RU2517037C1 - Method for preparing bone mineral component, and bone mineral component for filling and replacing bone defects - Google Patents
Method for preparing bone mineral component, and bone mineral component for filling and replacing bone defects Download PDFInfo
- Publication number
- RU2517037C1 RU2517037C1 RU2013105243/15A RU2013105243A RU2517037C1 RU 2517037 C1 RU2517037 C1 RU 2517037C1 RU 2013105243/15 A RU2013105243/15 A RU 2013105243/15A RU 2013105243 A RU2013105243 A RU 2013105243A RU 2517037 C1 RU2517037 C1 RU 2517037C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- blocks
- bone
- hours
- mineral component
- bricks
- Prior art date
Links
Landscapes
- Materials For Medical Uses (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине и может быть использовано для получения костного минерального компонента, а более конкретно к хирургической стоматологии, травматологии и ортопедии, и может быть использовано в качестве остеопластического материала при оперативном замещении костных дефектов (любого рода деструкция костной ткани, при удалении из костной ткани кист и опухолей и т.д.), а также в качестве носителя биологически активных веществ, стимулирующих остеогенез, лекарственных средств и клеток.The invention relates to medicine and can be used to obtain a bone mineral component, and more particularly to surgical dentistry, traumatology and orthopedics, and can be used as osteoplastic material for the surgical replacement of bone defects (any kind of destruction of bone tissue, when removed from bone tissue cysts and tumors, etc.), as well as a carrier of biologically active substances that stimulate osteogenesis, drugs and cells.
Так из описания к заявке США №5167961 (опубликована 01.12.1992) известен способ получения минерального костного компонента из костной ткани, например, производства Geistlich Sonne AG Fur Chemische Industrie (Люцен Швейцария) и остеопластический материал (Bio-Oss), включающий измельчение, гидролиз костной ткани, промывание, высушивание и обжиг на воздухе при температуре 250-600°C.So from the description of US application No. 5167961 (published December 1, 1992), a method for producing a mineral bone component from bone tissue is known, for example, manufactured by Geistlich Sonne AG Fur Chemische Industrie (Lucen Switzerland) and osteoplastic material (Bio-Oss), including grinding, hydrolysis bone tissue, washing, drying and firing in air at a temperature of 250-600 ° C.
Однако при использовании данного способа нельзя получить костный материал, аналогичный нативному минералу кости, так как в процессе получения часть резидуальных белков остается в материале.However, when using this method, it is impossible to obtain bone material similar to the native bone mineral, since in the process of obtaining a part of the residual proteins remains in the material.
Наиболее близким аналогом к патентуемому решению является способ получения костного материала, раскрытый в описании к патенту РФ №2189823 (опубликован 27.09.2002), особенностью которого является проведение гидролиза измельченной костной ткани смесью щелочи и этанола, с целью одновременного разрушения белка и обезжиривания костной крошки.The closest analogue to the patented solution is the method for producing bone material disclosed in the description of the patent of the Russian Federation No. 2189823 (published September 27, 2002), the feature of which is the hydrolysis of crushed bone tissue with a mixture of alkali and ethanol, in order to simultaneously destroy protein and degrease bone crumbs.
К недостаткам этого способа следует отнести то, что при обработке ткани этой смесью большая часть жира остается в ткани и, следовательно, часть белка (липопротеины) остается в крошке.The disadvantages of this method include the fact that when processing the tissue with this mixture, most of the fat remains in the tissue and, therefore, part of the protein (lipoproteins) remains in the crumbs.
Недостаточное выведение липопротеинов и других антигенных компонентов костной ткани делает применение данного способа для получения костного минерального компонента невозможным.The insufficient removal of lipoproteins and other antigenic components of bone tissue makes the use of this method to obtain a bone mineral component impossible.
К тому же гидролиз и обезжиривание материала в виде крошки значительно затруднен в результате плотности массы материала.In addition, the hydrolysis and degreasing of the material in the form of crumbs is significantly difficult as a result of the mass density of the material.
Задачей изобретения является получение костного минерального компонента, лишенного антигенных свойств, и, в конечном итоге, получение костного минерального компонента - неантигенного материала для замещения и восстановления костных дефектов с выраженными остеокондуктивными свойствами.The objective of the invention is to obtain a bone mineral component, devoid of antigenic properties, and, ultimately, obtaining a bone mineral component - non-antigenic material for the replacement and restoration of bone defects with pronounced osteoconductive properties.
