RU2484480C1

RU2484480C1 - Method for assessing action of biologically active substances on antigen-antibody interaction

Info

Publication number: RU2484480C1
Application number: RU2012115145/15A
Authority: RU
Inventors: Фрида Насыровна Гильмиярова; Виктория Марковна Радомская; Елена Александровна Шахнович; Наталия Александровна Колотьева; Наталия Сергеевна Нефедова; Елена Анатольевна Рыскина
Original assignee: Елена Александровна Шахнович
Priority date: 2012-04-16
Filing date: 2012-04-16
Publication date: 2013-06-10

Abstract

FIELD: medicine.

SUBSTANCE: in the method for assessing action of biologically active substances on the antigen-antibody interaction based on sampling whole blood, stabilising it by an anticoagulant, adding a biologically active substance to the whole blood samples of the groups O(I)-AB(IV), incubating for 3-5 minutes, introducing standard monoclonal anti-A and anti-B antibodies, and 3-5 minutes later, rating the agglutination intensity relevant to the blood group.

EFFECT: improved assessment accuracy.

3 tbl

Description

Изобретение относится к области медицины, в частности к биохимии, фармакологии, биологии, и может быть использовано для тестирования биологически активных веществ с учетом групповой принадлежности крови.The invention relates to medicine, in particular to biochemistry, pharmacology, biology, and can be used to test biologically active substances, taking into account the group of blood.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому результату является способ изучения агглютинации эритроцитов, который включает в себя взятие цельной крови, стабилизацию ее антикоагулянтом, добавление антител (антигликофориновые антитела, синтетический ВИЧ-пептид, химерные антитела к гликофорину/Д-димеру, дигоксин-гликофориновые антитела), перемешивание и спустя 3 минуты оценку агглютинации визуально или с помощью ИФА (Hillyard et al. Erythrocyte agglutination assay. Patent Number 5.086.002).The closest in technical essence and the achieved result is a method for studying erythrocyte agglutination, which includes taking whole blood, stabilizing it with an anticoagulant, adding antibodies (antiglycophorin antibodies, synthetic HIV peptide, chimeric antibodies to glycophorin / D-dimer, digoxin-glycophorin ), mixing, and after 3 minutes, agglutination assessment visually or by ELISA (Hillyard et al. Erythrocyte agglutination assay. Patent Number 5.086.002).

Недостатком известного способа, принятого за прототип, является проведение суммарной оценки агглютинации всех антигенов, расположенных на мембране эритроцита, не учитывая групповую принадлежность крови и индивидуальную группоспецифическую чувствительность.The disadvantage of this method, adopted as a prototype, is to conduct a total assessment of the agglutination of all antigens located on the erythrocyte membrane, not taking into account the group of blood and individual group-specific sensitivity.

Техническим результатом, на достижение которого направлено создание данного изобретения, является повышение качества оценки действия биологически активных веществ на антиген-антительное взаимодействие.The technical result, the achievement of which the creation of this invention is directed, is to improve the quality of the evaluation of the action of biologically active substances on antigen-antibody interaction.

Поставленный технический результат достигается тем, что в способе оценки действия биологически активных веществ на антиген-антительное взаимодействие, основанном на взятии цельной крови, стабилизации ее антикоагулянтом, добавлении в нее антител, перемешивании и спустя 3 минуты проведении оценки агглютинации визуально, в способе к образцам цельной крови О(I)-AB(IV) групп добавляют биологически активное вещество, инкубируют в течение 3-5 минут, затем вносят стандартные моноклональные анти-А и анти-В антитела и спустя 3-5 минут по бальной шкале определяют интенсивность агглютинации, соответствующую группе крови.The technical result achieved is achieved by the fact that in the method for evaluating the effect of biologically active substances on antigen-antibody interaction, based on taking whole blood, stabilizing it with an anticoagulant, adding antibodies to it, mixing and after 3 minutes visually evaluating the agglutination assessment, in the method for whole samples blood of O (I) -AB (IV) groups add the biologically active substance, incubate for 3-5 minutes, then add standard monoclonal anti-A and anti-B antibodies and after 3-5 minutes on a scale predelyayut agglutination intensity corresponding blood group.

Биологически активными веществами, используемыми в «Способе оценки действия биологически активных веществ на антиген-антительное взаимодействие», могут быть гормоны, метаболиты, высшие жирные кислоты, витамины, флаволигнаны, лекарственные препараты.The biologically active substances used in the "Method for evaluating the effect of biologically active substances on antigen-antibody interaction" can be hormones, metabolites, higher fatty acids, vitamins, flavolignans, drugs.

