RU2482478C2 - Method of determining soil toxicity by method of biotesting with use of holotrichs paramecium caudatum ehrenberg - Google Patents
Method of determining soil toxicity by method of biotesting with use of holotrichs paramecium caudatum ehrenberg Download PDFInfo
- Publication number
- RU2482478C2 RU2482478C2 RU2011128801/15A RU2011128801A RU2482478C2 RU 2482478 C2 RU2482478 C2 RU 2482478C2 RU 2011128801/15 A RU2011128801/15 A RU 2011128801/15A RU 2011128801 A RU2011128801 A RU 2011128801A RU 2482478 C2 RU2482478 C2 RU 2482478C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- toxicity
- water
- ciliates
- hexane
- soil
- Prior art date
Links
Abstract
Description
Изобретение относится к области сельского хозяйства, экологии и может быть использовано в системе экотоксикологического мониторинга земель сельскохозяйственного назначения. The invention relates to the field of agriculture, ecology and can be used in a system of ecotoxicological monitoring of agricultural land.
Суть изобретения.The essence of the invention.
Способ заключается в фракционном извлечении остатков пестицидов из почвы: с помощью водной экстракции - водорастворимых токсикантов и с помощью органического растворителя - остатков ДДТ с последующими испарением растворителя, переводом экстракта в коллоидное состояние в воде с применением поверхностно-активного вещества (ПАВ) и после дующего биотестирования на инфузориях Paramecium caudatum по тест-реакции скорости сокращения выделительных вакуолей.The method consists in fractional extraction of pesticide residues from the soil: using aqueous extraction - water-soluble toxicants and using an organic solvent - DDT residues, followed by evaporation of the solvent, transferring the extract to a colloidal state in water using a surface-active substance (surfactant) and after blowing biotesting on ciliates of Paramecium caudatum by test reaction of the rate of reduction of excretory vacuoles.
ОписаниеDescription
Анализ интегральной токсичности почвы, определяемой с помощью инфузорий, показывает отсутствие в ее составе токсичности наиболее экологически опасных как по уровню токсичности, так и по степени накопления веществ, относящихся к стойким органическим загрязнителям (СОЗ), таких как ДДТ, диоксины, полихлорированные бифенилы, фураны, полициклические ароматические углеводороды, нефтепродукты.An analysis of the integral toxicity of the soil, determined with the help of ciliates, shows the absence of toxicity of the most environmentally hazardous compounds both in terms of toxicity and in the degree of accumulation of substances related to persistent organic pollutants (POPs), such as DDT, dioxins, polychlorinated biphenyls, furans , polycyclic aromatic hydrocarbons, petroleum products.
Данное явление связано с плохой растворимостью соединений этого класса (хлорорганические) в воде, а также с тем фактом, что инфузории в силу своих размеров поглощают в основном растворенные вещества.This phenomenon is associated with the poor solubility of compounds of this class (organochlorine) in water, as well as the fact that ciliates, due to their size, absorb mainly dissolved substances.
Водорастворимость стойких органических загрязнителей (СОЗ) почв.Water solubility of persistent organic pollutants (POPs) of soils.
растворимостьWater
solubility
Определение данных загрязнителей, характеризующихся тенденцией к накоплению в окружающей среде, является приоритетной задачей при биотестировании почв.The determination of these pollutants, characterized by a tendency to accumulate in the environment, is a priority for soil biotesting.
Известен способ биотестирования на инфузориях стилонихиях, где объект исследования корма экстрагируется ацетоном с последующим разбавлениемA known method of biotesting at ciliates styonychia, where the object of study of the feed is extracted with acetone, followed by dilution
ацетонового экстракта водой до 1% содержания ацетона (Экспресс-метод определения общей токсичности фуражного зерна, продуктов его переработки и комбикормов с использованием инфузорий стилонихий. ГОСТ 13496.7-92 «Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения токсичности». ГОСТ 29136-91 «Мука кормовая из рыбы, морских млекопитающих, ракообразных и беспозвоночных. Методы определения токсичности»).acetone extract with water up to 1% acetone content (Express method for determining the total toxicity of feed grain, its processed products and animal feed using stylonychia infusoria. GOST 13496.7-92 "Feed grain, its processed products, animal feed. Methods for determining toxicity." GOST 29136- 91 "Feed flour from fish, marine mammals, crustaceans and invertebrates. Methods for determining toxicity").
Недостатком данного способа является тот факт, что инфузории как одноклеточные микроскопические организмы проявляют тест-реакцию в первую очередь на растворенные токсичные вещества.The disadvantage of this method is the fact that ciliates as unicellular microscopic organisms exhibit a test reaction primarily to dissolved toxic substances.
