RU2470649C1

RU2470649C1 - Method of treating consequences of herpetic meningoencephalitis with use of autologous mesenchymal stem cells

Info

Publication number: RU2470649C1
Application number: RU2011121013/15A
Authority: RU
Inventors: Евгений Ильич Зарайский; Галина Валериевна Павлова; Галина Николаевна Огудина; Дмитрий Юрьевич Пантелеев; Евгений Леонидович Мулик; Александр Владимирович Ревищин; Екатерина Юрьевна Рыбалкина; Фёдор Викторович Исаев
Original assignee: Российская Федерация, От Имени Которой Выступает Министерство Образования И Науки Российской Федерации
Priority date: 2011-05-25
Filing date: 2011-05-25
Publication date: 2012-12-27

Abstract

FIELD: medicine.

SUBSTANCE: invention refers to medicine, namely neurology, and may be used for treating complications caused by herpetic meningoencephalitis. A therapeutic effect is ensured by the endolumbar introduction of 1000000 autologous mesenchymal stem cells followed by the intramuscular introduction of ribonucleic acid hydrolysate 100 mg in one injection daily in the therapeutic course of 30 days.

EFFECT: use of the given method enables faster and more effective recovery of patient's cerebral functions.

1 ex

Description

Изобретение относится к области медицины, клеточной биологии, в частности к применению аутологичных мезенхимальных стволовых клеток (АМСК) для восстановления поражений нервной системы, вызванных герпетическим менингоэнцефалитом. Для восстановления мозговых функций использовали эндолюмбальное введение 1000000 АМСК, продифференцированных ретиноевой кислотой и внутримышечное введение гидролизата рибонуклеиновой кислоты, содержащего смесь моно- и олигонуклеотидов (ди-, три-, тетра-, пента-, гекса) в дозе 100 мг на введение ежедневно курсами по 30 инъекций. Изобретение позволяет повысить эффективность реабилитационной терапии при восстановлении поражений нервной системы, вызванных герпетическим менингоэнцефалитом.The invention relates to the field of medicine, cell biology, in particular to the use of autologous mesenchymal stem cells (AMSC) for the restoration of damage to the nervous system caused by herpetic meningoencephalitis. To restore brain functions, we used endolumbar administration of 1,000,000 AMSCs differentiated with retinoic acid and intramuscular administration of a ribonucleic acid hydrolyzate containing a mixture of mono- and oligonucleotides (di-, tri-, tetra-, penta-, hexa) at a dose of 100 mg for daily administration in courses of 30 injections. The invention improves the effectiveness of rehabilitation therapy in the restoration of lesions of the nervous system caused by herpetic meningoencephalitis.

Описание изобретенияDescription of the invention

На сегодняшний день задача эффективного восстановления пациентов с тяжелой неврологической патологией головного мозга, в том числе и последствиями герпетического менингоэнцефалита, является актуальной. Применяемые методы зачастую оказываются малоэффективными. Регенерация пораженной нервной ткани идет крайне медленно, а зачастую практически незаметна после окончания процесса рубцевания. Некоторые перспективы для решения этой сложной задачи наметились с появлением клеточной терапии.To date, the task of effective recovery of patients with severe neurological pathology of the brain, including the consequences of herpetic meningoencephalitis, is relevant. The methods used are often ineffective. The regeneration of the affected nerve tissue is extremely slow, and often almost imperceptible after the end of the scarring process. Some prospects for solving this complex problem have emerged with the advent of cell therapy.

Клеточная терапия позволяет активировать регенерацию многих пораженных органов и тканей. Функцию обновления и восстановления тканей in vivo выполняют стволовые клетки - недифференцированные предшественники клеток различных типов.Cell therapy allows you to activate the regeneration of many affected organs and tissues. The function of tissue renewal and restoration in vivo is performed by stem cells - undifferentiated cell precursors of various types.

