RU2476444C1 - METHOD OF PRODUCING CONJUGATE OF NONA-β-(1→3)-GLUCOSIDE WITH BOVINE SERUM ALBUMIN USING SQUARATE TECHNIQUE - Google Patents
METHOD OF PRODUCING CONJUGATE OF NONA-β-(1→3)-GLUCOSIDE WITH BOVINE SERUM ALBUMIN USING SQUARATE TECHNIQUE Download PDFInfo
- Publication number
- RU2476444C1 RU2476444C1 RU2011129357/10A RU2011129357A RU2476444C1 RU 2476444 C1 RU2476444 C1 RU 2476444C1 RU 2011129357/10 A RU2011129357/10 A RU 2011129357/10A RU 2011129357 A RU2011129357 A RU 2011129357A RU 2476444 C1 RU2476444 C1 RU 2476444C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- protein
- conjugate
- glucoside
- bsa
- nona
- Prior art date
Links
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области синтеза гликоконъюгатов, построенных на основе углеводных лигандов и белковых носителей. Предлагаются новые условия получения таких соединений на примере конъюгатов нона-β-(1→3)-глюкозида с бычьим сывороточным альбумином (БСА), в которых углеводные и белковый компоненты соединены посредством скваратного линкера. Соединения такого типа в настоящее время широко используются в качестве иммуногенов и для получения вакцин против инфекционных заболеваний и рака, что позволяет расширить арсенал медицинских препаратов, используемых для лечения этих заболеваний.The invention relates to the field of synthesis of glycoconjugates based on carbohydrate ligands and protein carriers. New conditions are proposed for the preparation of such compounds by the example of non-β- (1 → 3) -glucoside conjugates with bovine serum albumin (BSA), in which the carbohydrate and protein components are connected via a squared linker. Compounds of this type are currently widely used as immunogens and for the production of vaccines against infectious diseases and cancer, which makes it possible to expand the arsenal of medications used to treat these diseases.
Конъюгаты олиго- или полисахаридов с другой иммуногенной молекулой, такой как полипептид или белок, использовались для инициирования иммунного ответа на ряд грамотрицательных и грамположительных бактерий, а также других возбудителей инфекций. Конъюгирование полисахарида или олигосахарида с полипептидом превращает иммунный ответ на олиго- или полисахарид, который обычно является Т-независимым, в Т-зависимый ответ.Conjugates of oligo- or polysaccharides with another immunogenic molecule, such as a polypeptide or protein, have been used to initiate an immune response to a number of gram-negative and gram-positive bacteria, as well as other pathogens of infections. Conjugation of a polysaccharide or oligosaccharide with a polypeptide converts the immune response to an oligo or polysaccharide, which is usually T-independent, into a T-dependent response.
В предыдущем уровне техники раскрывается как прямое, так и непрямое соединение полисахаридов с белками с образованием конъюгатов (итог подведен в ссылке [1] и патенте США №5 306 492). Методы конъюгирования включают в себя диазосочетание, тиоэфирное связывание, амидирование, восстановительное аминирование и тиокарбамоилирование для присоединения к белковому носителю.The prior art discloses both direct and indirect coupling of polysaccharides with proteins to form conjugates (summarized in reference [1] and US Pat. No. 5,306,492). Conjugation methods include diazo coupling, thioether binding, amidation, reductive amination and thiocarbamoylation to attach to a protein carrier.
Gever et al., Med. Microbiol. Immunol., 165: 171-288 (1979) описали получение конъюгатов некоторых капсульных полисахаридных фрагментов Klebsiella pneumoniae с нитрофенилэтиламиновым линкером путем восстановительного аминирования и присоединения производного сахара с помощью азосочетания.Gever et al., Med. Microbiol. Immunol., 165: 171-288 (1979) described the preparation of conjugates of certain capsular polysaccharide fragments of Klebsiella pneumoniae with a nitrophenylethylamine linker by reductive amination and addition of a sugar derivative by azo coupling.
