RU2477321C1 - Способ выявления патогенных штаммов и изолятов бактерии pasteurella multocida - Google Patents
Способ выявления патогенных штаммов и изолятов бактерии pasteurella multocida Download PDFInfo
- Publication number
- RU2477321C1 RU2477321C1 RU2012106088/10A RU2012106088A RU2477321C1 RU 2477321 C1 RU2477321 C1 RU 2477321C1 RU 2012106088/10 A RU2012106088/10 A RU 2012106088/10A RU 2012106088 A RU2012106088 A RU 2012106088A RU 2477321 C1 RU2477321 C1 RU 2477321C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- pcr
- pasteurella multocida
- isolates
- pathogenic strains
- detect pathogenic
- Prior art date
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к ветеринарной микробиологии и биотехнологии, а именно к генетической инженерии. Предложен способ выявления патогенных штаммов и изолятов бактерии Pasteurella multocida при помощи ПЦР. Способ может быть использован в ветеринарной микробиологии для диагностики пастереллеза сельскохозяйственных животных. Способ включает выделение культур микроорганизмов из патологического материала на искусственных питательных средах, проведение ПЦР с синтетическими олигонуклеотидными праймерами SEQ ID NO: 1 - 5' atgatgtcggcatgaatttctcagc 3' и SEQ ID NO: 2 - 5' aacatagccagcgccagcaatgt 3'. Переносят продукт амплификации на гель и оценивают проведенную реакцию. Для постановки ПЦР используют взвесь микроорганизмов на стерильной дистиллированной воде без выделения ДНК. ПЦР проводят в 1 раунд. В случае положительной реакции синтезируется фрагмент, соответствующий размеру 534 п.н. Предложенное изобретение позволяет эффективно выявлять патогенные штаммы и изоляты бактерии Pasteurella multocida. 3 табл., 4 пр.
Description
Изобретение относится к ветеринарной микробиологии и биотехнологии, а именно к генетической инженерии, и может быть использовано для диагностики пастереллеза сельскохозяйственных животных.
Pasteurella multocida - условно-патогенная грамотрицательная бактерия, постоянно обитающая на слизистой оболочке верхних дыхательных путей животных. Бактерия обладает несколькими факторами вирулентности (капсула, дермонекротический токсин, адгезины, протектины, гиалуронидаза, железотранспортирующие протеины), обуславливающими ее патогенность для крупного рогатого скота (Dabo S.M. Pasteurella multocida and bovine respiratory disease / S.M.Dabo, J.D.Taylor, A.W.Confer // Animal Health Research Reviews. - 2008. - Vol.8 (2). - P.129-150). Комбинация факторов вирулентности у штаммов и изолятов бактерии Pasteurella multocida может быть разной, но во всех случаях обеспечивает проявление их патогенности.
Одновременно с патогенными изолятами бактерии Pasteurella multocida от больных животных могут выделяться и непатогенные, что затрудняет диагностику и требует определения патогенности выделенных культур.
До настоящего времени основным способом определения патогенности выделенных культур Р. multocida является трудоемкая процедура постановки биологической пробы на белых мышах массой 16-18 грамм. При этом наблюдение за зараженными животными проводят в течение 7 суток. Культуру считают патогенной, а биологическую пробу положительной при гибели через 24-72 часа хотя бы одного из зараженных животных и выделении от него исходной культуры бактерии (Методические указания по лабораторной диагностике пастереллезов животных и птиц, утвержденные Главным управлением ветеринарии министерства сельского хозяйства Российской Федерации №22-7/82 от 20.08.1992 г.).
К недостаткам данного способа относятся необходимость выделения и идентифицирования культуры бактерий по биохимическим и культурально-морфологическим свойствам, а также постановки биологической пробы на чувствительных лабораторных животных, что обуславливает его длительность, трудоемкость и дороговизну.
