RU2482175C1 - Method of producing microorganism growth stimulator - Google Patents
Method of producing microorganism growth stimulator Download PDFInfo
- Publication number
- RU2482175C1 RU2482175C1 RU2011137822/10A RU2011137822A RU2482175C1 RU 2482175 C1 RU2482175 C1 RU 2482175C1 RU 2011137822/10 A RU2011137822/10 A RU 2011137822/10A RU 2011137822 A RU2011137822 A RU 2011137822A RU 2482175 C1 RU2482175 C1 RU 2482175C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- hours
- medium
- growth
- yeast
- fusarium sambucinum
- Prior art date
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Mushroom Cultivation (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
1. Область техники1. The technical field
Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к микробиологии, и может быть использовано при получении питательных сред биологически активных веществ.The invention relates to the field of biotechnology, in particular to microbiology, and can be used to obtain nutrient media of biologically active substances.
2. Уровень техники2. The level of technology
Известен способ выращивания дрожжей в условиях аэрации на минеральных питательных средах, содержащих источники углерода, азота, фосфора и микроэлементов с использованием в качестве стимулятора роста дрожжей одной или нескольких а-аминокарбоновых кислот, смешанных с отдельными аминокислотами, такими как аргинин, лейцин и лизин, а также витаминами группы В, особенно пиридоксином и пантотеновой кислотой (патент Франции №1538957, кл. С12С, 1969 г.).A known method of growing yeast under conditions of aeration on mineral nutrient media containing sources of carbon, nitrogen, phosphorus and trace elements using one or more a-aminocarboxylic acids mixed with individual amino acids as arginine, leucine and lysine as a stimulator of growth also B vitamins, especially pyridoxine and pantothenic acid (French patent No. 1538957, CL C12C, 1969).
Недостатком этого способа является высокая стоимость исходных продуктов.The disadvantage of this method is the high cost of the starting products.
Известен способ выращивания дрожжей с использованием в качестве стимулятора роста кротонбетаина и бутилбетаина (патент Японии №5417026, кл. С12С 11/08, 1979 г.).A known method of growing yeast using crotonbetaine and butylbetaine as a growth promoter (Japanese patent No. 5417026, class 12C 11/08, 1979).
Однако действие этих стимуляторов проверено только в периодических режимах выращивания дрожжей путем встряхивания колб при низких концентрациях биомассы. Другим недостатком известного способа является значительный расход кротонбетаина и бутилбетаина, который составляет 0,1 мг на 1 л питательной среды.However, the effect of these stimulants was tested only in periodic regimes of yeast growth by shaking flasks at low biomass concentrations. Another disadvantage of this method is the significant consumption of crotonbetaine and butyl betaine, which is 0.1 mg per 1 liter of culture medium.
Известен способ получения экстракта кормовых дрожжей, в котором кормовые дрожжи смешивают с водой, кипятят при постоянном перемешивании и фильтруют (RU 2084171, М. кл6: C12N 1/00, 1/14, 20.07.1997 г.).A known method of obtaining an extract of fodder yeast, in which fodder yeast is mixed with water, boiled with constant stirring and filtered (RU 2084171, M. cl 6 : C12N 1/00, 1/14, 07/20/1997).
Недостатком указанного способа является длительность процесса фильтрации, наличие взвешенных частиц и высокая пигментация экстракта.The disadvantage of this method is the duration of the filtration process, the presence of suspended particles and high pigmentation of the extract.
Наиболее близким аналогом предлагаемого способа по признакам изобретения и достигаемому эффекту, принятым в качестве прототипа, является способ получения стимуляторов роста микроорганизмов из кормовых дрожжей, в котором кормовые дрожжи смешивают с водой с последующим кипячением, добавляют к экстракту натрий фосфорнокислый двузамещенный, перемешивают до полного растворения соли, подщелачивают до рН 7,2-8,3, после чего добавляют хлористый кальций, подщелачивают до рН 6,7-7,1, кипятят в течение часа, фильтрат концентрируют и высушивают (RU №2227158, М. кл.7: C12N 1/00, 1/14, 22.07.2002 г.).The closest analogue of the proposed method according to the features of the invention and the achieved effect, adopted as a prototype, is a method for producing microorganism growth stimulators from fodder yeast, in which fodder yeast is mixed with water, followed by boiling, sodium phosphate disubstituted is added to the extract, mixed until the salt is completely dissolved , alkalized to pH 7.2-8.3, then added calcium chloride, alkalized to pH 6.7-7.1, boiled for one hour, the filtrate was concentrated and dried (RU No. 22271 58, M. Cl. 7 : C12N 1/00, 1/14, 07/22/2002).