Техническим результатом патентуемого изобретения является получение костного минерального компонента с выраженным остеокондуктивным эффектом.The technical result of the patented invention is to obtain a bone mineral component with a pronounced osteoconductive effect.
Технический результат согласно изобретению достигается за счет осуществления способа получения костного минерального компонента, заключающегося в том, что костную губчатую ткань распиливают на блоки размером от 0,008 до 0,125 см3, которые помещают в 2% раствор натрия хлорида и проводят высаливание белков, форменных элементов крови и частиц жира из трабекул костной губчатой ткани в течение 24÷48 часов, промывают блоки водой, осуществляют гидролиз в 2% растворе гидроксида натрия в течение 24÷48 часов, затем гидролизат сливают, а блоки промывают водой при постоянном помешивании до полной нейтрализации гидроксида натрия, помещают блоки в 3-4% раствор перекиси водорода на 10÷16 часов, промывают блоки дистиллированной водой, далее в течение от 48 до 72 часов осуществляют обезжиривание блоков в смеси хлороформа с этанолом, взятых в соотношении 2:1, после чего блоки промывают дистиллированной водой, при постоянном помешивании, затем прогревают, равномерно повышая температуру от 600 до 1200°C, дополнительно прогревают при 1200÷1300°C в течение 2-5 минут.The technical result according to the invention is achieved through the implementation of a method for producing a bone mineral component, which consists in the fact that bone spongy tissue is sawn into blocks ranging in size from 0.008 to 0.125 cm 3 , which are placed in a 2% sodium chloride solution and salting out proteins, blood cells and particles of fat from trabeculae of bone cancellous tissue for 24–48 hours, the blocks are washed with water, hydrolysis is carried out in a 2% sodium hydroxide solution for 24–48 hours, then the hydrolyzate is drained and the blocks are washed with water with constant stirring until the sodium hydroxide is completely neutralized, place the blocks in a 3-4% hydrogen peroxide solution for 10–16 hours, rinse the blocks with distilled water, then degrease the blocks in a mixture of chloroform with ethanol taken for 48 to 72 hours a ratio of 2: 1, after which the blocks are washed with distilled water, with constant stirring, then heated, uniformly raising the temperature from 600 to 1200 ° C, additionally heated at 1200 ÷ 1300 ° C for 2-5 minutes.
Также технический результат достигается за счет использования для замещения и восстановления костных дефектов костного минерального компонента, полученного в соответствии с вышеописанным способом и выполненного в виде блоков или крошки.Also, the technical result is achieved due to the use for replacement and restoration of bone defects of the bone mineral component obtained in accordance with the above method and made in the form of blocks or chips.
Полученный таким образом костный минеральный компонент используют в виде блоков или измельчают до получения костной крошки с размером частиц 700-2000 мкм, фасуют в стеклянные флаконы и стерилизуют потоком быстрых электронов.Thus obtained bone mineral component is used in the form of blocks or crushed to obtain bone chips with a particle size of 700-2000 μm, Packed in glass bottles and sterilized by a stream of fast electrons.
В частности, стерилизацию можно осуществлять потоком быстрых электронов.In particular, sterilization can be carried out by a stream of fast electrons.
Существенным признаком заявленного технического решения является распиливание костной губчатой ткани на блоки размером от 0,008 до 0,125 см3 для лучшего первичного высаливания, составляющих трабекул губчатой части костной ткани.An essential feature of the claimed technical solution is the sawing of bone spongy tissue into blocks ranging in size from 0.008 to 0.125 cm 3 for better primary salting out, making up the trabeculae of the spongy part of the bone tissue.
Как показали проведенные испытания, при минимальном размере блока 0,008 см3 блоки обладают достаточной прочностью костной губчатой кости, не повреждаются и не уплотняются в растворе, что нежелательно при обработке растворами.As the tests showed, with a minimum block size of 0.008 cm 3 the blocks have sufficient bone spongy bone strength, are not damaged and do not compact in the solution, which is undesirable when processing with solutions.
Максимальный объем блока 0,125 см3 установлен исходя из того, что больший объем блоков не позволяет растворам солей, щелочи и перекиси водорода эффективно удалять белки и другие антигенные молекулы из стромы кусочка.The maximum block volume of 0.125 cm 3 is established on the basis that the larger block volume does not allow solutions of salts, alkali and hydrogen peroxide to effectively remove proteins and other antigenic molecules from the stroma of the piece.
