux and an 8 day / 16 night mode was confirmed by RT-PCR (Figure 1).

Преимуществом предложенного способа хранения при температуре +4°C является сохранение параметров микрорастений и увеличение доли жизнеспособных эксплантов (микрорастений) после хранения.The advantage of the proposed storage method at a temperature of + 4 ° C is the preservation of the parameters of microplants and an increase in the proportion of viable explants (microplants) after storage.

Предложенный способ хранения при температуре +4°C не является затратным, так как требует лишь добавления осмолитиков и инкубации при разработанных режимах освещения. Поэтому способ может быть успешно использован для научных исследований, сохранения ценных генотипов осины или при производстве посадочного материала растений в лесном хозяйстве.The proposed storage method at a temperature of + 4 ° C is not expensive, since it only requires the addition of osmolytics and incubation under developed lighting conditions. Therefore, the method can be successfully used for scientific research, the preservation of valuable genotypes of aspen or in the production of planting material of plants in forestry.

Таблица 1Table 1 Процент выживших растений осины при разных условиях инкубации после месяца, полугода и года хранения при температуре +4°CThe percentage of surviving aspen plants under different incubation conditions after a month, six months and a year of storage at a temperature of + 4 ° C ОпытExperience Состав сахаров в питательной среде (г/л)The composition of sugars in a nutrient medium (g / l) Интенсивность освещения (люкс)Light Intensity (Lux) Режим освещения (день/ночь)Lighting Mode (Day / Night) Выживание после хранения (%)Survival after storage (%) 1 мес1 month 6 мес6 months 12 мес12 months 1one сахароза - 30sucrose - 30 50005000 16/816/8 4242 00 00 22 сахароза - 15sucrose - 15 50005000 16/816/8 5656 00 00 сорбитол - 7,5sorbitol - 7.5 маннитол - 7,5mannitol - 7.5 33 сахароза - 15sucrose - 15 20002000 16/816/8 7373 00 00 сорбитол - 7,5sorbitol - 7.5 маннитол - 7,5mannitol - 7.5 4four сахароза - 15sucrose - 15 20002000 12/1212/12 100one hundred 5757 00 сорбитол - 7,5sorbitol - 7.5 маннитол - 7,5mannitol - 7.5 55 сахароза - 15sucrose - 15 20002000 8/168/16 100one hundred 100one hundred 100one hundred сорбитол - 7,5sorbitol - 7.5 маннитол - 7,5mannitol - 7.5

Таблица 2table 2 Процент выживших растений осины при добавлении в среду разных концентраций абсцизовой кислоты (АВА) и менее усвояемых сахаров после месяца, полугода и года хранения при температуре +4°C, интенсивностью освещения 2000 люкс и режиме 8 день/16 ночьPercentage of surviving aspen plants when different concentrations of abscisic acid (ABA) and less digestible sugars were added to the medium after a month, six months, and a year of storage at a temperature of + 4 ° C, lighting intensity of 2000 lux and 8 day / 16 night mode ОпытExperience Концентрация АВА, МThe concentration of ABA, M Выживание после хранения (%)Survival after storage (%) 1 мес1 month 6 мес6 months 12 мес12 months 1one 10-4 10 -4 100one hundred 24*24 * 00 22 10-5 10 -5 100one hundred 100one hundred 62*62 * 33 10-6 10 -6 100one hundred 100one hundred 100*one hundred* 4four 00 100one hundred 100one hundred 100one hundred * - образование витрифицированных побегов с измененной формой листа* - the formation of vitrified shoots with a modified leaf shape