В то же время растворяющая сила 1% раствора ацетона в воде очевидно недостаточна для растворения токсикантов класса СОЗ, токсины же, выпавшие в осадок, действуют на инфузории, в силу их тигмоотрицательности, только как неблагоприятные условия среды (шумовой эффект) проведения эксперимента.At the same time, the dissolving power of a 1% solution of acetone in water is obviously insufficient for the dissolution of toxicants of the POPs class, while the toxins that precipitate act on the ciliates, because of their negativity, only as adverse environmental conditions (noise effect) of the experiment.
При пробоподготовке по данному способу в процессе перевода ацетонового экстракта в 1% водноацетоновый раствор присутствующие СОЗ выпадают в осадок и не оказывают непосредственное токсическое действие на инфузории.When sample preparation according to this method, in the process of transferring the acetone extract to a 1% aqueous acetone solution, the present POPs precipitate and do not have a direct toxic effect on the ciliates.
Однако существуют приемы повышения доступности для инфузорий труднорастворимых веществ с помощью поверхностно-активных веществ (ПАВ) и последующим биотестированием их на гидробионтах (Виноходов Д.О. Научные основы биотестирования с использованием инфузорий: автореф. дис., докт. биол. наук: 03.00.23. - М, 2007).However, there are techniques for increasing the availability of difficult-soluble substances for infusoria using surfactants and their subsequent bioassay on hydrobionts (Vinokhodov D.O. Scientific principles of bioassay using infusoria: Abstract of Ph.D., Doctor of Biological Sciences: 03.00. 23. - M, 2007).
Выявлена чувствительность инфузорий к поверхностно-активным веществам - твину-80, тритону Х-305, додецилсульфату натрия. Полученные данные позволяют говорить о том, что для суспензирования не растворимых в воде токсичных веществ целесообразно применять этанол, ацетон, тритон Х-305 и твин-80, так как эти вещества не обладают высокой токсичностью по отношению к инфузориям.The sensitivity of ciliates to surface-active substances - tween-80, triton X-305, sodium dodecyl sulfate was revealed. The data obtained suggest that it is advisable to use ethanol, acetone, Triton X-305 and tween-80 to suspend water-insoluble toxic substances, since these substances do not have high toxicity with respect to ciliates.
Доступность труднорастворимых веществ для инфузорий при использовании ПАВ обусловлена процессами увеличения их дисперсности в водной среде.The availability of sparingly soluble substances for ciliates when using surfactants is due to the processes of increasing their dispersion in the aquatic environment.
Основной проблемой при использовании поверхностно-активных веществ для биотестирования является их токсичность для гидробионтов, характеризующаяся прямой зависимостью от степени достигаемой дисперсности, получаемых с помощью ПАВ коллоидных растворов. Кроме того, время сохранения достигнутого уровня дисперсности (стабильность) так же взаимозависимо от степени токсичности и количества применяемого ПАВ.The main problem when using surfactants for bioassay is their toxicity to aquatic organisms, which is directly dependent on the degree of dispersion achieved using surfactants in colloidal solutions. In addition, the time to maintain the achieved level of dispersion (stability) is also interdependent on the degree of toxicity and the amount of surfactant used.
В процессе биотестирования в исследуемых диспергированных образцах могут возникать тенденции снижения дисперсности, приводящие к снижению чувствительности инфузорий.During the biotesting process, dispersed samples may undergo a tendency toward a decrease in dispersion, leading to a decrease in the sensitivity of ciliates.
Решением данной проблемы могут служить тест-реакции инфузорий, регистрируемые в сроки в интервале нескольких минут (до 1 часа).A solution to this problem can be test reactions of ciliates, recorded on time in the interval of several minutes (up to 1 hour).
Известен метод, включающий прием краткосрочного биотестирования, что позволяет решить задачу нестабильности во времени уровня дисперсности, включающий определение тест-реакции инфузорий на токсические вещества в течение короткого отрезка времени (Патент RU 2281507 С2, МПК G01N 33/483 (2006.01).A known method, including the use of short-term biotesting, which allows to solve the problem of instability in time of the dispersion level, including determining the test reaction of ciliates to toxic substances for a short period of time (Patent RU 2281507 C2, IPC G01N 33/483 (2006.01).