Согласно изобретению после напиливания блоки помещают в 2% раствор хлорида натрия от 24 до 48 часов для высаливания белков, форменных элементов крови и части жира из трабекул.According to the invention, after filing, the blocks are placed in a 2% sodium chloride solution from 24 to 48 hours to salting out proteins, blood cells and part of the fat from the trabeculae.
При низкой пористости губчатой костной ткани блока обычно достаточным оказывается время в 24 часа, в течение этого времени большая часть свободного содержимого выходит из трабекул, после чего блоки промывают водой и приступают к следующему шагу - обработке.With low porosity of the spongy bone tissue of the block, a time of 24 hours is usually sufficient, during which time most of the free content leaves the trabeculae, after which the blocks are washed with water and proceed to the next step - processing.
При высокой пористости губчатой костной ткани время первичной обработки достигает 48 часов, при этом большая часть содержимого трабекул выходит в раствор, после чего блоки промывают водой и приступают к следующему шагу - обработке.With high porosity of the spongy bone tissue, the initial treatment time reaches 48 hours, while most of the contents of the trabeculae enter the solution, after which the blocks are washed with water and proceed to the next step - processing.
Пористость губчатой костной ткани определяют визуально, в зависимости от места забора материала.Spongy bone tissue porosity is determined visually, depending on where the material was taken.
Согласно изобретению блоки помещают для гидролиза в 2% раствор гидроксида натрия на время от 24 до 48 часов.According to the invention, the blocks are placed for hydrolysis in a 2% sodium hydroxide solution for a period of 24 to 48 hours.
При низкой плотности трабекул губчатой костной ткани время для осуществления гидролиза составляет 24 часа, если гидролиз проводится менее 24 часов, то в ткани могут оставаться часть белков и липопротеинов.With a low density of trabeculae of cancellous bone tissue, the time for hydrolysis is 24 hours, if hydrolysis is less than 24 hours, some of the proteins and lipoproteins may remain in the tissue.
При высокой плотности трабекул гидролиз проводят в течение 48 часов для полного разрушения белков внутри стромы трабекул. Это время было установлено по анализу содержания белка после гидролиза (по Лоури-Барнстеду).At a high density of trabeculae, hydrolysis is carried out for 48 hours to completely destroy proteins within the trabeculae stroma. This time was determined by analysis of protein content after hydrolysis (according to Lowry-Barnsted).
Пористость трабекул определяют визуально, в зависимости от места забора костного материала.The porosity of the trabeculae is determined visually, depending on the location of the bone material.
Согласно изобретению после проведения гидролиза и промывания блоков дистиллированной водой блоки помещают от 10 до 16 часов в 3-4% раствор перекиси водорода. Применение раствора перекиси водорода обусловлено ее способностью эффективно удалять остатки белка, гликопротеинов и липидопротеинов.According to the invention, after hydrolysis and washing of the blocks with distilled water, the blocks are placed for 10 to 16 hours in a 3-4% hydrogen peroxide solution. The use of a solution of hydrogen peroxide is due to its ability to effectively remove residual protein, glycoproteins and lipidoproteins.
Минимальное время экспозиции блоков в 3-4% растворе перекиси водорода составляет 10 часов и установлено для блоков с низкой плотностью трабекул губчатой кости, а также для очищения трабекул от поверхностно-связанных протеогликанов и липопротеинов.The minimum exposure time of blocks in a 3-4% hydrogen peroxide solution is 10 hours and is set for blocks with a low density of trabeculae of the trabecular bone, as well as for cleaning trabeculae from surface-bound proteoglycans and lipoproteins.
Максимальное время экспозиции блоков в 3-4% растворе перекиси водорода составляет 16 часов и установлено для блоков с высокой плотностью трабекул губчатой кости, для очищения трабекул от поверхностно-связанных протеогликанов и липопротеинов. Увеличение времени более 16 часов нецелесообразно, т.к. приводит к вымыванию минерального компонента.The maximum exposure time of blocks in a 3-4% hydrogen peroxide solution is 16 hours and is set for blocks with a high density of trabeculae of the trabecular bone, to clean trabeculae from surface-bound proteoglycans and lipoproteins. An increase in time of more than 16 hours is impractical because leads to leaching of the mineral component.
