RU2456596C2 - Diagnostic technique for endogenous intoxication - Google Patents

Diagnostic technique for endogenous intoxication Download PDF

Info

Publication number
RU2456596C2
RU2456596C2 RU2010140352/15A RU2010140352A RU2456596C2 RU 2456596 C2 RU2456596 C2 RU 2456596C2 RU 2010140352/15 A RU2010140352/15 A RU 2010140352/15A RU 2010140352 A RU2010140352 A RU 2010140352A RU 2456596 C2 RU2456596 C2 RU 2456596C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
endogenous intoxication
staining
histological
degree
histological sections
Prior art date
Application number
RU2010140352/15A
Other languages
Russian (ru)
Other versions
RU2010140352A (en
Inventor
Вячеслав Борисович Барканов (RU)
Вячеслав Борисович Барканов
Светлана Александровна Калашникова (RU)
Светлана Александровна Калашникова
Антон Николаевич Горячев (RU)
Антон Николаевич Горячев
Original Assignee
Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Волгоградский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Волгоградский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" filed Critical Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Волгоградский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию"
Priority to RU2010140352/15A priority Critical patent/RU2456596C2/en
Publication of RU2010140352A publication Critical patent/RU2010140352A/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2456596C2 publication Critical patent/RU2456596C2/en

Links

Abstract

FIELD: medicine.
SUBSTANCE: histological sections of internal organs are examined under a microscope; the histological examination is preceded by preparing a solution of diazotised aniline colour for staining the histological sections to detect indole, phenol, skatole; the histological section is stained and microphotographed; digital microphotos of the histological sections are processed on a computer. An average degree of staining with the diazotised aniline colour is estimated by the RGB colour grade system, and if observing the degree of staining within 250 to 100 RGB colour grade units, a mild severity of endogenous intoxication is diagnosed; the degree of staining varying from 100 to 50 RGB colour grade units shows a moderate severity of endogenous intoxication, while severe endogenous intoxication is indicated by the degree of staining being 50 to 0 RGB colour grade units.
EFFECT: using the technique enables higher toxicity and specificity of post-mortem diagnosis of endogenous intoxication based on the immediate detection of toxic metabolites collected in the internal organs.
1 tbl

Description

Изобретение относится к области медицины, а именно к патологоанатомической и судебно-медицинской практике, и может быть использовано для посмертной морфологической диагностики эндогенной интоксикации.The invention relates to medicine, namely to pathological and forensic practice, and can be used for posthumous morphological diagnosis of endogenous intoxication.

Сутью эндогенной интоксикации является нарушение работы внутренних органов за счет транслокации бактериального липолисахарида грамотрицательных бактерий из кишечника в системный кровоток. Повреждение печени и почек приводит к недостаточной инактивации и выведению токсинов, что вновь повреждает внутренние органы. Одним из органов, страдающих при эндогенной интоксикации, является кишечник. При эндогенной интоксикации в кишечнике увеличивается проницаемость, и в кровоток, помимо бактериального липополисахарида, проникают продукты гниения ароматических аминокислот - фенол, индол, скатол.The essence of endogenous intoxication is a malfunction of internal organs due to translocation of the bacterial lipolysaccharide of gram-negative bacteria from the intestine into the systemic circulation. Damage to the liver and kidneys leads to insufficient inactivation and elimination of toxins, which again damages the internal organs. One of the organs suffering from endogenous intoxication is the intestines. With endogenous intoxication, permeability increases in the intestine, and, in addition to bacterial lipopolysaccharide, the products of rotting aromatic amino acids - phenol, indole, skatol, penetrate the bloodstream.

Известен способ морфологической диагностики эндогенной интоксикации, суть которого заключается в морфологической и морфометрической оценке на гистологических препаратах таких показателей, как степень выраженности фиброза, объемная доля ядер, соединительной ткани, относительная площадь, занимаемая клетками и т.д. [Писарев В.Б., Богомолова Н.В., Новочадов В.В., 2008].A known method of morphological diagnosis of endogenous intoxication, the essence of which is the morphological and morphometric assessment of histological preparations of indicators such as the severity of fibrosis, volume fraction of nuclei, connective tissue, the relative area occupied by cells, etc. [Pisarev VB, Bogomolova N.V., Novochadov V.V., 2008].

