RU2485178C2 - Method of dna separation - Google Patents
Method of dna separation Download PDFInfo
- Publication number
- RU2485178C2 RU2485178C2 RU2011128959/10A RU2011128959A RU2485178C2 RU 2485178 C2 RU2485178 C2 RU 2485178C2 RU 2011128959/10 A RU2011128959/10 A RU 2011128959/10A RU 2011128959 A RU2011128959 A RU 2011128959A RU 2485178 C2 RU2485178 C2 RU 2485178C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- dna
- supernatant
- buffer solution
- sorbent
- source
- Prior art date
Links
Abstract
Description
Изобретение относится к области нано-биотехнологии и может быть использован для выделения дезоксирибонуклеиновой кислоты (далее по тексту - ДНК) из различных биологических объектов.The invention relates to the field of nano-biotechnology and can be used to isolate deoxyribonucleic acid (hereinafter referred to as DNA) from various biological objects.
Известен способ выделения ДНК с применением фенол-хлороформной смеси [1]. Недостатком способа [1] является высокая токсичность применяемых веществ, трудоемкость процедуры выделения, времязатратность (2-3 дня).A known method of DNA extraction using phenol-chloroform mixture [1]. The disadvantage of this method [1] is the high toxicity of the substances used, the complexity of the isolation procedure, the cost (2-3 days).
Известен способ выделения ДНК с использованием хелатирующего реагента - ионообменной смолы Челекс-100 (Chelex-100) [2]. Недостатком является низкое качество выделенного по способу [2] препарата ДНК из-за наличия посторонних примесей (продуктов лизиса клеток), невозможность выделения ДНК из костных и мышечных тканей, загрязнение препарата ДНК продуктами лизиса клеток (белки, липиды).A known method of DNA extraction using a chelating reagent - ion exchange resin Chelex-100 (Chelex-100) [2]. The disadvantage is the low quality of the DNA preparation isolated by the method [2] due to the presence of impurities (cell lysis products), the inability to isolate DNA from bone and muscle tissues, the contamination of the DNA preparation with cell lysis products (proteins, lipids).
Наиболее близким по существу заявляемого способа, прототипом, является способ выделения ДНК с применением геномагнитных нанозахватчиков (GMNC), основанный на связывании молекул ДНК с ДНК-зондом сорбента [3].The closest to the essence of the proposed method, the prototype, is a method for DNA extraction using genomagnetic nano-invaders (GMNC), based on the binding of DNA molecules to the sorbent DNA probe [3].
Недостатком прототипа является ограниченность области применения способа [3] при необходимости выделения ДНК из широкого спектра различных биологических объектов (крови, слюны, волос), как это бывает, например, при проведении судебно-медицинской экспертизы. Низкое количество выделенной ДНК из костной и мышечной тканей, ногтевых пластин также ограничивает применение прототипа.The disadvantage of the prototype is the limited scope of the method [3] if necessary, the allocation of DNA from a wide range of different biological objects (blood, saliva, hair), as it happens, for example, when conducting a forensic examination. The low amount of extracted DNA from bone and muscle tissue, nail plates also limits the use of the prototype.
Целью предлагаемого изобретения является расширение перечня используемых для выделения ДНК биологических объектов, повышение производительности работы по выделению ДНК, повышение качества и количества выделенного образца ДНК, упрощение, сокращение продолжительности процедуры выделения, удешевление процесса.The aim of the invention is to expand the list of biological objects used to isolate DNA, increase the productivity of DNA isolation, increase the quality and quantity of the extracted DNA sample, simplify, reduce the duration of the isolation procedure, and reduce the cost of the process.