Способ определяет токсичность объекта на физиологическом уровне - по снижению числа сокращений выделительных вакуолей на 50%, когда морфологические изменения в клетке еще не достаточно выражены.The method determines the toxicity of the object at the physiological level - to reduce the number of contractions of excretory vacuoles by 50%, when the morphological changes in the cell are not yet sufficiently pronounced.
Инфузории Paramecium caudatum имеют две сократительные (выделительные) вакуоли - одна в передней, другая в задней части тела, вакуоли попеременно сокращаются по мере наполнения их жидкостью с продуктами обмена веществ и выбрасывают содержимое в окружающую среду через специальное отверстие в клеточной стенке - экскреторную пору. Длительность интервала между двумя сокращениями вакуолей (частота пульсации) зависит от температуры окружающей среды (при температуре 16°С она равна 3-4 в мин). При добавлении в среду токсического вещества оно немедленно поступает внутрь инфузории, т.к. всасывание происходит всей поверхностью ее тела. Токсические вещества, поступившие внутрь клетки, нарушают ее жизнедеятельность, что сказывается и на выделительной системе, число сокращений выделительных вакуолей уменьшается вплоть до полной блокады их функции.The ciliates of Paramecium caudatum have two contractile (excretory) vacuoles - one in the front and the other in the back of the body, the vacuoles alternately contract as they are filled with fluid with metabolic products and release the contents into the environment through a special hole in the cell wall - the excretory pore. The duration of the interval between two reductions in vacuoles (pulsation frequency) depends on the ambient temperature (at a temperature of 16 ° C it is 3-4 in min). When a toxic substance is added to the medium, it immediately enters the ciliates, as absorption occurs over the entire surface of her body. Toxic substances entering the cell disrupt its vital activity, which affects the excretory system, the number of contractions of excretory vacuoles decreases until their function is completely blocked.
При полном прекращении сокращений вакуоли переполняются продуктами обмена, их объем значительно увеличивается. Следующим этапом губительного действия токсина на инфузории при его высокой концентрации в среде являются грубые морфологические изменения в клеточной стенке инфузорий в виде множественных округлых выростов («вакуолизация» клеточной стенки), которые затем разрываются, и содержимое клетки (эндоплазма)выходит в окружающую среду. По данному способу в культуру инфузорий Paramecium caudatum вносят исследуемый токсин в различных разведениях, выдерживают в течение трех минут при комнатной температуре, подсчитывают число сокращений выделительных вакуолей за 1 мин у 6-7 инфузорий, определяют токсическое воздействие бактериального антигена по степени угнетения выделительной функции инфузорий, и за токсическую концентрацию принимают концентрацию антигена, снижающую на 50% число сокращений выделительных вакуолей инфузорий по сравнению с контролем.With the complete cessation of contractions, vacuoles are overflowed with metabolic products, their volume increases significantly. The next stage of the detrimental effect of the toxin on the ciliates at its high concentration in the medium is gross morphological changes in the cell wall of the ciliates in the form of multiple rounded outgrowths (“vacuolization” of the cell wall), which then burst, and the contents of the cell (endoplasm) enter the environment. According to this method, the studied toxin is introduced into the culture of ciliates Paramecium caudatum in various dilutions, incubated for three minutes at room temperature, the number of contractions of excretory vacuoles for 1 min is calculated for 6-7 ciliates, the toxic effect of the bacterial antigen is determined by the degree of suppression of the excretory function of the ciliates, and for the toxic concentration, the antigen concentration is taken, which reduces by 50% the number of reductions in the excretory vacuoles of the ciliates compared to the control.
Наиболее близким к предлагаемому изобретению является способ (прототип) определения токсичности почвы с применением культуры равноресничных инфузорий Paramecium caudatum (Методика определения токсичности отходов, почв, осадков сточных, поверхностных и грунтовых вод методом биотестирования с использованием равноресничных инфузорий Paramecium caudatum Ehrenberg.Closest to the proposed invention is a method (prototype) for determining the toxicity of the soil using a culture of equamerican infusoria Paramecium caudatum (Methodology for determining the toxicity of waste, soil, sewage, surface and groundwater by biotesting using equine-ciliary infusoria Paramecium caudatum Ehrenberg.
Федеральный реестр (ФР) ФР. 1.39.2006.02506 ПНД Ф 14.1:2:3.13-06).Federal Register (FR) FR. 1.39.2006.02506 PND F 14.1: 2: 3.13-06).
Недостатком способа является определение в почве только водорастворимых токсинов. Даже при значительных превышениях ПДК такого загрязнителя как ДДТ в 10, в 100 раз, реакция инфузорий будет отсутствовать.The disadvantage of this method is the determination of only water-soluble toxins in the soil. Even with significant excesses of the MPC of such a pollutant as DDT by 10, 100 times, there will be no reaction of ciliates.