После обработки перекисью водорода блоки отмывают дистиллированной водой, которая стандартно применяется при изготовлении лекарственных средств и изделий медицинского назначения, так как она полностью лишена механических и иных примесей, например, таких как соли тяжелых металлов (Гос. Фармакопея XI, вып.1, с.165).After treatment with hydrogen peroxide, the blocks are washed with distilled water, which is standardly used in the manufacture of medicines and medical devices, since it is completely devoid of mechanical and other impurities, for example, salts of heavy metals (State Pharmacopoeia XI, issue 1, p. 165).
Согласно изобретению обработанные блоки губчатой костной ткани обезжиривают смесью хлороформ-этанол, взятых в соотношении 2:1, в течение от 48 до 72 часов.According to the invention, the treated blocks of cancellous bone tissue are degreased with a mixture of chloroform-ethanol, taken in a ratio of 2: 1, for 48 to 72 hours.
При обработке костных блоков в смеси хлороформ-этанол в соотношении 2:1 менее 48 часов приводит к тому, что блоки обезжириваются неполностью, о чем свидетельствует контрольная окраска Суданом (большая часть блоков чернеет).When processing bone blocks in a chloroform-ethanol mixture in a ratio of 2: 1 for less than 48 hours, the blocks are not completely degreased, as evidenced by the control color of Sudan (most of the blocks turn black).
При обработке костных блоков в смеси хлороформ-этанол в соотношении 2:1 в течение 72 часов блоки обезжириваются окончательно, о чем свидетельствует отсутствие окрашивания при контрольной окраске Суданом.When processing bone blocks in a chloroform-ethanol mixture in a ratio of 2: 1 for 72 hours, the blocks are completely degreased, as evidenced by the absence of staining during control staining with Sudan.
После обезжиривания блоки промывают дистиллированной водой до полного вымывания обезжиривающейся смеси из блоков. Процедуру отмывания проводят при постоянном помешивании блоков, например, с помощью магнитной мешалки.After degreasing, the blocks are washed with distilled water until the degreasing mixture is completely washed out of the blocks. The washing procedure is carried out with constant stirring of the blocks, for example, using a magnetic stirrer.
Каждую стадию обработки проводят при комнатной температуре.Each processing step is carried out at room temperature.
Дальнейшее прогревание блоков проводят в муфельной печи в автоматическом режиме.Further heating of the blocks is carried out in a muffle furnace in automatic mode.
Равномерное повышение температуры прогревания блоков от 600 до 1200°C с последующим при температуре 1200-1300°C в течение 2-5 мин.A uniform increase in the heating temperature of the blocks from 600 to 1200 ° C followed by at a temperature of 1200-1300 ° C for 2-5 minutes.
Блоки равномерно нагревают в автоматическом режиме со скоростью 100°C/час до 600°C при этом блоки периодически перемешивают, чем обеспечивается равномерность прогрева, и затем повышают температуру до 1200-1300°C.The blocks are evenly heated in automatic mode at a speed of 100 ° C / hour to 600 ° C, while the blocks are periodically mixed, which ensures uniform heating, and then increase the temperature to 1200-1300 ° C.
Нагревание блоков до 1200-1300°C в течение 2-5 мин приводит к окончательной деструкции коллагена до золы, которая удаляется автоматическим продувом блоков в печи.Heating the blocks to 1200-1300 ° C for 2-5 minutes leads to the final destruction of collagen to ash, which is removed by automatically blowing the blocks in the furnace.
Контроль полученного минерального компонента осуществляли лазерной денситометрией, в качестве стандарта был выбран костный гидроксиапатит. Анализ полученного костного минерального компонента показал, что он полностью соответствует международному стандарту по Лоури - менее 10 мкг/мл.The control of the obtained mineral component was carried out by laser densitometry, bone hydroxyapatite was chosen as the standard. Analysis of the obtained bone mineral component showed that it fully complies with the international Lowry standard - less than 10 μg / ml.