Недостатком способа является малая специфичность гепатофиброз, нефросклероз, пневмопатия по отдельности и в совокупности обнаруживаются при других заболеваниях. Также к недостаткам способа относится трудоемкость в морфометрическом подсчете клеточных и тканевых элементов. Еще один недостаток способа - это оценка степени эндогенной интоксикации по конечному результату - изменению органов и тканей, а не по обнаружению токсинов, таких как фенол, индол, скатол.The disadvantage of this method is the low specificity of hepatofibrosis, nephrosclerosis, pneumopathy individually and in the aggregate are found in other diseases. The disadvantages of the method include the complexity in the morphometric calculation of cellular and tissue elements. Another disadvantage of this method is the assessment of the degree of endogenous intoxication by the end result - a change in organs and tissues, and not on the detection of toxins, such as phenol, indole, skatol.

Известен способ морфологической диагностики эндогенной интоксикации, который заключается в определении биохимических молекул - маркеров интоксикации - веществ средней молекулярной массы, их олигопептидной фракции [Малахова М.Я., 1995].A known method of morphological diagnosis of endogenous intoxication, which consists in the determination of biochemical molecules - markers of intoxication - substances of average molecular weight, their oligopeptide fraction [Malakhova M.Ya., 1995].

Недостатком способа является использование в качестве объекта исследования жидких сред организма - крови, мочи, лимфы. Данный способ неприменим для посмертной патологоанатомической и судебно-медицинской диагностики, когда не существует возможности изъять образцы жидких сред организма и диагностические процедуры приходится выполнять на тканевом материале - кусочках внутренних органов.The disadvantage of this method is the use as an object of study of body fluids - blood, urine, lymph. This method is not applicable for post-mortem pathological and forensic diagnostics, when it is not possible to remove samples of body fluids and diagnostic procedures have to be performed on tissue material - pieces of internal organs.

В качестве прототипа изобретения использован способ качественной гистологической окраски на индол, фенол, скатол, который провидится путем реакции индола, фенола и скатола на гистологических срезах с диазотированными анилиновыми красителями [Лилли Р., 1969].As a prototype of the invention, a method of high-quality histological staining for indole, phenol, skatol, which is provided by the reaction of indole, phenol and skatol on histological sections with diazotized aniline dyes [Lilly R., 1969], was used.

Недостатком способа является отсутствие количественного измерения индофенолпозитивного продукта на гистологических срезах.The disadvantage of this method is the lack of quantitative measurement of indophenol-positive product on histological sections.

Технической задачей предлагаемого изобретения является повышение точности и специфичности посмертной диагностики эндогенной интоксикации, основанной на непосредственном обнаружении токсических метаболитов, накапливающихся во внутренних органах, а также использование в качестве объекта исследования только кусочков внутренних органов.The technical task of the invention is to increase the accuracy and specificity of the posthumous diagnosis of endogenous intoxication, based on the direct detection of toxic metabolites that accumulate in the internal organs, as well as the use as an object of study only pieces of internal organs.

Поставленная задача достигается тем, что по способу диагностики эндогенной интоксикации, включающей проведение микроскопического исследования гистологических срезов внутренних органов, перед гистологическим исследованием готовят раствор диазотированного анилинового красителя для окрашивания гистологических срезов для обнаружения индола, фенола, скатола, являющихся маркерами эндогенной интоксикации; окрашивают гистологический срез, проводят микрофотографирование гистологических срезов и компьютерную обработку цифровых микрофотографий гистологических срезов, оценивают среднюю степень окрашивания диазотированным анилиновым красителем в системе цветности RGB и при степени окрашивания от 250 до 100 единиц цветности RGB диагностируют легкую степень эндогенной интоксикации, от 100 до 50 единиц цветности RGB диагностируют среднюю степень эндогенной интоксикации, от 50 до 0 единиц цветности RGB диагностируют тяжелую степень эндогенной интоксикации.This object is achieved by the fact that according to the method for diagnosing endogenous intoxication, including microscopic examination of histological sections of internal organs, a diazotized aniline stain solution is prepared before histological examination for staining of histological sections to detect indole, phenol, skatol, which are markers of endogenous intoxication; the histological section is stained, micrographs of the histological sections are photographed and digital micrographs of the histological sections are digitally processed, the average degree of staining with a diazotized aniline dye in the RGB color system is evaluated, and a degree of endogenous intoxication, from 100 to 50 color units, is diagnosed with a degree of staining from 250 to 100 units of RGB color RGB diagnose a moderate degree of endogenous intoxication, from 50 to 0 color units RGB diagnose a severe degree of endogenous intoxication tion.