Недостатком прототипа является ограниченная производительность и значительная длительность процесса.The disadvantage of the prototype is the limited performance and significant duration of the process.
3. Раскрытие изобретения3. Disclosure of invention
Задачей изобретения является интенсификация роста микроорганизмов, используемых в биотехнологических производствах пробиотиков, производстве ферментов, в производстве кормовых белковых продуктов и т.д.The objective of the invention is to intensify the growth of microorganisms used in biotechnological production of probiotics, the production of enzymes, in the production of protein feed products, etc.
Поставленная задача достигается тем, что в способе получения стимулятора роста микроорганизмов выращивают грибы рода Fusarium sambusinum штаммов MKF-2001-3 или BKMF-3051D на среде, содержащей источник углерода - 3-4%, азота - 0,2-0,3%, фосфора - 0,2-0,3% и микроэлементы - 0,07-0,08% в стерильных условиях при температуре 26-30°С с перемешиванием и аэрацией в течение 40-48 часов, суспензию гриба и/или культуральную жидкость подтитровывают соляной кислотой до рН=4,0-4,5, нагревают в течение 1,0-1,5 часов до 115°С, выдерживают в течение 2 часов, остужают в течение 1,0-1,5 часов до комнатной температуры, полученная таким образом суспензия и/или культуральная жидкость является стимулятором роста микроорганизмов.This object is achieved in that in a method for producing a growth stimulator of microorganisms, fungi of the genus Fusarium sambusinum of strains MKF-2001-3 or BKMF-3051D are grown on a medium containing a carbon source of 3-4%, nitrogen 0.2-0.3%, phosphorus - 0.2-0.3% and trace elements - 0.07-0.08% under sterile conditions at a temperature of 26-30 ° C with stirring and aeration for 40-48 hours, the fungal suspension and / or culture fluid is titrated hydrochloric acid to pH = 4.0-4.5, heated for 1.0-1.5 hours to 115 ° C, maintained for 2 hours, cooled for 1.0-1.5 hours to room temperature ture thus obtained suspension and / or culture fluid is a stimulant of the growth of microorganisms.
4. Осуществление изобретения4. The implementation of the invention
Заявленный способ получения стимулятора роста микроорганизмов осуществляют следующим образом: выращивают грибы рода Fusarium sambusinum штамов MKF-2001-3 или BKMF-3051D на среде, содержащей источник углерода 3-4%, азота - 0,2-0,3%, фосфора - 0,2-0,3% и микроэлементы - 0,07-0,08% в стерильных условиях при температуре 26-30°С с перемешиванием и аэрацией в течение 40-48 часов.The claimed method for producing a growth stimulator of microorganisms is as follows: mushrooms of the genus Fusarium sambusinum of strains MKF-2001-3 or BKMF-3051D are grown on a medium containing a carbon source of 3-4%, nitrogen - 0.2-0.3%, phosphorus - 0 , 2-0.3% and trace elements - 0.07-0.08% under sterile conditions at a temperature of 26-30 ° C with stirring and aeration for 40-48 hours.
При этом основные из указанных технологических операций производят при следующей детализации процессов и параметров.In this case, the main of the indicated technological operations are carried out at the following detailing of processes and parameters.
Суспензию гриба подтитровывают соляной кислотой до рН=4,0-4,5, нагревают в течение 1,0-1,5 часов до 115°С, выдерживают в течение 2 часов, остужают в течение 1,0-1,5 часов до комнатной температуры, вносят стимулятор в количестве 0,002-0,8% от объема питательной среды.The fungal suspension is titrated with hydrochloric acid to pH = 4.0-4.5, heated for 1.0-1.5 hours to 115 ° C, incubated for 2 hours, cooled for 1.0-1.5 hours to room temperature, make the stimulator in an amount of 0.002-0.8% of the volume of the nutrient medium.
Культуральную жидкость отделяют фильтрованием от биомассы, подтитровывают соляной кислотой до рН=4,0-4,5, нагревают в течение 1,0-1,5 часов до 115°С, выдерживают в течение 2-х часов, остужают в течение 1,0-1,5 часов до комнатной температуры, вносят стимулятор в количестве 0,1-8,0% от объёма питательной среды.The culture fluid is separated by filtration from biomass, triturated with hydrochloric acid to pH = 4.0-4.5, heated for 1.0-1.5 hours to 115 ° C, kept for 2 hours, cooled for 1, 0-1.5 hours to room temperature, make the stimulator in an amount of 0.1-8.0% of the volume of the nutrient medium.