Способ включает почвенную пробоподготовку с экстракцией, биотестирование с высокочувствительной и легко воспроизводимой культурой инфузорий.The method includes soil sample preparation with extraction, bioassay with a highly sensitive and easily reproducible culture of ciliates.
Цель предлагаемого изобретения - повышения точности оценки биотестирования за счет включения в состав определяемых веществ труднорастворимого в воде ДДТ.The purpose of the invention is to improve the accuracy of the assessment of biotesting by including DDT, which is insoluble in water, in the composition of the substances being determined.
Поставленная цель достигается за счет процесса пробоподготовки почвы. Суть метода заключается в переводе извлеченных из почвы труднорастворимых в воде токсикантов в виде дисперсии, доступной для инфузорий в водной среде, способом конденсации. Для этого почвенный экстракт органического растворителя упаривается досуха, растворяется в 1 мл этанола и переводится в водную фазу в присутствии специально подобранных поверхностно-активных веществ. При этом токсиканты, переходящие в слабый растворитель (воду), начинают создавать осадок, образуя кристаллы - точки роста. Одновременно ПАВ, подобранное по степени подвижности и величине гидрофильно-липофильного баланса, локализуется на границе раздела фаз (вода/токсикант), препятствуя росту кристаллов и стабилизируя уровень дисперсности.The goal is achieved through the process of soil preparation. The essence of the method is the translation of toxicants, insoluble in water, extracted from the soil in the form of a dispersion, available for ciliates in the aquatic environment, by the condensation method. For this, the soil extract of the organic solvent is evaporated to dryness, dissolved in 1 ml of ethanol and transferred to the aqueous phase in the presence of specially selected surfactants. In this case, toxicants, passing into a weak solvent (water), begin to form a precipitate, forming crystals - growth points. At the same time, a surfactant, selected according to the degree of mobility and the magnitude of the hydrophilic-lipophilic balance, is localized at the interface (water / toxicant), inhibiting the growth of crystals and stabilizing the level of dispersion.
В качестве ПАВ для стабилизации дисперсии ДДТ, экспериментальным путем была выбрана желчь КРС. Входящие в ее состав желчные кислоты, обладающие хорошей подвижностью, как низкомолекулярные ПАВ, а также лецитин, создающий стероидную защиту дисперсной фазы, показали результаты относительно низкой токсичности при достаточном уровне дисперсности.As a surfactant for stabilizing the dispersion of DDT, cattle bile was experimentally selected. Its bile acids, which have good mobility, such as low molecular weight surfactants, as well as lecithin, which creates steroidal protection of the dispersed phase, have shown relatively low toxicity with a sufficient level of dispersion.
По данных таблицы видно, что желчь, как ПАВ, стабилизирующее дисперсную фазу, будет иметь преимущество, так как при высоком показателе гидрофильно-липофильного баланса (ГБЛ) может применяться в больших количествах и соответствовать широкому разбросу дозы токсикантов в исследуемых образцах.According to the table, it is clear that bile, as a surfactant that stabilizes the dispersed phase, will have an advantage, since with a high hydrophilic-lipophilic balance (GBL) it can be used in large quantities and corresponds to a wide variation in the dose of toxicants in the studied samples.
Основной функцией выбранного ПАВ является создание такого уровня дисперсности, который соответствует поглотительной способности инфузорий.The main function of the selected surfactant is to create a level of dispersion that matches the absorption capacity of the ciliates.
По данным биотестирования, проведенным с помощью автоматизированной системы БиоЛАТ, очевидна наибольшая эффективность предлагаемого метода в вариантах с использованием культуры Paramecium caudatum. Более высокий уровень чувствительности, по-видимому, связан с большими размерами клеток данной культуры инфузорий, адекватными уровню достигаемой дисперсности, достигаемой с помощью желчи.According to biotesting performed using the automated BioLAT system, the greatest effectiveness of the proposed method in variants using the Paramecium caudatum culture is obvious. A higher level of sensitivity, apparently, is associated with the large size of the cells of this culture of ciliates, adequate to the level of dispersion achieved with bile.