Наиболее приемлемым, с точки зрения описанных недостатков и принятым за прототип, является способ, основанный на выявлении гена tox А, отвечающего за синтез дермонекротического токсина Р. multocida в полимеразной цепной реакции, включающий выделение ДНК возбудителя из культур микроорганизмов, синтез специфических олигонуклеотидных праймеров 5′CTYAGATGAGCGACAAGG3′ и 5′AATGCCACACCTCTATAG3, амплификацию ДНК возбудителя в гнездовой ПЦР, специфическую идентификацию продукта ПЦР размером 846 п.н. с помощью электрофореза в 2% агарозном геле (Lichtensteiger C.A. Direct PCR analysis for toxigenic Pasteurella multocida / C.A.Lichtensteiger, S.M.Steenbergen, R.M. et al. // J. Clin. Microbiol. - 1996. - №34. - P.3035-3039).
К недостаткам данного способа можно отнести то, что он требует выделения ДНК из культуры бактерий, выявляет только штаммы и изоляты бактерии Pasteurella multocida, продуцирующие дермонекротический токсин.
Технической задачей предлагаемого решения является разработка нового эффективного способа выявления патогенных штаммов и изолятов бактерии Pasteurella multocida при помощи синтетических олигонуклеотидных праймеров.
Поставленная задача решается тем, что известный способ выявления патогенных штаммов и изолятов бактерии Pasteurella multocida, включающий получение и подготовку культурального материала и проведение ПЦР с олигонуклеотидными праймерами, отличается тем, что ПЦР проводят непосредственно с бактериальной культурой, выделенной из патологического материала, используют олигонуклеотидные праймеры SEQ ID NO:1 - 5′ atgatgtcggcatgaatttctcagc 3′, SEQ ID NO:2 - 5′ aacatagccagcgccagcaatgt 3′, ПЦР проводят в 1 раунд, при получении фрагмента, соответствующего размеру 534 п.н., диагностируют патогенные штаммы и изоляты бактерии Pasteurella multocida.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1. Получение синтетических олигонуклеотидных праймеров
Поиск новых синтетических олигонуклеотидных праймеров осуществляют на основе полного генома штамма Pasteurella multocida «PM70», представленного в базе данных GenBank (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/GenBank/GenBankSearch.html), при помощи пакета программного обеспечения «Lasergen». Полученные последовательности нескольких пар праймеров дополнительно тестируют на специфичность с помощью моделирования ПЦР в программе "Vector NTI Suite" с последовательностями геномов представителей семейства Pasteurellaceae и Enterobacteriaceae, представленных в базе данных GenBank.
Окончательный выбор праймеров основывают на следующих критериях: высокий индекс сходства фрагмента и ДНК различных штаммов Pasteurella multocida, высокая температура отжига (GC-метод), большая длина консенсусов, отсутствие гетеродуплексов.
Химический синтез праймеров осуществляют амидофосфитным методом на автоматическом синтезаторе ASM-102U. Концентрацию синтетических олигонуклеотидных праймеров в маточном растворе определяют спектрометрическим методом.
Таким образом, были выбраны синтетические олигонуклеотидные праймеры, комплементарные высококонсервативной области генома Pasteurella multocida участка гена КМТ-1, отвечающего за синтез мембранного протеина:
SEQ ID NO:1 - 5′ atgatgtcggcatgaatttctcagc 3′,
SEQ ID NO:2 - 5′ aacatagccagcgccagcaatgt 3′
Пример 2. Способ выявления патогенных вариантов бактерии Pasteurella multocida с помощью синтетических олигонуклеотидных праймеров в полимеразной цепной реакции (ПЦР)
Способ осуществляется в несколько этапов.
Этап 1. Выделение Pasteurella multocida из проб биологического материала
Для исследования отбирают пробы внутренних органов (при легочном пастереллезе: кусочки размером 1,5×1,5 см легких на границе нормального и измененного участка, бронхиальных, средостенных и заглоточных лимфатических узлов; при подозрении на геморрагическую септицемию: кусочки сердца с кровью, селезенки, печени, трубчатую кость) не позднее 3-5 часов после гибели животного, не подвергавшегося лечению антибактериальными препаратами.
Из полученных проб делают посев на мясопептонный агар или агар Хоттингера с добавлением 5% сыворотки крови лошади и 5% дефибрированной крови барана. Инкубируют в термостате при температуре 37°С в атмосфере 5% СО2.
Через 24-48 часов инкубации просматривают чашки Петри с агаром на наличие типичных для пастерелл колоний (прозрачных, диаметром до 3 мм, округлых с ровными краями, слизистой консистенции, серого цвета).
