RU2522203C2 - Method of controlling sterilisation of materials and products - Google Patents
Method of controlling sterilisation of materials and products Download PDFInfo
- Publication number
- RU2522203C2 RU2522203C2 RU2012126607/15A RU2012126607A RU2522203C2 RU 2522203 C2 RU2522203 C2 RU 2522203C2 RU 2012126607/15 A RU2012126607/15 A RU 2012126607/15A RU 2012126607 A RU2012126607 A RU 2012126607A RU 2522203 C2 RU2522203 C2 RU 2522203C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- sterilization
- cells
- materials
- biological indicators
- products
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано при контроле стерилизации бактериологическим методом материалов и изделий, например, медицинского или ветеринарного назначения.The invention relates to microbiology and can be used to control the sterilization by bacteriological method of materials and products, for example, medical or veterinary use.
Известен способ контроля стерилизации материалов и изделий, включающий размещение перед проведением процесса стерилизации среди стерилизуемых объектов биологических индикаторов со спорами клеток тест-микроорганизмов и бактериологический контроль жизнеспособности клеток тест-микроорганизмов после проведения процесса стерилизации (ГОСТ Р ИСО 11138-2-2000).A known method of controlling the sterilization of materials and products, including placing before the sterilization process among the sterilized objects biological indicators with spores of test microorganism cells and bacteriological control of cell viability of test microorganisms after the sterilization process (GOST R ISO 11138-2-2000).
Основным недостатком известного способа контроля стерилизации материалов и изделий является большая длительность (не менее 48 часов) получения результатов контроля стерилизации и необходимость использования множества дополнительных технических средств, специальных методик, приспособлений и специалистов для контроля жизнеспособности клеток тест-микроорганизмов биологических индикаторов.The main disadvantage of the known method for controlling the sterilization of materials and products is the long duration (at least 48 hours) of obtaining the results of sterilization control and the need to use many additional technical means, special techniques, devices and specialists to control the cell viability of test microorganisms of biological indicators.
Задачей настоящего изобретения является обеспечение возможности быстрого получения результата контроля эффективности процесса стерилизации материалов и изделий при одновременном упрощении технологии контроля жизнеспособности клеток тест-микроорганизмов биологических индикаторов.The objective of the present invention is the ability to quickly obtain the result of monitoring the effectiveness of the sterilization process of materials and products while simplifying the technology for monitoring the viability of cells of test microorganisms of biological indicators.
Техническим результатом изобретения является сокращение времени контроля эффективности процесса стерилизации материалов и изделий при одновременном упрощении технологии процесса контроля эффективности проводимой стерилизации.The technical result of the invention is to reduce the time for monitoring the effectiveness of the sterilization process of materials and products while simplifying the technology of the process for monitoring the effectiveness of sterilization.
Указанная задача достигается тем, что в известном способе контроля стерилизации материалов и изделий, включающем размещение перед проведением процесса стерилизации среди стерилизуемых объектов биологических индикаторов со спорами клеток тест-микроорганизмов и бактериологический контроль жизнеспособности клеток тест-микроорганизмов после проведения процесса стерилизации, сразу после окончания стерилизации в биологические индикаторы со спорами клеток тест-микроорганизмов вносят (0,3÷0,5) см3 хемилюминесцентной композиции, лизируют споры клеток тест-микроорганизмов, путем встряхивания биологических индикаторов в течение (3÷7) мин, далее хемилюминесцентным методом определяют в полученных экстрактах наличие жизнеспособных клеток тест-микроорганизмов и по интенсивности хемилюминесцентного свечения экстрактов определяют эффективность стерилизации материалов и изделий, при этом отсутствие хемилюминесцентного свечения при анализе каждого из полученных экстрактов является показателем эффективной стерилизации материалов и изделий. Причем в качестве биологических индикаторов могут быть использованы инокулированные носители в виде пробирок Эппендорфа, содержащие клетки Geobacillus Stearothermophilus штамм ВКМ В-718 в споровой форме, или инокулированные носители в виде флаконов из стекла, содержащие клетки Bacillus Licheniformis штамм G BKM-1711 D в виде спор, или инокулированные носители в виде одноразовых шприцов, содержащие клетки Bacillus Subtilis штамм В-168 ВКПМ В 10020 в споровой форме, или инокулированные носители с тест-микроорганизмами в виде одноразовых шприцов, содержащие клетки Geobacillus Stearothermophilus штамм ВКМ В-718 в споровой форме, а в качестве хемилюминесцентной композиции может быть использована полифункциональная хемилюминесцентная композиция, которая включает люминол, щелочь, Трилон Б, воду, метанол и глицин при следующем соотношении компонентов, мас.%:This problem is achieved by the fact that in the known method of controlling the sterilization of materials and products, including placing before the sterilization process among the sterilized objects biological indicators with spores of test microorganism cells and bacteriological monitoring of the viability of the cells of the test microorganisms after the sterilization process, immediately after sterilization in biological indicators with spores of cells of test microorganisms contribute (0.3 ÷ 0.5) cm 3 chemiluminescent composition, lysed spores of test microorganism cells by shaking biological indicators for (3 ÷ 7) minutes, then the chemiluminescent method determines the presence of viable test microorganism cells in the obtained extracts and determines the sterilization efficiency of materials and products by the intensity of the chemiluminescent glow of the extracts, while the absence of chemiluminescent glow in the analysis of each of the obtained extracts is an indicator of effective sterilization of materials and products. Moreover, inoculated carriers in the form of Eppendorf tubes containing cells of Geobacillus Stearothermophilus strain VKM B-718 in spore form or inoculated carriers in the form of glass vials containing cells of Bacillus Licheniformis strain G BKM-1711 D in the form of spores can be used as biological indicators or inoculated carriers in the form of disposable syringes containing Bacillus Subtilis cells strain B-168 VKPM B 10020 in spore form or inoculated carriers with test microorganisms in the form of disposable syringes containing Geobacillus Stearothermophilus cells w atm VKM B-718 in a spore form, and as the chemiluminescent composition can be used polyfunctional chemiluminescent composition which comprises a luminol, an alkali, Trilon B, water, methanol and glycine with the following component ratio, wt.%:
Проведенные исследования по патентным и научно-техническим информационным источникам показали, что предлагаемый способ неизвестен и не следует явным образом из изученного уровня техники, т.е. соответствует критериям "новизна" и "изобретательский уровень".Studies on patent and scientific and technical information sources have shown that the proposed method is unknown and does not follow explicitly from the studied prior art, i.e. meets the criteria of "novelty" and "inventive step".
