RU2477472C2 - Способ определения эффективности биодеградации углеводородов нефти в нативных и загрязненных почвах - Google Patents
Способ определения эффективности биодеградации углеводородов нефти в нативных и загрязненных почвах Download PDFInfo
- Publication number
- RU2477472C2 RU2477472C2 RU2010152769/15A RU2010152769A RU2477472C2 RU 2477472 C2 RU2477472 C2 RU 2477472C2 RU 2010152769/15 A RU2010152769/15 A RU 2010152769/15A RU 2010152769 A RU2010152769 A RU 2010152769A RU 2477472 C2 RU2477472 C2 RU 2477472C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- soil
- oil
- carbon dioxide
- native
- microbial
- Prior art date
Links
Landscapes
- Processing Of Solid Wastes (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии защиты окружающей среды в нефтедобывающей промышленности и сельском хозяйстве и может быть использовано для определения углеводород-деградирующего потенциала почвенной микробиоты. Способ заключаеся в презентативном отборе образцов нативной или загрязненной поллютантами почвы, причем для оценки углеводород-окисляющей активности почвенной микробиоты: 1) образец тестируемой почвы помещают в закрытую емкость, в течение определенного времени фиксируют количество метаболической углекислоты до и после внесения углеводородов нефти, 2) измеряют характеристики изотопного состава углерода метаболической углекислоты до и после внесения тестового субстрата, 3) проводят материально-изотопный баланс для определения количества углерода углекислоты, включенного за счет минерализации почвенного органического вещества и углеводородов нефти, 4) используя скорость микробной деградации нефти, проводят длительный прогноз микробного потребления нефти почвенной микробиоты на период положительных годовых температур анализируемого региона. Достигается повышение информативности и ускорение определения. 1 пр., 3 табл.
Description
Способ основан на использовании в качестве количественных параметров вариаций распространснностей стабильных изотопов углерода (12С и 13С) нефтепродуктов, почвенного органического вещества и метаболической углекислоты, образующейся при их микробном окислении. Способ включает: а) отбор образцов почв из мест загрязненных углеводородами нефти и/или мест, для которых существует потенциальная опасность углеводородного загрязнения, б) измерения углеводородокисляющей активности почвенной микробиоты, основанные на количественном и изотопном анализе метаболической углекислоты (СО2) до и после внесения в почву тестовых субстратов, в) определение долей углерода, включенного в СО2 за счет минерализации почвенного органического вещества (ПОВ) и тестовых субстратов на основе материального изотопного баланса, г) сравнение скоростей минерализации ПОВ до и после внесения тестового субстрата в почву и определение микробной прайминг-продукции СО2 (отрицательной или положительной прайминг-эффект), обусловленной микробным метаболизмом тест-субстрата, д) определение степени антропогенных изменений в почве за счет замещения нативного ПОВ на продукты экзогенного субстрата в случае выявления положительной прайминг-продукции субстрата.
Область техники
Изобретение относится к биотехнологии защиты окружающей среды в нефтедобывающей промышленности и сельском хозяйстве и может быть использовано для определения углеводород-деградирующего потенциала почвенной микробиоты. Загрязнение почв нефтью и нефтепродуктами, которое происходит в процессе нефтедобычи, в результате разрывов нефтепроводов, накопления отходов нефтеперерабатывающих заводов, эксплуатации автозаправочных станций и т.д. является глобальной проблемой при оценке состояния окружающей среды. По имеющимся данным около 5-10 млн. т углеводородов нефти ежегодно загрязняют почвенные и водные экосистемы. Токсическое действие нефтепродуктов на окружающую среду проявляется по нескольким аспектам, в частности, это: а) повышение гидрофобности почв и затруднение водного снабжения растительного покрова, б) проникновение низкомолекулярных антропогенных углеводородов в растительные ткани, нарушающие их биохимический состав и питательную ценность в трофических цепях, в) ингибирующее или активирующее влияние антропогенных поллютантов на микробные процессы, происходящие в почвах и сопровождающиеся изменениями многовековых процессов круговорота углерода в окружающей среде. Последний фактор связан как с вариациями состава микробных популяций в почве, так и с возможным влиянием на процессы формирования и сохранения структуры почвенного органического вещества (ПОВ) и продукции метаболической углекислоты.
Уровень техники
В настоящее время существует большое количество способов для определения микробного потребления нефтепродуктов, в которых использовали показатель остаточного содержания нефтепродуктов в «отбеливающей» земле по отношению к исходному значению. По установившейся практике оценки эффективности биодеградации углеводородов нефти этот показатель определяют весовым (гравиметрическим) методом и/или спектрофотометрической и хромато-масс-спектрометрической детекцией углеводородов в их экстрактах специфическими растворителями.