Сущность заявляемого способа. Повышение точности и специфичности диагностики эндогенной интоксикации по заявляемому способу достигается использованием уже известных гистологических окрасок на обнаружение фенола, индола, скатола для верификации их в тканях внутренних органов и оценки с помощью этого способа эндогенной интоксикации. Для этого проводится диазотирование анилиновых красителей нитритом натрия в кислой среде и данный диазотированный краситель вступает в реакцию с индолом, фенолом и скатолом на гистологических срезах, окрашивая их.The essence of the proposed method. Improving the accuracy and specificity of the diagnosis of endogenous intoxication by the present method is achieved by using the already known histological stains for the detection of phenol, indole, skatol to verify them in the tissues of the internal organs and evaluate using this method of endogenous intoxication. For this, aniline dyes are diazotized with sodium nitrite in an acidic medium and this diazotized dye reacts with indole, phenol and skatol on histological sections, staining them.

Для полуколичественного анализа накопления индола, фенола, скатола можно использовать микрофотографирование гистологических срезов с дальнейшей обработкой цифровых изображений с помощью программных приложений «Adobe Photoshop». Обработка цифровых изображений проводится на микрофотографии, открытой в приложении «Adobe Photoshop 7.0.». Участок ткани, содержащий накопленный субстрат в виде индола, фенола и скатола, окрашивается диазотированным сафранином в синий цвет. На микрофотографии, открытой в приложении «Adobe Photoshop 7.0.», выделяется участок, окрашенный в синий цвет, что соответствует накоплению индола, фенола и скатола. Далее в Меню «Изображение» выбирается опция «Гистограмма» и в системе каналов цвета выбирается «Синий» («Blue»). Итогом вычислений гистограммы служит показатель - средняя величина («Способ»), выдающий ответ в единицах RGB. Измерение данного показателя в двадцати полях зрения в каждой области позволяет рассчитать среднее значение яркости в каждой исследуемой области и стандартное отклонение яркостиFor a semi-quantitative analysis of the accumulation of indole, phenol, skatol, microphotography of histological sections can be used with further processing of digital images using the Adobe Photoshop software applications. Processing of digital images is carried out on microphotography, opened in the application “Adobe Photoshop 7.0.”. The tissue site containing the accumulated substrate in the form of indole, phenol and scatol is stained with diazotized safranin in blue. In the micrograph opened in the Adobe Photoshop 7.0 application, a blue colored area is highlighted, which corresponds to the accumulation of indole, phenol and scatol. Then, in the “Image” menu, the “Histogram” option is selected and “Blue” is selected in the color channel system. The result of the calculation of the histogram is an indicator - the average value (“Method”), which gives the answer in units of RGB. Measurement of this indicator in twenty fields of view in each area allows you to calculate the average value of brightness in each studied area and the standard deviation of brightness

Наши исследования показали, что в норме индол, фенол и скатол отсутствуют в тканях внутренних органов. При степени окрашивания от 250 до 100 единиц цветности RGB диагностируется легкая степень эндогенной интоксикации, от 100 до 50 единиц цветности RGB диагностируется средняя степень эндогенной интоксикации, от 50 до 0 единиц цветности RGB диагностируется тяжелая степень эндогенной интоксикации.Our studies have shown that, normally, indole, phenol and skatol are absent in the tissues of internal organs. With a degree of staining from 250 to 100 units of RGB color, a slight degree of endogenous intoxication is diagnosed, from 100 to 50 units of RGB color, an average degree of endogenous intoxication is diagnosed, from 50 to 0 units of RGB color, a severe degree of endogenous intoxication is diagnosed.

Таким образом, предлагаемое решение задачи содержит новые признаки (использование уже существующей гистологической окраски для нового способа количественной диагностики патологического процесса) и имеет изобретательский уровень. Отличительные признаки необходимы и достаточны для достижения поставленной задачи. Исходя из вышеизложенного заявляемое техническое решение в целом отвечает критериям изобретения.Thus, the proposed solution to the problem contains new features (the use of an existing histological stain for a new method for the quantitative diagnosis of the pathological process) and has an inventive step. Distinctive features are necessary and sufficient to achieve the task. Based on the foregoing, the claimed technical solution generally meets the criteria of the invention.