Предлагаемый способ является простым и может быть применен в лечебно-профилактических учреждениях, ветеринарных учреждениях, на фармакологических предприятиях, на предприятиях пищевой промышленности и других предприятиях и учреждениях, снабженных отечественным оборудованием, где необходим контроль стерилизации изделий и материалов.The proposed method is simple and can be applied in medical institutions, veterinary institutions, pharmacological enterprises, food industry enterprises and other enterprises and institutions equipped with domestic equipment where sterilization of products and materials is necessary.
Таким образом, заявленный способ является доступным, а, следовательно, практически применимым.Thus, the claimed method is affordable, and, therefore, practically applicable.
Предлагаемая совокупность приемов, позволяет обеспечить сокращение времени (до (25÷30) мин.) контроля эффективности процесса стерилизации материалов и изделий при одновременном упрощении технологии его проведения.The proposed set of techniques allows to reduce the time (up to (25 ÷ 30) min.) To control the effectiveness of the sterilization process of materials and products while simplifying the technology of its implementation.
При реализации предлагаемого способа используют анализатор жидкостей люминесцентных (АЖЛ), например, АЖЛ, имеющий сертификат RU С 31/003 А №30534 от 22.02.08 г. С помощью АЖЛ проводят анализ экстрактов, содержащих клетки тест-микроорганизмов, при использовании биологических индикаторов в цикле стерилизации для определения параметров изменения интенсивности свечения реакционной смеси во времени.When implementing the proposed method, a luminescent liquid analyzer (ALC) is used, for example, ALC having a certificate of RU C 31/003 A No. 30534 dated 02.22.08. Using ALC, extracts containing cells of test microorganisms are analyzed using biological indicators in sterilization cycle to determine the parameters of the change in the intensity of the glow of the reaction mixture over time.
Предлагаемый способ контроля стерилизации материалов и изделий пояснен чертежом и таблицами.The proposed method for controlling the sterilization of materials and products is illustrated in the drawing and tables.
На фиг.1 представлен график изменения интенсивности свечения экстрактов клеток Bacillus Licheniforis штамм G BKM В-1711 D до использования биологических индикаторов в цикле стерилизации материалов согласно примера 1.Figure 1 presents a graph of the change in the intensity of the luminescence of extracts of cells of Bacillus Licheniforis strain G BKM B-1711 D before the use of biological indicators in the sterilization cycle of materials according to example 1.
На фиг.2 представлен график изменения интенсивности свечения экстрактов клеток Bacillus Licheniforis штамм G BKM В-1711 D после использования биологических индикаторов в цикле стерилизации материалов согласно примера 1.Figure 2 presents a graph of the change in the intensity of the luminescence of extracts of cells of Bacillus Licheniforis strain G BKM B-1711 D after using biological indicators in the sterilization cycle of materials according to example 1.
На фиг.3 представлен график изменения интенсивности свечения экстрактов клеток Geobacillus Stearothermophilus штамм ВКМ В-718 до использования биологических индикаторов в цикле стерилизации изделий согласно примера 2.Figure 3 presents a graph of the change in the intensity of the luminescence of extracts of cells of Geobacillus Stearothermophilus strain VKM B-718 before using biological indicators in the sterilization cycle of products according to example 2.
На фиг.4 представлен график изменения интенсивности свечения экстрактов клеток Geobacillus Stearothermophilus штамм BKM В-718 после использования биологических индикаторов в цикле стерилизации изделий согласно примера 2.Figure 4 presents a graph of the change in the intensity of the luminescence of extracts of cells of Geobacillus Stearothermophilus strain BKM B-718 after using biological indicators in the sterilization cycle of products according to example 2.
На фиг.5 представлен график изменения интенсивности свечения экстрактов клеток Bacillus Subtilis штамм В-168 ВКПМ В 10020 до использования биологических индикаторов в цикле стерилизации изделий согласно примера 3.Figure 5 presents a graph of the change in the intensity of the luminescence of extracts of cells of Bacillus Subtilis strain B-168 VKPM B 10020 before using biological indicators in the sterilization cycle of products according to example 3.
На фиг.6 представлен график изменения интенсивности свечения экстрактов клеток Bacillus Subtilis штамм В-168 ВКПМ В 10020 после использования их в цикле стерилизации изделий согласно примера 3.Figure 6 presents a graph of the change in the intensity of the glow of extracts of cells of Bacillus Subtilis strain B-168 VKPM B 10020 after using them in the sterilization cycle of products according to example 3.
На фиг.7 представлен график изменения интенсивности свечения экстрактов клеток Geobacillus Stearothermophilus штамм BKM В-718 до использования биологических индикаторов в цикле стерилизации изделий согласно примера 4.Figure 7 presents a graph of the change in the intensity of the luminescence of extracts of cells of Geobacillus Stearothermophilus strain BKM B-718 before using biological indicators in the sterilization cycle of products according to example 4.