Согласно способу, представленному в заявке 2005130840/13, 04.10.2005 «Способ рекультивации отбеливающей земли, загрязненной нефтепродуктами», определение остаточного содержания нефтепродуктов проводили спектрофотометрическим и весовым методами. Пробу весом 10 г помещали в патрон из фильтровальной бумаги и переносили в аппарат Сокслета. Экстракцию проводили 120-150 мл гексана в течение 2-3 часов при температуре кипения гексана (69°С). Концентрацию углеводородов в пробе определяли по оптической плотности экстракта на спектрофотометре СФ-46 при длине волны, на которой данная смесь углеводородов имела максимальный пик поглощения. Проэкстрагированные пробы вместе с патронами высушивали в жарочном шкафу при температуре 100-120°С и снова взвешивали на электронных весах. По разнице в весе проб до и после экстракции определяли содержание остаточных нефтепродуктов в тестируемых почвах.
Согласно способу, представленному в работе (Zucchi et al. 2003, J. Appl. Microbiol. Vol.94. P.248-257), для определения общего содержания экзогенных углеводородов в почве применяли стандартный метод, используемый в США D 3921- 96 ASTM (American Standard and Test Materials), основу которого составляют данные инфракрасной спектроскопии в экстрагируемых углеводородах из почвы с использованием 1,1,2-trichloro-1,2,2-trifluoromethane и Florisil™ (Aldrich). С некоторой модификацией аналогичный метод рекомендован в Германии (DIN 38-409-1118 (1981) Deutsche Einheitsverfahren zur Wasser-, Abwasser- and Schlammuntersuchung Summarische Wirkungs und Stofikenngrossen (Gruooe H). Bestimmung von Kohlenwasserstoffen (1118). Deutsche Institut f. Normung eV, Berlin, Germany).
Известные способы для количественной оценки углеводородных загрязнителей в почвах имеют ряд существенных недостатков и ограничений. Прежде всего, это проблема, связанная с отбором и составлением представительной средней пробы, которая служила бы интегральным показателем для анализируемых почв. Вторая проблема, это степень полноты экстракции углеводородов нефти из почвы, поскольку существует определенное количество сорбированных, неэкстрагируемых углеводородов нефти. Третья проблема, это неконтролируемая возможность дополнительной экстракции нативных углеводородов, присутствующих в почве. Кроме того, при использовании весовых (гравиметрических) методов анализа известна еще одна проблема, которая связана с активацией микробного разрушения нативного почвенного вещества, обусловленного микробным метаболизмом экзогенного субстрата (углеводорода). В результате этого получаемый результат анализа содержит значительные ошибки, в особенности, при оценке эффективности биотехнологических схем деградации загрязнений, поскольку отражает не только убыль углеводородов нефти, но и возможную дополнительную минерализацию нативных почвенных веществ.
В дополнение к вышесказанному следует отметить, что все существующие в настоящее время аналитические методики позволяют получать интегральные данные за длительный период наблюдения (несколько месяцев или лет) и не дают возможности своевременно корректировать биотехнологическую схему проводимых работ. В свете этого крайне важной и технологически значимой характеристикой биоремедиации загрязненной почвенной или водной среды является определение не только содержания поллютантов, но обнаружение и количественная оценка нативной микробной активности в течение сравнительно короткого периода (дни или недели), т.е. определение скорости процесса. Этот показатель имеет большое значение как при составлении технологии биоремедиации, так и при оценке ее экономической эффективности. В ряде случаев при обнаружении активных микробных процессов, которые сопровождают снижение поллютантов, можно ограничиться лишь мониторингом состояния загрязненного участка и представить прогнозы о его очистке. Если нативная микробиота недостаточно интенсивно деградирует загрязнители, то имеется возможность ее активировать путем внесения специальных минеральных и/или органических добавок. В случае крайне низких скоростей биодеградации поллютантов или полного отсутствия микробной активности в анализируемой почвенной системе необходимо осуществить биоагментацию, т.е. внесение специфических микроорганизмов, которые будут способными эффективно деградировать поллютант. Способов, позволяющих в течение короткого периода наблюдения определять скорости микробной деградации углеводородов нефти в почвах, до настоящего времени не существует.
Сущность изобретения
Задачей заявляемого изобретения является создание способа определения скорости деградации углеводородного поллютанта нативной почвенной микробиотой и/или интродуцированными в почву специфическими микроорганизмами, которые способны деградировать соответствующий поллютант, оценки степени минерализации почвенного органического вещества и уровня возможного его замещения поллютантом и/или продуктами его трансформации.