Таблица 3Table 3 Процент выживших растений осины разных генотипов при добавлении в среду менее усвояемых сахаров после месяца, полугода и года хранения при температуре +4°C, интенсивностью освещения 2000 люкс и режиме 8 день/16 ночьPercentage of surviving aspen plants of different genotypes when less digestible sugars were added to the medium after a month, six months and a year of storage at a temperature of + 4 ° C, lighting intensity of 2000 lux and 8 day / 16 night mode Название клоновClone Name Количество посажанных растенийThe number of plants planted Выживание после хранения (%)Survival after storage (%) 1 мес1 month 6 мес6 months 12 мес12 months PtPt 200200 100one hundred 100one hundred 100one hundred f2f2 200200 100one hundred 100one hundred 100one hundred PtV22Ptv22 200200 100one hundred 100one hundred 100one hundred Pt III GFP 3с*Pt III GFP 3c * 200200 100one hundred 100one hundred 100one hundred Pt III GFP 5b*Pt III GFP 5b * 200200 100one hundred 100one hundred 100one hundred Pt III GFP 5c*Pt III GFP 5c * 200200 100one hundred 100one hundred 100one hundred f2 VII Gus 1a*f2 VII Gus 1a * 200200 100one hundred 100one hundred 100one hundred f2 VII Gus 1b*f2 VII Gus 1b * 200200 100one hundred 100one hundred 100one hundred Pt I Gus 5a*Pt I Gus 5a * 200200 100one hundred 100one hundred 100one hundred Pt V Gus 2c*Pt V Gus 2c * 200200 100one hundred 100one hundred 100one hundred PtV22 V Gus 14a*PtV22 V Gus 14a * 200200 100one hundred 100one hundred 100one hundred f2 XI Bar 2a*f2 XI Bar 2a * 200200 100one hundred 100one hundred 100one hundred Pt XI Bar 24a*Pt XI Bar 24a * 200200 100one hundred 100one hundred 100one hundred PtXIV Xeg 1a*PtXIV Xeg 1a * 200200 100one hundred 100one hundred 100one hundred PtXIV Xeg 1b*PtXIV Xeg 1b * 200200 100one hundred 100one hundred 100one hundred Pt XV Xeg 1a*Pt XV Xeg 1a * 200200 100one hundred 100one hundred 100one hundred PtXVXeg 2b*PtXVXeg 2b * 200200 100one hundred 100one hundred 100one hundred Pt XV Xeg 3a*Pt XV Xeg 3a * 200200 100one hundred 100one hundred 100one hundred Pt XV Xeg 3b*Pt XV Xeg 3b * 200200 100one hundred 100one hundred 100one hundred PtXVXeg 4a*PtXVXeg 4a * 200200 100one hundred 100one hundred 100one hundred Pt XV Xeg 4c*Pt XV Xeg 4c * 200200 100one hundred 100one hundred 100one hundred PtXVXeg 5a*PtXVXeg 5a * 200200 100one hundred 100one hundred 100one hundred PtXVI Xeg 5c*PtXVI Xeg 5c * 200200 100one hundred 100one hundred 100one hundred * трансгенные клоны осины с рекомбинантными генами GFP, Gus, Bar, Xeg, полученные на основе растений дикого типа генотипов Pt, f2, PtV22.* transgenic aspen clones with recombinant genes GFP, Gus, Bar, Xeg, obtained on the basis of wild-type plants of genotypes Pt, f2, PtV22.

Claims (2)

1. Способ хранения растений осины в условиях in vitro, включающий культивирование микропобегов осины на питательной среде WPM с добавлением сахарозы 10-20 г/л, агар-агара 9 г/л, витаминов MS 1 мл/л, сорбитола 5-10 г/л и маннитола 5-10 г/л, причем хранение растений осуществляют при температуре +4°C в режиме освещения 8 ч день/16 ч ночь с интенсивностью 2000 люкс.1. A method of storing aspen plants in vitro, including the cultivation of aspen microprobe on WPM nutrient medium with the addition of sucrose 10-20 g / l, agar-agar 9 g / l, MS vitamins 1 ml / l, sorbitol 5-10 g / l and mannitol 5-10 g / l, and the storage of plants is carried out at a temperature of + 4 ° C in the lighting mode 8 hours day / 16 hours night with an intensity of 2000 lux. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что пригоден для хранения растений генетически модифицированной осины с рекомбинантными генами. 2. The method according to claim 1, characterized in that it is suitable for storing genetically modified aspen plants with recombinant genes.
RU2012147452/10A 2012-11-08 2012-11-08 Method of long storage in vitro of aspen plants RU2522823C2 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2012147452/10A RU2522823C2 (en) 2012-11-08 2012-11-08 Method of long storage in vitro of aspen plants

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2012147452/10A RU2522823C2 (en) 2012-11-08 2012-11-08 Method of long storage in vitro of aspen plants

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2012147452A RU2012147452A (en) 2013-07-27
RU2522823C2 true RU2522823C2 (en) 2014-07-20

Family

ID=49155486

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2012147452/10A RU2522823C2 (en) 2012-11-08 2012-11-08 Method of long storage in vitro of aspen plants

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2522823C2 (en)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2590703C1 (en) * 2015-04-17 2016-07-10 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук (ИБХ РАН) METHOD FOR PRESERVING QUALITY CHARACTERISTICS OF in vitro CULTURE OF SOME WOOD PLANTS (CHINESE MAGNOLIA, RHODODENDRON, LILAC, BIRCH)
RU2634409C1 (en) * 2016-10-03 2017-10-26 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский институт лесной генетики, селекции и биотехнологии" (ФГБУ "ВНИИЛГИСбиотех") Method for birch micro plants long-term storage in vitro
RU2728684C1 (en) * 2019-05-17 2020-07-30 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный исследовательский центр картофеля им А.Г. Лорха" Method for preservation of potato healthier in vitro material
RU2731061C2 (en) * 2018-12-25 2020-08-28 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Пущинский государственный естественно-научный институт" (ПущГЕНИ) Method of storing rubus plants in vitro