На фиг.8 представлен график изменения интенсивности свечения экстрактов клеток Geobacillus Stearothermophilus штамм BKM В-718 после использования биологических индикаторов в цикле стерилизации изделий согласно примера 4.On Fig presents a graph of the intensity of the glow of extracts of cell extracts of Geobacillus Stearothermophilus strain BKM B-718 after using biological indicators in the sterilization cycle of products according to example 4.
В таблице 1 представлен результат контроля жизнеспособности клеток тест-микроорганизмов после стерилизации материалов согласно примера 1.Table 1 presents the result of monitoring the viability of the cells of the test microorganisms after sterilization of materials according to example 1.
В таблице 2 представлен результат контроля жизнеспособности клеток тест-микроорганизмов после стерилизации изделий согласно примера 2.Table 2 presents the result of monitoring the viability of the cells of the test microorganisms after sterilization of the products according to example 2.
В таблице 3 представлен результат контроля жизнеспособности клеток тест-микроорганизмов после стерилизации изделий согласно примера 3.Table 3 presents the result of monitoring the viability of the cells of the test microorganisms after sterilization of the products according to example 3.
В таблице 4 представлен результат контроля жизнеспособности клеток тест-микроорганизмов после стерилизации изделий согласно примера 4.Table 4 presents the result of monitoring the viability of the cells of the test microorganisms after sterilization of the products according to example 4.
Предлагаемый способ контроля стерилизации материалов и изделий осуществляют следующим образом.The proposed method for controlling the sterilization of materials and products is as follows.
Предварительно проводят бактериологический контроль жизнеспособности клеток микроорганизмов биологических индикаторов из тест-пакета, биологические индикаторы из которого в дальнейшем используют для контроля стерилизации материалов и изделий.Bacteriological control of the viability of the cells of microorganisms of biological indicators from a test package is preliminarily carried out, biological indicators from which are subsequently used to control the sterilization of materials and products.
Для этого из тест-пакета извлекают неиспользованные ранее биологические индикаторы, вносят в них по 0,3 см3 хемилюминесцентной композиции и в течение (3÷7) минут встряхиванием (перемешиванием) проводят экстракцию клеток тест-микроорганизмов, получая реакционную смесь в виде экстракта клеток тест-микроорганизмов.For this purpose, previously unused biological indicators are removed from the test package, 0.3 cm 3 of the chemiluminescent composition is added to them and, within 3-7 hours, the cells of the test microorganisms are extracted by shaking (stirring), and the reaction mixture is obtained as a cell extract test microorganisms.
Затем экстракт клеток тест-микроорганизмов каждого из биологических индикаторов поочередно переносят в кюветы АЖЛ, поочередно анализируют и определяют усредненную кривую кинетики изменения интенсивности свечения реакционной смеси во времени.Then, the extract of the cells of the test microorganisms of each of the biological indicators is alternately transferred to the AHL cuvettes, and the averaged kinetics curve of the change in the luminous intensity of the reaction mixture over time is determined and determined.
На выходе АЖЛ можно наблюдать усредненную кривую кинетики изменения интенсивности свечения реакционной смеси во времени (см. примеры на фиг.1, 3, 5, 7). О наличии жизнеспособности клеток можно судить по интенсивности свечения реакционной смеси.At the output of the AJL, one can observe the averaged kinetics curve of the change in the luminescence intensity of the reaction mixture over time (see examples in Figs. 1, 3, 5, 7). The presence of cell viability can be judged by the intensity of the glow of the reaction mixture.
Перед проведением процесса стерилизации среди стерилизуемых объектов размещают биологические индикаторы со спорами клеток тест-микроорганизмов из тест-пакета, прошедшего предварительный бактериологический контроль жизнеспособности клеток микроорганизмов, расположенных в нем биологических индикаторов.Before carrying out the sterilization process, biological indicators with spores of test microorganism cells from a test package that underwent preliminary bacteriological control of the cell viability of microorganisms located in it biological indicators are placed among the objects to be sterilized.
После процесса стерилизации проводят бактериологический контроль жизнеспособности клеток тест-микроорганизмов биологических индикаторов которые были размещены среди стерилизуемых объектов перед проведением процесса стерилизации.After the sterilization process, bacteriological control of the viability of the cells of the test microorganisms of biological indicators is carried out, which were placed among the sterilized objects before the sterilization process.
Для этого сразу после окончания процесса стерилизации в биологические индикаторы со спорами клеток тест-микроорганизмов вносят (0,3÷0,5) см3 хемилюминесцентной композиции, лизируют споры клеток тест-микроорганизмов путем встряхивания биологических индикаторов в течение (3÷7) мин и далее хемилюминесцентным методом определяют в полученном экстракте наличие жизнеспособных клеток тест-микроорганизмов. По изменению интенсивности хемилюминесцентного свечения судят о наличии жизнеспособных клеток тест-микроорганизмов после процесса стерилизации и определяют его эффективность. При этом отсутствие свечения указывает на отсутствие жизнеспособных клеток тест-микроорганизмов в исследуемом экстракте. Отсутствие жизнеспособных клеток тест-микроорганизмов в биологических индикаторах, которые были использованы для контроля процесса стерилизации, свидетельствует об эффективной стерилизации материалов и изделий.For this, immediately after the end of the sterilization process, (0.3 ÷ 0.5) cm 3 of chemiluminescent composition is introduced into biological indicators with spores of test microorganism cells, lysed spores of test microorganism cells by shaking biological indicators for (3 ÷ 7) min and further, the presence of viable cells of test microorganisms in the obtained extract is determined by the chemiluminescent method. The change in the intensity of the chemiluminescent glow is used to judge the presence of viable cells of test microorganisms after the sterilization process and determine its effectiveness. In this case, the absence of a glow indicates the absence of viable cells of test microorganisms in the studied extract. The absence of viable cells of test microorganisms in biological indicators, which were used to control the sterilization process, indicates the effective sterilization of materials and products.