Задача решается следующим образом: 1) отбирают представительные образцы тестируемой почвы, определяют содержание органического вещества в почве и количество углеводородокисляющих микроорганизмов; 2) вносят образцы почв в герметично закрывающиеся емкости, где почва занимает не более 15% от общего объема емкости; 3) проводят определение базовых характеристик почв: анализ количества метаболической углекислоты, заменяя газовую фазу в емкости с периодичностью несколько часов, определяют исходные изотопные показатели углекислоты и углерода почвенного органического вещества; 4) после определения базовых характеристик тестируемых образцов почв вносят специфический субстрат (углеводород), изотопный состав углерода которого отличается от почвенного органического вещества (количество углерода вносимого субстрата не должно превышать 20% от содержания органического вещества в почве); 5) контроль активности микробиоты в почве определяют по скорости продукции метаболической углекислоты, по изотопным характеристикам ее углерода и по количеству потребленного кислорода; 6) по материально-изотопному балансу определяют количество углекислоты, образовавшееся в результате микробной минерализации почвенного органического вещества и внесенного субстрата (углеводорода), соответственно; 7) по количеству углекислоты, образовавшейся в результате минерализации ПОВ, судят о степени микробной деградации ПОВ, а по количеству углекислоты, образовавшейся в результате микробной минерализации углеводородов нефти, судят о количестве нефти и/или продуктов ее микробной трансформации, оставшихся в почве; 8) сравнением количеств минерализованного ПОВ и части оставшихся углеводородов нефти судят о степени замены нативного ПОВ углеводородами поллютанта.
Предлагаемый способ оценки микробной способности деградировать поллютанты в почвах позволяет: а) определять скорость биоминерализации тестируемых поллютантов, б) дать количественный прогноз очистки почв с использованием нативной микробиоты, а при необходимости проводить дополнительную ее активацию, в) принимать решения о целесообразности внесения специализированных микроорганизмов, которые способны эффективно использовать в качестве субстрата соответствующий поллютант, г) выяснять степень разрушения почвенного органического вещества микроорганизмами, активируемыми внесенными поллютантами (прайминг-эффект), д) определять степень замены нативного почвенного органического вещества, минерализованного микроорганизмами, за счет поллютанта и/или его продуктов трансформации.
Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения
Реализация способа по оценке углеводород-минерализущего потенциала микроорганизмов в сельскохозяйственной почве осуществляется следующим образом.
Этап 1 (контроль). Образцы сельскохозяйственной почвы помещают в стеклянные сосуды, которые герметично закрывают крышками и предварительно выдерживают в течение 3-х суток при температуре 22°С. Для фиксации метаболической углекислоты, образующейся при микробной минерализации почвенного органического вещества (ПОВ), над поверхностью почв располагают стеклянные чашки, содержащие 1-3 мл водного 1 моль NaOH раствора. Количество СО2, зафиксированное NaOH, осаждают в виде ВаСО3 после добавления раствора BaCl2. Общую продукцию СО2 в ходе экспериментов в каждом из сосудов определяют по количеству раствора 0.1 М HCl, расходуемого на титрование остаточной щелочи в чашках. Карбонаты бария промывают водой, осаждают, высушивают и взвешивают полученные осадки. Затем их используют для количественной оценки продукции метаболической СО2 и изотопного анализа углерода. Определяют изотопные характеристики углерода ПОВ, для чего навеску в 10 мг ПОВ и 1 г окисленных медных стружек вносят в стеклянные ампулы (стекло марки «Пирекс») диаметром 6 мм и длиной 150 мм, запаянные с одного конца, вакуумируют до 10-2 мм рт. столба и запаивают с другого конца. Ампулы выдерживают при температуре 560°С в течение 24 ч, а затем образовавшуюся в них углекислоту используют для масс-спектрометрического изотопного анализа углерода. Для количественного анализа потребления кислорода отбирают аликвоты газовоздушной фазы в тестируемых емкостях в количестве 10 мл и определяют относительные содержания основных газовоздушных компонентов (азот, кислород, аргон и углекислота).
Этап 2. Готовят модельную почву, загрязненную углеводородами нефти, в герметично закрывающихся емкостях. Для этого аликвоту тестируемой почвы в количестве 10 г высушивают до постоянного веса, смешивают с потенциальным загрязнителем - сырой нефтью - и затем вносят в герметично закрывающуюся емкость и смешивают с увлажненной частью почвы. Количество вносимой нефти определяют из расчета возможного уровня загрязнения почвы. Например, внесение в почву нефти в количество 3,2% или 27,43 мг С нефти на г сухой почвы оценивается величиной разлива нефти около 385 кг нефти на га (при условии, что поверхностный слой загрязненной почвы составляет не более 10 см).