Примеры реализации способа.Examples of the method.
Пример 1. Готовят питательную среду, для чего 37,5 г дерти и 87,5 г ржаных отрубей заливают 875 мл водопроводной воды. Гидромодуль: твердая и жидкая фракция: 1:7.Example 1. Prepare a nutrient medium, for which 37.5 g of turf and 87.5 g of rye bran pour 875 ml of tap water. Water module: solid and liquid fraction: 1: 7.
Питательную среду подвергали термообработке на кипящей водяной бане в течение 4-х часов при рН=6,7. После термообработки смесь охлаждали до 35°С, с помощью 10% серной кислоты доводили рН до 5,0 и добавляли соли: (NH4)2SO4 - 5 г/л и КН2РO4 - 1,5 г/л. В полученную среду вносили ферментный препарат - глюкавамарин.ГЗХ. Ферментолиз проводили в течение 5 часов, после чего полученный ферментолизат анализировали (на содержание сахаров - РВ), разливали по колбам; в количестве 200 мл в каждую колбу.The nutrient medium was subjected to heat treatment in a boiling water bath for 4 hours at pH = 6.7. After heat treatment, the mixture was cooled to 35 ° C, the pH was adjusted to 5.0 with 10% sulfuric acid, and salts were added: (NH 4 ) 2 SO 4 - 5 g / L and KH 2 PO 4 - 1.5 g / L. An enzyme preparation, glucavamarine. GZH, was added to the resulting medium. Fermentolysis was carried out for 5 hours, after which the obtained fermentolizate was analyzed (for sugar content - RV), poured into flasks; 200 ml in each flask.
Колбы с питательной средой стерилизовали в течение 40 мин при 0,5 атм. После стерилизации питательной среды колбы охлаждали до 30°С и вносили в питательную среду биостимулятор.Flasks with culture medium were sterilized for 40 min at 0.5 atm. After sterilization of the growth medium, the flasks were cooled to 30 ° C and a biostimulator was introduced into the growth medium.
Дрожжи Saccharomyces cerevisiae diastaticus ВКПМ-у-1218 выращивали в колбах на качалке в течение 24 часов при температуре 32°С и скорости перемешивания среды 240 об/мин. После выращивания биомассы дрожжей в колбах с биостимулятором концентрация сахаров (РВ) снизилась с 6 г/л до 0,4 г/л, в контрольных колбах она была в пределах 0,6-0,7 г/л. В опытных колбах количество биомассы дрожжей было 3,5 г АСВ, в контроле - 2,9 г/л, т.е. на 20,67% меньше. Содержание сырого протеина в целевом продукте составило 42,8%, тогда как в контроле - 41,4%.The yeast Saccharomyces cerevisiae diastaticus VKPM-u-1218 was grown in flasks on a shaker for 24 hours at a temperature of 32 ° C and a medium stirring speed of 240 rpm. After growing yeast biomass in flasks with a biostimulant, the sugar concentration (RV) decreased from 6 g / L to 0.4 g / L, in the control flasks it was in the range of 0.6-0.7 g / L. In the experimental flasks, the amount of yeast biomass was 3.5 g of ASB, in the control - 2.9 g / l, i.e. 20.67% less. The crude protein content in the target product was 42.8%, while in the control 41.4%.
Пример 2. Дрожжеподобный гриб Trichosporon cutaneum ВСБ-775 выращивали на той же питательной среде, что и в примере 1, в колбах на качалке в течение 36 часов, используя биостимулятор в количестве 0,1% объема. В итоге определяли количество выращенной биомассы, степень ассимиляции сахаров (РВ) и содержание сырого протеина в биомассе гриба.Example 2. The yeast-like fungus Trichosporon cutaneum VSB-775 was grown on the same nutrient medium as in example 1, in flasks on a rocking chair for 36 hours, using a biostimulator in an amount of 0.1% volume. As a result, the amount of biomass grown, the degree of assimilation of sugars (RV), and the content of crude protein in the fungal biomass were determined.
В опытных колбах количество накопленной биомассы было в пределах 4,0-4,2 г АСВ, а в контрольных - 3,7-3,8 (+9,33%). Содержание сырого протеина в опытных образцах биомассы было 43,2%, а в контрольных - 41,8% (+3,35%).In the experimental flasks, the amount of accumulated biomass was in the range of 4.0–4.2 g of ACB, and in the control ones, 3.7–3.8 (+ 9.33%). The crude protein content in the experimental biomass samples was 43.2%, and in the control 41.8% (+ 3.35%).