В патенте США №4057685, Mclntire, описан липополисахарид Escherichia coli с пониженной токсичностью, ковалентно связанный с белковым антигеном в результате взаимодействия с галогенангидридом.US Pat. No. 4,057,685, Mclntire, describes a low toxicity Escherichia coli lipopolysaccharide covalently linked to a protein antigen by reaction with an acid halide.
В патенте США №4 356 170, Jennings et al., описывается получение полисахарид-белковых конъюгатов методом восстановительного аминирования.US Pat. No. 4,356,170 to Jennings et al. Describes the preparation of polysaccharide-protein conjugates by reductive amination.
В патенте США №4673574, 4761283 и 4808700, Anderson, описано получение иммуногенных конъюгатов, включающих в себя продукт восстановительного аминирования иммуногенного фрагмента капсульного полисахарида, полученного из капсульного полимера Streptococcus pneumoniae или Н.influenzae окислительным расщеплением периодатом или гидролизом гликозидной связи и содержащего свободную альдегидную группу на восстанавливающем конце, и бактериальный токсин или анатоксин в качестве белкового носителя.U.S. Patent No. 4,673,574, 4,761,283 and 4,808,700, by Anderson, describes the preparation of immunogenic conjugates comprising the product of reductive amination of an immunogenic fragment of a capsular polysaccharide derived from a capsule polymer of Streptococcus pneumoniae or H. influenzae by oxidative cleavage with a periodate or hydrolyzide-linked glycol group at the reducing end, and a bacterial toxin or toxoid as a protein carrier.
В патенте США №4459286, Hillman et al., описано получение полисахарид-белкового конъюгата путем активации полисахарида Н.influenzae типа В бромцианом, получения производного активированного полисахарида со спейсерной молекулой, 6-аминокапроновой кислотой, и присоединения основного белка внешней мембраны Neisseria meningitidis с использованием водорастворимого карбодиимида с образованием связи амидного типа с белком через сложный ряд связующих звеньев от 6-аминокапроновой кислоты до полисахарида.US Pat. No. 4,459,286 to Hillman et al., Describes the preparation of a polysaccharide-protein conjugate by activating H. influenzae type B polysaccharide with cyanogen bromide, the preparation of an activated polysaccharide derivative with a spacer molecule, 6-aminocaproic acid, and the addition of the main outer membrane protein Neisseria meningitidis using water-soluble carbodiimide with the formation of a bond of the amide type with a protein through a complex series of connecting units from 6-aminocaproic acid to the polysaccharide.
В патенте США №4965338, Gordon, описано получение водорастворимого ковалентного конъюгата полисахарида с дифтерийным анатоксином, где чистый полисахарид Н. influenzae типа b активируют бромцианом и сразу смешивают с дифтерийным анатоксином, модифицированным ADH-спейсером.US Pat. No. 4,965,338 to Gordon describes the preparation of a water-soluble covalent conjugate of a diphtheria toxoid polysaccharide, wherein the pure H. influenzae type b polysaccharide is activated with cyanogen bromide and immediately mixed with a diphtheria toxoid modified with an ADH spacer.
В патенте США №4663160, Tsay et al., описан детоксифицированный полисахарид грамотрицательных бактерий, ковалентно связанный с детоксифицированным белком, полученным из тех же видов грамотрицательных бактерий, посредством фрагмента, имеющего 4-12 атомов углерода.US Pat. No. 4,631,660, Tsay et al., Describes a detoxified polysaccharide of gram-negative bacteria covalently linked to a detoxified protein derived from the same species of gram-negative bacteria through a moiety having 4-12 carbon atoms.
В патенте США №4619828, Gordon et al., описаны конъюгаты молекул полисахаридов патогенных бактерий, таких как Haemophilus influenzae типа b, Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis и Escherichia coli, с Т-зависимыми антигенами, такими как дифтерийный и столбнячный анатоксины.US Pat. No. 4,619,828 to Gordon et al. Describes conjugates of polysaccharide molecules of pathogenic bacteria such as Haemophilus influenzae type b, Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis and Escherichia coli, with T-dependent antigens such as diphtheria and tetanus toxoid.