Цели достигают тем, что получают наночастицы оксида железа Fe3O4. Наночастицы модифицируют путем присоединения к ним молекул хитозана. Готовят суспензию из наночастиц, проводят измельчение исследуемого биологического объекта, заливают его лизирующим буфером, инкубируют. Получают клеточный лизат. К лизату добавляют наночастицы, инкубируют, разделяют на фракции в виде осадка и надосадка, удаляют надосадок, к осадку добавляют элюирующий буферный раствор, перемешивают. Получают суспензию. Суспензию разделяют на фракции в виде осадка и надосадка, отбирают надосадок. Надосадок содержит выделенный препарат ДНК.The goals are achieved in that they obtain iron oxide nanoparticles of Fe 3 O 4 . Nanoparticles are modified by attaching chitosan molecules to them. A suspension of nanoparticles is prepared, grinding of the biological object under study is carried out, it is poured with a lysis buffer, and incubated. A cell lysate is obtained. Nanoparticles are added to the lysate, incubated, separated into fractions in the form of a precipitate and a supernatant, the supernatant is removed, an eluting buffer solution is added to the precipitate, and mixed. A suspension is obtained. The suspension is divided into fractions in the form of sediment and supernatant, the supernatant is selected. The supernatant contains an isolated DNA preparation.
Заявляемый способ осуществляют, например, следующим образом. Отбирают пробу исследуемого биологического объекта, например костную ткань. Пробу измельчают, например костную ткань, - до порошкообразного состояния. Измельченную пробу помещают в чистую пробирку для ДНК-анализа, например - пробирку типа Эппендорф. Известным методом [4] получают наночастицы оксида железа (Fe3O4) и с использованием этих наночастиц готовят сорбент для выделения ДНК. Для этого в чистой посуде готовят ацетатный буферный раствор 0,015 М, например состава (0,5Н СН3СООН, 0,5Н CH3COONa, рН 3,6-5,6). В подготовленном буферном растворе растворяют хитозан, например, с молекулярной массой (Mw=5.0×105) и степенью деацитилирования 94.50%, добиваясь конечной концентрации хитозана 0,5 мг/мл. Затем в полученный буферный раствор хитозана добавляют ранее полученные наночастицы (Fe3O4), добиваясь конечной концентрации наночастиц (Fe3O4) 0,5 мг/мл, и получают взвесь модифицированных хитозаном наночастиц в ацетатном буферном растворе. Взвесь наночастиц в пробирке подвергают воздействию ультразвуковых колебаний и разбивают агрегировавшие наночастицы. Взвесь наночастиц подвергают воздействию ультразвуковых колебаний трижды по 3 мин. В перерывах между периодами воздействия ультразвуком взвесь наночастиц отстаивают в течение 2 мин. Ультразвук используют, например, частотой 20-22 кГц, при интенсивности колебаний не менее 22 кВт/м2. Под воздействием ультразвука взвесь наночастиц становится гомогенной (однородной). В однородную взвесь наночастиц по каплям добавляют раствор щелочи, например 10% водный раствор NaOH, доводят водородный показатель (рН) взвеси до 8-9 единиц. При этом наночастицы начинают заметно оседать на дно сосуда. Процесс оседания контролируют визуально. Затем процесс осаждения наночастиц продолжают, например с помощью центрифугирования при 1000 об/мин в течение 3 мин. Под действием центробежной силы происходит разделение взвеси на две фазы: образуются осадок (модифицированные хитозаном наночастицы Fe3O4) и надосадок (супернатант - ацетатный буферный раствор). Супернатант удаляют и осадок промывают, например, дистиллированной водой. Для этого к осадку добавляют дистиллированную воду (dH2O) в количестве, покрывающем поверхность осадка. Взбалтывая сосуд, например - пробирку, промывают наночастицы. Затем наночастицы осаждают, например, с помощью центрифугирования 1000 об/мин в течение 3 мин, и удаляют дистиллированную воду. Описанным образом повторно проводят процедуру промывания осажденных наночастиц дистиллированной водой. Отмытые наночастицы осаждают, например с помощью центрифугирования при 1000 об/мин в течение 3 мин, удаляют надосадочную жидкость, к осадку добавляют 0,015 М ацетатный буфер (рН 5,0).The inventive method is carried out, for example, as follows. A sample of the biological object under study, for example bone tissue, is taken. The sample is crushed, for example bone tissue, to a powder state. The ground sample is placed in a clean tube for DNA analysis, for example, an Eppendorf type tube. The known method [4] produces nanoparticles of iron oxide (Fe 3 O 4 ) and using these nanoparticles