Пример 3. Проводили испытания биостимулятора при выращивании дрожжей-сахаромицетов на ферментолизате зерносырья.Example 3. Tested biostimulant when growing yeast-saccharomycetes on fermentolizate grain.
Выращивание дрожжей-сахаромицетов (S. cerevisiae diastaticus BKПМ-у-1218) проводили в аппарате V-30 л (полезный объем - 20 л) на ферментолизате зерносырья.The cultivation of saccharomycetes yeast (S. cerevisiae diastaticus BKPM-1218) was carried out in a V-30 L apparatus (usable volume 20 L) on a raw-material fermentolizate.
Ферментолизат и культуральную жидкость готовили по режиму, указанному в примере 1. В контроле выращивание дрожжей осуществляли без добавления стимулятора. Выращивание культуры дрожжей осуществляли при следующих параметрах:The fermentolizate and culture fluid were prepared according to the procedure described in Example 1. In the control, yeast was grown without the addition of a stimulant. The cultivation of the yeast culture was carried out with the following parameters:
t среды - 30-32°Сt medium - 30-32 ° C
рН среды - 4,5-5,0pH of the medium - 4.5-5.0
интенсивность перемешивания - 800 об/мин, аэрация - 5-8 л/л среды.mixing intensity - 800 rpm, aeration - 5-8 l / l of medium.
Длительность процесса выращивания определяли по достижению количества остаточных сахаров РВ = 0,4. В контроле этот период составил 16 часов, в опыте - 12 часов. Процесс выращивания дрожжей сократился примерно на 25%. АСВ в опыте было больше, чем в контроле, на 4,34%.The duration of the growing process was determined by reaching the amount of residual sugars PB = 0.4. In control, this period was 16 hours, in the experiment - 12 hours. The process of growing yeast was reduced by about 25%. DIA in the experiment was more than in the control, by 4.34%.
По окончании процесса ферментации дрожжевая суспензия поступала на плазмолиз (t - 80°С, время 1 час); плазмолизат высушивали на распылительной сушилке.At the end of the fermentation process, the yeast suspension was supplied to plasmolysis (t - 80 ° C, time 1 hour); the plasmolysate was dried on a spray dryer.
В результате испытаний были наработаны образцы кормового белкового продукта. В контроле содержание сырого протеина составило 41,2%, белка по Барнштейну - 30,8%. В опытной партии содержание сырого протеина составило 44,5%, белка по Барнштейну - 33,8%. Содержание протеина выросло на 8%, белка на 9,74%. Как видим, использование биостимулятора позволяет ускорить биоконверсию сахаров и повысить качество целевого продукта.As a result of the tests, samples of the feed protein product were developed. In the control, the crude protein content was 41.2%, protein according to Barnstein - 30.8%. In the experimental batch, the crude protein content was 44.5%, protein according to Barnstein - 33.8%. Protein content increased by 8%, protein by 9.74%. As you can see, the use of a biostimulant can accelerate the bioconversion of sugars and improve the quality of the target product.
Пример 4. Выращивание пекарских дрожжей Saccharomyces cerevisiae (штамм ВНИИ ПП) проводили в ферментере БИОР-01 объемом 100 л. Рабочий объем составлял 50 л.Example 4. The cultivation of baker's yeast Saccharomyces cerevisiae (strain VNII PP) was carried out in a fermenter BIOR-01 with a volume of 100 l. The working volume was 50 liters.
В аппарат заливали около 40 л водопроводной воды, вносили компоненты питательной среды по следующей прописи (г/л):About 40 l of tap water was poured into the apparatus, the nutrient medium components were added according to the following recipe (g / l):
рН до засева - 5,8.pH before inoculation - 5.8.
В контроле биостимулятор в среду не вносили. Культивирование вели при 30°С при непрерывном перемешивании и аэрации. Процесс вели до достижения стационарной фазы роста. Накопление биомассы составило в контроле 1150 г, в опыте -1400 г. Количество биомассы выросло на 21,74%.In the control, a biostimulant was not added to the medium. Cultivation was carried out at 30 ° C with continuous stirring and aeration. The process was conducted until a stationary growth phase was reached. The accumulation of biomass in the control amounted to 1150 g, in the experiment –1400 g. The amount of biomass increased by 21.74%.
Пример 5. Выращивание клеток Bacillu.licheniformis B-8130, продуцента пробиотических препаратов проводили в ферментере БИОР-01 объемом 100 л. Рабочий объем составлял 50 л.Example 5. The cultivation of cells of Bacillu.licheniformis B-8130, a producer of probiotic preparations was carried out in a fermenter BIOR-01 with a volume of 100 l. The working volume was 50 liters.