5-10 типичных колоний, не смешивая, снимают с поверхности агара, переносят в отдельные стерильные стеклянные пробирки, содержащие 200 мкл стерильной дистиллированной воды, перемешивают на вортексе. Взвесь бактерий разводят стерильной дистиллированной водой до концентрации 109 КОЕ/мл.
Для постановки реакции взвесь бактерий в количестве 5 мкл вносят непосредственно в ПЦР-смесь, минуя стадию выделения ДНК.
Этап 2. Амплификация участка ДНК Pasteurella multocida, кодирующего участок гена КМТ-1
Полимеразная цепная реакция. Состав реакционной смеси: ПЦР-буфер (60 mM Tris-HCl [рН 8.5], 1,5 мМ MgCl2, 25 mM KCl, 10 мМ 2-меркаптэтанола, 0,1% Тритон Х-100), 0,2 мМ dNTP, по 0,2 мкг каждого праймера, 1.25 е.а. Taq-ДНК-полимеразы, 5 мкл взвеси бактерий.
Температурный режим проведения ПЦР: 95°С - 5 мин - 1 цикл; 95°С - 60 с, 60°С - 60 с, 72°С - 90 с - 35 циклов; 72°С - 5 мин.
Этап 3. Определение размера продуктов диагностической ПЦР
Продукты ПЦР анализируют методом электрофореза в 2%-ном агарозном геле в стандартном трис-боратном буфере (рН 8,0) по стандартной методике.
Результаты электрофореза учитывают, просматривая гель в ультрафиолетовом свете с длиной волны 254 нм на приборе «Трансиллюминатор».
Используют маркер молекулярного веса 100 bp. Результат ПЦР считают положительным, если продукт ПЦР соответствует размеру фрагмента в 534 нуклеотидную пару.
Таким образом, предлагаемый способ позволяет эффективно выявлять патогенные штаммы и изоляты бактерий вида Pasteurella multocida в пробах биологического материала от больных животных.
Пример 3. Определение чувствительности и специфичности ПЦР с использованием праймеров на ген КМТ1 и ПЦР на ген tox A
Для определения чувствительности метода по заявленному способу в сравнении с прототипом суточную культуру контрольного штамма Pasteurella multocida «W13Ф», выращенную на кровяном агаре, переносят в бактериологическую пробирку, содержащую 1000 мкл стерильной дистиллированной воды или физиологического раствора, разводят до концентрации 1011 КОЕ/мл, титруют методом 10-кратных разведений до разведения 101 КОЕ/мл, каждое разведение подвергают исследованию в ПЦР. Чувствительность разработанной ПЦР составляет 105 КОЕ/мл.
Результаты опытов по определению чувствительности реакции представлены в таблице 1.
| Таблица 1 | ||
| Концентрация Pasteurella multocida в пробе, КОЕ/мл | Результаты ПЦР по заявленному способу | Результаты ПЦР по способу, взятому за прототип |
| 107 | + | + |
| 106 | + | + |
| 105 | + | - |
| 104 | - | - |
| 103 | - | - |
| 102 | - | - |
Результаты опытов по определению специфичности реакции представлены в таблице 2.
| Таблица 2 | ||
| Вирус (штамм, изолят) | Результаты ПЦР по заявленному способу | Результаты ПЦР по способу, взятому за прототип |
| Pasteurella multocida (штамм «W130») | + | + |
| Pasteurella multocida (изолят, патогенный для белых мышей) | + | + |
| Pasteurella multocida (изолят, патогенный для белых мышей) | + | - |
| Pasteurella multocida (изолят, непатогенный для белых мышей) | - | - |
| Pasteurella multocida (изолят, непатогенный для белых мышей) | - | - |
| Salmonella typhimurium | - | - |
| Е.coli | - | - |
| Примечание: «+»- положительный результат; «-» - отрицательный результат. |
||
Таким образом, предлагаемый способ обладает высокой чувствительностью и специфичностью при выявлении ДНК патогенных штаммов и изолятов бактерии Pasteurella multocida, в то время как способ, принятый за прототип, обладает более низкой чувствительностью и не выявляет все патогенные изоляты Pasteurella multocida.