Количественный и качественный анализ полученного по патентуемому способу костного минерального компонента показал, что он представляет собой блоки белого или слегка розоватого цвета, на 99,9% состоящего из соединения природного гидроксиапатита с фосфатами и карбонатами, и составляет 73-75% от веса нормальной кости, что полностью соответствует весовому составу минеральной составляющей костной ткани (нормальная костная ткань содержит 74-75% минерального компонента и 24-25% костного коллагена (Boyd Е.D. Bone 1960 pp.35-40).Quantitative and qualitative analysis of the bone mineral component obtained by the patented method showed that it is blocks of white or slightly pinkish color, 99.9% consisting of a compound of natural hydroxyapatite with phosphates and carbonates, and makes 73-75% of the weight of normal bone, which fully corresponds to the weight composition of the mineral component of bone tissue (normal bone tissue contains 74-75% of the mineral component and 24-25% of bone collagen (Boyd E.D. Bone 1960 pp. 35-40).
Способ получения костного минерального компонента осуществляется следующим образом.A method of obtaining a bone mineral component is as follows.
Кость животного очищают от мышц, связок и отпиливают кортикальные слои, обнажая губчатую кость. Губчатую костную ткань напиливают на блоки от 0,008 до 0,125 см3, помещают в 2% раствор хлорида натрия на 24 часа, промывают водой, помещают для гидролиза в 0,4 н. раствор гидроксида натрия от 24 до 48 часов, затем гидролизат сливают, блоки промывают дистиллированной водой до полной нейтрализации гидроксида натрия, помещают в 3-4% раствор перекиси водорода на 10-16 часов, промывают дистиллированной водой, проводят обезжиривание в смеси хлороформа и этанола в соотношении 2:1 в течение 48 часов, после чего блоки промывают диситиллированной водой при постоянном помешивании, затем прогревают, равномерно повышая температуру от 600 до 1200°C, и подвергают обжигу при 1200-1300°C в течение 2-5 мин.The animal’s bone is cleaned of muscles, ligaments and sawn off the cortical layers, exposing the spongy bone. Spongy bone tissue is sawn into blocks from 0.008 to 0.125 cm 3 , placed in a 2% sodium chloride solution for 24 hours, washed with water, and placed for hydrolysis in 0.4 N. sodium hydroxide solution from 24 to 48 hours, then the hydrolyzate is drained, the blocks are washed with distilled water until the sodium hydroxide is completely neutralized, placed in a 3-4% hydrogen peroxide solution for 10-16 hours, washed with distilled water, degreased in a mixture of chloroform and ethanol in 2: 1 ratio for 48 hours, after which the blocks are washed with distilled water with constant stirring, then heated, uniformly raising the temperature from 600 to 1200 ° C, and fired at 1200-1300 ° C for 2-5 minutes.
Поученные таким образом блоки костного минерального компонента фасуют и стерилизуют.The blocks of the bone mineral component thus obtained are packed and sterilized.
При необходимости блоки измельчают до крошки размером 700 - 2000 мкм, фасуют и стерилизуют.If necessary, the blocks are crushed to a crumb size of 700 - 2000 microns, packaged and sterilized.
Для лучшего понимания сущности изобретение поясняется примерами конкретного исполнения.For a better understanding of the essence of the invention is illustrated by examples of specific performance.
Пример 1. 1 кг костной ткани быка, прошедшей Ветеринарный Контроль и имеющей Сертификат качества и безопасности, очищают от мышц, связок и прочего, отпиливают кортикальные слои, обнажая губчатую кость.Example 1. 1 kg of bone tissue of a bull that has passed the Veterinary Control and has a certificate of quality and safety, cleaned of muscles, ligaments and other things, sawed off the cortical layers, exposing the cancellous bone.
Губчатую костную ткань напиливали на блоки 0,08 см3, помещали в 2% раствор хлорида натрия, промывали водой, помещали для гидролиза в 2% раствор гидроксида натрия на 24 часа, гидролизат сливали, блоки промывали дистиллированной водой до полной нейтрализации гидроксида натрия (до pH 5,9-6,0).Spongy bone tissue was sawn into blocks of 0.08 cm 3 , placed in a 2% sodium chloride solution, washed with water, placed for hydrolysis in a 2% sodium hydroxide solution for 24 hours, the hydrolyzate was drained, the blocks were washed with distilled water until sodium hydroxide was completely neutralized (up to pH 5.9-6.0).
Далее осуществляли промежуточный контроль - количественный анализ на белок по Лоури-Барнстеду показал отсутствие резидуальных белков в смыве гидролизата.Then an intermediate control was carried out - a quantitative analysis for protein according to Lowry-Barnsted showed the absence of residual proteins in the washout of the hydrolyzate.