prepare a sorbent for DNA isolation. To do this, in a clean dish prepare an acetate buffer solution of 0.015 M, for example, of composition (0.5 N CH 3 COOH, 0.5 N CH 3 COONa, pH 3.6-5.6). Chitosan is dissolved in the prepared buffer solution, for example, with a molecular weight (M w = 5.0 × 10 5 ) and a deacylation ratio of 94.50%, achieving a final concentration of chitosan of 0.5 mg / ml. Then, previously obtained nanoparticles (Fe 3 O 4 ) are added to the obtained chitosan buffer solution, achieving a final concentration of nanoparticles (Fe 3 O 4 ) of 0.5 mg / ml, and a suspension of chitosan-modified nanoparticles in an acetate buffer solution is obtained. A suspension of nanoparticles in a test tube is subjected to ultrasonic vibrations and aggregated nanoparticles are broken. A suspension of nanoparticles is exposed to ultrasonic vibrations three times for 3 minutes. Between periods of exposure to ultrasound, a suspension of nanoparticles is defended for 2 minutes. Ultrasound is used, for example, with a frequency of 20-22 kHz, with an oscillation intensity of at least 22 kW / m 2 . Under the influence of ultrasound, a suspension of nanoparticles becomes homogeneous. An alkali solution, for example, a 10% aqueous solution of NaOH, is added dropwise to a homogeneous suspension of nanoparticles, and the pH of the suspension is adjusted to 8–9 units. In this case, the nanoparticles begin to noticeably settle to the bottom of the vessel. The subsidence process is monitored visually. The nanoparticle deposition process is then continued, for example by centrifugation at 1000 rpm for 3 minutes. Under the action of centrifugal force, the suspension is divided into two phases: a precipitate is formed (chitosan-modified Fe 3 O 4 nanoparticles) and a supernatant (supernatant - acetate buffer solution). The supernatant is removed and the precipitate is washed, for example, with distilled water. To this end, distilled water (dH 2 O) is added to the precipitate in an amount covering the surface of the precipitate. Shaking a vessel, for example a test tube, wash the nanoparticles. Then, the nanoparticles are precipitated, for example, by centrifugation at 1000 rpm for 3 minutes, and distilled water is removed. In the described manner, the washing procedure of the precipitated nanoparticles with distilled water is repeated. Washed nanoparticles are precipitated, for example, by centrifugation at 1000 rpm for 3 minutes, the supernatant is removed, 0.015 M acetate buffer (pH 5.0) is added to the precipitate.
Навеску ранее приготовленного анализируемого биологического объекта, например измельченную пробу костной ткани в 5 г, помещают в пробирку и заливают лизирующим буферным раствором, например, состава: 0,1 М Трис-HCl, 0,1 М ЭДТА, 0,1 М NaCl, 0,5% N-лаурилсаркозил Na и протеиназы K (ph 6-7, 20-25°С). Лизирующий раствор перемешивают (суспендируют) с измельченной пробой и получают суспензию, содержащую лизирующий буферный раствор и пробу костной ткани. Суспензию инкубируют, например, в течение 25-35 мин. После инкубации пробирку с суспензией подвергают воздействию постоянного магнитного поля, например, помещая пробирку на стандартный лабораторный магнитный штатив. Под действием постоянного магнитного поля происходит разделение суспензии на две фазы: осадок - клеточный лизат и надосадок - ацетатный буферный раствор. Образовавшийся надосадок удаляют и получают осадок - клеточный лизат, содержащий фракцию препарата ДНК из пробы.A portion of a previously prepared analyzed biological object, for example, 5 g ground bone tissue sample, is placed in a test tube and poured with a lysis buffer solution, for example, of the composition: 0.1 M Tris-HCl, 0.1 M EDTA, 0.1 M NaCl, 0 , 5% N-laurylsarcosyl Na and proteinases K (ph 6-7, 20-25 ° C). The lyse solution is mixed (suspended) with the ground sample and a suspension is obtained containing the lyse buffer solution and a sample of bone tissue. The suspension is incubated, for example, for 25-35 minutes. After incubation, the tube with the suspension is exposed to a constant magnetic field, for example, by placing the tube on a standard laboratory magnetic tripod. Under the influence of a constant magnetic field, the suspension is divided into two phases: precipitate - cell lysate and supernatant - acetate buffer solution. The resulting supernatant is removed and a precipitate is obtained - a cell lysate containing a fraction of the DNA preparation from the sample.