Пример 4. Сравнение эффективности разработанного метода перед стандартной методикой определения патогенности выделенных культур
Преимущества разработанного метода перед стандартной методикой представлены в таблице 3.
| Таблица 3 | ||
| Показатели | Стандартная методика | Метод ПЦР по заявленному способу |
| Длительность (дни) | 10 суток | 2 суток |
| Время исследования одной пробы биоматериала | 10 суток | 2 суток |
| Себестоимость исследования одной пробы (руб.) | 360 рублей | 80 рублей |
| Трудозатраты (чел.) | 2 | 1 |
| Необходимость получения чистой культуры | + | - |
| Необходимость постановки биологической пробы на лабораторных животных | + | |
Таким образом, предлагаемый нами способ позволяет проводить эффективное выявление патогенных штаммов и изолятов бактерий вида Pasteurella multocida на ранних стадиях культивирования, а также сократить сроки проведения исследований до двух суток, снизить себестоимость диагностики в 4,5 раза, трудозатраты в 2 раза, исключить необходимость выделения чистой культуры и проведения постановки биологической пробы белых мышах.
Перечень последовательностей
| <110> | Institute of experimental veterinary science of Sibiria and the Far East | |
| <120> | Способ выявления патогенных штаммов и изолятов бактерии Pasteurella multocida | |
| <130> | ||
| <160> | 3 | |
| <210> | 1 | |
| <211> | 22 | |
| <212> | DNA | |
| <213> | Pasteurella multocida | |
| <400> | 1 | |
| atgatgtcgg catgaatttc tcagc | 25 | |
| <210> | 2 | |
| <211> | 25 | |
| <212> | DNA | |
| <213> | Pasteurella multocida | |
| <400> | ||
| aacatagcca gcgccagcaa tgt | 22 | |
| <210> | 3 | |
| <400> | 3 | |
| 000 | ||
Claims (1)
- Способ выявления патогенных штаммов и изолятов бактерии Pasteurella multocida, включающий получение и подготовку культурального материала и проведение ПЦР с олигонуклеотидными праймерами, отличающийся тем, что ПЦР проводят непосредственно с бактериальной культурой, выделенной из патологического материала, используют олигонуклеотидные праймеры SEQ ID NO: 1 - 5' atgatgtcggcatgaatttctcagc 3', SEQ ID NO: 2 - 5' aacatagccagcgccagcaatgt 3', ПЦР проводят в 1 раунд, при получении фрагмента, соответствующего размеру 534 п.н., диагностируют патогенные штаммы и изоляты бактерии Pasteurella multocida.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2012106088/10A RU2477321C1 (ru) | 2012-02-20 | 2012-02-20 | Способ выявления патогенных штаммов и изолятов бактерии pasteurella multocida |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2012106088/10A RU2477321C1 (ru) | 2012-02-20 | 2012-02-20 | Способ выявления патогенных штаммов и изолятов бактерии pasteurella multocida |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2477321C1 true RU2477321C1 (ru) | 2013-03-10 |
Family
ID=49124210
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2012106088/10A RU2477321C1 (ru) | 2012-02-20 | 2012-02-20 | Способ выявления патогенных штаммов и изолятов бактерии pasteurella multocida |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2477321C1 (ru) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2551958C1 (ru) * | 2014-02-26 | 2015-06-10 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии"Вектор" (ФБУН ГНЦ ВБ "Вектор") | НАБОР ОЛИГОНУКЛЕОТИДНЫХ ПРАЙМЕРОВ И ФЛУОРЕСЦЕНТНО-МЕЧЕНЫХ ЗОНДОВ ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ И СУБТИПИРОВАНИЯ ДНК БАКТЕРИИ Pasteurella multocida СЕРОТИПОВ A, B, D, E, F МЕТОДОМ ПЦР В РЕЖИМЕ РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ |
| RU2562167C1 (ru) * | 2014-02-11 | 2015-09-10 | Государственное научное учреждение Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ИЭВСиДВ Россельхозакадемии) | СИНТЕТИЧЕСКИЕ ОЛИГОНУКЛЕОТИДНЫЕ ПРАЙМЕРЫ И ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ В СПОСОБЕ ИДЕНТИФИКАЦИИ ШТАММОВ И ИЗОЛЯТОВ БАКТЕРИИ Pasteurella multocida СЕРОГРУППЫ D У КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА В ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ. |
| RU2717535C1 (ru) * | 2019-03-27 | 2020-03-23 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный Ростовский аграрный научный центр" (ФГБНУ ФРАНЦ) | Способ выделения чистой культуры возбудителя пастереллёза Pasteurella multocida |
| CN116059333A (zh) * | 2021-10-19 | 2023-05-05 | 西南大学 | 一种牛源a型多杀性巴氏杆菌基因缺失菌株及其应用 |
| CN116334254A (zh) * | 2022-09-20 | 2023-06-27 | 江苏省家禽科学研究所 | 一种多杀性巴氏杆菌新型核酸检测试剂盒及其非诊断性检测方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1877297A (zh) * | 2006-07-12 | 2006-12-13 | 南开大学 | 多杀巴斯德氏菌聚合酶链式反应检测试剂盒及其检测方法 |
| RU2391409C1 (ru) * | 2008-11-06 | 2010-06-10 | Государственное научное учреждение Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока Сибирского отделения Россельхозакадемии (ГНУ ИЭВСиДВ СО Россельхозакадемии) | СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ РОДА Pasteurella И/ИЛИ Pseudomonas aeruginosa |
| CN101984073A (zh) * | 2010-10-19 | 2011-03-09 | 浙江大学 | 一种猪细菌的多重pcr检测方法 |
-
2012
- 2012-02-20 RU RU2012106088/10A patent/RU2477321C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1877297A (zh) * | 2006-07-12 | 2006-12-13 | 南开大学 | 多杀巴斯德氏菌聚合酶链式反应检测试剂盒及其检测方法 |
| RU2391409C1 (ru) * | 2008-11-06 | 2010-06-10 | Государственное научное учреждение Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока Сибирского отделения Россельхозакадемии (ГНУ ИЭВСиДВ СО Россельхозакадемии) | СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ РОДА Pasteurella И/ИЛИ Pseudomonas aeruginosa |
| CN101984073A (zh) * | 2010-10-19 | 2011-03-09 | 浙江大学 | 一种猪细菌的多重pcr检测方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| LICHTENSTEIGER C.A. et al. Direct PCR analysis for toxigenic Pasteurella multocida // J Clin Microbiol. - 1996, v.34, no.12, pp.3035-3039. * |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2562167C1 (ru) * | 2014-02-11 | 2015-09-10 | Государственное научное учреждение Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ИЭВСиДВ Россельхозакадемии) | СИНТЕТИЧЕСКИЕ ОЛИГОНУКЛЕОТИДНЫЕ ПРАЙМЕРЫ И ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ В СПОСОБЕ ИДЕНТИФИКАЦИИ ШТАММОВ И ИЗОЛЯТОВ БАКТЕРИИ Pasteurella multocida СЕРОГРУППЫ D У КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА В ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ. |
| RU2551958C1 (ru) * | 2014-02-26 | 2015-06-10 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии"Вектор" (ФБУН ГНЦ ВБ "Вектор") | НАБОР ОЛИГОНУКЛЕОТИДНЫХ ПРАЙМЕРОВ И ФЛУОРЕСЦЕНТНО-МЕЧЕНЫХ ЗОНДОВ ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ И СУБТИПИРОВАНИЯ ДНК БАКТЕРИИ Pasteurella multocida СЕРОТИПОВ A, B, D, E, F МЕТОДОМ ПЦР В РЕЖИМЕ РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ |
| RU2717535C1 (ru) * | 2019-03-27 | 2020-03-23 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный Ростовский аграрный научный центр" (ФГБНУ ФРАНЦ) | Способ выделения чистой культуры возбудителя пастереллёза Pasteurella multocida |
| CN116059333A (zh) * | 2021-10-19 | 2023-05-05 | 西南大学 | 一种牛源a型多杀性巴氏杆菌基因缺失菌株及其应用 |
| CN116059333B (zh) * | 2021-10-19 | 2024-01-09 | 西南大学 | 一种牛源a型多杀性巴氏杆菌基因缺失菌株及其应用 |
| CN116334254A (zh) * | 2022-09-20 | 2023-06-27 | 江苏省家禽科学研究所 | 一种多杀性巴氏杆菌新型核酸检测试剂盒及其非诊断性检测方法 |
| CN116334254B (zh) * | 2022-09-20 | 2024-01-16 | 江苏省家禽科学研究所 | 一种多杀性巴氏杆菌新型核酸检测试剂盒及其非诊断性检测方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Laroucau et al. | Chlamydial infections in duck farms associated with human cases of psittacosis in France | |