Таким образом нами предлагается способ определения токсичности почвы методом биотестирования с использованием равноресничных инфузорий Paramecium caudatum Ehrenberg, включающий экстракцию почвенного образца водой, фильтрацию с получением прозрачного раствора и рН 7,0-8,2, приготовление шкалы разведений экстракта и определение токсичности образца по тест-реакции инфузорий, отличающийся тем, что почву повторно экстрагируют водным раствором ацетона, проводят фильтрование, далее экстрагируют гексаном, сливают нижнюю гексановую фракцию и повторяют переэкстракцию новой порцией гексана, гексановый экстракт упаривают досуха, добавляют этанол, закрывают и настаивают, с последующим переводом в коллоидный раствор, путем разбавления этанолового экстракта до концентрации 2% водным раствором препарата сухой желчи КРС с концентрацией 0,01%, биотестируют шкалу разбавлении по тест-реакции скорости сокращений выделительных вакуолей инфузорий и оценивают уровень токсичности почвенного образца по величинам токсичности водорастворимой фракции и водонерастворимой с ДДТ.Thus, we propose a method for determining soil toxicity by biotesting using equidimensional ciliates Paramecium caudatum Ehrenberg, including extraction of the soil sample with water, filtration to obtain a clear solution and pH 7.0-8.2, preparation of a dilution scale of the extract, and determination of the toxicity of the sample by test ciliates, characterized in that the soil is re-extracted with an aqueous solution of acetone, filtered, then extracted with hexane, the lower hexane fraction is drained and repeated extraction with a new portion of hexane, the hexane extract is evaporated to dryness, ethanol is added, closed and insisted, followed by transfer to a colloidal solution, by diluting the ethanol extract to a concentration of 2% aqueous solution of cattle dry bile with a concentration of 0.01%, the dilution test scale according to test -reaction of the rate of contraction of excretory vacuoles of ciliates and assess the toxicity level of the soil sample by the values of the toxicity of the water-soluble fraction and water-insoluble with DDT.
Пример осуществления изобретения.An example embodiment of the invention.
Модельный образец почвы содержит ДДТ в количестве 1 ПДК (0,1 мг/кг почвы).The model soil sample contains DDT in the amount of 1 MPC (0.1 mg / kg of soil).
Навеску почвы 200 г в воздушно-сухом состоянии помещают в колбу емкостью 1000 мл и приливают 4-кратное количество дистиллята. На аппарате для встряхивания полученную смесь обрабатывают в течение 2-х часов, после чего отстаивают в течение 30 мин. Надосадочную жидкость декантируют, а остаток фильтруют через бумажный обеззоленый фильтр (белая лента).A sample of soil 200 g in an air-dry state is placed in a flask with a capacity of 1000 ml and a 4-fold amount of distillate is added. On the apparatus for shaking, the resulting mixture is treated for 2 hours, after which it is defended for 30 minutes. The supernatant is decanted, and the residue is filtered through an anhydrous paper filter (white tape).
Первые порции фильтрата часто бывают мутными. Их необходимо перефильтровать до прозрачного раствора. При повышенной мутности допускается отстаивание в холодильнике до 5 суток. Вытяжка из почвы должна иметь рН в диапазоне 7,0-8,2. Переходят к биотестированию водорастворимой фракции.The first portions of the filtrate are often cloudy. They must be filtered to a clear solution. With increased turbidity, sedimentation in the refrigerator is allowed for up to 5 days. Extract from the soil should have a pH in the range of 7.0-8.2. Go to the biotesting of the water-soluble fraction.
Почву, оставшуюся на фильтре, взвешивают, отбирают четверть (соответствует 50 г), помещают в круглодонную колбу на 250 мл, добавляют 40 мл водного раствора хлористого аммония 1% концентрации, закрывают притертой пробкой и оставляют на сутки.The soil remaining on the filter is weighed, a quarter is taken (corresponding to 50 g), placed in a 250 ml round bottom flask, 40 ml of an aqueous solution of ammonium chloride 1% concentration is added, closed with a ground stopper and left for a day.
Почву заливают 100 мл 75% ацетона в воде и встряхивают на аппарате в течение часа. Жидкую часть экстракта из круглодонной колбы переносят на фильтр, проводя фильтрование в делительную воронку 500 мл.The soil is poured with 100 ml of 75% acetone in water and shaken on the apparatus for an hour. The liquid portion of the extract from the round bottom flask is transferred to the filter, filtering in a 500 ml separatory funnel.