Методика заявляемого способа диагностики эндогенной интоксикации включает проведение микроскопического исследования гистологических срезов внутренних органов, перед гистологическим исследованием готовят раствор диазотированного анилинового красителя для окрашивания гистологических срезов для обнаружения индола, фенола, скатола, являющихся маркерами эндогенной интоксикации; окрашивают гистологический срез, проводят микрофотографирование гистологических срезов и компьютерную обработку цифровых микрофотографий гистологических срезов, оценивают среднюю степень окрашивания диазотированным анилиновым красителем в системе цветности RGB и при степени окрашивания от 250 до 100 единиц цветности RGB диагностируют легкую степень эндогенной интоксикации, от 100 до 50 единиц цветности RGB диагностируют среднюю степень эндогенной интоксикации, от 50 до 0 единиц цветности RGB диагностируют тяжелую степень эндогенной интоксикации.The method of the proposed method for the diagnosis of endogenous intoxication includes conducting a microscopic examination of histological sections of internal organs, before a histological examination, a solution of a diazotized aniline dye is prepared to stain histological sections to detect indole, phenol, skatol, which are markers of endogenous intoxication; the histological section is stained, micrographs of the histological sections are photographed and digital micrographs of the histological sections are digitally processed, the average degree of staining with a diazotized aniline dye in the RGB color system is evaluated, and a degree of endogenous intoxication, from 100 to 50 color units, is diagnosed with a degree of staining from 250 to 100 units of RGB color RGB diagnose a moderate degree of endogenous intoxication, from 50 to 0 color units RGB diagnose a severe degree of endogenous intoxication tion.

Пример конкретного выполнения. Нами было проведено экспериментальное исследование, целью которого было установление зависимости между степенью тяжести эндогенной интоксикации и интенсивностью окраски тканей внутренних органов диазотированными красителями на индол, фенол, скатол.An example of a specific implementation. We conducted an experimental study, the purpose of which was to establish a relationship between the severity of endogenous intoxication and the intensity of staining of tissues of internal organs with diazotized dyes for indole, phenol, and skatol.

Работа была выполнена на 45 нелинейных белых крысах обоего пола массой 180-210 г. Выбор, содержание животных, моделирование патологических процессов и выведение крыс из опыта осуществляли на основе базисных нормативных документов МЗ РФ и рекомендаций ВОЗ.The work was carried out on 45 non-linear white rats of both sexes weighing 180-210 g. The selection, keeping of animals, modeling of pathological processes and deriving rats from experience were carried out on the basis of basic regulatory documents of the Ministry of Health of the Russian Federation and WHO recommendations.

При моделировании эндогенной интокскации у 25-ти животных была использована классическая модель с преимущественным поражением печени, основанная на комбинированном введении малых доз бактериального липополисахарида и тетрахлорметана в течение 30-ти суток [Писарев В.Б., Богомолова Н.В. Новочадов В.В., 2008].When modeling endogenous intoxication in 25 animals, a classical model was used with primary liver damage, based on the combined introduction of small doses of bacterial lipopolysaccharide and carbon tetrachloride for 30 days [Pisarev VB, Bogomolova N.V. Novochadov V.V., 2008].

20 интактных животных выступали в качестве контрольной группы.20 intact animals acted as a control group.

Животных выводили из эксперимента передозировкой нембутала.Animals were removed from the experiment by an overdose of Nembutal.

Выраженность эндогенной интоксикации верифицировали по следующим биохимическим показателям: содержанию в плазме крови веществ средней молекулярной массы (ВСММ) и их олигопептидных фракций, концентрации малонового диальдегида (МДА).The severity of endogenous intoxication was verified by the following biochemical parameters: the content in the blood plasma of substances of medium molecular weight (SCMM) and their oligopeptide fractions, the concentration of malondialdehyde (MDA).

В качестве органа для исследования степени накопления диазотированных фенола, индола, скатола нами была выбрана печень. Выбор обусловлен тем, что при эндогенной интокскации продукты гниения аминокислот поступают из кишечника в портальный кровоток. Таким образом, печень - это первый орган на пути кишечных токсинов.As an organ for studying the degree of accumulation of diazotized phenol, indole, and skatol, we chose the liver. The choice is due to the fact that during endogenous intoxication, the products of decay of amino acids enter the intestine from the intestine into the bloodstream. Thus, the liver is the first organ in the way of intestinal toxins.

С образцов тканей печени были получены гистологические срезы, которые окрашивали по общепринятой методике: гематоксилином и эозином по общепринятой методике. Для выявления соединительной ткани использовали окраску по ван Гизон.Histological sections were obtained from liver tissue samples, which were stained according to the standard method: hematoxylin and eosin according to the standard method. To identify connective tissue, Van Gieson stain was used.

Для окраски печени на индол, фенол, скатол проводилось диазотирование анилиновых красителей (в нашем случае мы использовали сафранин) с последующим диазосочетанием с индофенольными веществами в ткани печени уже на гистологических срезах.To stain the liver with indole, phenol, and skatol, aniline dyes were diazotized (in our case, we used safranin), followed by diazocomposition with indophenol substances in the liver tissue already on histological sections.