Затем блоки помещали в 4% раствор перекиси водорода на 10 часов и промывали дистиллированной водой.Then the blocks were placed in a 4% hydrogen peroxide solution for 10 hours and washed with distilled water.
Промежуточный контроль - окрашивание блоков альциановым синим на протеогликаны - отрицательный.Intermediate control - staining of blocks with Alcian blue for proteoglycans - negative.
После отмывки блоков проводили обезжиривание в смеси хлороформа и этанола в соотношении 2:1 в течение 48 часов, затем блоки промывали дистиллированной водой при постоянном помешивании на магнитной мешалке.After washing the blocks, degreasing was carried out in a mixture of chloroform and ethanol in a ratio of 2: 1 for 48 hours, then the blocks were washed with distilled water with constant stirring on a magnetic stirrer.
Промежуточный контроль- окрашивание блоков Суданом на наличие жира и липопротеинов отрицительный.Intermediate control- Sudan staining of blocks for fat and lipoproteins is negative.
Затем отмытые блоки прогревали, равномерно повышая температуру от 600 до 1200°C, и подвергали обжигу при 1200-1300°C в течение 2-5 минут.Then the washed blocks were heated, uniformly raising the temperature from 600 to 1200 ° C, and subjected to calcination at 1200-1300 ° C for 2-5 minutes.
Промежуточный контроль - на белок по Лоури-Барнстеду - отрицательный.Intermediate control - for protein according to Lowry-Barnsted - negative.
Промежуточный качественный контроль на минеральный компонент осуществляют стандартным 1% раствором Н2SО4. Полученные блоки растворяются без остатка и без осадка.An intermediate quality control of the mineral component is carried out with a standard 1% solution of H 2 SO 4 . The resulting blocks are dissolved without residue and without sediment.
Полученные таким образом блоки костного минерального компонента - блоки белого или слегка розоватого цвета, на 99,9% состоящего из соединения природного гидроксиапатита с фосфатами и карбонатами и составляющего 73-75% от веса нормальной кости, что полностью соответствует весовому составу минеральной составляющей костной ткани.The blocks of the bone mineral component thus obtained are blocks of white or slightly pinkish color, 99.9% consisting of a compound of natural hydroxyapatite with phosphates and carbonates and comprising 73-75% of the weight of normal bone, which fully corresponds to the weight composition of the mineral component of bone tissue.
Полученные патентуемым способом блоки фасовали и стерилизовали потоком быстрых электронов.The blocks obtained by the patented method were packed and sterilized by a stream of fast electrons.
Полученные патентуемым способом блоки размельчали до крошки, фасовали и стерилизовали потоком быстрых электронов.The blocks obtained by the patented method were crushed to crumbs, packed and sterilized by a stream of fast electrons.
Материал предназначен для использования в хирургической стоматологии, травматологии и ортопедии в качестве остеокондуктивного для замещения и восстановления костных дефектов.The material is intended for use in surgical dentistry, traumatology and orthopedics as osteoconductive for the replacement and restoration of bone defects.
Пример 2. 1 кг костной ткани быка, прошедшей Ветеринарный Контроль и имеющей Сертификат качества и безопасности, очищают от мышц, связок и прочего, отпиливают кортикальные слои, обнажая губчатую кость.Example 2. 1 kg of bone tissue of a bull that has passed the Veterinary Control and has a certificate of quality and safety, is cleaned of muscles, ligaments and other things, sawed off the cortical layers, exposing the cancellous bone.
Губчатую костную ткань напиливали на блоки 0,125 см3, помещали в 2% раствор хлорида натрия, промывали водой, помещали для гидролиза в 0,4 н. раствор гидроксида натрия на 48 часов, гидролизат сливали, блоки промывали дистиллированной водой до полной нейтрализации гидроксида натрия (до pH 5,9-6,0).Spongy bone tissue was sawn into blocks of 0.125 cm 3 , placed in a 2% sodium chloride solution, washed with water, and placed for hydrolysis in 0.4 N. sodium hydroxide solution for 48 hours, the hydrolyzate was drained, the blocks were washed with distilled water until sodium hydroxide was completely neutralized (to pH 5.9-6.0).