В аппарат заливали около 40 л водопроводной воды, вносили компоненты питательной среды по следующей прописи (г/л):About 40 l of tap water was poured into the apparatus, the nutrient medium components were added according to the following recipe (g / l):
рН до засева - 7,0-7,2.pH before sowing - 7.0-7.2.
В контроле биостимулятор в среду не вносили. Культивирование вели при 37°С при непрерывном перемешивании и аэрации. Процесс вели до повышения уровня рН среды до 8,6-8,8 и появления свободных спор.In the control, a biostimulant was not added to the medium. Cultivation was carried out at 37 ° C with continuous stirring and aeration. The process was conducted until the pH of the medium increased to 8.6-8.8 and the appearance of free spores.
В контрольном аппарате продолжительность выращивания - 48-72 ч, образование спор 10-20%. В опытном аппарате - продолжительность выращивания - 26-28 ч, образование спор в 95-100% клеток.In the control apparatus, the growing time is 48-72 hours, spore formation 10-20%. In the experimental apparatus, the growing time was 26-28 hours, spore formation in 95-100% of the cells.
Пример 6. Выращивание клеток Bacillu.subtilis ГА-13, компонента бакпрепарата биокомпоста проводили в ферментере БИОР-01 объемом 100 л. Рабочий объем составлял 50 л.Example 6. The cultivation of cells of Bacillu.subtilis GA-13, a component of the biocompost preparation, was carried out in a 100 liter LIOR-01 fermenter. The working volume was 50 liters.
В аппарат заливали около 40 л водопроводной воды, вносили компоненты питательной среды по прописи (г/л) примера 5, биостимулятор в объеме 2,5 л (5%).About 40 L of tap water was poured into the apparatus, nutrient medium components were added according to the recipe (g / l) of Example 5, a biostimulant in a volume of 2.5 L (5%).
В контроле биостимулятор в питательную среду не вносили. Культивирование вели при 37°С при непрерывном перемешивании и аэрации до повышения уровня рН среды до 8,6-8,8 и появления свободных спор.In the control, a biostimulant was not introduced into the nutrient medium. Cultivation was carried out at 37 ° C with continuous stirring and aeration until the pH of the medium was increased to 8.6-8.8 and free spores appeared.
В контрольном аппарате продолжительность выращивания - 48-52 ч, образование спор 20-30%. В опытном аппарате - продолжительность выращивания - 25-27 ч, образование спор в 95-100% клеток.In the control apparatus, the growing time is 48-52 hours, the formation of spores 20-30%. In the experimental apparatus, the growing time is 25-27 hours, spore formation in 95-100% of the cells.
Пример 7. Мицелиальный гриб Penicilliun verruculosum выращивали на питательной среде, содержащей источники угрерода, азота и минеральные соли, перед стерилизацией в среду добавляют 5-8% биостимулятор, затем культивировали в течение 120 ч на качалке при температуре 29°С и постоянном перемешивании, в процессе ферментации отбирали пробы и в фильтрате культуральной жидкости определяли активность карбогидраз (целлюлаз и ксиланаз). Продукция (активность) ферментов в присутствии биостимулятора повышалась на 20% для целлюлаз и 25% для ксиланаз.Example 7. Penicilliun verruculosum mycelium was grown on a nutrient medium containing carbon sources, nitrogen, and mineral salts. Before sterilization, 5-8% biostimulant was added to the medium, then it was cultivated for 120 hours on a shaker at a temperature of 29 ° C with constant stirring. during the fermentation process, samples were taken and the activity of carbohydrases (cellulases and xylanases) was determined in the filtrate of the culture fluid. The production (activity) of enzymes in the presence of a biostimulant increased by 20% for cellulases and 25% for xylanases.
Пример 8. Дрожжи S. cerevisiae diastaticus (ВКПМ-у-1218 выращивали при непрерывном режиме в промышленном аппарате V-900 м3 (Vpaб - 450 м3) на ферментолизате зерносырья.Example 8. The yeast S. cerevisiae diastaticus (VKPM-u-1218 was grown under continuous conditions in an industrial apparatus V-900 m 3 (Vpaб - 450 m 3 ) on a raw-material fermentolizate.
Количество подаваемого биостимулятора составляло 0,002% от объема протока в час.The amount of biostimulator supplied was 0.002% of the duct volume per hour.