В патенте США №4711779, Porro et al., описаны вакцины на основе конъюгатов гликопротеинов, обладающие трехвалентной иммуногенной активностью, содержащие антигенные детерминанты капсульных полисахаридов грамположительных бактерий, а также либо CRM197, столбнячный анатоксин, либо коклюшный токсин.US Pat. No. 4,711,779 to Porro et al. Describes vaccines based on glycoprotein conjugates having trivalent immunogenic activity, containing antigenic determinants of capsular polysaccharides of gram-positive bacteria, and either CRM197, tetanus toxoid, or pertussis toxin.
В патенте США №5306492, Porro, описан конъюгат олигосахарида с белком-носителем, полученный путем взаимодействия по реакции восстановительного аминирования олигосахарида, имеющего концевую альдегидную группу, с диаминометаном в присутствии пиридинборана, дальнейшей реакции аминированного олигосахаридного продукта с молекулой, имеющей две функциональные группы, и затем взаимодействия активированного олигосахаридного продукта с белком-носителем.US Pat. No. 5,306,492, to Porro, describes a conjugate of an oligosaccharide with a carrier protein obtained by reacting a reductive amination reaction of an oligosaccharide having an aldehyde terminal group with diaminomethane in the presence of pyridinborane, a further reaction of the aminated oligosaccharide product with a molecule having two functional groups then the interaction of the activated oligosaccharide product with a carrier protein.
В патенте США №5192540, Kuo et al., описан конъюгат олигосахарида с белком, включающий в себя продукт восстановительного аминирования окисленного полирибозил-рибитолфосфатного фрагмента, полученного из капсульного полисахарида Haemophilus influenzae типа b, и белка внешней мембраны Haemophilus influenzae типа b.US Pat. No. 5,119,540 to Kuo et al. Describes a protein-oligosaccharide conjugate comprising a reductive amination product of an oxidized polyribosyl ribitol phosphate moiety derived from a Haemophilus influenzae type b capsular polysaccharide and type Haemophilus influenzae outer membrane protein.
В публикации заявки на европейский патент №ЕР 0747063 А2 описан модифицированный капсульный полисахарид, содержащий различные производные сиаловой кислоты, и гетеробифункциональную линкерную молекулу, связанную с молекулой носителя. Линкеры используются для N-алкилирования приблизительно до 5 остатков сиаловой кислоты на полисахарид. Затем оставшиеся аминогруппы ацилируют пропионовым или уксусным ангидридом.European Patent Application Publication No. EP 0747063 A2 describes a modified capsule polysaccharide containing various sialic acid derivatives and a heterobifunctional linker molecule linked to a carrier molecule. Linkers are used for N-alkylation of up to about 5 sialic acid residues per polysaccharide. The remaining amino groups are then acylated with propionic or acetic anhydride.
Существует потребность в более эффективных очищенных иммуногенных олигосахарид-белковых конъюгатах, которые могут быть получены более простым способом и с более высоким выходом, для широкомасштабного получения вакцин на основе иммуногенных олигосахарид-белковых конъюгатов.There is a need for more effective purified immunogenic oligosaccharide-protein conjugates, which can be obtained in a simpler way and with a higher yield, for large-scale production of vaccines based on immunogenic oligosaccharide-protein conjugates.
Одним из наиболее эффективных в настоящее время способов конъюгации олигосахаридов, содержащих свободную аминогруппу в агликоне, с белками является скваратный метод [2]. Так, в качестве прототипов данного изобретения могут выступать патенты США №7,722,890, Bundle, et al. и заявка на патент США №20090304734, Oscarson; Stefan; et al., в которых в качестве одного из наиболее эффективных способов конъюгирования углеводной цепи с белковым носителем также использовался скваратный метод.One of the most effective methods for conjugating oligosaccharides containing a free amino group in aglycone with proteins is the squat method [2]. Thus, US Pat. No. 7,722,890, Bundle, et al. and US Patent Application No. 20090304734, Oscarson; Stefan et al., in which, as one of the most effective methods for conjugating a carbohydrate chain to a protein carrier, the squat method was also used.
Наше изобретение иллюстрируется примером получения конъюгата нона-β-(1→3)-глюкозида с белком-носителем БСА.Our invention is illustrated by an example of the preparation of a non-β- (1 → 3) -glucoside conjugate with a BSA carrier protein.