В делительную воронку приливают 100 мл гексана, взбалтывают воронку в течение 1-2 минут, сливают нижнюю гексановую фракцию в круглодонную колбу со шлифом от ротационного испарителя и повторяют переэкстракцию повторно новой порцией гексана 50 мл. Объединенный гексановый экстракт упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре 50 градусов. Последнюю стадию упаривания проводят в пробирке 5 мл.100 ml of hexane is poured into the separatory funnel, the funnel is shaken for 1-2 minutes, the lower hexane fraction is poured into a round bottom flask with a thin section from a rotary evaporator and re-extraction is repeated again with a new portion of 50 ml of hexane. The combined hexane extract was evaporated to dryness on a rotary evaporator at a temperature of 50 degrees. The last stage of evaporation is carried out in a 5 ml tube.
К сухому остатку в пробирке приливают 0,5 мл этанола, закрывают пробирку и настаивают 3 часа (до полного растворения ДДТ).0.5 ml of ethanol is added to the dry residue in a test tube, the tube is closed and insisted for 3 hours (until DDT is completely dissolved).
Одновременно с растворением сухого остатка готовят дисперсионную среду для диспергирования ДДТ методом конденсации (перехода от сильного растворителя к слабому). Для этого готовят 0, 01% раствор желчи КРС (максимальная концентрация нетоксичная для инфузорий) и подогревают раствор на водяной бане до температуры 37 градусов.Simultaneously with the dissolution of the dry residue, a dispersion medium is prepared for dispersion of DDT by the condensation method (transition from a strong solvent to a weak one). To do this, prepare a 0, 01% solution of cattle bile (the maximum concentration is non-toxic for ciliates) and heat the solution in a water bath to a temperature of 37 degrees.
0,5 мл этанолового экстракта шприцом быстро и при помешивании вводится в раствор желчи 25 мл. Получившийся коллоидный раствор с эффектом светорассеивания немедленно биотестируют.0.5 ml of ethanol extract is injected quickly and with stirring into a solution of bile 25 ml with a syringe. The resulting colloidal solution with the effect of light scattering is immediately biotested.
Процесс биотестирования.The bioassay process.
1. Биотестирование водорастворимой фракции.1. Biotesting of a water-soluble fraction.
Для биотестирования используют микроаквариум с лунками, который помещают на предметный столик стереомикроскопа. Одну из лунок заполняют культурой инфузорий с помощью капиллярной пипетки. В свободные лунки капиллярной пипеткой помещают по (10-12) особей в каждую лунку, так, чтобы на одну тестируемую пробу приходилось не менее 50 инфузорий в пяти лунках. При помещении тест-объекта количество культуральной жидкости в лунке не должно превышать 0,02 см. Пять лунок используют в качестве контрольных.For biotesting use a micro-aquarium with holes, which are placed on the stage of the stereo microscope. One of the holes is filled with a culture of ciliates using a capillary pipette. In free wells, a capillary pipette is used to place (10-12) individuals in each well, so that at least 50 ciliates in five wells fall on one test sample. When placing the test object, the amount of culture fluid in the well should not exceed 0.02 cm. Five wells are used as control.
После помещения инфузорий наливают в контрольные лунки по 0,6 см культивационной воды, в опытные - по 0,6 см тестируемой пробы. Отмечают время начала биотестирования и подсчитывают под микроскопом количество особей в каждой лунке.After placing the ciliates, 0.6 cm of cultivation water is poured into the control wells, and 0.6 cm of the test sample into the experimental wells. The start time of the biotesting is noted and the number of individuals in each well is counted under a microscope.
Микроаквариум с заполненными лунками помещают в термостат и выдерживают в течение 24 часов при температуре (22-24)°С. По истечении этого времени производят подсчет о выживших и погибших особей под микроскопом. Выжившими считаются инфузории, которые свободно перемещаются в толще воды. Обездвиженных особей относят к погибшим.A micro aquarium with filled wells is placed in a thermostat and incubated for 24 hours at a temperature of (22-24) ° C. After this time, the survivors and deceased individuals are counted under a microscope. Survivors are considered ciliates that move freely in the water column. Immobilized individuals are considered dead.
Если гибель парамеции в контроле превышает 10%, результаты опыта не учитывают, и его повторяют снова.If the death of paramecia in the control exceeds 10%, the results of the experiment are not taken into account, and it is repeated again.
2. Биотестирование фракции с ДДТ.2. Biotesting fraction with DDT.