К клеточному лизату добавляют ранее приготовленный сорбент Fe3O4 в 0,015 М ацетатном буферном растворе, например, в количестве 20 мкл взвеси модифицированных наночастиц на 1 мл клеточного лизата. Взвесь перемешивают (суспендируют), например, автоматической пипеткой. Затем перемешанную взвесь инкубируют в течение 30 мин, при температуре в диапазоне плюс 15-30°С. Пробирку с взвесью подвергают воздействию постоянного магнитного поля, например, путем помещения пробирки на стандартный лабораторный магнитный штатив. Под воздействием магнитного поля происходит разделение суспензии на две фазы: осадок - сорбент Fe3O4 со связавшимися с ним молекулами ДНК и надосадок - лизирующий буферный раствор. Надосадок (супернатант) удаляют, а к осадку приливают отмывочный (элюирующий) буферный раствор, например, состава: 10 мМ трис-HCl, рН 7,4; 100 мМ NaCl; 1 мМ ЭДТА. Смесь перемешивают, например, автоматической пипеткой, затем пробирку помещают на стандартный лабораторный магнитный штатив, где под действием постоянного магнитного поля происходит разделение суспензии на две фазы: осадок - сорбент наночастиц Fe3O4 и надосадок - элюирующий буферный раствор с молекулами ДНК. Надосадок отбирают в чистые емкости, например пробирки типа Эппендорф. Отобранный надосадок является конечным продуктом - раствором, содержащим выделенный препарат ДНК. Выделенный препарат ДНК в растворе применяют по назначению, например для постановки реакции амплификации.The previously prepared sorbent Fe 3 O 4 in a 0.015 M acetate buffer solution is added to the cell lysate, for example, in an amount of 20 μl of a suspension of modified nanoparticles per 1 ml of cell lysate. The suspension is mixed (suspended), for example, with an automatic pipette. Then the mixed suspension is incubated for 30 min, at a temperature in the range of plus 15-30 ° C. The suspension tube is subjected to a constant magnetic field, for example, by placing the tube on a standard laboratory magnetic stand. Under the influence of a magnetic field, the suspension is divided into two phases: the precipitate is a Fe 3 O 4 sorbent with DNA molecules bound to it and the supernatant is a lysis buffer solution. The supernatant (supernatant) is removed, and washing (eluting) buffer solution is added to the precipitate, for example, with the composition: 10 mM Tris-HCl, pH 7.4; 100 mM NaCl; 1 mM EDTA. The mixture is stirred, for example, with an automatic pipette, then the tube is placed on a standard laboratory magnetic stand, where under the influence of a constant magnetic field the suspension is divided into two phases: the precipitate is a sorbent of Fe 3 O 4 nanoparticles and the supernatant is an elution buffer solution with DNA molecules. The supernatant is collected in clean containers, such as Eppendorf tubes. The selected supernatant is the final product - a solution containing the selected DNA preparation. The isolated DNA preparation in solution is used for its intended purpose, for example, for setting up an amplification reaction.