Целью данного изобретения является разработка эффективного способа получения иммуногенных конъюгатов нона-β-(1→3)-глюкозида с белком БСА скваратным методом, который имеет преимущество по сравнению с применяющимися в настоящее время методологиями и приводит к продукту с расчетной степенью включения олигосахарида в конъюгат.The aim of this invention is to develop an effective method for producing immunogenic conjugates of non-β- (1 → 3) -glucoside with BSA protein by the squared method, which has an advantage over the currently used methodologies and leads to a product with a calculated degree of oligosaccharide incorporation into the conjugate.
Техническим результатом изобретения является увеличение эффективности реакции конъюгации, снижение потребления используемого в избытке лиганда с достижением того же соотношения лиганд-БСА в конечном конъюгате, как и при проведении конъюгации без добавки диметилсульфоксида, но с использованием большего количества реагента.The technical result of the invention is to increase the efficiency of the conjugation reaction, reduce the consumption of the excess ligand used to achieve the same ligand-BSA ratio in the final conjugate, as when conjugating without dimethyl sulfoxide, but using a larger amount of reagent.
Указанный технический результат достигается за счет того, что способ синтеза конъюгатов олигосахаридных лигандов с белком БСА скваратным методом, отличающийся тем, что стадия конъюгации проводится в смеси боратного буфера (рН 9.0) и диметилсульфоксида. Кроме того, в качестве олигосахарида используется нона-β-(1→3)-глюкозид. Кроме того, соотношение боратного буфера (рН 9.0) и диметилсульфоксида составляет 9:1.The specified technical result is achieved due to the fact that the method of synthesis of conjugates of oligosaccharide ligands with BSA protein is squared, characterized in that the conjugation step is carried out in a mixture of borate buffer (pH 9.0) and dimethyl sulfoxide. In addition, nona-β- (1 → 3) -glucoside is used as the oligosaccharide. In addition, the ratio of borate buffer (pH 9.0) and dimethyl sulfoxide is 9: 1.
Способ получения иммуногенных олигосахарид-белковых конъюгатов 5 (Схема 1) включает в себя первоначальное взаимодействие 3-аминопропилгликозида олигосахарида 1 с диэтилскваратом 2 с последующей реакцией моноамида скваратовой кислоты 3 с белком БСА 4 в боратном буфере (рН 9.0).The method for producing immunogenic oligosaccharide-protein conjugates 5 (Scheme 1) involves the initial interaction of 3-aminopropylglycoside oligosaccharide 1 with diethyl squatrate 2 followed by reaction of squarate acid monoamide 3 with BSA 4 protein in borate buffer (pH 9.0).
Предлагается способ получения конъюгатов нона-β-(1→3)-глюкозида с белком БСА, в которых углеводные и белковый компоненты соединены посредством скваратного линкера, отличающийся тем, что реакция моноамида скваратовой кислоты 3 с белком-носителем БСА 4 проводится в смеси боратного буфера (рН 9.0) и диметилсульфоксида в соотношении 9:1 (по объему), что позволяет заметно увеличить эффективность реакции конъюгации и на 20-25% снизить потребление используемого в избытке лиганда 3 с достижением то же соотношения лиганд-БСА в конечном конъюгате 5, как и при проведении конъюгации без добавки диметилсульфоксида, но с использованием большего количества реагента 3.A method for producing conjugates of non-β- (1 → 3) -glucoside with BSA protein is proposed, in which the carbohydrate and protein components are connected via a squared linker, characterized in that the reaction of squarate acid monoamide 3 with a carrier protein BSA 4 is carried out in a mixture of borate buffer (pH 9.0) and dimethyl sulfoxide in a ratio of 9: 1 (by volume), which can significantly increase the efficiency of the conjugation reaction and reduce the consumption of excess ligand 3 by 20-25% to achieve the same ligand-BSA ratio in final conjugate 5, as and n When conjugation is carried out without the addition of dimethyl sulfoxide, but using more reagent 3.