Известны различные типы стволовых клеток взрослого организма - геоматопоэтические, нейрональные, мезенхимальные и т.д. Наибольшие перспективы связаны с мезенхимальными стволовыми клетками, способными дифференцироваться не только в ткани мезенхимального происхождения, но также и в ткани других зародышевых листков (Fridenshtein A.J., Deriglazova U.F., Kulagina N.N. et al. Precursors for fibroblasts in different populations of hematopoietic cells as detected by the in vitro colony assay method. Exp. Hematol. 1974. Vol.2. P.83-92).Various types of adult stem cells are known - geomatopoietic, neuronal, mesenchymal, etc. The greatest prospects are associated with mesenchymal stem cells that can differentiate not only in tissues of mesenchymal origin, but also in the tissue of other germ layers (Fridenshtein AJ, Deriglazova UF, Kulagina NN et al. Precursors for fibroblasts in different populations of hematopoietic cells as detected by the in vitro colony assay method. Exp. Hematol. 1974. Vol.2. P.83-92).

На сегодня известны многочисленные попытки регенерации нервной ткани при тяжелой неврологической патологии с помощью стволовых клеток. Стволовые клетки по методу получения можно подразделить на эмбриональные стволовые клетки, фетальные стволовые клетки и аутологичные стволовые клетки.To date, numerous attempts have been made to regenerate nerve tissue in severe neurological pathology using stem cells. According to the production method, stem cells can be divided into embryonic stem cells, fetal stem cells and autologous stem cells.

Эмбриональные стволовые клетки получают путем культивирования in vitro клеток эмбрионов, полученных на ранних стадиях эмбриогенеза. Эти клетки плюрипотентны, способны дифференцироваться в клетки практически любых тканей и органов, обладают огромным потенциалом роста. Однако введение таких клеток в мозг млекопитающих приводит, зачастую, к образованию опухолей. Поэтому их применение для целей терапии весьма проблематично.Embryonic stem cells are obtained by culturing in vitro embryo cells obtained in the early stages of embryogenesis. These cells are pluripotent, able to differentiate into cells of almost any tissue and organ, and have huge growth potential. However, the introduction of such cells into the mammalian brain often leads to the formation of tumors. Therefore, their use for therapeutic purposes is very problematic.

Фетальные стволовые клетки, получаемые из плодов первого-второго триместра беременности, довольно широко используются с целью регенерации различных поражений, в том числе и органов нервной системы. Недостатками данной технологии являются: опасность заражения реципиента вирусами (в первую очередь, ВИЧ и гепатитов) и прионами; морально-этические соображения и несоответствие антигенной структуры донорского материала, приводящее к его отторжению реципиентом. Несмотря на низкую антигенность эмбрионального клеточного материала после замещения им пораженных участков тканей реципиента и дифференцировки, на поверхности таких клеток появляются полноценные антигены главного комплекса гистосовместимости, что приводит к их отторжению.Fetal stem cells obtained from the fruits of the first or second trimester of pregnancy are quite widely used to regenerate various lesions, including organs of the nervous system. The disadvantages of this technology are: the risk of infection of the recipient with viruses (primarily HIV and hepatitis) and prions; moral and ethical considerations and the mismatch of the antigenic structure of the donor material, leading to its rejection by the recipient. Despite the low antigenicity of the embryonic cellular material after it replaces the affected areas of the recipient's tissues and differentiation, complete antigens of the main histocompatibility complex appear on the surface of such cells, which leads to their rejection.

Наиболее перспективными для регенерации нервной системы являются аутологичные стволовые клетки. Они полипотентны, обладают способностью к размножению, и методы их получения, а также безопасность введения давно известны на примере пересадок костного мозга и гемопоэтических стволовых клеток в гематологической клинике.The most promising for the regeneration of the nervous system are autologous stem cells. They are pluripotent, have the ability to reproduce, and the methods for their preparation, as well as the safety of administration, have long been known for example bone marrow and hematopoietic stem cell transplants in a hematological clinic.