Обнаружение жизнеспособных клеток тест-микроорганизмов хотя бы в одном из анализируемых биологических индикаторах указывает на то, что проведенная стерилизация материалов и изделий неэффективна, а материалы и изделия нуждаются в повторной стерилизации.Detection of viable cells of test microorganisms in at least one of the analyzed biological indicators indicates that the sterilization of materials and products has been ineffective, and materials and products need to be re-sterilized.
Возникновение свечения реакционной среды при смешении экстракта клеток тест-микроорганизмов с хемилюминесцентной композицией происходит по следующему механизму.The appearance of the luminescence of the reaction medium when the extract of the cells of the test microorganisms is mixed with the chemiluminescent composition occurs according to the following mechanism.
При экстракции клеток тест-микроорганизмов полифункциональной композицией, имеющей рН>10,0, происходит их лизис. В результате лизиса клеток их внутриклеточные ферменты группы оксидаз (каталаза, пероксидаза и т.п.) выходят в экстракт. При смешении экстракта клеточной субстанции с раствором пероксида водорода происходит его каталитическое разложение ферментами группы оксидаз по свободно-радикальному механизму по реакции:When the cells of the test microorganisms are extracted with a polyfunctional composition having a pH> 10.0, they are lysed. As a result of lysis of the cells, their intracellular enzymes of the oxidase group (catalase, peroxidase, etc.) are released into the extract. When the extract of the cellular substance is mixed with a solution of hydrogen peroxide, it is catalytically decomposed by the enzymes of the oxidase group according to the free-radical reaction mechanism:
Fe2++H2O2 → Fe3++НО2 *+H+ Fe 2+ + H 2 O 2 → Fe 3+ + HO 2 * + H +
Ре3++H2O2 → Fe2++НО*+OH.Pe 3+ + H 2 O 2 → Fe 2 ++ HO * + OH.
и последующие реакции:and subsequent reactions:
ОН*+H2O2 → H2O+HO2 * OH * + H 2 O 2 → H 2 O + HO 2 *
HO2 *+HO2 * → H2O+O2 - HO 2 * + HO 2 * → H 2 O + O 2 -
HO2 * → H++O2 - HO 2 * → H + + O 2 -
Fe2-+O2 → O2 -+Fe3+ Fe 2- + O 2 → O 2 - + Fe 3+
В процессе последних реакций комбинации свободных радикалов образуют короткоживущие соединения типа ассоциированного и неассоциированного Ван-дер-Вальсовского комплекса кислорода, обладающего избыточной энергией, которая трансформируется люминолом в свет по реакции:In the course of the latter reactions, combinations of free radicals form short-lived compounds of the type of the associated and non-associated Van der Waals oxygen complex, which has excess energy, which is transformed by luminol into light by the reaction:
где h - квант энергии.where h is the energy quantum.
Пример 1.Example 1
Проведен контроль процесса стерилизации материалов медицинского назначения сухим горячим воздухом.The process of sterilization of medical materials with dry hot air was monitored.
Предварительно по вышеописанной методике проведен бактериологический контроль жизнеспособности клеток тест-микроорганизмов биологических индикаторов - инокулированных носителей в виде флаконов из стекла, содержащих клетки Bacillus Licheniformis штамм G BKM-1711D в виде спор, из тест-пакета, биологические индикаторы которого в дальнейшем использовали для контроля проводимой стерилизации. Результат предварительной проверки показал высокий уровень жизнеспособности клеток тест-микроорганизмов биологических индикаторов из используемого в дальнейшем тест-пакета (см. фиг.1).Previously, according to the method described above, bacteriological monitoring of cell viability of test microorganisms of biological indicators — inoculated carriers in the form of glass bottles containing Bacillus Licheniformis cells G strain BKM-1711D in the form of spores — was carried out from a test package, the biological indicators of which were subsequently used to monitor sterilization. The result of the preliminary check showed a high level of viability of the cells of the test microorganisms of biological indicators from the test package used in the future (see figure 1).
Стерилизуемые материалы поместили в воздушный стерилизатор и среди них разместили 30 биологических индикаторов - инокулированных носителей в виде флаконов из стекла, содержащих клетки Bacillus Licheniformis штамм G BKM-1711D в виде спор из тест-пакета, прошедшего предварительный бактериологический контроль. Стерилизацию материалов проводили при (180±3)°С в течение 60 минут.The materials to be sterilized were placed in an air sterilizer and 30 biological indicators were placed among them - inoculated carriers in the form of glass bottles containing Bacillus Licheniformis strain G cells BKM-1711D in the form of spores from a test package that underwent preliminary bacteriological control. Materials were sterilized at (180 ± 3) ° C for 60 minutes.
По окончании стерилизации провели бактериологический контроль жизнеспособности клеток тест-микроорганизмов биологических индикаторов. Для этого во флаконы с тест-микроорганизмами налили по 0,3 см3 хемилюминесцентной композиции, закрыли их пробками и путем встряхивания (перемешивания) экстрагировали клетки тест-микроорганизмов в течение 7 минут. Полученные экстракты анализировали на АЖЛ.At the end of sterilization, bacteriological control of the viability of the cells of the test microorganisms of biological indicators was carried out. For this, 0.3 cm 3 of chemiluminescent composition was poured into vials with test microorganisms, closed with stoppers, and cells of test microorganisms were extracted by shaking (mixing) for 7 minutes. The obtained extracts were analyzed for AHL.