Основной эффект заключался в сокращении времени выращивания с 8,2 часа до 6,6 часа или на 24,24%. Количество АСВ возросло на 4,88%. Качество целевого продукта - кормового продукта оценивалось по содержанию сырого протеина, +4,44%, и белка по Барнштейну - +6,04%. Количество производимого кормового продукта выросло с 80,7 до 113,7 тонн в сутки, т.е. на 40,9%. При этом расходный коэффициент по зерносырью снизился с 1,55 т/т до 1,37 т/т.The main effect was to reduce the growing time from 8.2 hours to 6.6 hours or 24.24%. The number of DIAs increased by 4.88%. The quality of the target product - feed product was evaluated by the content of crude protein, + 4.44%, and protein according to Barnstein - + 6.04%. The quantity of feed produced increased from 80.7 to 113.7 tons per day, i.e. by 40.9%. At the same time, the expenditure coefficient for grain raw materials decreased from 1.55 t / t to 1.37 t / t.
Необходимо отметить также, что физиологическое состояние дрожжевых клеток характеризовалось активным почкованием (50-60%) и гомогенной протоплазмой. В связи с глубокой утилизацией субстрата (углеводов) в последней секции наблюдалось значительное количество вакуолизированных клеток.It should also be noted that the physiological state of yeast cells was characterized by active budding (50-60%) and homogeneous protoplasm. Due to the deep utilization of the substrate (carbohydrates), a significant number of vacuolated cells were observed in the last section.
Пример 9. Провели выращивание лептоспир серотипов Помона, Иктерогеморрагия, Тарассови на стандартной сывороточной среде (контроль) и на сывороточной модифицированной среде, содержащей 5% биостимулятора (опыт) при температуре 28°С в течение 10 суток.Example 9. Spent the cultivation of leptospira serotypes Pomona, Ikterohemorrhagia, Tarassovi on standard serum medium (control) and on serum modified medium containing 5% biostimulant (experiment) at a temperature of 28 ° C for 10 days.
Опытную серию вакцины готовили из культур лептоспир, выращенных на модифицированной сывороточной среде и содержащих 450-500 млн м.к. см3, путем их смешивания.An experimental series of vaccines was prepared from leptospira cultures grown on modified serum medium and containing 450-500 million cubic meters. cm 3 , by mixing them.
Контрольную серию вакцины готовили из культур лептоспир, выращенных на сывороточной среде и содержащих 85-95 млн м.к. см3, путем их концентрирования до содержания 500 млн м.к. см3 и последующего смешивания.A control series of the vaccine was prepared from leptospira cultures grown on serum medium and containing 85-95 million cubic meters. cm 3 , by concentrating them to a content of 500 million m.k. cm 3 and subsequent mixing.
Культуры лептоспир инактивировали в присутствии 0,1% формальдегида в течение 5 суток при температуре 37°С. В период опытной работы было изготовлено по 3 серии опытной и контрольной вакцины против лептоспироза объемом 2 дм3 каждая.Leptospira cultures were inactivated in the presence of 0.1% formaldehyde for 5 days at a temperature of 37 ° C. During the experimental work, 3 series of the experimental and control leptospirosis vaccines of 2 dm 3 each were manufactured.
Серии вакцины против лептоспироза контролировали на стерильность, безвредность и активность по принятым стандартным методикам.A series of leptospirosis vaccines was monitored for sterility, safety and activity according to standard procedures.
Результат.Result.
Объединенную пробу вакцины 29 августа 2009 г. ввели в дозе 1,0 см3 внутримышечно пяти кроликам серой окраски массой 2,8-3,0 кг.The combined vaccine sample was introduced on August 29, 2009 at a dose of 1.0 cm 3 intramuscularly to five gray rabbits weighing 2.8-3.0 kg.
Через 25 суток у иммунизированных кроликов из ушной вены произвели забор крови в объеме 5,0 см3. Сыворотки, полученные из крови кроликов, исследовали в реакции микроагглютинации с культурами штаммов лептоспир, входящих в состав вакцин.After 25 days in immunized rabbits from the ear vein, blood sampling was performed in a volume of 5.0 cm 3 . Serum obtained from rabbit blood was examined in a microagglutination reaction with cultures of leptospira strains included in the vaccines.
Провели учет результатов в реакции микроагглютинации. В сыворотке крови кроликов, иммунизированных контрольной концентрированной культурой лептоспир, установили наличие специфических антител к лептоспирам Помона и Тарассови - 1:200 и Иктерогеморрагия 1:50.We took into account the results in the microagglutination reaction. In the blood serum of rabbits immunized with a control concentrated culture of leptospira, the presence of specific antibodies to leptospira Pomona and Tarassovi - 1: 200 and Ictohemorrhage 1:50 was established.
