RU2506588C1 - Способ выделения из крови животных и человека личинок филяриат -микрофилярий - Google Patents
Способ выделения из крови животных и человека личинок филяриат -микрофилярий Download PDFInfo
- Publication number
- RU2506588C1 RU2506588C1 RU2012138774/15A RU2012138774A RU2506588C1 RU 2506588 C1 RU2506588 C1 RU 2506588C1 RU 2012138774/15 A RU2012138774/15 A RU 2012138774/15A RU 2012138774 A RU2012138774 A RU 2012138774A RU 2506588 C1 RU2506588 C1 RU 2506588C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- blood
- plasma
- larvae
- microfilaria
- recovery
- Prior art date
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Изобретение относится к паразитологии. Для выделения и обнаружения личинок филяриат-микрофилярий, получают микроскопические препараты, для чего пробу крови помещают в пробирку с антикоагулянтом К3-ЭДТА, отделяют плазму от форменных элементов путем осаждения в течение 20-24 часов при температуре 4-15°С без центрифугирования. При этом осадок на своей поверхности, граничащей с плазмой, образует форму воронки, на дне которой концентрируются личинки филяриат-микрофилярий, из дна воронки отбирают 15-20 мкл жидкости - плазмы, смешивают с 1% раствором Люголя, готовят мазки, проводят микроскопирование и сбор гельминтов. Изобретение позволяет уменьшить трудоемкость выделения из крови микрофилярий.
Description
Изобретение относится к паразитологии, в частности к сбору личинок филяриат (микрофилярий) из крови животных и человека.
Известен способ исследования крови на наличие личинок филяриат по Фюллеборну (Петров, A.M. Гельминтологическое исследование тканей [Текст] / A.M. Петров // Ветеринарная лабораторная практика. - Т.2. - М.: Изд. сельхоз. литературы, журн. и плакатов, 1963. - С.218-219). Для этого несколько миллилитров крови смешивают с жидкостью, состоящей из 95 мл 5%-ного раствора формалина, 5 мл ледяной уксусной кислоты, 2 мл концентрированного алкогольного раствора генцианвиолета; полученный раствор центрифугируют, а осадок исследуют на наличие личинок нематод.
Известен способ выделения из крови больных сахарным диабетом личинок гельминтов (патент РФ №2287815 С2, 2006.01, G01N 33/48, G01N 1/28), при котором пробы крови смешивают с антикоагулянтом К3-ЭДТА и физиологическим раствором 1:1, готовят на основе первого раствора второй раствор, с 0,5% NaOH соответственно берут 2:1, инкубируют полученный раствор при 60°С в течение 5-10 минут, центрифугируют его при 3000 об/мин в течение 5 минут, удаляют надосадочную жидкость, инкубируют осадок при 37°С в течение 10 минут, обрабатывают осадок 1% раствором Люголя при соотношении 1:1, готовят мазки, сушат при 37°С в течение 15-20 минут и проводят микроскопирование с объективами 10 и 40.
Известен способ, предложенный J.I. Knott (1939), сущность которого заключается в том, что в пробирку с 1 мл свежей крови добавляется 10 мл 2%-ного раствора формалина, и смесь центрифугируется в течение 5 минут при 1000-1500 оборотах в минуту. Надосадочную жидкость удаляют, осадок смешивают в равных количествах с 0,1%-ным раствором метиленовой сини. Из окрашенного осадка делают мазок и исследуют под микроскопом (Knott J.I. Method for making microfilarial surveys on day blood // Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. - 1939. - V.33. - P. 191-196).
Недостатком этих трех способов является то, что во время центрифугирования личинки подвергаются жесткому механическому воздействию, становятся мало- или неподвижными, меняется их морфологическая структура, затрудняющая их идентификацию до вида. Кроме того, выделение микрофилярий (личинок) из осадка, состоящей из клеток белой крови, разрушенных гемолизированных эритроцитов, паразитических организмов иной этиологии, кристаллов холестерина, раствора краски и неподвижных микрофилярий, требует выполнения очень большой кропотливой работы лаборанта.
Известен способ исследования крови на наличие личинок филариат по Т.И.Поповой (Петров A.M. Гельминтологическое исследование тканей [Текст] / A.M. Петров // Ветеринарная лабораторная практика. - Т.2. - М.: Изд. сельхоз. литературы, журн. и плакатов, 1963. - С.218-219). Кровь берут из яремной вены и смешивают ее с 4%-ным раствором лимоннокислого натрия в соотношении 1:10. Цитрированную кровь разбавляют дистиллированной водой в соотношении 1:7 или 1:10 и центрифугируют. Полученный осадок исследуют под микроскопом. В подготовленной таким образом крови личинки филяриат (микросетарии) остаются живыми (при температуре 13-15°С) в течение трех суток и при микроскопическом исследовании легко обнаруживаются.