При проведении конъюгации скваратсвязянного нонасахарида 3 (лиганд) с БСА 4 в обычных условиях (боратный буфер, рН 9.0) при начальном мольном соотношении лиганд - БСА 20:1 происходит включение 10 лигандов в конъюгат 5 (n=10) (здесь и далее определено методом масс-спектрометрии MALDI-TOF), то есть, не менее 50% исходного лиганда не включается и теряется (Пример 3). При снижении начального соотношения лиганд 3 - БСА 4 до 10:1 происходит пропорциональное снижение степени включения лиганда в конъюгат, то есть повысить таким образом степень конверсии лиганда 3 не удается (Пример 3). При соотношении лиганд 3 - БСА 4 16:1 степень включения лиганда составляет промежуточную величину в 7 единиц (Пример 4). Проведение конъюгации в смеси боратный буфер (рН 9.0) - ДМСО (9:1) позволяет на 20-25% снизить потребление лиганда 3 при том же соотношении лиганд-БСА в конечном конъюгате 5 (Пример 5).When conjugating a squared nonasaccharide 3 (ligand) with BSA 4 under ordinary conditions (borate buffer, pH 9.0) with an initial molar ratio of ligand - BSA of 20: 1, 10 ligands are included in conjugate 5 (n = 10) (hereinafter, determined by the method MALDI-TOF mass spectrometry), that is, at least 50% of the starting ligand is not turned on and is lost (Example 3). When reducing the initial ratio of ligand 3 - BSA 4 to 10: 1 there is a proportional decrease in the degree of incorporation of the ligand into the conjugate, that is, it is not possible to increase the degree of conversion of ligand 3 (Example 3). When the ratio of ligand 3 - BSA 4 16: 1, the degree of inclusion of the ligand is an intermediate value of 7 units (Example 4). Conducting conjugation in a mixture of borate buffer (pH 9.0) - DMSO (9: 1) allows to reduce the consumption of ligand 3 by 20-25% with the same ratio of ligand-BSA in the final conjugate 5 (Example 5).
Пример 1. Получение скваратного производного нонасахарида 3. К раствору исходного нона-β-(1→3)-глюкозида 1 (11,6 мг, 7,56 мкмоль) в 2 мл 50%-ого водного этанола добавляли диэтилскварат 2 (1,34 мкл, 9,07 мкмоль) и триэтиламин (1,1 мкл, 8,0 мкмоль). Полученную смесь оставляли на 2,5 часа. Затем растворитель упаривали. Остаток растворяли в 2 мл воды, раствор наносили на патрон Sep-Pak C-18, который промывали 5 мл воды, затем элюировали градиентом метанола в воде (10%→20%). Элюат упаривали, остаток лиофилизовали из воды и получили 12,2 мг (7,35 мкмоль, 97%) моноамида скваратной кислоты 3.Example 1. Obtaining a squared derivative of nonasaccharide 3. To a solution of the original non-β- (1 → 3) -glucoside 1 (11.6 mg, 7.56 μmol) in 2 ml of 50% aqueous ethanol was added diethyl squarate 2 (1, 34 μl, 9.07 μmol) and triethylamine (1.1 μl, 8.0 μmol). The resulting mixture was left for 2.5 hours. Then the solvent was evaporated. The residue was dissolved in 2 ml of water, the solution was applied to a Sep-Pak C-18 cartridge, which was washed with 5 ml of water, then eluted with a gradient of methanol in water (10% → 20%). The eluate was evaporated, the residue was lyophilized from water and 12.2 mg (7.35 μmol, 97%) of squarate acid monoamide 3 was obtained.