Диазотирование проводилось следующим способом. Использовали реактивы: сафранин, 1н. соляная кислота, нитрит натрия, п-диметиламинобензальдегид, концентрированная соляная кислота.Diazotization was carried out as follows. Used reagents: safranin, 1N. hydrochloric acid, sodium nitrite, p-dimethylaminobenzaldehyde, concentrated hydrochloric acid.

Готовится раствор А. - растворяют 1 ммоль сафранина (351 мг) в смеси 3 мл 1н. соляной кислоты и добавляют 6 мл дистиллированной воды. Охлаждают до 3°C. Перед окрашиванием к 9 мл этой смеси добавляют 1 мл 1М охлажденного раствора нитрита натрия.Solution A is prepared. - 1 mmol of safranin (351 mg) is dissolved in a mixture of 3 ml of 1N. hydrochloric acid and add 6 ml of distilled water. Cool to 3 ° C. Before staining, 1 ml of a 1M chilled sodium nitrite solution is added to 9 ml of this mixture.

Готовится раствор В. 1 г п-диметиламинобензальдегида, 10 мл концентрированной соляной кислоты, 30 мл ледяной уксусной кислоты.Solution B is prepared. 1 g of p-dimethylaminobenzaldehyde, 10 ml of concentrated hydrochloric acid, 30 ml of glacial acetic acid.

Протокол окрашивания.Staining protocol.

1. Срезы погружают в ксилол, далее в спирт.1. Sections are immersed in xylene, then in alcohol.

2. Быстро высушивают и погружают в раствор В - 5 мин, 25°С.2. Quickly dried and immersed in a solution In - 5 min, 25 ° C.

3. Промывают в 3-х сменах ледяной уксусной кислоты (30, 60, 60 сек).3. Washed in 3 shifts of glacial acetic acid (30, 60, 60 sec).

4 Добавляют 1 мл раствора А к 40 мл холодной ледяной уксусной кислоты, перемешивают и заливают смесью срезы в охлажденном сосуде - 5 мин.4 Add 1 ml of solution A to 40 ml of cold glacial acetic acid, mix and fill with a mixture of sections in a chilled vessel for 5 minutes.

5. Промывают в 2-х сменах ледяной уксусной кислоты.5. Washed in 2 shifts of glacial acetic acid.

6. Проводят через 3-4 смены ксилола.6. Carry out after 3-4 xylene changes.

7. Заключают срезы в бальзам под покровное стекло.7. Enclose slices in a balm under a coverslip.

Полученные гистологические препараты фотографировали насадкой - фотонасадкой DCM 130 к микроскопу Микмед-6 (ЛОМО, Россия).The obtained histological preparations were photographed using a DCM 130 photographic attachment to a Mikmed-6 microscope (LOMO, Russia).

Цифровые изображения обрабатывали программным пакетом «Adobe Photoshop» для построения гистограмм распределения красителя путем оценки яркости окраски в системе цветности RGB.Digital images were processed using the Adobe Photoshop software package for constructing histograms of dye distribution by evaluating the brightness of the color in the RGB color system.

Математическая обработка проводилась непосредственно из общей матрицы данных EXCEL 7.0 (Microsoft, USA) с привлечением возможностей программ STATGRAPH 5.1 (Microsoft, USA) и включала определение показателей средней, ее среднеквадратичного отклонения и ошибки репрезентативности.Mathematical processing was carried out directly from the EXCEL 7.0 general data matrix (Microsoft, USA) using the capabilities of STATGRAPH 5.1 programs (Microsoft, USA) and included determining the mean, its standard deviation, and representativeness errors.

При моделировании эндогенной интокскации концентрации ВСММ и их олигопептидные фракции регистрировались на уровне, превышающем аналогичные показатели в контрольной группе в 2,69 раза (Р<0,05) и в 2,32 раза (Р<0,05), соответственно (табл.1).When modeling endogenous intoxication, the concentrations of HSRM and their oligopeptide fractions were recorded at a level exceeding the same indices in the control group by 2.69 times (P <0.05) and 2.32 times (P <0.05), respectively (Table. one).