Этап 3. Проводят определение микробной минерализации углеводородов нефти, внесенных в почвы в опытах по сравнению с контролем (почва до внесения нефти). Минерализующую активность микроорганизмов определяют в опытах с нативными почвенными микроорганизмами (опыт 1) и с дополнительно внесенными лабораторными культурами (опыт 2).
Образцы почвы, загрязненные сырой нефтью (опыты), и нативные почвы (контроль без нефти), которые находятся в герметично закрытых стеклянных сосудах, выдерживают при температуре 22°С. Периодически один раз после экспозиции от 1 до 3 суток определяют продукцию метаболической углекислоты, образующейся при микробной минерализации почвенного органического вещества (ПОВ). Для этого над поверхностью почв располагают стеклянные чашки, содержащие от 1 до 3 мл водного 1 моль NaOH раствора. Количество СО2, зафиксированное NaOH, осаждают в виде ВаСО3 после добавления раствора BaCl2. Общую продукцию CO2 в ходе экспериментов в каждом из сосудов определяют по количеству раствора 0.1 М HCl, расходуемого на титрование остаточной щелочи в чашках. Карбонаты бария промывают водой, осаждают, высушивают и взвешивают полученные осадки. Затем их используют для количественной оценки продукции метаболической CO2 и изотопного анализа углерода.
Этап 4. Определяют отношения распространенностей изотопов углерода 13С/12С в ПОВ, сырой нефти и метаболической СО2 (в виде ВаСО3) с использованием изотопного масс-спектрометра. Для изотопного анализа метаболической СО2 используют около 3-4 мг полученного ВаСО3 [М.в.=197,34], который затем разлагают до CO2 с помощью ортофосфорной кислоты в 10 мл контейнере в присутствии воздуха. Для анализа изотопного состава углерода органического вещества образцы ПОВ и сырой нефти сжигают до СО2 в ампулах при температуре 560°С в присутствии окиси меди.
Отношения интенсивностей пиков в масс-спектре CO2 с m/z 45 (13C16O2) и 44 (12С16O2) используют для количественной характеристики содержания изотопов 13С
и 12С в анализируемых образцах. Согласно выражению (1), количество 13С изотопа определяют в относительных единицах δ13С (‰):
где Rsa=(13C)/(12C) представляет отношения распространенностей изотопов 13С/12С в образце, а Rst=(13C)/(12C) - отношения этих изотопов в международном стандарте PDB (Pee Dee Belemnite). Каждый образец CO2 анализируют в трех повторах, стандартная ошибка может достигать около ±0.1‰.
Средневзвешенный изотопный состав углерода метаболической CO2 (δ13Сср), которую получают на отдельных временных i-интервалах, определяют, используя выражение (2):
где qi и δ13Ci - скорость продукции СО2 и характеристика ее изотопного состава углерода на i-интервалах, соответственно.
Используя изотопные характеристики углерода суммарной CO2, образующейся при микробной минерализации ПОВ и нефти (δ 13Ccyv) (опыты), CO2 - при минерализации только ПОВ δ(13Спов) (контроль) и полагая, что 13CO2, продуцируемая при минерализации нефти, наследует ее изотопный состав (δ 13Снефть), то с помощью выражения (3) вычисляют долю CO2 (F), которая образовалась в при минерализации ПОВ и сырой нефти, соответственно.
Прайминг-эффект (ПЭ), т.е. активация дополнительной минерализации ПОВ за счет внесенного поллютанта, вычисляют путем сравнения количества СО2 в смеси при микробной минерализации ПОВ и нефтепродуктов (опыты) и количества СО2 в контроле, образовавшегося за соответствующие периоды наблюдения (выражение 4):
где QCYM - суммарное количество СО2 при минерализации ПОВ и нефти (опыты), a QПОВ - количество СО2 при минерализации только ПОВ (контроль).