Отсутствие свечения на выходе АЖЛ при анализе исследуемых экстрактов по окончании стерилизации показывало, что стерилизация материалов прошла эффективно (см. фиг.2). Время анализа 30 мин. Результаты анализа с использованием предлагаемого способа представлены на фиг.2 и в табл.1.The absence of glow at the output of the AHL during the analysis of the studied extracts after sterilization showed that the sterilization of the materials was effective (see figure 2).
Параллельно экстракты клеток тест-микроорганизмов биологических индикаторов высевали на питательную среду и термостатировали при 37°С в течение 48 часов.In parallel, cell extracts of test microorganisms of biological indicators were sown on a nutrient medium and thermostated at 37 ° C for 48 hours.
Отсутствие изменения цвета питательной среды показало, что стерилизация материалов эффективна. Время анализа 48 часов.The absence of color change in the culture medium showed that sterilization of materials is effective. Analysis time 48 hours.
Полученные результаты показали эффективность предлагаемого способа контроля стерилизации материалов медицинского назначения и значительное сокращение времени контроля процесса стерилизации с 48 часов до 30 минут.The results showed the effectiveness of the proposed method for controlling the sterilization of medical materials and a significant reduction in the time for monitoring the sterilization process from 48 hours to 30 minutes.
Пример 2.Example 2
Проведен контроль процесса стерилизации паром под давлением изделий медицинского назначения.The steam sterilization process under the pressure of medical devices was monitored.
Предварительно по вышеописанной методике проведен бактериологический контроль жизнеспособности клеток тест-микроорганизмов биологических индикаторов - инокулированных носителей в виде пробирок Эппендорфа, содержащих клетки Geobacillus Stearothermophilus штамм BKM В-718 в споровой форме из тест-пакета, биологические индикаторы из которого использовали в дальнейшем для контроля проводимого процесса стерилизации. Результат предварительной проверки показал высокий уровень жизнеспособности клеток тест-микроорганизмов биологических индикаторов из используемого тест-пакета (см. фиг.3).Preliminarily, according to the method described above, bacteriological monitoring of cell viability of test microorganisms of biological indicators — inoculated carriers in the form of Eppendorf tubes containing Geobacillus Stearothermophilus cells BKM strain B-718 in spore form from a test package, biological indicators from which were subsequently used to control the process was carried out sterilization. The result of the preliminary check showed a high level of viability of the cells of the test microorganisms of biological indicators from the used test package (see figure 3).
Стерилизуемые изделия медицинского назначения поместили в автоклав и среди них разместили 30 единиц биологических индикаторов - инокулированных носителей в виде пробирок Эппендорфа, содержащих клетки Geobacillus Stearothermophilus штамм BKM В-718 в споровой форме из тест-пакета, прошедшего предварительный бактериологический контроль.Sterilized medical devices were placed in an autoclave and among them 30 units of biological indicators were placed - inoculated carriers in the form of Eppendorf tubes containing Geobacillus Stearothermophilus cells strain BKM B-718 in a spore form from a test package that underwent preliminary bacteriological control.
Стерилизацию изделий проводили при температуре 121°С в течение 20 минут.Sterilization of the products was carried out at a temperature of 121 ° C for 20 minutes.
По окончании стерилизации провели бактериологический контроль жизнеспособности клеток тест-микроорганизмов биологических индикаторов.At the end of sterilization, bacteriological control of the viability of the cells of the test microorganisms of biological indicators was carried out.
Для этого в пробирки Эппендорфа, содержащие клетки Geobacillus Stearothermophilus штамм BKM В-718 в споровой форме, поочередно наливали по 0,3 см3 полифункциональной хемилюминесцентной композиции и путем встряхивания проводили лизирование клеток тест-микроорганизмов в течение 3 минут.For this, in Eppendorf tubes containing cells of Geobacillus Stearothermophilus strain BKM B-718 in spore form, 0.3 cm 3 of a polyfunctional chemiluminescent composition was alternately poured and test microorganisms were lysed by shaking for 3 minutes.
Полученный экстракт анализировали на АЖЛ.The resulting extract was analyzed for AHL.
Отсутствие свечения на выходе АЖЛ при анализе полученных экстрактов по окончании стерилизации показывало, что стерилизация изделий прошла эффективно (см. фиг.2). Время анализа 25 мин. Результаты анализа с использованием предлагаемого способа представлены на фиг.4 и в табл.2.The absence of glow at the output of the AHL when analyzing the obtained extracts at the end of sterilization showed that the sterilization of the products was effective (see figure 2). Analysis time 25 min. The results of the analysis using the proposed method are presented in figure 4 and table 2.
Параллельно экстракт клеток тест-микроорганизмов высевали на цветную питательную среду и термостатировали при температуре 37°С в течение 48 часов.In parallel, the extract of the cells of the test microorganisms was sown on a colored nutrient medium and thermostated at a temperature of 37 ° C for 48 hours.
Отсутствие изменения цвета питательной среды показало, что стерилизация изделий эффективна. Время анализа 48 часов.The absence of a color change in the culture medium showed that sterilization of products is effective. Analysis time 48 hours.
Полученные результаты показали эффективность предлагаемого способа контроля стерилизации изделий медицинского назначения и значительное сокращение времени контроля процесса стерилизации с 48 часов до 25 минут.The results obtained showed the effectiveness of the proposed method for controlling sterilization of medical devices and a significant reduction in the time for monitoring the sterilization process from 48 hours to 25 minutes.