Известны способы выделения (Fridenshtein A.J., Deriglazova U.F., Kulagina N.N. et al. Precursors for fibroblasts in different populations of hematopoietic cells as detected by the in vitro colony assay method. Exp. Hematol. 1974. Vol.2. P.83-92; патент RU 225252).Known isolation methods (Fridenshtein AJ, Deriglazova UF, Kulagina NN et al. Precursors for fibroblasts in different populations of hematopoietic cells as detected by the in vitro colony assay method. Exp. Hematol. 1974. Vol.2. P.83-92; patent RU 225252).

Однако попытки лечения грубой мозговой патологии при помощи АМСК на сегодня не увенчались значительными успехами. Возможно, это связано с отсутствием сигналов, необходимых для регенерации ткани после окончания процесса рубцевания.However, attempts to treat gross brain pathology with the help of AMSK have not been crowned with significant success today. Perhaps this is due to the lack of signals necessary for tissue regeneration after the scarring process is completed.

Известен эффект регенерации нервной ткани при тапеторетинальных дистрофиях под действием низкомолекулярной фракции гидролизата рибонуклеиновой кислоты (Фукс Б.Б. и др., «О специфическом лечебном эффекте рибонуклеотидов при тапеторетинальных дистрофиях», Вестник АМН, СССР, 1971, №7, стр.63-68). Однако этот препарат не применялся при лечении последствий герпетического менингоэнцефалита и других грубых патологий головного мозга.The known effect of regeneration of nerve tissue in tapetoretinal dystrophies under the action of a low molecular weight fraction of ribonucleic acid hydrolyzate (Fuchs B. B. et al., “On the specific therapeutic effect of ribonucleotides in tapetoretinal dystrophies”, Vestnik AMN, USSR, 1971, No. 7, p. 63- 68). However, this drug was not used in the treatment of the effects of herpetic meningoencephalitis and other gross brain pathologies.

Нами предложен способ восстановления мозговых функций у пациентов, перенесших герпетический менингоэнцефалит путем эндолюмбального введения 1000000 АМСК, продифференцированных ретиноевой кислотой и внутримышечное введение гидролизата рибонуклеиновой кислоты, содержащего смесь моно- и олигонуклеотидов (ди-, три-, тетра-, пента-, гекса) в дозе 100 мг на введение ежедневно курсами по 30 инъекций.We have proposed a method for restoring brain functions in patients undergoing herpetic meningoencephalitis by endolumbar administration of 1,000,000 AMSKs differentiated with retinoic acid and intramuscular administration of a ribonucleic acid hydrolyzate containing a mixture of mono- and oligonucleotides (di-, tri-, tetra-, penta-, hexa) a dose of 100 mg per administration daily in courses of 30 injections.

Техническим результатом изобретения является ускорение и повышенная эффективность восстановления мозговых функций пациентов, вызванные усилением регенеративных процессов в головном мозге.The technical result of the invention is the acceleration and increased efficiency of restoration of the brain functions of patients, caused by increased regenerative processes in the brain.

ПримерExample

Пациентка А.А., диагноз: последствия герпетического менингоэнцефалита - субтотальная энцефалопатия с синдромом двигательной гиперактивности и грубым нарушением высших корковых функций. Проводимое лечение (дельторан, кортексин, глятелин, фенибут, пантогам) видимого улучшения состояния не дало. Было проведено лечение по следующей схеме.Patient A.A., diagnosis: consequences of herpetic meningoencephalitis - subtotal encephalopathy with motor hyperactivity syndrome and gross violation of higher cortical functions. The treatment (deltoran, cortexin, glatelin, phenibut, pantogam) did not give a visible improvement. The treatment was carried out according to the following scheme.