Пример. Образцы пахотной почвы, отобранные на поле после выращивания кукурузы (С4-растение), внесят по 100 г почвы по сухому весу в каждую из 6-ти стеклянных 700 мл емкостей: почва в 2-х емкостях служила контролем (контроль 1 - нативная микробиота, контроль 2 - нативная микробиота + интродуцированные бактерии), почва в остальных 4-х емкостях (опыты) была загрязнена нефтью: опыт 1 - нативная почвенная микробиота, опыт 2 - нативная почвенная микробиота + интродуцированные бактерии. Исходная влажность почвы составляла 40% потенциальной влагоемкости. До внесения нефти в почву в течение 10 суток с периодичностью в 2-е суток определяли скорость продукции СО2 и ее изотопные характеристики углерода (исходные количественные характеристики). В качестве интродуцируемой лабораторной бактерии использовали Pseudomonas aureofaciens BS1393(pBS216), (коллекция лаборатории биологии плазмид ИБФМ РАН), которая способна расти на углеводородах. Кроме того, бактерии Р. aureofaciens BS1393(pBS216), содержащие плазмиду pBS216 с Naph опероном, обеспечивают биодеградацию нафталина и салицилата. Внесенные бактерии рассматриваются как потенциальные потребители ароматических углеводородов нефти. Выбор штамма Р. aureofaciens BS1393(pBS216) обусловлен тем, что благодаря синтезу антибиотиков феназинового ряда колонии штамма окрашиваются в ярко-оранжевый цвет. Это позволяет использовать данный признак в качестве маркерного показателя при скрининге внесенных микроорганизмов в почву в присутствии аборигенной микрофлоры. Бактерии Р. aureofaciens BS1393(pBS216) предварительно выращивают до стационарной фазы (18 часов) и затем вносят в почвы. Количество внесенных бактерий составляет около 10 кл/г почвы. Забор проб почвы для анализа количества клеток в каждом из сосудов (контейнеров) проводят путем отбора образцов почвы в трех точках, затем пробы объединяют. Навеску (1 г почвы) суспендируют в 10 мл физиологического раствора на "Vortex", оставляют на 30 мин для осаждения почвенных частиц. Отбирают 1 мл надосадочной жидкости и проводят соответствующие разведения (10×-10000×). Суспензию клеток в двух разведениях высевают на чашки Петри с LB средой. Проводят подсчет колоний и рассчитывают средние их значения в контроле и опытах. Анализ микробной минерализации ПОВ и внесенной в почву сырой нефти проводили в 4-х вариантах (2 контроля и 2 опыта). Через сутки во всех вариантах опытов наблюдают некоторое понижение КОЕ (ориентировочно это может достигать до 104/г почвы).
В таблице 1 приведены скорости продукции углекислоты, которая выделялась из образцов тестируемой почвы в результате минерализующей активности нативной почвенной микробиоты и специализированной углеводородокисляющей культуры, которые в контрольных опытах использовали в качестве субстрата только почвенное органическое вещество (контроль 1 и 2) и в случае загрязнения почвы углеводородами нефти (опыт 1 и 2).
| Таблица 1. | ||
| Средние скорости продукции углекислоты (мкг C-CO2 /г СП в ч) и общая продукция С-СО2 за время 47-суточного эксперимента (мг С-СO2 на 100 г СП) | ||
| Опыты | Скорость продукции СО2, мкг С-CO2/г СП ч | *Общая продукция CO2, мг C-CO2 |
| Контроль 1 | 0,228 (0,013)** | 25,72 (0,6) |
| Контроль 2 | 0,213 (0,0126) | 24,03 (0,59) |
| Опыт 1 | 1,480 (0,122) | 166,94 (5,7) |
| Опыт 2 | 1,546 (0,100) | 174,4 (4,7) |
| * Продукция С-CO2 из расчета на 100 г сухой почвы (СП) в течение 47-суточной экспозиции | ||
| ** В скобках приведены стандартные ошибки трех параллельных определений. | ||
Так как в опытах метаболическая углекислота могла образоваться в результате использования микроорганизмами в качестве субстрата ПОВ и нефть, то, использовав различие в изотопном составе углерода ПОВ и нефти, с помощью материально- изотопного баланса были рассчитаны количества углекислоты за счет потребления ПОВ и нефти, соответственно (табл.2).
| Таблица 2. | ||||
| Средневзвешенный изотопный состав углерода и доля СО2, которая образовалась за счет минерализации ПОВ, и прайминг-эффект (ПЭ) в опытах 1 и 2. | ||||
| Опыты | *δ13Ccp,‰ | **F, % | [CO2] (ПОВ), мг С-CO2 | ПЭ, % |
| Контроль 1 | -23,70 (0,1) | 100 | 25,72 (0,6) | 0 |
| Контроль 2 | -23,77 (0,1) | 100 | 24,03 0,59) | 0 |
| Опыт 1 | -26,59 (0,2) | 38,5(1,7) | 64,3 (3) | 150 (13) |
| Опыт 2 | -26,63 (0,2) | 38,2 (1,6) | 66,6 (3) | 177 (15) |
| * δ13Ccp - средневзвешенный изотопный состав углерода метаболической СO2. | ||||
| ** F - доля метаболической CO2, образующейся при микробной минерализации ПОВ | ||||
Как следует из табл.2, около 40% углекислоты в опытах образуется в результате микробного окисления ПОВ и только 60% за счет использования углерода нефтепродуктов. При более чем в 1.5 раза отмечено увеличение минерализации ПОВ в загрязненной почве по сравнению с нативной.