В качестве биологически активного вещества используют пировиноградную кислоту.As a biologically active substance, pyruvic acid is used.

В таблице 1 приведены данные оценки степени агглютинации в образцах цельной крови О(I)-AB(IV) групп, такие как значение агглютинации, числовое значение агглютинации и описание агглютинации.Table 1 shows the data on the degree of agglutination in samples of whole blood of O (I) -AB (IV) groups, such as the value of agglutination, the numerical value of agglutination, and a description of agglutination.

Таблица 1Table 1 Данные оценки степени агглютинации в образцах групп крови О(I)-AB(IV)Assessment data on the degree of agglutination in samples of blood groups O (I) -AB (IV) Значение агглютинацииThe value of agglutination Числовое значение агглютинацииThe numerical value of agglutination ОписаниеDescription 4+4+ 12 pt12 pt Клеточный осадок образует один комок, осадок виден макроскопическиThe cell pellet forms one lump, the pellet is visible macroscopically 3+3+ 10 pt10 pt Клеточный осадок представлен несколькими крупными комками, виден макроскопическиCell sediment is represented by several large lumps, macroscopically visible 2+2+ 8 pt8 pt Клеточный осадок представлен множеством мелких комочков, виден макроскопическиCell sediment is represented by many small lumps, macroscopically visible 1+1+ 5 pt5 pt Клеточный осадок представлен мельчайшими зернистыми комочками, макроскопически слабо заметенCell sediment is represented by tiny granular lumps, macroscopically weakly visible (+) или w (слабая)(+) or w (weak) 3 pt3 pt Клеточный осадок представлен мельчайшими гранулами, видимыми только под микроскопомThe cell pellet is represented by the smallest granules visible only under a microscope. -- 0 pt0 pt Отрицательный результат - все клетки свободно и равномерно распределеныNegative result - all cells are freely and evenly distributed

В таблице 2 приведены данные о влиянии биологически активного вещества, в качестве которого использовалась пировиноградная кислота, на антиген-антительное взаимодействие эритроцитов А(II) и B(III) групп крови.Table 2 shows data on the effect of a biologically active substance, which was used pyruvic acid, on the antigen-antibody interaction of red blood cells A (II) and B (III) groups.

Таблица 2table 2 Влияние пировиноградной кислоты на антиген-антительное взаимодействие эритроцитов А(II) и В(III) групп кровиThe effect of pyruvic acid on the antigen-antibody interaction of red blood cells A (II) and B (III) blood groups Контрольные образцыControl samples Антиген А А (II)Antigen A A (II) Антиген В В (III)Antigen B In (III) Время, (с)Time (s) АгглютинацияAgglutination Время, (с)Time (s) АгглютинацияAgglutination Время, (с)Time (s) АгглютинацияAgglutination МM 66 4+4+ 77 4+4+ 6,46.4 4+4+ MeMe 66 4+4+ 77 4+4+ 66 4+4+ Δ%Δ% +16+16 +6+6 SESE 00 00 0,810.81 00 0,510.51 00

В условиях in vitro у эритроцитов А(II) группы крови при добавлении пировиноградной кислоты, время начала агглютинации увеличилось на 16% по сравнению с контролем (7±0,81), а у В(III) группы крови увеличилось на 6%, то есть пировиноградная кислота слабее влияет на антиген-антительное взаимодействие эритроцитов B(III) группы крови с анти-В антителами (6,4±0,51). Степень агглютинации как в контрольных образцах, так и в опытных образцах - максимальная 4+.In vitro conditions in erythrocytes A (II) blood groups with the addition of pyruvic acid, the onset of agglutination increased by 16% compared with the control (7 ± 0.81), and in B (III) blood groups increased by 6%, then there is pyruvic acid has a weaker effect on the antigen-antibody interaction of blood group B (III) erythrocytes with anti-B antibodies (6.4 ± 0.51). The degree of agglutination in both control samples and experimental samples is a maximum of 4+.

В таблице 3 приведены данные о влиянии биологически активного вещества, в качестве которого использовалась пировиноградная кислота, на антиген-антительное взаимодействие эритроцитов AB(IV) группы крови.Table 3 shows data on the effect of a biologically active substance, which was used pyruvic acid, on the antigen-antibody interaction of blood group AB (IV) erythrocytes.