Таблица 1Table 1 Биохимические показатели выраженности эндогенной интоксикации у крыс (M±m)Biochemical indicators of the severity of endogenous intoxication in rats (M ± m) ПоказателиIndicators КонтрольThe control Эндогенная интоксикацияEndogenous intoxication ВСММ, усл.ед.HSRM, conventional units 0,16±0,020.16 ± 0.02 0,43±0,05*0.43 ± 0.05 * Олигопептиды, мг/лOligopeptides, mg / L 115,5±13,8115.5 ± 13.8 268,5±29,8*268.5 ± 29.8 * МДА, ммоль/г липидовMDA, mmol / g lipids 5,33±0,435.33 ± 0.43 11,40±0,94*11.40 ± 0.94 * Примечание. *р<0,05 по сравнению с исходным состоянием.Note. * p <0.05 compared with the initial state.

Аналогичное увеличение в плазме крови было обнаружено и для МДА.A similar increase in blood plasma was found for MDA.

Исходя из полученных данных можно говорить о том, что по биохимическим данным в опытной группе верифицировалось развитие эндогенной интоксикации.Based on the data obtained, we can say that according to biochemical data in the experimental group, the development of endogenous intoxication was verified.

При исследовании тканей печени в группе с эндогенной интокскацией развивались изменения по типу хронического токсического поражения печени с развитием, в конечном итоге, гепатофиброза. Наблюдался умеренно выраженный склероз перипортальных трактов, лимфогистиоцитарная инфильтрация новообразованной соединительной ткани.In the study of liver tissue in the group with endogenous intoxication, changes developed in the type of chronic toxic liver damage with the development, ultimately, hepatofibrosis. There was a moderate sclerosis of the periportal tracts, lymphohistiocytic infiltration of the newly formed connective tissue.

Гепатоциты, расположенные центролобулярно, были в состоянии вакуольной дистрофии, единичные из них - с явлениями кариопикноза и кариолизиза ядер. Печеночные клетки по периферии дольки повреждались в меньшей степени. Наряду с этим отмечено поражение малых вен и венул в виде разрастания волокнистой соединительной ткани стенок, пролиферации эндотелия с явлениями капилляризации синусоидов. Стенка сосудов и пространства Диссе находились в состоянии умеренного отека.Hepatocytes located centrolobularly were in a state of vacuole dystrophy, the only ones of them with the phenomena of karyopyknosis and karyolysis of nuclei. Liver cells on the periphery of the lobule were damaged to a lesser extent. Along with this, damage to the small veins and venules was noted in the form of proliferation of the fibrous connective tissue of the walls, proliferation of the endothelium with the phenomena of capillary sinusoids. The wall of the vessels and the Disse spaces were in a state of moderate edema.

Таким образом, морфологическое исследование также подтвердило развитие эндогенной интоксикации в опытной группе животных.Thus, the morphological study also confirmed the development of endogenous intoxication in the experimental group of animals.

При окрашивании тканей печени в контрольной группе незначительное накопление индофенолпозитивного субстрата наблюдалось в перипортальных областях печени, не затрагивая другие зоны печеночных долек. Такая локализация понятна, учитывая, что индол, фенол, скатол и в норме в микроколичествах проникают через кишечник в портальный кровоток и адсорбируются теми клетками, которые находятся ближе всего к портальной триаде.When staining liver tissue in the control group, a slight accumulation of indophenol-positive substrate was observed in the periportal areas of the liver, without affecting other areas of the hepatic lobules. This localization is understandable, given that indole, phenol, skatol and normally in micro quantities penetrate through the intestine into the portal bloodstream and are adsorbed by those cells that are closest to the portal triad.

В опытной группе с эндогенной интоксикацией накопление диазотированных индофенолов происходило на всем протяжении печеночной дольки - от портальной триады до центральной вены. Этому тоже можно найти объяснение - после того, как метаболические ресурсы всех клеток печени исчерпаны и они более не способны инактивировать индофенолы, последние накапливаются в цитоплазме клеток, не метаболизируясь. Избыток идет в системный кровоток, повреждая органы.In the experimental group with endogenous intoxication, the accumulation of diazotized indophenols occurred throughout the hepatic lobule - from the portal triad to the central vein. This can also be explained - after the metabolic resources of all liver cells are exhausted and they are no longer able to inactivate indophenols, the latter accumulate in the cytoplasm of the cells without being metabolized. Excess goes into the systemic circulation, damaging organs.

Морфометрическое исследование тканей печени в диазоокраске показало, что в группе сравнения максимальное накопления субстрата соответствовало 230,6±10,9 единиц цветности RGB. В опытной группе этот показатель находился в пределах 78,4±6,3 единиц цветности RGB.A morphometric study of liver tissue in diazo dye showed that in the comparison group, the maximum accumulation of the substrate corresponded to 230.6 ± 10.9 units of RGB color. In the experimental group, this indicator was within 78.4 ± 6.3 units of color RGB.