Вышеописанным путем ДНК выделяют также из мышечных тканей, роговых тканей животных, ногтевых пластин, биологических объектов на предметах-носителях - марле, бумаге, синтетических тканях, крови различного состояния, спермы, волос, ногтевых пластин. Выделение ДНК из роговых тканей животных, ногтевых пластин проводится так же, как из костной ткани: перед процедурой выделения необходимо измельчить биологический объект. Однако для экстракции ДНК с предметов-носителей необходимо предварительно сделать смыв биологического материала. Для этого предмет-носитель (марля, бумага, синтетические ткани) размером 1×1 см помещают в 1 мл дистиллированной воды (dH2O) и инкубируют при температуре плюс 56-70°С, получают смыв биологического материала. Затем отделяют предмет-носитель и работают со смывом по описанному выше методу.In the above-described way, DNA is also isolated from muscle tissues, animal horn tissues, nail plates, biological objects on carrier objects - gauze, paper, synthetic tissues, blood of various conditions, sperm, hair, nail plates. DNA is extracted from the horn tissue of animals and nail plates in the same way as from bone tissue: before the extraction procedure, it is necessary to grind the biological object. However, for the extraction of DNA from carrier objects, it is necessary to first flush the biological material. For this, a carrier object (gauze, paper, synthetic fabrics) 1 × 1 cm in size is placed in 1 ml of distilled water (dH 2 O) and incubated at a temperature of plus 56-70 ° С, a flush of biological material is obtained. Then the carrier object is separated and flushed according to the method described above.
Заявляемый способ позволяет значительно быстрее, по сравнению с аналогами [1, 2], выделить ДНК - процедура выделения ДНК занимает не более 1,5 часов для самых сложных объектов. Выход продукта по заявляемому способу составляет до 200 нг (нанограмм) ДНК из 5 г костного порошка. У прототипа - не более. 150 нг из 5 г костного порошка. То есть заявляемый способ позволяет увеличить выход выделяемого препарата ДНК не менее чем в 1,5 раза. Заявляемый способ позволяет выделить ДНК из биологических материалов, например мышечной ткани, рогов, шерсти животных, ногтевых пластин, неприменимых для извлечения ДНК по способу-прототипу [3].The inventive method allows much faster, in comparison with analogues [1, 2], to isolate DNA - the DNA extraction procedure takes no more than 1.5 hours for the most complex objects. The product yield by the present method is up to 200 ng (nanograms) of DNA from 5 g of bone powder. The prototype - no more. 150 ng of 5 g of bone powder. That is, the inventive method allows to increase the yield of secreted DNA preparation by at least 1.5 times. The inventive method allows to isolate DNA from biological materials, such as muscle tissue, horns, animal hair, nail plates, not applicable for DNA extraction by the prototype method [3].
Спектрофотометрически опреденная степень очистки ДНК, например от примесей - белков и липидов по величине отношения длин волн А260/А280, составляет 1,8-2,0. Это соответствует общепринятому стандарту чистоты ДНК, то есть выделенный заявляемым способом препарат чист.Spectrophotometrically determined degree of DNA purification, for example, of impurities - proteins and lipids by the value of the ratio of wavelengths A 260 / A 280 , is 1.8-2.0. This corresponds to the generally accepted standard for DNA purity, that is, the preparation isolated by the claimed method is pure.
Заявляемый способ - безопасный, применяемые при выделении ДНК компоненты абсолютно безвредны для человека. Способ позволяет выполнять выделение ДНК из широкого спектра биологических объектов, недоступных для прототипа и аналогов, то есть обладает расширенной областью применения. Перечисленные результаты применения заявляемого способа подтверждают его новизну. Заявляемый способ выделения ДНК - осуществимый с применением стандартных технических устройств и оборудования в промышленном производстве продуктов питания, в деятельности организаций здравоохранения, полиции, животноводства. Это соответствует предъявляемому к изобретениям критерию «промышленная применимость»,The inventive method is safe, the components used in the isolation of DNA are absolutely harmless to humans. The method allows for the extraction of DNA from a wide range of biological objects inaccessible to the prototype and analogues, that is, it has an extended scope. These results of the application of the proposed method confirm its novelty. The inventive method of DNA extraction is feasible using standard technical devices and equipment in the industrial production of food products, in the activities of healthcare organizations, police, and animal husbandry. This corresponds to the criterion of "industrial applicability" presented to the inventions,
Предлагаемый способ выделения ДНК необходим специалистам различных областей, опирающимся в своей работе на данные молекулярно-генетического анализа, например диагностической медицине при определении заболеваний по образцу ДНК (гепатит, ВИЧ, наследственные заболевания), судебно-медицинской экспертизе, ветеринарии, сельском хозяйстве.The proposed method for DNA extraction is necessary for specialists in various fields who rely on molecular genetic analysis data, for example, diagnostic medicine in determining diseases using DNA samples (hepatitis, HIV, hereditary diseases), forensic examination, veterinary medicine, and agriculture.