Пример 2. Получение конъюгата 5 нона-β-(1→3)-глюкозида с белком БСА при мольном соотношении углеводного лиганда и белка 10:1 без добавления ДМСО. Производное 3 в количестве 6,1 мг (3,67 мкмоль, 10 экв.) и БСА 4 в количестве 22,5 мг (0,34 мкмоль) растворили в 2 мл буферного раствора (350 мкМ КНСОз и 70 мкМ Na2B4O7·10H2O, pH=9), выдерживали 6 суток при комнатной температуре. Конъюгат 3 выделяли колоночной гель-хроматографией на сефадексе G-15 в воде и лиофилизовали. Получили 20,2 мг (0,27 мкмоль, 80%) конъюгата 3 (n ~5), MS MALDI-TOF: m/z 74090.Example 2. Obtaining a conjugate of 5 nona-β- (1 → 3) -glucoside with BSA protein at a molar ratio of carbohydrate ligand to protein 10: 1 without the addition of DMSO. Derivative 3 in an amount of 6.1 mg (3.67 μmol, 10 equiv.) And BSA 4 in an amount of 22.5 mg (0.34 μmol) were dissolved in 2 ml of buffer solution (350 μM KHCO3 and 70 μM Na 2 B 4 O 7 · 10H 2 O, pH = 9), kept for 6 days at room temperature. Conjugate 3 was isolated by column chromatography on Sephadex G-15 in water and lyophilized. Received 20.2 mg (0.27 μmol, 80%) of conjugate 3 (n ~ 5), MS MALDI-TOF: m / z 74090.
Пример 3. Получение конъюгата 5 нона-β-(1→3)-глюкозида с белком БСА при мольном соотношении углеводного лиганда и белка 20:1 без добавления ДМСО. Производное 3 в количестве 12,2 мг (7,35 мкмоль, 20 экв.) и БСА 4 в количестве 22,6 мг (0,341 мкмоль) растворили в 2 мл буферного раствора (350 мкМ KНСО3 и 70 мкМ Na2B4O7·10H2O, pH=9.0) и выдерживали 6 суток при комнатной температуре. Конъюгат 5 выделяли колоночной гель-хроматографией на сефадексе G-15 в воде и лиофилизовали. Получили 24,3 мг (0,29 мкмоль, 85%) конъюгата 5 (n ~10), MS MALDI-TOF: m/z 82110.Example 3. Obtaining a conjugate of 5 nona-β- (1 → 3) -glucoside with BSA protein at a molar ratio of carbohydrate ligand to protein 20: 1 without the addition of DMSO. Derivative 3 in the amount of 12.2 mg (7.35 μmol, 20 equiv.) And BSA 4 in the amount of 22.6 mg (0.341 μmol) were dissolved in 2 ml of buffer solution (350 μM KHCO 3 and 70 μM Na 2 B 4 O 7 · 10H 2 O, pH = 9.0) and kept for 6 days at room temperature. Conjugate 5 was isolated by column gel chromatography on Sephadex G-15 in water and lyophilized. Received 24.3 mg (0.29 μmol, 85%) of conjugate 5 (n ~ 10), MS MALDI-TOF: m / z 82110.
Пример 4. Получение конъюгата 5 нона-β-(1→3)-глюкозида с белком БСА при мольном соотношении углеводного лиганда и белка 16:1 без добавления ДМСО. Производное 3 в количестве 8,5 мг (5,09 мкмоль, 16 экв.) и БСА 4 в количестве 21 мг (0,318 мкмоль) растворили в 1.8 мл буферного раствора (350 мкМ KНСО3 и 70 мкМ Na2B4O7·10H2O, pH=9), выдерживали 6 суток при комнатной температуре. Конъюгат 3 выделяли колоночной гель-хроматографией на сефадексе G-15 в воде и лиофилизовали. Получили 20,8 мг (0,21 мкмоль, 81%) конъюгата 3 (n ~7), MS MALDI-TOF: m/z 77230.Example 4. Obtaining a conjugate of 5 nona-β- (1 → 3) -glucoside with BSA protein at a molar ratio of carbohydrate ligand to protein 16: 1 without the addition of DMSO. Derivative 3 in an amount of 8.5 mg (5.09 μmol, 16 equiv.) And BSA 4 in an amount of 21 mg (0.318 μmol) were dissolved in 1.8 ml of buffer solution (350 μM KHCO 3 and 70 μM Na 2 B 4 O 7 · 10H 2 O, pH = 9), kept for 6 days at room temperature. Conjugate 3 was isolated by column chromatography on Sephadex G-15 in water and lyophilized. Received 20.8 mg (0.21 μmol, 81%) of conjugate 3 (n ~ 7), MS MALDI-TOF: m / z 77230.