Пример 3.Example 3
Проведен контроль процесса стерилизации оксидом этилена изделий медицинского назначения.The process of sterilization with ethylene oxide of medical devices was monitored.
Предварительно по вышеописанной методике проведен бактериологический контроль жизнеспособности клеток тест-микроорганизмов биологических индикаторов - инокулированных носителей с тест-микроорганизмами в виде одноразовых шприцов, содержащих клетки Bacillus Subtilis штамм В-168 ВКПМ В 10020 в споровой форме из тест-пакета, биологические индикаторы из которого в дальнейшем использовали для контроля проводимой стерилизации. Результат предварительной проверки показал высокий уровень жизнеспособности клеток тест-микроорганизмов биологических индикаторов из используемого тест-пакета (см. фиг.5).Previously, according to the method described above, bacteriological monitoring of cell viability of test microorganisms of biological indicators — inoculated carriers with test microorganisms in the form of disposable syringes containing Bacillus Subtilis cells strain B-168 VKPM B 10020 in a spore form from a test package, biological indicators of which further used to control the ongoing sterilization. The result of the preliminary check showed a high level of viability of the cells of the test microorganisms of biological indicators from the used test package (see figure 5).
Стерилизуемые изделия поместили в стерилизатор. Среди стерилизуемых изделий разместили 30 единиц биологических индикаторов - инокулированных носителей с тест-микроорганизмами в виде одноразовых шприцов, содержащих клетки Bacillus Subtilis штамм В-168 ВКПМ В 10020 в споровой форме из тест-пакета, прошедшего предварительный бактериологический контроль.Sterilized products were placed in a sterilizer. Among the sterilized
Далее изделия стерилизовали при температуре 55°С, относительной влажности 80%, концентрации оксида этилена до 1000 мг на литр объема и экспозиции 60 минут.Further, the products were sterilized at a temperature of 55 ° C, relative humidity of 80%, ethylene oxide concentration up to 1000 mg per liter of volume and exposure for 60 minutes.
По окончании стерилизации провели бактериологический контроль жизнеспособности клеток тест-микроорганизмов биологических индикаторов.At the end of sterilization, bacteriological control of the viability of the cells of the test microorganisms of biological indicators was carried out.
Для этого в шприцы с тест-микроорганизмами набирали по 0,5 см3 полифункциональной хемилюминесцентной композиции и путем встряхивания (перемешивания) лизировали клетки в течение 5 минут. Полученные экстракты анализировали на АЖЛ.To do this, 0.5 cm 3 of a multifunctional chemiluminescent composition was drawn into syringes with test microorganisms and cells were lysed by shaking (mixing) for 5 minutes. The obtained extracts were analyzed for AHL.
Отсутствие свечения на выходе АЖЛ при анализе полученных экстрактов по окончании стерилизации показало, что стерилизация прошла эффективно (см. фиг.6). Время анализа 25 мин. Результаты анализа с использованием предлагаемого способа представлены на фиг.6 и в табл.3.The absence of glow at the output of the AHL when analyzing the obtained extracts at the end of sterilization showed that sterilization was effective (see Fig.6). Analysis time 25 min. The results of the analysis using the proposed method are presented in Fig.6 and in table.3.
Параллельно экстракты клеток тест-микроорганизмов высевали на питательную среду и термостатировали при температуре 37°С в течение 48 часов.In parallel, the extracts of the cells of the test microorganisms were sown on a nutrient medium and thermostated at a temperature of 37 ° C for 48 hours.
Отсутствие изменения цвета питательной среды показало, что стерилизация изделий эффективна. Время анализа 48 часов.The absence of a color change in the culture medium showed that sterilization of products is effective. Analysis time 48 hours.
Полученные результаты показали эффективность предлагаемого способа контроля стерилизации изделий медицинского назначения и значительное сокращение времени контроля процесса стерилизации с 48 часов до 25 минут.The results obtained showed the effectiveness of the proposed method for controlling sterilization of medical devices and a significant reduction in the time for monitoring the sterilization process from 48 hours to 25 minutes.
Пример 4.Example 4
Проведен контроль процесса стерилизации формальдегидом изделий медицинского назначения.The process of sterilization with formaldehyde of medical devices was monitored.
Предварительно по вышеописанной методике проведен бактериологический контроль жизнеспособности клеток тест-микроорганизмов биологических индикаторов - инокулированных носителей с тест-микроорганизмами в виде шприцов, содержащих клетки Geobacillus Stearothermophilus штамм ВКМ В-718 в споровой форме из тест-пакета, биологические индикаторы из которого в дальнейшем использовали для контроля проводимой стерилизации.Previously, according to the method described above, bacteriological monitoring of cell viability of test microorganisms of biological indicators — inoculated carriers with test microorganisms in the form of syringes containing Geobacillus Stearothermophilus cells VKM strain B-718 in spore form from a test package, biological indicators from which were subsequently used for control sterilization.
Результат проверки показал высокий уровень жизнеспособности клеток тест-микроорганизмов биологических индикаторов из используемого тест-пакета (см. фиг.7).The test result showed a high level of viability of the cells of the test microorganisms of biological indicators from the used test package (see Fig.7).
Стерилизуемые изделия поместили в стерилизатор и разместили среди них 30 единиц биологических индикаторов - инокулированных носителей с тест-микроорганизмами в виде шприцов, содержащими клетки Geobacillus Stearothermophilus штамм ВКМ В-718 в споровой форме из тест-пакета, прошедшего предварительный бактериологический контроль.Sterilized products were placed in a sterilizer and 30 units of biological indicators were placed among them - inoculated carriers with test microorganisms in the form of syringes containing cells of Geobacillus Stearothermophilus strain VKM B-718 in a spore form from a test package that underwent preliminary bacteriological control.