| Таблица 3. | |||||
| Балансовые расчеты минерализации ПОВ и сырой нефти почвенной микробиотой в течение 47-суточной экспозиции из расчета на 1 кг сухой почвы | |||||
| Опыт | Исходное Сорг, г/кгСП | Количество С-СО2, г/кг СП | Потребленная нефть, г/кг СП | ||
| ПОВ | нефть | ПОВ | нефть | нефть | |
| Контроль 1 | 49.00 | 0 | 0.2572 (0,006) | 0 | 0 |
| Контроль 2 | 49.00 | 0 | 0.2403 (0,006) | 0 | 0 |
| Опыт 1 | 49.00 | 27.43 (0.5) | 0.643 (0.003) | 1.03 (0.09) | 2.3 (0.3) |
| Опыт 2 | 49.00 | 27.43 (0.5) | 0.666 (0.003) | 1.08 (0.08) | 2.5 (0.3) |
| В скобках приведены отклонения 3-х параллельных определений | |||||
Принимая во внимание, что выход СО2 при микробном росте на углеводородах нефти составляет около 40-50%, то согласно табл.3 общее потребление нефти в опытах за 47 суток составит 2.3-2.5 г С нефти/кг почвы.
Оценочный прогноз микробной деградации нефти.
Полагая, что средняя скорость потребления нефти почвенной микробиотой сохранится в течение положительных температур в течение 6 месяцев года, находим, что количество потребленной нефти составит около 9 (0.5) г С нефти на кг СП или 32% от всего количества нефти, поступившей в почву.
Claims (1)
- Способ определения эффективности биодеградации углеводородов нефти в почвах, заключающийся в презентативном отборе образцов нативной или загрязненной поллютантами почвы, отличающийся тем, что для оценки углеводородокисляющей активности почвенной микробиоты: 1) образец тестируемой почвы помещают в закрытую емкость, в течение определенного времени фиксируют количество метаболической углекислоты до и после внесения углеводородов нефти, 2) измеряют характеристики изотопного состава углерода метаболической углекислоты до и после внесения тестового субстрата, 3) проводят материально-изотопный баланс для определения количества углерода углекислоты, включенного за счет минерализации почвенного органического вещества и углеводородов нефти, 4) используя скорость микробной деградации нефти, проводят длительный прогноз микробного потребления нефти почвенной микробиоты на период положительных годовых температур анализируемого региона.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2010152769/15A RU2477472C2 (ru) | 2010-12-24 | 2010-12-24 | Способ определения эффективности биодеградации углеводородов нефти в нативных и загрязненных почвах |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2010152769/15A RU2477472C2 (ru) | 2010-12-24 | 2010-12-24 | Способ определения эффективности биодеградации углеводородов нефти в нативных и загрязненных почвах |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2010152769A RU2010152769A (ru) | 2012-06-27 |
| RU2477472C2 true RU2477472C2 (ru) | 2013-03-10 |
Family
ID=46681642
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2010152769/15A RU2477472C2 (ru) | 2010-12-24 | 2010-12-24 | Способ определения эффективности биодеградации углеводородов нефти в нативных и загрязненных почвах |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2477472C2 (ru) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104298868A (zh) * | 2014-09-30 | 2015-01-21 | 北京农业信息技术研究中心 | 一种冷链物流的冷却肉货架期预测方法及系统 |
| RU2590554C1 (ru) * | 2014-12-19 | 2016-07-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт механики Уральского отделения Российской академии наук | Способ исследования особенностей поведения загрязняющих веществ в почвах |
| RU2599131C1 (ru) * | 2015-04-08 | 2016-10-10 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский институт агрохимии им. Д.Н. Прянишникова" (ФГБНУ "ВНИИ агрохимии") | Способ изготовления стандартных образцов массовой доли нефтепродуктов в кварцевом песке |
| RU2641825C2 (ru) * | 2016-04-05 | 2018-01-22 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт механики Уральского отделения Российской академии наук | Способ испытания загрязненных почв и грунтов |
| CN114814184A (zh) * | 2022-05-10 | 2022-07-29 | 中国科学院城市环境研究所 | 一种基于碳13同位素法测定可降解塑料降解率的方法 |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113138172B (zh) * | 2020-01-20 | 2022-06-07 | 天津理工大学 | 盐碱土壤修复率的测试方法 |
| CN113533683B (zh) * | 2021-06-02 | 2024-06-21 | 广东新泓环境科技有限公司 | 一种表层土壤石油烃污染预警方法和系统 |
Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU96113688A (ru) * | 1996-06-25 | 1998-09-27 | Н.Ф. Протопопов | Способ определения содержания нефти и нефтепродуктов в техногенных почвах |
| RU2199406C2 (ru) * | 2001-04-25 | 2003-02-27 | Институт биологии Уфимского научного центра РАН | Способ очистки почв от нефтяных загрязнений |
| RU2279472C2 (ru) * | 2004-06-25 | 2006-07-10 | Открытое акционерное общество "Акционерная нефтяная компания "Башнефть" | Способ очистки почвы от нефтяных загрязнений |
| RU2297290C1 (ru) * | 2005-10-04 | 2007-04-20 | Закрытое акционерное общество научно-производственное предприятие "Биомедхим" (ЗАО НПП "Биомедхим") | Способ рекультивации отбеливающей земли, загрязненной нефтепродуктами |
| RU2007110460A (ru) * | 2007-03-21 | 2008-09-27 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образовани Иркутский государственный университет путей сообщени (ИрГУПС) (RU) | Способ определения загрязнения грунта нефтепродуктами посредством физико-химического моделирования |
| RU2387996C1 (ru) * | 2008-09-22 | 2010-04-27 | Общество с ограниченной ответственностью "Научно-исследовательский институт природных газов и газовых технологий - Газпром ВНИИГАЗ" (ООО "ВНИИГАЗ") | Способ контроля очистки почв, загрязненных углеводородами, и нейтрализации углеводородных шламов посредством анализа активности дегидрогеназы |
| RU2397995C2 (ru) * | 2004-03-25 | 2010-08-27 | Х.К. Штарк Гмбх | Макромолекулярные соединения с ядерно-оболочечной структурой, способы их получения, их применение в качестве полупроводников в электронном функциональном элементе и в качестве электронного функционального элемента |
| CN101858902A (zh) * | 2010-06-01 | 2010-10-13 | 中国科学院广州地球化学研究所 | 一种结合碳同位素比值的土壤蚀变碳酸盐的测量方法 |
-
2010
- 2010-12-24 RU RU2010152769/15A patent/RU2477472C2/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU96113688A (ru) * | 1996-06-25 | 1998-09-27 | Н.Ф. Протопопов | Способ определения содержания нефти и нефтепродуктов в техногенных почвах |
| RU2199406C2 (ru) * | 2001-04-25 | 2003-02-27 | Институт биологии Уфимского научного центра РАН | Способ очистки почв от нефтяных загрязнений |
| RU2397995C2 (ru) * | 2004-03-25 | 2010-08-27 | Х.К. Штарк Гмбх | Макромолекулярные соединения с ядерно-оболочечной структурой, способы их получения, их применение в качестве полупроводников в электронном функциональном элементе и в качестве электронного функционального элемента |
| RU2279472C2 (ru) * | 2004-06-25 | 2006-07-10 | Открытое акционерное общество "Акционерная нефтяная компания "Башнефть" | Способ очистки почвы от нефтяных загрязнений |
| RU2297290C1 (ru) * | 2005-10-04 | 2007-04-20 | Закрытое акционерное общество научно-производственное предприятие "Биомедхим" (ЗАО НПП "Биомедхим") | Способ рекультивации отбеливающей земли, загрязненной нефтепродуктами |
| RU2007110460A (ru) * | 2007-03-21 | 2008-09-27 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образовани Иркутский государственный университет путей сообщени (ИрГУПС) (RU) | Способ определения загрязнения грунта нефтепродуктами посредством физико-химического моделирования |
| RU2387996C1 (ru) * | 2008-09-22 | 2010-04-27 | Общество с ограниченной ответственностью "Научно-исследовательский институт природных газов и газовых технологий - Газпром ВНИИГАЗ" (ООО "ВНИИГАЗ") | Способ контроля очистки почв, загрязненных углеводородами, и нейтрализации углеводородных шламов посредством анализа активности дегидрогеназы |
| CN101858902A (zh) * | 2010-06-01 | 2010-10-13 | 中国科学院广州地球化学研究所 | 一种结合碳同位素比值的土壤蚀变碳酸盐的测量方法 |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104298868A (zh) * | 2014-09-30 | 2015-01-21 | 北京农业信息技术研究中心 | 一种冷链物流的冷却肉货架期预测方法及系统 |
| CN104298868B (zh) * | 2014-09-30 | 2018-05-18 | 北京农业信息技术研究中心 | 一种冷链物流的冷却肉货架期预测方法及系统 |
| RU2590554C1 (ru) * | 2014-12-19 | 2016-07-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт механики Уральского отделения Российской академии наук | Способ исследования особенностей поведения загрязняющих веществ в почвах |
| RU2599131C1 (ru) * | 2015-04-08 | 2016-10-10 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский институт агрохимии им. Д.Н. Прянишникова" (ФГБНУ "ВНИИ агрохимии") | Способ изготовления стандартных образцов массовой доли нефтепродуктов в кварцевом песке |