Приведенный пример применения предлагаемого изобретения показывает его полезность, например, для диагностики заболеваний людей в медицине и сельскохозяйственных животных - в ветеринарии. Применение предлагаемого способа выделения ДНК существенно расширяет перечень объектов, используемых для извлечения нуклеиновых кислот, например при производстве судебно-медицинской экспертизы.The above example of the application of the invention shows its usefulness, for example, for the diagnosis of human diseases in medicine and farm animals - in veterinary medicine. The application of the proposed method for DNA isolation significantly expands the list of objects used to extract nucleic acids, for example, in the production of forensic medical examination.
Предлагаемое изобретение удовлетворяет критериям новизны, так как при определении уровня техники не обнаружено средство, которому присущи признаки, идентичные (то есть совпадающие по исполняемой ими функции и форме выполнения этих признаков) всем признакам, перечисленным в формуле изобретения, включая характеристику назначения.The present invention satisfies the criteria of novelty, since when determining the level of technology, no means have been found that have characteristics that are identical (that is, matching the functions performed by them and the form in which these signs are performed) to all the signs listed in the claims, including the purpose of the application.
Заявляемый способ выделения ДНК имеет изобретательский уровень, поскольку не выявлены технические решения, имеющие признаки, совпадающие с отличительными признаками данного изобретения, и не установлена известность влияния отличительных признаков на указанный технический результат.The inventive method for DNA isolation has an inventive step, since no technical solutions have been identified that have features that match the distinguishing features of this invention, and the influence of the distinctive features on the specified technical result is not known.
Заявленное техническое решение можно реализовать в промышленном производстве аналитического и диагностического оборудования, в деятельности организаций пищевой промышленности, здравоохранения, животноводства, правоохранительных органов посредством использования известных стандартных технических устройств и оборудования. Это соответствует критерию «промышленная применимость», предъявляемому к изобретениям.The claimed technical solution can be implemented in the industrial production of analytical and diagnostic equipment, in the activities of organizations of the food industry, healthcare, livestock, law enforcement through the use of well-known standard technical devices and equipment. This meets the criterion of "industrial applicability" presented to the invention.
ИСПОЛЬЗОВАННЫЕ ИСТОЧНИКИUSED SOURCES
1. Mathew C.G. The isolation of high molecular weight eukaryotic DNA [Текст] / C.G.Mathew// Nucleic Acids (Methods in Molecular Biology, volume 2). - 1984. - pp.31-34.1. Mathew C.G. The isolation of high molecular weight eukaryotic DNA [Text] / C.G. Mathew // Nucleic Acids (Methods in Molecular Biology, volume 2). - 1984. - pp. 31-34.
2. Walsh P.S. Chelex®100 as a Medium for Simple Extraction of DNA for PCR-Based Typing From Forensic Material [Текст] / P.S. Walsh, D.A. Metzger // BioTechniques. - 1991. - pp.506-513. Patent Nos. US 5,494,647/A/.2. Walsh P.S. Chelex®100 as a Medium for Simple Extraction of DNA for PCR-Based Typing From Forensic Material [Text] / P.S. Walsh, D.A. Metzger // BioTechniques. - 1991 .-- pp. 506-513. Patent Nos. US 5,494,647 / A /.