В сыворотке крови кроликов иммунизированных опытной культурой лептоспир, выращенных в присутствии биостимулятора, выявлены антитела к лептоспирам Помона и Тарассови 1:400 и Иктерогеморрагия 1:100.In the blood serum of rabbits immunized with an experimental culture of leptospira, grown in the presence of a biostimulant, antibodies to leptospira Pomona and Tarassovi 1: 400 and Ictohemorrhage 1: 100 were detected.
Выводы: включение биостимулятора в состав питательной среды для культивирования лептоспир существенно повышает накопление лептоспир и биосинтез специфических антигенов.Conclusions: the inclusion of a biostimulator in the composition of the culture medium for the cultivation of leptospira significantly increases the accumulation of leptospira and the biosynthesis of specific antigens.
Пример 10. Гриб Fusarium sambucinum штамма MKF-200-3 выращивали на среде, содержащей в качестве основного источника углерода сахарозу (3-4%, на мелассе, содержащей сахарозу). В мелассу вносят дополнительно сульфат аммония (NH4)2SO4 в количестве 5 г/л (0,5%) и фосфат калия (KH2PO4) в количестве 3,5 г/л (0,35%).Example 10. The fungus Fusarium sambucinum strain MKF-200-3 was grown on a medium containing sucrose as the main carbon source (3-4%, on molasses containing sucrose). Ammonium sulfate (NH 4 ) 2 SO 4 in an amount of 5 g / l (0.5%) and potassium phosphate (KH 2 PO 4 ) in an amount of 3.5 g / l (0.35%) are additionally added to molasses.
Что касается необходимых микроэлементов (Zn, Mg, Mn, Fe и др.), то они содержатся в мелассе и дополнительно не вносятся.As for the necessary trace elements (Zn, Mg, Mn, Fe, etc.), they are contained in molasses and are not additionally added.
Выращивание в аппарате V-30 л (полезный объем 20 л) проводили в течение 48-ми часов при следующим параметрам: t=30°C, pH=5,0.Growing in the apparatus V-30 l (usable volume 20 l) was carried out for 48 hours at the following parameters: t = 30 ° C, pH = 5.0.
Суспензию гриба подтитровывали соляной кислотой до рН=4,2, нагревали в течение 1,5 часов до 115°С, выдерживали в течение 1,3 часа до комнатной температуры, вносили стимулятор в количестве 0,05%, т.е. на полезный объем аппарата V-30 - 100 мл. Полученная суспензия гриба является заявленным биостимулятором.The suspension of the fungus was titrated with hydrochloric acid to pH = 4.2, heated for 1.5 hours to 115 ° C, kept for 1.3 hours at room temperature, the stimulant was introduced in an amount of 0.05%, i.e. on the useful volume of the V-30 apparatus - 100 ml. The resulting suspension of the fungus is a claimed biostimulant.
5. Технические результаты5. Technical results
Преимуществом заявленного предложения по сравнению с прототипом является существенная интенсификация роста микроорганизмов за счет стимулирования биологической активности их факторов роста. Использование стимуляторов роста в процессе получения биомассы как при периодическом, так и при непрерывном культивировании приводит к более полной утилизации субстрата, что позволяет повышать выход целевого продукта при сниженных расходных коэффициентах по источнику углерода и электроэнергии. Объемы кормовых и других целевых продуктов за счет использования предлагаемого стимулятора увеличивались до 40% и более при сокращении времени выращивания до 50%.The advantage of the claimed proposal compared with the prototype is a significant intensification of the growth of microorganisms by stimulating the biological activity of their growth factors. The use of growth stimulators in the process of biomass production both during batch and continuous cultivation leads to more complete utilization of the substrate, which allows to increase the yield of the target product with reduced consumption ratios for carbon source and electricity. The volume of feed and other target products due to the use of the proposed stimulant increased to 40% or more while reducing the growing time to 50%.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2011137822/10A RU2482175C1 (en) | 2011-09-14 | 2011-09-14 | Method of producing microorganism growth stimulator |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2011137822/10A RU2482175C1 (en) | 2011-09-14 | 2011-09-14 | Method of producing microorganism growth stimulator |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2011137822A RU2011137822A (en) | 2013-03-20 |
| RU2482175C1 true RU2482175C1 (en) | 2013-05-20 |
Family
ID=48789853