Биотестирование проводят в лунках полистироловой планшеты. В лунки дозатором с съемным наконечником впрыскивают культуральный раствор с инфузориями в количестве 8-10 клеток в 30-40 мкл. В контрольные лунки приливают по 500 мкл дистиллированной воды, а в остальные - разведения коллоидного опытного экстракта. Через 30 мин микроскопируют лунки, подсчитывая число сокращений выделительных вакуолей у 6-7 неподвижных клеток. С учетом стандарта количества сокращений 7-8 в минуту, определяют степень токсичности испытуемого экстракта, принимая за токсическую дозу 50% уменьшение скорости сокращений.Biotesting is carried out in the wells of polystyrene tablets. A culture solution with infusoria is injected into the wells with a removable tip dispenser in the amount of 8-10 cells in 30-40 μl. 500 μl of distilled water are poured into the control wells, and dilutions of the colloidal experimental extract are added to the rest. After 30 min, the wells are microscopic, counting the number of contractions of excretory vacuoles in 6-7 immobile cells. Given the standard number of contractions of 7-8 per minute, determine the degree of toxicity of the test extract, taking a toxic dose of 50% reduction in the speed of contractions.
С учетом изменения количества сокращений в примере 2,35-2,47 сокращения в минуту в варианте коллоидный раствор без разведения образец почвы содержит хроническую токсичность, т.е. содержит токсичность стойкого органического загрязнителя - ДДТ.Given the change in the number of contractions in example 2.35-2.47 contractions per minute in a colloidal solution without dilution, the soil sample contains chronic toxicity, i.e. contains toxicity of persistent organic pollutant - DDT.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2011128801/15A RU2482478C2 (en) | 2011-07-13 | 2011-07-13 | Method of determining soil toxicity by method of biotesting with use of holotrichs paramecium caudatum ehrenberg |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2011128801/15A RU2482478C2 (en) | 2011-07-13 | 2011-07-13 | Method of determining soil toxicity by method of biotesting with use of holotrichs paramecium caudatum ehrenberg |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2011128801A RU2011128801A (en) | 2013-01-20 |
| RU2482478C2 true RU2482478C2 (en) | 2013-05-20 |
Family
ID=48790104
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2011128801/15A RU2482478C2 (en) | 2011-07-13 | 2011-07-13 | Method of determining soil toxicity by method of biotesting with use of holotrichs paramecium caudatum ehrenberg |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2482478C2 (en) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2590554C1 (en) * | 2014-12-19 | 2016-07-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт механики Уральского отделения Российской академии наук | Method of analysing characteristics of the behaviour of contaminants in soil |
| RU2730610C1 (en) * | 2020-03-31 | 2020-08-24 | Автономная некоммерческая организация «Институт социально-экономических стратегий и технологий развития» | Method for detecting biological value of vegetable products grown in closed agrobiotechnological systems |
| RU2771429C1 (en) * | 2020-12-01 | 2022-05-04 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Красноярский государственный аграрный университет" | Method for determining the toxicity of soil and man-made materials applied in construction of roads by biotesting |
| RU2806596C1 (en) * | 2023-03-10 | 2023-11-01 | Общество с ограниченной ответственностью "АгроСтар-Трейд+" | Method for express evaluation of feed toxicity and full mixed diet for farm animals |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2110067C1 (en) * | 1996-08-15 | 1998-04-27 | Санкт-Петербургский государственный университет | Biological method for determining degree of total toxicity and principal toxicants in aqueous media (versions) |
| RU2151012C1 (en) * | 1997-06-24 | 2000-06-20 | Володина Татьяна Николаевна | Method for neutralization of soil pollutions by oil and oil products |
| RU2281507C2 (en) * | 2004-11-17 | 2006-08-10 | Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт | Method for evaluating toxicity of bacterial antigens |
-
2011
- 2011-07-13 RU RU2011128801/15A patent/RU2482478C2/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2110067C1 (en) * | 1996-08-15 | 1998-04-27 | Санкт-Петербургский государственный университет | Biological method for determining degree of total toxicity and principal toxicants in aqueous media (versions) |
| RU2151012C1 (en) * | 1997-06-24 | 2000-06-20 | Володина Татьяна Николаевна | Method for neutralization of soil pollutions by oil and oil products |
| RU2281507C2 (en) * | 2004-11-17 | 2006-08-10 | Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт | Method for evaluating toxicity of bacterial antigens |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| ТЕРЕХОВА В.А. Биотестирование почв: подходы проблемы. Почвоведение. 2011, No.2, с.190-198. * |
| ТЕРЕХОВА В.А. Биотестирование почв: подходы проблемы. Почвоведение. 2011, №2, с.190-198. * |