3. Xiaojun Z. Collection of Trace Amounts of DNA/mRNA Molecules Using Genomagnetic Nanocapturers [Текст] / Z. Xiaojun, T-D.Rovelyn, W.Kemin, T.Weihong // Analytical Chemistry. - Vol.75, №14, 15.07.2003, pp.3476-3483 (ПРОТОТИП).3. Xiaojun Z. Collection of Trace Amounts of DNA / mRNA Molecules Using Genomagnetic Nanocapturers [Text] / Z. Xiaojun, T-D. Rovelyn, W. Kemin, T. Weihong // Analytical Chemistry. - Vol. 75, No. 14, 07/15/2003, pp.3476-3483 (PROTOTYPE).
4. Губин С.П. Магнитные наночастицы: методы получения, строения и свойства [Текст] С.П.Губин, Ю.А.Кошкаров // Успехи химии 74(6), 2005. - С.539-568.4. Gubin S.P. Magnetic nanoparticles: production methods, structures and properties [Text] S.P. Gubin, Yu.A. Koshkarov // Advances in Chemistry 74 (6), 2005. - P.539-568.
Claims (7)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2011128959/10A RU2485178C2 (en) | 2011-07-12 | 2011-07-12 | Method of dna separation |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2011128959/10A RU2485178C2 (en) | 2011-07-12 | 2011-07-12 | Method of dna separation |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2011128959A RU2011128959A (en) | 2013-01-20 |
| RU2485178C2 true RU2485178C2 (en) | 2013-06-20 |
Family
ID=48786599
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2011128959/10A RU2485178C2 (en) | 2011-07-12 | 2011-07-12 | Method of dna separation |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2485178C2 (en) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103990443A (en) * | 2014-03-27 | 2014-08-20 | 华南师范大学 | Single-stranded DNA nucleic acid modified chitosan magnetic microsphere preparation method |
| CN103990443B (en) * | 2014-03-27 | 2016-11-30 | 华南师范大学 | A kind of single stranded DNA nucleic acid modifies the preparation method of chitosan magnetic microsphere |
| RU2650865C1 (en) * | 2016-11-29 | 2018-04-17 | Общество с ограниченной ответственностью "Магнэтик" | Set of reactives for dna purification |
| RU2653130C1 (en) * | 2017-06-16 | 2018-05-07 | Акционерное общество "ГенТерра" (АО "ГенТерра") | Magnetic sorbent, a method for its production and a method for separation of molecules of nucleic acids |
| RU2696052C1 (en) * | 2018-11-13 | 2019-07-30 | федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Южный федеральный университет" | Method for extracting dna from soil |
| RU2724506C1 (en) * | 2019-08-23 | 2020-06-23 | Алексей Юрьевич Дробышев | Method for dna recovery from bone material |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111514871A (en) * | 2020-05-27 | 2020-08-11 | 合肥中科易康达生物医学有限公司 | Preparation method and application of solid phase substrate for nucleic acid extraction |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU724531B2 (en) * | 1996-04-15 | 2000-09-21 | Promega Corporation | Multiplex amplification of short tandem repeat loci |
-
2011
- 2011-07-12 RU RU2011128959/10A patent/RU2485178C2/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU724531B2 (en) * | 1996-04-15 | 2000-09-21 | Promega Corporation | Multiplex amplification of short tandem repeat loci |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| XIAOJUN ZHAO et all. Collection of trace amounts of DNA/mRNA molecules using genomagnetic nanocapturers // Analitical Chemistry. Vol.75, No.14, 15.07.2003, pp.3476-3483. * |
| XIAOJUN ZHAO et all. Collection of trace amounts of DNA/mRNA molecules using genomagnetic nanocapturers // Analitical Chemistry. Vol.75, №14, 15.07.2003, pp.3476-3483. ПЕРШИНА А.Г. и др. Использование магнитных наночастиц в биомедицине // Бюллетень сибирской медицины. - 2008, №2, с.70-78. КУЛИКОВ Е.Е. Молекулярная характеристика древней ДНК человека и животных из коллекционного материала и археологических находок // Дисс. на соиск. уч. степ. канд. биол. наук. - М.: 2004, с.49-52. * |
| АНИКЕЕВ О.Е. Выделение и характеристика ДНК из образцов различной степени деградации. Научно-практическая конференция биохимиков, посвященная памяти проф. В.Г.Винтера (1939-2005), Казань, 12.11.2009, c.13-16. * |