Пример 5. Получение конъюгата 5 нона-β-(1→3)-глюкозида с белком БСА при мольном соотношении углеводного лиганда и белка 16:1 в присутствии ДМСО. Производное 3 в количестве 8,5 мг (5,09 мкмоль, 16 экв.) и БСА 4 в количестве 21 мг (0,318 мкмоль) растворили в смеси 1.8 мл буферного раствора (350 мкМ KНСО3 и 70 мкМ Na2B4O7·10H2O, pH=9) и 0,2 мл ДМСО, выдерживали 6 суток при комнатной температуре. Конъюгат 3 выделяли колоночной гель-хроматографией на сефадексе G-15 в воде и лиофилизовали. Получили 22,8 мг (0,28 мкмоль, 87%) конъюгата 3 (n ~10), MS MALDI-TOF: m/z 82150.Example 5. Obtaining a conjugate of 5 nona-β- (1 → 3) -glucoside with BSA protein with a molar ratio of carbohydrate ligand to protein 16: 1 in the presence of DMSO. Derivative 3 in an amount of 8.5 mg (5.09 μmol, 16 equiv.) And BSA 4 in an amount of 21 mg (0.318 μmol) were dissolved in a mixture of 1.8 ml of buffer solution (350 μM KHCO 3 and 70 μM Na 2 B 4 O 7 · 10H 2 O, pH = 9) and 0.2 ml of DMSO, kept for 6 days at room temperature. Conjugate 3 was isolated by column chromatography on Sephadex G-15 in water and lyophilized. Received 22.8 mg (0.28 μmol, 87%) of conjugate 3 (n ~ 10), MS MALDI-TOF: m / z 82150.
Источники информацииInformation sources
1. Dick. W.E., Jr. and M.Beurret. 1989. Glycoconjugates of bacterial carbohydrate antigens, p.48-114. In: Conjugate Vaccines Contributions to Microbiology and Immunology. J.M.Cruse and R.E.Lewis, Jr., (eds) S.Karger, Basel.1. Dick. W.E., Jr. and M.Beurret. 1989. Glycoconjugates of bacterial carbohydrate antigens, p. 48-114. In: Conjugate Vaccines Contributions to Microbiology and Immunology. J. M. Kruse and R. E. Lewis, Jr., (eds) S. Karger, Basel.
2. Chernyak, A.; Karavanov, A.; Ogawa, Y.; Kováč, P.Carbohydr. Res. 2001, 330, 479-486.2. Chernyak, A .; Karavanov, A .; Ogawa, Y .; Kováč, P. Carbohydr. Res. 2001, 330, 479-486.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2011129357/10A RU2476444C1 (en) | 2011-07-15 | 2011-07-15 | METHOD OF PRODUCING CONJUGATE OF NONA-β-(1→3)-GLUCOSIDE WITH BOVINE SERUM ALBUMIN USING SQUARATE TECHNIQUE |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2011129357/10A RU2476444C1 (en) | 2011-07-15 | 2011-07-15 | METHOD OF PRODUCING CONJUGATE OF NONA-β-(1→3)-GLUCOSIDE WITH BOVINE SERUM ALBUMIN USING SQUARATE TECHNIQUE |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2011129357A RU2011129357A (en) | 2013-01-20 |
| RU2476444C1 true RU2476444C1 (en) | 2013-02-27 |
Family
ID=48805131
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2011129357/10A RU2476444C1 (en) | 2011-07-15 | 2011-07-15 | METHOD OF PRODUCING CONJUGATE OF NONA-β-(1→3)-GLUCOSIDE WITH BOVINE SERUM ALBUMIN USING SQUARATE TECHNIQUE |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2476444C1 (en) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20090304734A1 (en) * | 2005-05-06 | 2009-12-10 | Stefan Oscarson | Immunogens for meningitidis-a vaccines |
| US7722890B2 (en) * | 2002-04-25 | 2010-05-25 | Theracarb, Inc. | Synthetic anti-Candida albicans oligosaccharide based vaccines |
-
2011
- 2011-07-15 RU RU2011129357/10A patent/RU2476444C1/en active IP Right Revival
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7722890B2 (en) * | 2002-04-25 | 2010-05-25 | Theracarb, Inc. | Synthetic anti-Candida albicans oligosaccharide based vaccines |