Изделия стерилизовали при температуре 75°С, относительной влажности 100%, концентрации формальдегида 30 мг/л в течение 60 минут.Products were sterilized at a temperature of 75 ° C, relative humidity of 100%, formaldehyde concentration of 30 mg / l for 60 minutes.
По окончании процесса стерилизации проведен бактериологический контроль жизнеспособности клеток тест-микроорганизмов биологических индикаторов.At the end of the sterilization process, bacteriological monitoring of cell viability of test microorganisms of biological indicators was carried out.
Для этого в шприц с тест-микроорганизмами набирали по 0,3 см3 полифункциональной хемилюминесцентной композиции и путем встряхивания (перемешивания) лизировали клетки в течение 5 минут. Полученные экстракты клеток анализировали на АЖЛ.For this, 0.3 cm 3 of a polyfunctional chemiluminescent composition was drawn into a syringe with test microorganisms and cells were lysed by shaking (mixing) for 5 minutes. The obtained cell extracts were analyzed for AHL.
Отсутствие свечения на выходе АЖЛ при анализе исследуемых биологических индикаторов по окончании стерилизации показывало, что стерилизация прошла эффективно (см. фиг.8). Время анализа 27 мин. Результаты анализа с использованием предлагаемого способа представлены на фиг.8 и в табл.4.The absence of glow at the output of the AHL during the analysis of the biological indicators under study after sterilization showed that the sterilization was effective (see Fig. 8). Analysis time 27 min. The results of the analysis using the proposed method are presented in Fig. 8 and in Table 4.
Параллельно экстракты клеток тест-микроорганизмов биологических индикаторов высевали на питательную среду и термостатировали при температуре 37°С в течение 48 часов.In parallel, cell extracts of test microorganisms of biological indicators were sown on a nutrient medium and thermostated at a temperature of 37 ° C for 48 hours.
Отсутствие изменения цвета питательной среды показало, что стерилизация изделий эффективна. Время анализа 48 часов.The absence of a color change in the culture medium showed that sterilization of products is effective. Analysis time 48 hours.
Полученные результаты показали эффективность предлагаемого способа контроля стерилизации изделий медицинского назначения и значительное сокращение времени контроля стерилизации изделий и материалов с 48 часов до 27 минут.The results showed the effectiveness of the proposed method for controlling the sterilization of medical devices and a significant reduction in the time for controlling the sterilization of products and materials from 48 hours to 27 minutes.
Таким образом, предлагаемый способ контроля стерилизации изделий и материалов обладает следующими преимуществами перед существующими в настоящее время:Thus, the proposed method of controlling the sterilization of products and materials has the following advantages over currently existing:
- время получения результата стерилизации составляет (25÷30) минут против 48 часов при той же достоверности контроля процесса стерилизации, что позволяет использовать его при каждом цикле стерилизации.- the time to obtain the sterilization result is (25 ÷ 30) minutes versus 48 hours with the same reliability of the control of the sterilization process, which allows you to use it with each sterilization cycle.
- нет необходимости приготавливать и использовать специальные питательные среды, термостаты, вспомогательное оборудование,- there is no need to prepare and use special nutrient media, thermostats, auxiliary equipment,
- упрощение технологии контроля жизнеспособности клеток тест-микроорганизмов биологических индикаторов, при этом нет необходимости содержать штат специалистов-микробиологов, помещения, расходовать электроэнергию, воду, газ и т.д.- simplification of technology for monitoring the viability of cells of test microorganisms of biological indicators, while there is no need to maintain a staff of specialist microbiologists, premises, consume electricity, water, gas, etc.
Предлагаемый способ контроля стерилизации изделий и материалов может быть применен в лечебно-профилактических учреждениях, ветеринарных учреждениях, на фармакологических предприятиях, на предприятиях пищевой промышленности и других предприятиях и учреждениях, где необходим контроль стерилизации изделий и материалов.The proposed method for controlling the sterilization of products and materials can be applied in medical institutions, veterinary institutions, pharmacological enterprises, food industry enterprises and other enterprises and institutions where sterilization of products and materials is necessary.