| КУЛИКОВ Е.Е. Молекулярная характеристика древней ДНК человека и животных из коллекционного материала и археологических находок // Дисс. на соиск. уч. степ. канд. биол. наук. - М.: 2004, с.49-52. * |
| ПЕРШИНА А.Г. и др. Использование магнитных наночастиц в биомедицине // Бюллетень сибирской медицины. - 2008, No.2, с.70-78. * |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103990443A (en) * | 2014-03-27 | 2014-08-20 | 华南师范大学 | Single-stranded DNA nucleic acid modified chitosan magnetic microsphere preparation method |
| CN103990443B (en) * | 2014-03-27 | 2016-11-30 | 华南师范大学 | A kind of single stranded DNA nucleic acid modifies the preparation method of chitosan magnetic microsphere |
| RU2650865C1 (en) * | 2016-11-29 | 2018-04-17 | Общество с ограниченной ответственностью "Магнэтик" | Set of reactives for dna purification |
| RU2653130C1 (en) * | 2017-06-16 | 2018-05-07 | Акционерное общество "ГенТерра" (АО "ГенТерра") | Magnetic sorbent, a method for its production and a method for separation of molecules of nucleic acids |
| RU2696052C1 (en) * | 2018-11-13 | 2019-07-30 | федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Южный федеральный университет" | Method for extracting dna from soil |
| RU2724506C1 (en) * | 2019-08-23 | 2020-06-23 | Алексей Юрьевич Дробышев | Method for dna recovery from bone material |
| RU2810467C1 (en) * | 2022-08-08 | 2023-12-27 | Михаил Владимирович Фаниев | Method of minimally invasive isolation of bacterial dna from testicular tissue biopsy in infertile men |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2011128959A (en) | 2013-01-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2485178C2 (en) | Method of dna separation | |
| CA2985652C (en) | Rapid methods for the extraction of nucleic acids from biological samples | |
| DE10084502B4 (en) | Process for purifying nucleic acid with silicon carbide | |
| CN105349404A (en) | Method for purification of nucleic acids, particularly from fixed tissue | |
| US20100137575A1 (en) | Universal biological sample processing | |
| US20200347449A1 (en) | Methods for determining spatial and temporal gene expression dynamics during adult neurogenesis in single cells | |
| CN103443275B (en) | The method of spermanucleic acid is reclaimed by forensic samples | |
| CN102203251A (en) | Methods and kits for extraction of DNA | |
| CN102137931A (en) | Method for filtering nucleic acids, in particular from fixed tissue | |
| US20150299769A1 (en) | Method for lysing a fixed biological sample | |
| CA3096461A1 (en) | Nucleic acid isolation and inhibitor removal from complex samples | |
| Schwarz | Using fluorescence activated cell sorting to examine cell-type-specific gene expression in rat brain tissue | |
| Czupalla et al. | Collagenase-based single cell isolation of primary murine brain endothelial cells using flow cytometry | |
| US20170121705A1 (en) | Methods and kits for nucleic acid isolation | |
| CN110088282A (en) | With the method for magnetic-particle separating high-purity nucleic acid | |
| US20050153292A1 (en) | Method to determine in vivo nucleic acid levels | |
| US20130052647A1 (en) | Methods for fractionating and processing microparticles from biological samples and using them for biomarker discovery | |
| DE602004003163T2 (en) | Method for providing samples for detection | |
| Clark et al. | ATAC-seq on sorted adult mouse neurons | |
| WO2018184719A1 (en) | Detection method and device | |
| Fasha et al. | Comparison study of human mononuclear cells presence in rat blood using flow cytometry and polymerase chain reaction | |
| WO2012007582A1 (en) | Method for rapidly providing constituents from biological samples | |
| US20230349901A1 (en) | Methods For Identification of Cognate Pairs of Ligands and Receptors | |
| EP3502275B1 (en) | Method for enrichment of nucleic acids | |
| AU2006289514A1 (en) | Functional in vitro immunoassay |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20130713 |