Исходя из результатов исследования можно говорить о том, что при эндогенной интоксикации происходит статистически достоверное увеличение количества индола, фенола, скатола в цитоплазме клеток печени, что может служить диагностическим критерием для посмертной морфологической диагностики эндогенной интоксикации.Based on the results of the study, we can say that with endogenous intoxication there is a statistically significant increase in the amount of indole, phenol, skatole in the cytoplasm of liver cells, which can serve as a diagnostic criterion for the posthumous morphological diagnosis of endogenous intoxication.

Преимущество и положительный эффект заявляемого способа.The advantage and positive effect of the proposed method.

Использование гистологической окраски диазотированными анилиновыми красителями тканей внутренних органов в заявленном способе значительно облегчало выявление индола, фенола, скатола. В целом это повышало точность посмертной диагностики эндогенной интоксикации. Наши показатели являются унифицированными количественными параметрами, которые являются объективными критериями диагностики эндогенной интоксикации.The use of histological staining with diazotized aniline dyes of tissues of internal organs in the claimed method significantly facilitated the detection of indole, phenol, skatol. In general, this increased the accuracy of the posthumous diagnosis of endogenous intoxication. Our indicators are unified quantitative parameters, which are objective criteria for the diagnosis of endogenous intoxication.

Источники информации, принятые во внимание при оформлении заявленного изобретенияSources of information taken into account when making the claimed invention

1. Писарев В.Б., Богомолова Н.В., Новочадов В.В. Бактериальный эндотоксикоз: взгляд патолога. - Волгоград. - Изд-во ВолГМУ. - 2008. - 310 с.1. Pisarev VB, Bogomolova N.V., Novochadov V.V. Bacterial endotoxemia: a pathologist's view. - Volgograd. - Publishing House of VolSMU. - 2008 .-- 310 s.

2. Малахова М.Я. Метод оценки эндогенной интокскации. - СПб. - 1995. - 72 с.2. Malakhova M.Ya. Method for assessing endogenous intoxication. - SPb. - 1995. - 72 p.

3. Лилли Р. Патогистологическая техника и практическая гистохимия. - М.: - Изд-во «Мир». - 1969. - 648 с.3. Lilly R. Pathological technology and practical histochemistry. - M.: - Publishing house "Mir". - 1969. - 648 p.

Claims (1)

Способ диагностики эндогенной интоксикации, включающий проведение микроскопического исследования гистологических срезов внутренних органов, отличающийся тем, что перед гистологическим исследованием готовят раствор диазотированного анилинового красителя для окрашивания гистологических срезов для обнаружения индола, фенола, скатола, являющихся маркерами эндогенной интоксикации, окрашивают гистологический срез, проводят микрофотографирование гистологических срезов и компьютерную обработку цифровых микрофотографий гистологических срезов, оценивают среднюю степень окрашивания диазотированным анилиновым красителем в системе цветности RGB и при степени окрашивания от 250 до 100 единиц цветности RGB диагностируют легкую степень эндогенной интоксикации, от 100 до 50 единиц цветности RGB диагностируют среднюю степень эндогенной интоксикации, от 50 до 0 единиц цветности RGB диагностируют тяжелую степень эндогенной интоксикации. A method for diagnosing endogenous intoxication, including microscopic examination of histological sections of internal organs, characterized in that before histological examination a solution of diazotized aniline dye is prepared for staining of histological sections to detect indole, phenol, scatol, which are markers of endogenous intoxication, the histological section is stained, histological sections are photographed, micrographs are taken of the histological section slices and computer processing of digital microphotographs of histological sections, evaluate the average degree of staining with a diazotized aniline dye in the RGB color system and with a degree of staining from 250 to 100 units of RGB color, a slight degree of endogenous intoxication is diagnosed, from 100 to 50 units of RGB color, a medium degree of endogenous intoxication is diagnosed, from 50 to 0 color units RGB is diagnosed with severe endogenous intoxication.
RU2010140352/15A 2010-10-01 2010-10-01 Diagnostic technique for endogenous intoxication RU2456596C2 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2010140352/15A RU2456596C2 (en) 2010-10-01 2010-10-01 Diagnostic technique for endogenous intoxication

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2010140352/15A RU2456596C2 (en) 2010-10-01 2010-10-01 Diagnostic technique for endogenous intoxication

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2010140352A RU2010140352A (en) 2012-04-10
RU2456596C2 true RU2456596C2 (en) 2012-07-20