Недостатком этого способа является то, что при добавлении воды резко меняется осмотическое давление, вызывающее разрушение эритроцитов. Выделение микрофилярий (личинок) из осадка, состоящего из клеток белой крови, разрушенных гемолизированных эритроцитов, паразитических организмов иной этиологии, кристаллов холестерина, раствора краски и неподвижных микрофилярий, требует выполнения очень большой кропотливой работы лаборанта.
Известен способ прямого исследования мазка крови при малом увеличении микроскопа (Архипов И.А. Дирофиляриоз [Текст] / И.А. Архипов, Д.Р. Архипова. - М., 2004. - 194 с.).
Недостатком этого способа является то, что при низкой интенсивности инвазии данный способ неэффективен без концентрации личинок, и кроме того, микрофилярии трудно увидеть из-за эритроцитов и провести дифференцировку по видам.
Технической задачей заявляемого изобретения является выделение из крови животных и человека личинок филяриат (микрофилярий), свободных от примесей, с концентрацией личинок без центрифугирования.
Технический результат решается тем, что для выделения из крови животных и человека личинок филяриат (микрофилярий), свободных от примесей, с концентрацией личинок без центрифугирования, пробы крови в пробирке с антикоагулянтом К3-ЭДТА, ставят в прохладное место при температуре 4-15°С в течение 20-24 часов, при этом кровь разделяется на плазму и осадок, последний на своей поверхности, граничащей с плазмой, образует форму воронки, на дне которой концентрируются личинки филяриат (микрофилярий). Из дна воронки отбирают жидкость (плазму) 15-20 мкл, смешивают с 1% раствором Люголя, готовят мазки и проводят микроскопирование. Форма воронки на поверхности осадка образуется вследствие чтение выпуклого в нижнюю сторону дна стеклянной пробирки, в которой была набрана кровь с антикоагулянтом К3-ЭДТА.
Заявленный способ выделения из крови животных и человека личинок филяриат (микрофилярий), свободных от примесей, с концентрацией личинок:
- отличается от прототипов 1-3 тем, что концентрация личинок производится без центрифугирования;
- отличается от прототипов 1-4 тем, что выделение концентрированных личинок производится не с осадка, а с плазмы, представляющей прозрачную жидкость соломенного цвета;
- отличается от прототипа 5 способом концентрации личинок. Технической эффективностью предлагаемого изобретения является
выделение из стабилизированной крови животных и человека концентрированных без центрифугирования личинок филяриат (микрофилярий), свободных от примесей, скопившихся в воронкообразном дне плазмы крови, образованной поверхностью осадка, вследствие чтения последним выпуклого в нижнюю сторону дна стеклянной пробирки. В целом, предлагаемое изобретение позволяет уменьшить трудоемкость выделения из крови микрофилярий с концентрацией последних без центрифугирования и без посторонных примесей.
Claims (1)
- Способ выделения из стабилизированной крови животных и человека концентрированных без центрифугирования личинок филяриат - микрофилярий, свободных от примесей, предусматривающий получение пробы крови в пробирке с антикоагулянтом К3-ЭДТА, отделение плазмы от форменных элементов - осадка при температуре 4-15°С в течение 20-24 ч, при этом кровь разделяется на плазму и осадок, последний на своей поверхности, граничащей с плазмой, образует форму воронки, на дне которой концентрируются личинки филариат - микрофилярий, из дна воронки отбирают жидкость - плазму 15-20 мкл, смешивают с 1%-ным раствором Люголя, готовят мазки и проводят микроскопирование и сбор гельминтов.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2012138774/15A RU2506588C1 (ru) | 2012-09-10 | 2012-09-10 | Способ выделения из крови животных и человека личинок филяриат -микрофилярий |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2012138774/15A RU2506588C1 (ru) | 2012-09-10 | 2012-09-10 | Способ выделения из крови животных и человека личинок филяриат -микрофилярий |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2506588C1 true RU2506588C1 (ru) | 2014-02-10 |
Family
ID=50032343
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2012138774/15A RU2506588C1 (ru) | 2012-09-10 | 2012-09-10 | Способ выделения из крови животных и человека личинок филяриат -микрофилярий |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2506588C1 (ru) |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2287815C2 (ru) * | 2004-04-19 | 2006-11-20 | Ружена Шаликовна Балугян | Способ выделения из крови больных сахарным диабетом гельминтов, личинок гельминтов |