Таблица 3Table 3 Влияние пировиноградной кислоты на антиген-антительное взаимодействие эритроцитов AB(IV) группы кровиThe effect of pyruvic acid on antigen-antibody interaction of blood group AB (IV) red blood cells Контрольные образцыControl samples Антиген А
AB(IV)Antigen A
AB (IV) Антиген В
AB(IV)Antigen B
AB (IV) Время (сек.)Time (sec.) АгглютинацияAgglutination Время (сек.)Time (sec.) АгглютинацияAgglutination Время (сек.)Time (sec.) АгглютинацияAgglutination МM 66 4+4+ 7,47.4 3,6+3.6+ 7,47.4 3,6+3.6+ MeMe 66 4+4+ 77 4+4+ 77 4+4+ Δ%Δ% +23+23 +23+23 SESE 00 00 0,510.51 0,510.51 0,510.51 0,510.51

При оценке агглютинации антигенов А и В эритроцитов AB(IV) группы крови время агглютинации в среднем возросло на 23% (7,4±0,51), а степень агглютинации слабее, чем в контрольных образцах и составляет 3,6+. Таким образом, пировиноградная кислота влияет на антиген-антительное взаимодействие, увеличивая время связывания антигенов и антител и образования их комплексов.When evaluating the agglutination of antigens A and B of blood group AB (IV) erythrocytes, the agglutination time increased on average by 23% (7.4 ± 0.51), and the degree of agglutination was weaker than in the control samples and amounted to 3.6+. Thus, pyruvic acid affects the antigen-antibody interaction, increasing the binding time of antigens and antibodies and the formation of their complexes.

Проведенный заявителем анализ уровня техники, включающий поиск по патентным и научно-техническим источникам информации, и выявление источников, содержащих сведения об аналогах заявляемого изобретения, позволили установить, что заявителем не обнаружен аналог, характеризующийся признаками, тождественными (идентичными) всем существенным признакам заявляемого изобретения.The analysis of the prior art by the applicant, including a search by patent and scientific and technical sources of information, and the identification of sources containing information about analogues of the claimed invention, made it possible to establish that the applicant did not find an analogue characterized by features identical (identical) to all essential features of the claimed invention.

Определение из перечня выявленных аналогов прототипа позволило выявить совокупность существенных по отношению к усматриваемому техническому результату отличительных признаков в заявляемом «Способе оценки действия биологически активных веществ на антиген-антительное взаимодействие», изложенных в формуле изобретения. Следовательно, заявляемое изобретение соответствует критерию «новизна».The definition from the list of identified analogues of the prototype allowed us to identify a set of essential distinguishing features with respect to the technical result in the claimed “Method for evaluating the effect of biologically active substances on antigen-antibody interaction” set forth in the claims. Therefore, the claimed invention meets the criterion of "novelty."

Для проверки соответствия заявляемого изобретения условию «изобретательсткий уровень» заявитель провел дополнительный поиск известных решений, чтобы выявить признаки, совпадающие с отличительными от прототипа признаками заявляемого изобретения.To verify the compliance of the claimed invention with the condition "inventive step", the applicant conducted an additional search for known solutions in order to identify signs that match the distinctive features of the claimed invention from the prototype.

Результаты поиска показали, что заявляемое техническое решение не вытекает для специалиста явным образом из известного уровня техники, определенного заявителем, и не выявлено влияние предусматриваемых существенными признаками заявляемого «Способа оценки действия биологически активных веществ на антиген-антительное взаимодействие» на достижение технического результата.The search results showed that the claimed technical solution does not follow explicitly for the specialist from the prior art determined by the applicant, and the effect of the essential features of the claimed “Method for evaluating the effect of biologically active substances on antigen-antibody interaction” provided for achieving a technical result is not revealed.

Следовательно, заявляемое изобретение соответствует критерию «изобретательский уровень».Therefore, the claimed invention meets the criterion of "inventive step".

Критерий изобретения «промышленная применимость» подтверждается тем, что предлагаемый «Способ оценки действия биологически активных веществ на антиген-антительное взаимодействие» может быть использован в биохимии, фармакологии, биологии, для тестирования биологически активных веществ с учетом принадлежности к различным группам крови.The criteria of the invention "industrial applicability" is confirmed by the fact that the proposed "Method for evaluating the effect of biologically active substances on antigen-antibody interaction" can be used in biochemistry, pharmacology, biology, for testing biologically active substances, taking into account belonging to different blood groups.

Claims

A method for evaluating the effect of biologically active substances on antigen-antibody interaction, based on taking whole blood, stabilizing it with an anticoagulant, adding antibodies, stirring, and after 3 min visually assessing agglutination, characterized in that O (I) -AB ( Iv) groups add a biologically active substance, incubate for 3-5 minutes, add standard monoclonal anti-A and anti-B antibodies, and after 3-5 minutes, the agglutination intensity corresponding to the cr vi.