Family

ID=46031383

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2010140352/15A RU2456596C2 (en) 2010-10-01 2010-10-01 Diagnostic technique for endogenous intoxication

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2456596C2 (en)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2572719C2 (en) * 2014-04-08 2016-01-20 Государственное бюджетное образовательное учреждение дополнительного профессионального образования "ПЕНЗЕНСКИЙ ИНСТИТУТ УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЯ ВРАЧЕЙ" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ДПО ПИУВ Минздрава России) Early diagnostic technique for endogenous intoxication
RU2734820C2 (en) * 2018-06-25 2020-10-23 Государственное бюджетное учреждение здравоохранения города Москвы Московский клинический научно-практический центр им. А.С. Логинова Департамента здравоохранения города Москвы Method for prediction of bacterial translocation in chronic echinococcosis

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ЛИЛЛИ Р. Патогистологическая техника и практическая гистохимия. - М.: Мир, 1962, МАРГУЛИС Д. Photoshop 6 для профессионалов: классическое руководство по цветокоррекции // Пер. с англ. - М.: OOO «РТВ-Медиа», 2001, с.153-167. RU 2378991 с.2, 20.01.2010. Лабораторная диагностика синдрома эндогенной интоксикации. Методические рекомендации // Под. ред. И.П.Корюкиной. - Пермь, 2005. *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2572719C2 (en) * 2014-04-08 2016-01-20 Государственное бюджетное образовательное учреждение дополнительного профессионального образования "ПЕНЗЕНСКИЙ ИНСТИТУТ УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЯ ВРАЧЕЙ" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ДПО ПИУВ Минздрава России) Early diagnostic technique for endogenous intoxication
RU2734820C2 (en) * 2018-06-25 2020-10-23 Государственное бюджетное учреждение здравоохранения города Москвы Московский клинический научно-практический центр им. А.С. Логинова Департамента здравоохранения города Москвы Method for prediction of bacterial translocation in chronic echinococcosis

Also Published As

Publication number Publication date
RU2010140352A (en) 2012-04-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Burstone An evaluation of histochemical methods for protein groups
Titford Progress in the development of microscopical techniques for diagnostic pathology
Ghosh et al. A novel imaging approach for early detection of prostate cancer based on endogenous zinc sensing
Susztak et al. Glucose-induced reactive oxygen species cause apoptosis of podocytes and podocyte depletion at the onset of diabetic nephropathy
Amin et al. Texture analysis of liver fibrosis microscopic images: a study on the effect of biomarkers
Zhang et al. A rapid assessment for predicting drug-induced hepatotoxicity using zebrafish
Nawroth et al. Modeling alcohol-associated liver disease in a human Liver-Chip
Kline et al. Utilizing magnetization transfer imaging to investigate tissue remodeling in a murine model of autosomal dominant polycystic kidney disease
Al-Mahmood Improving light microscopic detection of collagen by trichrome stain modification
CN103328950A (en) Closed loop monitoring of automated molecular pathology system
Millucci et al. Diagnosis of secondary amyloidosis in alkaptonuria
Stossi et al. Tributyltin chloride (TBT) induces RXRA down-regulation and lipid accumulation in human liver cells
CN103483872A (en) Staining agent combination for tumor tissue cell and preparation method thereof
Chiarini-Garcia et al. Glycol methacrylate embedding for improved morphological, morphometrical, and immunohistochemical investigations under light microscopy: testes as a model
Trinchet et al. Toxicity of harmful cyanobacterial blooms to bream and roach
RU2456596C2 (en) Diagnostic technique for endogenous intoxication
Maksymiuk et al. Trimethylamine, a gut bacteria metabolite and air pollutant, increases blood pressure and markers of kidney damage including proteinuria and KIM-1 in rats
Konno et al. Pathological application of carbocyanine dye-based multicolour imaging of vasculature and associated structures
Zhang et al. Mitochondria-targeted fluorescence/photoacoustic dual-modality imaging probe tailored for visual precise diagnosis of drug-induced liver injury
JP6393252B2 (en) DAB-containing substrate kit for staining using labeled enzyme
WO2021240914A1 (en) Urine sediment staining liquid
Ermert et al. Comparison of different detection methods in quantitative microdensitometry
Duquesne et al. Interest of metabonomic approach in environmental nephrotoxicants: Application to aristolochic acid exposure
Mouzyka et al. Chromoendoscopy with hematoxylin in the classificaton of gastric lesions
CN116888143A (en) Method for determining collagen content by using collagen hybrid peptide

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20121002