| Orynbayev et al. | Biological characterization of Pasteurella multocida present in the Saiga population | |
| Thomas et al. | Isolation of Vero cytotoxin-producing Escherichia coli serotypes O9ab: H-and O101: H-carrying VT2 variant gene sequences from a patient with haemolytic uraemic syndrome | |
| RU2477321C1 (ru) | Способ выявления патогенных штаммов и изолятов бактерии pasteurella multocida | |
| CN105648055B (zh) | 一种禽源沙门氏菌多重pcr检测试剂盒及其非诊断性检测方法 | |
| Elbrissi et al. | Isolation, identification and differentiation of Campylobacter spp. using multiplex PCR assay from goats in Khartoum State, Sudan | |
| Cechova et al. | Chlamydiosis in farmed chickens in Slovakia and zoonotic risk for humans | |
| Jung et al. | Colonization patterns of Enterococcus cecorum in two different broiler production cycles detected with a newly developed quantitative real-time PCR | |
| Shah et al. | Molecular characterization of local isolates of Mycoplasma capricolum sub specie Capripneumoniae in goats (Capra hircus) of Khyber Pakhtunkhwa, Pakistan. | |
| Liu et al. | Multiplex PCR assay based on the citE2 gene and intergenic sequence for the rapid detection of Salmonella Pullorum in chickens | |
| Shoaib | Mycoplasmosis in poultry, a perpetual problem. | |
| Hess et al. | Interlaboratory comparison of ability to detect nucleic acid of Mycoplasma gallisepticum and Mycoplasma synoviae by polymerase chain reaction | |
| Kogovšek et al. | Loop-mediated isothermal amplification: rapid molecular detection of virulence genes associated with avian pathogenic Escherichia coliin poultry | |
| Kaevska et al. | Examination of Mycobacterium avium subsp. avium distribution in naturally infected hens by culture and triplex quantitative real time PCR. | |
| Khosroshahi et al. | Identification of Legionella pneumophila in intubated patients with TaqMan real time PCR | |
| Fonseca et al. | Transfer, viability and colonisation of Campylobacter jejuni in the chicken vitellus and in embryos | |
| Abd-Elsadek et al. | Molecular studies on Pasteurella multocida in ducks | |
| Langkabel et al. | Comparison of methods for the detection ofSalmonella in poultry | |
| Shayegh et al. | POTENTIAL OF PASTEURELLA MULTOCIDA ISOLATED FROM HEALTHY AND DISEASED CATTLE | |
| RU2562167C1 (ru) | СИНТЕТИЧЕСКИЕ ОЛИГОНУКЛЕОТИДНЫЕ ПРАЙМЕРЫ И ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ В СПОСОБЕ ИДЕНТИФИКАЦИИ ШТАММОВ И ИЗОЛЯТОВ БАКТЕРИИ Pasteurella multocida СЕРОГРУППЫ D У КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА В ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ. | |
| Hira Hameed et al. | Higher order occurrence of virulent isolates of Pseudomonas aeruginosa in hospital environments initiate one health concerns irrespective of the biological association. | |
| Dablool | Evaluating the Antimicrobial Susceptibility of M. haemolytica and P. multocida isolated From Dairy Calf Pneumonia | |
| RU2527153C1 (ru) | СИНТЕТИЧЕСКИЕ ОЛИГОНУКЛЕОТИДНЫЕ ПРАЙМЕРЫ ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ ШТАММОВ И ИЗОЛЯТОВ БАКТЕРИИ Pasteurella multocida СЕРОГРУППЫ А У КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА И СПОСОБ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ | |
| RU2551962C1 (ru) | СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ И ГЕНОТИПИРОВАНИЯ БАКТЕРИИ Pasteurella multocida КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА СЕРОГРУПП A, B, D, E, F В МУЛЬТИПЛЕКСНОЙ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ | |
| CN109182568A (zh) | 一种沙门氏菌快速鉴定与分型方法及试剂盒 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20170221 |