1. Получили пунктат костного мозга пациентки из гребня подвздошной кости в объеме 1 мл;1. Received a puncture of the bone marrow of the patient from the iliac crest in a volume of 1 ml;

2. Пунктат в стерильных условиях был помещен на лед и доставлен в культуральную лабораторию;2. Punctate under sterile conditions was placed on ice and delivered to a culture laboratory;

3. Пунктат десятикратно промывали раствором, содержащим среду RPMI 1640, глютамин, гентамицин, 10% фетальной бычьей сыворотки;3. Punctate was washed ten times with a solution containing RPMI 1640 medium, glutamine, gentamicin, 10% fetal bovine serum;

4. Отмытую строму костного мозга измельчили до фрагментов размером 1 и менее миллиметра и поместили в плоскодонный культуральный флакон, содержащий среду RPMI 1640 (40%), среду ДМЕМ (40%), фетальную бычью сыворотку (20%), глютамин, гентамицин, суплемент ("Sigma" США) и инкубировали при 37°C в атмосфере 6% CO₂;4. The washed bone marrow stroma was crushed to fragments of 1 mm or less in size and placed in a flat-bottomed culture bottle containing RPMI 1640 medium (40%), DMEM medium (40%), fetal bovine serum (20%), glutamine, gentamicin, complement ("Sigma" USA) and incubated at 37 ° C in an atmosphere of 6% CO ₂ ;

5. Смену среды проводили 1 раз в 2 дня. Через 2 недели клетки образовавшегося монослоя пересеяли, а еще через 2 недели клетки сняли с монослоя, обработали в течение 2 часов ретиноевой кислотой в бессывороточной среде и ввели эднолюмбально пациентке в количестве 1000000 (1 млн) в объеме 1 мл. За день до введения пациентке внутримышечно ввели 4 мг доксометазона;5. The change of environment was carried out 1 time in 2 days. After 2 weeks, the cells of the formed monolayer were reseeded, and after another 2 weeks the cells were removed from the monolayer, treated with retinoic acid in serum-free medium for 2 hours and introduced into the patient in an amount of 1 ml of 1000000 (1 million) ednolumbally to the patient. The day before administration, the patient was injected intramuscularly with 4 mg of doxometasone;

6. Через 3 дня пациентке начали вводить гидролизат рибонуклеиновой кислоты внутримышечно в количестве 100 мг на инъекцию 1 раз в день. Курс введения продолжали в течение 30 дней. Затем курс введения гидролизата рибонуклеиновой кислоты повторяли четырежды с месячным перерывом.6. After 3 days, the patient began to inject intramuscularly a ribonucleic acid hydrolyzate in an amount of 100 mg per injection once a day. The course of administration was continued for 30 days. Then the course of administration of the ribonucleic acid hydrolyzate was repeated four times with a monthly break.

В результате терапии отмечены следующие положительные эффекты: улучшилось ее восприятие смысла слов, она начала понимать обращенные к ней просьбы. Начала самостоятельно делать гимнастику. Освоила ранее недоступные для нее движения - вставление ключа в замочную скважину, открывание-закрывание двери. Начала играть в настольные игры с партнерами (домино, карты), что свидетельствует о восстановлении способности устного счета. Практически полностью восстановила навыки самообслуживания. Частично восстановила письменную речь.As a result of therapy, the following positive effects were noted: her perception of the meaning of words improved, she began to understand the requests addressed to her. I started doing gymnastics on my own. I mastered previously inaccessible movements for her - inserting a key into a keyhole, opening and closing a door. She began to play board games with partners (dominoes, cards), which indicates the restoration of the ability of oral counting. Almost completely restored self-care skills. Partially restored the written language.

Таким образом, предложенная терапия позволила при отсутствии эффекта традиционной терапии восстановить многие сложные функции головного мозга после его грубого поражения.Thus, the proposed therapy made it possible, in the absence of the effect of traditional therapy, to restore many complex functions of the brain after its gross defeat.

Claims

A method of treating the effects of herpetic meningoencephalitis using autologous mesenchymal stem cells, characterized in that to achieve a therapeutic effect, 1,000,000 autologous mesenchymal stem cells are injected endolumbally, and then intramuscularly 100 mg ribonucleic acid hydrolyzate per injection daily for 30 days.