| RU2641825C2 (ru) * | 2016-04-05 | 2018-01-22 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт механики Уральского отделения Российской академии наук | Способ испытания загрязненных почв и грунтов |
| CN114814184A (zh) * | 2022-05-10 | 2022-07-29 | 中国科学院城市环境研究所 | 一种基于碳13同位素法测定可降解塑料降解率的方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2010152769A (ru) | 2012-06-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2477472C2 (ru) | Способ определения эффективности биодеградации углеводородов нефти в нативных и загрязненных почвах | |
| Zhu et al. | Enhanced cytotoxicity of photoaged phenol-formaldehyde resins microplastics: Combined effects of environmentally persistent free radicals, reactive oxygen species, and conjugated carbonyls | |
| Heitkötter et al. | Interactive effects of biochar ageing in soils related to feedstock, pyrolysis temperature, and historic charcoal production | |
| Bachmann et al. | Toward the standardization of biochar analysis: the COST action TD1107 interlaboratory comparison | |
| Wu et al. | Evaluating fluorescent dissolved organic matter released from wetland-plant derived biochar: effects of extracting solutions | |
| Randazzo et al. | Volatile organic compounds (VOCs) in solid waste landfill cover soil: Chemical and isotopic composition vs. degradation processes | |
| Muhammad et al. | Effects of lead and cadmium nitrate on biomass and substrate utilization pattern of soil microbial communities | |
| Ueshima et al. | Cd adsorption onto Pseudomonas putida in the presence and absence of extracellular polymeric substances | |
| Macleod et al. | Sequential extraction of low concentrations of pyrene and formation of non-extractable residues in sterile and non-sterile soils | |
| Krzyszczak et al. | Formation of polycyclic aromatic hydrocarbons and their derivatives in biochars: The effect of feedstock and pyrolysis conditions | |
| Jednak et al. | Transformation and synthesis of humic substances during bioremediation of petroleum hydrocarbons | |
| Ramalingam et al. | Anaerobic 1, 4-dioxane biodegradation and microbial community analysis in microcosms inoculated with soils or sediments and different electron acceptors | |
| Li et al. | Effect of landfill leachate on cell cycle, micronucleus, and sister chromatid exchange in Triticum aestivum | |
| Pelz et al. | Tracing toluene-assimilating sulfate-reducing bacteria using 13C-incorporation in fatty acids and whole-cell hybridization | |
| Ding et al. | Reductive release of Fe mineral-associated organic matter accelerated by oxalic acid | |
| Wang et al. | Photooxidation of pyrogenic organic matter reduces its reactive, labile C pool and the apparent soil oxidative microbial enzyme response | |
| Teklay et al. | Temporal changes in soil carbon and nitrogen storage in a hybrid poplar chronosequence in northern Alberta | |
| Ukpaka et al. | Adsorbent in bioremediation of crude oil polluted environment: Influence of physicochemical characteristics of various saw dusts | |
| Chen et al. | Saline–alkali land reclamation boosts topsoil carbon storage by preferentially accumulating plant-derived carbon | |
| Avdalović et al. | Study on the assessment of humification processes during biodegradation of heavy residual fuel oil | |
| Clingenpeel et al. | Stable carbon isotope fractionation in chlorinated ethene degradation by bacteria expressing three toluene oxygenases | |
| Estrada-González et al. | Physiological regulations of a highly tolerant cactus to dry season modify its rhizospheric microbial communities | |
| Ader et al. | Microbial perchlorate reduction: A precise laboratory determination of the chlorine isotope fractionation and its possible biochemical basis | |
| Huang et al. | An emerging pollutant contributing to the cytotoxicity of MSWI ash wastes: Strontium | |
| Kluk et al. | Potential of Helianthus annuus for phytoremediation of lead, zinc, total petroleum hydrocarbons (TPH) and polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) contaminated soil |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20201225 |