| US20090304734A1 (en) * | 2005-05-06 | 2009-12-10 | Stefan Oscarson | Immunogens for meningitidis-a vaccines |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| FERNÁNDEZ-SANTANA V. ет al. Antigenicity and Immunogenicity of a Synthetic Oligosaccharide-Protein Conjugate Vaccine against Haemophilus influenzae Type b/ Infect Immun. - 2004 December; 72(12):7115-7123. * |
| КАРЕЛИН А.А. и др. Синтез олигосахаридных фрагментов маннана клеточной стенки Candida albicans и их конъюгатов с БСА // Биоорганическая химия. - 2007, т.33, No.1, с.119-130. * |
| КАРЕЛИН А.А. и др. Синтез олигосахаридных фрагментов маннана клеточной стенки Candida albicans и их конъюгатов с БСА // Биоорганическая химия. - 2007, т.33, №1, с.119-130. FERNÁNDEZ-SANTANA V. ет al. Antigenicity and Immunogenicity of a Synthetic Oligosaccharide-Protein Conjugate Vaccine against Haemophilus influenzae Type b/ Infect Immun. - 2004 December; 72(12):7115-7123. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2011129357A (en) | 2013-01-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP7494276B2 (en) | Polypeptide antigen conjugates with unnatural amino acids | |
| JP5699174B2 (en) | Immunogen for meningitis type A vaccine | |
| JP2020523323A (en) | A multivalent conjugated vaccine comprising a bivalent or multivalent conjugated polysaccharide that provides improved immunogenicity and binding activity | |
| US20140341909A1 (en) | Conjugation of biomolecules using diels-alder cycloaddition | |
| CA2340692A1 (en) | Immunogenic .beta.-propionamido-linked polysaccharide protein conjugate useful as a vaccine produced using an n-acryloylated polysaccharide | |
| JP2002539294A (en) | Reductive amination of polysaccharides | |
| BR112014018815B1 (en) | IMMUNOGENIC COMPOSITION COMPRISING PROTEIN-POLYSACCHARIDE X CONJUGATE FROM N. MENINGITIDIS | |
| AU2004207647B2 (en) | Conjugates obtained by reductive amination of serotype 5 pneumococcus capsular polysaccharide | |
| US20140170151A1 (en) | Synthetic Oligosaccharides for Staphylococcus Vaccine | |
| Wright et al. | Preparation of synthetic glycoconjugates as potential vaccines against Shigella flexneri serotype 2a disease | |
| JPH11508564A (en) | Methods for producing synthetic N-linked glycoconjugates | |
| US20220040283A1 (en) | Multivalent Pneumococcal Glycoconjugate Vaccines Containing Emerging Serotype 24F | |
| Bongat et al. | Multimeric bivalent immunogens from recombinant tetanus toxin HC fragment, synthetic hexasaccharides, and a glycopeptide adjuvant | |
| RU2476444C1 (en) | METHOD OF PRODUCING CONJUGATE OF NONA-β-(1→3)-GLUCOSIDE WITH BOVINE SERUM ALBUMIN USING SQUARATE TECHNIQUE | |
| US5952454A (en) | Linking compounds useful for coupling carbohydrates to amine-containing carriers | |
| JP4850377B2 (en) | Ribose-ribitol phosphate oligosaccharide derivative and vaccine containing the same | |
| Banoub et al. | Synthesis of glycoconjugates derived from various lipopolysaccharides of the Vibrionaceae family | |
| AU664609B2 (en) | Synthetic lipid a glycoconjugate antigens for use in vaccines | |
| Pozsgay et al. | Towards an oligosaccharide-based glycoconjugate vaccine against Shigella dysenteriae type 1 | |
| WO2009033269A1 (en) | Novel polysaccharide immunogens from alloiococcus otitidis and synthesis of a glycoconjugate vaccine thereof |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20140716 |
|
| NF4A | Reinstatement of patent |
Effective date: 20161120 |
|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20180716 |
|
| NF4A | Reinstatement of patent |
Effective date: 20210413 |