-
2012
- 2012-09-10 RU RU2012138774/15A patent/RU2506588C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2287815C2 (ru) * | 2004-04-19 | 2006-11-20 | Ружена Шаликовна Балугян | Способ выделения из крови больных сахарным диабетом гельминтов, личинок гельминтов |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
Диагностика дирофиляриоза - Научные статьи - Статьи - ВетА+, www.vetaplus.m/publ/diagnostika.../1-1-0-12 Выделение микрофилярий из крови животного. Просмотр производился П-образным способом с охватом всех полей зрения материала. 16.12.2011, он-лайн [найдено 26.08.2013] [найдено из Интернет] . Методические рекомендации по клинике, диагностике, лечению ... www.libussr.ru/doc_ussr/usr_9706.htm - Личинки - микрофилярии накапливаютс&# * |
Диагностика дирофиляриоза - Научные статьи - Статьи - ВетА+, www.vetaplus.m/publ/diagnostika…/1-1-0-12 Выделение микрофилярий из крови животного. Просмотр производился П-образным способом с охватом всех полей зрения материала. 16.12.2011, он-лайн [найдено 26.08.2013] [найдено из Интернет] <www.vetaplus.ru/publ/diagnostika…/1-1-0-12>. Методические рекомендации по клинике, диагностике, лечению … www.libussr.ru/doc_ussr/usr_9706.htm - Личинки - микрофилярии накапливаются и длительно циркулируют в … 12 июля 1978, он-лайн [найдено 26.08.2013] [найдено из Интернет]<www.libussr.ru/doc_ussr/usr_9706.htm>. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Prata et al. | Preparation of biological samples for microplastic identification by Nile Red | |
US20160266016A1 (en) | Composition for preparing biomaterial with excellent light-transmitting property, and use thereof | |
CN106399250A (zh) | 一种分离外泌体的方法及其试剂盒 | |
US9416391B2 (en) | Method for identifying cancer drug candidates in Drosophila | |
Karimi et al. | Blood parasites of camels from central regions of Iran: comparative evaluation of various detection techniques and serum protein components | |
Hassan et al. | Epidemiological survey on stray dogs and cats gastro-intestinal parasites in Kirkuk province, Iraq | |
Tekwu et al. | Mechanically produced schistosomula as a higher-throughput tools for phenotypic pre-screening in drug sensitivity assays: current research and future trends | |
CN112834737A (zh) | 一种用于整体组织样本的精准免疫荧光标记方法 | |
CN104833805A (zh) | 一种循环肿瘤细胞检测和鉴定试剂盒及其应用 | |
Estrada et al. | Apoptosis of hemocytes from lions-paw scallop Nodipecten subnodosus induced with paralyzing shellfish poison from Gymnodinium catenatum | |
RU2506588C1 (ru) | Способ выделения из крови животных и человека личинок филяриат -микрофилярий | |
Pagliara et al. | Parasites affect hemocyte functionality in the hemolymph of the invasive Atlantic blue crab Callinectes sapidus from a coastal habitat of the Salento Peninsula (SE Italy) | |
Gómez-Cabañas et al. | Detecting apoptosis of leukocytes in mouse lymph nodes | |
US20170307485A1 (en) | Refractive index matching composition for biological tissue | |
Joshua et al. | Haemoparasites of camels (Camelus dromedarius) in Maiduguri, Nigeria | |
Gáspár et al. | Ex vivo ooplasmic extract from developing Drosophila oocytes for quantitative TIRF microscopy analysis | |
Hwang et al. | Endoparasites of formosan black bears (Ursus thibetanus formosanus) during acorn season in Yushan national park, Taiwan | |
RU2362995C1 (ru) | Способ диагностики кровепаразитарных инфекций | |
Zamini et al. | Capillaria hepatica in Rattus spp. captured in Sanandaj and orally uninfected Balb/C mice with embryonated eggs | |
Maria et al. | Histochemical and morphological features of biopsied and stripped oocytes from the Brazilian endangered teleost pirapitinga, Brycon nattereri (Characiformes) | |
FORTUNER | mento, California | |
Hammad et al. | Comparative study among lactophenol blue, lactophenol solution and proteinase-K lytic solution for rostellar hooks morphometry of protoscolices | |
Nickle | Methods for Collection and Preparation of Nematodes | |
RU2407278C1 (ru) | Способ определения жизнеспособности озимой культуры | |
RU2702989C1 (ru) | Способ диагностики гельминтозов у человека и животных |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20160911 |