Claims (6)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2012126607/15A RU2522203C2 (en) | 2012-06-26 | 2012-06-26 | Method of controlling sterilisation of materials and products |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2012126607/15A RU2522203C2 (en) | 2012-06-26 | 2012-06-26 | Method of controlling sterilisation of materials and products |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2012126607A RU2012126607A (en) | 2014-01-20 |
| RU2522203C2 true RU2522203C2 (en) | 2014-07-10 |
Family
ID=49944563
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2012126607/15A RU2522203C2 (en) | 2012-06-26 | 2012-06-26 | Method of controlling sterilisation of materials and products |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2522203C2 (en) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2683644C2 (en) * | 2016-03-02 | 2019-04-01 | Этикон, Инк. | Apparatus and method for analysing biological indicators |
| US11390901B2 (en) | 2016-03-02 | 2022-07-19 | Asp Global Manufacturing Gmbh | Apparatus and method for analyzing biological indicators |
| US11660365B2 (en) | 2016-03-02 | 2023-05-30 | Asp Global Manufacturing Gmbh | Apparatus and method for sterilizing medical devices |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20220053782A (en) * | 2020-10-23 | 2022-05-02 | (주)아덴하이진 | Biological-Indicator for rapid verification of disinfection or sterilization verification |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2251110C2 (en) * | 1999-03-01 | 2005-04-27 | Айдек Фармасьютикалз Корпорейшн | Radioactive labeling set and binding analysis |
| RU2276190C2 (en) * | 2004-06-02 | 2006-05-10 | Военный университет радиационной, химической и биологической защиты | Express-method for assay of microscopic fungi, bacteria and yeasts |
| RU2378315C1 (en) * | 2008-04-17 | 2010-01-10 | Закрытое акционерное общество "ДиаМорф" | Polyfunctional chemiluminescent composition |
| WO2011011189A1 (en) * | 2009-07-20 | 2011-01-27 | 3M Innovative Properties Company | Biological sterilization indicator and method of using same |
-
2012
- 2012-06-26 RU RU2012126607/15A patent/RU2522203C2/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2251110C2 (en) * | 1999-03-01 | 2005-04-27 | Айдек Фармасьютикалз Корпорейшн | Radioactive labeling set and binding analysis |
| RU2276190C2 (en) * | 2004-06-02 | 2006-05-10 | Военный университет радиационной, химической и биологической защиты | Express-method for assay of microscopic fungi, bacteria and yeasts |
| RU2378315C1 (en) * | 2008-04-17 | 2010-01-10 | Закрытое акционерное общество "ДиаМорф" | Polyfunctional chemiluminescent composition |
| WO2011011189A1 (en) * | 2009-07-20 | 2011-01-27 | 3M Innovative Properties Company | Biological sterilization indicator and method of using same |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Р.Л. ГУТЕРМАН и др. Современные средства контроля стерилизационного и дезинфекционного оборудования. // Журнал "Медтехника и медизделия" N4(54) июнь/июль, 2009, опубликовано 09.07.2009 [он-лайн], [найдено 12.04.2013]. Найдено из Интернет: . * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2683644C2 (en) * | 2016-03-02 | 2019-04-01 | Этикон, Инк. | Apparatus and method for analysing biological indicators |
| US11390901B2 (en) | 2016-03-02 | 2022-07-19 | Asp Global Manufacturing Gmbh | Apparatus and method for analyzing biological indicators |
| US11660365B2 (en) | 2016-03-02 | 2023-05-30 | Asp Global Manufacturing Gmbh | Apparatus and method for sterilizing medical devices |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2012126607A (en) | 2014-01-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2522203C2 (en) | Method of controlling sterilisation of materials and products | |
| Prorot et al. | Sludge disintegration during heat treatment at low temperature: a better understanding of involved mechanisms with a multiparametric approach | |
| Horan et al. | Die-off of enteric bacterial pathogens during mesophilic anaerobic digestion | |
| Elizaquível et al. | Application of propidium monoazide-qPCR to evaluate the ultrasonic inactivation of Escherichia coli O157: H7 in fresh-cut vegetable wash water | |
| Smet et al. | Influence of food intrinsic factors on the inactivation efficacy of cold atmospheric plasma: Impact of osmotic stress, suboptimal pH and food structure | |
| Cella et al. | Assessment of microbial viability in municipal sludge following ultrasound and microwave pretreatments and resulting impacts on the efficiency of anaerobic sludge digestion | |
| Zhang et al. | On the mechanisms of deactivation of Bacillus atrophaeus spores using supercritical carbon dioxide | |
| Zhang et al. | Viability assay of E. coli O157: H7 treated with electrolyzed oxidizing water using flow cytometry | |
| Bennet et al. | Evaluation of supercritical CO2 sterilization efficacy for sanitizing personal protective equipment from the coronavirus SARS-CoV-2 | |
| Hossain et al. | Mathematical modeling of Enterococcus faecalis, Escherichia coli, and Bacillus sphaericus inactivation in infectious clinical solid waste by using steam autoclaving and supercritical fluid carbon dioxide sterilization | |
| Hossain et al. | Modeling the supercritical carbon dioxide inactivation of Staphylococcus aureus, Escherichia coli and Bacillus subtilis in human body fluids clinical waste | |
| Maiti et al. | Anaerobic culture on growth efficient bi-layered culture plate in a modified candle jar using a rapid and slow combustion system | |
| Borkar et al. | Plasma-generated nitric oxide water: A promising strategy to combat bacterial dormancy (VBNC state) in environmental contaminant Micrococcus luteus | |
| JP2011224001A (en) | Culture medium for cultivation and identification of bacteria of genus pectinatus and method for taking swab samples | |
| Sebald et al. | Pasteur, oxygen and the anaerobes revisited | |
| Zhe et al. | Control of multidrug-resistant planktonic Acinetobacter baumannii: biocidal efficacy study by atmospheric-pressure air plasma | |
| Kaur et al. | Assessment of Escherichia coli reactivation after photocatalytic water disinfection using flow cytometry: comparison with a culture-based method | |
| CN1995373A (en) | Paper sheet for quick-testing of coliform group bacteria of dung in water | |
| Mushtaq et al. | Effectiveness of pressurised carbon dioxide for inactivation of Escherichia coli isolated from sewage sludge | |
| CN201903505U (en) | Portable meat freshness quick-test box | |
| Nwankwo et al. | Evaluation of antimicrobial activity of prodigiosin produced from Serratia marcescens against some pathogenic bacteria | |
| RU2576030C1 (en) | Method for detecting danger of microbiological water pollution | |
| Shahin et al. | Comparative evaluation of anoxomat and conventional anaerobic GasPak jar systems for the isolation of anaerobic bacteria | |
| CN101886130B (en) | Method for quantitatively detecting deoxyribonucleic acid (DNA) demethylation capability of pollutant | |
| RU2276190C2 (en) | Express-method for assay of microscopic fungi, bacteria and yeasts |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20150627 |