| ФР. 1.39.2006.02506. ПНД Ф Т 14.1:2:3.13-06 (ПНД Ф Т 16.1:2.3:3.10-06). Методика определения токсичности отходов, почв, осадковых сточных, поверхностных и грунтовых вод методом биотестирования с использованием равноресничных инфузорий PARAMECIUM CAUDATUM EHRENBERG. Факультет почвоведения МГУ, 2006, 30 с. * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2590554C1 (en) * | 2014-12-19 | 2016-07-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт механики Уральского отделения Российской академии наук | Method of analysing characteristics of the behaviour of contaminants in soil |
| RU2730610C1 (en) * | 2020-03-31 | 2020-08-24 | Автономная некоммерческая организация «Институт социально-экономических стратегий и технологий развития» | Method for detecting biological value of vegetable products grown in closed agrobiotechnological systems |
| RU2771429C1 (en) * | 2020-12-01 | 2022-05-04 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Красноярский государственный аграрный университет" | Method for determining the toxicity of soil and man-made materials applied in construction of roads by biotesting |
| RU2806596C1 (en) * | 2023-03-10 | 2023-11-01 | Общество с ограниченной ответственностью "АгроСтар-Трейд+" | Method for express evaluation of feed toxicity and full mixed diet for farm animals |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2011128801A (en) | 2013-01-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Bernardes et al. | Impact of pesticides on environmental and human health | |
| Alexander | Aging, bioavailability, and overestimation of risk from environmental pollutants | |
| Balint et al. | Biochemical and subcellular changes in carp exposed to the organophosphorus methidathion and the pyrethroid deltamethrin | |
| Friberg-Jensen et al. | Effects of the pyrethroid insecticide, cypermethrin, on a freshwater community studied under field conditions. I. Direct and indirect effects on abundance measures of organisms at different trophic levels | |
| Velmurugan et al. | The effects of monocrotophos to different tissues of freshwater fish Cirrhinus mrigala | |
| Amachree et al. | Comparison of intermittent and continuous exposures to cadmium in the blue mussel, Mytilus edulis: accumulation and sub-lethal physiological effects | |
| Mesa et al. | Concentration and environmental fate of ivermectin in floodplain wetlands: an ecosystem approach | |
| Riaz et al. | Monitoring and spatiotemporal variations of pyrethroid insecticides in surface water, sediment, and fish of the river Chenab Pakistan | |
| Akhtar et al. | Prallethrin induced serum biochemical changes in Wistar rats | |
| Becker et al. | Pesticide contamination of water alters the metabolism of juvenile silver catfish, Rhamdia quelen | |
| Lin et al. | Bioavailability of pyrene associated with different types of protein compounds: Direct evidence for its uptake by Daphnia magna | |
| Claessens et al. | Passive sampling reversed: Coupling passive field sampling with passive lab dosing to assess the ecotoxicity of mixtures present in the marine environment | |
| RU2482478C2 (en) | Method of determining soil toxicity by method of biotesting with use of holotrichs paramecium caudatum ehrenberg | |
| Roast et al. | Toxicity of the organophosphate pesticides chlorpyrifos and dimethoate to Neomysis integer (Crustacea: Mysidacea) | |
| de Solla et al. | Absorption of current use pesticides by snapping turtle (Chelydra serpentina) eggs in treated soil | |
| Duesterloh et al. | Photoenhanced toxicity of weathered Alaska North Slope crude oil to the calanoid copepods Calanus marshallae and Metridia okhotensis | |
| Michalec et al. | Changes in the swimming behavior of Pseudodiaptomus annandalei (Copepoda, Calanoida) adults exposed to the diatom toxin 2-trans, 4-trans decadienal | |
| Weis et al. | DDT as an accelerator of limb regeneration and molting in fiddler crabs | |
| Coelho et al. | Toxicity evaluation of leached of sugarcane vinasse: histopathology and immunostaining of cellular stress protein | |
| Gbadegesin et al. | Evaluation of hepatotoxicity and clastogenicity of carbofuran in male Wistar rats | |
| Villeneuve et al. | Environmental stresses and skeletal deformities in fish from the Willamette River, Oregon | |
| Rios-Fuster et al. | Assessment of the impact of aquaculture facilities on transplanted mussels (Mytilus galloprovincialis): Integrating plasticizers and physiological analyses as a biomonitoring strategy | |
| Bille et al. | First report of a fish kill episode caused by pyrethroids in Italian freshwater | |
| Păunescu et al. | Histopathological changes in the liver and kidney tissues of marsh frog (Pelophylax ridibundus) induced by the action of Talstar 10EC insecticide | |
| Croxton et al. | The use of flow cytometric applications to measure the effects of PAHs on growth, membrane integrity, and relative lipid content of the benthic diatom, Nitzschia brevirostris |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20130714 |