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2076482C1 (en) * 1994-04-11 1997-03-27 Всероссийский селекционно-технологический институт садоводства и питомниководства NUTRITIONAL STORAGE PLANT IN VITRO

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2076482C1 (en) * 1994-04-11 1997-03-27 Всероссийский селекционно-технологический институт садоводства и питомниководства NUTRITIONAL STORAGE PLANT IN VITRO

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
LLOYD G. and McCOWN B., Commercially-feasible micropropagation of mountain Laaurel, Ralmia latifolia, dy use of shoot-tip culture, The international plant propagators society, Combined Proceedings, Vol. 30, 1980, p. 421-427 *
RYYNANEN L., Effect of Abscisic Acid, Cold Hardening, and Photoperiod on Recovery of Cryopreserved in Vitro Shoot Tips of Silver Birch, Cryobiology 36, 1998, p. 32-39. МОХАММЕД АБДУЛВАСИ ИБРАХИМ, Микроразмножение, длительное депонирование и криосохранение in vitro малины красной, автореферат диссертации, Москва, 1998, с.12-16. ЦУПИКОВА Л.А., Депонирование и рекультивирование сахарной свеклы в культуре in vitro, Рамонь, 2002, с.29-30, с.32, 64-75, 127-129. *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2590703C1 (en) * 2015-04-17 2016-07-10 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук (ИБХ РАН) METHOD FOR PRESERVING QUALITY CHARACTERISTICS OF in vitro CULTURE OF SOME WOOD PLANTS (CHINESE MAGNOLIA, RHODODENDRON, LILAC, BIRCH)
RU2634409C1 (en) * 2016-10-03 2017-10-26 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский институт лесной генетики, селекции и биотехнологии" (ФГБУ "ВНИИЛГИСбиотех") Method for birch micro plants long-term storage in vitro
RU2731061C2 (en) * 2018-12-25 2020-08-28 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Пущинский государственный естественно-научный институт" (ПущГЕНИ) Method of storing rubus plants in vitro
RU2728684C1 (en) * 2019-05-17 2020-07-30 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный исследовательский центр картофеля им А.Г. Лорха" Method for preservation of potato healthier in vitro material

Also Published As

Publication number Publication date
RU2012147452A (en) 2013-07-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Hernández et al. Vegetative propagation of Quercus suber L. by somatic embryogenesis: II. Plant regeneration from selected cork oak trees
RU2522823C2 (en) Method of long storage in vitro of aspen plants
Yadav et al. High frequency direct plant regeneration from leaf, internode, and root segments of Eastern Cottonwood (Populus deltoides)
CN102499086B (en) Method for breeding locust
Thao et al. Callus induction and plantlet regeneration in ornamental Alocasia micholitziana
Aggarwal et al. Establishment of high frequency shoot regeneration system in Himalayan poplar (Populus ciliata Wall. ex Royle) from petiole explants using Thidiazuron cytokinin as plant growth regulator
Popova et al. The effect of seed cryopreservation on the development of protocorms by the hybrid orchid Bratonia
Stefenon et al. Advances and constraints in somatic embryogenesis of Araucaria angustifolia, Acca sellowiana, and Bactris gasipaes
Vieitez et al. Cryopreservation of zygotic embryonic axes and somatic embryos of European chestnut
Hohtola Somatic embryogenesis in Scots pine (Pinus sylvestris L.)
RU2731061C2 (en) Method of storing rubus plants in vitro
Vila et al. Plant regeneration from shoot apical meristems of Melia azedarach L.(Meliaceae)
Bandita Deo et al. Effects of plant growth hormones on shoot proliferation of Musa paradisiaca cv. BANTAL.
Zhang et al. Efficient somatic embryogenesis in sugar beet (Beta vulgaris L.) breeding lines
RU2565803C2 (en) Method of cryopreservation of axillary buds of aspen plants in vitro
CN102499087A (en) Isolated culture and plant regeneration method of silver chain
RU2565806C2 (en) Method of in vitro preparation of microshoots of ash, aspen, willow for subsequent rooting under ex vitro conditions
Zavattieri et al. Effects of carbon source, carbon concentration and culture conditions on in vitro rooting of Pinus pinea L. microshoots
Guerra et al. Fundamentals, advances and applications of somatic embryogenesis in selected Brazilian native species
US7950183B2 (en) Methods of producing a synchronized population of conifer somatic embryo germinants
Deb et al. Establishment of an embryogenic suspension culture of Pinus kesiya (Khasi pine) from various explants
Iordan-Costache et al. Improved micropropagation of Populus spp. by Pluronic F-68
Wang et al. Adventitious shoot regeneration from in vitro stem explants of Phellodendron amurense
Noveroli Recent Advances in Sago Palm (Metroxylon Saga Rottboell) Micropropagation
Hwang An efficient in vitro propagation of Zanthoxylum piperitum