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2011137822/10A RU2482175C1 (en) | 2011-09-14 | 2011-09-14 | Method of producing microorganism growth stimulator |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2482175C1 (en) |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2177699C1 (en) * | 2000-06-27 | 2002-01-10 | ООО "Гелла-Фарма" | Biologically active additive to food (versions) and method of its production (versions) |
| RU2227158C2 (en) * | 2002-07-22 | 2004-04-20 | Научно-производственное объединение "Питательные среды" | Method for preparing growth stimulating agent from fodder yeast |
| RU2259209C2 (en) * | 2004-03-01 | 2005-08-27 | Зуев Евгений Трофимович | Strain of fungus fusarium sambucinum as producer of biologically active substances |
| RU2289954C2 (en) * | 2004-12-01 | 2006-12-27 | Брагинцева Лидия Михайловна | Biologically active food supplement (variants) |
| US20100093061A1 (en) * | 2006-12-20 | 2010-04-15 | Bodie Elizabeth A | Assays for Improved Fungal Strains |
-
2011
- 2011-09-14 RU RU2011137822/10A patent/RU2482175C1/en active IP Right Revival
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2177699C1 (en) * | 2000-06-27 | 2002-01-10 | ООО "Гелла-Фарма" | Biologically active additive to food (versions) and method of its production (versions) |
| RU2227158C2 (en) * | 2002-07-22 | 2004-04-20 | Научно-производственное объединение "Питательные среды" | Method for preparing growth stimulating agent from fodder yeast |
| RU2259209C2 (en) * | 2004-03-01 | 2005-08-27 | Зуев Евгений Трофимович | Strain of fungus fusarium sambucinum as producer of biologically active substances |
| RU2289954C2 (en) * | 2004-12-01 | 2006-12-27 | Брагинцева Лидия Михайловна | Biologically active food supplement (variants) |
| US20100093061A1 (en) * | 2006-12-20 | 2010-04-15 | Bodie Elizabeth A | Assays for Improved Fungal Strains |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2011137822A (en) | 2013-03-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Uma et al. | Production and properties of invertase from a Cladosporium cladosporioides in SmF using pomegranate peel waste as substrate | |
| JP2008538914A (en) | Wood decay basidiomycetes for the production of lignin degrading enzymes | |
| Lai et al. | Optimization of submerged culture conditions for the production of mycelial biomass and exopolysaccharides from Lignosus rhinocerus | |
| CN112760271A (en) | Process for producing clostridium butyricum through high-density fermentation under negative pressure condition and application | |
| Zhu et al. | pH-control modes in a 5-L stirred-tank bioreactor for cell biomass and exopolysaccharide production by Tremella fuciformis spore | |
| Zheng et al. | An increase of curdlan productivity by integration of carbon/nitrogen sources control and sequencing dual fed-batch fermentors operation | |
| CN102220396A (en) | Simple fermentation method for acarbose | |
| RU2482175C1 (en) | Method of producing microorganism growth stimulator | |
| US20170211051A1 (en) | Method for producing an enzymatic cocktail from fungal must | |
| US6348335B1 (en) | Low-molecular active weight ingredient extract from yeasts and method for producing it | |
| Aleksieva et al. | High-yield production of alpha-galactosidase excreted from Penicillium chrysogenum and Aspergillus niger | |
| CN111378583B (en) | Trichoderma reesei and application thereof | |
| FR3113067B3 (en) | Process for the preparation of beta-galactosidase and its use | |
| CN106754829A (en) | A kind of method of utilization bacillus HS17 fermenting and producing chitosan enzymes and its application | |
| CN101880634A (en) | Method for producing feed yeast by using corn steep liquor | |
| KR20140042566A (en) | Method for producing succinic acid using spent microalgae as a nitrogen source | |
| RU2375440C2 (en) | Method for producing yeasts autolysate | |
| RU2370527C1 (en) | Metschnikowia pulcherrimayeast strain producent of forage protein | |
| CN104789489A (en) | Arginine deiminase high-yielding Bacillus cereus and application thereof | |
| RU2090614C1 (en) | Method of preparing protein-vitamin product from the starch-containing raw | |
| CN109182407A (en) | A kind of tryptophan preparation method and its fermentation medium and tryptophan that use fermentation special nutritional member | |
| Makendran | Enzymatic conversion of RNA from yeast extract to guanosine monophosphate (a flavoring agent) | |
| RU2673125C1 (en) | Method for producing microbe plant supplement for animals | |
| CN109312298B (en) | Thiamine miehei bacillus strain and application thereof | |
| CN105331649A (en) | Method for continuous production of gamma-aminobutyric acid |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20180915 |
|
| NF4A | Reinstatement of patent |
Effective date: 20210709 |