Промежуточный контроль - количественный анализ на белок по Лоури-Барнстеду показал отсутствие резидуальных белков в смыве гидролизата.Intermediate control - a quantitative analysis for protein according to Lowry-Barnsted showed the absence of residual proteins in the washout of the hydrolyzate.
Затем блоки помещали в 4% раствор перекиси водорода на 16 часов и промывали дистиллированной водой.Then the blocks were placed in a 4% hydrogen peroxide solution for 16 hours and washed with distilled water.
Промежуточный контроль - окрашивание блоков альциановым синим на протеогликаны - отрицательный.Intermediate control - staining of blocks with Alcian blue for proteoglycans - negative.
После отмывки блоков проводили обезжиривание в смеси хлороформа и этанола в соотношении 2:1 в течение 72 часа, затем блоки промывали дистиллированной водой при постоянном помешивании на магнитной мешалке.After washing the blocks, degreasing was carried out in a mixture of chloroform and ethanol in a ratio of 2: 1 for 72 hours, then the blocks were washed with distilled water with constant stirring on a magnetic stirrer.
Промежуточный контроль - окрашивание блоков Суданом на наличие жира и липопротеинов - отрицительный.Intermediate control - Sudan staining of blocks for fat and lipoproteins - is negative.
Затем отмытые блоки прогревали, равномерно повышая температуру от 600 до 1200°C, и подвергали обжигу при 1200-1300°C в течение 2-5 минут.Then the washed blocks were heated, uniformly raising the temperature from 600 to 1200 ° C, and subjected to calcination at 1200-1300 ° C for 2-5 minutes.
Промежуточный контроль - на белок по Лоури-Барнстеду - отрицательный.Intermediate control - for protein according to Lowry-Barnsted - negative.
Промежуточный качественный контроль на минеральный компонент - стандартный раствор H2SO4. Полученные блоки растворяются без остатка и без осадка.Intermediate quality control of the mineral component is a standard solution of H 2 SO 4 . The resulting blocks are dissolved without residue and without sediment.
Полученные таким образом блоки костного минерального компонента - блоки белого или слегка розоватого цвета, на 99,9% состоящего из соединения природного гидроксиапатита с фосфатами и карбонатами и составляющего 73-75% от веса нормальной кости, что полностью соответствует весовому составу минеральной составляющей костной ткани.The blocks of the bone mineral component thus obtained are blocks of white or slightly pinkish color, 99.9% consisting of a compound of natural hydroxyapatite with phosphates and carbonates and comprising 73-75% of the weight of normal bone, which fully corresponds to the weight composition of the mineral component of bone tissue.
Полученные патентуемым способом блоки фасовали и стерилизовали потоком быстрых электронов.The blocks obtained by the patented method were packed and sterilized by a stream of fast electrons.
Полученные патентуемым способом блоки размельчали до крошки, фасовали и стерилизовали потоком быстрых электронов.The blocks obtained by the patented method were crushed to crumbs, packed and sterilized by a stream of fast electrons.
Материал предназначен для использования в хирургической стоматологии, травматологии и ортопедии в качестве остеокондуктивного для замещения и восстановления костных дефектов.The material is intended for use in surgical dentistry, traumatology and orthopedics as osteoconductive for the replacement and restoration of bone defects.
Часть блоков измельчали до крошки размером 700 - 2000 мкм, фасовали в стекляные флаконы и стерилизовали потоком быстрых электронов.Part of the blocks was crushed to a crumb size of 700 - 2000 μm, Packed in glass bottles and sterilized by a stream of fast electrons.
Крошку использовали в качестве остеокондуктивного материала для заполнения экспериментальных костных дефектов на нижней челюсти.The crumb was used as an osteoconductive material for filling experimental bone defects in the lower jaw.
Материал в виде блоков использовали в экспериментальных исследованиях при реконструкции (поднятии) альвеолярной кости для последующей дентальной имплантации.Material in the form of blocks was used in experimental studies during reconstruction (elevation) of the alveolar bone for subsequent dental implantation.
Осложнений после операции не выявляли.No complications were revealed after surgery.
Claims (6)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013105243/15A RU2517037C1 (en) | 2013-02-08 | 2013-02-08 | Method for preparing bone mineral component, and bone mineral component for filling and replacing bone defects |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013105243/15A RU2517037C1 (en) | 2013-02-08 | 2013-02-08 | Method for preparing bone mineral component, and bone mineral component for filling and replacing bone defects |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2517037C1 true RU2517037C1 (en) | 2014-05-27 |
Family
ID=50779349
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2013105243/15A RU2517037C1 (en) | 2013-02-08 | 2013-02-08 | Method for preparing bone mineral component, and bone mineral component for filling and replacing bone defects |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2517037C1 (en) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2104703C1 (en) * | 1989-11-22 | 1998-02-20 | Ост-Девелоппман | Method of preparing material for osteoplastics and material prepared by this method |
| RU2189823C2 (en) * | 2000-04-21 | 2002-09-27 | Панасюк Андрей Федорович | Method for obtaining an osseous material |
| RU2358728C2 (en) * | 2002-02-08 | 2009-06-20 | Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг | Bone loss treatment and prevention method |
-
2013
- 2013-02-08 RU RU2013105243/15A patent/RU2517037C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2104703C1 (en) * | 1989-11-22 | 1998-02-20 | Ост-Девелоппман | Method of preparing material for osteoplastics and material prepared by this method |
| RU2189823C2 (en) * | 2000-04-21 | 2002-09-27 | Панасюк Андрей Федорович | Method for obtaining an osseous material |
| RU2358728C2 (en) * | 2002-02-08 | 2009-06-20 | Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг | Bone loss treatment and prevention method |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPH0553506B2 (en) | ||
| Atiya et al. | Liquid Nitrogen--Treated Autogenous Dentin as Bone Substitute: An Experimental Study in a Rabbit Model. | |
| DK154892B (en) | BONE COMPOSITION MATERIAL WITH IMPROVED BIOLOGICAL STABILITY BASED ON MODIFIED COLLAGEN | |
| TW201927277A (en) | Dried implant composition and injectable aqueous implant formulation | |
| Butz et al. | Sinus augmentation with bovine hydroxyapatite/synthetic peptide in a sodium hyaluronate carrier (PepGen P-15 Putty): a clinical investigation of different healing times. | |
| Ghiacci et al. | “Over-inlay” block graft and differential morphometry: a novel block graft model to study bone regeneration and host-to-graft interfaces in rats | |
| US8586099B2 (en) | Method for preparing a prion-free bond grafting substitute | |
| Horowitz et al. | Enhancing extraction socket therapy with a biphasic calcium sulfate | |
| RU2517037C1 (en) | Method for preparing bone mineral component, and bone mineral component for filling and replacing bone defects | |
| CN114302748A (en) | Bone graft material derived from porous worms | |
| Aroni et al. | Bone repair induced by different bone graft substitutes in critical-sized defects in rat calvaria | |
| RU2627844C1 (en) | Method for obtaining suspensional form of a ruled decellularized extracellular matrix | |
| RU2721604C1 (en) | Method for producing osteoplastic biomaterials from bone tissue | |
| CN110732040A (en) | bone repair material, method and use | |
| KR20040087438A (en) | Restorative and Grafting Material for Hard Tissue Defect and Fabrication Method of The Same Using Animal Teeth | |
| Minetti et al. | Tooth transformer®: A new method to prepare autologous tooth grafts–Histologic and histomorphometric analyses of 11 consecutive clinical cases | |
| TR202009080A2 (en) | Production of xenograft from animal bone. | |
| RU2640932C2 (en) | Method for bone-plastic material obtaining | |
| Djordjević et al. | CBCT analysis of bone density in bicortical defects after augmentation with alloplastic and xenogeneic bone substitutes–A study on domestic pigs | |
| WO1996012509A1 (en) | Process for inactivating and eliminating the organic matrix from animal bone for heterotopic xenografts | |
| KR100635385B1 (en) | Method for Preparing a Prion-free Bone Grafting Substitute | |
| Kompantsev et al. | Creating osteoplastic materials to repair jaw bones defects | |
| RU2393819C1 (en) | Method of preparing prion-free bone graft substitute | |
| Helena Theodoro et al. | Comparison of different bone substitutes in the repair of rat calvaria critical size defects: questioning the need for alveolar ridge presentation. | |
| Alemi et al. | Effect of a nanocomposite containing ostrich eggshell on calvarium healing in the rabbit: a pathologic study |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20170209 |
|
| NF4A | Reinstatement of patent |
Effective date: 20181008 |
|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20210209 |